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DE69734483T2 - Polynukleotid-Impfstoff, vorzugsweise zur Behandlung der Atemkrankheit bei Rindern - Google Patents

Polynukleotid-Impfstoff, vorzugsweise zur Behandlung der Atemkrankheit bei Rindern Download PDF

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DE69734483T2
DE69734483T2 DE69734483T DE69734483T DE69734483T2 DE 69734483 T2 DE69734483 T2 DE 69734483T2 DE 69734483 T DE69734483 T DE 69734483T DE 69734483 T DE69734483 T DE 69734483T DE 69734483 T2 DE69734483 T2 DE 69734483T2
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plasmid
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gene
primary
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Jean-Christophe Audonnet
Annabelle Bouchardon
Philippe Baudu
Michel Riviere
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Boehringer Ingelheim Animal Health France SAS
Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc
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Merial SAS
Merial Inc
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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft eine Impfstoffformulierung, die das Impfen von Rindern insbesondere gegen die Atemkrankheit ermöglicht. Sie betrifft auch ein entsprechendes Impfverfahren.
  • Alle Rinder sind Träger von Viren und Bakterien, die in sehr unterschiedlichem Maße pathogen sein können.
  • Die Viren können sich vermehren, wenn die spezifische Immunität geschwächt ist und wenn die Atemwege geschädigt sind. Sie werden anschließend von dem Tier ausgeschieden und können dann andere Tiere anstecken.
  • Als auftretende Viren können insbesondere das Parainfluenza-Virus Typ 3 (PI-3) mit einer mäßigen speziellen Pathogenität, das „Respiratory Syncytia"-Virus (RSV) und das Rinderherpesvirus (BHV), das auch als infektiöser boviner Rhinotracheitisvirus (IBR) bezeichnet wird, mit höheren speziellen Pathogenitäten, genannt werden.
  • Ein anderes Virus, das wegen seiner immunsuppressiven Rolle und seiner schädlichen Wirkungen auf die Reproduktion wichtig ist, ist das "Mucosal-Disease"-Virus oder Rinder-Pestivirus (BVDV).
  • Diese Viren äußern sich im Allgemeinen durch eine primäre Phase von Hyperthermie, Grippesyndrom und Atembeschwerden, mit Verdauungsproblemen (Diarrhöen) im Fall von BVD. Diese Phase kann von einer sekundären Phase mit dem Auftreten von Bronchopneumonie in Verbindung mit bakteriellen Infektionen, insbesondere Pasteurella, begleitet sein, was zum Tod führen kann. Dieses Phänomen wird insbesondere durch die Immunsuppression im Anschluss an eine Infektion mit BVD oder durch eine Infektion von Makrophagen durch PI-3 verstärkt. Es können auch noch andere Symptome auftreten, wie Aborte bei BVD und BHV.
  • Es scheint daher notwendig zu sein zu versuchen, eine wirksame Vorbeugung gegen die wichtigsten Viren zur Verfügung zu stellen, die bei der Atemkrankheit bei Rindern eine Rolle spielen.
  • Es wurden bereits in der Vergangenheit Impfstoffverbindungen gegen bestimmte Viren vorgeschlagen, die für die Atemkrankheit bei Rindern verantwortlich sind.
  • Die bisher entwickelten Verbindungen wurden aus inaktivierten Impfstoffen oder Lebendimpfstoffen und gegebenenfalls aus Gemischen derartiger Impfstoffe realisiert. Ihre Anwendung bereitet Probleme in Bezug auf die Kompatibilität zwischen Valenzen und Stabilität. Es muss nämlich gleichzeitig die Kompatibilität zwischen den verschiedenen Impfstoffvalenzen, ob in Bezug auf die verschiedenen verwendeten Antigene oder in Bezug auf die Formulierungen selbst, gewährleistet werden, insbesondere falls gleichzeitig inaktivierte und Lebendimpfstoffe kombiniert werden. Es stellt sich auch das Problem der Konservierung derartiger kombinierter Impfstoffe und auch ihrer Unschädlichkeit, insbesondere in Gegenwart eines Adjuvans. Diese Impfstoffe sind im Allgemeinen ziemlich teuer.
  • Die Patentanmeldungen WO-A-90 11092, WO-A-93 19183, WO-A-94 21797 und WO-A-95 20660 haben die kürzlich entwickelte Technik der Polynucleotidimpfstoffe genutzt. Es ist bekannt, dass bei diesen Impfstoffen ein Plasmid verwendet wird, das in den Wirtszellen das in das Plasmid eingefügte Antigen exprimieren kann. Alle Verabreichungswege wurden vorgeschlagen (intraperitoneal, intravenös, intramuskulär, transkutan, intrakutan, über die Schleimhaut, usw). Es können auch verschiedene Impfmittel verwendet werden, wie DNA, die auf der Oberfläche von Goldteilchen abgelagert und so verschossen wird, dass sie die Haut des Tieres durchdringt (Tang et al,. Nature 356, 152–154, 1992), und Flüssigstrahlinjektoren, mit Hilfe derer gleichzeitig die Haut, der Muskel, das Fettgewebe und das Brustgewebe transfiziert werden können (Furth et al., Analytical Biochemistry, 205, 365368, 1992).
  • Für die Polynucleotidimpfstoffe können ebenso nackte DNA wie RNA verwendet werden, die zum Beispiel in Liposomen oder kationischen Lipiden formuliert wurden.
  • G.J.M: COX hat in J. of Virology, Band 67, Nr. 9, September 1993, 5664–5667 bereits die Polynucleotidimpfung gegen das Rinderherpesvirus Typ 1 vorgeschlagen. Die Autoren haben insbesondere Plasmide beschrieben, in denen die Gene gI (gB), gIII (gC) und gIV (gD) integriert sind.
  • In Vaccine, Band 13, Nr. 4, 415–421, 1995, stellt J.E. CROWE einen allgemeinen Überblick über die verschiedenen Impfverfahren gegen das „Respiratory Syncytia"-Virus und gegen das Parainfluenza-Virus Typ 3 vor. Dieser Überblick greift die gesamten von den derzeitigen Impftechniken dargebotenen Möglichkeiten auf und deutet einfach an, dass die Technologie der Polynucleotidimmunisierung bei der Immunisierungsstrategie gegen RSV und PI-3 nützlich sein könnte. Es sind weder eine Plasmidkonstruktion noch ein Resultat zu einer Impfung von Rindern gegen diese Viren in diesem Dokument beschrieben.
  • Die Erfindung schlägt somit vor, eine multivalente Impfstoffformulierung zur Verfügung zu stellen, die es ermöglicht, eine Impfung gegen eine gewisse Zahl an pathogenen Viren zu gewährleisten, die insbesondere bei der Atemkrankheit bei Rindern eine Rolle spielen, und somit eine wirksame Impfung gegen diese Krankheit zu gewährleisten.
  • Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, eine derartige Impfstoffformulierung zur Verfügung zu stellen, die verschiedene Valenzen verbindet und dabei alle Kriterien erfüllt, die für die Kompatibilität und Stabilität der Valenzen untereinander notwendig sind.
  • Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, eine derartige Impfstoffformulierung zur Verfügung zu stellen, die es ermöglicht, verschiedene Valenzen in dem gleichen Träger zu verbinden.
  • Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, einen derartigen Impfstoff zur Verfügung zu stellen, der leicht und kostengünstig realisierbar ist.
  • Noch eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, eine derartige Impfstoffformulierung und ein Impfverfahren für Rinder zur Verfügung zu stellen, die es ermöglichen, einen multivalenten langfristigen Schutz mit einem erhöhten Wirkungsgrad sowie einer guten Unschädlichkeit zu erhalten, bei dem keine Rückstände verbleiben.
  • Daher liegt der vorliegenden Erfindung die Aufgabe zugrunde, eine Impfstoffformulierung insbesondere gegen die Atemkrankheit bei Rindern zur Verfügung zu stellen, die mindestens drei Valenzen von Polynucleotidimpfstoff umfasst, wobei jede ein Plasmid umfasst, das ein Gen einer Valenz der Atemkrankheit bei Rindern integriert, derart, dass es in vivo in den Wirtszellen exprimiert wird, wobei diese Valenzen ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Rinderherpesvirus, „Respiratory Syncytia"-Virus, "Mucosal-Disease"-Virus und Parainfluenza-Virus Typ 3, wobei die Plasmide für jede Valenz ein oder mehrere Gene umfassen, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus gB und gD beim Rinderherpesvirus, F und G beim „Respiratory Syncytia"-Virus, E2, C + E1 + E2 und E1 + E2 beim "Mucosal-Disease"-Virus, HN und F beim Parainfluenza-Virus Typ 3.
  • Unter Valenz versteht man bei der vorliegenden Erfindung mindestens ein Antigen, das einen Schutz gegen das betreffende Pathogen-Virus gewährleistet, wobei die Valenz als Untervalenz ein oder mehrere natürliche oder modifizierte Gene von einem oder mehreren der Stämme des betreffenden Pathogens enthalten kann.
  • Unter Gen des pathogenen Agens versteht man nicht nur das komplette Gen, sondern auch davon abweichende Nucleotidsequenzen, einschließlich Fragmente, die die Fähigkeit bewahren, eine Schutzreaktion herbeizuführen. Der Begriff Gen deckt die Nucleotidsequenzen ab, die denjenigen entsprechen, die in den Beispielen genau beschrieben werden, das heißt abweichende Sequenzen, die jedoch das gleiche Protein codieren. Er deckt auch die Nucleotidsequenzen anderer Stämme des betreffenden Pathogens ab, die einen Kreuzschutz oder einen für einen Stamm oder eine Gruppe von Stämmen spezifischen Schutz gewährleisten. Er deckt auch die Nucleotidsequenzen ab, die modifiziert wurden, um die Expression in vivo durch das Wirtstier zu vereinfachen, die aber das gleiche Protein codieren.
  • Vorzugsweise umfasst die erfindungsgemäße Impfstoffformulierung die vier Valenzen.
  • Was die Valenz BHV betrifft, so wird die Verwendung der beiden Gene bevorzugt, die für gB und gD codieren, und zwar in verschiedenen Plasmiden oder in ein und demselben Plasmid. Gegebenenfalls kann das eine oder das andere dieser Gene verwendet werden, was jedoch weniger bevorzugt ist.
  • Für die Valenz RSV werden vorzugsweise die beiden Gene G und F verwendet, die in zwei verschiedene Plasmide oder in ein und dasselbe Plasmid integriert sind. Gegebenenfalls kann das Gen F allein verwendet werden, was jedoch weniger bevorzugt ist.
  • Für die Valenz BVD wird die Verwendung eines Plasmids bevorzugt, in das das Gen E2 integriert ist. Gegebenenfalls kann ein Plasmid verwendet werden, das für E1 und E2 zusammen oder für eine Einheit, die aus C, E1 und E2 gebildet wird, codiert, was jedoch weniger bevorzugt ist.
  • Für die Valenz PI-3 wird die Verwendung der Einheit der beiden Gene HN und F in zwei verschiedenen Plasmiden oder in ein und demselben Plasmid bevorzugt. Es kann auch nur das Gen HN verwendet werden.
  • Eine gemäß der Erfindung bevorzugte Impfstoffformulierung umfasst und gewährleistet die Expression der Gene gB und gD des BHV, G und F des RSV, E2 von BVD und HN und F des PI-3.
  • Die erfindungsgemäße Impfstoffformulierung kann in einem Dosisvolumen zwischen 0,1 und 10 ml und insbesondere zwischen 1 und 5 ml verabreicht werden.
  • Die Dosis wird im Allgemeinen zwischen 10 ng und 1 mg, vorzugsweise zwischen 100 ng und 500 μg, und noch stärker bevorzugt zwischen 1 μg und 250 μg pro Plasmidtyp liegen.
  • Vorzugsweise werden nackte Plasmide verwendet, die einfach in den Impfträger gegeben werden, der im Allgemeinen physiologisches Wasser (0,9% NaCl), ultrareines Wasser, TE-Puffer usw. ist. Selbstverständlich können alle Formen von Polynucleotidimpfstoffen verwendet werden, die im Stand der Technik beschrieben sind.
  • Jedes Plasmid umfasst einen Promotor, der in der Lage ist, die Expression des Gens, das von diesem gesteuert wird, in den Wirtszellen zu gewährleisten. Es handelt sich im Allgemeinen um einen starken Eukaryonten-Promotor und insbesondere um einen frühen Promotor des Cytomegalovirus CMV-IE menschlichen oder murinen Ursprungs, oder gegebenenfalls auch anderen Ursprungs, wie Ratte, Schwein, Meerschweinchen.
  • Allgemeiner kann der Promotor entweder viralen oder zellulären Ursprungs sein. Als anderer viraler Promotor als CMV-IE können früher oder später Promotor des SV40-Virus oder der LTR-Promotor des Rousschen Sarkom-Virus genannt werden. Es kann sich auch um einen Promotor des Virus handeln, aus dem das Gen stammt, zum Beispiel der Gen-spezifische Promotor.
  • Als zellulärer Promotor kann der Promotor eines Zytoskelettgens genannt werden, wie zum Beispiel der Desmin-Promotor (Bolmont et al., Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology, 1990, 22, 117–122; und ZHENLIN et al., Gene, 1989, 78, 243–254), oder auch der Aktin-Promotor.
  • Wenn mehrere Gene in demselben Plasmid vorliegen, können diese in der gleichen Transkriptionseinheit oder in zwei verschiedenen Einheiten vorhanden sein.
  • Die Kombination der verschiedenen Valenzen des erfindungsgemäßen Impfstoffes kann vorzugsweise durch Mischen von Polynucleotidplasmiden erfolgen, die das oder die Antigen(e) jeder Valenz exprimieren. Es kann aber auch vorgesehen sein, Antigene von mehreren Valenzen von demselben Plasmid exprimieren zu lassen.
  • Aufgabe der Erfindung sind auch Formulierungen monovalenter Impfstoffe, die ein oder mehrere Plasmide umfassen, die für ein oder mehrere Gene eines der Viren codieren, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus BRSV, BVD und PI-3, wobei die Gene diejenigen sind, die vorstehend beschrieben wurden. Abgesehen von ihrem monovalenten Charakter können diese Formulierungen die vorstehend erwähnten Charateristika besitzen, was die Wahl der Gene, ihre Kombinationen, die Zusammensetzung der Plasmide, die Dosisvolumina, die Dosen, usw. anbetrifft.
  • Die monovalenten Impfstoffformulierungen können (i) zur Herstellung einer polyvalenten Impfstoffformulierungen, wie vorstehend beschrieben, (ii) individuell gegen die spezielle Pathologie, (iii) in Verbindung mit einem Impfstoff eines anderen Typs (Lebendvoll- oder inaktivierter Impfstoff, rekombinanter Impfstoff oder Impfstoff aus einer Untereinheit) gegen eine andere Pathologie, oder (iv) als Wiederauffrischung eines Impfstoffs, wie nachstehend beschrieben wird, verwendet werden.
  • Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung eines oder mehrerer Plasmide gemäß der Erfindung für die Herstellung eines Impfstoffs zur Impfung von Rindern, die mit einem klassischen Primärimpfstoff eines wie im Stand der Technik beschriebenen Typs primär geimpft wurden, die insbesondere ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Lebendvollimpfstoff, inaktiviertem Vollimpfstoff, Impfstoff aus einer Untereinheit, rekombinantem Impfstoff, wobei dieser Primärimpfstoff das oder die Antigen(e), das/die von dem/den Plasmid(en) codiert wird werden, oder das/die Antigen(e) präsentiert, das heißt enthält oder exprimieren kann, wodurch ein Kreuzschutz entsteht.
  • Bemerkenswerterweise hat der Polynucleotidimpfstoff eine starke Wiederauffrischungswirkung, die sich in einer Verstärkung der Immunreaktion und einer langfristigen Immunität äußert.
  • Allgemein können die Impfstoffe der Primärimpfung aus den handelsüblichen Impfstoffen ausgewählt sein, die bei verschiedenen Herstellern von Veterinärimpfstoffen erhältlich sind.
  • Gegenstand der Erfindung ist auch ein Impfstoffkit, der einen Primärimpfstoff, wie denjenigen, der vorstehend beschrieben ist, und eine erfindungsgemäße Impfstoffformulierung für die Wiederauffrischung umfasst. Sie betrifft auch eine erfindungsgemäße Impfstoffformulierung mit einem Hinweis, dass diese Formulierung als Wiederauffrischung einer Primärimpfung, wie vorstehend beschrieben, verwendet werden kann.
  • Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist gleichfalls ein Verfahren zur Impfung von Rindern gegen die Atemkrankheit, umfassend die Verabreichung der wirksamen Impfstoffformulierung wie vorstehend beschrieben. Dieses Impfverfahren umfasst die Verabreichung einer oder mehrerer Dosen der Impfstoffformulierung, wobei diese Dosen nacheinander innerhalb kurzer Zeit und/oder nacheinander in größeren Abständen verabreicht werden können.
  • Die erfindungsgemäßen Impfstoffformulierungen können im Rahmen dieses Impfverfahrens über die verschiedenen Verabreichungswege, die im Stand der Technik für die Polynucleotidimpfung beschrieben sind, und durch bekannte Verabreichungstechniken verabreicht werden.
  • Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist das Impfverfahren, das darin besteht, eine Primärimpfung, wie vorstehend beschrieben, und eine Wiederauffrischimpfung mit einer erfindungsgemäßen Impfstoffformulierung vorzunehmen.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird einem Tier zunächst eine wirksame Dosis des klassischen Impfstoffs, insbesondere als inaktivierter, Lebend-, abgeschwächter oder rekombinanter Impfstoff, oder noch ein Impfstoff aus einer Untereinheit so verabreicht, dass eine Primärimpfung gesichert ist und vorzugsweise wird 2 bis 6 Wochen danach die Verabreichung des polyvalenten oder monovalenten erfindungsgemäßen Impfstoffs vorgenommen.
  • Die Erfindung betrifft auch das Herstellungsverfahren der Impfstoffformeulierungen, das heißt die Herstellung der Valenzen und ihrer Gemische, wie sie aus dieser Beschreibung hervorgeht.
  • Die Erfindung wird nun genauer anhand der Ausführungsformen der Erfindung mit Bezug auf die beigefügten Zeichnungen beschrieben.
  • Verzeichnis der Figuren
  • 1: pVR1012-Plasmid
  • 2: Sequenz des Gens BHV-1 St gB
  • 3: Konstruktion des Plasmids pPB156
  • 4: Plasmid pAB087
  • 5: Plasmid pA8011
  • 6: Plasmid pAB012
  • 7: Plasmid pAB058
  • 8: Plasmid pAB059
  • 9: Plasmid pAB060
  • 10: Plasmid pAB071
  • 11: Plasmid pAB072
  • Auflistung der Sequenzen SEQ ID Nr.
    • SEQ ID Nr. 1: Sequenz des Gens BHV-1 gB (Stamm ST)
    • SEQ ID Nr. 2: Oligonucleotid PB234
    • SEQ ID Nr. 3: Oligonucleotid PB235
    • SEQ ID Nr. 4: Oligonucleotid AB162
    • SEQ ID Nr. 5: Oligonucleotid AB163
    • SEQ ID Nr. 6: Oligonucleotid A8026
    • SEQ ID Nr. 7: Oligonucleotid AB027
    • SEQ ID Nr. 8: Oligonucleotid AB028
    • SEQ ID Nr. 9: Oligonucleotid AB029
    • SEQ ID Nr. 10: Oligonucleotid AB110
    • SEQ ID Nr. 11: Oligonucleotid AB111
    • SEQ ID Nr. 12: Oligonucleotid AB114
    • SEQ ID Nr. 13: Oligonucleotid AB115
    • SEQ ID Nr. 14: Oligonucleotid AB116
    • SEQ ID Nr. 15: Oligonucleotid AB117
    • SEQ ID Nr. 16: Oligonucleotid AB130
    • SEQ ID Nr. 17: Oligonucleotid AB131
    • SEQ ID Nr. 18: Oligonucleotid AB132
    • SEQ ID Nr. 19: Oligonucleotid AB133
  • Beispiele
  • Beispiel 1: Virenzucht
  • Die Viren werden auf geeigneten Zellsystemen gezüchtet, bis ein cytopathischer Effekt auftritt. Die für jedes Virus zu verwendenden Zellsysteme sind dem Fachmann bekannt. Kurz gesagt werden Zellen, die für das verwendete Virus suszeptibel sind, in essentiellem Minimalmedium Eagle (MEM-Medium) oder einem anderen geeigneten Medium mit dem untersuchten Virenstamm unter Verwendung einer Infektionsmultiplizität von 1 beimpft. Die infizierten Zellen werden dann bei 37°C während der Zeit inkubiert, die erforderlich ist für das Auftreten eines vollständigen cytopathischen Effekts (durchschnittlich 36 Stunden).
  • Beispiel 2: Extraktion viraler genomischer DNA
  • Nach der Züchtung werden der Zellüberstand und die lysierten Zellen abgenommen und die gesamte Virensuspension wird bei 1000g 10 Minuten bei +4°C zentrifugiert, um die Zellrückstände zu entfernen. Die Virenpartikel werden dann durch Ultrazentrifugieren bei 400000 g während 1 Stunde bei +4°C erhalten. Das Pellet wird in einem Minimalvolumen Puffer aufgenommen (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Diese konzentrierte Virensuspension wird mit Proteinase K (100 μg/ml final) in Gegenwart von Natriumdodecylsulfat (SDS) (0,5% final) für 2 Stunden bei 37°C behandelt. Die virale DNA wird anschließend mit einem Phenol/Chloroform-Gemisch extrahiert, dann mit 2 Volumen unverdünntem Ethanol ausgefällt. Nach Übernachtinkubation bei –20°C wird die DNA für 15 Minuten bei 10000 g bei +4°C zentrifugiert. Das DNA-Pellet wird getrocknet, dann in einem Minimalvolumen von ultrareinem sterilem Wasser aufgenommen. Sie kann dann von Restriktionsenzymen verdaut werden.
  • Beispiel 3: Isolierung viraler genomischer RNA
  • Die RNA-Viren wurden nach den dem Fachmann bekannten Techniken gereinigt. Die virale genomische RNA von jedem Virus wurde anschließend unter Verwendung der Extraktionstechnik "Guanidiniumthiocyanat/Phenolchloroform", wie beschrieben von P. Chomczynski und N. Sacchi (Anal. Biochem. 1987, 162, 156–159), isoliert.
  • Beispiel 4: Molekularbiologische Techniken
  • Alle Plasmidkonstruktionen wurden unter Verwendung der molekularbiologischen Standardtechniken durchgeführt, die von J. Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. Ausgabe, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989) beschrieben wurden. Alle für die vorliegende Erfindung verwendeten Restriktionsfragmente wurden unter Verwendung des "Geneclean"-Kits (BIO101 Inc. La Jolla, CA) isoliert.
  • Beispiel 5: RT-PCR-Technik
  • Spezifische Oligonucleotide (die an ihren 5'-Enden Restriktionsstellen aufweisen, um das Klonieren der amplifizierten Fragmente zu erleichtern) wurden derart synthetisiert, dass sie die codierenden Bereiche der zu amplifizierenden Gene vollständig abdecken (siehe spezifische Beispiele). Die reverse Transkriptase-Reaktion (RT) und die Polymerasekettenreaktion (PCR) erfolgten nach den Standardtechniken (J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. Ausgabe, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Jede RT-PCR-Reaktion erfolgte mit einem Paar spezifischer Primer unter Verwendung von viralem genomischen RNA-Extrakt als Matrize. Die amplifizierte cDNA wurde mit Phenol/Chloroform/Isoamylalkohol (25:24:1) extrahiert, bevor sie durch die Restriktionsenzyme verdaut wurde.
  • Beispiel 6: pVR1012-Plasmid
  • Das Plasmid pVR1012 (1) wurde von Vical Inc. San Diego, CA, USA, bezogen. Seine Konstruktion wurde in J. Hartikka et al. (Human Gene Therapy, 1996, 7, 1205–1217) beschrieben.
  • Beispiel 7: Konstruktion des Plasmids pPB156 (Gen BHV-1 gB)
  • Die genomische DNA des Rinderherpesvirus BHV-1 (Stamm ST) (Leung-Tack P. et al. Virology, 1994, 199, 409–421) wurde gemäß der in Beispiel 2 beschriebenen Technik hergestellt und mit BamHI verdaut. Nach der Reinigung wurde das 18kbp-BamHI-BamHI-Fragment in den Vektor pBR322 cloniert, der zuvor mit BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pIBR-4-BamHI (22 kbp) zu erhalten.
  • Das Plasmid pIBR-4-BamHI wurde anschließend mit SalI verdaut, um ein 6,6 kbp-SalI-SalI-Fragment freizusetzen, das das Gen enthielt, das für das Glycoprotein gB des BHV-1 codiert (2 und SEQ ID Nr. 1). Dieses Fragment wurde in den Vektor pBR322 kloniert, der zuvor von SalI verdaut worden war, um das Plasmid pIBR-6,6-SalI (10,9 kbp) zu erhalten.
  • Das Plasmid pIBR-6,6-SalI wurde mit NheI und BgIII verdaut, um ein 2676 bp NheI-BgIII-Fragment freizusetzen, das das Gen enthielt, das für das Glycoprotein gB des Rinderherpesvirus (BHV-1) (Fragment A) codiert.
  • Eine PCR-Reaktion erfolgte mit der genomischen DNA des Rinderherpesvirus (BHV-1) (Stamm ST) und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • PB234 (30-mer) (SEQ ID Nr. 2)
    • 5'TTGTCGACATGGCCGCTCGCGGCGGTGCTG 3'
  • PB235 (21-mer) (SEQ ID Nr. 3)
    • 5'GCAGGGCAGCGGCTAGCGCGG 3' um das 5'-Ende des Gens zu isolieren, das das Glycoprotein gB des BHV-1 codiert.
  • Nach der Reinigung wurde das 153bp PCR-Produkt mit SalI und NheI verdaut, um ein 145 bp SalI-NheI-Fragment (Fragment B) zu isolieren.
  • Die Fragmente A und B wurden mit dem Vektor pVR1012 (Beispiel 6) ligiert, der zuvor mit SalI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pPB158 (7691 bp) zu erhalten (3).
  • Beispiel 8: Konstruktion des Plasmids pAB087 (Gen BHV-1 gD)
  • Eine PCR-Reaktion erfolgte mit der genomischen DNA des Rinderherpesvirus (BHV-1) (Stamm ST) (P. Leung-Tack et al. Virology, 1994, 199, 409–421), hergestellt gemäß der in Beispiel 2 beschriebenen Technik, und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB162 (31-mer) (SEQ ID Nr. 4)
    • 5'AAACTGCAGATGCAAGGGCCGACATTGGCCG 3'
  • AB163 (27-mer) (SEQ ID Nr. 5)
    • 5'ATCTTGTACCATATGACCGTGGCGTTG 3' um das 5'-Ende des Gens, das für das Glycoprotein gD des Rinderherpesvirus (BHV-1) (GenBank-Sequenzhinterlegungsnummer = L26360) codiert, in Form eines 338 bp PCR-Fragments zu amplifizieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit PstI und NdeI verdaut, um ein 317 bp PstI-NdeI-Fragment (Fragment A) zu isolieren.
  • Das Plasmid pBHV001 (P. Leung-Tack et al. Virology, 1994, 199, 409–421.) wurde mit NdeI und StyI verdaut, um ein 942 bp Fragment freizusetzen, das das 3'-Ende des Gens enthielt, das für das Glycoprotein gD von BHV-1 (Fragment B) codiert.
  • Die Fragmente A und B wurden mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit PstI und XbaI verdaut worden war, um das Plasmid pAB087 (6134 bp) zu erhalten (4).
  • Beispiel 9: Konstruktion des Plasmids pAB011 (Gen BRSV F)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des „Respiratory Syncytia"-Virus (BRSV) (Stamm 391-2) (R. Lerch et al. Virology, 1991, 181, 118–131), hergestellt wie in Beispiel 3 angegeben, und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB026 (33-mer) (SEQ ID Nr. 6)
    • 5'AAAACTGCAGGGATGGCGGCAACAGCCATGAGG 3'
  • AB027 (31-mer) (SEQ ID Nr. 7)
    • 5'CGCGGATCCTCATTTACTAAAGGAAAGATTG 3' um das Gen, das für das Fusionsglycoprotein F (BRSV F) codiert, in Form eines 1734 bp-PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment PstI und BamHI verdaut, um ein 1717 bp PstI-BamHI-Fragment zu isolieren. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit PstI und BsmHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB011 (6587 bp) zu erhalten (5).
  • Beispiel 10: Konstruktion des Plasmids pAB012 (Gen BRSV G)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des „Respiratory Syncytia"-Virus (BRSV) (Stamm 391-2) (R. Lerch et al. Virology, 1990, 64, 5559–5569) und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB028 (32-mer) (SEQ ID Nr. 8)
    • 5'AAAACTGCAGATGTCCAACCATACCCATCATC 3'
  • AB029 (35-mer) (SEQ ID Nr. 9)
    • 5'CGCGGATCCCTAGATCTGTGTAGTTGATTGATTTG 3' um das Gen, das für das Protein G (BRSV G) codiert, in Form eines 780 bp-PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit PstI und BamHI verdaut, um ein 763 bp PstI-BamHI-Fragment zu isolieren. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit PstI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB012 (5634 bp) zu erhalten (6).
  • Beispiel 11: Konstruktion des Plasmids pAB058 (Gen BVDV C)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des viralen Rinderdiarrhöevirus (BVDV) (Stamm Osloss) (L. De Moerlooze et al. J. Gen. Virol. 1993, 74, 1433–1438), hergestellt gemäß der in Beispiel 3 beschriebenen Technik, und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB 110 (35-mer) (SEQ ID Nr. 10)
    • 5'AAAACTGCAGATGTCCGACACAAAAGCAGAAGGGG 3'
  • AB111 (47-mer) (SEQ ID Nr. 11)
    • 5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCATTCCCACTGCGACTTGAAACAAAAC 3' um ein 342 bp Fragment zu amplifizieren, das das Gen enthielt, das für das Capsid-C-Protein des BVDV-Virus codiert. Nach der Reinigung wurde das RT-PCR-Produkt mit PstI und BamHI verdaut, um ein 324 bp PstI-BamHI-Fragment zu erhalten. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit PstI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB058 (5183 bp) zu erhalten (7).
  • Beispiel 12: Konstruktion des Plasmids pAB059 ("Gen" BVDV E1)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des viralen Rinderdiarrhöevirus (BVDV) (Stamm Osloss) (L. De Moerlooze et al. J. Gen. Virol. 1993, 74, 1433–1438) und unter Verwendung des folgenden Oligonucleotide:
  • AB 114 (32-mer) (SEQ ID Nr. 12)
    • 5'ACGCGTCGACATGAAGAAACTAGAGAAAGCCC 3'
  • AB 115 (33-mer) (SEQ ID Nr. 13)
    • 5'CGCGGATCCTCAGCCGGGTTTGCAAACTGGGAG 3' um die Sequenz, die für das E1-Protein des BVDV-Virus codiert, in Form eines 1381 bp PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit SalI und BamHI verdaut, um ein 1367 bp SalI-BamHI-Fragment zu erhalten. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit SalI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB059 (6236 bp) zu erhalten (8).
  • Beispiel 13: Konstruktion des Plasmids pAB060 ("Gen" BVDV E2)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischer RNA des viralen Rinderdiarrhöevirus (BVDV) (Stamm Osloss) (L. De Moerlooze et al. J. Gen. Virol. 1993, 74, 1433–1438) und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB 116 (36-mer) (SEQ ID Nr. 14)
    • 5'ACGCGTCGACATGACGACTACTGCATTCCTGGTATG 3'
  • AB 117 (33-mer) (SEQ ID Nr. 15)
    • 5'CGCGGATCCTCATTGACGTCCCGAGGTCATTTG 3' um die Sequenz, die das E2-Protein des BVDV-Virus codiert, in Form eines 1252 bp PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit SalI und BamHI verdaut, um ein 1238 bp SalI-BamHI-Fragment zu erhalten.
  • Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit SalI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB060 (6107 bp) zu erhalten (9).
  • Beispiel 14: Konstruktion des Plasmids pAB071 (Gen BPIV HN)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des Parainfluenza-Rindervirus Typ 3 (PI3 = BPIV) und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB 130 (33-mer) (SEQ ID Nr. 16)
    • 5'TTTGTCGACATGGAATATTGGAAACACACAAAC 3'
  • AB 131 (33-mer) (SEQ ID Nr. 17)
    • 5'TTTGGATCCTTAGCTGCAGTTTTTCGGAACTTC 3' um das für das Glycoprotein HN des BPIV codierende Gen (Gensequenz HN, 1987 hinterlegt von H. Shibuta, Sequenz-Hinterlegungsnr. in GenBank = Y00115) in Form eines 1737 bp PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit SalI und BamHI verdaut, um ein 1725 bp SalI-BamHI-Fragment zu isolieren. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit SalI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB071 (6593 bp) zu erhalten (10).
  • Beispiel 15: Konstruktion des Plasmids pAB072 (Gen BPIV F)
  • Eine RT-PCR-Reaktion gemäß der in Beispiel 5 beschriebenen Technik erfolgte mit der genomischen RNA des Parainfluenza-Rindervirus Typ 3 (PI3 = BPIV) und unter Verwendung der folgenden Oligonucleotide:
  • AB 132 (30-mer) (SEQ ID Nr. 18)
    • 5'TTTGTCGACATGATCATCACAAACACAATC 3'
  • AB 133 (30-mer) (SEQ ID Nr. 19)
    • 5'TTTGGATCCTACTTGTCTACTTGTTAGTAC 3' um das für das F-Protein des BPIV codierende Gen (Gensequenz F, 1987 hinterlegt von H. Shibuta, Sequenzhinterlegungsnr. in GenBank = Y00115) in Form eines 1641 bp PCR-Fragments zu isolieren. Nach der Reinigung wurde dieses Fragment mit SalI und BamHI verdaut, um ein 1629 bp SalI-BamHI-Fragment zu isolieren. Dieses Fragment wurde mit dem Vektor pVR1012 ligiert (Beispiel 6), der zuvor mit SalI und BamHI verdaut worden war, um das Plasmid pAB072 (6497 bp) zu erhalten (11).
  • Beispiel 16: Herstellung und Reinigung der Plasmide
  • Zur Herstellung von Plasmiden zur Impfung von Tieren kann jede Technik verwendet werden, die es ermöglicht, eine Suspension von gereinigten Plasmiden zu erhalten, und zwar zum großen Teil in Form einer Superhelix. Diese Techniken sind dem Fachmann bekannt. Insbesondere kann hier die Technik der alkalischen Lyse, gefolgt von zwei Ultrazentrifugationen auf Chlorcäsiumgradient in Gegenwart von Ethidiumbromid, genannt werden, wie in 7. Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. Ausgabe, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989) beschrieben. Es kann auch auf die Patentanmeldungen PCT WO 95/21250 und PCT WO 96/02658 verwiesen werden, die Verfahren zur Herstellung von für die Impfung verwendbaren Plasmiden im industriellen Maßstab beschreiben. Für die Herstellung von Impfstoffen (siehe Beispiel 17) werden die gereinigten Plasmide so resuspendiert, dass Lösungen mit hoher Konzentration (> 2 mg/ml) erhalten werden, die zum Lagern geeignet sind. Hierfür werden die Plasmide entweder in ultrareinem Wasser oder in einem TE-Puffer (10 mM Tris-HCl; 1 mM EDTA, pH-Wert 8,0) resuspendiert.
  • Beispiel 17: Herstellung von kombinierten Impfstoffen
  • Die verschiedenen Plasmide, die zur Herstellung eines kombinierten Impfstoffs notwendig sind, werden aus ihren konzentrierten Lösungen (Beispiel 16) gemischt. Die Gemische werden so angesetzt, dass die Endkonzentration jedes Plasmids der wirksamen Dosis jedes Plasmids entspricht. Zum Einstellen der Endkonzentration des Impfstoffs kann entweder eine 0,9%ige NaCl-Lösung oder ein PBS-Puffer verwendet werden.
  • Besondere Formulierungen, wie Liposome, kationische Lipide, können ebenfalls für die Herstellung von Impfstoffen verwendet werden.
  • Beispiel 18: Impfung von Rindern
  • Die Rinder werden mit Dosen von 100 μg, 250 μg oder 500 μg je Plasmid geimpft. Die Injektionen erfolgen intramuskulär mit einer Nadel, entweder in den Glutäusmuskel oder in Halsmuskeln. Die Impfdosen werden in Volumen zwischen 1 und 5 ml verabreicht.

Claims (13)

  1. Rinderimpfstoff umfassend ein Plasmid, das ein Gen des Parainfluenza-Virus Typ 3 (PI-3) enthält, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus HN und F, und einen geeigneten Träger.
  2. Impfstoff nach Anspruch 1, wobei das Plasmid die zwei Gene HN und F umfasst.
  3. Impfstoff nach Anspruch 1, umfassend ein Plasmid, das HN enthält, und ein Plasmid, das F enthält.
  4. Impfstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Plasmid einen Promotor umfasst ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus CMV-IE-Promotor, früher SV40-Promotor, später SV40-Promotor, LTR-Promotor des Rousschen Sarkom-Virus und Promotor eines Zytoskelettgens.
  5. Impfstoff nach Anspruch 4, wobei der Promotor ein CMV-IE-Promotor ist.
  6. Impfstoff nach Anspruch 4, wobei der Promotor eines Zytoskelettgens der Desmin-Promotor oder der Aktin-Promotor ist.
  7. Impfstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass er außerdem ein anderes Plasmid umfasst, das ein Gen eines anderen respiratorischen Pathogens bei Rindern enthält und exprimiert.
  8. Impfstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass er weiterhin zwei Plasmide enthält, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus einem Plasmid, das das Gen gB oder gD des Rinderherpesvirus enthält, einem Plasmid, das das E2-, C+E1+E2- und E1+E2-Gen des "Mucosal-Disease"-Virus enthält und ein Plasmid, das das F- oder G-Gen des "Respiratory Syncytial"-Virus bei Rindern enthält.
  9. Impfstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass er von jedem Plasmid 10 ng bis 1 mg, vorzugsweise 100 ng bis 500 μg und noch bevorzugter 1 μg bis 250 μg umfasst.
  10. Verwendung eines oder mehrerer der in einem der Ansprüche 1 bis 9 beschriebenen Plasmids/e zur Herstellung eines Impfstoffes gegen das Parainfluenza-Virus Typ 3 (PI-3) für die Impfung von primär geimpften Rindern mit einem Primärimpfstoff ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Lebendvollimpfstoff, einem inaktivierten Vollimpfstoff, einem Impfstoff aus einer Untereinheit, einem rekombinanten Impfstoff, wobei der Primärimpfstoff das oder die Antigen(e) präsentiert, das/die durch das oder die Plasmid(e) oder Antigen(e) codiert wird/werden, wodurch ein Kreuzschutz gewährleistet wird.
  11. Impfstoffkit, der einen Polynucleotidimpfstoff gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, und einen Primärimpfstoff umfasst, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Lebendvollimpfstoff, einem inaktivierten Vollimpfstoff, einem Impfstoff aus einer Untereinheit, einem rekombinanten Impfstoff, wobei der Primärimpfstoff das Antigen präsentiert, das durch den Polynucleotidimpfstoff codiert wird oder ein Antigen, wodurch ein Kreuzschutz gewährleistet wird, zur Verabreichung des Primärimpfstoffs in einer Primärimpfung und für eine Wiederauffrischung mit dem Polynucleotidimpfstoff.
  12. Impfstoff gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 mit einem Hinweis, dass dieser Polynucleotidimpfstoff bei einer Wiederauffrischung des Primärimpfstoffes verwendet werden kann, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Lebendvollimpfstoff, einem inaktivierten Vollimpfstoff, einem Impfstoff aus einer Untereinheit, einem rekombinanten Impfstoff, wobei der Primärimpfstoff das Antigen präsentiert, das durch den Polynucleotidimpfstoff oder ein Antigen codiert wird, wodurch ein Kreuzschutz gewährleistet wird.
  13. Verwendung eines Plasmids wie in einem der Ansprüche 1 bis 9 beschrieben zur Herstellung eines Impfstoffes zur Impfung von Rindern gegen das PI-3-Virus zusammen mit einem Lebendvollimpfstoff oder einem inaktivierten Vollimpfstoff, einem rekombinanten Impfstoff oder einem Impfstoff aus einer Untereinheit gegen eine andere Rinderkrankheit.
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UA (1) UA70914C2 (de)
WO (1) WO1998003200A2 (de)
ZA (1) ZA976283B (de)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
US7078388B2 (en) 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US20040002472A1 (en) * 2000-01-21 2004-01-01 Audonnet Jean-Christophe Francis Vaccination or immunization using a prime-boost regimen
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US6852705B2 (en) * 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (de) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systeme und Methoden zur Erhöhung der Milchproduktion bei Tieren
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
EP1689858B1 (de) 2003-11-13 2013-05-15 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Verfahren zur charakterisierung des ibd (infectious bursal disease)-virus
EP1718770B1 (de) 2004-02-19 2011-05-25 The Governors of the University of Alberta Leptinpromotor-polymorphismen und verwendungen davon
SI1881845T1 (sl) 2005-04-25 2010-06-30 Merial Ltd Cepiva proti virusu Nipah
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
EP3147296A1 (de) 2005-11-14 2017-03-29 Merial, Inc. Gentherapie für nierenversagen
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
HRP20130643T1 (hr) 2007-05-02 2013-08-31 Merial Limited Dnk-plazmidi koji imaju poboljšanu ekspresiju i stabilnost
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
EP3168307B1 (de) 2008-11-28 2020-07-15 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Rekombinanter impfstoff gegen vogelgrippe und verwendungen davon
KR101715418B1 (ko) 2009-04-03 2017-03-10 메리얼 인코포레이티드 뉴캐슬 질환 바이러스-벡터를 이용한 조류 백신
KR20120101572A (ko) 2009-12-28 2012-09-13 메리얼 리미티드 재조합 ｎｄｖ 항원 및 이의 용도
AU2011207626B2 (en) 2010-01-19 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Engineered opsonin for pathogen detection and treatment
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
AU2011224188B2 (en) 2010-03-12 2015-01-22 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Bluetongue virus recombinant vaccines and uses thereof
WO2012030720A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
AR084358A1 (es) * 2010-12-27 2013-05-08 Lilly Co Eli Composiciones y metodos para identificar y diferenciar componentes virales de vacunas multivalentes de la “fiebre de embarque” (complejo de enfermedad respiratoria bovina (brdc))
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
AU2012240246A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
AU2012240240A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
AU2012245395A1 (en) 2011-04-20 2013-11-14 Merial, Inc. Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
AP2013007180A0 (en) 2011-04-25 2013-10-31 Advanced Bioscience Lab Inc Truncated HIV envelope proteins (ENV), methods andcompositions related thereto
MX361804B (es) 2011-05-27 2018-12-17 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus hendra y el virus nipah.
CA2837375C (en) 2011-06-01 2019-07-16 Merial Limited Needle-free administration of prrsv vaccines
US9593160B2 (en) 2011-07-18 2017-03-14 President And Fellows Of Harvard College Engineered microbe-targeting molecules and uses thereof
ES2626297T3 (es) 2011-08-12 2017-07-24 Merial, Inc. Preservación asistida por vacío de productos biológicos, en particular de vacunas
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
WO2013106558A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Merial Limited Lipid based adjuvants for dna - plasmid vaccines
KR102087458B1 (ko) 2012-02-14 2020-03-10 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 로타바이러스 아단위 백신 및 그의 제조 방법 및 용도
CN104203271B (zh) 2012-02-14 2017-08-25 梅里亚股份有限公司 表达狂犬病病毒和ox40蛋白的重组痘病毒载体及从其制造的疫苗
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
CN104582724A (zh) 2012-06-13 2015-04-29 梅里亚有限公司 重配btv和ahsv疫苗
EA031453B1 (ru) 2012-08-01 2019-01-31 Бавариан Нордик А/С Рекомбинантный модифицированный вирус осповакцины анкара (mva) и его применение
HK1216006A1 (zh) 2013-03-12 2016-10-07 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. 反向遺傳學施馬倫貝格病毒疫苗組合物，和其使用方法
WO2014144325A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for improving detection and/or capture of a target entity
US9988617B2 (en) 2013-05-21 2018-06-05 President And Fellows Of Harvard College Engineered heme-binding compositions and uses thereof
WO2015095604A2 (en) 2013-12-18 2015-06-25 President And Fellows Of Harvard College Methods and assays relating to circulating tumor cells
EP3215188A1 (de) 2014-11-03 2017-09-13 Merial, Inc. Verfahren zur verwendung von mikronadelimpfstoffformulierungen zur anregung von schützender immunität gegen das tollwutvirus bei tieren
NZ738957A (en) 2015-06-23 2019-09-27 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
EP3763378A1 (de) 2015-08-06 2021-01-13 President and Fellows of Harvard College Verbesserte mikrobenbindende moleküle und verwendungen davon
CA2996143A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Merial, Inc. Fcv recombinant vaccines and uses thereof
RU2710854C1 (ru) 2015-09-29 2020-01-14 Мериал, Инк. Вакцины на основе вирусоподобных частиц (vlp) собачьего парвовируса (cpv) и их применение
ES2899230T3 (es) 2015-11-23 2022-03-10 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Proteínas de fusión de FMDV y E2 y usos de las mismas
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109021081B (zh) * 2018-08-10 2019-06-04 山东大学 一种牛病毒性腹泻病毒样颗粒及其构建方法与应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5169628A (en) * 1988-04-22 1992-12-08 The Upjohn Company Chimeric glycoproteins containing immunogenic segments of human parainfluenza virus type 3
HUT67362A (en) * 1990-07-24 1995-03-28 Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins, vaccines, antibodies and transformed cells
GB9200117D0 (en) * 1992-01-06 1992-02-26 Connaught Lab Production of recombinant chimeric proteins for vaccine use
CA2136677A1 (en) * 1993-12-29 1995-06-30 Intervet, Inc. Method of intranasally administering to bovines a trivalent vaccine containing modified live ibrv, pl3v and brsv
EP0740704A1 (de) * 1994-01-27 1996-11-06 University Of Massachusetts Medical Center Immunisierung durch impfung einer dns-transkriptionseinheit
US5541102A (en) * 1994-09-02 1996-07-30 Board Of Regents, University Of Nebraska-Lincoln Bovine cell line resistant to in vitro infection by bovine viral diarrhea virus and all other known pestiviruses
US6019980A (en) 1995-06-07 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines
US6060457A (en) 1996-06-20 2000-05-09 Universite De Montreal DNA plasmid vaccine for immunization of animals against BVDV
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
JP5566663B2 (ja) * 2009-11-09 2014-08-06 三菱重工業株式会社 多翼遠心ファンおよびそれを用いた空気調和機

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9902791A2 (hu) 1999-12-28
DK1382348T3 (da) 2006-03-13
DE69725988T2 (de) 2004-11-11
RU2002132831A (ru) 2005-01-20
DK0912194T3 (da) 2004-03-15
AP9701044A0 (en) 1997-07-31
HU225169B1 (en) 2006-07-28
BR9710506A (pt) 1999-08-17
EP0912194A2 (de) 1999-05-06
CA2260855C (en) 2012-01-03
RU2305560C2 (ru) 2007-09-10
EP1382348A2 (de) 2004-01-21
ID19513A (id) 1998-07-16
FR2751229A1 (fr) 1998-01-23
NZ508940A (en) 2002-09-27
US6818628B2 (en) 2004-11-16
CZ17599A3 (cs) 1999-06-16
AU3773597A (en) 1998-02-10
HRP970383A2 (en) 1998-10-31
ATE253376T1 (de) 2003-11-15
NZ517686A (en) 2003-01-31
CZ298915B6 (cs) 2008-03-12
HU0500910D0 (en) 2005-11-28
DE69734483D1 (de) 2005-12-01
PL331236A1 (en) 1999-07-05
NZ508939A (en) 2002-04-26
WO1998003200A2 (fr) 1998-01-29
CA2260855A1 (en) 1998-01-29
MA24269A1 (fr) 1998-04-01
EP1382348B1 (de) 2005-10-26
PE84699A1 (es) 1999-11-28
IL127703A0 (en) 1999-10-28
ES2210548T3 (es) 2004-07-01
CO4700306A1 (es) 1998-12-29
ATE307607T1 (de) 2005-11-15
US20020160018A1 (en) 2002-10-31
DE69725988D1 (de) 2003-12-11
UA70914C2 (uk) 2004-11-15
PL190122B1 (pl) 2005-11-30
AR007862A1 (es) 1999-11-24
AU734442B2 (en) 2001-06-14
WO1998003200A3 (fr) 1998-02-26
HUP9902791A3 (en) 2000-03-28
CZ298898B6 (cs) 2008-03-05
US6376473B1 (en) 2002-04-23
EP1382348A3 (de) 2004-01-28
EP0912194B1 (de) 2003-11-05
ES2254833T3 (es) 2006-06-16
NZ333751A (en) 2001-03-30
IL127703A (en) 2006-12-31
FR2751229B1 (fr) 1998-11-27
JP2000516200A (ja) 2000-12-05
PT912194E (pt) 2004-03-31
ZA976283B (en) 1999-01-19
HU228353B1 (en) 2013-03-28

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