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DE69703417T2 - Ausgerichtete Peptid-Anordnung und ein rationelles und schnelles Verfahren zum Nachweis einer Bindung oder einer Wechselwirkungsstelle eines Proteins mittels deren - Google Patents

Ausgerichtete Peptid-Anordnung und ein rationelles und schnelles Verfahren zum Nachweis einer Bindung oder einer Wechselwirkungsstelle eines Proteins mittels deren

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DE69703417T2
DE69703417T2 DE1997603417 DE69703417T DE69703417T2 DE 69703417 T2 DE69703417 T2 DE 69703417T2 DE 1997603417 DE1997603417 DE 1997603417 DE 69703417 T DE69703417 T DE 69703417T DE 69703417 T2 DE69703417 T2 DE 69703417T2
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DE
Germany
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protein
sequence
peptide array
binding
ligand
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DE1997603417
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Johji Miwa
Shahid Saeed Siddiqui
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NEC Corp
Original Assignee
NEC Corp
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Publication date
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Description

    HINTERGRUND DER ERFINDUNG 1. Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft gerichtete Peptide und ihre immobilisierten Präparate. Außerdem betrifft sie rationelle, rasche Verfahren zum Nachweisen der Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins mit einem Liganden hierfür (d. h. einer Substanz, die an das Protein bindet bzw. mit dem Protein eine Interaktion eingeht) oder zum Nachweisen eines solchen Liganden durch dessen Verwendung, Verfahren zur Modifizierung bzw. zum Konstruieren eines Proteins oder eines Liganden durch Verwendung von Information an einer so nachgewiesenen Stelle, sowie Immungssay- Verfahren.
    • 2. Stand der Technik
  • Traditionell existierte kein Verfahren zum rationellen, raschen und systematischen Nachweisen der Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins mit einem Liganden hierfür. Zum Beispiel wird der traditionelle Nachweis eines spezifischen Proteins durch Verwendung einer Antigen-Antikörper- Reaktion im allgemeinen aufgrund des Vorhandenseins einer Reaktion mit dem Protein als Ganzes durchgeführt, egal, ob es sich bei dem verwendeten Antikörper um einen polyclonalen oder monoclonalen Antikörper handelt. In diesem Fall führt daher (1) der Nachweis der Reaktion nicht zwingend zum Nachweis der Bindungsstelle und außerdem (2) kann die Anzahl der tatsächlich existierenden Bindungsstellen nicht bekannt sein. Außerdem ist es im Falle eines Nachweises durch Western Blotting oder beim in-situ-Nachweis (z. B. in Zellen oder Geweben) durch Immunantikörpertechniken (3) häufig unmöglich, zu wissen, ob es sich bei dem bindenden Protein um genau das Protein, das man nachzuweisen wünscht, handelt oder nicht. Aus J. Immunology 148 (7), Seiten 2074 bis 2079 (1992) ist eine vom Sm-B/B'-Polypeptid abgeleitete Peptidanordnung mit Segmenten einer geeigneten Länge und eines geeigneten Umfangs (Oktapeptid) bekannt. Zur Untersuchung der Interaktionsstellen werden überlappende Oktapeptide dieses Polypeptids hergestellt.
  • Die vorliegende Erfindung beruht auf einem vollkommen neuen Konzept, und es existiert keine Technik, die damit direkt vergleichbar ist.
  • Da wie oben beschrieben kein Verfahren zum direkten, rationellen und raschen Nachweisen der Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins mit einem Liganden hierfür existierte, beruhten die Modifizierung eines Proteins oder Liganden und die Konstruktion eines neuen Proteins oder Liganden auf dem Zufall. Dementsprechend wurden solche Aufgaben dadurch durchgeführt, daß man sich nur auf den Zufall bzw. die "Eingebung" eines Fachmanns verließ.
    • KURZE DARSTELLUNG DER ERFINDUNG
  • Ein Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß die oben beschriebenen Probleme dadurch gelöst werden, daß ein Verfahren zum rationellen, raschen, systematischen und bequemen Nachweisen der Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins mit einem Liganden hierfür bereitgestellt wird. Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß ein rationelles und rasches Verfahren zum Nachweisen eines Liganden unter Verwendung des oben genannten Verfahrens bereitgestellt wird. Noch ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß rationelle und rasche Verfahren zur Modifizierung bzw. zum Konstruieren eines Proteins oder eines Liganden durch Verwendung von Information, die durch die oben beschriebenen Methoden erhalten wurde, sowie mittels Immungssay-Verfahren bereitgestellt werden.
  • Zur Lösung der oben genannten Aufgaben haben die Erfinder verschiedene Forschungen angestellt und nun die vorliegende Erfindung abgeschlossen. Die vorliegende Erfindung wird in den Ansprüchen definiert.
  • Gemäß einem ersten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine gerichtete Peptidanordnung bereitgestellt, die als getrennte Elemente mehrere Peptidsegmente enthält, die dadurch gewonnen wurden, daß man die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Sequenzsegmente mit gleicher Länge und einem geeigneten Umfang teilte und Peptide synthetisierte, die auf diesen Sequenzsegmenten beruhen, wobei die Peptidsegmente jede Position davon einnehmen.
  • Gemäß einem zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine gerichtete Peptidanordnung bereitgestellt, die als getrennte Elemente mehrere Peptidsegmente enthält, die dadurch gewonnen wurden, daß man die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Sequenzsegmente mit gleicher Länge und einem geeigneten Umfang teilte und Peptide synthetisierte, die auf diesen Sequenzsegmenten beruhen, wobei die Aminosäuresequenzen der Peptidsegmente die Aminosäuresequenz des Proteins ausdrücken, wobei die Peptidsegmente jede Position davon einnehmen.
  • Gemäß einem dritten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat bereitgestellt, das dadurch gewonnen wurde, daß man die gerichtete Peptidanordnung nach dem ersten oder zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung immobilisierte.
  • Gemäß einem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins bereitgestellt, bei dem man die Bindungs- oder Interaktionsstelle eines beliebigen geeigneten Proteins oder eines spezifischen Proteins mit einem Liganden hierfür dadurch nachweist, daß man die gerichtete Peptidanordnung nach dem ersten oder zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
  • Gemäß einem fünften Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zum Nachweisen eines Liganden für ein Protein bereitgestellt, das einen Schritt umfaßt, bei dem man das Nachweisverfahren nach dem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung verwendet.
  • Gemäß einem sechsten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zur Modifizierung eines Proteins bereitgestellt, das einen Schritt umfaßt, bei dem man das Nachweisverfahren nach dem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung verwendet.
  • Gemäß einem siebenten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zum Konstruieren eines Proteins bereitgestellt, das einen Schritt umfaßt, bei dem man das Nachweisverfahren nach dem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung verwendet.
  • Gemäß einem achten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zur Modifizierung ei nes mit dem Nachweisverfahren nach dem fünften Aspekt der vorliegenden Erfindung nachgewiesenen Liganden bereitgestellt, das einen Schritt umfaßt, bei dem man die durch das Nachweisverfahren nach dem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung erhaltene Information über eine Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins verwendet.
  • Gemäß einem neunten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Verfahren zum Konstruieren eines mit dem Nachweisverfahren nach dem fünften Aspekt der vorliegenden Erfindung nachgewiesenen Liganden bereitgestellt, das einen Schritt umfaßt, bei dem man die durch das Nachweisverfahren nach dem vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung erhaltene Information über eine Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins verwendet.
  • Gemäß einem zehnten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein rationelles und rasches Immungssay-Verfahren bereitgestellt, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach dem ersten oder zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung oder ein davon abgeleitetes mobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung kann die Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins mit einem Liganden hierfür rationell, rasch, systematisch und bequem nachgewiesen werden.
  • Der Nachweis eines Liganden für ein spezifisches Protein oder dessen Bindungsstelle wie in Beispiel 2 der vorliegenden Erfindung beschrieben ist nicht nur für die Identifizierung und das Verständnis der Wirkungsweise des Proteins auf molekularem Niveau unumgänglich, sondern auch bei der Konstruktion eines Proteins mit neuen Eigenschaften durch Modifizierung seiner Bindungsstelle wie in Beispiel 3 beschrieben sehr nützlich. So wurde zum Beispiel in Beispiel 3 ein Protein mit der Fähigkeit, sich mit einem Phorbol ester zu verbinden, in ein Protein umgewandelt, das dazu nicht fähig war. Bei Ausweitung dieses Konzepts wird auch die umgekehrte Umwandlung möglich sein. Wird außerdem der Phorbolester als Ligand aufgefaßt, so läßt sich diese Vorgehensweise auf den Nachweis eines beliebigen Proteins und Liganden hierfür anwenden.
  • Kann nun weiterhin eine Ligandenbindungs- oder -interaktionsstelle auf molekularem Niveau identifiziert und Verstanden werden, wird es leichter, den Liganden zu konstruieren oder zu modifizieren. Es wird daher dementsprechend leichter werden, zum Beispiel eine Chemikalie und eine physiologisch wirksame Substanz zu konstruieren, die direkt dadurch auf ein spezifisches Protein einwirken kann, daß sie es als Liganden erkennt.
  • Die vorliegenden Erfindung dient daher auch zur Schaffung eines Proteins oder Liganden mit einer stärker erwünschten Funktion dadurch, daß man die Ligandenbindungs- oder Ligandeninteraktionsstelle des Proteins modifiziert oder konstruiert oder den Liganden modifiziert oder konstruiert. Außerdem gestattet die vorliegende Erfindung, nach unbekannten Liganden für ein beliebiges Protein auf rationelle, rasche, systematische, gezielte, vollständige und wirtschaftliche Weise zu suchen.
  • Weiterhin kann die vorliegende Erfindung ein ausgezeichnetes Immungssay-Verfahren bereitstellen, da aufgrund einer Antigen-Antikörper-Reaktion das reagierende (d. h. das bindende oder die Interaktion eingehende) Peptidsegment bzw. die reagierenden (d. h. die bindenden oder eine Interaktion eingehenden) Peptidsegmente leicht mit dem bloßen Auge, einem Mikroskop oder anderen Nachweismitteln beobachtet werden kann bzw. können.
    • GENAUE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGEN
  • Bei der vorliegenden Erfindung wird die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Sequenzsegmente mit gleicher Länge und einem beliebigen geeigneten überlappenden Umfang geteilt, und Peptide, die den jeweiligen Sequenzsegmenten (im folgenden als "Peptidsegmente" bezeichnet) entsprechen, werden synthetisiert. Die so synthetisierten einzelnen Peptidsegmente werden in einer geeigneten Ordnung angeordnet, zum Beispiel beginnend von einem Terminus (d. h. dem Amino- oder Carboxyterminus) des Proteins. Dann werden sie auf einer geeigneten Substanz immobilisiert oder in Lösung gebracht und in einem geeigneten Behältnis aufbewahrt. Diese Mehrzahl geeignet angeordneter Peptidsegmente wird als gerichtete Peptidanordnung, Peptall oder PEPTALL bezeichnet.
  • Zum Beispiel läßt sich eine gerichtete Peptidanordnung dadurch bilden, daß man Peptidsegmente auf geeignete Weise anordnet, um zur Aminosäuresequenz eines Proteins wie in der folgenden Formel (I) dargestellt zu gelangen. In dieser Formel sind die durch "//" getrennten Peptideinheiten unabhängige Peptidsegmente. Obwohl in diesem Beispiel jedes Peptidsegment aus 10 Aminosäuren besteht, kann die Anzahl der Aminosäuren und der Umfang der Peptidsegmente in einem Protein willkürlich gewählt werden.
  • Wenn zur Zeit jedes Peptidsegment aus bis zu mehreren zig Aminosäuren besteht, dann können mehrere zig Peptidsegmente gleichzeitig binnen kurzem durch Verwendung eines Einzelpeptidsyntheseautomaten synthetisiert werden. Außerdem nimmt die Anzahl der Untersuchungen, in denen nachgewiesen wird, daß ein Protein als Aggregat aus mehreren bis mehre ren zig relativ kurzen funktionellen Peptiden angesehen werden kann, ständig zu.
  • Zu den Substanzen, die sich zur Immobilisierung der erfindungsgemäßen gerichteten Peptidanordnung eignen, zählen Membranen wie Membranfilter. Gele in Plattenform, wie Agar und Polyacrylamid, zählen ebenfalls dazu. Spezifische Beispiele der Gele in Plattenform sind Agarmedien zur Kultur von Bakterien, die in Behältnisse wie Petrischalen gegeben werden. Außerdem kann die erfindungsgemäße gerichtete Peptidanordnung auch dadurch hergestellt werden, daß man ihre Peptidsegmente in ein Behältnis gibt, in dem sie getrennt voneinander vorliegen können. Insbesondere kann die gerichtete Peptidanordnung dadurch hergestellt werden, daß man Lösungen herstellt, die ihre Peptidsegmente enthalten, und diese in Mikrotiternäpfchen gibt, so daß sie getrennt voneinander vorliegen. Weiterhin kann die erfindungsgemäße gerichtete Peptidanordnung in der Form eines Mikrochips oder Mikrogeräts mit einem integrierten Schaltkreis, auf dem die gerichtete Peptidanordnung angeordnet und immobilisiert ist, hergestellt werden.
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung können aufgrund des grundlegenden Konzepts, daß die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Peptideinheiten gleicher Länge geteilt ist, eine Vielzahl genauer Informationen über Peptidsegmente, die den Peptideinheiten entsprechen, dadurch gewonnen werden, daß man verschiedene ausführliche Versuche (darunter Prüfung und Konstruktion) an einer gerichteten Peptidanordnung, die die regelmäßig angeordneten Peptidsegmente enthält, durchführt. Anders ausgedrückt bedeutet dies, daß genaue Informationen über einen beliebigen Teil des ursprünglichen Proteins erhalten werden können. So kann man das für die Modifikation des ursprünglichen Proteins oder zur Konstruktion eines neuen Proteins erforderliche Wissen bzw. die dafür erforderlichen Informationen auf rationelle, rasche, analytische, systematische und leichte Weise erhalten. Außerdem kann ein Ligand für ein beliebiges Protein nachgewiesen werden, und das Wissen und die Informationen über die Ligandenbindungs- oder Ligandeninteraktionsstelle des Proteins lassen sich auf rationelle, rasche, analytische und systematische Weise erhalten. So können das zur Modifikation des Liganden oder zur Neukonstruktion eines Liganden erforderliche Wissen bzw. die dafür erforderlichen Informationen auf rationelle, rasche, analytische und systematische Weise erhalten werden.
  • Der Ausdruck "Ligand" bedeutet im folgenden Zusammenhang eine beliebige Substanz, die an Proteine oder beliebige andere Moleküle bindet bzw. mit Proteinen oder beliebigen anderen Molekülen eine Interaktion eingeht. Dazu zählen zum Beispiel Antikörper, Chemikalien wie zum Beispiel pharmazeutische Arzneistoffe, Agrarchemikalien und Insektizide, physiologisch wirksame Stoffe wie Toxine, Pheromone und Hormone, sowie biologische Substanzen wie andere Proteine, Nukleinsäuren (z. B. DNA und RNA), Kohlenhydrate und Lipide.
  • Natürlich kann das für die vorliegende Erfindung verwendete Konzept auf die Herstellung von Anordnungen beliebiger Moleküle zum Nachweis von beliebigen bindenden oder eine Interaktion eingehenden Molekülen angewandt werden.
  • Die vorliegende Erfindung kann auch auf Immungssay-Verfahren angewandt werden. Dazu zählen zum Beispiel der durch ELISA repräsentierte Enzym-Immungssay, der Virus-Immungssay, der Metall-Immungssay, der Fluoreszenz-Immungssay und der Radio-Immungssay.
  • Bei diesen Immungssay-Verfahren kann ein Antikörper zum Nachweis seiner Antikörperbindungs- oder -interaktionsstelle zuerst mit einer geeigneten Substanz (d. h. einem Enzym, Bakteriophagen, Metall, Fluoreszenzmittel oder radioaktivem Isotop) modifiziert und anschließend mit einem gerichteten Peptid reagieren gelassen werden. Es ist jedoch auch möglich, einen Antikörper zuerst mit einem gerichteten Peptid reagieren zu lassen und ihn dann mit solch einer Substanz vor dem Nachweis zu modifizieren. Der Zweck der Modifizierung besteht darin, daß die Beobachtung der Stelle, an der die Reaktion mit dem Antikörper stattfindet (d. h. Bindungs- oder Interaktionsstelle) zu erleichtern. Das heißt, daß man den Antikörper nicht direkt, sondern mit einer durch die Verwendung solch eines geeigneten Modifizierungsmittels erhöhten Nachweisempfindlichkeit nachweist.
  • Die vorliegende Erfindung wird durch die Beispiele unten genauer erläutert. Diese Beispiele sind jedoch nicht als erfindungsbeschränkend aufzufassen.
    • Beispiel 1
  • Die vorliegende Erfindung wird im Zusammenhang mit einem Beispiel erklärt, bei dem sie auf den Nachweis der Bindungsstelle eines spezifischen Proteins mit einem Antikörper gegen das Protein (d. h. der Antikörpererkennungsstelle des Proteins) angewandt wird. In diesem Beispiel wurde versucht, die Bindungsstelle von Tubulin, bei dem es sich um ein mikrotubulibildendes Protein handelt, mit einem dagegen gerichteten Antikörper (d. h. Anti-Tubulin-Antikörper) nachzuweisen.
  • Zuerst wurde die Aminosäuresequenz des von einem Nematoden stammenden Alpha-3-Tubulin, wie in Formel (II) unten gezeigt, in 45 Sequenzsegmente zu je 10 Aminosäuren geteilt (mit Ausnahme des letzten Sequenzsegments, das aus 12 Aminosäuren bestand).
  • Anschließend wurden gemäß den Aminosäuresequenzen der jeweiligen Sequenzsegmente Peptidsegmente synthesisiert. Diese Peptidsegmente wurden zur Herstellung einer Membran mit gerichteter Peptidanordnung auf einem Membranfilter angeordnet und immobilisiert.
  • Diese Membran mit gerichteter Peptidanordnung wurde zuerst mit einem Antikörper gegen acetyliertes Tubulin und anschließend mit einem Sekundärantikörper mit mit Meerrettichperoxidase markiertem Maus-Anti-Kaninchen-IgG reagieren gelassen. Danach wurde durch Färbung der Membran mit der gerichteten Peptidanordnung die Reaktionsstelle aufgrund einer Farbentwicklungsreaktion identifiziert.
  • Bei diesem Beispiel wurde eine Farbentwicklung bei den Peptidsegmenten, die dem vierten und fünften Sequenzsegment der Formel (II) entsprachen, beobachtet.
  • Aus den obigen Ergebnissen läßt sich ableiten, daß sich die Bindungsstelle von Alpha-3-Tubulin mit dem im vorliegenden Beispiel verwendeten Antikörper gegen acetyliertes Tubulin in der Aminosäuresequenz QPDGQMPSDKSLGGSDDSFS befindet.
    • Beispiel 2
  • Zuerst wurde eine Aminosäuresequenz, die einem Teil der Regulationsregion von Proteinkinase C (PKC) entsprach, wie in Formel (III) unten gezeigt geteilt, und die entsprechenden Peptidsegmente wurden synthetisiert. Eine Membran mit gerichteter Peptidanordnung wurde dann wie oben in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.
  • Die Membran mit der gerichteten Peptidanordnung wurde mit einem mit Tritium (³H) markierten Phorbolester reagieren gelassen und anschließend mit einem Photofilm in Kontakt gebracht. Die Reaktionsstelle wurde auf diese Weise durch Autoradiographie identifiziert.
  • Bei diesem Beispiel wurde eine Bestrahlung an der Position des Peptidsegments, das dem dritten Sequenzsegment der Formel (III) entspricht, beobachtet. Dieses Sequenzsegment entspricht einer "zinkfingerartigen" Sequenz, von der traditionellerweise angenommen worden war, daß es sich um eine Bindungsstelle für Phorbolester handelt.
    • Beispiel 3
  • In dem in Beispiel 2 nachgewiesenen dritten Peptidsegment wurde eine Aminosäure wie in Formel (IV) unten dargestellt substituiert. Bis auf diese Modifizierung wurde der Nachweis auf die gleiche Art und Weise wie in Beispiel 2 durchgeführt.
  • Dementsprechend wurde an der Position des dritten Peptidsegments, an der eine Aminosäure ersetzt worden war, keine Bestrahlung beobachtet. Dies kann so interpretiert werden, daß als Ergebnis der Substitution von G (Glycin) im dritten Peptidsegment durch E (Glutaminsäure) der als Ligand agierende Phorbolester seine Fähigkeit, an diese Region zu binden, verloren hat.
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  • SEQUENZART: Aminosäure
  • ART DES MOLEKÜLS: Peptid
  • SEQUENZ:

Claims (28)

1. Gerichtete Peptidanordnung, die als getrennte Elemente mehrere Peptidsegmente enthält, die dadurch gewonnen wurden, daß man die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Sequenzsegmente mit gleicher Länge und einem geeigneten Rahmen teilte und Peptide synthetisierte, die auf diesen Sequenzsegmenten beruhen, wobei die Peptidsegmente jede Position davon einnehmen.
2. Gerichtete Peptidanordnung, die als getrennte Elemente mehrere Peptidsegmente enthält, die dadurch gewonnen wurden, daß man die Aminosäuresequenz eines Proteins in nicht überlappende Sequenzsegmente mit gleicher Länge und einem geeigneten Rahmen teilte und Peptide synthetisierte, die auf diesen Sequenzsegmenten beruhen, wobei die Aminosäuresequenzen der Peptidsegmente die Aminosäuresequenz des Proteins ausdrücken, wobei die Peptidsegmente jede Position davon einnehmen.
3. Immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat, das dadurch gewonnen wurde, daß man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisierte.
4. Gerichtete Peptidanordnungsmembran mit einer Membran, auf der die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisiert ist.
5. Immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat mit einem Gel, auf dem die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisiert ist.
6. Gerichtete Peptidanordnungsplatte mit einem Gel in der Form einer Platte, auf dem die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisiert ist.
7. Gerichtetes Peptidanordnungspräparat mit einer Reihe von Mikrotiternäpfchen, in die Lösungen, die die Peptidsegmente, die die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 darstellen, enthalten, so gegeben werden, daß sie getrennt voneinander vorliegen.
8. Mikrochip mit integriertem Schaltkreis, auf dem die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisiert ist.
9. Mikrogerät mit integriertem Schaltkreis, auf dem die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 immobilisiert ist.
10. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins, bei dem man die Bindungs- oder Interaktionsstelle eines beliebigen geeigneten Proteins oder eines spezifischen Proteins mit einem Liganden hierfür dadurch nachweist, daß man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
11. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um einen Antikörper handelt.
12. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um einen pharmazeutischen Arzneistoff, eine Agrarchemikalie oder ein Insektizid handelt.
13. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um ein Pheromon oder ein Hormon handelt.
14. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um ein anderes Protein handelt.
15. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um eine Nukleinsäure handelt.
16. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um ein Kohlenhydrat handelt.
17. Verfahren zum Nachweisen einer Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins nach Anspruch 10, wobei es sich bei dem Liganden um ein Lipid handelt.
18. Verfahren zum Nachweisen eines Liganden für ein Protein, das einen Schritt umfaßt, bei dem das Nachweisverfahren nach Anspruch 10 verwendet wird.
19. Verfahren zur Modifizierung eines Proteins, das einen Schritt umfaßt, bei dem das Nachweisverfahren von Anspruch 10 verwendet wird.
20. Verfahren zum Konstruieren eines Proteins, das einen Schritt umfaßt, bei dem das Nachweisverfahren von Anspruch 10 verwendet wird.
21. Verfahren zur Modifizierung eines mit dem Nachweisverfahren nach Anspruch 18 nachgewiesenen Liganden, das einen Schritt umfaßt, bei dem man die durch das Nachweisverfahren nach Anspruch 10 erhaltene Information über eine Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins verwendet.
22. Verfahren zum Konstruieren eines mit dem Nachweisverfahren nach Anspruch 18 nachgewiesenen Liganden, das einen Schritt umfaßt, bei dem man die durch das Nachweisverfahren nach Anspruch 10 erhaltene Information über eine Bindungs- oder Interaktionsstelle eines Proteins verwendet.
23. Immungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
24. Ein durch ELISA repräsentiertes EnzymImmungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
25. Virus-Immungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
26. Metall-Immungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
27. Fluoreszenz-Immungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
28. Radio-Immungssay-Verfahren, bei dem man die gerichtete Peptidanordnung nach Anspruch 1 oder 2 oder ein davon abgeleitetes immobilisiertes gerichtetes Peptidanordnungspräparat verwendet.
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Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999039210A1 (en) * 1998-01-29 1999-08-05 Miller, Samuel High density arrays for proteome analysis and methods and compositions therefor
EP1965213A3 (de) 1998-02-04 2009-07-15 Invitrogen Corporation Microarrays und ihre Verwendungen
EP1159615A2 (de) * 1999-03-10 2001-12-05 National Institutes of Health, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services of the Government Universales eiweiseinreihungssystem
EP1179186B1 (de) * 1999-05-14 2006-01-11 McGill University Methoden zur identifizierung von modulatoren wechselwirkender proteine
EP1684077A1 (de) * 1999-05-14 2006-07-26 McGill University Verfahren zur Identifizierung von Modulatoren wechselwirkender Proteine
KR20000071894A (ko) * 1999-08-19 2000-12-05 김선영 단백질칩 및 이를 이용한 다목적 자동화 진단시스템
AU1630501A (en) * 1999-10-08 2001-04-23 Superarray, Inc. Compositions and methods for detecting protein modification and enzymatic activity
CN1654956A (zh) 2000-05-04 2005-08-17 耶鲁大学 用于筛选蛋白活性的高密度蛋白阵列
DE60120713T2 (de) 2000-08-15 2007-06-06 Discerna Ltd. Funktionelles protein array
US6539102B1 (en) 2000-09-01 2003-03-25 Large Scale Proteomics Reference database
US6980674B2 (en) 2000-09-01 2005-12-27 Large Scale Proteomics Corp. Reference database
ATE538380T1 (de) 2001-01-23 2012-01-15 Harvard College Nukleinsäure-programmierbare protein-arrays
EP1393073A4 (de) * 2001-05-03 2007-03-28 Sigma Genosys Ltd Konstruktionsverfahren für protein-mikroarrays
EP1403640B1 (de) 2001-05-07 2007-12-05 HiPep Laboratories Peptidimmobilisierte grundplatte und vefahren zum testen eines zielproteins unter verwendung derselben
AU2003300168A1 (en) * 2002-12-31 2004-07-29 Rodi Pharma, Inc. Bindingzyme arrays and high-throughput proteomic methods
US7736909B2 (en) 2003-01-09 2010-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions comprising capture agents
US20040248323A1 (en) 2003-06-09 2004-12-09 Protometrix, Inc. Methods for conducting assays for enzyme activity on protein microarrays
KR100690948B1 (ko) 2004-06-17 2007-03-09 한국과학기술원 대장균의 외막 단백질을 이용한 목적 단백질의 미생물표면발현 방법
KR100784261B1 (ko) 2006-01-02 2007-12-11 한국과학기술원 탄저균의 포자외막 단백질을 이용한 목적단백질의 미생물표면발현방법
US8178316B2 (en) 2006-06-29 2012-05-15 President And Fellows Of Harvard College Evaluating proteins
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Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2422492A (en) * 1991-08-07 1993-03-02 H & N Instruments, Inc. Synthesis of chain chemical compounds

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