DE69618817T2

DE69618817T2 - Fungizide substanzen be-49385 und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE69618817T2
Application number: DE69618817T
Authority: DE
Inventors: Kenji Kawamura; Katsuhisa Kojiri; Hiroshi Kushida; Masao Nagashima; Shigeru Nakajima; Hiroyuki Suda; Shigeru Uchiyama
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1995-11-21
Filing date: 1996-11-15
Publication date: 2002-11-14
Anticipated expiration: 2016-11-16
Also published as: DE69618817D1; EP0877091B1; AU7587596A; JP3517880B2; EP0877091A4; US5928910A; WO1997019186A1; EP0877091A1; CA2238190A1; ATE212379T1; CA2238190C

Description

TECHNISCHES GEBIET

Die vorliegende Erfindung ist brauchbar auf pharmazeutischem Gebiet. Mehr im Besonderen bezieht sich die vorliegende Erfindung auf neue Verbindungen mit fungiziden bzw. antifungalen Wirkungen, ein Verfahren zu deren Herstellung und Anwendungen davon sowie einen Mikroorganismus, der solche Verbindungen erzeugt.

Stand der Technik

Auf dem Gebiet der Chemotherapie gegen Mikrobenbefall wurden bereits viele Verbindungen praktisch als pharmazeutische Produkte eingesetzt. Die existierenden chemotherapeutischen Mittel sind jedoch hinsichtlich ihrer Wirkungen gegen Mykose aufgrund der Infektion durch sogenannte Eumyceten, wie Pilze oder Hefe, nicht notwendigerweise angemessen, und das Auftreten resistenter Stämme wurde ein ernstes klinisches Problem.

Offenbarung der Erfindung

Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein neues antifugales Mittel mit stärkeren antifungalen Wirkungen gegen Pilze zu finden.
Die Erfinder haben ein Screening sekundärer Metaboliten von Mikroorganismen im weiten Umfang hinsichtlich Substanzen mit antifungalen Wirkungen ausgeführt, um die Aufgabe zu lösen, und als ein Ergebnis haben sie festgestellt, dass die durch die nachfolgende allgemeine Formel I repräsentierte Verbindung ausgezeichnete antifungale Wirkungen hat und so die Erfindung gemacht.
Die vorliegende Erfindung schafft eine neue Verbindung der allgemeinen Formel (I):
worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder
oder
ist und R&sub2; ein Wasserstoffatom oder eine niedere Alkanoylgruppe ist; ein Verfahren zu deren Herstellung und ihre Anwendung sowie einen zur Gattung Paecilomyces gehörenden Mikroorganismus, der zur Erzeugung einer Verbindung der allgemeinen Formel (11) in der Lage ist;
worin R&sub2;&sub0; ein Wasserstoffatom ist und R&sub1; die obengenannte Bedeutung hat.
Von den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoff ist, als BE-49385A bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385B bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385C bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385D bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385E bezeichnet, eine Verbindung, worin jedes von R&sub1;
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385F bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385G bezeichnet, eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; ein Wasserstoffatom ist, als BE-49385H bezeichnet und eine Verbindung, worin R&sub1; eine Gruppe der Formel ist
und R&sub2; eine Acetylgruppe ist, als BE-49385A-Ac bezeichnet.
Der Begriff "nieder", wie er in der vorliegenden Beschreibung benutzt wird, bedeutet, dass die Anzahl der Kohlenstoffe der Gruppe mit dieser Bezeichnung höchsten 6, vorzugsweise höchstens 4 beträgt. Die "niedere Alkanoylgruppe" bedeutet eine lineare oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe, wie eine Formylgruppe, eine Acetylgruppe, eine Propionylgruppe, eine Isopropionylgruppe, eine Isobutyrylgruppe, eine sec-Butyrylgruppe, eine tert-Butyrylgruppe, eine Pentanoylgruppe, eine Isopentanoylgruppe, eine Neopentanoylgruppe oder eine Hexanoylgruppe.
Im Folgenden werden die physikochemischen Charakteristika der antifungalen Substanzen BE-49385 der vorliegenden Erfindung angegeben. Die Abkürzungen in den NMR-Messungen haben die folgenden Bedeutungen.
s: Singlett
d: Dublette
t: Triplett
q: Quartett
m: Multiplett
br: breit
J: Kupplungskonstante
H&sub2;: Hertz

Physikochemische Charakteristika von BE-49385A

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;O&sub7;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 575,3945
errechneter Wert 575,3947
Spezifische Drehung: [α]²&sup0;D = -66,0º (c = 1,00, CHCl&sub3;)
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
Infrarot-Absorptionsspektrum: (KBr, cm&supmin;¹): 3496, 3438, 3398, 2962, 1727, 1540, 1459, 1382, 1197, 1135
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.30 (1H, dt, J = 7.3, 4.0 Hz), 5.14 (1 H, s), 5.04 (1 H, brt, J = 9.0 Hz), 4.71 (1H, s), 4.38 (1 H, dq, J = 10.0, 6.4H z) , 4.22 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.58 (1H, s), 3.12 (2H, m), 3. 07(1H, d, J = 4.0 Hz), 2.80 (1H, s), 2.49 (1H, d, J = 15.6H z), 2.39 (1H, d, 15.6 Hz), 2.26 (1H, dd, J = 11.6, 7.3 Hz), 2.20 (1H, brt, J = 12. 2 Hz), 1.92-2.07 (4H, m), 1.66-1.85 (3 H, m), 1.63 (3H, s), 1.54 (2H, m), 1.46 (3H, d, J = 6.4H z), 1.31-1.43 (3H, m), 1.23 (3H, s), 1.13-1.26 (2H, m), 1. 08 (1H, t, J = 12.2 Hz), 0.98 (3H, s), 0.94 (6H, d, J = 6.4H z), 0.90 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.87(3H, t, J = 7.0 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.0(s), 172.7(s), 150.4(s), 143.0(s), 116.7(d), 11 0.9(t), 79.8(d), 77.5(d), 76.4(s), 74.5(d), 71.5(s), 53.3 (d) , 50.5(d), 49.4(d), 48.2(t), 47.3(t), 45.8(t), 45.7 (d), 45.6(t), 43.3(d), 42.2(s), 35.0(t), 31.0(t), 30.3 (d), 29.6(d), 27.2(q), 26.2(q), 23.9(q), 21.7(q), 21.5 (t), 21.3(q), 20.5(q), 19.4(q), 11.2(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,29 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385B

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub5;H&sub5;&sub6;O&sub7;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 589,4083
errechneter Wert 589,4104
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.33 (1K, dt, J = 7.3, 4.0 Hz), 5.14 (1H, s), 5.04 (1H, brt, J = 9.2 Hz), 4.71 (1H, s), 4.38 (1H, dq, J = 11.0, 6.3H z), 4.22 (1H, s), 4.16 (1H, m), 3.06-3.16 (3H, m), 2.83 (1H, s), 2.65 (1H, d, J = 6.1 Hz), 2.24 (1H, dd, J = 11.6, 7. 3 Hz), 2.20 (1H, m), 2.05 (2H, m), 1.96 (2H, m), 1.81 (3H, m), 1.71 (1H, m), 1.67 (1H, m), 1.63 (3H, s), 1.46 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.25-1.46(5H, m), 1.15 (1H, dd, J = 11.6, 7. 3 Hz), 1.08 (2H, m), 0.98 (3H, s), 0.95 (1H, m), 0,94 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.93 (3H, d, J = 6.7 Hz), 0.89 (3H, d, j = 6.4 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.86 (3H, t. J = 7,0 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
175.3(s), 173.0(s), 150.4(s), 142.9(s), 116.7(d). 110. 9(t), 80.8(d), 77.5(d), 76.4(s), 74.4(d), 69.0(d), 53.2 (d), 50.5 (d), 49.4(d), 47.1 (t), 45.7 (t), 45.7(d), 43.9 (t), 43.3(d), 42.3(t), 42.3(s), 34.9(t), 31.4(d), 29.5(d), 28. 5(t), 26.8(d), 26.2(q), 23.9(q), 21.6(q), 21.5(t), 20.6 (q), 20.4(q), 19.9(q), 19.4(q), 10.9(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,30 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385C

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;O&sub6;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 559,3984
errechneter Wert 559,3999
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDU3) δ ppm:
6.23 (1H, dt, J = 7.6, 4.0 Hz), 5.14 (1H, s), 5.04(1H, brt, J = 9.0 Hz), 4.71 (1H, s), 4.38 (1H, dq, J = 11.0, 6.4H z), 4.21 (1H, brs), 3.05-3.16 (3H, m), 2.84 (1H, s), 2.16- 2.27 (3H, m), 1.90-2.07 (6H, m), 1.82 (1H, dt, J = 12.8. 2. 8 Hz), 1.67-1.78 (2H, m), 1.63 (3H, s), 1.46 (3H, d, J = 6. 4 Hz), 1. 32-1. 43 (3H, m), 1. 23 (1H, m), 1. 04-1. 16 (3H, m), 0.99 (1H, m), 0.97 (3H, s), 0.93 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.91 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.86 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.86 (3H, t, J = 7.3 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.0(s), 172.8(s), 150.5(s), 143.1(s), 116.6(d), 110. 9(t), 79.1(d), 77.5(d), 76.4(s), 74.5(d), 53.3(d), 50.5 (d) , 49.4(d), 47.3(t), 45.8(t), 45.8(d), 44.1(t), 43.4(d), 42.2(s), 42.1(t), 35.1(t), 29.7(d), 29.0(t), 28.0(d), 26. 2(q), 423.9(q), 21.7(q), 21.5(t), 20.4(q), 20.2(q), 19.5 (q), 19.4(q), 11.0(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,43 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385D

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub3;H&sub4;&sub4;O&sub7;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 553,3180
errechneter Wert 553,3165
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
7.30-7.41 (5H, m), 5.32 (1H, dt, J = 7.3, 4.0 Hz), 5.12 (2H, brs), 5.01 (1H, t, J = 9.0 Hz), 4.70 (1H, s), 4.36 (1H, dq, J = 11.0, 6.4 Hz), 4.20 (1H, s), 3.44 (1H, d, J = 5.8 Hz), 3.00-3.12 (3H, m), 2.77 (1H, s), 2.16 (1H, dt, J = 12.5, 3. 1 Hz), 2.10 (1H, dd, J = 12.0, 7.3 Hz), 2.03 (1H, dd, J = 11. 0,6. 4 Hz), 1.93 (2H, m), 1.88 (1H, dd, J = 12.5, 3.1 Hz), 1.77 (2H, m), 1.69 (1H, m), 1.60 (3H, s), 1.45 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.34 (1H, ddd, J = 12.5, 12.5, 12.5 Hz), 0.95 (1 H, m), 0.94 (3H, s), 0.93 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.90 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.86 (1H, m)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.1(s), 172.9(s), 150.4(s), 142.7(s), 138.3(s), 128. 4(d), 128.4(d), 128.3(d), 126.4(d), 126.4(d), 116.7(d), 110.9(t) 81.5(d), 77.5(d), 76.3(s), 74,4(d), 72.8(d), 53. 1(d), 50.3(d), 49.4(d), 46.4(t), 45.6(d), 45.6(t), 43.2 (d), 42.1(s), 34,99(t), 29.5(d), 26.2(q), 23.9(q), 21.6(q), 21.5(t), 20.4(q), 19.4(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,19 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385E

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;O&sub8;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 591,3880
errechneter Wert 591,3897
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.38 (1H, dt, J = 7.3, 4.0 Hz), 5.14 (1H, s), 5.05 (1H, t, J = 9.3 Hz), 4.72 (1H, s), 4.38 (1H, dq, J = 10.8, 6.3 Hz), 4. 22 (1H, s), 3.98 (1H. d, 36.1 Hz), J=6.1 Hz), 3.06-3.16 (4H, m), 2. 82 (1H, s), 2.49 (1H, s), 2.28 (1H, dd, J = 11.6, 7.3 Hz), 2. 21 (1H, brt, J = 12.5 Hz), 1.92-2.07 (4H. m), 1.82 (2H. m), 1.72 (1H, m), 1,65 (1H, m), 1,63 (3H, s), 1,49 (2H,m) 1.46 (1H, m), 1.46 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.37 (1H, ddd, J = 11.6, 11.6, 11.6 Hz), 1.20 (2H. m), 1.18 (3H, s), 1.07 (1H, t, J = 12.5 Hz), 0.99 (3H, s), 0.96 (3H, d, J = 6.7 Hz), 0.95 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.90 (3H, d, J = 7.3 Hz), 0.89 (3H, t, J = 7.3 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
172.9(s), 172.8(s), 150.3(s), 142.8(s), 116.8(d), 111. 0(t), 81.5(d), 77.5(d), 76.3(s), 76.1(d), 74.4(d), 74.3 (s), 53.2(d) 50.6(d), 49.4(d), 47.0(t), 45.7(t), 45.7(d), 44.2(t), 43.2(d), 42.2(s), 34.8(t), 31.0(t), 29.8(d), 29. 5(d), 26.2(q), 23.9(q), 23.1(q), 21.6(q), 21.5(t), 21.1 (q), 20.4(q), 19.4(q), 11.2(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,14 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385F

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub8;O&sub5;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 419,2785
errechneter Wert 419,2797
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.13 (1H, s), 5.03 (1H, brt, J = 9.2 Hz), 4.69 (1H. s), 4.35 (2H, m), 4.23 (1H, s), 3.24 (1H, brs), 3.11 (2H, m), 2.19 (1H, dt, J = 12.2, 2.4 Hz), 2.00-2.09 (3H, m), 1.95 (2 H, m), 1.83 (1H, dt, J = 12.5, 3.0 Hz), 1.66 (1H, m), 1.6 2 (3H, s), 1.50 (1H, dt, J = 10.4, 4.0 Hz), 1.45 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.34 (1H, ddd, J = 12.5, 12.5, 12.5 Hz), 1.23 (1H, dd, J = 11.3, 8.8 Hz), 1.08 (1H, t, J = 12.2 Hz), 1.00 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.96 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.93 (3H. s)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.1(s), 150.6(s), 143.1(s), 116.6(d), 110.8(t), 77. 5(d), 77.3(d), 76.4(s), 74.5(d), 57.6(d), 50.7(d), 50.2 (t), 49.5(d), 45.9(t), 45.8(d), 43.3(d), 42.3(s), 35.1(t), 29.8(d), 26.2(q), 24.1(q), 21.8(q), 21.5(t), 20.5(q), 19. 4(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rt-Wert: 0,09 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385G

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub4;H&sub5;&sub4;O&sub8;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 589,3730
errechneter Wert 589,3741
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.35 (1H, dt, J = 7.6, 3.7 Hz), 5.14 (1H, s), 5.04 (1H, brt, J = 9.2 Hz), 4.71 (1H, s), 4.38 (1H, dq, J = 11.0, 6.4H z), 4.22 (2H, m), 4.05 (1H, brs), 3.82 (1H, m), 3.02-3.16 (3H, m), 2.83 (1H, s), 2.28 (1H, dd, J = 12.0, 7.6 Hz), 2. 19 (1H, brt, J = 12.5 Hz), 2.05 (2H, m), 1.96 (2H, m), 1.81 (2H, m), 1.72 (1H, m), 1.63 (3H, s), 1.54-1.64 (2H, m), 1.46 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.13-1.40 (7H, m), 1.09 (1H, t, J = 12.5 Hz), 0.98 (3H, s), 0.95 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.90 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.7 Hz), 0.88 (3H, t, J = 7.3H
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.2(s), 173.0(s). 150.4(s), 142.9(s), 116.7(d), 110. 9(z), 81.5(d), 77.5(d), 76.4(s), 74.5(d), 73.0(d). 72.9 (d), 53.3(d), 50.5(d), 49.4(d), 47.2(t), 45.7(d), 45.7(t). 43.3(d), 42.3(s), 34.9(t), 34.2(d), 32.4(t), 31.3(t), 29. 5(d), 29.3(t), 26.3(q), 23.9(q), 21.6(q), 21.5(t), 20.5(q), 19.4(q), 19.0(q), 11.2(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,16 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385H

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub5;H&sub5;&sub6;O&sub8;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;:
gemessener Wert 605,4050
errechneter Wert 605,4054
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3; ) δ ppm:
5.35 (1H, dt, 4.3, 4 Hz), 5.14 (1H, s), 5.04 (1H, brt, J = 9.2 Hz), 4.71 (1H, s), 4.38 (1H, dq. J = 11.0, 6.4H z), 4.21 (2H, m), 3.52 (1H, m), 3.04-3.16 (3H, m). 2.99 (1H, brd, J = 3.7 Hz), 2.78 (1H, s), 2.27 (1H, dd, J = 12.0, 7.0 Hz), 2.20 (1H, brt, J = 12.5 Hz), 2.05 (2H, m), 1.95 (2H, m), 1.81 (3H, m), 1.73 (1H, m), 1.63 (3H, brs), 1.46 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.33-1.50 (4H, m), 1.22 (1H, dd, J = 12.0, 8. 0 Hz), 1.00-1.12 (3H, m), 1.00 (3H, d, J = 6.7 Hz), 0.98 (3H, s), 0.95 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.90 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.89 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.87 (3H, t, J = 7.3 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
173.6(s), 172.9(s), 150.4(s), 142.9(s), 116.7(d), 110. 9(t), 81.5(d), 77.5(d), 76.4(s), 76.4(d), 74.5(d), 71.3 (d), 53.2(d), 50.5(d), 49.4(d), 47.0(t), 45.7(d), 45.6(t), 43.3(d), 42.3(s), 40.3(t), 34.9(t), 33.6(d), 31.3(d), 29. 5(d), 28.0(t), 26.2(q), 23.9(q), 21.6(q), 21.5(t), 20.5 (q), 20.0(q), 19.4(q), 15.3(q), 10.7(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,21 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Physikochemische Charakteristika von BE-49385A-Ac

Natur: Weißer amorpher Festkörper oder Kristalle
Molekülformel: C&sub3;&sub6;H&sub5;&sub6;O&sub8;
Massenspektrometrie: [Hohe Auflösung FAB-MS] als (M+H)&spplus;: 617
Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Es wird Endabsorption gezeigt.
¹H-NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
5.44 (1H, s), 5.29 (1H, m), 5.17 (1H, brs), 5.05 (1H, t, J = 8.4 Hz), 4.86 (1H, brs), 4.35 (1H, m), 3.57 (1H, brs), 3.13 (1H, dd, J = 14.6, 9.8 Hz), 3.03 (1H, m), 2.68 (1H, br s), 2.49 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.39 (1H, d, J = 15.6 Hz), 2.2 6 (1H, dd, J = 12.0, 7.3 Hz), 2.20 (3H, s), 2.19 (1H, m), 1. 93-2.11 (4H, m), 1.66-1.80 (3H, m), 1.63 (3H, s), 1.50-1. 56 (2H, m), 1.46 (3H, d, J = 6.1 Hz), 1.30-1.43 (3H, m), 1. 23 (3H, s), 1.12-1.24 (2H, m), 1.07 (1H, t, J = 12.5 Hz), 0. 98 (3H, s), 0.94 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.93 (3H, d, 3 = 6.0 Hz), 0.90 (3H, d, J = 6.0 Hz), 0.87 (3H, t, J = 7.3 Hz)
¹³C-NMR-Spektrum (125 MHz, CDCl&sub3;) δ ppm:
172.7(s), 170.9(s), 167.2(s), 149.6(s), 143.0(s), 116. 6(d), 111.9(t), 79.8(d), 76.5(d), 76.4(s), 74.3(d), 71.5 (s), 53.2(d), 50.5(d), 50.4(d), 48.2(t), 47.2(t), 45.7(t), 45.6(t), 45.5(d), 43.0(d), 42.2(s), 35.1(t), 31.0(t), 30. 2(d), 29.6(d), 27.2(q), 26.2(q), 23.7(q), 21.7(q), 21.5 (t), 21.3(q), 20.6(q), 20.4(q); 19.4(q), 11.2(q)
Löslichkeit: Leicht löslich in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Dimethylsulfoxid, und kaum löslich in Wasser.
Unterscheidung von saurer, neutraler oder basischer Substanz:
Neutrale Substanz
Farbreaktion: Schwefelsäure-Reaktion positiv,
Phosphormolybdat-Reaktion positiv
Rf-Wert: 0,6 (unter Einsatz von Kieselgel 60F&sub2;&sub5;&sub4;, hergestellt durch Merck Co., Entwicklungs-Lösungsmittel: Toluol/Tetrahydrofuran/Methanol (50 : 10 : 1)

Biologische Wirkungen (antifungale Wirkungen) von BE-49385

Die minialen Hemmkonzentrationen der antifungalen Substanzen BE-49385 gegen verschiedene Pilze wurden gemessen. Die Messung der MIC wurde nach einem Agar-Verdünnungsverfahren unter Einsatz eines Kulturmediums ausgeführt, das hergestellt war durch Vermischen von 900 ml einer Agarlösung, enthaltend 2,5 g sterilisiertes Dikaliumhydrogenphosphat und 15 g Agar, mit einer Lösung, erhalten durch Auflösen von 6,7 g einer Hefe-Stickstoff-Basis (hergestellt von Difico Co.) und 10 g Glucose in 100 ml gereinigtem Wasser, gefolgt von der Sterilisierung mittels eines Sterilisierungsfilters. BE-49385 wurde in Dimethylsulfoxid in einer Konzentration von 10 mg/ml gelöst und weiter mit Dimethylsulfoxid verdünnt, um eine doppelt verdünnte Reihe zu erhalten, und die Dimethylsulfoxid-Konzentration in der Agarplatte wurde auf 1% eingestellt. Auf der zubereiteten Agarplatte wurden 5 ul der Teststamm-Lösung, eingestellt auf eine Konzentration von 106 Zellen/ml, getropft, gefolgt vom Züchten bei 28ºC für 3 Tage, woraufhin das Wachstum bewertet wurde. Die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC, Einheit: ug/ml) der antifungalen Substanz BE-49385A gegen verschiedene Pilze sind in Tabelle 1 gezeigt, und die MICs von BE-49385-Substanzen gegen Schizosaccharomyces pombe IAM4863 sind in Tabelle 2 gezeigt. Tabelle 1 Antifungale Wirkungen von BE-49385A

Tabelle 2

Minimale Hemmkonzentrationen (MIC, ug/ml von BE-49385 gegen Schizosaccharomyces pombe IAM4863

Verbindungen MIC(ug/ml)

BE-49385A < 0,10
BE-49385B 0,39
BE-49385C 0,39
BE-49385D 0,78
BE-49385E 0,20
BE-49385G 0,39
Wie oben gezeigt, weisen die antifungalen Substanzen BE-49385 bemerkenswerte wachstumshemmende Wirkungen gegen verschiedene Pilze auf. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind demgemäß als antifungale Mittel brauchbar.
Im Folgenden wird ein Verfahren zur Herstellung von BE-49385 beschrieben.
Der für die Produktion der antifungalen Substanzen BE-49385 der vorliegenden Erfindung einzusetzende Mikroorganismus kann irgendein Mikroorganismus sein, solange er in der Lage ist, die antifungalen Substanzen BE-49385 zu produzieren. Es ist jedoch, z. B., möglich, einen Mikroorganismusstamm F49385 mit den folgenden mykologischen Charakteristika zu benutzen, der neu aus Erdboden in Kaminfurani-cho, Hokkaido, Japan durch die Erfinder abgetrennt und gesammelt worden war.

(1) Morphologie

Die Mycelien des F49385-Stammes sind farblos mit einer glatten Oberfläche und sie haben eine Breite von 0,8 bis 2,4 um. Nicht oft werden Conidiophoren mit einer Länge von 5,6 bis 6,4 um und einer Breite das Basisabschnittes von 2,0 bis 2,4 um gebildet. Phialiden können direkt auf den Mycelien oder an den vorderen Enden der Conidiophoren gebildet werden, und sie haben eine Flaschengestalt von 5,6 bis 15,2 · 2,4 bis 3,2 um und schlanke vordere Enden mit einr Breite von 0,8 um. Conidien werden in einer Kettenform von den vorderen Enden der Phialiden gebildet, und sie haben eine Zitronengestalt von 2,8 bis 4,8 · 2,4 bis 2,8 um bei glatter Oberfläche, wobei beide Enden rechteckig mit einer Breite von 0,4 um sind.

(2) Kultur-Charakteristika

Tabelle 3 zeigt die Wachstums-Charakteristika, wenn der F49385-Stamm bei 25ºC 10 Tage lang unter Einsatz verschiedener Agarmedien gezüchtet wurde. Die Farben in der Tabelle sind auf der Grundlage der Farbbezeichnungen im Methuen Handbook of Color, 3. Auflage (1984) angegeben. Tabelle 3 Wachstums-Charakteristika von F49385-Stamm
In jedem Kulturmedium ist das Wachstum relativ langsam, und es wurde kein Sekret an der Kolonie-Oberfläche beobachtet. Weiter wächst der Stamm nicht bei 37ºC. Der Bereich der Wachstums-Temperatur dieses Stammes geht von 11 bis 34ºC und die optimale Wachstums-Temperatur ist 28ºC. Der Bereich des Wachstum-pH ist der von pH 3,5 bis pH 9, und der optimale pH-Bereich ist der von 4,5 bis 6,5.
Aus den vorstehenden mycologischen Charakteristika wurde der F49385-Stamm als Paecilomyces inflatus (Burnside) Carmichael identifiziert und als Paecilomyces inflatus F49385 (monophialide Art von Paecilomyces, Seite 13-15, Mycological Papers, Nr. 107, C. A. B. (1967) und Fungi Canadenses, Nr. 155, National Mycological Herbarium, Agriculture Canada (1979) bezeichnet.
Dieser Stamm wurde als eine internationale Hinterlegung beim National Institute of Bioscience and Human-Technology (NIBH), Agency of Industrial Science and Technology, Ministerium für internationalen Handel und Industrie (Adresse: 1-3, Higashi 1-chome, Tsukubashi, Ibaraki-ken 305, Japan) hinterlegt, und die Hinterlegungsnummer ist FERM BP-5715 (Datum der ursprünglichen Hinterlegung: 8. November 1995).
Mutanten von Paecilomyces inflatus F49385 können nach einem konventionellen Behandlungs-Verfahren zur Stammtransformation hergestellt werden, wie Behandlung durch Bestrahlung mit Röntgenstrahlen oder ultravioletten Strahlen, Behandlung mit einem Mutagen, wie Stickstofflost, Azaserin, salpetriger Säure, 2-Aminopurin oder N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG), Phagenkontakt, Transformation, Transduktion oder Konjugation.
Für die Produktion von BE-49385-Substanzen der vorliegenden Erfindung wird ein BE- 49385 produzierender Stamm einem nährquellen-haltigen Kulturmedium inokuliert und aerob gezüchtet, um ein Züchtungsprodukt zu erhalten, das BE-49385-Substanzen enthält. Als Nährquellen können solche benutzt werden, die als Nährquellen für Pilze bekannt sind. So kann, z. B., als eine Kohlenstoffquelle kommerziell erhältliche Glucose, Glycerin, Maltose, Stärke, Saccharose, Melasse oder Dextrin entweder allein oder in Kombination als eine Mischung benutzt werden. Als eine Stickstoffquelle kann kommerziell erhältliches Sojabohnenpulver, Maiseinweich-Flüssigkeit, Glutenmehl, Fleischextrakt, Hefeextrakt, getrocknete Hefe, Baumwollpulver, Pepton, Weizenkeime, Fischpulver, entfettete Reiskleie, entfettetes Fleisch und Maispulver, ein anorganisches Ammoniumsalz oder Natriumnitrat entweder allein oder in Kombination als eine Mischung benutzt werden. Als ein anorganisches Salz kann beispielsweise kommerziell erhältliches Calciumcarbonat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Magnesiumsulfat, Natriumbromid, Natriumborat oder verschiedene Phosphorsäuresalze benutzt werden. Weiter können Eisen, Mangan, Zink, Cobalt oder Schwermetallsalz von, z. B., Molybdänsäure in sehr geringer Menge hinzugegeben werden. Findet ein kräftiges Schäumen statt, dann kann geeigneterweise ein Pflanzenöl, wie Sojabohnen- oder Leinsamenöl, ein höherer Alkohol, wie Octadecanol, oder verschiedene Siliconverbindungen als ein Entschäumungsmittel hinzugegeben werden. Andere Substanzen können auch benutzt werden, solange sie von dem produzierenden Stamm benutzt werden und der Produktion von BE-49385 dienen, wie 3-(N-Morpholino)propansulfonsäure oder Natriumborat.
Das Züchten kann in der gleichen Weise wie ein übliches Verfahren zum Produzieren eines Metaboliten eines Mikroorganismus ausgeführt werden, und es kann eine feste Kultur oder eine flüssige Kultur sein. Im Falle einer flüssigen Kultur kann eine stationäre Kultur, Rührkultur, Schüttelkultur oder aerobe Kultur ausgeführt werden. Besonders bevorzugt ist eine Schüttelkultur oder tiefe aerobe Rührkultur. Die Züchtungs-Temperatur beträgt üblicherweise von 11 bis 34ºC, insbesondere von 25 bis 30ºC. Ein bevorzugter pH des Kulturmediums liegt im Bereich von 4,5 bis 6,5 und die Züchtungszeit beträgt üblicherweise von 48 bis 500 Stunden, vorzugsweise von 120 bis 400 Stunden. Um die erwünschten BE-49385-Substanzen aus dem gezüchteten Produkt zu sammeln, kann geeigneterweise ein Trennmittel, das gewöhnlich zum Sammeln eines erwünschten Produktes von einem Metaboliten verwendet wird, der durch einen Mikroorganismus produziert wird, benutzt werden.
BE-49385-Substanzen sind in der Kulturlösung oder in den Zellen vorhanden und sie können unter Einsatz üblicher Mittel zur Abtrennung, wie ein Lösungsmittel-Extraktionsverfahren oder ein Ionenaustauscherharz-Verfahren, ein Adsorptions- oder Teilungs-Chromatographieverfahren und ein Gelfiltrations-Verfahren allein oder in der richtigen Kombination benutzt werden, um sie aus der Kulturlösung abzutrennen und zu reinigen.
Als ein bevorzugtes Trenn- und Reinigungs-Beispiel kann das folgende Verfahren erwähnt werden. Zuerst wird die Kulturlösung filtriert, um die Zellen zu erhalten. Die erhaltenen Zellen werden mit einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol oder Aceton, extrahiert. Der erhaltene Rohextrakt wird mittels eines Wasser-Ethylacetat-Systems oder eines Wassern-Hexan-Systems getrennt und die organische Lösungsmittel-Schicht wird destilliert, um einen Rest zu erhalten, der dann der Siliciumdioxidgel-Chromatographie (eluiert mit n-Hexan/Ethylacetat oder mit Toluol/Ethylacetat), ODS-Chromatographie (eluiert mit Acetonitril/Wasser) oder Gelfiltrations-Chromatographie (eluiert mit Wasser-Methanol-System oder Ethanol), falls erforderlich, wiederholt unterworfen wird, um die entsprechenden BE-49385-Substanzen abzutrennen und sie als amorphen Feststoff oder Kristalle zu erhalten.
Um aus den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) nach der vorliegenden Erfindung eine Verbindung herzustellen, worin R&sub2; eine Alkanoylgruppe ist, kann ein Alkanoyl-Modifikations- Verfahren benutzt werden, das auf chemischem Gebiet gut bekannt ist, indem man eine Verbindung der allgemeinen Formel (II), d. h., BE-49385A, B, C, D, E, F, G oder H, als das Ausgangsmaterial einsetzt. So kann, z. B., eine solche Verbindung leicht hergestellt werden durch Umsetzen des Ausgangsmaterials mit einem niederen Alkanoylhalogenid mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder einem Anhydrid einer niederen aliphatischen Säure mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bei geringer Temperatur oder unter Erwärmen, z. B., bei gewöhnlicher Temperatur für eine geeignete Zeitdauer, falls erforderlich in Gegenwart eines Alkalis, wie Pyridin.
Die antifungale Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann oral oder parenteral bei der klinischen Anwendung verabreicht werden, und sie kann so formuliert werden, dass sie an die Verabreichungsart angepasst ist, indem man pharmakologisch akzeptable Zusätze hinzugibt, wie es der Fall erfordert, und sie als antifungales Mittel benutzt.
Die Form einer solchen Formulierung kann, z. B., eine feste Formulierung sein, wie Tabletten, Kapseln, Granulat, Pillen, Pastillen, Pulver oder Suppositorien, oder eine flüssige Formulierung, wie Sirupe, Elixiere, Suspensionen oder Injektionen, ebenso wie Aerosole, Augentropfen, Salben, Augensalben, Emulsionen, Cremes, Einreibemittel oder Lotionen. Diese Formulierungen können gemäß konventionellen Verfahren hergestellt werden, die gewöhnlich auf dem Gebiet der Arzneimittel-Formulierungen benutzt werden.
Als Zusätze können verschiedene Zusätze eingesetzt werden, die üblicherweise auf dem Gebiet der Arzneimittel-Formulierung benutzt werden. So können, z. B., Saccharide, wie Lactose oder Glucose, Stärke, wie die von Mais, Weizen oder Reis, pflanzliches Öl, wie Sojabohnenöl, Erdnussöl oder Sesamöl, Fettsäure, wie Stearinsäure, anorganisches Salz, wie Magnesiummetasilicataluminat oder wasserfreies Calciumphosphat, synthetisches Polymer, wie Polyvinylpyrrolidon oder Polyalkylenalkohol, Fettsäuresalz, wie Calciumstearat oder Magnesiumstearat, Alkohol, wie Stearylalkohol oder Benzylalkohol, synthetisches Cellulose-Derivat, wie Methylcellulose, Carboxymethylcellulose, Ethylcellulose oder Hydroxypropylmethylcellulose oder andere, wie Wasser, Gelatine, Talk und Gummi arabicum, beispielsweise erwähnt werden.
Im Falle einer flüssigen Formulierung kann sie in einer solchen Form vorliegen, dass sie zur Zeit der Verwendung in Wasser oder anderem geeigneten Medium gelöst oder suspendiert wird. Insbesondere, wenn die Verabreichung durch intramuskuläre Injektion, intravenöse Injektion oder subcutane Injektion erfolgt, kann, z. B., ein geeignetes Medium für eine solche Injektion destilliertes Wasser zur Injektion, eine wässerige Chlorwasserstoffsäure-Lidocain-Lösung (für intramuskuläre Injektion), physiologische Salzlösung, eine wässerige Glucose-Lösung, Ethanol, Flüssigkeit für intravenöse Injektion (wie eine wässerige Lösung von Zitronensäure und Natriumcitrat) oder eine Elektrolyt-Lösung (für intravenöses Eintropfen und intravenöse Injektion) oder eine gemischte Lösung davon sein. Weiter kann ein Puffer oder ein Konservierungsmittel hinzugegeben werden. Diese Formulierungen können üblicherweise von 0,1 bis 100 Gew.-%, vorzugsweise von 5 bis 100 Gew.-%, des aktiven Bestandteils im Falle der oben erwähnten festen Formulierungen enthalten, und sie können von 0,1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 5 Gew.-%, im Falle anderer Formulierungen enthalten. Weiter können diese Formulierungen andere Verbindungen enthalten, die therapeutisch wirksam sind.
Ein praktisch bevorzugte Dosis der Verbindung der vorliegenden Erfindung variiert in Abhängigkeit von der Art der eingesetzten Verbindung, der Art der gemischten Zusammensetzung, dem Geschlecht, Alter, Gewicht, Erkrankungsgrad und dem im Besonderen zu behandelnden Körperteil des Patienten, doch beträgt sie üblicherweise von 0,1 bis 100 mg/kg im Falle oraler Verabreichung und von 0,01 bi 100 mg/kg im Falle parenteraler Verabreichung pro Erwachsenem pro Tag. Die Anzahl der Verabreichungen variiert in Abhängigkeit vom Verabreichungs-Verfahren und dem Symptom, doch ist es bevorzugt, die Verabreichung von 1- bis 5-mal täglich auszuführen.

BESTE ART DER AUSFÜHRUNG DER ERFINDUNG

Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung detaillierter unter Bezugnahme auf Beispiele beschrieben, doch ist die vorliegende Erfindung dadurch in keiner Weise beschränkt.

BEISPIEL 1: Verfahren zum 1-Ierstellen von BE-49385

1-1) Verfahren zum Herstellen einer BE-49385C enthaltenden Fraktion. einer BE-49385A und BE- 493858 enthaltenden Fraktion und einer BE-49385D E und BE-49385F enthaltenden Fraktion

Der Pilzstamm F49385, der auf eine geneigte Platte von Weichagar inokuliert war, wurde in sechs Erlenmeyerkolben mit einer Kapazität von 500 ml, enthaltend 100 ml, eines Kulturmediums (pH 6), umfassend 1% Glucose, 3% Maltose, 0,3% Hefeextrakt, 1% Weizenkeim, 0,5% Glutenmehl, 0,3% Polypepton, 0,1% Natriumnitrat, 0,2% Natriumchlorid, 0,1% Dikaliumhydrogenphosphat, 0,05% Magnesiumsulfat, 0,00008% Zinksulfat, 0,002% Calciumchlorid, 0,0002% Eisen(II)sulfat, 0,00004% Kupfer(I)chlorid, 0,00004% Magnesiumchlorid, 0,00004% Cobaltchlorid, 0,00008% Natriumborat und 0,00024% Ammoniummolybdat, inokuliert und auf einem Rotationsschüttler (180 U/min) 96 Stunden lang bei 28ºC gezüchtet. 200 ml dieser Kulturlösung wurden in jeden von drei Fermentern mit einer Kapazität von 20 l und enthaltend 10 l des obigen Kulturmediums, inokuliert und 312 Stunden lang bei 28ºC gezüchtet.
Die so erhaltene Kulturlösung (26,5 l) wurde 10 Minuten bei 90ºC sterilisiert, und dann wurden Zellen durch Filtration abgetrennt. Zu den Zellen gab man Methanol (20 l), gefolgt vom Rühren für einige Stunden. Dann wurden die Zellen abfiltriert, um eine Methanolextrakt-Lösung zu erhalten. Aceton (10 l) wurde nach der Methanol-Extraktion hinzugegeben, gefolgt vom Rühren für einige Stunden, woraufhin die Zellen abfiltriert wurden, um eine Acetonextrakt-Lösung zu erhalten. Die Methanolextrakt-Lösung und die Acetonextrakt-Lösung wurden zusammengeschüttet und unter verringertem Druck auf etwa 2 l konzentriert. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man n-Hexan (1 l) und Ethylacetat (1 l) zur Extraktion hinzu. Die erhaltene n-Hexan/Ethylacetat-Extraktlösung wurde unter verringertem Druck konzentriert und zu dem Rest gab man n-Hexan (500 ml), gefolgt von einer Filtration, und gab das Filtrat auf eine Chromatosäule (4,0 · 25 cm) von Siliciumdioxidgel (Wako Junyaku K. K.), um mit einem gemischten Lösungsmittel von n-Hexan/Ethylacetat (8 : 1 bis 1 : 1) zu extrahieren. Die extrahierte aktive Fraktion wurde konzentriert und unter verringertem Druck getrocknet, und ergab 570 mg einer Fraktion Fr. 1, enthaltend BE- 49385C, 1526 mg einer Fraktion Fr. 2, enthaltend BE-49385A und BE-49385B, und 908 mg einer Fraktion Fr. 3, enthalten BE-49385D, E und BE-49385F.

1-1-1) Verfahren zum Abtrennen eines Rohmaterials, enthaltend BE-49385A und eines Rohmaterials, enthaltend BE-49385B

In 1-1 erhaltene Fr. 2 wurde in Methanol (5 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (4,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt von Pharmacia Co.) gegben. Die durch Elution mit 80% Methanol erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (3 ml gelöst und auf eine Chromatosäule (4,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt von Pharmacia Co.) gegeben. Die Elution wurde mit Ethanol ausgeführt und die eluierte aktive Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (6 ml) gelöst und auf eine Develosil ODS-10-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch Nomura Kagaku K. K.) in einer Menge von jeweils 0,2 ml gegeben und dann unter Einsatz von 85% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen und man erhielt 508 mg einer Rohsubstanz Fr. 2-1, enthaltend BE-49385A, und 25 mg einer Rohsubstanz Fr. 2-2, enhaltend BE-49385B.

1-1-1-1) Verfahren zum Herstellen von BE-4938 5A

In 1-1-1 erhaltene Fr. 2-1 wurde in Toluol (10 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,5 · 33 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Merck Co.) gegeben und die Elution mit einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (9 : 1 bis 8 : 1) ausgeführt. Die durch die Elution erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (5 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 88% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen, woraufhin die erwünschte Fraktion unter verringertem Druck konzentriert wurde. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte dann mit Ethylacetat (50 ml). Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde weiter mit Wasser (50 ml) gewaschen und die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne konzentriert, wobei 485 mg eines weißen Pulvers von BE-49385A erhalten wurden.

1-1-1-2) Verfahren zum Herstellen von BE-49385B

In 1-1-1 erhaltene Fr. 2-2 wurde in Toluol (3 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,5 · 33 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Merck Co.) gegeben und die Elution mit einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (9 : 1 bis 8 : 1) ausgeführt. Die durch die Elution erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (1 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 90% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen, woraufhin die erwünschte Fraktion unter verringertem Druck konzentriert wurde. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte dann mit Ethylacetat (50 ml). Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde weiter mit Wasser (50 ml) gewaschen und die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne konzentriert, wobei 9,7 mg eines weißen Pulvers von BE-49385B erhalten wurden.

1-1-2) Verfahren zum Herstellen von BE-49385C

In 1-1 erhaltene Fr. 1 wurde in Methanol (3 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,5 · 35 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt von Pharmacia Co.) gegeben. Die durch Elution mit 80% Methanol erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (3 ml gelöst und auf eine Chromatosäule (4,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt durch Pharmacia Co.) gegeben und die Elution mit Methanol ausgeführt und die eluierte aktive Fraktion unter verringertem Druck konzentriert. Das Konzentrat wurde in Toluol (3 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,5 · 33 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Merck Co.) gegeben und die Elution mit einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (49 : 1 bis 22 : 3) ausgeführt. Die durch die Elution erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (4 ml) gelöst und auf eine Develosil ODS-10-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch Nomura Kagaku K. K.) in einer Menge von jeweils 0,4 ml gegeben und unter Einsatz von 92% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen und dabei 42 mg einer Rohsubstanz erhalten, die BE-49385C enthielt. Diese Rohsubstanz wurde in Ethanol (4 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,4 ml gegeben und unter Einsatz von 95% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen, woraufhin die erwünschte Fraktion unter verringertem Druck konzentriert wurde. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte mit Ethylacetat (50 ml). Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde mit Wasser (50 ml) gewaschen und die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne konzentriert, wobei 42,5 mg eines weißen Pulvers von BE-49385C erhalten wurden.

1-1-3) Verfahren zum Herstellen einer Fraktion, enthaltend BE-49385D und BE-49385E und einer Fration, enthaltend BE-49385F

In 1-1 erhaltene Fr. 3 wurde in Methanol (5 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (4,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt von Pharmacia Co.) gegeben. Die durch Elution mit 80% Methanol erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (3 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (4,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt durch Pharmacia Co.) gegeben und die Elution mit Methanol ausgeführt und die eluierte aktive Fraktion unter verringertem Druck konzentriert. Das Konzentrat wurde in einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethyacetat (1 : 1, 10 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,0 · 15 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Merck Co.) gegeben und die Elution mit einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (4 : 1 bis 11 : 9) ausgeführt und die aktive Fraktion zur Trockne konzentriert, wobei 53 mg einer Fraktion Fr.3-1, enthaltend BE-49385D und BE- 49385E, und 46 mg einer Fraktion Fr.3-2, enthaltend BE-49385F, erhalten wurden.

1-1-3-1) Verfahren zum Herstellen einer Rohsubstanz, enthaltend BE-49385D und einer Roh ubstanz, enthaltend BE-49385E

In 1-1-3 erhaltenes Fr. 3-1 wurde in Ethanol (3 ml) gelöst und auf eine Develosil ODS-10- Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch Nomura Kagaku K. K.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 70% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs- Flüssigkeitschromatographie unterworfen und die aktive Fraktion zur Trockne konzentriert, wobei 5,1 mg einer Rohsubstanz Fr. 3-1, enthaltend BE-49385D, und 25 mg einer Rohsubstanz Fr. 3-1-2, enthaltend BE-49385E, erhalten wurden.

1-1-3-1-1) Verfahren zum Herstellen von BE-49385D

In 1-1-3-1 erhaltenes Fr. 3-1-1 wurde in Ethanol (1 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS- A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 70% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen, woraufhin die erwünschte Fraktion unter verringertem Druck konzentriert wurde. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte dann mit Ethylacetat (50 ml). Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde mit Wasser (50 ml) gewaschen und die Ethylacetat-Lösung zur Trockne konzentriert, wobei 3,6 mg eines weißen Pulvers von BE-49385D erhalten wurden.

1-1-3-1-2) Verfahren zum Herstellen von BE-49385E

In 1-1-3-1 erhaltenes Fr. 3-1-2 wurde in Ethanol (1,5 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,2 ml gegeben und unter Einsatz von 70% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen und die erwünschte Fraktion unter verringertem Druck konzentriert. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an. Dann extrahierte man sie mit Ethylacetat (50 ml) und wusch die Ethylacetatextrakt-Lösung mit Wasser (50 ml) und konzentrierte die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne, wobei 20,5 ml eines weißen Pulvers von BE-49385E erhalten wurden.

1-1-3-2) Verfahren zum Herstellen von BE-49385F

In 1-1-3 erhaltenes Fr. 3-2 wurde in Ethanol (4 ml) gelöst und auf eine Develosil ODS-10- Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch Nomura Kagaku K. K.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 55% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs- Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die aktive Fraktion wurde zur Trockne konzentriert, und man erhielt 28 mg einer Rohsubstanz, enthaltend BE-49385F. Die Rohsubstanz wurde in Ethanol (2,5 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-A-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 57% Acetonitril als mobiler Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Zu dieser konzentrierten Lösung gab man Wasser (50 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte man sie dann mit Ethylacetat. Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde mit Wasser (50 ml) gewaschen. Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde zur Trockne konzentriert, und ergab 32,1 mg eines weißen Pulvers von BE-49385F.

1-2) Verfahren zum Herstellen einer Fraktion, enthaltend BE-49385 G und BE-49385H

Der Pilzstamm F49385, der auf eine geneigte Platte von Weichagar inokuliert war, wurde in zwei Erlenmeyerkolben mit einer Kapazität von 500 mit enthaltend 100 ml eines Kulturmediums (pH 6), umfassend 1% Glucose, 3% Maltose, 0,3% Hefeextrakt, 1% Weizenkeim, 0,5% Glutenmehl, 0,3% Polypepton, 0,1% Natriumnitrat, 0,2% Natriumchlorid, 0,1% Dikaliumhydrogenphosphat, 0,05% Magnesiumsulfat, 0,00008% Zinksulfat, 0,002% Calciumchlorid, 0,0002% Eisen(11)sulfat, 0,00004% Kupfer(I)chlorid, 0,00004% Magnesiumchlorid, 0,00004% Cobaltchlorid, 0,00008% Natriumborat und 0,00024% Ammoniummolybdat, inokuliert und auf einem Rotationsschüttler (180 U/min) 96 Stunden lang bei 28ºC gezüchtet. 200 ml dieser Kulturlösung wurden in jeden von drei Fermentern mit einer Kapazität von 20 l und enthaltend 10 l des obigen Kulturmediums, inokuliert und 96 Stunden lang bei 28ºC gezüchtet. 2 C dieser Kulturlösung wurden in einen Fermenter mit einer Kapaztität von 200 l und enthaltend 100 l des obigen Kulturmediums inokuliert und bei 28ºC für 336 Stunden gezüchtet.
Die so erhaltene Kulturlösung (100 l) wurde 10 Minuten bei 90ºC sterilisiert, und dann wurden Zellen durch Filtration abgetrennt. Zu den Zellen gab man Methanol (60 l), gefolgt vom Rühren für einige Stunden. Dann wurden die Zellen abfiltriert, um eine Methanolextrakt-Lösung zu erhalten. Diese Methanolextrakt-Lösung wurde unter verringertem Druck auf etwa 2 l konzentriert und n-Hexan (3 l) und Ethylacetat (3 l) wurden zur Extraktion dieser konzentrierten Lösung hinzugegeben. Zu der unteren Schicht nach der n-Hexan/Ethylacetat-Extraktion wurde Ethylacetat (5 l) zur Extraktion hinzugegeben. Diese Extrakt-Lösung wurde mit der n-Hexan/Ethylacetatextrakt-Lösung kombiniert, gefolgt von einer Konzentrierung unter verringertem Druck. Zu dem durch Konzentrierung erhaltenen Rest gab man n-Hexan (200 ml) und Toluol (200 ml) hinzu, gefolgt von einer Filtration. Das Filtrat wurde auf eine Chromatosäule (4,0 · 50 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Wako Junyaku K. K.) hinzugegeben und mit Toluol und einem gemischten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (19 : 1 bis 1 : 1) eluiert. Die extrahierte aktive Fraktion wurde unter verringertem Druck zur Trockne konzentriert und ergab 3,48 g einer Fraktion Fr. 4, enthaltend BE-49385 G und BE-49385H.

1-2-1) Verfahren zum Herstellen einer Rohsubstanz, enthaltend BE-49385 G und einer Rohsubstanz, enthaltend BE-49385H

In 1-2 erhaltene Fr. 4 wurde in Ethanol (3 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (3,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt von Pharmacia Co.) gegben. Die durch Elution mit Ethanol erhaltene erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Toluol (30 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (2,0 · 30 cm) von Siliciumdioxidgel (hergestellt durch Merck Co.) gegeben. Die Elution wurde mit einem gemichten Lösungsmittel von Toluol/Ethylacetat (19 : 6 bis 33 : 17) ausgeführt und die eluierte aktive Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert und das Konzentrat in Ethanol (2 ml) gelöst und auf eine Chromatosäule (3,0 · 45 cm) von Sephadex LH-20 (hergestellt durch Pharmacia Co.) gegeben, wobei die Elution mit Ethanol ausgeführt wurde und die eluierte aktive Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Das Konzentrat wurde in Ethanol (5 ml) gelöst und auf eine Develosil ODS-10-Säule (50 · 500 mm, hergestellt durch Nomura Kagaku K. K.) gegeben und dann unter Einsatz von 70% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die aktive Fraktion wurde zur Trockne konzentriert und ergab 10 mg einer Rohsubstanz Fr. 4-1, enthaltend BE-49385 G, und 10 mg einer Rohsubstanz Fr. 4-2, enhaltend BE-49385H.

1-2-1-1) Verfahren zum Herstellen von BE-49385G

In 1-2-1 erhaltenes Fr. 4-1 wurde in Ethanol (0,9 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-As- 10-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,3 ml gegeben und unter Einsatz von 70% Acetonitril als eine mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Chromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Diese konzentrierte Lösung wurde in Ethanol (1,5 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-As-5- Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,5 ml gegeben und unter Einsatz von 68% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Diese konzentrierte Lösung wurde in Ethanol (0,6 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS- As-5-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) gegeben und unter Einsatz von 65% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Diese konzentrierte Lösung wurde in Ethanol (0,4 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-As-10-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) gegeben und unter Einsatz von 70% Acetonitril als eine mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Zu der konzentrierten Lösung gab man Wasser (30 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte dann mit Ethylacetat (30 ml). Die Ethylacetatextrakt-Lösung wurde weiter mit Wasser (30 ml) gewaschen und die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne konzentriert und dabei 3,9 mg eines weißen Pulvers von BE-49385 G erhalten.

1-2-1-2) Verfahren zum Herstellen von BE-49385H

In 1-2-1 erhaltenes Fr. 4-2 wurde in Ethanol (1,5 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-As- 5-Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,5 ml gegeben und unter Einsatz von 75% Acetonitril als eine mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Chromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Diese konzentrierte Lösung wurde in Ethanol (0,8 ml) gelöst und auf eine YMC-Pack ODS-As-5- Säule (20 · 250 mm, hergestellt durch YMC Co.) in einer Menge von jeweils 0,4 ml gegeben und unter Einsatz von 72% Acetonitril als mobile Phase einer fraktionellen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie unterworfen. Die erwünschte Fraktion wurde unter verringertem Druck konzentriert. Zu der konzentrierten Lösung gab man Wasser (20 ml) und säuerte die Mischung mit 1 N Chlorwasserstoffsäure an und extrahierte dann mit Ethylacetat (20 ml). Die Ethylacetatextrakt- Lösung wurde mit Wasser (20 ml) gewaschen und die Ethylacetatextrakt-Lösung zur Trockne konzentriert und dabei 1,4 mg eines weißen Pulvers von BE-49385H erhalten.

BEISPIEL 2: Verfahren zum Herstellen von BE-40385A-Ac

1,0 mg von BE-49385A wurde in 9,25 ml wasserfreiem Pyridin gelöst und 0,25 ml Acetanhydrid hinzugegeben, gefolgt vom Rühren bei Raumtemperatur für 4 Stunden. Die Reaktionsmischung wurde unter verringertem Druck konzentriert und Wasser hinzugegeben gefolgt von einem Konzentrieren unter verringertem Druck zur Trockne. Diese Operation wurde wiederholt, um BE-49385A-Ac zu erhalten.
Formulierungsbeispiele der Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden im Folgenden gezeigt, doch sind die Formulierungen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung nicht auf solche Formulierungsbeispiele beschränkt.

FORMULIERUNGSBEISPIEL 1

10 Teile von BE-49385A, 15 Teile schweren Magnesiumoxids und 75 Teile Lactose wurden gleichmäßig vermischt, um ein pulverförmiges oder feingranulares Pulver mit einer Teilchengröße von höchstens 350 um zu erhalten. Dieses Pulver wurde in einen Kapselbehälter gegeben, um ein Kapsel-Arzneimittel zu erhalten.

FORMULIERUNGSBEISPIEL 2

45 Teile von BE-49385A, 15 Teile Stärke, 16 Teile Lactose, 21 Teile kristalline Cellulose, 3 Teile Polyvinylalkohol und 30 Teile destillierten Wassers wurden gleichmäßig vermischt, dann pulverisiert, granuliert und getrocknet und dann gesiebt, um ein Granulat einer Größe mit einem Durchmesser um 1.410 bis 177 um zu erhalten.

FORMULIERUNGSBEISPIEL 3

Granulat wurde in der gleichen Weise wie im Formulierungsbeispiel 2 hergestellt, und dann wurden 3 Teile Calciumstearat zu 9 G Teilen des Granulats hinzugegeben, gefolgt vom Kompressions-Formen, um Tabletten mit einem Durchmesser von 10 mm zu erhalten.

FORMULIERUNGSBEISPIEL 4

10 Teile kristalline Cellulose und 3 Teile Calciumstearat wurden zu 90 Teilen des nach dem Verfahren des Formulierungsbeispiels 2 erhaltenen Granulats hinzugegeben, gefolgt vom Kompressions-Formen, um Tabletten mit einem Durchmesser von 8 mm zu erhalten. Dann wurde eine gemischte Suspension von Sirup, Gelatine und ausgefälltem Calciumcarbonat hinzugegeben, um mit Zucker überzogene Tabletten zu erhalten.

FORMULIERUNGSBEISPIEL 5

1 Teil von BE-49385A, 49,5 Teile von Macrogol 4000 und 49,5 Teile von Macrogol 400 wurden vermischt und gut geknetet, bis an ein homogenes Material erhielt, wobei eine Salbe erhalten wurde.

INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT

Die BE-49385-Substanzen der vorliegenden Erfindung haben antifungale Wirkungen und sind somit brauchbar als antifungale Mittel.

Claims

1. Verbindung der allgemeinen Formel (I):

worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder

oder

ist und R&sub2; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe ist.

2. Verfahren zum Herstellen einer Verbindung der allgemeinen Formel (I):

worin R&sub2; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe ist und R&sub1; die obengenannte Bedeutung hat, umfassend das Züchten eines Mikroorganismus, der zur Gattung Paecilomyces gehört und zur Produktion einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) in der Lage ist:

worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder

oder

ist und R&sub2;&sub0; ein Wasserstoffatom ist, Sammeln der Verbindung der allgemeinen Formel (II) und, falls erforderlich, Umwandeln dieser Verbindung in eine Verbindung, bei der R&sub1; eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe ist.

3. Verfahren nach Anspruch 2, worin der Mikroorganismus, der zur Gattung Paecilomyces gehört und zur Produktion einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) in der Lage ist:

worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder

oder

ist und R&sub2;&sub0; ein Wasserstoffatom ist, Paecilomyces inflatus ist.

4. Antifungales Mittel, enthaltend ein Verbindung der allgemeinen Formel (I):

worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder

oder

ist und R&sub2; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe ist, als einen aktiven Bestandteil.

5. Mikroorganismus, der zur Gattung Paecilomyces gehört und zur Produktion einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) in der Lage ist:

worin R&sub1; ein Wasserstoffatom oder

oder

ist und R&sub2;&sub0; ein Wasserstoffatom ist.

6. Mikroorganismus nach Anspruch 5, worin der Mikroorganismus, der zur Gattung Paecilomyces gehört, Paecilomyces inflatus ist.

7. Mikroorganismus nach Anspruch 5, worin der Mikroorganismus, der zur Gattung Paecilomyces gehört, Paecilomyces inflatus F49385 (FERM BP-5715) oder sein Mutant ist.