DE69400798T2

DE69400798T2 - Urethane und Urea zur Induktion der Cytokin-Produktion

Info

Publication number: DE69400798T2
Application number: DE69400798T
Authority: DE
Inventors: Semiramis Ayral-Kaloustian; Mila T Du; James J Gibbons; Steven R Schow
Original assignee: American Cyanamid Co
Current assignee: Wyeth Holdings LLC
Priority date: 1993-05-12
Filing date: 1994-04-20
Publication date: 1997-03-13
Anticipated expiration: 2014-04-21
Also published as: ES2094004T3; IL109602A0; EP0652228A1; PL179984B1; ATE144533T1; HU9401444D0; FI942186A0; SK281120B6; PH30182A; NZ260507A; RU2135515C1; US5658945A; TW380129B; AU6304394A; NO941786L; NO941786D0; US5545662A; HU219768B; CZ290445B6; HUT67038A

Description

Hintergrund der Erfindung

Cytokine, wie G-CSF, M-CSF, GM-CSF (Kolonie-stimulierende Faktoren) und IL-1, IL-3, IL-6 (Interleukine), können die Hämatopoese bei Erkrankungen, die mit einem Funktionsausfall des Knochenmarks assoziiert sind, stimulieren und daher die Wiederherstellung nach einer Neutropenie beschleunigen, wie von Metcalf, D., Science, 529, (1991), und H.G. Klingemann und H.J. Deeg, CIPS, 14, 243, (1989), sowie G. Mortsyn und A.W. Burgess, Cancer Research 48, 5624, (1988), angegeben. Es wurde berichtet, daß Teile der natürlichen Bakterienzellwand und synthetische Lipopeptide, welche die Zellwand nachahmen, Immunstimulans-Eigenschaften haben, wie von J. Freund, Adv. Tubercl. Res., 1, 130 (1956); F. Ellouz, A. Adam, R. Ciorbaru und E. Lederer, Biochem. Biophys. Res. Commun., 59, 1317, (1974); V. St.Georgiev, Medicinal Res. Rev., 11, 81 (1991), und I. Azuma, Int. J. Immunopharmac., 14, 487 (1992), beschrieben. Spezifischer wurden bestimmte Verbindungen identifiziert, welche die CSF-Bildung zu induzieren scheinen und die Wiederherstellung des Knochenmarks nach einer durch Chemotherapie oder Strahlung verursachten Myelosuppression unterstützen können. Diese schließen Verbindungen ein, wie Pimelautid (RP-40639) (wie von F. Floch'h, J. Bouchaudon, C. Fizames, A. Zerial, G. Dutruc-Rosset und G.H. Werner, CIPS, 763 (1984), und im FR-Patent 2 482 961 (1981) angegeben); Muroctasin (Daiichi Seiyaku Co.) (wie von I. Azuma, Int. J. Immunopharmac., 14, 487 (1992); R. Nakajima, Y. Yshida, K. Akahane, M. Sekiguchi und Y. osada, Arzneim.-Forsch., 41, 60 (1991); Scrip. 22, 1655 (1991); und im EP-Patent 135 788 (1985) angegeben); und FK-156 und FK-565 (Fujisawa) (wie von S. Izumi, K. Nakahara, T. Gotoh, S. Hashimito, T. Kino, M. 0kuhara, H. Aoki und H. Imanaka, J. Antibiotics, 566, (1983); K. Nakamura, K. Nakahara, H. Aoki, Agric. Biol. Chem. 48, 2579 (1984); H. Keiji, H. Takeno, S. 0kada, O. Nakguchi, Y. Kitaura und M. Hashimoto, Tetrahedron Lett., 23, 693 (1982), und in den US- Patenten 4 349 466 und 4 666 890 angegeben).
Das US-Patent 4 666 890 offenbart ein synthetisches Tripeptid, von dem berichtet wurde, daß es Immunmodulator-Wirksamkeit aufweist, zur Verwendung als Antitumor-Mittel anstatt als Chemotherapie-Adjuvans. Die angegebenen Zellwandkomponenten und ihre synthetischen Analoga sind alle Peptide, die eine D-Glutaminsäure (D-Glu)-Gruppe, γ-gebunden entweder an Lysin (Lys) oder Diaminopimelinsäure (A&sub2;pm), einschließen, wobei zusätzliche Peptid-Bindungen oder Fettsäureacyl-Gruppen die beiden Enden flankieren.
Die neuen Urethane und Harnstoffe, die in dieser Erfindung geoffenbart werden, sind die ersten Beispiele von Nicht-Peptid- Analoga von Bakterienzellwand-Kgmponenten, und es fehlt ihnen die im Stand der Technik übliche D-Glu-Gruppe. Während der Stand der Technik keine Verzweigung am Peptidgerüst vorgesehen hat, schließt diese Erfindung ferner verzweigte Analoga, welche die gewünschte Wirksamkeit beibehalten, wenn sie in einer spezifischen Konfiguration synthetisiert werden, und ein Syntheseverfahren für diese chiralen verzweigten Analoga ein.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung betrifft Urethane und Harnstoffe der Formel: Formel (I),
worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, einer substituierten oder unsubstituierten C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkylalkyl-Gruppe, einer Vinyl-Gruppe, einer Acetylen-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Amino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Acylamino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryloxy-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaralkyl-Gruppe und einer substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen heterocyclischen Gruppe mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen; Ra und R3 unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff, substituiertem oder unsubstituiertem C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkylalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Aryl, substituiertem oder unsubstituiertem Aralkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyaralkyl, Vinyl, Acetylen und einem substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen Heterocyclus mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen, mit der Maßgabe, daß im Fall von R3 die Heteroatome im Heterocyclus nicht direkt an die Gruppe -CH- des Teils -CH-X- gebunden sind;
und R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carboxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy X Sauerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R4 H oder eine Amino-Schutzgruppe darstellt; und die pharmazeutisch annehmbaren Salze hievon.
Nachstehend werden Einzelheiten der verschiedenen oben angegebenen Definitionen und spezifische Beispiele, die unter derartige Definitionen fallen, ausgeführt:
(a) Die C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl-Gruppe kann eine geradkettige oder verweigte nied.Alkyl-Gruppe mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Methyl-Gruppe, eine Ethyl-Gruppe, eine Propyl-Gruppe, eine Isopropyl-Gruppe, eine Butyl-Gruppe, eine Isobutyl-Gruppe, eine sek.Butyl-Gruppe, eine tert.Butyl-Gruppe, eine Pentyl- Gruppe, eine Neopentyl-Gruppe, eine Isopentyl-Gruppe, eine Hexyl-Gruppe, eine Isohexyl-Gruppe, usw.
(b) Die Cycloalkyl-Gruppe kann eine Cycloalkyl-Gruppe mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Cyclopropyl-Gruppe, eine Cyclobutyl-Gruppe, eine Cyclopentyl-Gruppe oder eine Cyclohexyl- Gruppe.
(c) Die Cycloalkylalkyl-Gruppe kann eine Cycloalkylalkyl- Gruppe mit 4 bis 12 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Cyclopropylmethyl-Gruppe, eine Cyclobutylmethyl-Gruppe, eine Cyclopentylmethyl-Gruppe, eine Cyclohexylmethyl-Gruppe, 1-Cyclopropylethyl-Gruppe, eine 2-Cyclopropylethyl-Gruppe, eine 1-Cyclobutylethyl-Gruppe, eine 2-Cyclobutylethyl-Gruppe, eine 1-Cyclopentylethyl-Gruppe, eine 2-Cyclopentylethyl-Gruppe, eine 1-Cyclohexylethyl-Gruppe, eine 3-Cyclohexylpropyl-Gruppe, eine 3-Cyclopentylpropyl-Gruppe, eine 4-Cyclohexylbutyl-Gruppe, eine 4-Cyclopentylbutyl-Gruppe, eine 4-Cyclopentylpentyl-Gruppe oder 4-Pentylcyclohexyl-Gruppe.
(d) Die Acylamino-Gruppe kann eine Acylamino-Gruppe sein, worin der Acyl-Teil von einer Säure abgeleitet ist, wie einer organischen Carbonsäure oder Kohlensäure, wobei jede hievon insbesondere eine aliphatische, eine aromatische und/oder eine heterocyclische Gruppe in ihrem Molekül enthält. Diese schließen ein: aliphatische Acyl-Gruppen mit einer Acyl-Gruppe, die von einer aliphatischen Säure stammt und einschließt: Alkanoyl (z.B. Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Tsobutyryl, Valeryl, Isovaleryl, Pivaloyl, Hexanoyl, α-Ethylhexanoyl, Heptanoyl, Lauroyl, Stearoyl, Docosanoyl, eine Gruppe der Formel: CH&sub3;(CH&sub2;)&sub3;&sub1;CO, [CH3(CH&sub2;)&sub2;&sub1;]&sub2;CHCO, [CH&sub3;(CH&sub2;)&sub1;&sub5;]&sub2;CHCO, CH&sub3;(CH&sub2;)&sub4;&sub1;CO, etc.); nied.Alkoxycarbonyl (z.B. Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, tert.Butoxycarbonyl, tert.Pentoxycarbonyl, etc.) und dgl. Der Acyl-Teil kann auch ein aromatisches Acyl sein, d.h. eine Acyl-Gruppe, die von einer Säure mit einer substituierten oder unsubstituierten Aryl-Gruppe stammt, wobei die Aryl-Gruppe einschließen kann: Phenyl, Tolyl, Xylyl, Naphthyl und dgl., und geeignete Beispiele hievon werden wie folgt veranschaulicht: Aroyl (z.B. Benzoyl, Toluoyl, Xyloyl, Naphthoyl, Phthaloyl, etc.); Aralkoxycarbonyl (z.B. Benzyloxycarbonyl, Benzhydroloxycarbonyl, Trityloxycarbonyl, α-Naphthylmethoxycarbonyl, etc.) und dgl. Der Acyl- Teil kann auch eine heterocyclische Acyl-Gruppe sein, d.h. eine Acyl-Gruppe, die von einer Säure mit einer heterocyclischen Gruppe stammt, und schließt ein: heterocyclisches Carbonyl, worin der Heterocyclus-Teil ein 5- bis 6-gliedriger Heterocyclus mit zumindest 1 bis 4 Heteroatomen ist, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel (z.B. Thienoyl, Furoyl, Pyrrolcarbonyl, 5-Oxo-2-pyrrolidincarbonyl, Nicotinoyl, etc.) und dgl.
(e) Die Aryl-Gruppe kann eine Aryl-Gruppe mit 6 bis 15 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Phenyl-Gruppe, eine Biphenyl- Gruppe, eine 1-Naphthyl-Gruppe oder eine 2-Naphthyl-Gruppe.
(f) Die Aralkyl-Gruppe kann eine Aralkyl-Gruppe mit 7 bis 15 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Benzyl-Gruppe, eine 1-Naphthylmethyl-Gruppe, eine 2-Naphthylmethyl-Gruppe, eine 5,6,7,8-Tetrahydro-1-naphthyl-Gruppe, eine 5,6,7,8-Tetrahydro-2- naphthyl-Gruppe, eine Phenethyl-Gruppe, eine 3-Phenylpropyl- Gruppe oder eine 4-Phenylbutyl-Gruppe.
(g) Die Aryloxy-Gruppe kann eine Aryloxy-Gruppe mit 6 bis 15 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Phenoxy-Gruppe, eine Biphenoxy-Gruppe, eine 1-Naphthyloxy-Gruppe oder eine 2-Naphthyloxy-Gruppe.
(h) Die Alkoxyaryl- oder Alkoxyaralkyl-Gruppe kann eine Alkoxyaryl- oder Alkoxyaralkyl-Gruppe mit 6 bis 21 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Benzoyl-Gruppe oder eine Alkoxyphenylmethyl-Gruppe.
(i) Die monocyclische oder bicyclische heterocyclische Gruppe mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen, kann eine heterocyclische Gruppe mit 4 bis 15 Kohlenstoffatomen sein, wie eine Pyrrolyl-Gruppe, eine Furyl-Gruppe, eine Thienyl- Gruppe, eine Pyridyl-Gruppe, eine Imidazolyl-Gruppe, eine Pyrazolyl-Gruppe, eine Thiazolyl-Gruppe, eine Isothiazolyl- Gruppe, eine Isoxazolyl-Gruppe, eine 0xazolyl-Gruppe, eine Pyrazinyl-Gruppe, eine Pyrimidinyl-Gruppe, eine Pyridazinyl- Gruppe, eine Indolyl-Gruppe, eine Chinolyl-Gruppe, eine Isochinolyl-Gruppe, eine Phthalazinyl-Gruppe, eine Naphthidinyl- Gruppe, eine Chinoxalinyl-Gruppe, eine Chinazolinyl-Gruppe, eine 1,4-Benzodioxanyl-Gruppe, eine 1,3-Benzodioxanyl-Gruppe, eine 1,2,3-Triazolyl-Gruppe, eine 1,3,4-Triazolyl-Gruppe, eine 1,3,4-Thiadiazolyl-Gruppe, eine 1,2,3-Thiadiazolyl-Gruppe, eine Tetrazolyl-Gruppe, eine Tetrahydrofuranyl-Gruppe, eine Tetrahydrothienyl-Gruppe, eine Pyrrolidinyl-Gruppe, eine Imidazolidinyl-Gruppe, eine 2-Imidazolinyl-Gruppe, eine Morpholinyl-Gruppe, eine Morpholino-Gruppe, eine Piperizin-N- oxid-Gruppe, eine Piperazin-N-oxid-Gruppe, eine Morpholin-N- oxid-Gruppe, eine nied.Alkylmorpholino-Gruppe, wie eine N-Methylmorpholino-Gruppe, eine N-Ethylmorpholino-Gruppe oder eine N-Propylmorpholino-Gruppe, eine Piperazinyl-Gruppe, eine Piperidino-Gruppe, eine Piperidinyl-Gruppe, eine Thiomorpholino- Gruppe oder eine Thiomorpholinyl-Gruppe.
Die Substituenten in den oben angegebenen Gruppen (a) bis (i) können sein: ein Halogenatom, wie ein Chloratom, ein Fluoratom oder eine Bromatom, eine Hydroxyl-Gruppe; eine nied.Alkyl- Gruppe, wie eine Methyl-Gruppe, eine Ethyl-Gruppe, eine Propyl- Gruppe, eine Isopropyl-Gruppe, eine Butyl-Gruppe, eine Isobutyl- Gruppe, eine sek.Butyl-Gruppe oder eine tert.Butyl-Gruppe; eine nied.Alkoxy Gruppe, wie eine Methoxy Gruppe, eine Ethoxy Gruppe, eine Propoxy-Gruppe, eine Isopropoxy-Gruppe, eine Butoxy-Gruppe, eine Isobutoxy-Gruppe, eine sek.Butoxy-Gruppe oder eine tert.Butoxy-Gruppe; eine Aryloxy-Gruppe, wie eine Phenoxy- Gruppe, eine 1-Naphthyloxy-Gruppe oder eine 2-Naphthyloxy- Gruppe; eine Aralkyloxy-Gruppe, wie eine Benzyloxy-Gruppe, eine Phenethyloxy-Gruppe, eine 1-Naphthylmethyloxy-Gruppe oder eine 2-Naphthylmethyloxy-Gruppe; eine Amino-Gruppe; eine Mono- oder Di-nied.alkylamino-Gruppe, wie eine Methylamino-Gruppe, eine Ethylamino-Gruppe, eine Propylamino-Gruppe, eine Isopropylamino- Gruppe, eine Butylamino-Gruppe, eine sek. Butylamino-Gruppe, eine Isobutylamino-Gruppe, eine tert.Butylamino-Gruppe, eine Dimethylamino-Gruppe oder eine Diethylamino-Gruppe; eine Arylamino-Gruppe, wie eine Phenylamino-Gruppe, eine 1-Naphthylamino- Gruppe oder eine 2-Naphthylamino-Gruppe; eine Aralkylamino- Gruppe, wie eine Benzylamino-Gruppe, eine Phenethylamino-Gruppe, eine 1-Napthylmethylamino-Gruppe oder eine 2-Naphthylmethylamino-Gruppe; eine Carboxyl-Gruppe; eine Formyl-Gruppe; eine nied.Alkoxycarbonyl-Gruppe, wie eine Methoxycarbonyl-Gruppe, eine Ethoxycarbonyl-Gruppe, eine Propoxycarbonyl-Gruppe, eine Isopropoxycarbonyl-Gruppe, eine Butoxycarbonyl-Gruppe, eine sek.Butoxycarbonyl-Gruppe, eine Isobutoxycarbonyl-Gruppe oder eine tert.Butoxycarbonyl-Gruppe; eine Aryloxycarbonyl-Gruppe, wie eine Phenoxycarbonyl-Gruppe, eine 1-Naphthyloxycarbonyl- Gruppe oder eine 2-Naphthyloxycarbonyl-Gruppe; eine Aralkyloxycarbonyl-Gruppe, wie eine Benzyloxycarbonyl-Gruppe, eine Phenethyloxycarbonyl-Gruppe, eine 1-Naphthylmethyloxycarbonyl- Gruppe oder eine 2-Naphthylmethyloxycarbonyl-Gruppe; eine Mercapto-Gruppe; eine nied.Alkylthio-Gruppe, wie eine Methylthio-Gruppe, eine Ethylthio-Gruppe, eine Propylthio-Gruppe, eine Isopropylthio-Gruppe, eine Butylthio-Gruppe, eine sek.Butylthio- Gruppe, eine Isobutylthio-Gruppe oder eine tert.Butylthio- Gruppe; eine Arylthio-Gruppe, wie eine Phenylthio-Gruppe, eine 1-Naphthylthio-Gruppe oder eine 2-Naphthylthio-Gruppe; eine Aralkylthio-Gruppe, wie eine Benzylthio-Gruppe, eine Phenethylthio Gruppe, eine 1 Naphthylmethylthio Gruppe oder eine 2 Naphthylmethylthio-Gruppe; eine Arylsulfinyl-Gruppe, wie eine Phenylsulfinyl Gruppe, eine 1 Naphthylsulfinyl Gruppe oder eine 2 Naphthylsulfinyl Gruppe; eine Aralkylsulfinyl-Gruppe, wie eine Benzylsulfinyl-Gruppe, eine Phenethylsulfinyl Gruppe, eine 1-Naphthylmethylsulfinyl Gruppe oder eine 2 Naphthylmethylsulfinyl-Gruppe; eine nied.Alkylsulfonyl-Gruppe, wie eine Mesyl- Gruppe, eine Ethylsulfonyl-Gruppe, eine Propylsulfonyl-Gruppe, eine Isopropylsulfonyl-Gruppe, eine Butylsulfonyl-Gruppe, eine Isobutylsulfonyl-Gruppe, eine sek.Butylsulfonyl-Gruppe oder eine tert.Butylsulfonyl-Gruppe; eine Arylsulfonyl-Gruppe, wie eine Phenylsulfonyl-Gruppe, eine l-Naphthylsulfonyl-Gruppe oder eine 2-Naphthylsulfonyl-Gruppe; eine Aralkylsulfonyl-Gruppe, wie eine Benzylsulfonyl-Gruppe, eine Phenethylsulfonyl-Gruppe, eine 1-Naphthylmethylsulfonyl-Gruppe oder eine 2-Naphthylmethylsulfonyl-Gruppe; oder eine monocyclische oder bicyclische heterocyclische Gruppe mit 4 bis 15 Kohlenstoffatomen und 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel, wie eine Pyrrolyl-Gruppe, eine Furyl-Gruppe, eine Thienyl-Gruppe, eine Pyridyl-Gruppe, eine Imidazolyl-Gruppe, eine Pyrazolyl-Gruppe, eine Thiazolyl-Gruppe, eine Isothiazolyl- Gruppe, eine Isoxazolyl-Gruppe, eine Oxazolyl-Gruppe, eine Pyrazinyl-Gruppe, eine Pyrimidinyl-Gruppe, eine Pyridazinyl- Gruppe, eine Indolyl-Gruppe, eine Chinolyl-Gruppe, eine Isochinolyl-Gruppe, eine Phthalazinyl-Gruppe, eine Naphthidinyl- Gruppe, eine Chinoxalinyl-Gruppe, eine Chinazolinyl-Gruppe, eine 1,4-Benzodioxanyl-Gruppe, eine 1,3-Benzodioxanyl-Gruppe, eine 1,2,3-Triazolyl-Gruppe, eine 1,3,4-Triazolyl-Gruppe, eine 1,3,4-Thiadiazolyl-Gruppe, eine 1,2,3-Thiadiazolyl-Gruppe, eine Tetrazolyl-Gruppe, eine Tetrahydrofuranyl-Gruppe, eine Tetrahydrothienyl-Gruppe, eine Pyrrolidinyl-Gruppe, eine Imidazolidinyl-Gruppe, eine 2-Imidazolinyl-Gruppe, eine Morpholinyl-Gruppe, eine Morpholino-Gruppe, eine Morpholin-N- oxid-Gruppe, eine nied.Alkylmorpholino-Gruppe, wie eine N-Methylmorpholino-Gruppe, eine N-Ethylmorpholino-Gruppe oder eine N-Propylmorpholino-Gruppe, eine Piperazinyl-Gruppe, eine Piperidino-Gruppe, eine Piperidinyl-Gruppe, eine Thiomorpholino- Gruppe oder eine Thiomorpholinyl-Gruppe.
Der hier verwendete Ausdruck "nied.Alkyl" bedeutet eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-Gruppe.
Schutzgruppen für das geschützte Carboxy oder geschützte Carboxy-nied.alkyl schließen beliebige herkömmliche Schutzgruppen fur Carboxy-Gruppen ein, wie sie routinemäßig von Fachleuten der Peptid und Aminosaure Chemie verwendet werden, wie jene, die in T. Greene, "Protecting Groups in Organic Synthesis", J. Wiley and Sons, 1981, zu finden sind. Diese schließen ein: Silylester, aliphatische Ester und aromatische Ester, wie Trimethylsilyl, tert.Butyldimethylsilyl, Acetyl, Benzoyl und dgl.
Schutzgruppen für die geschützte Amino-Gruppe schließen beliebige herkömmliche Schutzgruppen für Amino-Gruppen ein, wie sie routinemäßig von Fachleuten der Peptid- und Aminosäure- Chemie verwendet werden, wie jene, die in T. Greene, supra, S. 218-287, zu finden sind. Eine geeignete Schutzgruppe wird derart ausgewählt, daß die Bedingungen für ihre Entfernung mit anderen Strukturmerkmalen der Verbindung kompatibel sind. Geeignete Schutzgruppen schließen Acyl-Gruppen ein, wie tert.Butoxycarbonyl oder Benzyloxycarbonyl und dgl.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Mit Bezugnahme auf die obige allgemeine Beschreibung sind Verbindungen der Formel (I), die bevorzugt werden, jene, worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer substituierten oder unsubstituierten C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkylalkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryloxy-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaryl-Gruppe und einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaralkyl-Gruppe, wobei der Aryl-Teil in den obigen Gruppen aus substituiertem oder unsubstituiertem Phenyl ausgewählt ist; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff und substituiertem oder unsubstituiertem C&sub1;-C&sub6;-Alkyl; R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carboxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy- oder geschütztem Carboxy-nied.alkyl und Carboxyamid; x Saüerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R&sub4; H oder eine Amino-Schutzgruppe darstellt.
Ferner sind die am meisten bevorzugten Verbindungen der Formel (I) gemäß der vorliegenden Erfindung jene der Formel (I), worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer C&sub4;-C&sub1;&sub4;-Alkyl-Gruppe, einer Cycloalkyl-Gruppe, einer C&sub2;-C&sub8;-Alkylsubstituierten Cycloalkyl-Gruppe, einer Phenyl-Gruppe, einer Benzyl-Gruppe, einer C&sub4;-C&sub8;-Alkylphenyl-Gruppe und einer C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder -alkoxyphenylmethyl-Gruppe; Ra und R3 unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff und C&sub1;-C&sub6;-Alkyl; R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carboxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy- oder geschütztem Carboxy-nied.alkyl und Carboxyamid; X Sauerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R&sub4; H oder eine Amino-Schutzgruppe darstellt.
Verbindungen der Formel (I), die insbesondere am meisten bevorzugt werden, sind jene, worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer n-Hexyl-Gruppe, einer 4-n-Pentylcyclohexyl-Gruppe; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff oder Methyl; R&sub2;, Rb und Rc Carboxy bedeuten; X Sauerstoff oder Stickstoff darstellt; und R&sub4; H ist.
Besonders bevorzugt werden jene Verbindungen der Formel (I) mit D-Allothreonin-Konfiguration wie folgt:
worin R3 Methyl bedeutet, und R&sub1; und R&sub2; vorstehend definiert sind.
Ebenso besonders bevorzugt werden die Verbindungen mit der folgenden Stereochemie im Diaminopimelylalanin-Teil des Moleküls:
worin Ra Methyl bedeutet, und Rb, Rc und R4 wie vorstehend definiert sind.
In bezug auf die Stereochemie werden insbesondere die folgenden Verbindungen der Formel (I) am meisten bevorzugt
worin R&sub3; und Ra Methyl bedeuten, X Sauerstoff darstellt, Rb, Rc, R&sub1;, R&sub2;, R&sub4; vorstehend definiert sind.
Die Urethane und Harnstoffe vom Typ 1, die Gegenstand dieser Erfindung sind, werden durch eine konvergente Synthese hergestellt, die nachstehend ausgeführt wird. Schema I [Y = Abgangsgruppe; Gruppen R und X wie in Formel (I) beschrieben]
Die linken (X=O, Alkohol (2b), oder X = NH, Amin (2c)) und rechten (Amin (3)) Fragmente, die geeignete Schutzgruppen (Beispiele üblicherweise verwendeter Amin-Schutzgruppen sind in T. Greene, "Protecting Groups in organic Synthesis", J. Wiley and Sons, 1981, S. 218-287, zu finden) an den mehrfachen funktionellen Gruppen tragen, werden getrennt hergestellt. Zuerst wird die Verbindung (2) mit einem aktivierten Carbonyl-Äquivalent, YC(=O)Y, wie Phosgen, Triphosgen, Phosgen/Pyridin-Addukt, Trichlormethylchloroformiat oder 1,1'-Carbonyldiimidazol, üblicherweise bei 0ºC umgesetzt, und die erhaltene Zwischenverbindung (2y) wird mit (3) gekoppelt, wobei jeweils das Urethan (1a) (X=O) oder der Harnstoff (1b) (X=NH) vorgesehen wird. Alternativ dazu wird zuerst das Amin (3) mit YC(=O)Y umgesetzt, und die erhaltene Zwischenverbindung wird mit (2) gekoppelt, wobei (1a) oder (1b) vorgesehen wird. Etwaige Schutzgruppen werden unter Standard-Bedingungen entfernt, wobei Verbindungen vom Typ (1) mit unmaskierten Funktionalitäten erhalten werden.

Linke Fragmente:

Zur Synthese des linken Fragments (2a) wird die selektive N-Acylierung von Aminoalkoholen (5) unter Verwendung eines geeigneten Acylierungsmittels (4) unter basischen Bedingungen erzielt. Wenn das gewünschte Acylierungsmittel nicht verfügbar ist, wird es aus der entsprechenden Säure (4a) hergestellt, die ihrerseits durch 0xidation von (6) oder oxidativen Abbau von (2c-1) gemäß herkömmlichen Verfahren erzeugt werden kann. Schema II gemäß Formel (I)
Die Verbindungen (2c) ((2a), worin R2 = CO&sub2;H) werden unter sauren Bedingungen jeweils unter Verwendung eines geeigneten Alkohols (R"OH) oder Amins (R"NH&sub2;) in den Ester (2e) oder das Amid (2f) übergeführt. Alternativ dazu wird die Verbindung (2c) unter Verwendung eines Alkylierungsmittels R"Y unter basischen Bedingungen verestert. Schema III [Z=O oder NH R"=H (wenn Z=NH), Alkyl-Gruppe oder Schutzgruppe] Y=Cl,Br,I oder andere abgangsgruppe
Alkohole (2c) mit variierenden R&sub3;-Alkylverzweigungen werden gemäß Schema IV hergestellt. Der Alkohol (2j) wird mit einer geeigneten Schutzgruppe maskiert (wobei NH frei bleibt, als cyclischer N,O-Acetal zusammen mit OH geschützt oder mit einer getrennten Amin-Schutzgruppe blockiert wird), und der Ester (8) wird reduziert zum Aldehyd (9) in einem Schritt (Garner und Park, J. Org. Chem., 1987, 52, 2361) oder zwei Schritten über die Reduktion zum Alkohol und Reoxidation unter Verwendung herkömmlicher Verfahren. Der Zusatz geeigneter Organometall-Reagentien R&sub3;M zum Aldehyd ergibt (10) als einzelnes Diastereomer oder Mischung von zwei Diastereomeren, vorausgesetzt, daß Ausgangsmaterial (2j) ist nicht racemisch. Durch die Demaskierung des primären Alkohols (und von NH, sofern blockiert), um (11) zu erhalten, gefolgt von selektiver Oxidation (gemäß Skarzewski et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 2177), gefolgt von Standard- Oxidation des erhaltenen Aldehyds (gemäß Mehltretter et al., J. Amer. Chem. Soc., 1950, 73, 2424), wird (2c) erhalten. Alternativ dazu wird der sekundäre Alkohol in (10) geschützt, und der primäre Alkohl (und NH, sofern blockiert) in der erhaltenen Verbindung (12) wird selektiv demaskiert, wobei die Verbindung (13) erhalten wird. Unter Verwendung herkömmlicher Techniken wird letztere zur Verbindung (14) oxidiert, die in (2c) übergeführt wird. Die primären und sekundären Alkohol-Funktionalitäten in (11) werden auch sequentiell geschützt, wobei (12) (W = H) vorgesehen wird. Die Netto-Transformation von (2j) in (2c) involviert eine Inversion der Konfiguration am α-Kohlenstoff zur Carboxyl-Gruppe durch Transposition der Carboxyl- und Alkohol- Teile sowie die Einführung einer Gruppe R&sub3; in Stellung β mit Chiralität. Die Diastereomere von (10), (12) oder (13) können durch Chromatographie getrennt werden. Daher kann (2j) mit R-Konfiguration in Stellung α (2c)-Diastereomere mit S,R ((α,β)- und S,S (α,β)-Konfiguration vorsehen, und (2j) mit 5-Konfiguration kann (2c)-Diastereomere mit R,R (α,β)- und R,S (α,β)-Konfiguration vorsehen. Schema IV [M=Li,MgX od. anderes Organoalkyl; R"',R""=nicht-äqu. OH-Schutzgr. W=H od. N-Schutzgr. od. R"', W=H,O-Alkyliden, Ketal oder Acetal]
Alternativ dazu kann (11) oder (12) gemäß Schema V aus (5j) hergestellt werden. Das Amin wird mit zwei Schutzgruppen oder einer cyclischen Schutzgruppe vollständig blockiert, wobei (15) erhalten wird. Die Überführung von (15) in (16) in (17) in (19) ist dieselbe Reaktionssequenz, die oben für (8) in (9) in (10) in (12) beschrieben ist. Die Amin-Schutzgruppen in (17) oder (19) werden entfernt, wobei jeweils (18) oder (20) vorgesehen wird. Letztere werden acyliert, um (11) oder (12) zu erhalten. Schema V [W,W'=H identische od. verschiedene N-Schutzgr., od. zusammen 1 cycl. Schutzgr., od. R"', W=H,O-Alkyliden, Ketal od. Acetal]
Für die Synthese des linken Fragments (2b) ergibt die Acylierung des Amins (21) unter basischen Bedingungen die Verbindung (22). Das primäre Amid wird zum Amin (2b) umgelagert (gemäß Loudon et al., J. org. Chem., 1984, 49, 4272; Waki et al., Synthesis, 1981, 53, 266; oder Koser et al., J. org. Chem., 1988, 53, 5158). Schema VI
Die Verbindungen (2g) ((2b), worin R&sub2; = CO&sub2;H) werden unter sauren Bedingungen unter Verwendung eines geeigneten Alkohols (R"OH) oder Amins (R"NH&sub2;) jeweils in den Ester (2h) oder das Amid (2i) (m Schema VII gezeigt) übergeführt. Alternativ dazu wird das Amin (2g) als Urethan geschützt, wie BOC oder CBZ; die Säure wird unter basischen Bedingungen in den Ester oder das Amid übergeführt; und die Schutzgruppe wird entfernt, wobei (2h) oder (2i) erhalten wird. Schema VII [Z=O oder NH R"=H (wenn Z=NH), Alkyl-Gruppe oder Schutzgruppe]
Amine (2g) mit variierenden R&sub3;-Alkylverzweigungen werden gemäß Schema VIII hergestellt. Der Alkohol (10) wird gemäß Schema IV erhalten, oder durch Reduktion einer verfügbaren Säure (2c), gefolgt vom Schützen des erhaltenen primären Alkohols (11). Dann wird die Verbindung (10) durch herkömmliche Verfahren über die Zwischenverbindung (23) in das Azid (24) übergeführt. Der Azid-Teil wird durch katalytische Hydrierung zu einem Amid (25) reduziert und letzteres maskiert, wobei (26) erhalten wird. Alternativ dazu ergibt die Standard-Oxidation von (10) die Verbindung (27). Durch reduktive Aminierung des Ketons mit einem geeigneten Amin (W"'NH&sub2;) wird die Verbindung (28) erhalten, die ihrerseits durch weiteres Schützen als Carbamat in (26) (W"'= Alkyl, W"=Alkoxycarbonyl) oder zu (26) (W"=Alkoxycarbonyl, W"'=H) durch Entschützen (zu (25)) und erneutes Schützen übergeführt wird. Die Demaskierung des primären Alkohols in (26) (und Amids NH, sofern blockiert), um (29) zu erhalten, gefolgt von Oxidation, ergibt (30), wie in Schema IV zur Überführung von (13) in (14). Die Amin-Schutzgruppe(n) wird (werden) entfernt, wobei (29) erhalten wird. Aus (10) oder (28) erzeugte Diastereomere können durch Chromatographie in einer der Zwischenstufen ((28, (26) oder (29)) getrennt werden. Schema VIII [G=OTs, OMs, OTf, Halogen od. and. Abgangsgr.; W,W"'=H,N-Schutzgr; W"=N-Schutzgr. verschieden von W]
Alternativ dazu kann (26) aus (17) gemäß Schema IX hergestellt werden. Die Überführungen von (17) in (31) in (32) in (33) in (34), oder (17) in (35) in (36) in (34), sind jeweils die gleichen Reaktionssequenzen wie oben für (10) in (23) in (24) in (25) in (26) oder (10) in (27) in (28) in (26) beschrieben. Die Amin-Schutzgruppen W und W' werden entfernt, wobei die Verbindung (37) erhalten wird. Letztere wird acyliert, wobei (26) erhalten wird. Schema IX [W"=N-Schutzgr. verschieden von W,W']

Rechte Fragmente:

Das Fragment (3) wird durch Kopplung der Säure (oder geschützten Säure) (38) mit einem geeigneten Amin (39), gefolgt vom selektiven Entschützen der Zwischenverbindung (40), hergestellt. Schema X [W"=N-Schutz-gr.; R"=H,Carboxy-Schutz-od. Aktivierungsgr.]
Säuren (38) oder Amide (40) werden hergestellt gemäß Kolodziejczyk et al. (Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382; und Literaturstellen darin), Jurgens (Tetrahedron Lett., 1992, 33, 4727; und Literaturstellen darin), Williams (J. org. Chem., 1992, 33, 4727; und Literaturstellen darin), Hashimoto (Tetrahedron Lett., 1982, 23, 693; und Literaturstellen darin), oder gemäß Schema XI. Glutaminsäure ((41), chiral oder racemisch) wird unter Standard-Bedingungen geschützt, wobei die Verbindung (42) erhalten wird, die ihrerseits mit Formaldehyd kondensiert wird, um die Verbindung (43) zu ergeben. Letztere wird in einem Ein-Topf-Verfahren zum Aldehyd (44) reduziert. Eine Kondensation vom Wittig-Horner-Emmons-Typ des Aldehyds mit einem Reagens vom Typ (45) (hergestellt gemäß Schmidt et al., Synthesis, 1984, 53) ergibt (46). Durch das Umsetzen des Lactons mit einem geeigneten Amin (39) (wenn nicht verfügbar, hergestellt gemäß den Verfahren, die in "Synthesis of optically Active α-Amino Acids", R.M. Williams, Hrg., Pergamon Press, 1989; und Literaturstellen darin angegeben sind) mit einem begleitenden Formaldehyd-Verlust wird (47) erhalten. Die katalytische Hydrierung der Doppelbindung ergibt (40). Wenn die chirale Verbindung (41) als Ausgangsmaterial verwendet wird, werden Diastereomere von (40) durch fraktionierte Kristallisation oder Chromatographie getrennt. Die Verhältnisse der erhaltenen Diastereomere sind von der Wahl der Schutzgruppen, des Hydrierungskatalysators und der Reaktionsbedingungen abhängig (Knowles et al., J. Amer. Chem. Soc., 99, 5947 (1977); Ojima und Suzuki, Tetrahedron Lett., 21, 1239 (1980)). Daher ergibt (41) mit S-Konfiguration Diastereomere von (40), die S,S- und S,R-Konfiguration an der A&sub2;pm aufweisen, und (41) mit R-Konfiguration kann Diastereomere von (40) vorsehen, die R,S- und R,R-Konfiguration an der A&sub2;pm haben. Schema XI
Die Reaktionen werden in einem Lösungsmittel durchgeführt, das für die verwendeten Reagentien und Materialien sowie die vorgenommene Transformation geeignet ist. Fachleuten der organischen Synthese ist klar, daß die verschiedenen Funktionalitäten, die am Molekül vorliegen, mit den vorgeschlagenen chemischen Transformationen konsistent sein müssen. Dies erfordert häufig eine Festlegung der Reihenfolge der Syntheseschritte, Schutzgruppen, wenn erforderlich, und Bedingungen des Entschützens. Substituenten an den Ausgangsmaterialien können mit einigen Reaktionsbedingungen inkompatibel sein. Derartige Einschränkungen für die Substituenten, die mit den Reaktionsbedingungen kompatibel sind, sind für Fachleute ersichtlich.
Pharmazeutisch annehmbare Salze schließen sowohl die metallischen (anorganischen) Salze als auch die organischen Salze ein; wobei eine Liste hievon in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. Aufl., S. 1418 (1985), angegeben ist. Fachleuten ist wohlbekannt, daß eine geeignete Salzform auf der Basis der physikalischen und chemischen Stabilität, Fließfähigkeit, Hygroskopie und Löslichkeit ausgewählt wird. Aus den oben angegebenen Gründen bevorzugte Salze der Erfindung schließen Kalium-, Natrium-, Calcium-, Magnesium- und Ammoniumsalze ein. Einige Verbindungen der vorstehend beschriebenen Schemata weisen asymmetrische Zentren auf. Die vorliegende Erfindung umfaßt alle Stereoisomere der Verbindungen, egal ob frei von anderen Stereoisomeren oder gemischt mit anderen Stereoisomeren in beliebigen Verhältnissen, und schließt daher beispielsweise eine racemische Mischung von Enantiomeren sowie die diastereomere Mischung von Isomeren ein.
Die neuen Verbindungen dieser Erfindung sind wegen ihrer Fähigkeit zur Induktion einer Cytokin-Bildung und Wiederherstellung des Knochenmarks nach einer Chemotherapie nützlich, wie in den folgenden Tests gezeigt.

Beschreibung biologischer Tests, Interleukin 6 (IL-6)-Test zur Strukturfunktionsanalyse

Testverbindungen werden in Wasser gelöst und subkutan in 0,2 ml verabreicht, wobei eine Dosis von 0,1 bis 10 mg/kg vorgesehen wird. Die weniger löslichen Verbindungen werden zuerst in 100 % Ethanol gelöst und dann in Wasser auf die geeignete Konzentration gebracht. 4 Stunden nach der Injektion wird den Mäusen Blut abgenommen und das Serum gewonnen. Die IL-6-abhängige Zellinie 7TD1 wird verwendet, um serielle Verdünnungen von Sera auf den IL-6-Gehalt zu testen. 7TD1-Zellen (1 x 10&sup4;) werden in Mikrotitervertiefungen gegeben und 72 Stunden lang bei 37ºC mit standardmäßigem rekombinanten Mäuse-IL-6 oder mit zu testenden Serumverdünnungen inkubiert. Während der letzten 6 Stunden werden die Zellen mit ³H-Tdr (µCi) gepulst. Dann werden die Zellen geerntet, und der Proliferationsgrad wird durch die Aufnahme von ³H-Tdr, wie durch Flüssigszintillationsspektrometrie gemessen, bestimmt. Die Konzentration von IL-6 im Serum wird aus Standard-Kurven unter Verwendung von rekombinantem IL-6 von R&D Systems Inc. berechnet und in Einheiten der IL-6-Aktivität angegeben, wie vom Hersteller definiert.

Test auf Granulocvten-Kolonie-stimulierenden Faktor (GCSF)

Ein Biotest auf GCSF wird in einer Weise identisch mit dem IL-6-Test durchgeführt, außer daß die GCSF-abhängige Zellinie NFS-60 anstelle der IL-6-abhängigen 7TD1-Zellinie verwendet wird. Eine Neutralisation von monoklonalem Antikörper zu Mäuse- GCSF wird verwendet, um die Spezifität des Tests nachzuweisen.

Granulocyten-Makrophagen (CFU-GM)-Koloniebildungstests

Mäuse werden mit 150 mg/kg 5-Fu behandelt, und die Behandlung mit Testverbindung beginnt 24 Stunden später. An aufeinanderfolgenden Tagen werden die Mäuse durch Genickbruch getötet und die Femora unter sterilen Bedingungen entfernt. Die Femora werden mit 1 ml eiskaltem Medium (Iscoves, ergänzt mit 20 % FCS, 1 % Penicillin-Streptomycin, 1 % Glutamin und 5 x 10&supmin;&sup5; M 2-Mercaptoethanol) gespült. Dann werden Knochenmarkzellen (5 x 10&sup5;) in 3 ml warmer Agarose (3 %) in Iscoves Medium mit 100 Einheiten/ml rekombinanten Mäuse-GM-CSF, erworben von Genzyme (Boston, MA) auf 12 x 75 mm Gewebekulturplatten plattiert. Die Platten werden in 5 % CO&sub2; 7 Tage lang bei 37ºC inkubiert. Nach 7 Tagen werden Kolonien von 50 Zellen oder mehr unter einem Seziermikroskop gezählt.

Test auf Kolonie-stimulierenden Faktor (CSF) im Serum

Ein Test, der die Aktivität des Kolonie-stimulierenden Faktors detektiert, jedoch nicht zwischen verschiedenen Typen von Kolonie-stimulierenden Faktoren unterscheidet, wird zur Detektion des Vorliegens der CSF-Aktivität im Serum von Mäusen, denen die Testverbindungen injiziert wurden, verwendet. Knochenmarkzellen werden wie oben für den CFU-GM-Test beschrieben hergestellt. Die Zellen werden dann in Weichagar mit einer 0,3 % Endkonzentration von Serum inkubiert, das den Mäusen 4 Stunden nach der Injektion von Testverbindungen entnommen wurde. Nach 7 Tagen Inkubieren bei 37ºC wird die Anzahl von Kolonie-bildenden (CFU) Zellen pro 10&sup5; plattierten Knochenmarkzellen durch das Zählen von Kolonien mit mehr als 50 Zellen unter einem Seziermikroskop bestimmt. Die Daten werden als CFU/10&sup5; Knochenmarkzellen angegeben.

Neutrophilen-Zirkulationstest

Mäuse werden mit 5-FU (150 mg/kg) und, beginnend 24 Stunden später, täglich mit Testverbindung behandelt. Den Mäusen wird täglich durch retroorbitale Punktion Blut in heparinisierten Kapillarröhrchen abgenommen. Zirkulierende WBC-Zahlen werden durch einen Coulter-Zähler bestimmt. Blutausstriche werden mit Wright-Geimsa-Lösung angefärbt, und der Prozentsatz zirkulierender Neutrophilen wird durch Differentialzählung unter einem Mikroskop bestimmt.

Durch 5-Fluoruracil (5-FU)-induzierte Neutropenie bei Mäusen

Die Mäuse werden ip mit 150 mg/kg des Chemotherapeutikums 5-FU behandelt, das einen starken Neutrophilen-Verlust im peripheren Blut 5 bis 6 Tage danach induziert. 24 Stunden nach der Dosis wird die Behandlung mit den Testverbindungen initiiert. Die Wirkung der Testverbindungen auf die Wiederherstellung neutrophiler Stammzellen im Knochenmark wird durch den CFU-GM-Test bestimmt. Die Wiederherstellung zirkulierender Neutrophilen wird durch eine Differentialanfärbung des peripheren Blutes verfolgt.

Delta-Test

Die Mäuse werden mit einer 5-FU-Einzeldosis (150 mg/kg ip) behandelt. 24 Stunden später werden Knochenmarkzellen entfernt und in 2 aliquote Mengen geteilt. Eine aliquote Menge wird sofort in Weichagar mit 15 ng/ml IL-1 und 250 E/ml GM-CSF plattiert. Nach 14 Tagen wird die Anzahl der Kolonien (CFU-1) bestimmt. Eine zweite aliquote Menge von Zellen wird in eine Flüssigkultur mit einzelnen Wachstumsfaktoren oder Arzneimitteln oder Kombinationen von beiden gegeben, um die Fähigkeit dieser Mittel zur Expansion des Kolonie-bildenden Zellpools festzustellen. Nach 7 Tagen in Flüssigkultur werden diese Zellen geerntet und in Weichagar mit IL-1 und GM-CSF plattiert, wie bei der ersten aliquoten Menge. Nach 14 Tagen wird die Anzahl der Kolonien in der zweiten aliquoten Menge (CFU-2) bestimmt. Das Verhältnis oder Delta wird als CFU-2/CFU-1 berechnet, und dieses Verhältnis dient zur Feststellung der Fähigkeit der in der Flüssigphase verwendeten Wachstumsfaktoren und/oder Arzneimittel, ein Wachstum der Kolonie-bildenden Zellen (CFU) oder eine Differenzierung von prä-CFU zu CFU zu induzieren.

Ergebnisse

Die Testverbindungen können eine IL-6-Produktion im Serum von Mäusen innerhalb von 4 Stunden nach einer subkutanen Einzelinjektion induzieren (Tabelle 1). Ähnlich wird auch eine Serum- CSF-Aktivität bei diesen Verbindungen in Mäusen detektiert (Tabelle 2). Der IL-6-Test wird quantitativ durchgeführt und zur Bestimmung der relativen Wirkungsstärke verwendet. Der CSF-Test wird bei einer einzigen Serumkonzentration verwendet und ist daher qualitativ.
Es wird nachgewiesen, daß eine repräsentative Verbindung (Beispiel 28) auch GCSF im Serum von Mäusen nach Injektion induziert (Tabelle 3). Es wird gezeigt, daß repräsentative Verbindungen (Beispiele 28, 32 und 84) eine Neutrophilen-Wiederherstellung in mit 5-FU behandelten Mäusen induzieren (Tabelle 4). Eine repräsentative Verbindung (Beispiel 28) verstärkt die Wiederherstellung peripherer Blut-Neutrophilen, der eine Erhöhung von CFU-GM vorausgeht, den Neutrophilen-Vorläufern im Knochenmark (Tabelle 5), wobei gezeigt wird, daß die Testverbindungen eine Wirkung im Knochenmark ausüben.
Eine repräsentative Verbindung (Beispiel 28) induziert auch eine IL-6- und GCSF-Produktion im Serum von mit 5-FU behandelten Primaten (Tabelle 6). Eine repräsentative Verbindung (Beispiel 32) beschleunigt die Wiederherstellung von Neutrophilen bei mit dem Chemotherapeutikum Cytoxan behandelten Primaten (Tabelle 7). Mit Testverbindung behandelte Gruppen kehren am Tag 7 zu den Kontrollwerten zurück, verglichen mit der Wiederherstellung am Tag 10 bei der Gruppe nur mit Cytoxan. Daher induzieren die Testverbindungen sowohl bei Primaten als auch Mäusen ein ähnliches Spektrum von Cytokinen und eine verstärke Neutrophilen- Wiederherstellung.
Eine repräsentative Verbindung (Beispiel 28) wirkt synergistisch in vitro mit dem hämatopoetischen Wachstumsfaktor c-kit Liganden (KL), um das Wachstum der Knochenmark-Stammzellen zu verstärken (Tabelle 8). Dies unterstützt den Anspruch, daß diese Verbindungen bei der Verstärkung des Wachstums neutrophiler Stammzellen im Knochenmark wirksam sind. Die Testverbindungen sind auch bei der Beschleunigung der Neutrophilen-Wiederherstellung bei mit 5-FU behandelten Mäusen wirksam, wenn sie oral verabreicht werden (Tabelle 9), wie durch repräsentative Verbindungen (Beispiele 28 und 32) gezeigt.

Klinische Signifikanz

Die mit den beschriebenen Testverbindungen gesammelten Daten zeigen, daß sie in der Lage sind, die endogene Produktion von Wachstumsfaktoren (IL-6 und GCSF) zu induzieren, von denen bekannt ist, daß sie die Neutrophilen-Produktion im Knochenmark regulieren. Diese Verbindungen können therapeutisch zur Wiederherstellung der Neutrophilen nach Krebschemotherapie, Strahlentherapie, Knochenmarktransplantationen oder Infektionen verwendet werden. Außerdem können diese Verbindungen in Kombination mit rekombinanten Wachstumsfaktoren eingesetzt werden, um die Wirksamkeit der rekombinanten Moleküle zu potenzieren. Diese Verbindungen können auch bei der Behandlung von Krebs, AIDS, aplastischer Anämie, myelodysplastischem Syndrom, Infektionskrankheiten und der Verstärkung der Immunantwort nützlich sein. im Gegensatz zu rekombinanten Wachstumsfaktoren sind die Testverbindung bei oraler Verabreichung wirksam. Tabelle 1 Wirkung von Testverbindungen auf die IL-6-Produktion bei Mäusen Tabelle 2 Wirkung von Testverbindungen auf die CSF-Produktion bei Mäusen Tabelle 3 Wirkung von Testverbindungen auf die GCSF-Produktion bei Mäusen
Die Mäuse (10/Gruppe) erhalten eine subkutane Einzelinjektion der Testverbindung, und 4 Stunden später wird Blut abgenommen. GCSF-Werte im Serum werden durch einen Biotest unter Verwendung der GCSF-abhängigen Zellinie NFS-60 bestimmt. Tabelle 4 Wirkung von Testverbindungen auf die Neutrophilen- Wiederherstellung bei mit 5-FU behandelten Mäusen
* Daten von 10 Mäusen/Gruppe am Tag 7 nach der Behandlung mit 150 mg/kg 5-FU. Beginnend 24 Stunden nach der 5-FU-Dosis wurden die Mäuse täglich mit Testverbindung in den angegebenen Konzentration behandelt. Die Neutrophilen-Zahl für normale Mäuse (n=5) beträgt 3236 ± 301.
** Mäuse, die nur mit 5-FU und Träger behandelt wurden.
*** Tag 8 nach 5-FU
*** 6 Mäuse/Gruppe Tabelle 5 Wirkung von Testverbindungen auf Knochenmark-CFU-GM bei mit
Gruppen von 5 Mäusen werden mit 150 mg/kg 5-FU und, beginnend 24 Stunden später, mit 0,1 mg/kg Testverbindung täglich s.c. behandelt. Die Daten sind von Tag 3 nach 5-FU-Behandlung angegeben. Tabelle 6 Wirkung von Testverbindungen auf Serum-IL-6 und GCSF bei mit
Gruppen von 3 Hundskopfaffen werden mit 125 mg/kg 5-FU und, beginnend 24 Stunden später, mit 0,05 mg/kg Testverbindung s.c. behandelt. Die Daten stammen von Sera, die 4 Stunden nach der Behandlung mit Testverbindung entnommen wurden. Tabelle 7 Wirkung von Testverbindungen auf die Neutrophilen-Wiederherstellung bei mit Cytoxan behandelten Primaten, absolute Neutrophilen-Zahl/mm³ Blut
Gruppen von 4 Hundskopfaffen werden am Tag 1 und Tag 0 mit 60 mg/kg Cytoxan behandelt. Beginnend 24 Stunden nach der zweiten Cytoxan-Dosis wird eine Gruppe täglich s.c. mit 50 pg/kg Testverbindung und die andere nur mit Träger (Wasser) behandelt.
* p(0,05 gegenüber der Nur-Cytoxan-Kontrolle gemäß Student's-t- Test. Tabelle 8 Testverbindungen wirken synergistisch mit c-kit-Liganden (KL) auf die Expansion von Knochenmark-Stammzellen in vitro

Beispiel Nr. in vitro-Kultur -fache CFU-Erhöhung

Knochenmarkzellen von mit 5-FU behandelten Mäusen werden zur Anreicherung mit frühen Stammzellen verwendet. Die Zellen werden in 2 aliquote Mengen geteilt, wie im Verfahrensteil für den "Delta-Test" beschrieben. Die -fache Erhöhung wird durch die Messung der Wirkung einer in vitro-Inkubation der Zellen mit Gewebekulturmedium plus Testverbindung und/oder Wachstumsfaktor KL während 7 Tagen auf Kolonie-bildende Zellen (CFU) bestimmt. Die Anzahl der CFUs wird dann mit der Koloniebildung der frischen Knochenmarkzellen verglichen, die nicht in vitro inkubiert wurden, um die -fache Erhöhung zu bestimmen. Die Testverbindung wird in vitro bei 0,5 µg/ml verwendet. Tabelle 9 Wirkung der oralen Dosierung von Testverbindungen auf die Neutrophilen-Wiederherstellung bei mit 5-FU behandelten Mäusen
Gruppen von 5 Mäusen werden mit 150 mg/kg 5-FU behandelt. 1 Tag später beginnt die orale Dosierung mit Testverbindungen und wird 10 Tage lang fortgesetzt. Die gezeigten Daten stammen vom Tag 6 nach 5-FU-Behandlung.
* Tag 7 nach 5-FU
Wenn die Verbindungen für die obigen Zwecke verwendet werden, können sie mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern kombiniert werden, beispielsweise Lösungsmitteln, Verdünnungsmitteln und dgl., und können oral in Formen wie Tabletten, Kapseln, dispergierbaren Pulvern, Granula oder Suspensionen, die beispielsweise etwa 0,05 bis 5 % Suspendiermittel enthalten, Sirupen, die beispielsweise etwa 10 bis 50 % Zucker enthalten, und Elixieren, die beispielsweise etwa 20 bis 50 % Ethanol enthalten, und dgl., oder parenteral in Form steriler injizierbarer Lösungen oder Suspensionen, die etwa 0,05 bis 5 % Suspendiermittel in einem isotonischen Medium enthalten, verabreicht werden. Derartige pharmazeutische Zubereitungen können beispielsweise etwa 0,05 bis etwa 90 % des aktiven Bestandteils in Kombination mit dem Träger, üblicherweise zwischen etwa 5 % und 60 Masse-%, enthalten.
Die effektive Dosierung des verwendeten aktiven Bestandteils kann in Abhängigkeit von der bestimmen eingesetzten Verbindung, vom Verabreichungsweg und vom Schweregrad des behandelten Zustands variieren. Allgemein werden jedoch zufriedenstellende Ergebnisse erhalten, wenn die Verbindungen der Erfindung bei einer täglichen Dosierung von etwa 15 µg bis etwa 100 µg/kg Tierkörpergewicht verabreicht werden, vorzugsweise in geteilten Dosen zwei- bis viermal täglich, oder in einer Form mit anhaltender Freisetzung. Für die meisten großen Säuger beträgt die gesamte Tagesdosierung etwa 1 bis 50 µg, vorzugsweise etwa 1 bis 20 µg. Zur inneren Verwendung geeignete Dosierungsformen umfassen etwa 5 µg bis 25 µg der aktiven Verbindung in inniger Mischung mit einem festen oder flüssigen pharmazeutisch annehmbaren Träger. Dieses Dosierungsschema kann angepaßt werden, um die optimale therapeutische Reaktion vorzusehen. Beispielsweise können einige geteilte Dosen täglich verabreicht werden, oder die Dosis kann proportional reduziert werden, wie durch die Anforderungen der therapeutischen Situation indiziert.
Diese aktiven Verbindungen können oral sowie auf intravenösen, intramuskulären oder subkutanen Wegen verabreicht werden. Feste Träger schließen ein: Stärke, Lactose, Dicalciumphosphat, mikrokristalline Cellulose, Saccharose und Kaolin, wohingegen flüssige Träger einschließen: steriles Wasser, Polyethylenglykole, nicht-ionische grenzflächenaktive Stoffe und eßbare Öle, wie Mais-, Erdnuß- und Sesamöle, wie sie für die Beschaffenheit des aktiven Bestandteils und die bestimmte gewünschte Verabreichungsform geeignet sind. Vorteilhaft können Adjuvantien, die gewöhnlich bei der Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen verwendet werden, eingeschlossen werden, wie Geschmacksstoffe, Färbemittel, Konservierungsmittel und Antioxidantien, beispielsweise Vitamin E, Ascorbinsäure, BHT und BHA.
Die vom Standpunkt der einfachen Herstellung und Verabreichung bevorzugten pharmazeutischen Zusammensetzungen sind feste Zusammensetzungen, insbesondere Tabletten und hartgefüllte oder mit Flüssigkeit gefüllte Kapseln. Die orale Verabreichung der Verbindungen wird bevorzugt.
Diese aktiven Verbindungen können auch parenteral oder intraperitoneal verabreicht werden. Lösungen oder Suspensionen dieser aktiven Verbindungen als freie Base oder pharmakologisch annehmbares Salz können in Wasser, geeignet gemischt mit einem grenzflächenaktiven Stoff, wie Hydroxypropylcellulose, hergestellt werden. Auch Dispersionen können in Glycerin, flüssigen Polyethylenglykolen und Mischungen hievon in Ölen hergestellt werden. Unter gewöhnlichen Lager- und Verwendungsbedingungen enthalten diese Zubereitungen ein Konservierungsmittel, um das Wachstum von Mikroorganismen zu verhindern.
Die zur injizierbaren Verwendung geeigneten pharmazeutischen Formen schließen ein: sterile wässerige Lösungen oder Dispersionen und sterile Pulver zur Zubereitung steriler injizierbarer Lösungen oder Dispersionen kurz vor der Verwendung. In allen Fällen muß die Form steril sein und muß in dem Ausmaß flüssig sein, daß sie leicht in Spritzen verabreicht werden kann. Sie muß unter den Herstellungs- und Lagerbedingungen stabil sein und muß gegen die verunreinigende Wirkung von Mikroorganismen, wie Bakterien und Pilzen, konserviert werden. Der Träger kann ein Lösungsmittel- oder Dispersionsmedium sein, das beispielsweise Wasser, Ethanol, Polyol (z.B. Glycerin, Propylenglykol und flüssiges Polyethylenglykol), geeignete Mischungen hievon und Pflanzenöle enthält.

Abkürzungen

IL: Interleukin
CSF: Kolonie-stimulierender Faktor G (Granulozyten)-, M (Makrophagen)- und GM (Granulozyten-Makrophagen) -CSFs
Ala: Alanin
A&sub2;pm: 2,6-Diaminopimelinsäure
Lys: Lysin
Ser: Serin
Thr: Threonin
B0C: tert.Butoxycarbonyl
BOP: Benzotriazolyloxytris-(dimethylamino)- phosphoniumhexafluorphosphat
CBZ: Carbobenzyloxy
TFA: Trifluoressigsäure
MS: Molekularsiebe
TEA: Triethylamin
DMAP: Dimethylaminopyridin
Die Verbindungen dieser Erfindung und ihre Herstellung werden durch die folgenden Beispiele besser verständlich, die jedoch keine Einschränkung hievon darstellen sollten.
in den folgenden Beispielen werden die Produkte durch Flash-Chromatographie auf Silikagel 60A (230 bis 400 Mesh) getrennt, wenn nichts anderes angegeben ist. Die Reinheit der Produkte wird durch DC auf Silikagel GF (250 mm) bestimmt. Die Schmelzpunkte werden auf einer Mel-Temp-Vorrichtung erhalten und sind unkorrigiert (alle Temperaturen in ºC). Wenn nichts anderes angegeben ist, werden ¹H-NMR-Spektren (300 MHz) für Deuterochloroform-Lösungen erhalten (1 % interner Standard, Me&sub4;Si; Kopplungskonstanten in Hz-Einheiten angegeben). Reaktionen, die wasserfreie Bedingungen erfordern, werden unter einer Argonatmosphäre unter Verwendung von Lösungsmitteln in mit einem Septum verschlossenen Flaschen durchgeführt. organische Lösungen werden über Magnesiumsulfat oder Natriumsulfat getrocknet, und die Lösungsmittel werden im Vakuum auf einem Rotationsverdampfer entfernt.

Beispiel 1:

N-(1-Oxoheptyl)-D-allothreonin (2c-1)
Eine Lösung von 440 ml (2,83 mmol) n-Heptanoylchlorid in 250 ml THF wird tropfenweise während 30 min einer kalten (-5 bis 0ºC), heftig gerührten Mischung von 300 mg (2,51 mmol) D-allo- Thr und 3,5 ml (7,0 mval) 2n wässerigem NaOH in 4,0 ml THF zugesetzt. Die erhaltene Mischung wird 2 h lang bei derselben Temperatur und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, der Rückstand mit Wasser verdünnt und unter Verwendung von konz. HCl angesäuert. Die Mischung wird mit EtOAc extrahiert und die kombinierte organische Lösung mit Koch- Salzlösung gewaschen, getrocknet, filtriert und konzentriert, wobei 420 mg rohe Verbindung (2c-1) (enthaltend 10 % Heptanoyl- Reagens-Überschuß) erhalten werden, die sich beim Stehenlassen verfestigt.
NMR δ 1,28 (d, J = 6,5, 3 H), 4,20 (m, 1 H), 4,61 (dd, J =3,4 6,6 1 H), 6,56 (br ,d, J = 6,9, 1 H); [α]26D -38±2 (CHCl&sub3;).

Beispiel 2:

N-(1-Oxoheptyl)-D-threonin (2c-2)
2,50 g (20,99 mmol) D-Thr werden gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren in (2c-2) übergeführt:
NMR δ 1,22 (d, J = 6,4, 3H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (dd, J = 1,9, 8,3, 1H), 6,30- 6,80 (br s, variabel, )2H), 6,88 (br d, J = 8,3, 1H); MS (HR-EI) m/z 321,1939 (M berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub4;: 321,1940).

Beispiel 3:

N-(1-Oxoheptyl)-L-allothreonin (2c-3)
150 mg (1,26 mmol) L-allo-Thr werden gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren in (2c-3) übergeführt: NMR gleich wie für (2c-1).

Beispiel 4:

N-(1-oxoheptyl)-L-threonin (2c-4)
300 mg (2,51 mmol) L-Thr werden gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren in (2c-4) übergeführt: NMR gleich wie für (2c-2).

Beispiel 5:

N-(1-Oxoheptyl)-D-serin (2c-5)
6,00 g (57,09 mmol) D-Ser werden gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren in (2c-5) übergeführt. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie (2 x 21 cm Säule, Gradient 1 % CH&sub3;OH und 0,5 % HOAc bis 3 % CH&sub3;OH und 2 % HOAc in CH&sub2;Cl&sub2;) gereinigt:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,90 (t, J = 6,8, 3H), 1,32 (m, 6H), 1,63 (m, 2H), 2,27 (scheinbar t, J ≈ 7,5, 2H), 3,81 und 3,89 (AB von ABX, JAB = 11,2, JAX = 4,1, JBX = 5,0, 2H), 4,49 (X von ABX, J 4,2, 4,8, 1H); MS (CI, NH&sub4;) m/z 218 (M + H), 235 (M + NH&sub4;); [α]26D -8±1 (MeOH).

Beispiel 6:

N-[trans-(4-Pentylcyclohexyl)-carbonyl]-D-allothreonin (2c-6)
Eine Lösung von 198 mg (1,0 mmol) trans-4-Pentylcyclohexancarbonsäure in 1 ml trockenem Toluol wird mit 760 mg (5,9 mmol) Oxalylchlorid bei 0ºC behandelt und die Mischung 2 h lang bei derselben Temperatur und 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Überschüssiges Reagens wird im Vakuum entfernt. Eine Lösung des rohen Säurechlorids in 2 ml trockenem Acetonitril wird einer Mischung von 100 mg (0,85 mmol) D-allo-Thr, 600 µl (1,20 mval) 2n wässerigem NaOH und 85 mg (0,85 mmol) TEA in 1,5 ml THF gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren zugesetzt. Das Rohprodukt (2c-6) wird durch Chromatographie (1,5 x 1,8 cm Säule, 5 % CH&sub3;OH und 0,4 % HOAc in CH&sub2;Cl&sub2;) gereinigt: NMR δ 0,88 (t, J = 7, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 6,49 (d, 1H); MS (CI, CH&sub4;) m/z 300 (M + H).

Beispiel 7:

N-[(4-Butoxyphenyl)-acetyl]-D-allothreonin (2c-7)
Gemäß dem in Beispiel 6 beschriebenen Verfahren werden 288 mg (1,38 mmol) 4-Butoxyphenylessigsäure in das Säurechlorid übergeführt und zu 150 mg (1,26 mmol) D-allo-Thr zugesetzt, um (2c-9) zu erhalten. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie (2,5 x 18 cm Säule, Gradient 4 % CH&sub3;OH und 0,3 % HOAc in CH&sub2;Cl&sub2;) gereinigt:
NMR δ 0,96 (t, J=7,4, 3 H), 1,14 (d, J = 5,8, 3 H), 1,47 (m, 2 H), 1,74 (m, 2 H), 3,53 (br s, 2 H), 3,91 (t, J ≈ 6,5, 2 H), 4,10 (br s, 1 H), 4,53 (br s, 1 H), 4,90 (br s, )2 H), 6,76 (br d, J = 6,0, 1 H), 6,84 (d, U = 8,4, 2 H), 7,13 (d, J = 8,4, 2 H);
MS (HR-EI) m/z 309,1567 (M berechnet für C&sub1;&sub6;H&sub2;&sub3;NO&sub5;: 309,1576); [α]26D -26±2 (CHCl&sub3;); Fp. 90-94ºC.

Beispiel 8:

N- (1-Oxoheptyl)-D-allothreoninphenylmethylester (2e-1)
420 mg (1,82 mmol) rohe Verbindung (2c-1) werden in 18 ml DMF gelöst, mit 321 mg (3,82 mmol) festem NaHCO&sub3; behandelt, und die erhaltene Mischung wird 1 h lang bei 70 bis 75ºC gerührt. Die Mischung wird auf 40 bis 50ºC abekühlt und mit 1,13 ml (9,31 mmol) Benzylbromid behandelt. Das Rühren wird 2 h lang bei 40ºC und 18 h lang bei Umgebungstemperatur fortgesetzt. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, und der Rückstand wird in H&sub2;O/EtOAc aufgenommen. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet, filtriert und eingedampft. Durch Reinigung des Rohprodukts mittels Chromatographie (2 x 24 cm Säule, 3:1 Hexan/EtOAc) werden 506 mg (1,57 mmol) eines weißen Feststoffs erhalten, der als (2e-1) charakterisiert wird:
NMR δ 0,88 (scheinbar t, J = 6,8, 3H), 1,09 (d, J = 6,4, 3H), 1,20-1,40 (m, 6H), 1,55-1,74 (m, 2H), 2,27 (scheinbar t, J ≈ 7,5, 2H), 3,20-3,80 (br s, variabel, 1H), 4,21 (dq, J = 3,3, 6,4, 1H), 4,74 (dd, J = 3,3, 6,8, 1H), 5,20 und 5,23 (AB, J = 12,2, 2H), 6,43 (br d, J = 6,5, 1H), 7,36 (m, 5H); MS (HR-EI) m/z 321,1939 (M berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub4;: 321,1940); [α]26D -29±2 (CHCl&sub3;); Fp. 70-73ºC.

Beispiel 9:

N-(1-Oxoheptyl)-D-threoninphenylmethylester (2e-2)
Durch Benzylierung der rohen Verbindung (2c-2) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-2) erhalten. Der rohe Feststoff wird durch Chromatographie (3,0 x 39 cm Säule, 3:1 Hexan/EtOAc) gereinigt:
NMR δ 0,88 (scheinbar t, J ≈ 6,8, 3H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,23-1,38 (m, 6H), 1,60-1,71 (m, 2H) und 1,55-1,95 (überlappend br s, variabel, )1H), 2,28 (scheinbar t, J ≈ 7,6, 2H), 4,37 (dq, J = 2,4, 6,4, 1H), 4,67 (dd, J = 2,4, 8,9, 1H), 5,19 und 5,22 (AB, J = 12,3, 2H), 6,21 (br d, J = 9, 1H), 7,35 (m, 5H). MS (HR-EI) m/z 322,2011 (M + H berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub8;NO&sub4;: 322,2019); [α]26D +9±1 (CHCl&sub3;); Fp. 77-80ºC.

Beispiel 10:

N-(1-Oxoheptyl)-L-allothreoninphenylmethylester (2e-3)
Durch Benzylierung der rohen Verbindung (2c-3) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-3) erhalten. Der rohe Feststoff wird durch Chromatographie (2,5 x 28 cm Säule, 4:1 Hexan/EtOAc) gereinigt:
NMR gleich wie für (2e-1); MS (HR-EI) m/z 321,1935 (M berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub4;: 321,1940); [α]26D +25±2 (CHCl&sub3;); Fp. 70-73ºC.

Beispiel 11:

N-(1-Oxoheptyl)-L-threoninphenylmethylester (2e-4)
Durch Benzylierung der rohen Verbindung (2c-4) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-4) erhalten. Der Feststoff wird durch Chromatographie (2,0 x 20 cm Säule, Gradient 4:1 bis 3:1 Hexan/EtOAc) gereinigt:
NMR gleich wie für (2e-2); MS (HR- EI) m/z 321,1947 (M berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub4;: 321,1940); [α]26D -9±2 (CHCl&sub3;); Fp. 78-80ºC.

Beispiel 12:

N-(1-Oxoheptyl)-D-serinphenylmethylester (2e-5) Durch Benzylierung von (2c-5) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-5) erhalten.
NMR δ 0,88 (scheinbar t, J ≈ 6,8, 3H), 1,20-1,40 (m, 6H), 1,55-1,70 (m, 2H), 2,25 (scheinbar t, J ≈ 7,7, 2H), 2,45 und 2,80 (br s, 1H), 3,92 und 3,99 (AB von ABX, JAB = 11,2, JAX = 3,4, JBX = 4,0, 1H), 4,72 (ddd, scheinbar Quintett, JX-NH = 7,3, JAX = JBX 3,7, 1H), 5,21 (scheinbar s, geringe AB-Seitensignale, 2H), 6,46 (br d, J = 7,1, 1H), 7,36 (m, 5H); MS (HR-EI) m/z 307,1792 (M berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub5;NO&sub4;: 307,1801); [α]26D -11±1 (CHCl&sub3;); Fp. 62-66ºC.

Beispiel 13:

N-[trans-(4-Pentylcyclohexyl)-carbonyl]-D-allothreoninphenylmethylester (2e-6)
Durch Benzylierung von (2c-6) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10, gefolgt von Chromatographie (2 x 18 cm Säule, 0,5 % CH&sub3;OH in CH&sub2;Cl&sub2;), wird (2e-6) erhalten.
NMR δ 0,88 (m, 5 H), 1,07 (d, J = 6,4, 3 H), 1,10-1,35 (m, 8 H), 1,35-1,55 (m, 2 H),- 1,64 (br. s, 1 H), 1,64-1,97 (m, 4 H), =2,14 (m, 1 H), 3,67 (br s, 1 H), 4,20 (m, 1 H), 4,73 (dd, J = 3,2 Und 6,7, 1 H), 5,18 Und 5,25 (AB, JAB = 12,2, 2 H), 6,44 (d, J = 6,6, 1 H);
MS (HR-EI) m/z 389,2566 (M berechnet für C&sub2;&sub3;H&sub3;&sub5;NO&sub4;: 389,2566); [α]26D -24±2 (CHCl&sub3;); Fp. 130-34ºC.

Beispiel 14:

N-[(4-Butoxyphenyl)-acetyl]-D-allothreoninphenylmethylester (2e-7)
Durch Benzylierung von (2c-7) gemäß dem Verfahren von Beispiel 10, gefolgt von Chromatographie (2 x 20 cm Säule, 3:1 Hexan/EtOAc), wird (2e-7) vorgesehen.
NMR δ 1,00 (m, 6H), 1,50 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 3,38 (br s, 1H), 3,56 (scheinbar s, geringe AB-Seitensignale, 2H), 3,95 (scheinbar t, J = 6,5, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,72 (dd, J = 7,0 und 3,4, 1H), 5,13 und 5,19 (AB, J = 12,2, 2H), 6,38 (br d, J = 6,8, 1H), 6,87 (d, J = 8,7, 2H), 7,15 (d, J = 8,6, 2H); MS (CI, CH4) m/z 400 (M + H); [α]26D -18±2 (CHCl&sub3;); Fp. 80-83ºC.

Beispiel 15:

(R)-3-Hydroxy-N-(1-Oxoheptyl)-D-norvalinphenylmethylester (2e-8)
Durch Benzylierung der Verbindung (2c-8) von Beispiel 51 gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-8) vorgesehen.

Beispiel 16:

(S)-3-Hydroxy-N-(1-oxoheptyl)-D-norvalinphenylmethylester (2e-9)
Durch Benzylierung von (2c-9) von Beispiel 52 gemäß dein Verfahren von Beispiel 10 wird (2e-9) vorgesehen.

Beispiel 17:

N-[N²-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[ (phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alaninphenylmethylester (40b)
Eine Mischung von 683 mg (1,06 mmol) N-[N²-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6- [(methoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin-4-nitrophenylmethylester ((40a); Kolodziejczyk et al., Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382), 2,15 g zerstoßenen 4A Molekularsieben, 10,5 ml THF und 11,0 ml (105,6 mmol) Benzylalkohol wird 30 min lang gerührt und dann mit 82 µl (0,27 mval) Titan(IV)-isopropoxid behandelt. Die erhaltene Mischung wird 24 h lang auf 85 bis 90ºC erhitzt. Die Feststoffe werden durch Diatomeenerde filtriert, und das Lösungsmittel wird entfernt. Der Benzylalkohol-Überschuß wird auf einer Kugelrohr-Vorrichtung abdestilliert (etwa 1000 µ Druck, 50 bis 75ºC). Das rohe orange Öl wird chromatographiert (2,5 x 31 cm Säule, Gradient 4:1 bis 2:1 Hexan/EtOAc), wobei 633 mg (88 % Ausbeute) der Verbindung (40b) vorgesehen werden.
NMR δ 1,39 (d, J = 7,2, 3 H),=1,43 (s, 9 H), 1,40-1,67 (m, 4 H), 1,84 (br s, 2 H), 4,07 (br s, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,58 (scheinbar Quintett, 1H), 5, (br d, 1 H), 5,07-5,25 (m, 6 H), 5,43 (br d, J = 7,9, 1 H), 6,68 (br d, 1 H), 7,33 (m);MS (HR-FAB) m/z 676,3232 (M + H berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub4;&sub6;N&sub3;O&sub9;: 676,3234).

Beispiel 18:

N-[N&sup6;-[(Phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninphenylmethylester (3b) Eine Lösung von 251 mg (0,37 mmol) der Verbindung (40b) in 870 µl TFA wird 30 min lang bei 0ºC gerührt. Die TFA wird entfernt, das Öl in EtOAc aufgenommen und mit gesättigter NaHCO&sub3;- Lösung gewaschen. Durch Trocknen und Entfernen des Lösungsmittels werden 225 mg (geringer Überschuß) der Verbindung (3b) erhalten, die in anschließenden Reaktionen ohne weitere Handhabung verwendet wird:
NMR δ 1,39 (d, 3H) und 1,20-1,70 (überlappend m, 4H), 1,82 (br s, 2H), 3,23 (br s, variabel, 2H), 3,33 (br ß, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,47 (scheinbar Quintett, 1H), 5,03-5,13 (m, 6H), 5,27 (br d, 1H), 7,35 (m, 15H), 7,95 (br d, 1H); MS (FAB) m/z 576 (M + H), 598 (M + Na).

Beispiel 19:

[R-(R*,R*)]-N-[N²-[[(3-Oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- 1-methyl-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alaninphenylmethylester (1a- 1)
Eine Lösung von 173,6 mg (0,54 mmol) der Verbindung (2e-1) in THF (Sure/Seal-Lösungsmittel erneut getrocknet über 3A MS, 1,45 ml) wird einem kalten Phosgen-Überschuß (1,92 M Lösung in Toluol; 1,40 ml, 2,63 mmol), alternativ mit 81 µl (0,58 mmol) TEA, während eines Zeitraums von 15 min bei 0ºC zugesetzt. Die erhaltene milchige Mischung wird weitere 15 min lang bei derselben Temperatur und 5 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird 30 min lang mit Argon entgast und 30 min lang unter Aspirator-Druck gerührt. Der Rückstand wird mit einer Lösung von 0,37 mmol frisch hergestellter Verbindung (3b) in CH&sub3;CN (erneut getrocknet wie für THF, 2,9 ml) und dann 81 pl (0,58 mmol) TEA behandelt, wobei beide auf einmal zugesetzt werden. Die weiße Aufschlämmung wird über Nacht bei Umgebungstemperatur gerührt. Die Mischung wird in EtOAc/H&sub2;O aufgenommen, und die Schichten werden getrennt. Die wässerige Phase wird 2 x mit EtOAc extrahiert und die kombinierte organische Phase mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet, filtriert und eingedampft. Durch die Reinigung des Produkts mittels Chromatographie (3 x 30 cm Säule, Gradient 2:1 bis 1:2 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-1) identifiziert wird:
NMR δ 0,86 (m, 3H), 1,11 (d, J = 6,4, 3H), 1,20-1,40 (m, 8H), 1,42 (d, J = 7,3, 3H), 1,50-1,75 (m, 4H), mit überlappendem H&sub2;O-Signal), 1,75-2,05 (br d, 2H), 2,20 (m, 2H), 4,15 (br s, 1H), 4,47 (br s, 1H), 4,62 (scheinbar Quintett, 1H), 4,87 (scheinbar br d, J ≈ 6, 1H), 5,00-5,20 (m, 9H), 5,23 (m, 1H), 5,37 (br d, 1H), 6,40 (br d, 1H), 7,33 (m, 2OH), 7,77 (br d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 923,4420 (M + H berechnet für C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub3;N&sub4;O&sub1;&sub2;: 923,4442).

Beispiel 20:

[S-(R*,S*]-N-[N²-[[(3-Oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- 1-methyl-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl)-L-lysyl]-D- alaninphenylmethylester (1 a-2)
20 mg (0,062 mmol) der Verbindung (2e-2) werden gemäß dem Verfahren in Beispiel 19 mit 0,043 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (1,5 x 21 cm Säule, 2:1 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-2) charakterisiert wird:
NMR δ 0,87 (m, 3H), 1,25 und 1,23-1,38 (überlappend d, J = 6,2, 3H, und m, 8H), 1,40 (d, J = 7,2, 3H), 1,55-1,75 (m, 4H, mit überlappendem H&sub2;O-Signal), 1,75-1,90 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 4,08 (br s, 1H), 4,83 (br s, 1H), 4,58 (scheinbar Quintett, 1H), 4,83 (br d, 1H), 5,05-5,30 (m, 9H), 5,35 (br s, 1H), 5,68 (br s, 1H), 6,30 (br s, 1H), 6,62 (br s, 1H), 7,33 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 923,4455 (M + H berechnet für C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub3;N&sub4;O&sub1;&sub2;: 923,4442).

Beispiel 21:

[S-(R*,R*)]-N-[N²-[[(3-Oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- 1-methyl-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alaninphenylmethylester (1a-3)
27,4 mg (0,085 mmol) der Verbindung (2e-3) werden gemäß dem Verfahren in Beispiel 19 mit 0,06 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (1,5 x 16 cm Säule, 2:1 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-3) identifiziert wird:
NMR δ 0,86 (m, 3H), 1,20-1,35 (m, 1H), 1,39 und 1,35-1,57 (überlappend d, J = 7,1, 3H, und in, 4H), 1,75-1,95 (br s, 2H), 2,10-2,30 (m, 2H), 4,08 (br in, 1H), 4,37 (br s, 1H), 4,57 (scheinbar Quintett, J = 7,3, 1H), 4,70-5,30 (überlappende Multipletts, 10H), 5,93 (br d, 1H), 6,50 (br d, 1H), 6,63 (br d, J = 7, 1H), 7,05 (m, 1H), 7,34 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 945,4281 (M + Na berechnet für C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub2;N&sub4;O&sub1;&sub2;NA: 945,4262).

Beispiel 22:

[R-(R*,S*)]-N-[N²-[[(3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-ainino)- 1-methyl-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alaninphenylinethylester (1a-4)
27,6 mg (0,085 mmol) der Verbindung (2e-4) werden gemäß dem Verfahren in Beispiel 19 mit 0,06 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (1,5 x 16 cm Säule, Gradient von 2:1 bis 1:1 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-4) identifiziert wird:
NMR δ 0,86 (m, 3H), 1,25 und 1,25-1,40 (überlappend d, J = 6,5, 3H, und in, 11H), 1,42 (d, J = 7,0, 3H), 1,53-1,73 (m, 4H, mit überlappendem H&sub2;O- Signal), 1,73-1,95 (br s, 2H), 2,27 (scheinbar t, J = 7,5, 2H), 4,12 (br s, 1H), 4,38 (br s, Feinstruktur, 1H), 4,58 (br s, 1H), 4,81 (br d, 1H), 5,03-5,23 (m, 8H), 5,23-5,48 (m, 3H), 6,41 (br d, 1H), 6,71 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 945,4271 (M + Na berechnet für C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub2;N&sub4;O&sub1;&sub2;NA: 945,4262).

Beispiel 23:

(R)-N-[N²-[[(3-Oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-3- (phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;&supmin;[(phenylmethoxy)- carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninphenylmethylester (1a-5)
99 mg (0,32 mmol) der Verbindung (2e-5) werden gemäß dem Verfahren in Beispiel 19 mit 0,21 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (2 x 21 cm Säule, Gradient 2:1 bis 1:1 Toluol/Ether) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-5) charakterisiert wird:
NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,20-1,38 (m, 8H), 1,39 (d, J = 7,2, 3H), 1,50-1,66 (m, 4H), 1,85 (br s, 2H), 2,21 (scheinbar t, J ≈ 7,6, 2H), 4,09 (br s, 1H), 4,23-4,51 (m, 3H), 4,58 (scheinbar Quintett, J = 7,3, 1H), 4,90 (br s, 1H), 5,05-5,25 (m, 9H), 5,55 (br t, 1H), 6,55 (br d, 1H), 6,90 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 909,4270 (M + H berechnet für C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub1;N&sub4;O&sub1;&sub2;: 909,4285).

Beispiel 24:

[R-(R*,R*)]-N-[N²-[[1-Methyl-3-oxo-2-[[(4- pentylcyclohexyl)-carbonyl]-amino]-3-(phenylmethoxy) propoxy]- carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)- carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninphenylmethylester (1a-6)
33 mg (0,085 mmol) der Verbindung (2e-6) werden gemäß dein Verfahren in Beispiel 19 mit 0,06 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (1,5 x 17 cm Säule, 2:1 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-6) charakterisiert wird:
NMR δ 0,87 (m, 5 H), 1,10 (d, J = 6,6, 3 H), 1,10-1,43 (m, 15 H), 1,43 (d, J = 7,3, 3 H), 1,70-2,20 (m, 7 H), 4,15 (m, 1 H), 4,37 (m, l H), 4,64 (m, 1 H), 4,89 (br d, J = 8,3, 1 H), 5,03-5,30 (m, 9 H), 5,37 (br d, 1 H), 6,43 (br d, 1 H), :7,33 (m, 20 H), 7,34 (br d, 1 H);
MS (HR-FAB) m/z 1013,4903 (M + Na berechnet für C&sub5;&sub6;H&sub7;&sub0;N&sub4;O&sub1;&sub2;NA: 1013,4888).

Beispiel 25:

[R-(R*,R*)]-N-[N²-[[2-[[(4-Butylphenyl)-acetyl]- amino]-1-methyl-3-oxo-3-(phenylmethoxy)-propoxy] carbonyl]-N&sup6;- [(phenylmethoxy)-carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L- lysyl]-D-alaninphenylmethylester (1a-7)
34 mg (0,085 mmol) der Verbindung (2e-7) werden gemäß dein Verfahren in Beispiel 19 mit 0,06 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt. Durch die Reinigung des Rohprodukts (1,5 x 14 cm Säule, 2:1 Hexan/EtOAc) wird ein weißes Wachs erhalten, das als (1a-7) charakterisiert wird:
NMR δ 0,97 (m, 6H), 1,10-1,60 (m, überlappend d, J = 7,31 9H), 1,65-2,03 (m, 4H), 3,45 (m, 2H), 3,92 (scheinbar t, J = 6,5, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,62 (scheinbar Quintett, J = 7,3, 1H), 4,86 (br d, J = 8,0, 1H), 5,05-5,25 (m, 9H), 5,42 (br d, J = 7,5, 1H), 6,33 (br d, 1H), 6,84 (d, J = 8,5, 2H), 7,13 (d, J = 8,5, 2H), 7,33 (m, 20H), 7,89 (br d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 1023,4368 (M + Na berechnet für C&sub5;&sub6;H&sub6;&sub4;N&sub4;O&sub1;&sub2;Na: 1023,4368).

Beispiel 26:

[R-(R*,R*)]-N-[N²-[[1-Ethyl-3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)- carbonyl]-(R)-6-[ (phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninphenylmethylester (1a-8)
99 mg (0,32 mmol) der Verbindung (2e-8) werden gemäß dem Verfahren von Beispiel 19 mit 0,21 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt.

Beispiel 27:

[S-(R*,S*)]-N-[N²-[[1-Ethyl-3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-3-(phenylmethoxy)-propoxy]-carbonyl]-N&sup6;-[(phenylmethoxy)- carbonyl]-(R)-6-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninphenylmethylester (1a-9)
99 mg (0,32 mmol) der Verbindung (2e-9) werden gemäß dem Verfahren von Beispiel 19 mit 0,21 mmol der Verbindung (3b) gekoppelt.

Beispiel 28:

[R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethoxy]-carbonyl ]-L-lysyl]-D- alanin (1a-11)
Einer Lösung von 140 mg (0,15 mmol) der Verbindung (1a-1) in EtOAc/Etoh (5 ml:15 ml) wird über Pd(OH)&sub2; (Pearlman-Katalysator, 20 % auf C, 100 mg) unter Verwendung einer Parr-Vorrichtung bei einem Ausgangsdruck von 490 kPa (70 psi) hydriert. Nach 5,5 h wird durch Filtration und Eindampfen ein farbloses Glas erhalten. Letzteres wird mit Ether zerrieben, und die Seiten des Kolbens werden abgeschabt, wobei ein weißes kristallines Pulver erhalten wird. Die Ether-Lösung wird mit einer Spritze entfernt, und der Feststoff wird mit zwei weiteren Portionen Ether gewaschen, getrocknet und als (1a-11) charakterisiert:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,89 (m, 3 H), 1,22 (d, J = 6,5, 3 H), 1,24-1,39 (m, 6 H), 1,42 (d, J = 7,3, 3 H), 1,45-1,99 (m, 8 H), 2,26 (t, J ≈ 7,5, 2H), 3, 62 (m, 1 H), 4,06 (m, 1 H), 4,41 (m, 1H), 4,89 (br s für OH, NH; ein verborgenes CH-Signal), 5,14 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2671 (M + H berechnet für

Beispiel 29:

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D- alanin (1a-12)
Durch Hydrogenolyse von 37,0 mg (0,04 mmol) der Verbindung (1a-2) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-12) erhalten:
NM:R (CD&sub3;OD) δ 0,90 (m, 3 H), 1,26 (d, J = 6,3, 3 H), 1,2-1,38 (m, 6 H), 1,40 (d, J = 7,2, 3 H), 1,44-1,73 (m, 5 H), 1,73-2,05 (m, 3 H), 2,33 (scheinbar t, J ≈ 7,3, 2 H),=3,92 (m, 1 H), 4,16 (br s, 1 H), 4,38 (m, 1 H), 4,64 (m, 1 H), 5,31 (m, 1 H);
MS (HR-FAB)m/z 519,2671 (M + H berechnet für C&sub2;&sub2;H&sub3;&sub9;N&sub4;O&sub1;&sub0;: 519.2666)

Beispiel 30:

[S-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1- methyl-2-(1-oxoheptyl)-amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D- alanin (1a-13)
Durch Hydrogenolyse von 22,0 mg (0,024 mmol) der Verbindung (1a-3) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-13) erhalten:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,91 (m, 3H), 1,19-1,45 [überlappend d (J = 6,5, bei 1,25 d), m, und d (J = 7,3, bei 1,39 d), 12H], 1,47- 1,72 (m, 5H), 1,72-2,10 (m, 3H), 2,29 (scheinbar t, J = 7,5, 2H), 3,68 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 5,17 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2651 (M + H berechnet für C&sub2;&sub2;H&sub3;&sub9;N&sub4;O&sub1;&sub0;: 519,2666.

Beispiel 31:

[R-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D- alanin (1a-14)
Durch Hydrogenolyse von 36,6 mg (0,04 mmol) der Verbindung (1a-4) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-14) erhalten: NMR (CD&sub3;OD) δ 0,90 (m, 3H), 1,22-1,36 [überlappend d (J = 6,2, bei 1,24 d), und m, 12H], 1,36-2,02 (m, 8H), 2,32 (m, 2H), 3,60-3,80 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 5,30 (br s, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2667 (M + H berechnet für C&sub2;&sub2;H&sub3;&sub9;N&sub4;O&sub1;&sub0;: 519,2666.

Beispiel 32:

(R)-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-2-[(1-oxo- heptyl)-amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1a-15)
Durch Hydrogenolyse von 247 mg (0,27 mmol) der Verbindung (1a-5) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-15) erhalten:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,90 (m, 3H), 1,16-1,46 [überlappend d (J = 7,0, bei 1,40 d), und m, 9H], 1,46-2,05 (m, 8H), 2,25 (m, 2H), 3,69 (br s, 1H), 4,11 (br s, 1H), 4,36 (m, 3H), 4,63 (br s, 1H); MS (HR-FAB) m/z 505,2505 (M + H berechnet für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub7;N&sub4;O&sub1;&sub0;: 505,2509).

Beispiel 33:

[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1-methyl-2-[[(4- pentylcyclohexyl)-carbonyl]-amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D- alanin (1a-16)
Durch Hydrogenolyse von 17 mg (0,017 mmol) der Verbindung (1a-6) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-16) erhalten:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,90 (m, 5H), 1,10-1,75 [m, 19H, mit überlappend 1,23 (d, J = 6,6) und 1,45 (d, J = 7,4)], 1,75-2,05 (m, 8H), 2,24 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,90 (m, 1H, unter OH-Signal), 5,14 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 609,3099 (M + Na berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub4;&sub6;N&sub4;O&sub1;&sub0;NA: 609,3112).

Beispiel 34:

N-[N²-[[2-[[4-Butoxyphenyl)-acetyl]-amino]-2- carboxy-1-methylethoxy]-carbonyl]-(R)-6-carboxy-L-lysyl]-D- alanin (1a-17)
Durch Hydrogenolyse von 33 mg (0,034 mmol) der Verbindung (1a-7) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-17) erhalten:
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,99 (m, 3H), 1,10-2,05 (m, 16H), 3,55 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,96 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,90 (m, 1H, unter OH-Signal), 5,18 (m, 1H), 6,85 (m, J = 8,6, 2H), 7,22 (m, J = 8,6, 2H); MS (HR-FAB) m/z 597,2757 (M + H berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub4;&sub1;N&sub4;O&sub1;&sub1;: 597,2772).

Beispiel 35:

[R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[1-[carboxy-[(1- oxoheptyl)-amino]-methyl-propoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1a-18)
Durch Hydrogenolyse von 247 mg (0,27 mmol) der Verbindung (1a-8) gemäß dem Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-18) erhalten.

Beispiel 36:

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[1-[carboxy-[(1- oxoheptyl)-amino]-methyl]-propoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1a-19)
Durch Hydrogenolyse von 247 mg (0,27 mmol) der Verbindung (1a-9) gemäß dein Verfahren von Beispiel 28 wird (1a-19) erhalten.

Beispiel 37:

N-(1-oxoheptyl)-L-serinmethylester (2j)
L-Serinmethylesterhydrochlorid wird gemäß dein in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren in (2j) übergeführt:
NMR δ 0,89 (t, J = 6,9, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,65 (m, 2H), 2,28 (scheinbar t, J ≈ 7,5, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,96 (m, 2H), 4,69 (m, 1H), 6,80 (br s, 1H); MS (HR-EI) m/z 231,1465 (M berechnet für C&sub1;&sub1;H&sub2;&sub1;NO&sub4;: 231,1459); [α]26D +22±1 (CHCl&sub3;).

Beispiel 38:

(S)-2,2-Dimethyl-3-(1-oxoheptyl)-4-oxazolidin- carbonsäuremethylester (8a)
320 mg (1,38 mmol) der Verbindung (2j) und 40 mg p-TSA werden in 2 ml trockenem Aceton und 2 ml 2,2-Dimethoxypropan gelöst. Die erhaltene Lösung wird über Nacht am Rückfluß erhitzt. Festes K&sub2;CO&sub3; wird zugesetzt, und die flüchtigen Stoffe werden im Vakuum entfernt, wobei ein Rückstand erhalten wird. Flash-Chromatographie (2 x 21 cm Säule, 6:1 Hexan/EtOAc) des Rückstands ergibt (8a) als Öl:
NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,29 (m, 6H), 1,57 (s, 3H), 1,62 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 4,20 (m, 2H), 4=,46 (m, 1H); [α]26D = -47 ± 1 (CHCl&sub3;).

Beispiel 39:

(R)-2,2-Dimethyl-3-(1-oxoheptyl)-4-oxazolidinmethanol
Eine Lösung von 296 mg (1,09 mmol) der Verbindung (8a) in 1 ml trockenem Ether wird mit Lithiumborhydrid (2 M Lösung in THF, 0,55 ml, 1,09 mval) unter einer Argonatmosphäre behandelt. Die Mischung wird 3 h lang am Rückfluß und 18 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Die erhaltene Mischung wird mit Ether verdünnt und mit Methanol abgeschreckt. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, und der Rückstand wird in EtOAc/H&sub2;O aufgenommen. Durch Aufarbeiten wird der rohe Alkohol vorgesehen, der durch Chromatographie (2:1 Hexan/EtOAc) gereinigt wird:
NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,54 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,35 (m, 2H), 3,30-4,40 (komplexes in, 6H); MS (HR-EI) m/z 243,1837 (M berechnet für C&sub1;&sub3;H&sub2;&sub5;NO&sub3;: 243,1840); [α]26D -5±1 (CHCl&sub3;).

Beispiel 40:

(S)-2,2-Dimethyl-3-(1-oxoheptyl)-4-oxazolidincarboxaldehyd (9a)
Eine Lösung von 105 ul (1,23 mmol) oxalylchlorid in 2,75 ml CH&sub2;Cl&sub2; wird auf -60ºC gekühlt. Eine Lösung von 192 µl DMSO in 0,55 ml CH&sub2;Cl&sub2; wird während eines Zeitraums von 5 min zugesetzt und die erhaltene milchige Mischung 15 min lang bei -60ºC gerührt. 133 mg (0,55 mmol) des Alkohols von Beispiel 39 in 0,55 ml CH&sub2;Cl&sub2; werden der Mischung während 5 min zugesetzt. Das Bad wird auf -20ºC erwärmen gelassen (20 min) und die klare Lösung 20 min lang bei -20ºC gerührt. 0,77 ml Triethylamin und 3,4 ml H&sub2;O werden zugesetzt, und die Mischung wird 5 min lang bei Umgebungstemperatur gerührt. Durch Aufarbeiten mit CH&sub2;Cl&sub2; wird ein rohes Öl erhalten, das durch Chromatographie (1,5 x 20 cm, 3:1 gemeinsam) gereinigt wird, wobei (9a) erhalten wird:
NMR δ 8 0,85 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,60 (s, 3H), 1,60-1.70 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2,00-2,40 (m, 2H), 4,00-4,30 (m, 3H), 9,65 (d, J≈1,1H).

Beispiel 41:

(4S)-α-Ethyl-2,2-dimethyl-3-(1-Oxoheptyl)-4-oxazolidinmethanol (10a)
Eine Lösung von 108 mg (0,44 mmol) der Verbindung (9a) in 1 ml Ether wird einer kalten (5ºC) Lösung von E:tmgbr (3 M in Ether, 0,36 ml) tropfenweise zugesetzt. Das kalte Bad wird entfernt, ein Jodkristall der Mischung zugesetzt und das Rühren 1,5 h lang bei Raumtemperatur fortgesetzt. Die erhaltene Mischung wird mit EtOAc verdünnt und mit gesättigter wässeriger NH&sub4;Cl-Lösung gewaschen. Die wässerige Phase wird reextrahiert, die kombinierte organische Lösung getrocknet und eingedampft, wobei die rohe Verbindung (10a) erhalten wird:
NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,05 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,45 (m, 2H), 1;57 (s, 3H), 1,50-l,75 (m, 5H), 2,10-2,60 (m, 2H), 3,50-4,50 (m, 4H); MS (EI) m/z 271 (M).

Beispiel 42:

R-(R*,S*)- und S-(R*,R* )-N-[2-Hydroxy-1-(hydroxymethyl)-butylheptanamid
107 mg (0,39 mmol) rohe Verbindung (loa) werden in 0,38 ml kalter TFA, enthaltend H&sub2;O (≈ 1 %), gelöst, und die Lösung wird 45 min lang bei 0ºC gerührt. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, der Rückstand wird in EtOAc aufgenommen und mit gesättigtem NaHCO&sub3; und Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocken und Entfernen des Lösungsmittels wird (11a) (2:1 Mischung von Diastereomeren) durch Chromatographie (1,5 x 18 cm, 2 % MeOH in CH&sub2;Cl&sub2;) isoliert:
NMR 0,85-1,05 (m, 6H), 1,30 (m, 6H), 2 ,23 (m, 2H), 3,65-4,05 (m, 4H), 6,20 und 6,40 (zwei breite d, 2:1 Verhältnis, jeweils 1H); MS (HR-EI) m/z 231,1887 (M berechnet für C&sub1;&sub2;H&sub2;&sub5;NO&sub3;: 231,1940).

Beispiel 43:

[S-(R*,R* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-diphenylsilyl]-oxy]-methyl]-2-hydroxybutyl]-heptanamid (10c)
Eine Mischung von 1,0 mmol der Verbindung (11a), 1,2 mmol tert.Butyldiphenylsilylchlorid, 1,2 mmol TEA und 0,04 mmol DMAP in 1,5 ml CH&sub2;Cl&sub2; wird 20 h lang bei Raumtemperatur gemäß S.K. Chaudhary und O. Hernandez (Tetrahedron Lett., 1979, 99) gerührt. Die erhaltene Mischung wird zwischen CH&sub2;Cl&sub2; und H&sub2;O verteilt. Die Schichten werden getrennt, die organische Phase wird mit gesättigter NH&sub4;Cl-Lösung gewaschen und getrocknet. Durch die Entfernung des Lösungsmittels wird eine Mischung erhalten, die durch Chromatographie gereinigt wird. Das weniger polare Produkt wird als (10c) identifiziert.

Beispiel 44:

[R-(R*,S* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-diphenylsilyl]-oxy]-methyl]-2-hydroxybutyl)-heptanamid (10d)
Das polarere Isomer, das in Beispiel 43 isoliert wurde, wird als (10d) charakterisiert.

Beispiel 45:

[S-(R*,R* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-diphenylsilyl]-oxy]-methyl]-2-(phenylmethoxy) --butyl]-heptanamid (12c)
Eine Lösung von 1 mmol der Verbindung (loc) in 0,60 ml DMF und 0,96 ml (8 mmol) BnBr wird mit 37 mg (0,1 mmol) n-Bu&sub4;N&spplus;I&supmin; behandelt. Eine Dispersion von NaH (60 % in Öl, 1,3 mval) wird portionsweise der Lösung während eines Zeitraums von 1 h zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Durch Ether-Aufarbeitung wird ein rohes Öl vorgesehen, das durch Chromatographie gereinigt wird. Das Hauptprodukt wird als (12c) charakterisiert.

Beispiel 46:

[R-(R*,S* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-diphenylsilyl]-oxy]-methyl]-2-(phenylmethoxy)-butyl]-heptanamid (12d)
Die Verbindung (12d) wird unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 45 aus (10d) hergestellt.

Beispiel 47:

[S-(R*,R*)]-N-[1-(Hydroxymethyl)-2-(phenylmethoxy)- butyl]-heptanamid (13c)
1 mmol der Verbindung (12c) wird in 1,1 ml THF gelöst und mit n-Bu&sub4;N&spplus;F&supmin;-Lösung (In in THF, 3,0 ml) (gemäß E.J. Corey und A. Venkateswarlu, J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 6190) behandelt. Nach 40 min bei Raumtemperatur wird die Reaktion mit Eis abgeschreckt und die Mischung zwischen Ether und Wasser verteilt. Die wässerige Schicht wird mit Ether reextrahiert, und die kombinierten organischen Schichten werden mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet, und das Lösungsmittel wird entfernt, wobei die Verbindung (13c) erhalten wird, die durch Chromatographie gereinigt wird.

Beispiel 48:

[R-(R*,S*)]-N-[1-(Hydroxymethyl)-2-(phenylmethoxy)- butyl]-heptanamid (13d)
Die Verbindung (13d) wird gemäß dein in Beispiel 47 beschriebenen Verfahren aus (12d) hergestellt.

Beispiel 49:

N-(1-Oxoheptyl)-3-(phenylmethoxy)-threo-D-norvalin (14c)
1 mmol des Alkohols (13c) in 4 ml DMF wird mit 3,5 mval Pyridiniumdichromat gemäß dem Verfahren von Corey und Schmidt, Tetrahedron Lett., 1979, 399, behandelt. Nach 18 h wird die Mischung über Eis gegossen. Durch Ether-Aufarbeitung wird die Verbindung (14c) erhalten, die durch Chromatographie gereinigt wird.

Beispiel 50:

N-(1-Oxoheptyl)-3-(phenylmethoxy)-erythro-D- norvalin (14d)
Die Verbindung (14d) wird gemäß dem Verfahren in Beispiel 49 aus (13d) hergestellt.

Beispiel 51:

3-Hydroxy-N-(1-Oxoheptyl) -threo-D-norvalin (2c-8)
Eine Lösung von (14c) in EtOAc/ETOH wird gemäß dein Verfahren in Beispiel 28 hydriert. Das Rohprodukt wird als (2c-8) identifiziert und in Beispiel 15 verwendet.

Beispiel 52:

3-Hydroxy-N-(1-Oxoheptyl)-erythro-D-norvalin (2c-9)
Die Verbindung (2c-9) wird gemäß dein Verfahren in Beispiel 51 aus (14d) hergestellt. Das Rohprodukt wird in Beispiel 16 verwendet.

Beispiel 53:

N²-(1-Oxoheptyl)-D-asparagin (22a)
4,5 g (29,9 mmol) D-Asparagin (21a) wird gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 in (22a) übergeführt. Eine Mischung von Wasser und THF wird als Lösungsmittel verwendet und 2n wässeriges NaOH durch eine Mischung von Triethylamin und 0,5n NaHCO&sub3; ersetzt. Der rohe Feststoff wird durch Umkristallisationa aus Methylalkohol-Ether gereinigt.
NMR (CD&sub3;OD) δ 0,90 (t, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,23 (t, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,71 (dd, 1H); MS (LR-CI) m/z 245 (M + H berechnet für C&sub1;&sub1;H&sub2;&sub1;N&sub2;O&sub4;: 245).

Beispiel 54:

3-Amino-N-(1-oxoheptyl)-D-alanin (29-1)
2,21 g (9,0 mmol) der Verbindung (22a) werden einer Lösung von 5,83 g (13,57 mmol) Bis-(trifluoracetoxy)-jodbenzol in 51 ml N,N-Dimethylformamid und 41 ml Wasser zugesetzt. Die Mischung wird 15 min lang gerührt und mit 1,46 ml (18,09 mmol) Pyridin behandelt. Die erhaltene Lösung wird 18 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, und der Rückstand wird mit 90 ml Wasser verdünnt. Die Mischung wird 3 x mit je 50 ml Ether gewaschen. Die wässerige Schicht wird abgetrennt und eingedampft. Durch Zerreiben der erhaltenen Flüssigkeit mit Ether wird ein weißer Feststoff erhalten, der als (29-1) charakterisiert wird:
NMR (CD&sub3;OH) δ 0,61 (t, 3H), 1,35 (m, 2H), 2,05 (t, 2H), 3,0-3,2 (m, 2H), 4,40 (m, 1H): MS (HR- FAB) m/z 217,1555 (M + H berechnet für C&sub1;&sub0;H&sub2;&sub1;NO&sub3;: 217,1552).

Beispiel 55:

3-Amino-N-(1-Oxoheptyl)-D-alaninphenylmethylestermonohydrochlorid (2h-1)
3,05 ml (42,87 ml) Acetylchlorid werden während eines Zeitraums von 10 min einer eiskalten Lösung von 10 ml (96,63 mmol) Benzylalkohol tropfenweise zugesetzt. Die erhaltene Lösung wird weitere 30 min lang gerührt. Das Eisbad wird dann entfernt, und 1,32 g (6,12 mmol) der Verbindung (29-1) werden zugesetzt. Die Lösung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, und die flüchtigen Stoffe werden durch Kugelrohr-Destillation entfernt. Der Rückstand wird mit Ether zerrieben und dann aus Ethylalkohl umkristallisiert, wobei einer weißer Feststoff erhalten wird, der als (2h-1) identifiziert wird:
NMR (CDCl&sub3;) δ 0,75 (t, 3H), 1,45 (m, 2H), 2,20 (t, 2H), 3,40 (m, 2H), 4,80 (br s, 1H), 5,10 (s, 2H), 7,62 (br s, 1H); MS (HR-FAB) m/z 307,2017 (M + H berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub7;NO&sub3;: 307,2022).

Beispiel 56:

[S-(R*,R*)]-N-[2-Hydroxy-1-(hydroxymethyl)-propyl]- heptanamid (11c)
Einer Lösung von 1,0 g (3,11 mmol) der Verbindung (2e-2) in Ether wird unter Erwärmen einer Lösung von 1,60 ml (3,2 mmol) Lithiumborhydrid in Tetrahydrofuran tropfenweise bei Raumtemperatur zugesetzt. Die Reaktionsmischung wird 3 h lang am Rückfluß gehalten, mit Ether verdünnt und langsam mit Methanol behandelt, bis das Schäumen aufhört. Die flüchtigen Stoffe werden entfernt, wobei ein Rückstand erhalten wird, der zwischen Wasser und Ethylacetat verteilt wird. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und filtriert. Das Filtrat wird zu einem verbleibenden Öl eingedampft, das mittels Chromatographie durch Elution mit 3:1 Ethylacetat- Hexanen gereinigt wird, wobei 560 mg des gewünschten Produkts als Öl erhalten werden.
NMR δ 1,20 (d, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,26 (t, 2H), 4,19 (q, 1H), 6,23 (br d, 1H), MS (CI) m/z 218 (M + H berechnet für C&sub1;&sub1;H&sub2;&sub4;NO&sub3;: 218).

Beispiel 57:

[S-(R*,R* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]-oxy]-methyl]-2-hydroxypropyl]-heptanamid (10c)
Eine Mischung von 1,945 g der Verbindung (11c), 1,4165 g tert.Butyldimethylsilylchlorid, 951 mg (1,31 ml) Triethylamin und 42,76 mg 4-Dimethylaminopyridin in 13 ml Methylenchlorid wird unter Argon 18 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit Methylenchlorid verdünnt, und Wasser wird zugesetzt. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei 3,25 g eines verbleibenden Öls erhalten werden, das mittels Chromatographie durch Elution mit 1:5 Ethylacetat-Hexan gereinigt wird, wobei 2,30 g des gewünschten Produkts als Öl erhalten werden.
NMR δ 0,08 (d, 6H), 0,89 (t, 3H), 0,90 (s, 9H), 1,16 (d, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,24 (t, 2H), 3,47 (s, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,85 (s, 2H), 4,28 (q, 1H), 6,13 (brd, 1H); MS (FAB) m/z = 332 (M + H berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub3;&sub8;NO&sub3;Si: 332).

Beispiel 58:

(S)-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]silyl]-oxy]-methyl]-2-oxopropyl]-heptanamid (27c)
Eine Mischung von 2,30 g (6,94 mmol) der Verbindung (10c) und 10,62 g (28,2 mmol) Pyridiniumdichromat in 20 ml N,N-Di- methylformamid wird 18 h lang unter Argon gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit 100 ml Wasser verdünnt und 3 x mit je 40 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei 1,87 g einer verbleibenden braunen Flüssigkeit erhalten werden. Die Flüssigkeit wird durch Chromatographie unter Verwendung von 1:6 Ethylacetat/Hexan gereinigt, wobei 997 mg des gewünschten Produkts als Öl erhalten werden.
NMR δ 0,83 (s, 9H), 1,61 (m, 2H), 2,22 (t, 2H), 2,23 (s, 3H), 3,82 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 4,57 (m, 1H), 6,42 (brd, 1H); MS (FAB) m/z 330 (M + H berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub3;&sub6;NO&sub3;Si: 330).

Beispiel 59:

[R-(R*,S* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]-oxy]-methyl]-2-[(phenylmethyl)-amino]-propyl]-heptanamid (28c)
Eine Mischung von 960 mg (2,91 mmol) der Verbindung (27c) in 5 ml Methylalkohol, enthaltend Molekularsiebe, wird 30 min lang bei Raumtemperatur gerührt. Unter Rühren werden 365 mg Natriumcyanoborhydrid zugesetzt, und die Reaktionsmischung wird 18 h lang unter Argon gerührt. Die Reaktionsmischung wird filtriert und zu einem Rückstand eingedampft, der zwischen Ethylacetat und wässerigem Natriumbicarbonat verteilt wird. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei 1,224 g einer verbleibenden gelben Flüssigkeit erhalten werden. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Verwendung von 2:5 Ethylacetat/Hexan gereinigt, um 561,2 mg des gewünschten Produkts (28c) als Öl zu ergeben.
NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,09 (d, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,20 (t, 2H), 3,08 (m, 1H), 6,22 (brd, 1H), 7,32 (m, 5H); MS (HR-FAB) m/z 421,3245 (M + H berechnet für C&sub2;&sub4;H&sub4;&sub4;N&sub2;O&sub2;Si: 421,3250).

Beispiel 60:

[R-(R*,R* )]-N-[1-[[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]-oxy]-methyl]-2-[(phenylmethyl)-amino]-propyl]-heptanamid (28d)
Durch weitere Elution der Chromatographiesäule in Beispiel 59 werden 239,4 g des gewünschten Produkts (28d) als Öl erhalten.
NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,18 (d, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,18 (t, 2H), 2,80 (m, 1H), 6,47 (brd, 1H), 7,31 (m, 5H); MS (HR-FAB) m/z 421,3253 (M + H berechnet für C&sub2;&sub4;H&sub4;&sub4;N&sub2;O&sub2;Si: 421,3250).

Beispiel 61:

[R-(R*,S*)]-N-[2-Amino-1-[[[(1,1-dimethylethyl)- dimethylsilyl]-oxy]-methyl]-propyl]-heptanamid (25c)
Eine Mischung von 208,6 g (0,50 mmol) der Verbindung (28c) und 104 mg Pd(OH)&sub2; in 15 ml Methylalkohol wird in einer Parr- Vorrichtung unter Wasserstoffdruck 18 h lang geschüttelt. Die Reaktionsmischung wird durch Diatomeenerde filtriert und das Filtrat konzentriert, wobei 169 mg des gewünschten Produkts (25c) als Öl erhalten werden.
NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,05 (d, 3H), 1,60 (m, 2H), 2,10 (t, 2H), 3,31 (m, 1H), 6,47 (br d, 1H).

Beispiel 62:

[R-(R*,R*)]-N-[2-Amino-1-[[[(1,1-dimethylethyl)- dimethylsilyl]-oxy]-methyl]-propyl]-heptanamid (25d)
Die Verbindung (25d) wird gemäß dem zur Herstellung von (25c) verwendeten Verfahren aus (28d) hergestellt.

Beispiel 63:

[S-(R*,S* )]-[3-[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]-oxy]-1-methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-propyl]-phenylmethylestercarbaminsäure (26c)
Einer Lösung von 164 mg (0,496 mmol) der Verbindung (25c) in 1 ml Methylenchlorid bei 0ºC unter Argon werden 201 mg (276,5 pl, 1,98 mmol) Triethylamin zugesetzt, gefolgt vom tropfenweisen Zusatz von 169 mg (142 pl, 0,992 mmol) Benzylchloroformiat. Die Reaktionsmischung wird auf Raumtemperatur erwärmen gelassen, dann 18 h lang gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit Methylenchlorid verdünnt, und Wasser wird zugesetzt. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und konzentriert, wobei 230 mg eines verbleibenden blaßgelben Öls erhalten werden. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Verwendung von 1:5 Ethylacetat/Hexan gereinigt, wobei 92 mg des gewünschten Produkts (26c) erhalten werden.
NMR δ 0,90 (s, 9H), 1,21 (d, 3H), 1,56 (m, 2H), 2,09 (t, 2H), 3,69 (2dd, 2H), 3,84 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 5,07 (q, 2H), 5,17 (d, 1H), 6,15 (br d, 1H), 7,34 (m, 5H); MS (FAB) m/z 465 (M + H berechnet für C&sub2;&sub5;H4&sub5;N&sub2;O&sub4;Si: 465).

Beispiel 64:

[R-(R*,R* )]-[3-[[(1,1-Dimethylethyl)-dimethylsilyl]-oxy]-1-methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-propyl]-phenylmethylestercarbaminsäure (26d)
Die Verbindung (25d) wird gemäß dem zur Herstellung von (26c) verwendeten Verfahren geschützt, wobei (26d) erhalten wird.

Beispiel 65:

[S-(R*,S*)]-[3-Hydroxy-1-methyl-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-propyl]-carbaminsäurephenylmethylester (29c)
Die Verbindung (26c) wird gemäß dem Verfahren in Beispiel 47 desilyliert, wobei (29c) erhalten wird.

Beispiel 66:

[R-(R*,R*)]-[3-Hydroxy-1-methyl-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-propyl]-carbaminsäurephenylmethylester (29d) Die Verbindung (26d) wird wie in Beispiel 65 desilyliert, wobei (29d) erhalten wird.

Beispiel 67:

[S-(R*,S* )]-2-[(1-Oxoheptyl)-amino)-3-[[(phenylmethoxy)-carbonyl]-amino]-butansäure (30c)
Durch 0xidation der Verbindung (29c) gemäß dem Verfahren von Beispiel 49 wird (30c) erhalten.

Beispiel 68:

[R-(R*,R* )]-2-[(1-Oxoheptyl)-amino]-3-[[(phenylmethoxy)-carbonyl]-amino]-butansäure (30d)
Die Verbindung (29d) wird gemäß Beispiel 67 in (30d) übergeführt.

Beispiel 69:

[R-(R*,S* )]-3-Amino-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-butansäure (29-2)
Durch Hydrogenolyse von (3º0) gemäß Beispiel 28 wird die Verbindung (29-2) erhalten.

Beispiel 70:

[R-(R*,R* )]-3-Amino-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-butansäure (29-3)
Die Verbindung (30d) wird gemäß Beispiel 69 in (29-3) übergeführt.

Beispiel 71:

[R-(R*,S* )]-3-Amino-2-[(1-oxoheptyl)-amlno]-butansäuremethylester (2h-2)
Durch Veresterung von (29-2) gemäß Beispiel 55 unter Verwendung von MeOH als Alkohol wird (2h-2) als sein Hydrochloridalz vorgesehen.

Beispiel 72:

[R-(R*,R* )]-3-Amino-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-butansäuremethylester (2h-3)
Die Verbindung (29-3) wird wie in Beispiel 71 verestert, wobei (2h-3) als sein Hydrochloridsalz erhalten wird.

Beispiel 73:

(S)-5-Oxo-3-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-4- oxazolidinpropansäure (43c)
Ene Mischung von 100 g (355 mmol) N-Benzyloxycarbonyl-L-Glu (42c) und 213 g Paraformaldeyhd wird in 1 l Toluol auf Rückfluß erhitzt. Nach 4 h wird die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt und 5 x mit je 150 ml gesättigter Natriumbicarbonat- Lösung extrahiert. Die wässerigen Schichten werden kombiniert, dann mit 400 ml Ethylacetat verteilt und mit festem Natriumbisulfat angesäuert. Die Schichten werden getrennt, und die organische Schicht wird über Magnesiumsulfat getrocknet, dann konzentriert, wobei 89,72 g der rohen Säire als viskoses gelbes Öl erhalten werden:
NMR δ 7,38 (m, 5H), 5,6 (brs, 1H), 5,21 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,41 (t, J = 6 Hz, 1H), 2,6-2,1 (m, 4H).

Beispiel 74:

(S)-5-Oxo-3-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-4oxazolidinpropanal (44c)
Eine Lösung von 27 g (92,7 mmol) der rohen Säure (43c) in 200 ml THF wird auf 0ºC gekühlt, und 13 ml (10,7 g, 141 mmol) Boran-Methylsulfid-Komplex werden über einen Zusatztrichter tropfenweise zugesetzt. Die Reaktionsmischung wird allmählich auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und 12 h lang gerührt. Die erhaltene Mischung wird im Vakuum konzentriert, wobei ein weißes glasartiges Material erhalten wird, das in 500 ml Methylenchlorid aufgenommen und mit 61 g (281 mmol) Pyridiniumchlorochromat bei 0ºC in Anwesenheit von 3A Molekularsieben behandelt wird. Die Mischung wird auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und 3 h lang gerührt. Die Mischung wird durch Diatomeenerde mit 200 ml Ether filtriert, dann konzentriert. Der Rückstand wird in Ether aufgenommen und erneut durch Diatomeenerde mit Ether filtriert, dann konzentriert, wobei 13,22 g des rohen Aldehyds als hellgrünes Öl erhalten werden:
NMR δ 9,80 (br s, 1H), 7,40 (m, 5H), 5,55 (br s, 1H), 5,20 (m, 3H), 4,38 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 2,6-2,1 (m, 4H).

Beispiel 75:

4-[4-[[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-amino]-5- methoxy-5-oxo-3-pentenyl]-5-oxo-3-oxazolidincarbonsäurephenylmethylester (46c)
Einer Lösung von 15,1 g Phosphonat (45) in 300 ml Methylenchlorid bei -78ºC werden tropfenweise 102 ml 0,5 M Kaliumhexamethyldisilylamid-THF-Lösung zugesetzt. Die Reaktionsmischung wird 10 min lang gerührt, und 18 g roher Aldehyd in 30 ml Methylenchlorid werden zur Enolat-Lösung zugesetzt. Die Mischung wird 3 h lang unter Erwärmen auf Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit 100 ml Wasser abgeschreckt und 2 x mit je 300 ml Ether extrahiert. Die organischen Extrakte werden kombiniert und mit 200 ml Wasser und 50 ml Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Magnesiumsulfat wird das Volumen verringert. Der Rückstand wird unter Verwendung eines variablen Gradienten von Hexan/Ethylacetat chromatographiert. 2,4 g des E-Isomers eluieren zuerst, gefolgt von 15,4 g des gewünschten Z-Isomers (46c).
NMR δ 1,45 (s, 9H); 2,00-2,40(M, 4H); 3,74(s, 3H); 4,36(b t, 1H); 5,20(M, 4H); 5,54(b s) 1H); 6,43(b t, 1H); 7,37(m, 5H). IR(rein)cm&supmin;¹: 3350(s), 1800(s), 1740(s); MS(CI): m/z 466(M+NH&sub4;); 410(M-C&sub4;H&sub8;)&spplus;; 349 (M-C&sub4;H&sub8;CO&sub2;+H)&spplus;; [α]26D +68±1.

Beispiel 76:

(Z)-N-[5,6-Didehydro-N-[(1-dimethylethoxy)carbonyl]-6-(methoxycarbonyl)-N²-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L- lysyl]-D-alaninmethylester (47c)
Eine Mischung von 3,3 g D-Alaninmethylester und 7,1 g der Verbindung (46c) wird 10 min lang auf 140ºC erhitzt, dann werden weitere 1,6 g D-Alaninmethylester zugesetzt. Das Erhitzen wird weitere 10 min lang auf 140ºC fortgesetzt. Nach dem Abkühlen auf Umgebungstemperatur wird das Rohprodukt auf Silikagel unter Verwendung eines variablen Gradienten von Hexan/Ethylacetat chromatographiert. 6,7 g gereinigtes Produkt werden gewonnen. Das Material wird aus Hexanen-Ether umkristallisiert, wobei 5,8 g des gewünschten Produkts (47c) als Feststoff erhalten werden.
NMR δ 1,43(s,d, 12H); 1,80-2,10(m, 2H); 2,23-2,36(m, 2H); 3,72(s, 3H); 3,76(s, 3H); 4,15-4,27(m, 1H); 4;50-4,60(m, 1H); 5,11(b s, 2H); 5,76(b s, 1H); 6;38(b s, 1H); 6,47(b t, 1H); 6,81(b s, 1H); 7,34(m, 5H); ¹³C-NMR: 17,82(-CH H&sub3;; 24,33(- H&sub2;-CH&sub2;); 28,02(C( H&sub3;)&sub3;); 30,99(- H&sub2;CH=C); 47,94(- HCH&sub3;); 52,17 (-O H&sub3;); 52,29(-O H&sub3;); 54,28(OC HNH); 66,93(- H&sub2;Ar); 80,43 (-O (CH3)&sub3;); 126,57 (-HN =C); 127,86 (Phenylring-Kohlenstoff); 127,94 (Phenylring-Kohlenstoff); 128,12 (Phenylring-Kohlenstoff); 128,28 (Phenylring-Kohlenstoff); 135,98 (Phenylring- Kohlenstoff); 153,45 (Phenylring-Kohlenstoff); 156,21 (O ONH-);
165,13(- ONH-); 171,04(- O&sub2;-); 172,99(- O&sub2;-). IR(KBr, cm&supmin;¹) 3300(s); 1720(s); 1690(s); 1650(s); 1510(s); MS(CI) m/z 522(MH)&spplus;; 466(MH-C&sub4;H&sub8;) +; 422(MH-C&sub4;H&sub8;CO&sub2;)&spplus;. MS(FAB) m/z 544(M+Na)&spplus;; 522(MH)&spplus;; 466(MH-C&sub4;H&sub8;)&spplus;;
Analyse:
Berechnet: C 57,57; H 6,76; N 8,06
Gefunden: C 56,98; H 6,66; N 7,88.
[α]26D -7±1; Fp. 120-121ºC.

Beispiel 77:

N-[N&sup6;-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-(R)-6- (methoxycarbonyl)-N²-[(phenylmethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alaninmethylester (40c)
Eine Lösung von 8,5 g der Verbindung (47c) in 25 ml Essigsäure und 250 ml THF wird bei 366 kPa (48 psi) Wasserstoff über 0,5 g (Bicyclo(2.2.1.)hepta-2,5-dien[25,35]bis-(diphenylphosphino)-butan)-rhodium(I)-perchlorat 18 h lang hydriert. Die Reaktionsmischung wird filtriert und zu einem Rückstand eingedampft. Der Rückstand wird unter Verwendung eines variablen Gradienten von Hexan-Ethylacetat chromatographiert, wobei 7,9 g reduziertes Produkt als Rückstand erhalten werden. Durch mehrfache Kristallisationen werden 2,6 g diastereomer reine Verbindung (40c) erhalten.
NMR(CDCl&sub3;) δ 1,40(d,J = 6Hz, 3H); 1,43(s, 9H); 1,60-1,97(m, 6H); 3,73(s, 3H); 3,74(s, 3H); 4,12-4,37(m, 2H); 4,52-4,61(m, 1H); 5,12(bs, 3H); 5,44-5,55(b s, 1H); 6,73(b s, 1H); 7,36(b s, 5H); ¹³C-NMR: δ 18,02(CH- H&sub3;); 21,12(CH&sub2;- H&sub2;-CH&sub2;); 28,23(-OC( H&sub3;)&sub3;); 31,87(- H&sub2;-CH&sub2;-); 32,29(-CH&sub2; H&sub2;&submin;); 47,99(- HCH&sub3;) 52,23(-O H&sub3;); 52,38(-O H&sub3;); 52,75(OC HN); 54,41(OC HN); 67,01(-O H&sub2;AR); 79,97 (-O (CH&sub3;)&sub3;); 127,99 (Phenylring-Kohlenstoff); 128,09 (Phenylring-Kohlenstoff); 128,44 (Ar H); 136,13(Ar C); 155,48(O ONH); 156,23(O ONH); 171,10(- ONH-); 173,03(- O&sub2;-2X);
IR(KBr) (cm¹) 3340(s); 1760(s); 1740(s); 1680(s); 1660(s); 1660(s); 1520(s); MS(FAB) m/z 546(M+Na)&spplus;; 524(MH)&spplus;; 424(MH-C&sub4;H&sub8;CO&sub2;)&spplus;;
Analyse:
Berechnet: C 57,35; H 7,12; N 8,03
Gefunden: C 57,23; H 7,27; N 8,03.
Drehung [α]25D -9±1; Fp. 120-121ºC.

Beispiel 78:

N-[N&sup6;-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-(R)-6- (methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alaninmethylester (3c)
Eine Lösung von 248 mg (0,47 mmol) der Verbindung (40c) in 8 ml Methanol wird über Pd(OH)2 gemäß Beispiel 28 hydriert. Nach 3 h wird durch Filtration und Eindampfen ein farbloses Glas erhalten. NMR (CDCl&sub3;) δ 3,50 (m, 1H), 3,80 (s, 6H), 4,30 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,85 (br s, 1H).

Beispiel 79:

N-[N&sup6;-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl]-6-(methoxycarbonyl)-N²-[[[3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-3-(phenylmethoxy)- propyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1b-1)
Eine Lösung von 94,5 mg (0,24 mmol) der Verbindung (30) in trockenem THF (3A-Sieb, 0,8 ml) wird unter Argon einer Mischung von 39,34 mg (0,24 mmol) über P&sub2;O&sub5; getrocknetem 1,1,-Carbonyldiimidazol in 1,8 ml trockenem THF tropfenweise zugesetzt. Die
Mischung wird 2 h lang gerührt, und 83,3 mg (0,24 mmol) der Verbindung (2h-1) und 34 µl (0,24 mmol) THF werden zugesetzt. Die erhaltene Mischung wird 18 h lang bei Umgebungstemperatur gerührt. Die Mischung wird mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Koch- Salzlösung gewaschen, getrocknet, filtriert und zu einem Rückstand eingedampft. Der Rückstand wird mittels Chromatographie durch Elution mit 1 bis 2 % Methanol in Chloroform gereinigt, wobei 109,3 mg der Verbindung (1b-1) als grauweißer Feststoff erhalten werden.
NMR δ 0,88(t, 3H), 2,22(t, 2H), 3,59(m, 2H), 3,70(S, 3H), 3,73(S, 3H), 4,26(m, 1H), 4,52(t, 1H), 4,63(m, 1H), 5,32(d, 2H), 5,63(d, 1H), 7,07(d, 1H), 7,20 (d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 722,3980 (M + H berechnet für C&sub3;&sub5;H&sub5;&sub6;N&sub5;O&sub1;&sub1;: 722,3976).

Beispiel 80:

N-[6-(Methoxycarbonyl]-N²-[[[3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-3-(phenylmethoxy)-propyl]-amino]-carbonyl]-L- lysyl]-D-alaninmethylester (1b-2)
Zu 16 mg der Verbindung (1b-1) unter Argon bei 0ºC werden 100 µl TFA zugesetzt, gefolgt von 1 h Rühren. Die flüchtigen Stoffe werden abgedampft, wobei 11,1 mg der Verbindung (1b-2) erhalten werden.
NMR(CD&sub3;OD) δ 9,80(t, 3H), 1,30(d, 3H), 2,15(t, 2H), 3p32(m, h), 3,56(m, 1H), 3,60(s, 3H), 3,73(s, 3H), 3,95(m, 1H), 4,15(m, 1H), 4,30(q, 1H), 4,38(m, 1H), 5,07(d, 2H), 7,28(m, 5H); MS(HR-FAB) m/z 622,3435 (M+H, berechnet für C&sub3;&sub0;H&sub4;&sub8;N&sub5;O&sub9;: 622,3452).

Beispiel 81:

N-[N²-[[[2-Carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]- amino]-carbonyl]-N&sup6;-[(1,1-dimethylethoxy)-carbonyl]-6-(methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alaninmethylester (1b-3)
Zu 70 mg der Verbindung (1b-1) in 7 ml Methylalkohol werden 31 mg Pd(OH)&sub2;-auf-Kohle zugesetzt, und die Reaktionsmischung wird 4 h lang gemäß Beispiel 28 hydriert. Die Reaktionsmischung wird durch ein Diatomeenerdekissen filtriert. Das Filtrat wird konzentriert, wobei 53,8 mg der Verbindung (1b-3) als Glas erhalten werden.
NMR (CD&sub3;OD) δ
O,80(t, 3H), 2,15(t, 2H), 3,32(m, 1H), 3,56(m, 1H), 3,60(s, 6H), 3,95(m, 1H), 4,15(m, 1H), 4,30(q, 1H), 4,38(m, 1H); MS(HR-FAB) m/z 632,3493 (M+H, berechnet für C&sub2;&sub8;H&sub5;&sub0;N&sub5;O&sub1;&sub1;: 632,3506).

Beispiel 82:

N-[N²-[[[2-Carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]- amino]-carbonyl]-6-(methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alaninmethylester (1b-4)
Zu 40,2 mg der Verbindung (1b-3) unter Argon bei 0ºC werden 300 µl TFA gemäß dem Verfahren von Beispiel 80 zugesetzt. Die flüchtigen Stoffe werden abgedampft, und das Konzentrat wird über Nacht getrocknet, wobei 47 mg der Verbindung (1b-4) erhalten werden.
NMR(CD&sub3;OD) δ 0,80(t, 3H), 1,30(d, 3H), 2,15(t, 2H), 3,28(m, 1H), 3,56(m, 1H), 3,62(S, 3H), 3,75(s, 3H), 3,95(m, 1H), 4,13(m, 1H), 4,31(q, 1H), 4,43(m, 1H); MS(HR-FAB) m/z 532,2972 (M + H berechnet für C&sub2;&sub3;H&sub4;&sub2;N&sub5;O&sub9;: 532,2983).

Beispiel 83:

N-[6-Carboxy-N²-[[[carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- ethyl]-amino]-carbonyl]-N&sup6;-[(1,1-dimethylethoxy)-carbonyl]-L- lysyl]-D-alanin(1b-5)
Einer Lösung von 135,9 mg der Verbindung (1b-1) in 2,7 ml Methylalkohol werden 104 mg Kaliumcarbonat und 0,9 ml Wasser zugesetzt, gefolgt von 20 h Rühren bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird zu einem Rückstand eingedampft, der in 1 ml Wasser gelöst und mit In HCl auf pH 2 angesäuert wird. Die Reaktionsmischung wird 5 min lang gerührt und 2 x mit Ethylacetat extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte werden mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei 106 mg eines Rückstands erhalten werden. Der Rückstand wird 3 x mit je 5 ml Ether zerrieben und der Ether dekantiert. Der feste Rückstand wird getrocknet, um 91,7 mg des Produkts (1b-5) als weißen Feststoff zu ergeben.
NMR(CD&sub3;OD) δ 0,80(t, 3H), 2,15(t, 2H), 3,32(m, 1H), 3,56(m, 1H), 3,95(s, 3H), 4,15(m, 1H), 4,30(q, 1H), 4,38(m, 1H); MS(ER-FAB) m/z 604,3200 (M+H, berechnet für C&sub2;&sub6;H&sub4;&sub6;N&sub5;O&sub1;&sub1;: 604,3194).

Beispiel 84:

N-[6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1b-11)
85,9 mg der Verbindung (lb-5) unter Argon werden mit 500 µl TFA gemäß Beispiel 80 behandelt. Die flüchtigen Stoffe werden abgedampft, wobei ein Rückstand erhalten wird, der 3 x mit Ether zerrieben wird, und der Ether wird dekantiert. Der Rückstand wird getrocknet, wobei 77,9 mg der Verbindung (1b-11) als weißer Feststoff erhalten werden.
NMR(CD&sub3;OD) δ 0,80(t, 3H), 2,16(t, 2H), 3,22(br s, 5H), 3,58(m, 2H), 3,85(m, 1H), 4,15(m, 1H), 4,30(d, 1H), 4,40(m, 1H); MS(HR-FAB) m/z 526,2482 (M+H, berechnet für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub8;N&sub5;O&sub9;: 526,2489).

Beispiel 85:

[S-(R*,S*)]-N-[N&sup6;-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl- N²[[[3-methoxy-1-methyl-3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-propyl]- amino]-carbonyl]-(R)-6-(methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alanin (1b-6)
Das Amin (2h-2) wird mit dem Amin (3c) gemäß dem in Beispiel 79 beschriebenen Verfahren gekoppelt. Der Harnstoff wird durch Chromatographie gereinigt und als (1b-6) identifiziert.

Beispiel 86:

[R-(R*,R*)]-N-[N&sup6;-[(1,1-Dimethylethoxy)-carbonyl- N²-[[[3-methoxy-1-methyl-3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-propyl]- amino]-carbonyl]-(R)-6-(methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alaninmethylester (1b-7)
Das Amin (2h-3) wird gemäß Beispiel 85 in den Harnstoff (1b-7) übergeführt.

Beispiel 87:

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N-[[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl] amino]-carbonyl]-N&sup6;-[(1,1- dimethylethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin (1b-8)
Durch Hydrolyse der Verbindung (1b-6) gemäß dem Verfahren in Beispiel 83 wird die Verbindung (1b-8) erhalten.

Beispiel 88:

[R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-N&sup6;-[(1,1- dimethylethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin(1b-9)
Durch Hydrolyse der Verbindung (1b-7) gemäß Beispiel 87 wird die Verbindung (1b-9) erhalten.

Beispiel 89:

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]- D-alanin (1b-12)
Durch die Deblockierung der Amin-Gruppe von (1b-8) mit TFA gemäß dem Verfahren in Beispiel 84 wird die Verbindung (1b-12) vorgesehen. Beispiel 90: [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-1- methyl-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]- D-alanin (1b-13)
Die Verbindung (1b-9) wird gemäß dein Verfahren in Beispiel 89 entschützt, wobei die Verbindung (1b-13) erhalten wird.

Claims

1. Verbindung der Formel (I): Formel (I)

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, einer substituierten oder unsubstituierten C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkylalkyl-Gruppe, einer Vinyl-Gruppe, einer Acetylen-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Amino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Acylamino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-Gruppe, einher substituierten oder unsubstituierten Aryloxy-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxyaralkyl-Gruppe und einer substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen heterocyclischen Gruppe mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff, substituiertem oder unsubstituiertem C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkylalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Aryl, substituiertem oder unsubstituiertem Aralkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyaralkyl, Vinyl, Acetylen und einem substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen Heterocyclus mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen, mit der Maßgabe, daß im Fall von R&sub3; die Heteroatome im Heterocyclus nicht direkt an die Gruppe -CH- des Teils -CH-X- gebunden sind; und R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carboxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy- oder geschütztem Carboxynied.alkyl und Carboxyamid; X Sauerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R&sub4; H oder eine Amino-Schutzgruppe darstellt; wobei die Substituenten in den oben angegebenen substituierten Alkyl-, Cycloalkyl-, Cycloalkylalkyl-, Amino-, Acylamino-, Aryl-, Aralkyl-, Aryloxy-, Alkoxyaryl-, Alkoxyaralkyl- und heterocyclischen Gruppen ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Hydroxyl, nied.Alkyl, nied.Alkoxy, Aryloxy, Aralkyloxy, Amino, Mono- oder Di-nied.alkylamino, Arylamino, Aralkylamino, Carboxyl, Formyl, nied.Alkoxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, nied.Alkylthio, Arylthio, Aralkylthio, Arylsulfinyl, Aralkylsulfinyl, nied.Alkylsulfonyl, Arylsulfonyl, Aralkylsulfonyl und einer monocyclischen oder bicyclischen heterocyclischen Gruppe mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff; und die pharmazeutisch annehmbaren Salze hievon.

2. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel: Formel (I),

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer C&sub4;-C&sub1;&sub4;-Alkyl-Gruppe, einer Cycloalkyl-Gruppe, einer C&sub2;-C&sub8;-Alkylsubstituierten Cycloalkyl-Gruppe, einer Phenyl-Gruppe, einer Benzyl-Gruppe, einer C&sub4;-C&sub8;-Alkylphenyl-Gruppe und einer C&sub1;-C&sub6;-Alkylalkoxyphenylmethyl-Gruppe; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff und C&sub1;-C&sub6;-Alkyl; R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carböxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy- oder geschütztem Carboxy-nied.alkyl und Carboxyamid; X Sauerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R&sub4; H oder eine Amino- Schutzgruppe darstellt.

3. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel: Formel (I),

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer n-Hexyl-Gruppe, einer 4-n-Pentylcyclohexyl-Gruppe; Ra und R3 unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff und Methyl; R&sub2;, Rb und Rc Carboxy bedeuten; X Sauerstoff oder Stickstoff darstellt; und R&sub4; H ist.

4. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel:

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, einer substituierten oder unsubstituierten C&sub1;-C&sub2;&sub0;-Alkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkyl- Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Cycloalkylalkyl-Gruppe, einer Vinyl-Gruppe, einer Acetylen-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Amino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Acylamino-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-Gruppe, einer substituierten oder unsubstituierten Aryloxy- oder Alkoxyaryl-Gruppe, oder Alkoxyaralkyl oder einer substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen heterocyclischen Gruppe mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff, substituiertem oder unsubstituiertem C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Cycloalkylalkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Aryl, substituiertem oder unsubstituiertem Aralkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Alkoxyaralkyl, Vinyl, Acetylen und einem substituierten oder unsubstituierten monocyclischen oder bicyclischen Heterocyclus mit 1 bis 4 Heteroatomen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatomen, mit der Maßgabe, daß im Fall von R&sub3; die Heteroatome im Heterocyclus nicht direkt an die Gruppe -CH- des Teils -CH-X- gebunden sind; und R&sub2;, Rb und Rc unabhängig ausgewählt sind aus Carboxy oder geschütztem Carboxy, Carboxy- oder geschütztem Carboxy-nied.alkyl und Carboxyamid; X Sauerstoff oder Stickstoff bedeutet; und R&sub4; H oder eine Amino- Schutzgruppe darstellt; wobei die Substituenten für die oben angegebenen substituierten Gruppen wie in Anspruch 1 definiert sind.

5. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel:

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer n-Hexyl-Gruppe, einer 4-n-Pentylcyclohexyl-Gruppe; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff oder Methyl; R&sub2;, Rb und Rc Carboxy bedeuten; X Sauerstoff oder Stickstoff darstellt; und R&sub4; H ist.

6. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel:

worin R&sub1; ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einer n-Hexyl-Gruppe, einer 4-n-Pentylcyclohexyl-Gruppe; Ra und R&sub3; unabhängig ausgewählt sind aus Wasserstoff oder Methyl; R&sub2;, Rb und Rc Carboxy bedeuten; X Sauerstoff darstellt; und R&sub4; H ist.

7. Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N-[[2-carboxy-1-methyl-2-[(1- oxoheptyl)-amino]-ethoxy] carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

[S-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N-[[2-carboxy-1-methyl-2-[(1- oxoheptyl)-amino]-ethoxy] carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

[R-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1-methyl-2-[(1- oxoheptyl)-amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

(R)-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-2-[(1-oxoheptyl)- amino]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

(R)-6-Carboxy-N²-[[2-carboxy-1-methyl-2-[((4-pentylcyclohexyl) carbonyl]-amin6]-ethoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

N-[N²-[[2-[[(4-Butoxyphenyl)-acetyl]-aminol-2-carboxy-1- methylethoxy]-carbonyl]-(R)-6-carboxy-L-lysyl]-D-alanin;

[R-(R*,R* )]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[1-[carboxy-[(1-oxoheptyl)-amino]-methyl]-propoxy]-carbonyl] -lysyl]-D-alanin;

[S-(R*,S* )]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[1-[carboxy-[(1-oxoheptyl)-amino]-methyl]-propoxy]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

N-[6-(Methoxycarbonyl)-N²-[[[3-oxo-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- 3-(phenylmethoxy)-propyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alaninmethylester;

N-[N²-[[[2-Carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]- carbonyl]-6-(methoxycarbonyl)-L-lysyl]-D-alaninmethylester;

N-[6-Carboxy-N²-[[[carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]- amino]-carbonyl]-N&sup6;-[(1,1-dimethylethoxy)-carbonyl]-L-lysyl]-D- alanin;

N-[6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-2-[(1-oxoheptyl)-amino]- ethyl]-amino]-carbonyl] L-lysyl]-D-alanin;

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-1-methyl-2- [(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin;

[R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-Carboxy-N²-[[[2-carboxy-1-methyl-2- [(1-oxoheptyl)-amino]-ethyl]-amino]-carbonyl]-L-lysyl]-D-alanin.

8. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche zur Induktion der Produktion von Wachstumsfaktoren (IL-6 und CSF²&sup5;) verwendbar ist, die die Neutrophilen-Produktion im Knochenmark eines Säugers regulieren, und welche einen geeigneten pharmazeutischen Träger und eine wirksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 umfaßt.

9. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach Anspruch 1, welches umfaßt: Umsetzen einer Verbindung der Formel:

worin R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und X wie in Anspruch 1 definiert sind, mit einem aktivierten Carbonyl-Äquivalent der Formel:

worin y eine Abgangsgruppe darstellt, wobei eine Verbindung der Formel:

worin R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und X wie in Anspruch 1 definiert sind, erhalten wird, die weiter umgesetzt wird mit einer Verbindung der Formel:

worin Ra, Rb, Rc und R&sub4; wie in Anspruch 1 definiert sind, wobei eine Verbindung nach Anspruch 1 erhalten wird.

10. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach Anspruch 1, welches umfaßt: Umsetzen einer Verbindung der Formel:

worin Ra, Rb, Rc und R&sub4; wie in Anspruch 1 definiert sind, mit einem aktivierten Carbonyl-Äquivalent der Formel:

worin Y eine Abgangsgruppe darstellt, wobei eine Verbindung der Formel:

worin Ra, Rb, Rc und R&sub4; wie in Anspruch 1 definiert sind, erhalten wird, die weiter umgesetzt wird mit einer Verbindung der Formel:

worin R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und X wie in Anspruch 1 definiert sind, wobei eine Verbindung nach Anspruch l erhalten wird.