DE60306546T2

DE60306546T2 - Entzündungshemmende 3-arylthio-3-thiazolylalkylamine

Info

Publication number: DE60306546T2
Application number: DE60306546T
Authority: DE
Inventors: AstraZeneca R & D Charnwood Jeffrey Loughborough STONEHOUSE
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2002-11-07
Filing date: 2003-11-06
Publication date: 2007-07-05
Anticipated expiration: 2023-11-07
Also published as: WO2004041794A1; DE60306546D1; ES2268441T3; EP1562920B1; WO2004041794A8; AU2003278667A1; US20060040992A1; SE0203304D0; EP1562920A1; ATE331711T1; JP2006506414A

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Arylthiazolylthioalkylaminderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, sie enthaltende Zusammensetzungen sowie ihre Verwendung in der Therapie.
Allgemeiner Stand der Technik
Stickstoffmonoxid wird in Säugetierzellen aus L-Arginin durch die Einwirkung von spezifischen Stickstoffmonoxidsynthasen (NOS) gebildet. Bei diesen Enzymen unterscheidet man zwei verschiedene Klassen, nämlich die konstitutive NOS (cNOS) und die induzierbare NOS (iNOS). Bis jetzt sind zwei konstitutive NOS und eine induzierbare NOS identifiziert worden. Bei den konstitutiven NOS ist ein Endothel-Enzym (ecNOS) an der Entspannung der glatten Muskulatur und der Regulation des Blutdrucks und der Durchblutung beteiligt, während das neuronale Enzym (ncNOS) als Neurotransmitter dient und an der Regulation von verschiedenen biologischen Funktionen wie Hirnischämie beteiligt sein dürfte. Insbesondere soll die induzierbare NOS an der Pathogenese von Entzündungskrankheiten beteiligt sein. Eine Regulation dieser Enzyme sollte daher beträchtliche Möglichkeiten bei der Behandlung von verschiedensten Krankheitszuständen bieten (J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 1996, 31, 221–230).
An der Identifikation von Verbindungen, die als spezifische Hemmer von einer oder mehreren Isoformen des Enzyms Stickstoffmonoxidoxidase dienen, wurde intensiv geforscht. Es wurde auch häufig behauptet, daß solche Verbindungen in der Therapie verwendet werden können.
In der Patentanmeldung WO 02/090332 werden bestimmte Arylheteroalkylaminderivate offenbart, die sich als NOS-Inhibitoren eignen. Es wurde nun gefunden, daß bestimmte Verbindungen, die in den allgemeinen Schutzbereich dieser Anmeldung fallen, jedoch nicht speziell als Beispiele angeführt sind, überraschend vorteilhafte Eigenschaften aufweisen. Diese Verbindungen sind Gegenstand der vorliegenden Anmeldung.
Beschreibung der Erfindung
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Verbindungen der Formel (I)
wobei:
T und W unabhängig voneinander für CR¹ oder N stehen und, wenn mehr als eine R¹-Gruppe vorhanden ist, diese jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sein können;
X und R¹ unabhängig voneinander für H, C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkoxy, Halogen, CN, C≡CH, NO₂, CHO, COCH₃ oder NHCHO stehen; wobei die Alkyl- bzw. Alkoxygruppe gegebenenfalls weiter durch ein oder mehrere Fluoratome substituiert ist;
Y für C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkoxy, Halogen, CN, C≡CH, NO₂, CHO, COCH₃ oder NHCHO steht; wobei die Alkyl- bzw. Alkoxygruppe gegebenenfalls weiter durch ein oder mehrere Fluoratome substituiert ist;
und deren pharmazeutisch annehmbare Salze bereitgestellt.
Bei einer Ausführungsform steht Y für CN oder Halogen.
Bei einer Ausführungsform stehen X und R¹ unabhängig voneinander für H, Halogen oder CF₃.
Der Vorteil der Verbindungen der Formel (I) und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate besteht darin, daß sie Hemmer des Enzyms Stickstoffmonoxidsynthase (NOS) sind. Insbesondere besteht der Vorteil der Verbindungen der Formel (I) und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere und Racemate darin, daß sie Hemmer der induzierbaren Isoform des Enzyms Stickstoffmonoxidsynthase (iNOS) sind.
Die Erfindung stellt weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I) oder einem ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate bereit.
Erfindungsgemäß wird auch eine Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate zur Verwendung als Arzneimittel bereitgestellt.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate bei der Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung oder Prophylaxe von Krankheiten oder Leiden, bei denen die Hemmung der Stickstoffmonoxidsynthaseaktivität von Nutzen ist, bereitgestellt.
Gemäß einem spezifischeren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate bei der Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung oder Prophylaxe von entzündlichen Erkrankungen bereitgestellt.
Erfindungsgemäß wird weiterhin ein Verfahren zur Behandlung bzw. zur Verminderung des Risikos von Krankheiten bzw. Leiden bereitgestellt, bei denen eine Inhibierung von Stickoxidsynthaseaktivität von Nutzen ist, bei dem man einer Person, die an dieser Krankheit bzw. diesem Leiden leidet bzw. bei der das Risiko einer solchen Krankheit bzw. eines solchen Leidens besteht, eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon verabreicht.
Insbesondere wird auch ein Verfahren zur Behandlung bzw. zur Verminderung des Risikos einer entzündlichen Erkrankung bei einer Person, die an dieser Krankheit leidet bzw. bei der das Risiko einer solchen Krankheit besteht, bereitgestellt, das die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon umfaßt.
Die Verbindungen der vorliegende Erfindung können auch vorteilhaft in Kombination mit einem zweiten pharmazeutischen Wirkstoff, insbesondere in Kombination mit einem selektiven Hemmer der induzierbaren Isoform der Cyclooxygenase (COX-2) verwendet werden. Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird daher die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate in Kombination mit einem COX-2-Hemmer für die Behandlung von Entzündung, entzündlichen Erkrankungen und entzündungsbedingten Zuständen bereitgestellt. Außerdem wird ein Verfahren zur Behandlung von Entzündung, entzündlichen Krankheiten und entzündungsbedingten Störungen bzw. Verringerung der Entzündungsgefährdung bzw. Gefährdung durch entzündliche Erkankung und entzündungsbedingte Störungen bei einem menschlichen Patienten, der an solch einer Erkrankung oder Störung leidet oder davon gefährdet ist, bereitgestellt, wobei dieses Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, daß man dem menschlichen Patienten eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, Enantiomers oder Racemats in Kombination mit einem COX-2-Hemmer verabreicht.
Zu besonderen erfindungsgemäßen Verbindungen zählen:
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlor-3-pyridincarbonitril;
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-4-chlorbenzonitril;
(2S,4R,)-2-Amino-4-[[2-chlor-5-(trifluormethyl)phenyl]thio]-5-thiazolbutanol;
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-6-(trifluormethyl)-3-pyridincarbonitril;
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlorbenzonitril;
und deren pharmazeutisch annehmbare Salze.
Falls nicht anders erwähnt, bedeutet der Ausdruck "C_1-4-Alkyl" im vorliegenden Zusammenhang eine gerade- oder verzweigtkettige Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Zu diesen Gruppen zählen zum Beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl, n-Butyl, i-Butyl und t-Butyl.
Falls nicht anders erwähnt, bedeutet der Ausdruck "C_1-4-Alkoxy" im vorliegenden Zusammenhang eine gerade- oder verzweigtkettige Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Zu diesen Gruppen zählen zum Beispiel Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, i-Propoxy und t-Butoxy.
Falls nicht anders erwähnt, bedeutet der Ausdruck "Halogen" im vorliegenden Zusammenhang Fluor, Chlor, Brom und Iod.
"C_1-4-Alkyl oder C_1-4-Alkoxy gegebenenfalls weiter durch ein oder mehrere Fluoratome substituiert" schließt beispielsweise CH₂F, CHF₂, CF₃, CF₃CF₂, CF₃CH₂, CH₂FCH₂, CH₃CF₂, CF₃CH₂CH₂, OCF₃ und OCH₂CF₃ ein.
Erfindungsgemäß wird weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere oder Racemate bereitgestellt, bei dem man:

a) eine Verbindung der Formel (II)
in welcher T, X, Y und W wie in Anspruch 1 definiert sind und L¹ für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III)
umsetzt oder
b) eine Verbindung der Formel (IV)
in welcher T, W, X und Y wie in Anspruch 1 definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (V)
in welcher L² für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt; und, falls gewünscht oder erforderlich, die so erhaltene Verbindung der Formel (I) oder ein anderes Salz davon in ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon umwandelt; oder eine Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I) umwandelt; und, falls gewünscht, die so erhaltene Verbindung der Formel (I) in ein optisches Isomer davon umwandelt.

Die Umsetzung in Verfahren (a) wird durchgeführt, indem man ein Nukleophil der Formel (III) in einem inerten Lösungsmittel mit einem Elektrophil der Formel (II) behandelt. Als Abgangsgruppen L¹ eignen sich beispielsweise Sulfonate und Halogenide, insbesondere Fluorid oder Chlorid. Die Umsetzung erfolgt im allgemeinen in Gegenwart einer nicht-nukleophilen Base wie Natriumhydrid oder Caesiumcarbonat. Als organische Lösungsmittel eignen sich zum Beispiel N,N-Dimethylformamid, N-Methyl-2-pyrrolidinon, Tetrahydrofuran und Dimethylsulfoxid. Die Umsetzung wird im allgemeinen bei einer Temperatur zwischen 0°C und dem Siedepunkt des Lösungsmittels durchgeführt.
In Verfahren (b) werden die Reaktionspartner (IV) und (V) in einem geeigneten inerten Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran zum Beispiel unter Anwendung von Mitsunobu-Bedingungen miteinander gekuppelt. So behandelt man die Reaktionspartner zum Beispiel bei einer geeigneten Temperatur, im allgemeinen zwischen 0°C und dem Siedepunkt des Lösungsmittels, mit einem Phosphinderivat und an Azoderivat. Als Phosphinderivate eignen sich beispielsweise Triphenylphosphin und Tributylphosphin. Als Azoderivate eignen sich zum Beispiel Azodicarbonsäurediethylester, Azodicarbonsäurediisopropylester und 1,1'-(Azodicarbonyl)dipiperidin. Als Abgangsgruppe L² eignet sich beispielsweise Hydroxy.
Alternativ dazu führt man die Umsetzung in Verfahren (b) durch, indem man ein Nukleophil der Formel (IV) in einem inerten Lösungsmittel mit einem Elektrophil der Formel (v) behandelt. Als Abgangsgruppen L² eignen sich beispielsweise Sulfonate und Halogenide, insbesondere Chlorid oder Bromid. Die Umsetzung erfolgt im allgemeinen in Gegenwart einer nicht-nukleophilen Base wie Natriumhydrid oder Caesiumcarbonat. Als organische Lösungsmittel eignen sich zum Beispiel N,N-Dimethylformamid, N-Methyl-2-pyrrolidinon, Tetrahydrofuran und Dimethylsulfoxid. Die Umsetzung wird im allgemeinen bei einer Temperatur zwischen 0°C und dem Siedepunkt des Lösungsmittel durchgeführt.
Dem Fachmann wird klar sein, daß es bei den genannten Verfahren wünschenswert oder erforderlich sein kann, eine Amin-, Hydroxyl- oder sonstige gegebenenfalls reaktionsfähige Gruppe zu schützen. Geeignete Schutzgruppen und Einzelheiten von Verfahren zum Hinzufügen und Entfernen solcher Gruppen können dem Standardwerk "Protecting Groups in Organic Synthesis" [Schutzgruppen in der organischen Synthese], 3. Ausgabe (1999) von Greene und Wuts entnommen werden.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden Amingruppen als Carbamatderivate, zum Beispiel als t-Butyloxycarbamate, geschützt.
Bei einer anderen bevorzugten Ausführungsform werden Amin- und Hydroxylgruppen von Verbindungen der Formel (I) wie in Formel (VI) gleichzeitig als cyclisches Hemiaminal geschützt.
Spezielle Beispiele für den Einsatz von Schutzgruppen sind im Abschnitt mit den Beispielen angeführt.
Die vorliegende Erfindung beinhaltet Verbindungen der Formel (I) in Form von Salzen, insbesondere Säureadditionssalzen. Zu geeigneten Salzen zählen solche, die sowohl mit organischen als auch anorganischen Säuren gebildet werden. Solche Säureadditionssalze sind üblicherweise pharmazeutisch annehmbar, obwohl auch Salze von pharmazeutisch nicht unbedenklichen Säuren bei der Herstellung und Reinigung der jeweiligen Verbindung von Nutzen sein können. Zu bevorzugten Salzen zählen also diejenigen, die mit Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Essigsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Methansulfonsäure und Benzolsulfonsäure gebildet werden.
Salze von Verbindungen der Formel (I) können dadurch gebildet werden, daß man die freie Base oder eines ihrer Salze, Enantiomere oder Racemate mit einem oder mehreren Äquivalenten der entsprechenden Säure umsetzt. Die Reaktion kann in einem Lösungsmittel oder Medium, in dem das Salz unlöslich ist, oder in einem Lösungsmittel, in dem das Salz löslich ist, zum Beispiel Wasser, Dioxan, Ethanol, Tetrahydrofuran oder Diethylether, oder einer Lösungsmittelmischung, das bzw. die im Vakuum oder durch Gefriertrocknung entfernt werden kann, durchgeführt werden. Die Reaktion kann auch ein metathetisches Verfahren sein oder an einem Ionenaustauscherharz durchgeführt werden.
Zwischenverbindungen können als solche oder in geschützter Form verwendet werden. Schutzgruppen und Einzelheiten für Verfahren zu ihrer Entfernung können dem Standardwerk "Protecting Groups in Organic Synthesis", 3. Ausgabe (1999) von Greene und Wuts entnommen werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen und ihre Zwischenverbindungen lassen sich nach Standardverfahren aus ihren Reaktionsmischungen isolieren und gegebenenfalls weiter auf reinigen.
Die Verbindungen der Formel I können in enantiomeren Formen vorliegen. Der Erfindungsumfang erstreckt sich daher auf alle Enantiomere, Diastereomere, Racemate und deren Mischungen. Die verschiedenen optischen Isomere lassen sich durch Trennen einer racemischen Mischung der Verbindungen nach traditionellen Techniken, zum Beispiel fraktionierte Kristallisation oder HPLC, isolieren.
Zwischenprodukte können auch in enantiomeren Formen vorliegen und als aufgereinigte Enantiomere, Diastereomere, Racemate oder Mischungen verwendet werden.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere und Racemate sind deshalb nutzbringend, weil sie über eine pharmakoligische Wirksamkeit bei Tieren verfügen. Insbesondere wirken die Verbindungen als Hemmer des Enzyms Stickstoffmonoxidsynthase. Genauer handelt es sich um Hemmer der induzierbaren Isoform des Enzyms Stickstoffmonoxidsynthase, und deshalb kann angenommen werden, daß sie sich für Therapiezwecke, zum Beispiel als entzündungshemmende Mittel, eignen. Eventuell eignen sie sich auch als Hemmer der neuronalen Isoform des Enzyms Stickstoffmonoxidsynthase.
Die Verbindungen und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere und Racemate sind für die Behandlung oder Prophylaxe von Krankheiten oder Leiden, bei denen die Produktion oder Überproduktion der Stickstoffmonoxidsynthase eine Rolle spielt, indiziert. Insbesondere sind die Verbindungen für die Behandlung von entzündlichen Störungen bei Säugetieren, darunter auch dem Menschen, indiziert.
Insbesondere können folgende Beschwerden genannt werden:
Osteoarthritis, rheumatoide Arthritis, rheumatoide Spondylitis, Gichtarthritis sowie weitere Arthriden, Gelenksentzündungen;
Ekzem, Schuppenflechte, Dermatitis oder weitere entzündliche Hautbeschwerden wie Sonnenbrand;
entzündliche Augenbeschwerden, darunter Uveitis, Glaukom und Konjunktivitis;
mit Entzündung einhergehende Lungenerkrankungen, zum Beispiel Asthma, Bronchitis, chronisch-obstruktive Lungenerkrankung, Vogelzüchterlunge, Drescherkrankheit, akute Atemwegserkrankung;
Bakteriämie, Endotoxämie (septischer Schock), aphthöse Geschwüre, Zahnfleischentzündung, Fieber, Schmerzen, Meningitis und Pankreatitis;
Beschwerden des Magen-Darm-Trakts, darunter Reizdarm, Morbus Crohn, chronisch-atrophische Gastritis, Gastritis varialoforme, ulzerative Colitis, Zöliakie, Enteritis regionalis, Ulcus pepticum, Reizdarm, Refluxösophagitis, Schädigung des Magen-Darm-Trakts aufgrund von Infektionen durch zum Beispiel Helicobacter pylori, oder von Behandlungen mit nichtsteroidartigen entzündungshemmenden Arzneimittelwirkstoffen;
sowie weitere mit Entzündung einhergehende Beschwerden.
Die Verbindungen werden sich auch bei der Behandlung und Linderung von akuten Schmerzen oder anhaltenden entzündungsbedingten Schmerzen oder Neuropathie oder Schmerzen zentralen Ursprungs eignen.
Uns interessieren besonders die Beschwerden Reizdarm, rheumatoide Arthritis, Osteoarthritis, chronisch-obstruktive Lungenerkrankung und Schmerzen.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, Enantiomere und Racemate können auch bei der Behandlung oder Prophylaxe von anderen Krankheiten oder Beschwerden als den oben genannten von Nutzen sein. Zum Beispiel können die Verbindungen bei der Behandlung von folgendem von Nutzen sein: Atherosklerose, Mukoviszidose, durch septischen und/oder toxischen Schock bedingter Hypotonus, Behandlung von Funktionsstörungen des Immunsystems, als Hilfsstoff bei der kurzfristigen Immunsuppression bei der Organtransplantationstherapie, Beeinflussung des Eintritts von Zuckerkrankheit, Aufrechterhaltung der Pankreasfunktion bei Zuckerkrankheit, Behandlung von mit Diabetes einhergehenden Gefäßkomplikationen sowie bei der gemeinsamen Therapie mit Cytokinen, zum Beispiel TNF oder Interleukinen.
Die Verbindungen der Formel (I) können auch bei der Behandlung von folgendem von Nutzen sein: Sauerstoffnot, zum Beispiel bei Herzstillstand und Schlaganfall, neurodegenerative Störungen, darunter Nervendegeneration und/oder Nervennekrose bei Krankheiten wie Ischämie, Sauerstoffnot, Hypoglykämie, Epilepsie, sowie externen Wunden (wie Rückenmarks- und Kopfverletzungen), Sauerstoffüberdruckkrämpfe und -vergiftungen, Demenz, z.B. präsenile Demenz, Morbus Alzheimer und Demenz in Verbindung mit AIDS, Sydenham-Chorea, Morbus Parkinson, Tourette-Syndrom, Morbus Huntington, amyotrophische Lateralsklerose, multiple Sklerose, Korsakoff-Syndrom, mit Gehirngefäßstörung einhergehender Schwachsinn, Schlafstörungen, Schizophrenie, Depression, Schmerzen, Autismus, Winter-Blues, Jet-Lag, Depressionen oder andere mit prämenstruellem Spannungssyndrom einhergehende Symptome, Angstzustände und septischer Schock. Von Verbindungen der Formel (I) kann auch erwartet werden, daß sie bei der Vorbeugung und Umkehr von Drogenabhängigkeit oder -toleranz, wie Toleranz gegenüber Opiaten und Diazepinen, bei der Behandlung von Drogenabhängigkeit, bei der Behandlung von Migräne und anderen vaskulären Kopfschmerzen, neurogenen Entzündungen, bei der Behandlung von Störungen der Beweglichkeit des Magen-Darm-Trakts, Krebs und bei der Geburtseinleitung von Nutzen sind.
Von besonderem Interesse für uns sind die Beschwerden Schlaganfall, Morbus Alzheimer, Morbus Parkinson, mutiple Sklerose, Schizophrenie, Migräne, Krebs, septischer Schock und Schmerzen.
Es wird erwartet, daß die Prophylaxe für die Behandlung von Patienten, bei denen bereits ein Anfall aufgetreten ist oder bei denen angenommen wird, daß sie auf eine andere Weise von der jeweiligen Krankheit oder Beschwerde verstärkt gefährdet sind, von besonderer Bedeutung sein wird. Zu den Patienten, bei denen die Gefahr besteht, daß eine bestimmte Krankheit oder Beschwerde auftritt, zählen im allgemeinen solche, bei denen die Krankheit oder Beschwerde bereits in der Familie aufgetreten ist, oder solche, bei denen eine genetische Untersuchung bzw. ein genetisches Screening ergeben hat, daß sie für das Auftreten dieser Krankheit oder Beschwerde besonders anfällig sind.
Die verabreichte Dosierung bei den obengenannten therapeutischen Indikationen hängt natürlich von der verwendeten Verbindung, dem Verabreichungsweg und der erwünschten Behandlung ab. Im allgemeinen erzielt man jedoch zufriedenstellende Ergebnisse, wenn die Verbindungen in einer Dosierung von 1 mg bis 2000 mg der festen Form pro Tag verabreicht werden.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate können alleine oder in Form von entsprechenden pharmazeutischen Zusammensetzungen, in dem die Verbindung oder das Derivat in Abmischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoff, Verdünnungsmittel oder Träger vorliegt, verwendet werden. Die Verabreichung kann enteral (darunter oral, sublingual oder rektal), intranasal, intravenös, topisch oder auf anderen parenteralen Wegen erfolgen, ist jedoch nicht darauf beschränkt. Traditionelle Vorgehensweisen für die Auswahl und Herstellung von geeigneten pharmazeutischen Präparaten sind zum Beispiel in "Pharmaceuticals – The Science of Dosage Form Designs" [Pharmazeutika – Die Wissenschaft der Arzneiformen], M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988, beschrieben. Die pharmazeutische Zusammensetzung umfaßt vorzugsweise weniger als 80% und stärker bevorzugt weniger als 50% einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze.
Erfindungsgemäß wird weiterhin eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon in einer Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Adjuvants, Verdünnungsmittel oder Träger enthält.
Ebenfalls bereitgestellt wird ein Verfahren zur Herstellung solch einer pharmazeutischen Zusammensetzung, bei dem die Bestandteile vermischt werden.
Die Verbindungen der Formel (I) und ihre pharmazeutisch annehmbaren Derivate können vorteilhaft auch in Kombination mit einem COX-Hemmer, speziell in Kombination mit einem COX-2-Hemmer verwendet werden. Besonders bevorzugte COX-2-Hemmer sind Celecoxib und MK-966. Der NOS-Hemmer und der COX-2-Hemmer können entweder gemeinsam innerhalb der gleichen pharmazeutischen Zusammensetzung formuliert werden und so in Einzeldosisform verabreicht werden, oder jede Komponente kann einzeln formuliert werden, sodaß getrennte Dosierungen gleichzeitig oder der Reihe nach verabreicht werden können.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erläutert, jedoch keineswegs eingeschränkt:
Es werden die folgenden Abkürzungen verwendet: DMSO (Dimethylsulfoxid), DMF (N,N-Dimethylformamid), THF (Tetrahydrofuran), NMP (N-Methylpyrrolidinon).
Beispiel 1
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thiol]-5-chlor-3-pyridincarbonsäurenitril-ethandioat
a) (4S)-4-[(2R)-2-Hydroxy-2-(2-chlor-5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester und (4S)-4-[(2S)-2-Hydroxy-2-(2-chlor-5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
n-Butyllithium (2,0 M in Hexan, 21,6 ml) wurde bei –78°C unter einer Stickstoffatmosphäre tropfenweise zu einer Lösung von 2-Chlorthiazol (5,4 g) in THF (400 ml) gegeben. Nach 15 Minuten wurde einer Lösung von (4S)-2,2-Dimethyl-4-(2-oxoethyl)-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester (7,0 g) in THF (140 ml) zugetropft, und die Reaktionsmischung wurde weitere 60 Minuten lang gerührt. Die Kühlung wurde dann entfernt, und die Mischung wurde 60 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde in gesättigte wäßrige Ammoniumchloridlösung gegeben, und die Produkte wurden mit Diethylether extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat), filtriert und eingedampft. Aufreinigung durch Chromatographie (Kieselgel, 20% Essigsäureethylester/Isohexan als Laufmittel) lieferte die im Untertitel genannte (4S,2S)-Verbindung (5,2 g) als ein farbloses Öl.
MS APCI + ve m/z 363 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d₆, 90°C) 7,49 (1H, s), 5,69 (1H, d), 4,85 (1H, dd), 3,96–3,86 (2H, m), 3,84–3,77 (1H, m), 2,10–1,99 (1H, m), 1,90 (1H, dt), 1,47 (3H, s), 1,40 (12H, s).
Durch weiteres Eluieren erhielt man die im Untertitel genannte (4S,2R)-Verbindung (5,1 g, 42%) als ein farbloses Öl.
MS APCI + ve m/z 363 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d₆, 90°C) 7,49 (1H, s), 5,70 (1H, d), 4,92 (1H, scheinbares quin.), 4,05–3,98 (1H, m), 3,91–3,84 (2H, m), 2,16–2,07 (1H, m), 1,84 (1H, ddd), 1,48 (3H, s), 1,41 (12H, s).
b) (4S)-4-[(2S)-2-Hydroxy-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
10% Palladium-auf-Aktivkohle wurde zu einer Lösung des (4S,2S)-Produkts aus Beispiel 1 Schritt (a) (5,2 g) und Natriumacetat (2,9 g) in Methanol (120 ml) gegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei 50°C 16 h unter 5 Atmosphären Wasserstoff gerührt. Die Mischung wurde filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde dann in Dichlormethan gelöst, nochmals filtriert und eingedampft, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (4,8 g) als ein farbloses Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 329 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d₆, 90°C) 8,90 (1H, d), 7,73 (1H, d), 5,49 (1H, d), 4,94 (1H, dt), 3,93–3,91 (2H, m), 3,85–3,78 (1H, m), 2,09 (1H, ddd), 1,94–1,89 (1H, m), 1,47 (3H, s), 1,41 (3H, s), 1,40 (9H, s).
c) (4S)-4-[(2R)-2-(Benzoylthio)-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Eine Lösung von Triphenylphosphin (7,9 g) in trockenem THF (100 ml) wurde bei 0°C im Verlauf von 5 Minuten tropfenweise mit Azodicarbonsäurediisopropylester (5,9 ml) versetzt. Nach Ende der Zugabe wurde die Mischung 20 Minuten lang gerührt und dann mit einer Lösung des Produkts von Beispiel 1 Schritt (b) (4,8 g) und Thiobenzoesäure (3,5 ml) in THF (50 ml) versetzt. Das Kühlbad wurde entfernt, und es wurde über Nacht weiter bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch aufgereinigt (Kieselgel, 10% Diethylether/Isohexan als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (4,4 g) als einen gelben Feststoff erhielt.
MS APCI + ve m/z 449 ([M + H]⁺).
d) (4S)-4-[(2R)-2-[(5-Chlor-3-cyano-2-pyridinyl)thio]-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (c) (290 mg) wurde mit 7 M Ammoniak in Methanol (5 ml) versetzt 6 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rückstand wurde in trockenem DMF (5 ml) gelöst und unter Stickstoff mit 2,5-Dichlor-3-pyridincarbonsäurenitril (112 mg) und anschließend mit Cäsiumcarbonat (210 mg) versetzt. Die Reaktionsmischung wurde 18 h gerührt und in Kochsalzlösung und Essigsäureethylester gegossen, und die organische Phase wurde abgetrennt, mit Wasser (2×) und Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (Magnesiumsulfat). Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rückstand wurde chromatographisch (Kieselgel, 25% Essigsäureethylester/Dichlormethan als Laufmittel) aufgereinigt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (160 mg) als ein zähflüssiges Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 481 ([M + H]⁺).
e) 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlor-3-pyridincarbonsäurenitril-ethandioat
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (d) (160 mg) wurde 1 h in 4 M HCl in Dioxan (1 ml) und Methanol (1 ml) gerührt. Die Reaktionsmischung wurde eingedampft, azeotrop mit Diethylether (3×) destilliert und dann mit 1 Äquivalent Oxalsäure in Ethanol (10 ml) versetzt. Die klare Lösung wurde bis zur vollständigen Ausfällung mit Diethylether versetzt, und der Feststoff wurde abfiltriert, mit Diethylether gewaschen und 2 h bei 40°C im Vakuum getrocknet, wodurch man die Titelverbindung (60 mg) als einen hellbraunen Feststoff erhielt.
MS APCI + ve m/z 341 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d₆) 9,07 (1H, s), 8,87 (1H, d), 8,56 (1H, d), 8,07 (2H, bs), 8,00 (1H, s), 5,71 (1H, t), 3,57 (1H, dd), 3,49 (1H, dd), 3,12–3,04 (1H, m), 2,45–2,32 (2H, m).
Beispiel 2
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-4-chlorbenzonitril-dihydrochlorid
a) (4S)-4-[(2R)-2-[(5-Chlor-2-cyanophenyl)thio]-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (c) (290 mg) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 1 Schritt (d) mit 2-Fluor-4-chlorbenzonitril (101 mg) und Cäsiumcarbonat (211 mg) behandelt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (160 mg) als ein zähflüssiges Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 480 ([M + H]⁺).
b) 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-4-chlorbenzonitril-dihydrochlorid
Das Produkt aus Beispiel 2 Schritt (a) wurde 1 h in 4 M HCl in Dioxan (1 ml) und Methanol (1 ml) gerührt. Die Reaktionsmischung wurde eingedampft, azeotrop mit Diethylether destilliert (3×) und 2 h bei 40°C im Vakuum getrocknet, wodurch man die Titelverbindung (113 mg) als einen hellgelben Feststoff erhielt.
MS APCI + ve m/z 340 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d₆) 9,05 (1H, s), 8,15 (2H, bs), 7,86 (1H, d), 7,83 (1H, s), 7,81 (1H, d), 7,55 (1H, dd), 5,57 (1H, t), 3,59 (1H, dd), 3,51 (1H, dd), 3,07 (1H, br s), 2,31–2,23 (2H, m).
Beispiel 3
(2S,4R)-2-Amino-4-[[2-chlor-5-(trifluormethyl)phenyl]thio]-5-thiazolbutanol-hydrochlorid
a) (4S)-4-[(2R)-2-[[2-Chlor-5-(trifluormethyl)phenyl]thio]-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (c) (190 mg) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 1 Schritt (d) mit 4-Chlor-3-fluorbenzotrifluorid (83 mg) und Caesiumcarbonat (163 mg) behandelt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (105 mg) als ein zähflüssiges Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 523 ([M + H]⁺).
b) (2S,4R)-2-Amino4-[[2-chlor-5-(trifluormethyl)phenyl]thio]-5-thiazolbutanolhydrochlorid
Das Produkt aus Beispiel 3 Schritt (a) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 2 Schritt (b) umgesetzt, wodurch man die Titelverbindung (58 mg) als einen weißen Feststoff erhielt, der das (2S,4S)-Diastereomer als eine 30%ige Verunreinigung enthielt.
MS APCI + ve m/z 383 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 300 MHz (DMSO-d₆) 9,04 (1H, s), 8,15 (2H, br s), 7,86 (1H, d), 7,77–7,69 (2H, m), 7,61 (1H, s), 5,54 (1H, t), 3,63–3,55 (1H, m), 3,13–3,01 (2H, m), 2,34–2,19 (2H, m).
Beispiel 4
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-6-(trifluormethyl)-3-pyridinecarbonitril-dihydrochlorid
a) (4S)-4-[(2R)-2-[[3-Cyano-6-(trifluoromethyl)-2-pyridinyl]thio]-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (c) (190 mg) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 1 Schritt (d) mit 2-Chlor-6-trifluormethyl-3-pyridincarbonitril (86 mg) und Caesiumcarbonat (163 mg) behandelt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (117 mg) als ein zähflüssiges 0l1 erhielt.
MS APCI + ve m/z (515 [M + H]⁺).
b) 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-6-(trifluormethyl)-3-pyridincarbonsäurenitril-dihydrochlorid
Das Produkt aus Beispiel 4 Schritt (a) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 2 Schritt (b) umgesetzt, wurde man die Titelverbindung (85 mg) als einen weißen Feststoff erhielt.
MS APCI + ve m/z (375 [M + H]⁺).
¹H-NMR 300 MHz (DMSO-d₆) 9,04 (1H, s), 8,57 (1H, d), 8,20 (2H, bs), 7,97 (1H, s), 7,89 (1H, d), 5,68 (1H, t), 3,60–3,56 (1H, m), 3,52 (1H, dd), 3,18–3,09 (1H, m), 2,48–2,41 (2H, m).
Beispiel 5
2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlorbenzonitril-dihydrochlorid
a) (4S)-4-[(2R)-2-[(4-Chlor-2-cyanophenyl)thio]-2-(5-thiazolyl)ethyl]-2,2-dimethyl-3-oxazolidincarbonsäure-1,1-dimethylethylester
Das Produkt aus Beispiel 1 Schritt (c) (190 mg) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 1 Schritt (d) mit 5-Chlor-2-fluorbenzonitrile (65 mg) und Caesiumcarbonat (163 mg) behandelt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (160 mg) als ein zähflüssiges Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 480 ([M + H]⁺).
b) 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlorbenzonitril-dihydrochlorid
Das Produkt von Beispiel 5 Schritt (a) wurde gemäß der Vorschrift von Beispiel 2 Schritt (b) umgesetzt, wodurch man die Titelverbindung (97 mg) als ein hellgelbes Öl erhielt.
MS APCI + ve m/z 340 ([M + H]⁺).
¹H-NMR 300 MHz (DMSO d₆) 9,04 (1H, s), 8,27 (2H, br s), 8,04 (1H, d), 7,81 (1H, s), 7,77–7,74 (2H, m), 5,58 (1H, t), 3,57 (1H, dd), 3,51 (1H, dd), 3,07–3,00 (1H, m), 2,27 (2H, t).
Screening-Tests
Die pharmakologische Wirksamkeit von erfindungsgemäßen Verbindungen wurde in den folgenden Screening-Tests geprüft.
Screening-Test 1
Die Aktivität von Verbindungen der Formel (I) oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze kann mittels einer Vorgehensweise nach Förstermann et al., Eur. J. Pharm., 1992, 225, 161–165 auf stickstoffmonoxidsynthasehemmende Wirksamkeit gescreent werden. Die Stickstoffmonoxidsynthase wandelt ³H-L-Arginin in ³H-L-Citrullin um, das mittels Kationenaustauschchromatographie abgetrennt und mittels Flüssigkeitsszintillationszählung mengenmäßig bestimmt werden kann.
Das Enzym wird nach Induktion aus der Maus-makrophagen Zellkulturlinie J774A-1 (Herkunft: Laboratorien des Imperial Cancer Research Fund) präpariert. Die J774A-1-Zellen werden in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit Zusatz von 10% fötalem Rinderserum, 4 mM L-Glutamin und Antibiotika (100 Einheiten/ml Penizillin G, 100 mg/ml Streptomycin & 0,25 mg/ml Amphotericin B) gezüchtet. Die Zellen werden routinemäßig in 225-cm³-Kolben, die 35 ml Medium enthalten, bei 37°C in einer befeuchteten, 5% CO₂ enthaltenden Atmosphäre gezüchtet.
Die Stickstoffmonoxidsynthase wird von Zellen als Reaktion auf Interferon-g (IFNg) und Lipopolysaccharid (LPS) produziert. Das Medium von konfluenten Kulturkolben wird entfernt und durch 25 ml (pro Kolben) frisches Medium, das 1 mg/ml LPS und 10 Einheiten/ml IFNg enthält, ersetzt. Nach 17–20-stündiger Kultivierungsdauer werden die Zellen durch Abschaben des Zellrasens von der Kolbenoberfläche in das Kulturmedium geerntet. Die Zellen werden abzentrifugiert (1000 g, 10 Minuten lang) und durch Zugabe einer Lösung, die 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 20°C), 10% (v/v) Glycerin, 0,1% (v/v) Triton-X-100, 0,1 mM Dithiothreitol und einen Proteasehemmercocktail von Leupeptin (2 mg/ml), Sojabohnen-Trypsinhemmer (10 mg/ml), Aprotinin (5 mg/ml) und Phenylmethylsulfonylfluorid (50 mg/ml) enthält, zu dem Zellpellet lysiert.
Für den Assay werden 25 μl Substrat-Cocktail (50 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 20°C), 400 μM NADPH, 20 μM Flavin-Adenin-Dinukleotid, 20 μM Flavin-Mononukleotid, 4 μM Tetrahydrobiopterin, 12 μM L-Arginin und 0,025 mCi L-[³H]-Arginin) zu Näpfchen einer 96-Well-Filterplatte (Porengröße 0,45 μM), die 25 μl einer Lösung von Prüfverbindung in 50 mM Tris-HCl enthalten, gegeben. Die Reaktion wird durch Zugabe von 50 μl Zelllysat (Herstellung wie oben) gestartet und nach einstündiger Inkubation bei Raumtemperatur durch Zugabe von 50 μl einer wäßrigen Lösung von 3 mM Nitroarginin und 21 mM EDTA gestoppt.
Das markierte L-Citrullin wird von dem markierten L-Arginin mittels Dowex AG-50W getrennt. 150 μl einer 25%igen wäßrigen Aufschlämmung von Dowex 50W (Na⁺-Form) wird zu dem Assay zugegeben, wonach das Ganze in 96-Well-Platten filtriert wird. Es wird eine 75-μl-Probe des Nitrats gezogen und zu Näpfchen von 96-Well-Platten, die festes Szintillationsmaterial enthalten, gegeben. Nachdem die Proben trocknen gelassen wurden, wird das L-Citrullin durch Szintillationszählung quantitativ bestimmt.
Bei einem typischen Versuch beträgt die Basalaktivität 300 dpm pro 75-μl-Probe und erhöht sich bei den Reagenskontrollen auf 1900 dpm. Die Aktivität der Verbindung wird als IC₅₀ ausgedrückt (diejenige Konzentration an Arzneimittelwirkstoff, die in dem Assay zu einer 50%igen Enzymhemmung führt), und Aminoguanidin, das eine IC₅₀ (50%ige Hemmkonzentration) von 10 μM aufweist, wird als Standard für Verifizierung der Vorgehensweise mitgeführt. Die Verbindungen werden in verschiedenen Konzentrationen geprüft, und die IC₅₀-Werte aus den erzielten Hemmwerten berechnet. Diejenigen Verbindungen, die bei einer Konzentration von 100 μM zu einer mindestens 25%igen Hemmung des Enzyms führen, werden als aktiv eingestuft und mindestens einer erneuten Prüfung unterworfen.
Die Verbindungen der Beispiel 1 bis 5 wurden mit dem obigen Screening-Test untersucht, wobei man IC₅₀-Werte von unter 10 μM erhielt, was darauf hindeutet, daß von ihnen zu erwarten steht, daß sie eine nützliche therapeutische Wirkung zeigen.
Screening-Test 2
Rekombinante humane NO-Synthasen (iNOS, eNOS & nNOS) wurden in E. coli exprimiert, und Lysate wurden in Hepes-Puffer (pH 7,4), enthaltend Cofaktoren (FAD, FMN, H₄B), Proteaseinhibitoren, Lysozym und das Detergens CHAPS, hergestellt. Diese Präparationen wurden bei geeigneter Verdünnung verwendet, um eine Inhibition der verschiedenen Isoformen zu bestimmen. Die Inhibition von NOS wurde bestimmt, indem die Bildung von L-[³H]Citrullin aus L-[³H]Arginin unter Verwendung einer Anpassung des Verfahrens von Förstermann et al.⁹ gemessen wurde. Enzymassays wurden in Gegenwart von 3 μM [³H]Arginin, 1 mM NADPH und anderen Cofaktoren, die zur Unterstützung der NOS-Aktivität erforderlich sind (FAD, FMN, H₄B, Calmodulin, Ca²⁺), durchgeführt. Da verschiedene NOS-Inhibitoren berichtetermaßen nur niedrige Bindungskinetiken zeigen oder da sie das Enzym in einer zeitabhängigen Weise inaktivieren, wurden Enzym und Inhibitor 60 Minuten lang in Gegenwart von NADPH vorinkubiert, bevor Arginin zur Initiierung der Reaktion hinzugesetzt wurde. Inkubationen wurden weitere 60 Minuten lang fortgesetzt, bevor die Assays gelöscht wurden, und [³H]Citrullin wurde von nicht umgesetztem Substrat mittels Chromatographie auf Dowex-50W-Harz in einem 96-Vertiefungs-Format abgetrennt.
Die Verbindungen der Beispiel 1 bis 5 wurden mit dem obigen Screening-Test untersucht, wobei man IC₅₀-Werte von unter 10 μM gegen das iNOS-Enzym erhielt, was darauf hindeutet, daß von ihnen zu erwarten steht, daß sie eine nützliche therapeutische Wirkung zeigen.
Screening-Test 3
Die Verbindungen weisen auch eine Wirkung gegen die humane Form der induzierten Stickstoffmonoxidsynthase auf, wie mit dem folgenden Assay nachgewiesen werden kann.
Die Human-Colorektalkarzinomzellinie DLD-1 (Herkunft: europäische Sammlung tierischer Zellkulturen, Zellinie Nummer 90102540) wurde routinemäßig in RPMI 1640 mit Zusatz von 10% (v/v) fötalem Rinderserum und 2 mM L-Glutamin bei 37°C in 5% CO₂ gezüchtet.
Die Stickstoffmonoxidsynthase wurde in den Zellen durch Zusatz von Medium, das humanes rekombinantes Gamma-IFN (1000 Einheiten/ml), TNF-Alpha (200 Einheiten/ml), IL-6 (200 Einheiten/ml) und IL-1-Beta (250 Einheiten/ml) enthielt, induziert. Nach 18-stündiger Inkubation bei 37°C wurde das Medium entfernt, und Zellen wurden mit warmer phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen. Die Zellen wurden noch 5 Stunden bei 37°C/5% CO₂ in RPMI 1640, das 100 μM L-Arginin und 100 μM Verapamil-HCl enthielt, in Gegenwart bzw. Abwesenheit von Testverbindungen inkuziert.
Die Nitritakkumulation wurde dadurch bestimmt, daß man gleiche Volumina Kulturmedium und Griess-Reagens (10 mg/ml Sulfanilamid, 1 mg N-(1-Naphthyl)ethylendiamin in 1 ml 2,5%iger (v/v) Phosphorsäure) mischt. Die Hemmung in Gegenwart von Verbindungen wurde in bezug auf die von unbehandelten Zellen produzierten Nitritmengen berechnet. Die IC₅₀-Werte wurden durch halblogarithmisches Auftragen der Hemmung in % gegen die Konzentration der Verbindung abgeschätzt.
Die Verbindungen der Beispiel 1 bis 5 wurden mit dem obigen Screening-Test untersucht, wobei man IC₅₀-Werte von unter 100 μM erhielt, was darauf hindeutet, daß von ihnen zu erwarten steht, daß sie eine nützliche therapeutische Wirkung zeigen.

Claims

Verbindungen der Formel (I)
wobei: T und W unabhängig voneinander für CR¹ oder N stehen und, wenn mehr als eine R¹-Gruppe vorhanden ist, diese jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sein können; X und R¹ unabhängig voneinander für H, C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkoxy, Halogen, CN, C≡CH, NO₂, CHO, COCH₃ oder NHCHO stehen; wobei die Alkyl- bzw. Alkoxygruppe gegebenenfalls weiter durch ein oder mehrere Fluoratome substituiert ist; Y für C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkoxy, Halogen, CN, C≡CH, NO₂, CHO, COCH₃ oder NHCHO steht; wobei die Alkyl- bzw. Alkoxygruppe gegebenenfalls weiter durch ein oder mehrere Fluoratome substituiert ist; und deren pharmazeutisch annehmbare Salze.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei Y für CN oder Halogen steht.
Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, wobei X und R¹ unabhängig voneinander für H, Halogen oder CF₃ stehen.
Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1, bei denen es sich um: 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlor-3-pyridincarbonitril; 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-4-chlorbenzonitril; (2S,4R,)-2-Amino-4-[[2-chlor-5-(trifluormethyl)phenyl]thio]-5-thiazolbutanol; 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-6-(trifluormethyl)-3-pyridincarbonitril; 2-[[(1R,3S)-3-Amino-4-hydroxy-1-(5-thiazolyl)butyl]thio]-5-chlorbenzonitril; handelt und deren pharmazeutisch annehmbare Salze.
Verbindungen der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4 und deren pharmazeutisch annehmbare Salze zur Verwendung als Medikament.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon in einer Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Adjuvants, Verdünnungsmittel oder Träger.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prophylaxe von humanen Krankheiten bzw. Leiden, bei denen eine Inhibierung der Stickoxidsynthaseaktivität von Nutzen ist.
Verwendung nach Anspruch 7, bei der vorwiegend die induzierbare Stickoxidsynthase inhibiert wird.
Verwendung einer wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 definierten Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prophylaxe von entzündlichen Krankheiten.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei es sich bei der Krankheit um entzündliche Darmerkrankung handelt.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei es sich bei der Krankheit um rheumatoide Arthritis handelt.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei es sich bei der Krankheit um Osteoarthritis handelt.
Verwendung einer wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 definierten Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prophylaxe von Schmerzen.
Verwendung einer wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 definierten Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon in Kombination mit einem COX-2-Inhibitor bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prophylaxe von entzündlichen Krankheiten.
Verfahren zur Herstellung einer wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 definierten Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, Enantiomers oder Racemats davon, bei dem man: a) eine Verbindung der Formel (II)
in welcher T, X, Y und W wie in Anspruch 1 definiert sind und L¹ für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III)
umsetzt oder b) eine Verbindung der Formel (IV)
in welcher T, W, X und Y wie in Anspruch 1 definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (v)
in welcher L² für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt; und, falls gewünscht oder erforderlich, die so erhaltene Verbindung der Formel (I) oder ein anderes Salz davon in ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon umwandelt; oder eine Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I) umwandelt; und, falls gewünscht, die so erhaltene Verbindung der Formel (I) in ein optisches Isomer davon umwandelt.