DE60122196T2

DE60122196T2 - Synergistische antioxidans-kombination von delta tocols und polyphenolen

Info

Publication number: DE60122196T2
Application number: DE60122196T
Authority: DE
Inventors: Nathalie Hasler-Nguyen; Jacob Zijlstra; P. John TROUP
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2000-10-24
Filing date: 2001-10-22
Publication date: 2007-08-23
Anticipated expiration: 2021-10-23
Also published as: ES2269494T3; EP1331858B1; AU2002219051A1; DK1331858T3; US7452549B2; DE60122196D1; GB0026018D0; EP1331858A2; WO2002034072A3; ATE335410T1; AR031147A1; US20040023894A1; PT1331858E; WO2002034072A2

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Zusammensetzungen, die eine Kombination von mindestens einer Quelle von δ-Tocolen (Tocotrienol und/oder Tocopherol) umfassen, mit einer Antioxidansquelle, die polyphenolische Verbindungen umfasst. Aufgrund der synergistischen Effekte sind solche Zusammensetzungen bei der Behandlung oder Prävention von Störungen, die durch freie Radikale verursacht werden, wie jene, die koronare Herzkrankheit, Krebs und Rheumatismus betreffen, verwendbar.
Hintergrund der Erfindung
Es gibt eine Vielzahl von Beweisen, die vermuten lassen, dass Nahrung, die reich an Obst und Gemüse ist, gegen die Entwicklung von chronischen Krankheiten, wie koronare Herzkrankheit (CHD) und Krebs, welche unter der wohlhabenden Bevölkerung die hauptsächlichen Krankheiten mit Todesfolge sind, schützt. Es wurde seit einiger Zeit erkannt, dass diese vorteilhaften Wirkungen mindestens zum Teil auf die antioxidierenden Komponenten dieser Nahrungsmittel zurückzuführen sind, welche die Zellschädigung durch freie Radikale hemmen können. Im Körper entsteht die Schädigung durch freie Radikale aufgrund der reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), die endogen innerhalb der Gewebe gebildet werden, und auch im Ergebnis der Aussetzung den Radikalen, die sich aus Zigarettenrauch, ionisierender Strahlung, Luftverschmutzung und anderen Umweltübeln ergeben. Diese freien Radikale haben das Potenzial, mit biologischen Molekülen, wie Proteinen, Lipiden und DNA, in Wechselwirkung zu treten, und sie sind in die Ätiologie von verschiedenen Erkrankungen verwickelt.
Antioxidantien kommen wahrscheinlich bei vielen Aspekten von multifaktoriellen Erkrankungszuständen, wie Krebs oder CHD, ins Spiel; folglich ist es schwierig, festzustellen, wie ihre Primärwirkungen ausgeübt werden. Jedoch im Fall des Entwicklungsvorgangs von Arteriosklerose wurde eine deutliche Verbindung zwischen Oxidation von niederdichtem Lipoprotein (LDL) und der Bildung von okklusiver Plaque in den Arterien aufgezeigt. Vitamin E (α-Tocopherol), das als Teil der Nahrung verzehrt wird, liegt naturgemäß im Blut vor, wo es wirkt, um das LDL vor Oxidation zu bewahren. In-vitro-Versuche haben festgestellt, dass andere natürliche Quellen von Antioxidantien, wie grüner Tee, die Oxidation von LDL auch wesentlich verzögern. In-vivo-Studien haben die In-vitro-Tests bestätigt, indem sie zeigen, dass das Erhöhen der Aufnahme von einigen Antioxidantien, wie Vitamin E, mit der Nahrung die Beständigkeit von LDL gegen Oxidation erhöhen kann und wodurch Läsionen in den Arterien vermindert werden.
Guthrie et al. „Abstract 1907: combined effect of palm oil tocotrienols, flavonoids and tamoxifen on the proliferation of estrogen receptor-positive MCF-7 human brest cells", in Proceedings of the 87^th annual meeting of the American Association for Cancer Research, Washington, 20.–24. April 1996, offenbaren unter anderem eine Kombination von 1 : 1 von Palmöl-Tocotrienolen und Flavonoiden. Palmöl-Tocotrienole treten in einem Gemisch von α-, γ- und δ-Tocotrienolen sowie als α-Tocopherol auf.
WO-A-0151043 offenbart eine pharmazeutische Zusammensetzung zum Verhindern und Behandeln von neoplastischer und onkogener Störung, insbesondere Tumorzellenproliferation, die eine Kombination von Limonoiden, insbesondere Zitrusflavonoiden und δ-Tocotrienol, beinhaltet.
Die hauptsächlichen Antioxidantien von Nahrungsquellen sind Vitamin E (α-Tocopherol) und C (Ascorbinsäure), die Carotinoide und Polyphenole. Aufgrund einer Erhöhung des öffentlichen Bewusstseins über die Bedeutung von diesen Mikronährmitteln wurde es für die Leute zu einer alltäglichen Angelegenheit, ihre Nahrung mit natürlichen oder synthetischen Antioxidansquellen zu ergänzen. Jedoch trotz dieser allgemeinen Verschiebung zugunsten gesünderen Essverhaltens ist das Auftreten von CHD und Krebs forthin besorgniserregend.
Es wird deutlich leichter, die Anwendung von antioxidierenden Nahrungsergänzungen zu fördern, als eine radikale Änderung in der Ernährungsweise einzuführen. Nahrungsergänzungen haben jedoch eigene Nachteile, insbesondere, da es negative Nebenwirkungen, die mit hohen Dosen verbunden sind, gibt. Vor kurzem hat das US Institute of Medicine beispielsweise angeraten, dass die obere Grenze für die Aufnahme von Vitamin E auf 1000 mg α-Tocopherol pro Tag eingestellt werden sollte, aufgrund des Risikos von Schlaganfall und ungesteuertem Bluten wegen der Koagulanzeigenschaften dieses Nährstoffs. β-Carotin wurde tatsächlich mit einer Erhöhung des Auftretens von Krebs in Verbindung gebracht. Somit kann bei der maximal sicheren Dosierung die Antioxidanswirkung weniger als optimal sein.
Folglich gibt es einen Bedarf für neue Antioxidansprodukte, die in der Form eines Lebensmittels oder als Nahrungsergänzung bereitgestellt werden können und die bei Dosierungen, die keine Gesundheitsrisiken beinhalten, beim Verhindern von CHD, Krebs und anderen Erkrankungen, die mit der Erzeugung von freien Radikalen verbunden sind, wirksam sind.
Kurzdarstellung der Erfindung
Gemäß einem ersten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend ein Gemisch von

(a) einer Quelle von δ-Tocol, umfassend mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol; und
(b) Polyphenolen,

In einem zweiten Aspekt der Erfindung wird eine Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend in einer täglichen Dosierung:

(a) mindestens 5 mg von δ-Tocopherol oder von einem Gemisch von δ-Tocotrienol und δ-Tocopherol und
(b) Polyphenole.

In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend in einer täglichen Dosierung:

(a) mindestens 5 mg δ-Tocotrienol und
(b) Polyphenole, die von Zitrusflavonoiden verschieden sind.

In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein Nahrungs- oder Getränkeprodukt bereitgestellt, umfassend

(a) eine Quelle von δ-Tocol, die mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol umfasst, und
(b) eine Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst,

In einem noch weiteren Aspekt der Erfindung wird eine pharmazeutische Zusammensetzung oder Nahrungsergänzung bereitgestellt, die die wie beanspruchte, erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst, mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer wie beanspruchten erfindungsgemäßen Zusammensetzung als ein Fänger für freie Radikale bereitgestellt.
In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend ein Gemisch von

(a) einer Quelle von δ-Tocol, die vorzugsweise mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol umfasst; und
(b) einer Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst,

In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine wie beanspruchte, erfindungsgemäße Zusammensetzung zur Verwendung als ein Arzneimittel bereitgestellt.
In einem noch weiteren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer wie beanspruchten, erfindungsgemäßen Zusammensetzung bei der Herstellung eines Arzneimittels oder einer Nahrungsformulierung für die Verhinderung oder Behandlung eines Erkrankungszustands oder einer körperlichen Schädigung, die mit der Erzeugung von freien Radikalen verbunden ist, bereitgestellt.
In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein Kit bereitgestellt, umfassend:

(a) eine Quelle von δ-Tocol, die vorzugsweise mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol umfasst; und
(b) eine Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst, für die getrennte, aufeinander folgende oder gleichzeitige Verabreichung.

In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine kosmetische Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend:

(a) eine Quelle von δ-Tocol, die vorzugsweise mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol umfasst; und
(b) eine Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst; und
(c) eine kosmetische Grundlage.

Beschreibung der Figuren
1 ist eine Kurve, die die Wirkungen von TRF von Palmöl (s; Sugro), Extrakt von grünem Tee (GT) und Traubensamenextrakt (GS) und Kombinationen davon auf die Verzögerungsphase in einem In-vitro-LDL-Oxidationsassay veranschaulicht.
2 ist eine Kurve, die den Synergismus in dem LDL-Oxidationsassay bei verschiedenen Konzentrationsverhältnissen von Extrakt von grünem Tee (GT) : TRF (Fuji) zeigt.
3 ist eine Kurve, die die Antioxidanswirkungen von reinem δ-Tocotrienol und δ-Tocopherol in Kombination mit Extrakt von grünem Tee (GT) in dem LDL-Oxidationsassay vergleicht.
4 vergleicht die Antioxidanswirkungen in dem LDL-Oxidationsassay von grünem Tee (GT) und rotem Pu Erh Tee (RT), wenn in Verbindung mit δ-Tocotrienol (δ-T) getestet wurde.
5 zeigt die Wirkungen des Anwendens von reinem Epicatechin als einem synergistischen Partner mit δ-Tocotrienol in dem LDL-Oxidationsassay.
Beschreibung der Erfindung im Einzelnen
Es wurde überraschenderweise gefunden, dass die Antioxidanseigenschaften von einer Kombination einer Tocolquelle, die δ-Tocotrienol und/oder -Tocopherol umfasst, mit einer Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst, mehr als additiv sind; d.h. wir haben einen synergistischen Effekt bei der Prävention vor Oxidation in einem In-vitro-LDL-Oxidationsmodell beobachtet (welches ein repräsentatives Modell für freie Radikaloxidation in vivo im Allgemeinen und Peroxidation von Lipiden im Besonderen ist).
Im Ergebnis dieser Synergie wird es möglich, eine äquivalente oder verbesserte Antioxidanswirkung bei niederen Dosierungen zu erhalten, verglichen mit üblichen Antioxidansprodukten. Dies hat den Vorteil, dass ein kräftiger Antioxidanseffekt unter Vermeiden beliebiges einzelnes Antioxidans mit Anteilen einnehmen zu müssen, die die Gesundheit schädigen könnten, in vivo erreicht werden kann. Zusätzlich ist der erhältliche maximale antioxidative Vorteil dem maximalen Vorteil, der durch die getrennte Verwendung von diesen Antioxidantien erhältlich ist, überlegen.
Tocopherole und Tocotrienole (manchmal insgesamt als Vitamin E oder „Tocole" bekannt) sind in Fett lösliche, biologische Membrankomponenten, die strukturell verwandt sind, wobei sie den gleichen aromatischen Chromanol"kopf" aufweisen. Während Tocopherole eine gesättigte Isoprenoidseitenkette aufweisen, sind Tocotrienolseitenketten ungesättigt. Tocole treten in α-(alpha), β-(beta), γ-(gamma) und δ-(delta)-Formen auf, die gemäß der Substitutionsposition an dem Phenolring eingeteilt werden. Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung wird der generische Begriff „Tocol" in Bezug auf jedes Isomer von Tocotrienol oder Tocopherol oder einer Salzform davon oder beliebiges Gemisch (racemisch oder andersartig) von solchen Molekülen verwendet. „δ-Tocole" sind eine Untergruppe von diesen Tocolen; d.h. jene mit einer δ-Monomethylgruppe an dem Benzolring der Chromaneinheit, und dieser Begriff ist in Bezug auf jedes Isomer von δ-Tocotrienol oder δ-Tocopherol oder Salzform davon oder jedes Gemisch (racemisch oder andersartig) von solchen Molekülen vorgesehen. Chemische Derivate und Homologe von Tocolen, einschließlich Tocolester, wie das Acetat, Succinat und Palmitat, sind zur Verwendung in der Erfindung auch annehmbar.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen umfassen mindestens eine Quelle (a) von δ-Tocotrienol und/oder δ-Tocopherol und sind vorzugsweise reich an diesen δ-Tocolen, wobei der δ-Tocotrienolgehalt oder δ-Tocopherolgehalt oder δ-Tocolgehalt von der δ-Tocolquelle, vorzugsweise mindestens 0,1 Gewichtsprozent der Quelle, vorzugsweise mindestens 1%, bevorzugter mehr als 2%, besonders bevorzugt mindestens 7% und gegebenenfalls mindestens 9%, auf das Gewicht der Quelle, ist.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist der δ-Tocolgehalt der δ-Tocolquelle (a) mindestens 25 Gewichtsprozent und vorzugsweise mindestens 50% von jenem der Quelle. Gegebenenfalls besteht die Tocolkomponente der Zusam mensetzung im Wesentlichen aus (beispielsweise mindestens 90%, vorzugsweise mindestens 95 Gewichtsprozent von) oder besteht aus δ-Tocotrienol und/oder δ-Tocopherol. Einzelne oder gemischte δ-Tocole können in im Wesentlichen reiner Form (beispielsweise ≥ 90% Reinheit, vorzugsweise ≥ 95% Reinheit) durch chemische Synthese oder durch Reinigung aus natürlichen Quellen gemäß üblichen Verfahren erhalten werden.
Tocolquellen, die besonders reich an δ-Tocolen sind, schließen Getreide (Gerste, Hafer, Reis, Weizen, Roggen, Amaranth) und Pflanzenöle, wie Reiskleieöl, Gerstenöl, Olivenöl und Palmöl, ein. Die Quelle kann an δ-Tocolen durch übliche Verarbeitungsmittel, wie jene, die in WO 91/17985 offenbart werden, angereichert sein. Bevorzugte Quellen für δ-Tocole zur Verwendung in der Erfindung sind die an Tocotrienol reichen Fraktionen (TRF; beispielsweise Nutriene^®, TocoTab P40^®, Gold-TriE^®, Palmvitee^®), die durch molekulare Destillation von jedem der vorstehend genannten Pflanzenöle erhalten werden. Normalerweise wird die δ-Tocolquelle, die eine Fraktion oder ein Extrakt sein kann, ein Gemisch von in Fett löslichen Molekülen umfassen, einschließlich eines Bereichs von Tocopherolen und Tocotrienolen. Optimal ist der Gesamttocolgehalt der Tocolquelle mindestens 30 Gewichtsprozent, vorzugsweise mindestens 50 Gewichtsprozent und besonders bevorzugt mindestens 70 Gewichtsprozent der Quelle. Um diese Konzentration von Tocolen zu erreichen, kann es notwendig sein, weiterhin kommerziell erhältliche Tocolprodukte, wie TRF, aufzukonzentrieren.
In einer Ausführungsform der Erfindung ist das Gewichtsverhältnis von Gesamttocotrienolen zu α-Tocopherol in der Zusammensetzung größer als 0,5, vorzugsweise größer als 1,0 oder auch größer als 2,0 oder 3,0. Gegebenenfalls ist die Zusammensetzung im Wesentlichen frei von α-Tocopherol, was bedeutet, dass weniger als 5%, vorzugsweise weniger als 2 Gewichtsprozent, des Gesamttocolgehalts α-Tocopherol ist.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist die Quelle (a) ausgewählt auf der Grundlage, dass das Gewichtsverhältnis von δ-Tocol : α-Tocopherol größer als 0,65, vorzugsweise mindestens 1,0, ist. Eine solche Quelle ist TocoTab P40^® (Fuji), ein TRF, hergestellt aus Palmöl durch ein Verfahren, das selektiv δ-Tocotrienol anreichert. Als ein Beispiel für eine δ-Tocolquelle mit einem sehr hohen Verhältnis von δ-Tocol : α-Tocopherol (> 1,5) kann Covi-Ox^TM T-30 P (ein Gemisch von Tocopherolen, vertrieben von Cognis GmbH) erwähnt werden. Durch Auswählen von Quelle (a) hinsichtlich eines hohen Verhältnisses von δ-Tocol : α-Tocopherol, ist es möglich, eine relativ große Dosis von antioxidierenden δ-Tocolen einzunehmen, ohne das Risiko, dass die tägliche Maximumaufnahme von α-Tocopherol, die durch die nationalen Gesundheitsbehörden empfohlen wird, überschritten wird.
Geeignete tägliche Dosen an Gesamttocol in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung sind bis zu 2000 mg, vorzugsweise 5 bis 1000 mg und liegen optimal im Bereich von 50 bis 500 mg, im Allgemeinen 100–300 mg. In einer Dosierungseinheit umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung vorzugsweise 0,1 bis 50 mg, bevorzugter 0,25 bis 20 mg und besonders bevorzugt 0,5 bis 15 mg δ-Tocol. Die bevorzugten täglichen Dosierungen von δ-Tocol sind bis zu etwa 1000 mg, gegebenenfalls 0,1 bis 500 mg, bevorzugter 0,25 bis 125 mg, gewöhnlich 0,5 bis 60 mg und gegebenenfalls 5 bis 25 mg. Wenn TRF als die Quelle (a) von δ-Tocol verwendet wird, wird es vorzugsweise in einer Menge von 10 bis 500 mg/Tag, bevorzugter 50–250 mg/Tag und besonders bevorzugt 20–100 mg/Tag, verbraucht. Bezüglich des Körpergewichts ist ein geeigneter täglicher Dosierungsbereich etwa 5 μg bis 5 mg δ-Tocol/kg, insbesondere etwa 0,1 bis 2 mg δ-Tocol/kg. Die tägliche Dosierung kann einer Einzeldosierungseinheit entsprechen oder kann durch mehrfache Dosierungseinheiten bereitgestellt werden.
Obwohl bemerkenswerte synergistische Effekte mit jedem von δ-Tocotrienol und δ-Tocopherol beobachtet werden, verhält sich das Erstere bei In-vitro-LDL-Oxidationsstudien etwas besser und kann deshalb bei niedrigeren Dosen verabreicht werden, um die gleiche Wirkung zu erreichen. Deshalb wird eine optimale erfindungsgemäße Zusammensetzung δ-Tocotrienol in Gegenwart oder Abwesenheit von anderen Tocolen umfassen.
Antioxidansquelle (b) der erfindungsgemäßen Zusammensetzung kann als mindestens eine Quelle oder Substanz, die polyphenolische Verbindungen umfasst, umfassend definiert werden. Diese polyphenolischen Verbindungen tragen zu den außergewöhnlichen antioxidierenden Wirkungen von Quellen (a) und (b), wenn in Kombination verwendet, bei.
In der Antioxidansquelle (b) kann/können eine einzelne polyphenolische Quelle oder Gemische von verschiedenen polyphenolischen Quellen vorliegen. Der Begriff „Polyphenol" kann als eine Verbindung definiert werden, die einen aromatischen Ring besitzt, der einen oder mehrere Hydroxysubstituenten trägt, einschließlich funktioneller Derivate. Antioxidantien, die Polyphenole enthalten, schließen Pflanzen-, Algen- oder Pilzextrakte oder Fraktionen, die reich an Polyphenolen sind, einschließlich Flavonoide (Isoflavone, Anthocyanine, Proanthocyanidine und Anthocyanidine, Flavane, Flavonole, Flavone und Flavanone), ein. Spezielle Beispiele für Bioflavonoide sind Catechine (Catechin, Epicatechin, Gallocatechin, Epigallocatechin, Epicatechingallat, Epigallocatechingallat), Quercetin, Rutin, Hesperidin und Genistein.
Chemisch synthetisierte oder gereinigte Polyphenole und Gemische davon können anstelle von Pflanzenextrakten verwendet werden. Polyphenole können aus natürlichen Quellen durch jedes geeignete Verfahren, das dem Fachmann bekannt ist, insbesondere unter Verwendung von Lösungsmitteln mit Lebensmittelsqualität, synthetisiert oder extrahiert werden. Flüssige und feste (beispielsweise Granulat- oder Pulverform) Extrakte sind geeignet.
In der Regel gilt, je größer der Gehalt an Polyphenolen in dem Extrakt, umso größer ist der beobachtete synergistische Effekt. Deshalb ist in einer Ausführungsform der Erfindung die in der Erfindung verwendete Antioxidansquelle (b) reich an Polyphenolen; d.h. mit einem Polyphenolgehalt von mindestens 50%, auf das Trockengewicht, vorzugsweise mindestens 65%, auf das Trockengewicht, und gegebenenfalls mindestens 75%, auf das Trockengewicht, von Quelle (b). Die Antioxidansquelle (b) kann im Wesentlichen aus Polyphenolen bestehen.
Insbesondere werden Kräuterinfusionen, Tees, Tisane und Extrakte (beispielsweise lyophilisierte Extrakte), die aus Blättern von verschiedenen Sorten hergestellt werden, für ihre durch Polyphenol bedingten, freien Radikalfängerwirkungen gelobt. Kräuterquellen, aus denen Antioxidanszubereitungen hergestellt werden können, schließen Materialien ein, die erhalten wurden von: Tee (Camellia sinensis und Camellia assaimica), Rooibos, Honeybush, Ginkgo biloba, Phyllanthus-Spezies, Catechu gambir, Urtica-Spezies, Rosmarin, Sago, Minze, usw. Camellia sinensis-Blätter sind besonders bevorzugt. Grüner Tee ist besonders wirksam, wie roter Tee, weißer Tee und Mohnai-Tee ist, jedoch können auch schwarzer Tee, Oolong-Tee, gelber Tee und Jasmin-Tee verwendet werden. Alle Arten von Pu Erh Tees und grünen Tees sind bevorzugt. Wenn die Quelle von Polyphenolen Blattmaterial ist, kann dieses Material frisch eingesammelte Blätter, frische Blätter, die sofort nach dem Sammeln getrocknet werden, frische Teeblätter, die vor dem Trocknen wärmebehandelt wurden, um jegliche vorliegende Enzyme zu inaktivieren, unfermentierter Tee, fermentierter Tee, Instanttee, Teefeststoffe, teilweise fermentierte Teeblätter und heiße oder kalte wässrige und alkoholische Extrakte (Tinkturen) von diesen Blättern und Gemische davon sein.
Polyphenole, die natürlicherweise in Camellia-Pflanzen und Extrakten davon vorkommen, sind zur Verwendung als Komponente (b) in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen be sonders bevorzugt. Eingeschlossen in diese Gruppe von Polyphenolen sind Catechine, nämlich Epicatechin, Epigallocatechin, Epicatechingallat und Epigallocatechingallat. Zuckersalze, Zuckerester und andere essbare, physiologisch verfügbare Derivate von Catechinen können gegen die natürlich vorkommenden Formen ausgetauscht werden.
Wirksame Extrakte (beispielsweise wässrig oder alkoholisch), als eine Quelle von Antioxidans (b), können aus Pflanzenteilen, einschließlich Blättern (Tees), roher oder gekochter ganzer Frucht, Beeren und Gemüse, Nüssen (beispielsweise Kolanüsse), den Häuten der Frucht, Fruchtfleisch (beispielsweise Orange, Pflaume, Mandarine, Pampelmuse, Traube), Fruchtrinde (beispielsweise Zitrusfrüchte), Schale, Schnitzel, Zapfen (beispielsweise Hopfen), Samen (beispielsweise Kakaobohnen, Kaffeebohnen, Silybum marianum) oder Steine, Rinde, Knospen (beispielsweise Syzygium aromaticum), Blüten (beispielsweise Cruciferous-Gemüse), Wurzeln, Rhizome und Knollen (beispielsweise Curcuma longa, Taraxacum officinale, Arctium lappa, Glycyrrhiza glabra, Zingiber officinalis), Stiele, und so weiter, erhalten werden. Traubenkernextrakt ist eine bevorzugte an Antioxidans reiche Quelle (b), welche reich an Proanthocyanidinen ist. Traubenhaut und Traubensaft (auch Rotweinextrakt), Meerespinienrinde, Äpfel, Pflaumen, Kirschen, Rotkohl, Wolfsbeere, Weißdornbeere, Hagebutten, Heidelbeere, Preiselbeere, Holunderbeere und Blaubeere und anderes Obst und Gemüse mit roter, blauer oder purpurner Pigmentierung sind andere Quellen für Proanthocyanidine. Gemüse, das reich an Polyphenolen ist, schließt Pfeffer (beispielsweise Chilipfeffer), Spinat, Brokkoli, Rosenkohl, Kohl, Grünkohl, Rettiche, Rüben und Brunnenkresse ein. Extrakte, die aus Früchten und Gemüse hergestellt wurden, können auch den Vorteil des Bereitstellens von in Wasser löslichen Vitaminen (C- und B-Komplex) und Polyphenolen aufweisen.
Interessanterweise wurde, wenn Traubenkernextrakt und Extrakt von grünem Tee in Kombination als Antioxidanskomponente (b) der Zusammensetzung verwendet werden, die Synergie mit δ-Tocolen vermindert, wenn mit Extrakt von grünem Tee allein verglichen wurde. Deshalb ist es zur optimalen Wirksamkeit bevorzugt, dass, wenn grüner Tee oder Extrakte davon als Antioxidansquelle (b) verwendet werden, Extrakte von jedem Teil der Traubenfrucht aus der Zusammensetzung weggelassen werden, und umgekehrt. Die Verminderung des synergistischen Effekts kann ein übliches Auftreten sein, wenn verschiedene Quellen von Polyphenolen in Kombination verwendet werden. Deshalb ist es im Allgemeinen bevorzugt, dass eine einzige polyphenolische Antioxidansquelle in der Zusammensetzung vorliegt.
Eine Dosierungseinheit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung umfasst vorzugsweise 1 mg bis 500 mg Polyphenole als Antioxidans (b) in reiner Form oder in einem Extrakt. Tägliche Dosen liegen in geeigneter Weise bei mindestens 1 mg, vorzugsweise 10 mg bis 2000 mg, bevorzugter 100 mg bis 1000 mg und besonders bevorzugt 250 mg bis 700 mg.
In der erfindungsgemäßen Zusammensetzung liegt die polyphenolische Antioxidansquelle (b) in idealer Weise im gleichen Gewicht (oder Konzentration) oder im Gewichtsüberschuss (Konzentrationsüberschuss), bezogen auf den Gesamttocolgehalt der Zusammensetzung, vor, beispielsweise in einem Gewichtsverhältnis von mindestens 1 : 1, vorzugsweise mindestens 1,5 : 1, bevorzugter mindestens 3 : 1 und besonders bevorzugt mindestens 6 : 1.
Vorzugsweise liegt das Trockengewichtsverhältnis von Polyphenolen zu δ-Tocolen in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung im Bereich 1 : 1 bis 200 : 1, bevorzugter 10 : 1 bis 100 : 1 und besonders bevorzugt 25 : 1 bis 50 : 1.
In einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die erfindungsgemäße Zusammensetzung eine Quelle von δ-Tocol(en), in Kombination mit einem oder mehreren Teecatechinen, oder Tee (beispielsweise grüner Tee oder Pu Erh Tee) oder Extrakten davon oder Gemischen davon als Antioxidansquelle (b). Eine geeignete Quelle für δ-Tocol(e) ist ein Gemisch von kon zentrierten Tocopherolen, wie jenes, das unter dem Namen Covi-Ox ^TMT-30 P (Cognis GmbH) vertrieben wird.
Wenn δ-Tocotrienol das einzige δ-Tocol in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ist, kann die Antioxidansquelle (b) Zitrusflavonoide umfassen, wird jedoch zusätzlich andere(s) Polyphenol(e) umfassen.
Ohne durch Theorie gebunden sein zu wollen, ist eine mögliche Erklärung für die unter Anwendung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen beobachtete Synergie, dass es eine Kaskade von Redoxzyklen gibt, die in dem Serum auftreten. Gemäß dieser Theorie schützt die Oxidation von endogenem α-Tocopherol in den LDL-Komplexen die Oxidation von LDL. Andere Tocole, insbesondere δ-Tocole, regenerieren α-Tocopherol auf Kosten dessen, indem sie selbst oxidiert werden. Oxidierte Tocole können durch polyphenolische Antioxidantien oder deren Metaboliten wieder aufbereitet werden, und nur wenn diese Antioxidantien nach einer längeren Verzögerungsphase erschöpft sind, beginnt irreversible LDL-Oxidation stattzufinden.
Es wurde postuliert, dass Ascorbinsäure, ein bekanntes in Wasser lösliches Antioxidans, oxidiertes α-Tocopherol in den LDL-Komplexen wieder aufbereitet. Jedoch, wenn Ascorbinsäure in unserem In-vitro-Assay getestet wurde, wurde von ihr nicht gefunden, dass sie synergistische Antioxidanseigenschaft aufweist, wenn in Kombination mit TRF oder gereinigtem δ-Tocol verwendet. Der gleiche Mangel an Synergie wird mit N-Acetylcystein, einem weiteren, gut bekannten, in Wasser löslichen Antioxidans, und mit α-Liponsäure, die ein in Fett lösliches Antioxidans ist, beobachtet. Keines von diesen drei Antioxidantien ist polyphenolisch, was vermuten lässt, dass die Synergie mit dem Vorliegen von Polyphenolen in dem Antioxidansmittel (b) in Beziehung steht.
Die Beobachtung, dass δ-Tocole bessere synergistische Partner sind, als jedes von den anderen Tocolisomeren, lässt vermuten, dass die einzige Methylgruppe an dem Phenolring der δ-Tocole ein wichtiger Faktor bei dieser Aktivität ist. Wenn die Wiederaufbereitungstheorie korrekt ist, ist der engere Zusammenhang, dass die Chemie der δ-Tocole es ihnen ermöglicht, LDL-α-Tocopherol zu reduzieren, oder durch in Wasser lösliche Antioxidantien, in einer wirksameren Weise als andere Tocole, reduziert zu werden, oder mehrere Redoxzyklen einzugehen.
Die Antioxidanswirksamkeit von α-Tocopherol ist nicht auf die LDL-Oxidation begrenzt, und es ist im Allgemeinen als ein Schutzvitamin für Lipide und insbesondere Membranphospholipide bekannt. Deshalb kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Träger und Ergänzung von endogener α-Tocopherol-Antioxidansaktivität in verschiedenen Stellen und Geweben um den Körper verwendet werden. Die Zusammensetzung kann in ernährungsmäßiger, pharmazeutischer oder kosmetischer Form verabreicht werden. Obwohl enterale Verabreichung (insbesondere oral) bevorzugt ist, ist auch örtliche Verabreichung denkbar, ob als eine pharmazeutische Salbe oder als eine Hautlotion oder als ein Kosmetikum.
Vorzugsweise werden die Komponenten (a) und (b) zusammen in pharmazeutischer Form oder als eine Nahrungsergänzung in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger bereitgestellt. Als Alternative kann jede Komponente getrennt bereitgestellt werden, beispielsweise in Kitform, zur getrennten, gleichzeitigen oder aufeinander folgenden Verabreichung. Die Pharmazeutika oder Ergänzungen sind Zusammensetzungen zur enteralen (oralen, nasalen oder rektalen), parenteralen oder örtlichen Verabreichung und können in flüssiger oder fester Form vorliegen.
Typische Formulierungen umfassen (in Gewichtsprozent) beispielsweise 0,001% bis 100%, vorzugsweise etwa 0,1% bis 50 Gewichtsprozent, von jedem der Wirkbestandteile (a) und (b). Gegebenenfalls sind die wirksamen Antioxidanskomponenten der pharmazeutischen oder Nahrungsergänzung nur Tocolquelle (a) und Antioxidansquelle (b). In einigen Fällen machen die Tocolquelle (a) und Antioxidansquelle (b) zusammen > 10%, vorzugsweise > 25% und bevorzugter > 50 Gewichtsprozent der Ergänzung aus.
Pharmazeutische Zusammensetzungen und Nahrungsergän zungen können in Form von Hart- oder Weich(Gel)kapseln, Tabletten, Dragees, Säckchen, Pulvern, Pastillen, Sirupen, flüssigen Suspensionen, Emulsionen und Lösungen in geeigneten Dosierungsformen hergestellt werden.
Orale pharmazeutische oder Nahrungsergänzungsformen können durch übliche Compoundierungsverfahren, die auf dem pharmazeutischen Fachgebiet bekannt sind; das heißt, durch Vermischen der Wirksubstanzen, zusammen mit essbaren pharmazeutisch verträglichen festen oder flüssigen Trägern und/oder Exzipienten, beispielsweise Füllstoffen, wie Cellulose, Lactose, Saccharose, Mannit, Sorbit und Calciumphosphaten und Bindemitteln, und Bindemitteln, wie Stärke, Gelatine, Tragacanth, Methylcellulose und/oder Polyvinylpyrrolidon (PVP), hergestellt werden. Wahlweise Additive schließen Gleitmittel und Fließkonditionierer (beispielsweise Kieselsäure, Siliziumdioxid, Talkum, Stearinsäure, Magnesium/Calciumstearate, Polyethylenglycol-(PEG)-Verdünnungsmittel, Zerfallsmittel (beispielsweise Stärke, Carboxymethylstärke, vernetztes PVP, Agar, Alginsäure und Alginate), färbende Mittel, Geschmacksmittel und schmelzende Mittel ein. Drageekerne werden mit geeigneten, gegebenenfalls enterischen, Beschichtungen ausgestattet; es werden unter anderem konzentrierte Zuckerlösungen verwendet, die Gummi arabicum, Talkum, PVP, PEG und/oder Titandioxid enthalten können, oder Beschichtungslösungen in geeigneten organischen Lösungsmitteln oder Lösungsmittelgemischen, oder für die Herstellung von enterischen Beschichtungen, Lösungen von geeigneten Cellulosezubereitungen, wie Acetylcellulosephthalat oder Hydroxypropylmethylcellulosephthalat. Farbstoffe oder Pigmente können beispielsweise für Indentifizierungszwecke zu den Tabletten oder Drageebeschichtungen, oder um verschiedene Dosen des Wirkbestandteils anzuzeigen, gegeben werden.
Andere oral verabreichbare pharmazeutische Zusammensetzungen sind Hartgelatinekapseln und auch weiche, verschlossene Kapseln, die aus Gelatine und einem Weichmacher, wie Glycerin und Sorbit, bestehen. Die Hartgelatinekapseln können den Wirkbestandteil in Form von Granulaten, beispielsweise in Anmischung mit Füllstoffen, wie Lactose, Bindemitteln, Gleitmitteln und, falls erwünscht, Stabilisatoren, umfassen. In weichen Kapseln werden die Wirkbestandteile vorzugsweise in geeigneten Flüssigkeiten, wie Fettöle, Paraffinöl oder flüssigen Polyethylenglycolen, gelöst oder suspendiert; gleichsam ist es möglich, Stabilisatoren zuzusetzen.
Da die Zusammensetzung hydrophile und hydrophobe Verbindungen umfasst, kann ein üblicher Emulgator oder ein übliches Tensid angewendet werden, um die Wirkbestandteile innerhalb des Endprodukts gleichförmig zu dispergieren. Gegebenenfalls können die hydrophoben Tocole in Vesikel oder Mizellen zur Einarbeitung in fettarme oder auf Wasser basierende Formulierungen eingekapselt werden. Ein Verfahren zum Herstellen von sprühgetrockneten Pulvern, die Tocotrienole zum Pressformen enthalten, wird in WO 00/27393 beschrieben und wird hierin durch diesen Hinweis einbezogen. Wenn Fette oder Öle als Lösungsmittel verwendet werden, muss das in Wasser lösliche, polyphenolische Antioxidans zum Sichern von Dispersion behandelt werden, beispielsweise um zu gewährleisten, dass die Teilchengröße klein ist, und/oder durch Herstellen einer Emulsion, unter Anwendung eines Tensids mit einem HLB-Wert (Hydrophilizität-Lipophilizität-Ausgleich) unter 10.
Wenn die erfindungsgemäße Zusammensetzung äußerlich für kosmetische Haarpflege- oder Hautpflege/Hautschutzzwecke aufgetragen wird, kann sie in Form einer Creme, eines Gels, einer Salbe, eines festen Stifts, einer Lotion oder einer Lösung, gegebenenfalls zusammen mit Emulgatoren, vorliegen. Typische Zusammensetzungen schließen Lotionen, die Wasser und/oder Alkohole und Erweichungsmittel, wie Kohlenwasserstofföle und Wachse, Silikonöle, Pflanzen-, Tier- oder Meeresfette oder -öle, Glyceridderivate, Fettsäuren oder Fett säureester, Alkohol oder Alkoholether, Lanolin und Derivate, mehrwertige Alkohole oder Ester, Wachsester, Sterole, Phospholipide und dergleichen, enthalten, ein. Übliche in Wasser unlösliche oder wässrige Grundlagen für Salben und Cremes können verwendet werden: beispielsweise flüssiges Paraffin, Petrolatum, Wollwachs, Ölsäureoleylester und dergleichen. Cetylstearylalkohol und andere emulgierende Alkohole können angewendet werden, wie Nicht-Alkohol-Emulgatoren, wie Tween 20, Tween 80 und Lecithin. Falls erwünscht, kann eine Verbindung, die Eindringung von UV-Strahlung verhindert oder diese absorbiert, in die Zusammensetzung eingeschlossen sein, wobei einige Beispiele PABA, TiO₂, ZnO₂ sind. Eine repräsentative örtliche Zubereitung kann 0,1 bis 20 Gewichtsprozent Tocole und mindestens eine Äquivalentmenge, auf das Gewicht einer Antioxidansquelle (b), enthalten.
Die erfindungsgemäßen synergistischen Zusammensetzungen können leicht in Nährmittelformulierungen, typischerweise Nutrazeutika, oder funktionelle Nahrungs- und Getränkeprodukte eingearbeitet werden. Beispielsweise kann eine δ-Tocolquelle zu einem ähnlichen Nahrungsprodukt hinzugefügt werden, das natürlicherweise reich an Polyphenolen ist, wobei einige Beispiele sind: grüner Tee, Kräutertees, Kaffee, Kakao, Traubensaft, Holunderbeerensaft, Zitrussäfte, Beerensäfte, Rotwein, Bier und Schokolade. Alternativ werden gereinigte Polyphenole oder eine Quelle von Polyphenolen zu einem üblichen Nahrungs- oder Getränkeprodukt gegeben, das reich an δ-Tocolen ist, wie Kochöle, Margarine, Vollkorn-, Getreide- und Vollkornmehlprodukte. Geeignete Produktformate schließen gelbe Fettaufstriche, Salatdressings, Müsli, Granola, Müsliriegel, Cracker, Biskuits und Kekse ein. Eine weitere Option ist es, Quellen von sowohl synergistischen Partnern eines Typs von Nahrung oder Getränk einzuarbeiten, welcher arm an endogenen Polyphenolen und δ-Tocolen ist, wie Milchprodukte (Käse, Butter, Milch, Milchshakes, Joghurt, Smoothies, Eiscreme, Creme) und Süßigkeiten (Bonbons, Kaugummi, Desserts, milch freie Whipprodukte, Sorbets, Zuckerglasur, usw.). Im Allgemeinen umfassen die erfindungsgemäßen Nahrungs- und Getränkeprodukte Nährstoffmengen von einem oder mehreren von Kohlenhydraten, Protein, Faser und Fett.
Der Polyphenolgehalt eines fertigen flüssigen Produkts (Getränk) wird normalerweise im Bereich von etwa 0,01 bis 1 Gewichtsprozent des Produkts, vorzugsweise 0,025 bis 0,5 Gewichtsprozent, liegen. In einem festen Produkt (ein Nahrungsmittel oder wieder herstellbares Getränkepulver) ist der gewöhnliche Bereich des Polyphenolgehalts 0,05% bis 5%, vorzugsweise 0,1 bis 2%, auf das Gewicht.
Essbare oder trinkbare Produkte der Erfindung werden im Allgemeinen 0,001 bis 0,5%, vorzugsweise 0,01% bis 0,25 Gewichtsprozent, des fertigen Produkts von δ-Tocolquelle (a) enthalten.
Die erfindungsgemäßen Getränkezusammensetzungen können hergestellt und zum Verzehr durch den Verbraucher in Form eines Sirups, eines wässrigen Konzentrats, eines trockenen Pulvers oder (aufschäumenden) Granulaten, die mit Wasser verdünnt werden, um ein Getränk zu ergeben, oder als eine Tablette, die mit Wasser genommen werden soll, hergestellt und verkauft werden.
Nahrungs- und Getränkeprodukte, die eine Kombination von δ-Tocolquelle (a) und Antioxidansquelle (b) enthalten, sind für den Verbraucher hinsichtlich der damit verbundenen Gesundheitsvorteile nicht nur attraktiv, sondern haben auch die vorteilhafte Eigenschaft des Besitzens von langer Lebensdauer aufgrund des starken Antioxidansgehalts. Folglich muss es nicht erforderlich sein, künstliche Konservierungsmittel den Nahrungs- und Getränkeprodukten der Erfindung zuzusetzen, oder bei jedem Verhältnis können Mengen von diesen Additiven bei einem Minimum gehalten werden. Fett und Öl enthaltende Nahrungsprodukte sind besonders empfindlich, durch die Entwicklung von Ranzigkeit verdorben zu werden, und sind deshalb vorrangige Ziele für den Einschluss der synergistischen Anti oxidanszusammensetzung der Erfindung, gegebenenfalls in Verbindung mit α-Tocopherol.
Falls erwünscht, können andere Wirkbestandteile mit der Tocol/Antioxidansquelle (b) der erfindungsgemäßen Zusammensetzung kombiniert werden. Besonders bevorzugt sind jeder natürliche Bestandteil oder jedes natürliche Arzneimittel, von dem bekannt ist, dass er/es eine vorteilhafte Wirkung auf das Senken von Cholesterinspiegeln oder beim Bekämpfen von Herzkrankheit aufweist. Es kann jedoch ratsam sein, β-Carotin aus der Zusammensetzung auszuschließen, wegen Bedenken hinsichtlich Karzinogenizität. Andere erwünschte Komponenten der Zusammensetzung sind Faktoren, die das Stoppen freier Radikale unterstützen oder ergänzen, wie bestimmte Mineralien, Vitamine und Metaboliten.
Die erfindungsgemäßen essbaren Produkte umfassen gegebenenfalls übliche Nahrungsadditive, wie beliebige von: Emulgatoren, Stabilisatoren, Süßungsmitteln, Geschmacksmitteln, färbenden Mitteln, Konservierungsmitteln, Chelatisierungsmitteln, osmotischen Mitteln, Säuerungsmitteln, Verdickungsmitteln, Texturisierern, und so weiter.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann mit vorteilhaften Wirkungen zur Prävention, zum Verlangsamen des Fortschritts von oder Behandeln von jeder Erkrankung, die mit freier Radikalschädigung verbunden ist, insbesondere Schädigung, die sich in der Lipidperoxidation ergibt, verabreicht werden. Diese Kategorie schließt CHD, Krebs (beispielsweise Sarkome und Karzinome des Darms, der Bauchspeicheldrüse, Brust, des Eierstocks, der Prostatadrüse, Lunge, usw.), Rheumatismus und Entzündung, Hepatitis, Alkoholismus, Alzheimer-Krankheit, Demenz, Diabetes, Multiple Sklerose, HIV und AIDS, Collagenabbau, Linsentrübung, Makuladegeneration, beschleunigtes Altern, Neuropathien, Myopathien, ischämische Reperfusionsschädigung, hämorrhagischen Schock, Gingivitis, Gesichtsherpes, Psoriasis, Ekzem und Seborrhöe ein. Die Erfindung kann auch angewendet werden, um den Wirkungen der Bildung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) entgegenzuwirken, was immer die Ursache ist, einschließlich jene, die sich aus Umweltverschmutzung oder -reizung ergibt, und aus Behandlung mit neoplastischen Arzneimitteln.
Insbesondere kann diese neue Behandlungsform angewendet werden, um CHD und seine darunter fallenden Ursachen zu verhindern oder zu behandeln. Aufgrund der direkten Verbindung zwischen Verhinderung von LDL-Oxidation und Verzögerung von Arteriosklerose werden Schlaganfallpatienten und Herzinfarktpatienten oder jene mit einem Risiko für diese Zustände von der Behandlung mit den beanspruchten Zusammensetzungen besonders profitieren. Diabetes Typ 2 hat ein Übergewicht an LDL kleiner Dichte, was die Oxidation von LDL prädisponiert, und zusätzlich geringere Anteile an endogenem α-Tocopherol aufweist. Deshalb ist diese Patientengruppe eine Zielgruppe, die für die Behandlung gemäß dem vorliegenden Verfahren besonders gut geeignet ist.
Die Einnahme der erfindungsgemäßen Zusammensetzung kann als ein kosmetisches Behandlungsverfahren, insbesondere, um der Entwicklung von Falten, entgegenzuwirken, die Hautalterung zu verzögern und das Gesamtaussehen von Haut, Augen und Haar zu verbessern, angewendet werden.
Raucher und Sonnenbadende sind besonders anfällig für Krebs und Alterung der Haut und anderer Gewebe, als Folge der Erzeugung von freien Radikalen. Zu einigem Ausmaß können sie dies durch Halten einer erhöhten Aufnahme von Antioxidantien in ihren Nahrungsmitteln kompensieren, was durch Konsumieren der erfindungsgemäßen Zusammensetzung leicht erreichbar ist.
Von körperlicher Ertüchtigung wird angenommen, dass sie eine Erhöhung in der Erzeugung freier Radikale durch eine Erhöhung der Sauerstofferzeugung in der mitochondrialen Elektronentransportkette oder durch eine Erhöhung in der metallkatalysierten Erzeugung freier Radikale aufgrund von mechanischer und morphologischer Schädigung der Muskeln auslöst. Es wurde berichtet, dass Lipid- und Proteinoxidation eine Folge von längerer körperlicher Ertüchtigung ist. Die vorliegende Erfindung stellt ein zweckdienliches Verfahren zum Vermeiden oder Minimieren von Oxidationsschädigung, die nach physikalischer Aktivität folgt, bereit.
Gemäß der vorliegenden Erfindung umfasst ein Verfahren zum Verhindern oder Behandeln eines medizinischen Zustands, der durch Erzeugung von freien Radikalen in dem Säugerkörper verursacht wird, Verabreichen an eine Person bei Bedarf solcher Behandlung einer wirksamen Menge einer Kombination von (a) einer Tocolqueile, die δ-Tocole umfasst, und (b) einer Antioxidansquelle, die Polyphenole umfasst, worin δ-Tocole vorzugsweise mehr als 2 Gewichtsprozent der Quelle (a) ausmachen. Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung umfasst ein Verfahren zum Verhindern von oxidativer Gewebsschädigung bei einem Säuger aufgrund physikalischer Aktivität Verabreichung einer Tocolquelle, die δ-Tocole (vorzugsweise mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol) in Kombination mit einer Polyphenol enthaltenden Antioxidansquelle umfasst.
Beispiele
Oxidation von LDL in vitro
Plasma wurde aus dem Blut von gesunden weiblichen und männlichen Probanden erhalten und wurde gefroren. Nach Auftauen wurde das Plasma auf eine Dichte von 1,057 mit festem KBr eingestellt und mit 0,15 M NaCl (Dichte = 1,006 kg/l) überschichtet. Die Röhrchen wurden dann bei 400 000 G bei 15°C für 2 Stunden zentrifugiert. Die obere Fraktion (Chylomikrons + VLDL) wurde entfernt. Um die LDL-Fraktion zu isolieren, wurde das verbleibende Plasma auf eine Dichte von 1,063 kg/l mit fester KBr eingestellt und das Röhrchen wurde mit KBr-Lösung (Dichte = 1,063) gefüllt. Nach Zentrifugierung bei 400 000 G bei 15°C für 2 Stunden wurde die LDL-Fraktion, die oben schwamm, gesammelt.
Die LDL-Fraktion enthielt zwischen etwa 300–700 μg/ml Proteine. Die Fraktionen wurden mit ethanolischen Lösungen, die verschiedene Extrakte enthielten, oder mit dem gleichen Volumen reinem Ethanol (Kontrolle) ergänzt. Die Oxidation wurde durch Zusetzen von frisch hergestellter CuSO₄ Lösung (25 μMol/l Endkonzentration) bei 37°C gestartet. Die Kinetik der Oxidation von Lipoprotein wurde durch kontinuierliches Verfolgen der Änderung in der Absorption bei 234 nm (bei 37°C) an einem UV/VIS-Spektrophotometer, das mit der Erhöhung in der konjugierten Dienabsorption korreliert, bestimmt. Die wirksame Konzentration des Wirkstoffmittels, bei der 50° der Reaktion beobachtet wurden, wird als der EC₅₀ definiert.
Die für die Bildung von Dien erforderliche Zeit wird als die Verzögerungsphase definiert. Je länger die Verzögerungsphase, umso besser der Schutz von LDL gegen Oxidation. Da angenommen wird, dass LDL-Oxidation zur Entwicklung von Arteriosklerose beiträgt und mit dem Risiko der Entwicklung von koronarer Herzkrankheit (CHD) korreliert, ist jeder Faktor, der die Oxidation von LDL in dem In-vitro-Assay verzögert, ein starker Kandidat zur Verwendung in einem Arzneimittel, einer Nahrungs- oder Diätergänzung zur Behandlung oder Verhinderung von diesen medizinischen Zuständen.
Konzentrations-Reaktions-Kurven für das LDL-Oxidationsassay wurden für jede der Tocolzubereitungen getrennt aufgetragen und für die in Wasser löslichen Antioxidanszubereitungen (siehe 1 bis 5). In jedem Versuch wurde der Tocotrienolgehalt der Tocolzubereitungen (TRF) auf 0,05 oder 0,1 μg/ml standardisiert.
Wie in 1 ersichtlich werden kann, sind Extrakte von grünem Tee (GT, Greenselect^®) und Traubenkernextrakt (GS, Leucoselect^®), beide bezogen von Indena, mindestens gleichwertig in der Antioxidansstärke zu Tocolen (in diesem Fall Palmöl TRF „Gold Tri-E", das 7 Gewichtsprozent δ-Tocotrienol enthält und von Sugro, „S", bezogen wird) in diesem Assay (d.h. sie haben niedrigere EC₅₀-Werte). Besondere Kombinationen von diesen zwei Klassen von Antioxidantien wurden in dem gleichen Assay getestet. Zusätzliche Antioxidanseffekte wurden durch eine Verzögerungszeit, die der Produktzugabe der Verzögerungszeiten der einzelnen Komponenten entspricht, an gezeigt. Tatsächlich wurde Synergie beobachtet; d.h. die Verzögerungszeit, die mit der Kombination von GT/TRF und GS/TRF erreicht wurde, war signifikant länger als die Summe der einzelnen Verzögerungszeiten.
(Sugro TRF wurde bei einer äquivalenten Tocotrienolkonzentration von 0,1 μg/ml verwendet. Grüner Tee und Traubenkernextrakte wurden bei einer Konzentration von 0,4 μg/ml verwendet, ausgenommen im Fall, wo grüner Tee und Traubenkern zusammen verwendet wurden, wenn jeder bei einer Konzentration von 0,2 μg/ml verwendet wurde.)
Die in 2 gezeigten Ergebnisse zeigen, dass Synergie zwischen Extrakt von grünem Tee (GT) und TRF (Fuji, ungefähr 9 Gewichtsprozent δ-Tocotrienol) bei Konzentrationsverhältnissen von 1 : 1 und höher aufzeigbar ist. In den Versuchen wurde Fuji TRF bei einer äquivalenten Tocotrienolkonzentration von 0,1 μg/ml verwendet, und Extrakt von grünem Tee wurde bei einer Konzentration von 0,1, 0,4 oder 0,6 μg/ml verwendet.
3 veranschaulicht, dass gereinigte δ-Tocole, wenn mit Extrakt von grünem Tee (GT) kombiniert, synergistische Antioxidans-Wechselwirkungen in dem LDL-Oxidationsassay zeigen. Hier ergeben die synergistischen Eigenschaften dieser Kombination eine bemerkenswerte Ausdehnung der Verzögerungszeit, verglichen mit der Summe der einzelnen Komponenten-Verzögerungszeiten. Die Verzögerungsphase, die mit gereinigten δ-Tocolen beobachtet wurde, war auch signifikant und konsistent länger, im Vergleich mit jener, die unter Verwendung von anderen Tocolisomeren, in Kombination mit Extrakt von grünem Tee unter ansonsten identischen Bedingungen beobachtet wurde. δ-Tocole wurden bei einer Konzentration von 0,05 μg/ml und grüner Tee bei 0,3 μg/ml verwendet.
4 zeigt, dass sowohl grüner Tee (GT) als auch roter Pu Erh Tee (RT) in der Lage sind, eine längere LDL-Oxidationsverzögerungsphase einzuleiten, wenn mit δ-Tocotrienol (δ-T) kombiniert. Die Tees wurden bei einer Konzentrati on von 0,3 μg/ml verwendet und δ-Tocotrienol wurde bei einer Konzentration von 0,1 μg/ml in dem Assay verwendet.
In 5 wird gezeigt, dass reines Catechin (Epicatechin von Sigma) gegen Extrakt von grünem Tee als ein polyphenolischer Antioxidanspartner mit δ-Tocotrienol in dem LDL-Oxidationsassay ausgetauscht werden kann. δ-Tocotrienol wurde bei einer Konzentration von 0,1 μg/ml verwendet und Epicatechin wurde bei 0,3 μg/ml verwendet.

Claims

Zusammensetzung, umfassend ein Gemisch von (a) einer Quelle von δ-Tocol, umfassend mehr als 2 Gewichtsprozent δ-Tocol; und (b) Polyphenolen, mit der Maßgabe, dass, wenn (b) Zitrusflavonoide umfasst, (a) δ-Tocopherol umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin eine Dosierungseinheit 0,5 bis 50 mg δ-Tocol umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, umfassend in einer täglichen Dosierung: (a) mindestens 5 mg von δ-Tocopherol oder von einem Gemisch von δ-Tocotrienol und δ-Tocopherol.
Zusammensetzung nach einem vorangehenden Anspruch, worin das Trockengewichtsverhältnis von (b) : (a) ≥ 1 ist.
Zusammensetzung nach einem vorangehenden Anspruch, die ein oder mehrere Flavonoide umfasst.
Zusammensetzung nach einem vorangehenden Anspruch, die ein oder mehrere Catechine umfasst.
Zusammensetzung nach einem vorangehenden Anspruch, worin die Quelle von Komponente (a) eine an Tocotrienol reiche Fraktion (TRF) von Palmöl oder Reiskleieöl oder ein Gemisch von Tocopherolen ist, und die Quelle von Polypheno len (b) grünen Tee oder Pu Erh Tee oder Extrakte oder Gemische davon umfasst.
Zusammensetzung nach einem vorangehenden Anspruch, die eine einzige polyphenolische Antioxidansquelle umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nahrungsergänzung, umfassend die Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Pharmazeutische Zusammensetzung oder Nahrungsergänzung nach Anspruch 9, worin die Antioxidanskomponenten der Zusammensetzung oder Ergänzung im Wesentlichen aus (a) und (b) bestehen.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Verwendung als Arzneimittel.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 bei der Herstellung eines Arzneimittels oder einer Nahrungsformulierung für die Prävention oder Behandlung eines Krankheitszustands oder einer körperlichen Schädigung, die mit der Erzeugung von freien Radikalen verbunden sind.
Verwendung nach Anspruch 12, wobei der Krankheitszustand Arteriosklerose, Rheumatismus oder Krebs ist.
Verwendung nach Anspruch 12, wobei die körperliche Schädigung durch physische Aktivität, Aussetzen der Sonne oder Rauchen verursacht ist.