DE60122156T2

DE60122156T2 - Neue disaccharide mit anti-arthritischer wirkung

Info

Publication number: DE60122156T2
Application number: DE60122156T
Authority: DE
Inventors: Francisco Javier Vila Pahi; Francesc Flores Salgado; Ramon Ruhi Roura; Narcis Arnau Pastor; Ricardo Lucas Rodriguez; Manuel Martin Lomas
Original assignee: Bioiberica SA
Current assignee: Bioiberica SA
Priority date: 2000-07-13
Filing date: 2001-07-05
Publication date: 2007-08-23
Anticipated expiration: 2021-07-06
Also published as: CA2415752A1; AU2001269139A1; DE60122156D1; ATE335752T1; EP1300411B1; ES2167251A1; PT1300411E; EP1300411A1; US20030181400A1; WO2002008239A1; US6680304B2; CA2415752C; ES2267788T3; DK1300411T3; ES2167251B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Disaccharide, die Solvate und pharmazeutisch annehmbare Salze davon sowie diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen. Die Erfindung betrifft ebenso ein Verfahren zur Herstellung der neuen Disaccharide sowie ihre therapeutische Verwendung.
STAND DER TECHNIK IN BEZUG AUF DIE ERFINDUNG
Arthrose (Osteoarthritis) ist die gängigste artikuläre rheumatische Erkrankung, welche die meisten Menschen mit einem Alter von über 65 Jahren betrifft, die durch einen schrittweisen Abbau des Knorpelgewebes zusammen mit dem Auftreten von Entzündungen und Schmerzen gekennzeichnet ist. Der Begriff Arthrose beschreibt eine Erkrankung, in der der hyaline Knorpel der Gelenke zerstört ist.
Derzeit konzentriert sich die Therapie auf eine Linderung der Symptome, da bisher kein Mittel gefunden werden konnte, welches eine erwiesene Verminderung des Fortschreitens der Zerstörung des Knorpels bereitstellt, obwohl es für Chondroitinsulfat und Hyaluronsäure einige klinische Beweise gibt.
Die Substanzen, welche auf die Symptome wirken, umfassen: schnell wirkende Substanzen, wie Analgetika, nichtsteroidale entzündungshemmende Arzneimittel (NSAID) bzw. nichtsteroidale Antiphlogistika (NSAP) und Kortikoide, sowie Substanzen, welche eine etwas geringere Wirkung besitzen, die als SYSADOA (Symptomatic Slow Acting Drug for Osteoarthritis) bekannt sind (M. G. Lequesne, Rev. Rhum. (Eng./Ausg.), 61, 69–73 (1994)) und die Hyaluronsäure, Chondroitinsulfat und Glucosaminsulfat umfassen.
Symptomatisch langsam wirkende Arzneimittel besitzen den zusätzlichen Vorteil, dass sie sicherer sind als NSAIDs bzw. NSAP (E. Maheu, European Journal of Rheumatology and Inflammation, 15, 17–24 (1995)) und dass sie eine länger anhaltende Wirkung aufweisen, welche sogar einige Monate nach Beendigung der Behandlung weiter besteht.
Kürzlich haben klinische Versuche, welche mit Hyaluronsäure (V. Listra et al., Osteoarthritis Cart., 5, 153–160 (1997)) und mit Chondroitinsulfat (G. Verbruggen et al., Osteoarthritis Cart., 6 (Supplement A), 37–38 (1998)) durchgeführt wurden, zum ersten Mal einen Nachweis der Möglichkeit geliefert, dass diese zwei Verbindungen, die, außer dass sie als SYSADOA wirken, den Verlauf von arthrotischen Erkrankungen beeinflussen und verzögern können (chondro-protektive Mittel).
Hyaluronsäure ist ein Nichtsulfat-Glucosaminglykan natürlichen Ursprungs mit einer polymeren Struktur, welche aus Disacchariden von N-Acetylglucosamin und Glucuronsäure aufgebaut ist.
Hyaluronsäure wird aus Säugerorganen und/oder -geweben extrahiert. Ein bekanntes Problem liegt in der Tatsache, dass in Abhängigkeit der Art des Erhalts das Molekulargewicht des Produkts variieren kann, was zusammen mit der Tatsache, dass sie aus unterschiedlichen Quellen stammen kann, bedeutet, dass unterschiedliche Hyaluronsäuren existieren, welche dieselben klinischen Wirkungen aufweisen können oder eben nicht.
Die Disaccharide der vorliegenden Erfindung sind den in der polymeren Struktur von Hyaluronsäure vorliegenden Dimeren dahingehend verwandt, dass sie Disaccharide mit β-(1→3)-Verknüpfungen zwischen der Glucuronsäure und dem Glucosamin darstellen, allerdings enthalten die Disaccharide der vorliegenden Erfindung in jedem Fall eine Sulfatgruppe an dem C-4 und/oder dem C-6 des Glucosaminrings.
Einige Verbindungen wurden in der Bibliografie/Literatur beschrieben, welche ebenso als mit den Verbindungen der vorliegenden Erfindung strukturell verwandt angesehen werden können.
J. R. Chouchman et al. ( EP 211610 ) offenbaren veresterte Disaccharide, welche von den Verbindungen der vorliegenden Erfindung in der Natur des Alkylrests der Estergruppe (-COOR') differieren. Diese Verbindungen unterscheiden sich ebenso von denen der vorliegenden Erfindung, dass sie zur Stimulierung des Haarwachstums und für die Behandlung von Kahlköpfigkeit nützlich sind.
Die Disaccharide, welche in der Struktur von Chondroitinsulfat wiederholt vorliegen, das sulfatierte Derivat sowohl in der Position 4 als auch in der Position 6 des N-Acetylgalactosamins, sind kommerziell erhältlich, und sie werden durch Abbau der natürlichen Polymere oder durch chemische Synthese (J. C. Jacquinet, Carbohydrate Research, 199, 153–181 (1990); J. C. Jacquinet et al., Carbohydrate Research, 314, 283–288 (1998)) erhalten, allerdings unterscheiden sie sich von den Verbindungen der vorliegenden Erfindung dahingehend, dass sie Galactosamin anstelle von Glucosamin enthalten. Die biologischen Aktivitäten dieser Disaccharide wurden bisher noch nicht beschrieben.
Hartung et al. (WO 9309766) offenbaren ein Verfahren zur Behandlung von schmerzhaften arthropatischen Erkrankungen beim Menschen und beim Pferd, bei dem eine wirksame Menge einer mindestens ein Chondrotinsulfatsalz enthaltenden Zusammensetzung parenteral, intramuskulär oder transdermal verabreicht wird. In der selben Weise offenbaren Nocelli et al. ( EP 704216 ) eine gelartige pharmazeutische Zusammensetzung, welche Chondroitinsulfatsalze für die Behandlung von Arthrose mittels einer oralen Verabreichung enthalten. Die Chondrotin-Derivate, welche von Hartung et al. und Nocelli et al. beschrieben wurden, unterscheiden sich von den Verbindungen der vorliegenden Erfindung dahingehend, dass sie sich auf eine polymere Struktur beziehen und dass sie eine Galactosamin-Einheit an stelle eines Glucosamins enthalten.
Daher ist es ersichtlich, dass der Erhalt der neuen Verbindungen für die Behandlung von Arthrose und deren Symptomen, wie etwa Entzündungen und Schmerzen, weiterhin ein Problem in der Therapie darstellt.
OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Disaccharide der Formel (I)
worin:
R¹ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, linearem oder verzweigtem (C₁-C₄)-Alkyl, Phenylalkyl mit weniger als 10 Kohlenstoffatomen und -COCH₃ ausgewählt ist;
R² aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -COCH₃ und -SO₃M ausgewählt ist;
R³ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, linearem oder verzweigtem (C₁-C₄)-Alkyl, Phenylalkyl mit weniger als 10 Kohlenstoffatomen, -COCH₃ und -COPh ausgewählt ist, worin Ph Phenyl darstellt;
G aus -COOR⁴ und -COOM ausgewählt ist, worin R⁴ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, (C₁-C₂)-Alkyl und Arylalkyl mit weniger als 16 Kohlenstoffatomen ausgewählt ist;
A aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -SO₃H, -SO₃M und -COCH₃ ausgewählt ist; und
B aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -SO₃H, -SO₃M und -COCH₃ ausgewählt ist, worin entweder A oder B zwingend entweder -SO₃H oder -SO₃M darstellt, worin M ein organisches oder Metallkation ist.
Die Erfindung umfasst ebenso die Solvate und die pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindungen der Formel (I).
Die Verbindungen der Formel (I) besitzen ein anomeres Kohlenstoffatom in ihrer Struktur. Die Erfindung umfasst anomere Formen α und β sowie deren Mischungen.
In einer bevorzugten Ausführungsform sind die Verbindungen der Formel (I) jene, worin: G -COOR⁴ oder -COOM darstellt, worin R⁴ (C₁-C₂)-Alkyl oder Arylalkyl mit weniger als sechszehn Kohlenstoffatomen darstellt und M ein Metallkation ist.
Besonders bevorzugt sind die Verbindungen der Formel (I), worin: R¹ Wasser stoff darstellt, R² -COCH₃ ist und R³ Wasserstoff darstellt. Gleich bevorzugt sind die Verbindungen der Formel (I) worin: R¹ Methyl ist, R² -COCH₃ ist und R³ Wasserstoff darstellt.
Noch mehr bevorzugt sind die Verbindungen der Formel (I), worin A Wasserstoff ist und B -SO₃M ist oder worin A -SO₃M ist und B Wasserstoff darstellt, oder worin A und B -SO₃M sind und M ein Metallkation darstellt.
Besonders bevorzugt sind die Verbindungen der Formel (I), worin: M das Natriumkation ist.
Ganz besonders bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sind jene, worin die Verbindungen der Formel (I) eine der folgenden sind:
Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Dinatriumsalz;
Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-0-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Dinatriumsalz;
Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Trinatriumsalz;
2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-D-glucopyranose-Dinatriumsalz;
2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-D-glucopyranose-Dinatriumsalz;
2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4.6-di-O-sulfo-D-glucopyranose-Trinatriumsalz.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung stellt ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) dar.
Gemäß der Erfindung werden die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) durch ein Verfahren erhalten, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass ein Monosaccharid der Formel (II)
worin R⁵ eine reaktive Gruppe darstellt, welche eine β-(1→3)-Verknüpfung mit dem freien Hydroxyl des Monosaccharids der Formel (III) eingehen kann, R⁶ äquivalent zu der Gruppe R⁴ in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche Carboxylgruppen schützt und später eliminiert werden kann, P¹, P² und P³ Gruppen darstellen, welche Hydroxyle schützen und welche später eliminiert werden können, oder äquiva lent zu R³ in (I) sein können, zur Reaktion mit einem Monosaccharid der Formel (III) gebracht wird
worin R⁷ äquivalent zu R¹ in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche mit R¹ übereinstimmen kann oder nicht und später eliminiert werden kann, so dass R¹ = H in (I) ist, R⁸ eine Gruppe äquivalent zu R² in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche Aminogruppen schützt, P⁴ und P⁵ Schutzgruppen sein können, welche gemeinsam eine zyklische Schutzgruppe bilden, entweder P⁴ oder P⁵ Acetyl sein kann, wobei in diesem Fall P⁴ äquivalent zu B oder P⁵ äquivalent zu A sein wird, zur Bildung eines intermediären Disaccharids der Formel (IV):
Wenn die reaktive Gruppe R⁵ in (II) Br darstellt, dann kann die Reaktion zwischen (II) und (III) beispielsweise in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer geeigneten Temperatur, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und in Gegenwart eines Katalysators, wie beispielsweise Silbertriflat, stattfinden. Ein Protonenakzeptor kann ebenso vorliegen.
Wenn die reaktive Gruppe R⁵ in (II) -O-C(=NH)-CCl₃ darstellt, kann die Kondensationsreaktion zwischen dem α-Imidat (II) und dem Alkohol (III) in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, beispielsweise Dichlormethan, und vorzugsweise bei Raumtemperatur stattfinden.
Vorzugsweise bedeuten die P¹-, P²- und P³-Gruppen Pivaloyl-, Benzoyl-, Acetyl- oder Benzylgruppen.
Die Gruppen P⁴ und P⁵ repräsentieren vorzugsweise eine cyclische Schutzgruppe, wie Benzyliden, welche aus der Umsetzung des Hydroxylgruppen 4 und 6 des Glucosaminrings mit dem Benzaldehyd herrühren.
Die Gruppe R⁶ stellt vorzugsweise Methyl dar.
Die Gruppe R⁷ stellt vorzugsweise Methyl oder Benzyl dar.
Die Gruppe R⁸ stellt vorzugsweise Acetyl, Trichloracetyl oder Benzyloxycarbonyl (BOC) dar.
Das intermediäre Disaccharid der Formel (IV) wird selektiv entschützt. Wenn beispielsweise die Hydroxylgruppen 4 und 6 des Glucosaminrings in der Form des Acetals geschützt sind, kann das Disaccharid der Formel (IV) beispielsweise mit Ethanthiol/Dichlormethan in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure behandelt werden, wobei das intermediäre Disaccharid der Formel (V) erhalten wird,
worin P¹, P², P³, R⁶, R⁷ und R⁸ die vorstehend beschriebenen Gruppen darstellen.
Aus dem intermediären Disaccharid der Formel (V) können die gewünschten funktionellen Gruppen nach und nach eingeführt werden.
Beispielsweise kann für die O-Sulfonierung an dem C-4 des Glucosaminrings der primäre Alkohol an der Position 6 beispielsweise mit einer Acetylgruppe geschützt werden (in welchem Fall CH₂OP⁵ erhalten wird, worin P⁵ = Acetyl ist), durch Zugabe von Essigsäureanhydrid in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Pyridin, und bei einer Temperatur von unterhalb 0°C, oder mit einer Benzoylgruppe unter Verwendung von beispielsweise Benzoylcyanid in beispielsweise Pyridin. Anschließend kann die freie Hydroxylgruppe an dem C-4 mit beispielsweise dem Schwefeltrioxid-Trimethylamin-Komplex (SO₃-NMe₃) in beispielsweise N,N-Dimethylformamid und bei einer geeigneten Temperatur, vorzugsweise zwischen 40 und 60°C, zur Umsetzung gebracht werden.
Für die O-Sulfonierung der Hydroxylgruppe am C-6 des intermediären Disaccharids der Formel (V) wird sie beispielsweise mit dem Schwefeltrioxid-Trimethylamin-Komplex (SO₃-NMe₃) in beispielsweise N,N-Dimethylformamid umgesetzt, wobei ein Hauptteil des Sulfat-Derivats an dem C-6 erhalten wird, zusammen mit einer geringeren Menge des Disulfat-Derivats. Ein Einstellen der Reaktionsbedingungen ist möglich, um den Anteil des Disulfat-Derivats (an dem C-4 und an dem C-6 des Glucosaminrings) zu erhöhen.
Wenn die Sulfatgruppen einmal an dem C-4 und/oder C-6 des Glucosaminrings eingeführt wurden, sofern die Gruppen P¹, P², P³, P⁴, P⁵, R⁶, R⁷ und R⁸ nicht zu den relevanten Gruppen in der Formel (I) äquivalent sind, wird eine vollständige oder selektive Entschützung angewendet, um die Verbindungen der Formel (I) zu erhalten. Sofern erforderlich, werden nach der Entschützung die Gruppe oder die Gruppen unter Erhalt der Verbindungen der Formel (I) umgesetzt.
Zum Erhalt einer Verbindung der Formel (I) beispielsweise, worin R² SO₃M darstellt, wird eine Hydrogenolyse durchgeführt, sobald die Sulfatgruppe an dem C-4 oder dem C-6 oder dem C-4 und dem C-6 eingeführt wurde, wenn R⁸ beispielsweise Benzoyloxycarbonyl (BOC) darstellt, und die erhaltene Aminogruppe wird anschließend bei einem basischen pH mit beispielsweise dem Schwefeltrioxid-Trimethylamin-Komplex umgesetzt.
Zum Erhalt einer Verbindung der Formel (I), worin R¹ Wasserstoff darstellt, ist es möglich, mit einer anderen Verbindung der Formel (I) zu beginnen, in der R¹ Benzyl darstellt, und anschließend die Benzylgruppe durch Hydrogenolyse unter Verwendung von beispielsweise Pd-C in Gegenwart eines geeigneten Lösungsmittels, wie beispielsweise wässrigen Methanols, zu entfernen.
Zur Verdeutlichung des beschriebenen Verfahrens zeigen die Schemata 1 und 2 die synthetischen Sequenzen zum Erhalt einiger der Verbindungen der Formel (I).
Schema 1
Schema 2
Um darüber hinaus ebenso das beschriebene Verfahren zu verdeutlichen, zeigt das Schema 3 die synthetische Sequenz zum Erhalt einiger Verbindungen der Formel (I), worin R¹ Wasserstoff oder Benzyl darstellt.
Schema 3
Das anfängliche Monosaccharid der Formel (II) kann aus der kommerziell erhältlichen Verbindung D-Glucurono-3,6-lacton der Formel (IX) mittels einer Sequenz an Umsetzungen erhalten werden, welche in der Kohlenhydrat-Chemie bekannt sind.
Zur Verdeutlichung dieser Sequenz zeigt das Schema 4, wie die Verbindung der Formel (IIa) (II mit R⁵ = -O-C(=NH)-CCl₃, P¹, P² und P³ = Pivaloyl und R⁶ = Methyl) erhalten wird, deren Synthese in den Beispielen beschrieben ist.
Schema 4
Das anfängliche Monosaccharid der Formel (III) kann aus dem kommerziell erhältlichen D-Glucosamin-Hydrochlorid der Formel (XII) mittels einer Reihe von selektiven Hydroxyl-Schutzreaktionen erhalten werden.
Zur Verdeutlichung dieser Synthesesequenz zeigt das Schema 5, wie die Verbindung der Formel (IIIa) (Verbindung der Formel III mit P⁴ und P⁵ = Benzyliden, R⁷ = Methyl und R⁸ = Acetyl) erhalten wird, deren Synthese in den Beispielen beschrieben ist.
Wenn R⁷ = Benzyl ist, kann die anomere Hydroxylgruppe in der Verbindung (XIIIa) mit Benzylalkohol in Gegenwart von gasförmigem Chlorwasserstoff und bei einer Temperatur zwischen beispielsweise 50 und 80°C benzyliert werden.
Schema 5
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung ist deren Verwendung in der Humantherapie mit einer Anwendung in der Vorbeugung oder Behandlung von Arthrose (Osteoarthritis) sowie entzündlichen Erkrankungen, wie entzündlicher Arthritis, rheumatoider Arthritis, Psoriasis-Arthritis, rheumatischem Fieber, palindromischem Rheumatismus, Reiters Syndrom, Lupus erythematodes und Spondylitis ankylosans.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können ebenso zur Regulierung bzw. Kontrolle der Blutgerinnung verwendet werden.
Die Erfindung betrifft ebenso ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels, welches in der Vorbeugung oder Behandlung von Arthrose, entzündlichen Erkrankungen und der Blutgerinnung wirksam ist, wobei das Verfahren das Mischen eines pharmazeutisch annehmbaren Trägers und einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I) umfasst.
Für die therapeutische Verwendung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden sie zu geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzungen formuliert, wobei konventionelle Techniken und Hilfsmittel, wie sie in Remington's Pharmaceutical Science Handbook, Mack Pub. Co., N. Y., USA, beschrieben sind, verwendet werden.
Die neuen pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können an Patienten in geeigneten Dosierungen verabreicht werden. Die Verabreichung der Zusammensetzungen kann auf unterschiedliche Weise erfolgen, beispielsweise als orale, intravenöse, intraperitoneale, intraartikuläre, subkutane, intramuskuläre, topische, intradermale oder intranasale Verabreichung. Die pharmazeuti schen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen eine therapeutisch wirksame Menge einer der Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Die Menge hängt von einer großen Anzahl von Faktoren ab, wie beispielsweise dem Allgemeinzustand des Patienten, dem Alter, dem Geschlecht, der besonderen Verbindung, dem Verabreichungsweg und anderen gut bekannten Faktoren. Es ist ebenso verständlich, dass der Wirkstoffbestandteil in einfacher oder mehrfacher Dosis verabreicht werden kann, um die erwünschten therapeutischen Wirkungen zu erzielen. Sofern erforderlich, können andere therapeutische Mittel zusammen mit jenen, welche durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt werden, verwendet werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden vorzugsweise an einen Patienten in einem pharmazeutisch annehmbaren Träger verabreicht. Diese Träger sind altbekannt und liegen üblicherweise in fester oder flüssiger Form vor. Die pharmazeutischen Zubereitungen in fester Form, welche gemäß der vorliegenden Erfindung hergestellt werden können, umfassen Pulver, Pellets, Tabletten, dispergierbare Granulate, Kapseln, Seals, Suppositorien und andere feste pharmazeutische Formen. Die Zubereitungen in flüssiger Form umfassen Lösungen, Suspensionen, Emulsionen und Mikrokügelchen. Die Zubereitungen in fester Form, welche direkt vor der Verwendung zu Zubereitungen in flüssiger Form für die orale, parenterale oder intraartikuläre Verabreichung umgewandelt werden können, werden ebenso in Erwägung gezogen. Diese flüssigen Formen umfassen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen.
Ein Vorteil der vorliegenden Erfindung in Bezug auf Glykosaminoglykane/Glucosaminoglykane, wie Hyaluronsäure, liegt in der Tatsache, dass keine Herstellungsbeschränkungen vorliegen, da die Verbindungen der vorliegenden Erfindung synthetische Produkte sind.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
Die folgenden Beispiele sind nicht limitierend, und sie verdeutlichen die Herstellung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung.
Beispiel 1: Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (Ib)
1A Methyl-1,2,3,4-tetra-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat (Xa)
Zu einer 0,01 M Natriumhydroxid-Lösung in Methanol (400 ml) wird D-Glucurono-3,6-lacton (60 g, 0,288 mMol) zugesetzt, und die Mischung wird 1 Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt. Die gelbe Lösung wird anschließend aufkonzentriert, und der Rückstand wird in einer Mischung aus Pyridin (500 ml) und Chloroform (100 ml) gelöst und auf 0°C abgekühlt. Pivaloylchlorid (284, ml, 2,30 mMol) wird langsam unter Rühren zugesetzt, wobei das Rühren 6 Tage lang bei Raumtemperatur fortgesetzt wird. Die Mischung wird mit CH₂Cl₂ (3 × 200 ml) extrahiert, und die organischen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzen triert. Dieses Rohrmaterial wird durch Säulenchromatographie (Hexan/AcOEt 12 : 1) aufgereinigt, wobei 102,5 g des Produkts (65% Ausbeute) erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 5,736 (d, 1H, J₁₂ = 8 Hz, H-1), 5,403 (t, 1H, J₃₄ = J₄₅ = 9,5 Hz, H-3), 5,249 (m, 2H, H-2, H-4), 4,16 (d, 1H, J₄₅ = 10 Hz, H-5), 3,70 (s, 3H, COOMe), 1,16, 1,11, 1,10 (3s, 36H, 4-OPiv).
1B Methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-glucopyranosiluronat (XIa)
Eine Lösung von Methyl-1,2,3,4-tetra-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat (40 g, 73,44 mMol) und Hydrazinacetat (13,53 g, 146,9 mMol) wird in trockenem DMF (120 ml) gelöst und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wird mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit Wasser (3 × 100 ml) gewaschen, die organischen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Der erhaltene Rückstand wird durch Säulenchromatographie (Hexan/AcOEt 3 : 1) aufgereinigt, wobei 25,5 g (75% Ausbeute) des Produkts und 20% des Anfangsprodukts erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: β-5,40 (t, 1H, J₃₄ = J₂₃ = 9,5 Hz, H-3), 5,23 (t, 1H, J₄₅ = J₃₄ = 10 Hz, H-4), 4,93 (dd, 1H, J₁₂ = 8 Hz, J₂₃ = 9,5 Hz, H-2), 4,75 (d, 1H, J₁₂ = 8 Hz), 4,1 (d, 1H, J₃₄ = 10 Hz H-5), α-5,48 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1), 5,19 (t, 1H, J₄₅ = J₄₃ = 10 Hz, H-4), 4,85 (dd, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, J₂₃ = 10 Hz, H-2), 4,56 (d, 1H, J₅₄ = 10 Hz, H-5), 3,67 (s, 6H, 2COOMe), 1,0 und 1,3 (3s, 40H, 6-OPiv).
1C Methyl-(2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-glucopyranosyl-trichloracetimidat)-uronat (IIa)
Zu einer Lösung von Methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-glucopyranosyluronat (22 g, 47,76 mMol) in trockenem CH₂Cl₂ (40 ml) und Trichloracetonitril (72 ml, 716,45 mMol) werden 1,8-Diazabicyclo(5.4.0)undec-7-en (0.5 ml) zugesetzt, und die Mischung wird 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird sie im Vakuum aufkonzentriert. Der Rückstand wird durch Silikagel-Säulenchromatographie (Hexan/AcOEt 5 : 1 mit 1% NEt₃) aufgereinigt, wobei 22,5 g der Verbindung (87% Ausbeute) erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 8,69 (s, 1H, NH), 6,58 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1), 5,63 (t, 1H, J₃₂ = J₃₄ = 10 Hz, H-3), 5,24 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 10 Hz, H-4), 5,12 (dd, 1H, J₂₁ = 3,5 Hz, J₂₃ = 10 Hz H-2), 4,42 (d, 1H, J₄₅ = 10 Hz, H-5), 3,62 (s, 3H, COOMe), 1,12, 1,11, 1,07 (3s, 27H, 3-OPiv).
1D N-Acetylglucosamin (XIIIa)
D-Glucosamin-Hydrochlorid (100 g, 0,46 Mol) wird zu einer 0,6 M Lösung von MeONa/MeOH zugegeben und 5 Minuten lang gerührt. Essigsäureanhydrid (48 ml) wird anschließend zugesetzt, und nach 30 Minuten tritt ein weißer Niederschlag auf, welcher abfiltriert und mit kaltem Ethanol gewaschen wird. Die Flüssigkeit wird aus absolutem Ethanol umkristallisiert, wobei 79,3 g der Verbindung (quantitativ) erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (300 MHz, D₂O) δ ppm: 5,06 (d, 1H, J₁₂ = 3,44 Hz, H-1), 3,76– 3,53 (m, 5H, H-2, H-3, H-4, H-6, H-6'), 3,27 (m, 1H, H-5), 1,90 (s, 3H, CH₃CONH-).
1E Methyl-2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosid (XIVa)
Zu einer Lösung von N-Acetylglucosamin (50 g, 0,22 mMol) in MeOH (50 ml) wird eine katalytische Menge an Amberlit IR-120 H⁺-Harz zugesetzt, und die Mischung wird 2 Tage lang erwärmt. Die Mischung wird filtriert, aufkonzentriert und durch Silikagel-Säulenchromatographie (CH₂Cl₂/MeOH 5 : 1) aufgereinigt, wobei 10 g des α-anomeren Methyl-2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucoyranosid (25%)-Anomer und 40 g des β-Anomer erhalten werden, welches unter Erhalt des α-anomeren Methyl-2-acetamid-2-deoxy-α-D-glucopyranosids unter den selben Reaktionsbedingungen isomerisiert wird (70% Ausbeute).
¹H NMR-Spektrum (300 MHz, CD₃OD) δ ppm: 4,64 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1), 3,89 (dd, 1H, J₂₁ = 3,5 Hz, J₂₃ = 8,8 Hz, H-2), 3,81 (dd, 1H, J₆₅ = 2,5 Hz, J_66' = 12 Hz, H-6), 3,67 (dd, 1H, J_6'5 = 5 Hz, J_66' = 12 Hz H-6'), 3,62 (dd, 1H, J₃₄ = 10,5 Hz, J₃₂ = 8,5 Hz H-3), 3,36 (s, 3H, MeO), 3,29 (m, 1H, H-4), 1,96 (s, 3H, CH₃CONH-).
1F Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-α-D-glucopyranosid (IIIa)
Zu einer Lösung von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosid (0,88 g, 3,74 mMol) in trockenem DMF (10 ml) werden p-Toluolsulfonsäure in katalytischen Mengen sowie PhCH(OMe)₂ (1,014 ml, 5,61 mMol) zugesetzt, und die Mischung wird 12 Stunden lang auf eine Temperatur von 55°C erwärmt. Anschließend wird die Mischung mit gesättigter NaHCO₃-Lösung neutralisiert, mit CH₂Cl₂ verdünnt und mit Wasser (2 × 50 ml) gewaschen. Die organischen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Das resultierende Rohmaterial wird in einer Silikagel-Säule (CH₂Cl₂/MeOH 25 : 1) unter Erhalt von 1,079 g der Verbindung (90% Ausbeute) aufgereinigt.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 7,5–7,3 (m, 5H, Ph), 5,83 (d, 1H, J_NH,2 = 8,5 Hz, NH-), 5,55 (s, 1H, H_ipso), 4,70 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1), 4,27 (dd, 1H, J₆₅ = 3,5 Hz, J_66' = 12 Hz H-6), 4,21 (ddd, 1H, J₂₁ = 3,5 Hz, J_2,NH = 8,5 Hz, J₂₃ = 9 Hz H-2), 3,89 (ddd, 1H, J_3,OH = 3,5 Hz, J₃₄ = J₃₂ = 9 Hz H-3), 3,76 (m, 2H, H-5, H-6'), 3,57 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz H-4), 3,40 (s, 3H, MeO), 2,97 (d, 1H, J_3,OH = 3,5 Hz, OH), 2,06 (s, 3H, CH₃CONH-).
1G Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (IVa)
Zu einer Mischung von Methyl-(2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-glucopyranosyl-trichloracetimidat)-uronat (10 g, 16,54 mMol) und Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-α-D-glucopyranosid (4,1 g, 12,73 mMol), gelöst in trockenem CH₂Cl₂ (80 ml) bei Raumtemperatur, wird Trimethylsilyltrifluormethansulfonat (0,3 ml, 0,1 Äq.) zugesetzt. und die Mischung wird 1 Stunde lang gerührt. Die Reaktion wird anschließen durch Zugabe von gesättigter NaHCO₃-Lösung neutralisiert und mit CH₂Cl₂ verdünnt, und die organische Phase wird mit H₂O (3 × 100 ml) gewaschen. Die organi schen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Das erhaltene Rohmaterial wird durch Silikagel-Säulenchromatographie (Toluol/Aceton 5 : 1) aufgereinigt, wobei 7,8 g Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (80% Ausbeute) und 1,4 g (14%) des zurückgewonnenen Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-α-D-glucopyranosids erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 7,5–7,3 (m, 5H, Ph), 5,59 (d, 1H, J_NH,2 = 7 Hz, NH-), 5,5 (s, 1H, H_ipso), 5,22 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9,5 Hz, H-3), 5,1 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9,5 Hz H-4), 4,97 (t, 1H, J₂₁ = 8 Hz, H-2), 4,88 (d, 1H, J₁₂ = 3 Hz, H-1'), 4,87 (d, 1H, J₁₂ = 8 Hz, H-1), 4,22 (m, 1H, H-5'), 4,11 (m, 1H, H-2'), 3,92 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9 Hz, H-3'), 3,82 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9 Hz, H-4'), 3,76 (m, 2H, H-5, H-6'), 3,70 (m, 1H, H-6'), 3,64 (s, 3H, COOMe), 3,32 (s, 3H, OMe), 2,00 (s, 3H, MeCONH-), 1,4–1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).
1H Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (Va)
Zu einer Lösung von Methyl-2-acetamido-4,6-benzyliden-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (100 mg, 0,13 mMol) in trockenem CH₂Cl₂ (2 ml), welche eine katalytische Menge an p-Toluolsulfonsäure enthält, wird EtSH (48 μl, 0,65 mMol) langsam zugesetzt und bei Raumtemperatur 5 Stunden lang gerührt. Anschließend erfolgt eine Neutralisation durch Zugabe von gesättigter NaHCO₃-Lösung, verdünnt mit CH₂Cl₂ (25 ml), und die organische Phase wird mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen. Die organischen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Das resultierende Rohmaterial wird durch Silikagel-Säulenchromatographie (CH₂Cl₂/MeOH 25 : 1) aufgereinigt, wobei 78,4 mg der Verbindung (89% Ausbeute) erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 5,89 (d, 1H, J_NH,2 = 7 Hz, NH), 5,34 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9,5 Hz, H-3), 5,27 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz H-4), 4,88 (t, 1H, J₂₁ = 5 Hz, H-2), 4,80 (d, 1H, J₁₂ = 6 Hz, H-1), 4,68 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1'), 4,16 (d, 1H, J₅₄ = 9,5 Hz H-5), 4,07 (m, 1H, H-2), 3,86 (dd, 1H, J₆₅ = 6 Hz, J_66' = 12 Hz, H-6'), 3,77 (dd, 1H, J_6'5 = 5 Hz, J_6'6 = 12 Hz, H-6), 3,71 (s, 3H, COOMe), 3,70 (m, 1H, H-3'), 3,57 (t, 1H, H-4'), 3,56 (m, 1H, H-3'), 3,31 (s, 3H, OMe), 2,00 (s, 3H, MeCONH-), 1,4–1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).
1I Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4,6-disulfo-α-D-glucopiranosid, Dinatriumsalz (VIIc)
Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-6-sulfo-α-D-glucopiranosid, Natriumsalz (VIIb)
Eine Lösung von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (75 mg, 0,11 mMol) in trockenem DMF (2 ml) wird 2 Tage lang in Gegenwart von SO₃-NMe₃-Komplex (200 mg, 1,437 mMol) bei 55°C in einer Argonatmosphäre gerührt. Die Mischung wird gekühlt, und MeOH (1 ml) und H₂O (1 ml) werden zugesetzt. Die Lösung wird durch eine Sephadex-LH-20-Säule (CH₂Cl₂/MeOH 1 : 1) geleitet. Die erhaltenen Fraktionen, welche die zwei Disaccharide enthalten, werden aufkonzentriert und durch eine Silikagel-Säule (AcOEt/MeOH 5 : 1) zur Abtrennung der monosulfatierten von der disulfatierten Verbindung geleitet. Die zwei resultierenden Fraktionen werden durch DOWEX-50 W X4 (Na⁺) (MeOH/H₂O 9 : 1) unter Erhalt von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-6-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (62,4 mg, 68% Ausbeute) und Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4,6-disulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (13 mg, 15% Ausbeute) geleitet.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-6-sulfo-α-D-glucopyranosid (VIIb), Natriumsalz, δ ppm: 5,35 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9,5 Hz, H-3), 5,17 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz H-4), 5,00 (m, 2H, H-2, H-1), 4,61 (d, 1H, J₁₂ = 6 Hz, H-1'), 4,34 (dd, 1H, J₆₅ = 2 Hz, J_66' = 10,5 Hz H-6'), 4,27 (d, 1H, J₅₄ = 10 Hz H-5), 4,10 (dd, 1H, J₆₅ = 6 Hz, J_66' = 11 Hz H-6'), 3,94 (m, 2H, H-2', H-3'), 3,79 (m, 1H, H-5'), 3,74 (s, 3H, COOMe), 3,41 (m, 2H, H-2, H-4'), 3,38 (s, 3H, OMe), 1,97 (s, 3H, MeCONH-), 1,2–1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4,6-disulfo-α-D-glucopyranosid (VIIc), Dinatriumsalz, δ ppm: 7,80 (d, 1H, J_NH,2 = 9 Hz, NH), 5,38 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9 Hz, H-3), 5,22 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 10 Hz H-4), 5,11 (d, 1H, J₁₂ = 7,5 Hz, H-1), 5,01 (dd, 1H, J₂₁ = 8 Hz, J₂₃ = 9,5 Hz H-2), 4,68 (d, 1H, J₁₂ = 3 Hz, H-1'), 4,57 (d, 1H, J₄₅ = J₄₃ = 9,5 Hz H-4'), 4,28 (m, 2H, H-6, H-5), 4,14 (m, 3H, H-3, H-5, H-6'), 4,10 (m, 1H, H-2'), 3,73 (s, 3H, COOMe), 3,41 (s, 3H, OMe), 2,05 (s, 3H, MeCONH-), 1,2–1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).
1J Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (Ib)
Zu einer Lösung von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-6-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (60 mg, 0,07 mMol) in 2 ml einer (MeOH/H₂O 5 : 1)-Mischung werden 1,5 ml einer 3 M Natriumhydroxid-Lösung zugesetzt und bei Raumtemperatur 2 Tage lang gerührt. Anschließend erfolgt eine Neutralisation mit Essigsäure auf einen pH von 8 sowie ein Aufkonzentrieren unter Vakuum, und das resultierende Rohmaterial wird durch Sephadex G-10 (H₂O/EtOH 9 : 1)-Säulenchromatographie aufgereinigt, wobei 40 mg (quantitative Ausbeute) der Verbindung als weißer Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 250°C unter Zersetzung erhalten werden.
IR-Spektrum (KBr): 3429, 2915, 1627, 1553, 1422, 1381, 1232, 1106, 1061, 950, 820 cm^–1.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, D2O) δ ppm: 4,76 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz, H-1'), 4,52 (d, 1H, J₁₂ = 8 Hz, H-1), 4,37 (dd, 1H, J₅₆ = 2 Hz, J_66' = 11,5 Hz, H-6), 4,29 (dd, 1H, J_6'5 = 5,5 Hz, J_66' = 11,5 Hz H-6'), 4,15 (dd, 1H, J₂₁ = 3,5 Hz, J₂₃ = 10,5 Hz H-2'), 3,94 (m, 2H, H-5', H-3'), 3,73 (m, 1H, H-4), 3,63 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9,5 Hz, H-4'), 3,53 (m, 2H, H-3, H-5), 3,45 (s, 3H, MeO), 3,37 (dd, 1H, J₂₁ = 8 Hz, J23 = 9,5 Hz H-2), 1,94 (s, 3H, CH₃CONH-).
Beispiel 2: Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Trinatriumsalz (Ic)
Zu einer Lösung von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4,6-disulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (13 mg, 0,01 mMol) in 2 ml einer (MeOH/H₂O 5 : 1)-Mischung werden 1,5 ml einer 3 M Natriumhydroxid-Lösung zugesetzt und bei Raumtemperatur 2 Tage lang gerührt. Anschließend erfolgt eine Neutralisation mit Essigsäure auf einen pH von 8 sowie ein Aufkonzentrieren unter Vakuum, und das resultierende Rohmaterial wird durch Sephadex G-10 (H₂O/EtOH 9 : 1)-Säulenchromatographie aufgereinigt, wobei 8,5 mg (92% Ausbeute) der Verbindung als ein weißer Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 249–250°C unter Zersetzung erhalten werden.
IR-Spektrum (KBr): 3436, 2918, 1632, 1555, 1429, 1381, 1257, 1109, 1060, 950, 811 cm^–1.
¹H NMR-Spektrum (300 MHz, D₂O) δ ppm: 4,80 (m, 2H, H-1, H-1'), 4,19 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz, H-4'), 3,98 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9,3 Hz H-3'), 3,75 (m, 3H, H-6, H-6', H-5'), 3,57 (m, 1H, H-5), 3,42 (m, 2H, H-4, H-3), 3,31 (s, 4H, H-2, MeO), 2,95 (dd, 1H, J₂₁ = 3,6 Hz, J₂₃ = 10,2 Hz H-2'), 1,83 (s, 3H, CH₃CONH-).
Beispiel 3: Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (Ia)
3A Methyl-2-acetamido-6-O-acetyl-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (VIa)
Zu einer Lösung von Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (100 mg, 0,147 mMol) in Pyridin (2 ml) bei –10°C werden 0,016 ml Essigsäureanhydrid (0,162 mMol) zugesetzt und bei dieser Temperatur 2 Tage lang belassen. Anschließend wird CH₂Cl₂ zugesetzt, und die organische Phase wird mit H₂O (2 × 25 ml) gewaschen. Die organischen Extrakte werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Das Rohmaterial wird durch Silikagel-Säulenchromatographie (CH₂Cl₂/MeOH 40 : 1) aufgereinigt, wobei 73 mg der Verbindung (70% Ausbeute) plus 14,6 mg des Ausgangsprodukts (15% Ausbeute) erhalten werden.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, CDCl₃) δ ppm: 6,16 (d, 1H, J_NH,2 = 8,5 Hz, NH), 5,23 (t, 1H, J₃₄ = J₃₂ = 9 Hz, H-3), 5,12 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz H-4), 4,84 (t, 1H, J₂₁ = J₂₃ = 8 Hz H-2), 4,75 (d, 1H, J₁₂ = 6,5 Hz, H-1), 4,56 (d, 1H, J₁₂ = 3,5 Hz H-1'), 4,39 (dd, 1H, J_6'5 = 1,5 Hz, J_6'6 = 11,5 Hz H-6), 4,12 (dd, 1H, J₆₅ = 5,5 Hz, J_6'6 = 12 Hz H-6', H-6), 4,076 (d, 1H, J₅₄ = 10 Hz H-5), 3,96 (m, 1H, H-2'), 3,92 (d, 1H, H-5'), 3,62 (t, 1H, J₃₂ = J₃₄ = 8,5 Hz H-3'), 3,57 (s, 1H, OH), 3,58 (s, 3H, COOMe), 3,38 (t, 1H, J₄₅ = J₄₃ = 10 Hz H-4'), 3,31 (s, 3H, OMe), 1,95 (s, 3H, MeCONH-), 1,85 (s, 3H, MeCO), 1,4–1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).
3B Methyl-2-acetamido-6-O-acetyl-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid
Eine Lösung von Methyl-2-acetamido-6-O-acetyl-2-deoxy-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-α-D-glucopyranosid (1 g, 1,39 mMol) in trockenem DMF (15 ml) wird 24 Stunden lang in Gegenwart des SO₃-NMe₃-Komplexes (1,93 g, 13,90 mMol) bei 55°C in einer Argonatmosphäre gerührt. Die Mischung wird gekühlt, und MeOH (10 ml) sowie H₂O (5 ml) werden zugesetzt. Die Lösung wird durch eine Sephadex LH-20-Säule (CH₂Cl₂/MeOH 1 : 1) geleitet. Die Reaktionsmischung, welche drei Produkte enthält, wird durch Silikagel-Säulenchromatographie (CH₂Cl₂/MeOH 15 : 1) aufgereinigt, wobei die folgenden Fraktionen erhalten werden: a) Ausgangsprodukt mit Ammoniumsalzen, b) intermediäres R_f-Produkt ohne Sulfat und mit zwei Acetylgruppen, c) niederes R_f-Produkt, welches dem Titelprodukt (500 mg) entspricht.
3C Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Dinatriumsalz (Ia)
Gemäß demselben Verfahren, welches bereits für die Verbindungen Ib und Ic beschrieben wurde, wird die Verbindung Methyl-2-acetamido-6-O-acetyl-3-O-(methyl-2,3,4-tri-O-pivaloyl-β-D-glucopyranosyluronat)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid einer basischen Hydrolyse unterzogen, wobei die Titelverbindung als weißer Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 203°C unter Zersetzung erhalten wird.
IR-Spektrum (KBr): 3430, 2958, 1622, 1553, 1484, 1413, 1361, 1229, 1112, 1049, 904, 803 cm^–1.
¹H NMR-Spektrum (500 MHz, D₂O) δ ppm: 4,74 (m, 2H, J₁₂ = 3,5 Hz, J₁₂ = 8 Hz H-1, H-1'), 4,24 (t, 1H, J₄₃ = J₄₅ = 9 Hz, H-4), 4,02 (t, 1H, J43 = J₃₂ = 9 Hz H-3), 3,89 (m, 1H, H-6), 3,80 (m, 2H, H-5', H-6'), 3,65 (m, 1H, H-5), 3,48 (m, 2H, H-4, H-3), 3,34 (s, 4H, H-2, MeO), 2,99 (dd, 1H, J₂₁ = 3,5 Hz, J₂₃ = 10 Hz H-2'), 1,87 (s, 3H, CH₃CONH-).

Claims

Disaccharid mit Antiarthroseeigenschaften, welches durch die Formel (I)
dargestellt ist, worin: R¹ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, linearem oder verzweigtem (C₁-C₄)-Alkyl, Phenylalkyl mit weniger als 10 Kohlenstoffatomen und -COCH₃ ausgewählt ist; R² aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -COCH₃ und -SO₃M ausgewählt ist; R³ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, linearem oder verzweigtem (C₁-C₄)-Alkyl, Phenylalkyl mit weniger als 10 Kohlenstoffatomen, -COCH₃ und -COPh ausgewählt ist, worin Ph Phenyl darstellt; G aus -COOR⁴ und -COOM ausgewählt ist, worin R⁴ aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, (C₁-C₂)-Alkyl und Arylalkyl mit weniger als 16 Kohlenstoffatomen ausgewählt ist; A aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -SO₃H, -SO₃M und -COCH₃ ausgewählt ist; und B aus der Gruppe, bestehend aus Wasserstoff, -SO₃H, -SO₃M und -COCH₃ ausgewählt ist, worin entweder A oder B zwingend entweder -SO₃H oder -SO₃M darstellt, worin M ein organisches oder Metallkation ist; ein Solvat oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Disaccharid gemäß Anspruch 1, worin G entweder -COOR⁴ oder -COOM darstellt, worin R⁴ entweder (C₁-C₂)-Alkyl oder Arylalkyl mit weniger als 16 Kohlenstoffatomen darstellt und M ein Metallkation ist.
Disaccharid gemäß Anspruch 2, worin R¹ Wasserstoff, R² -COCH₃ und R³ Wasserstoff darstellt.
Disaccharid gemäß Anspruch 2, worin R¹ Methyl, R² -COCH₃ und R³ Wasserstoff darstellt.
Disaccharid gemäß Anspruch 3 oder Anspruch 4, worin A Wasserstoff ist, B -SO₃M darstellt und M ein Metallkation ist.
Disaccharid gemäß Anspruch 3 oder Anspruch 4, worin A -SO₃M ist, B Wasserstoff darstellt und M ein Metallkation ist.
Disaccharid gemäß Anspruch 3 oder Anspruch 4, worin A und B jeweils -SO₃M darstellen und M ein Metallkation ist.
Disaccharid gemäß einem der vorherigen Ansprüche, worin M das Natriumkation ist.
Disaccharid gemäß der Formel (I) nach Anspruch 1, welches aus den folgenden ausgewählt ist: Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Dinatriumsalz; Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Dinatriumsalz; Methyl-2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid-Trinatriumsalz; 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-6-O-sulfo-D-glucopyranose-Dinatriumsalz; 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4-O-sulfo-D-glucopyranose-Dinatriumsalz; 2-Acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-glucopyranosyluronsäure)-4.6-di-O-sulfo-D-glucopyranose-Trinatriumsalz.
Verfahren zur Herstellung eines Disaccharids der allgemeinen Formel (I), welches in Anspruch 1 definiert ist, dadurch gekennzeichnet, dass: a) ein Monosaccharid der Formel (II),
worin R⁵ eine reaktive Gruppe darstellt, welche eine β-(1→3)-Verknüpfung mit dem freien Hydroxyl des Monosaccharides der Formel (III) eingehen kann, R⁶ äquivalent zu der Gruppe R⁴ in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche Carboxylgruppen schützt und später eliminiert werden kann, P¹, P² und P³ Gruppen darstellen, welche Hydroxyle schützen und welche später eliminiert werden können, oder äquivalent zu R³ in (I) sein können, zur Reaktion mit einem Monosaccharid der Formel (III) gebracht wird,
worin R⁷ äquivalent zu R¹ in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche mit R¹ übereinstimmen kann oder nicht und später eliminiert werden kann, so dass R¹ = H in (I) ist, R⁸ eine Gruppe äquivalent zu R² in (I) oder eine Gruppe sein kann, welche Aminogruppen schützt, P⁴ und P⁵ Schutzgruppen sein können, welche gemeinsam eine zyklische Schutzgruppe bilden, entweder P⁴ oder P⁵ Acetyl sein kann, wobei in diesem Fall P⁴ äquivalent zu B oder P⁵ äquivalent zu A sein wird, zur Bildung eines intermediären Disaccharids der Formel (IV),
b) das Disaccharid der Formel (IV) selektiv entschützt wird, um das intermediäre Disaccharid der Formel (V) zu erhalten,
worin P¹, P², P³, R⁶, R⁷ und R⁸ die vorher beschriebenen Gruppen darstellen; c) die Sulfatgruppe oder -gruppen in den Glucosaminring eingeführt wird/werden und für die O-Sulfonierung an dem C-4 des Glucosaminringes der primäre Alkohol an der 6-Position geschützt werden kann, z. B. mit einer Acetylgruppe (wobei in diesem Fall CH₂OP⁵ erhalten werden wird, worin P⁵ = Acetyl ist), und die O-Sulfonierung des freien Hydroxyls an dem C-4 anschließend stattfindet, wohingegen im Falle, dass die O-Sulfonierung des Hydroxyls an C-6 des Glucosaminringes stattfindet, es nötig ist, mit dem intermediären Disaccharid der Formel (V) zu beginnen, wobei das Disulfatderivat (an C-4 und C-6) durch Einstellen der Reaktionsbedingungen erhalten werden kann; d) sobald die Sulfatgruppen an C-4 und/oder C-6 eingeführt wurden, falls die Gruppen P¹, P², P³, P⁴, P⁵, R⁶, R⁷ und R⁸ nicht äquivalent zu den entsprechenden Gruppen in der Formel (I) sind, vollständige oder selektive Entschützung angewandt wird, um ein durch die Formel (I) dargestelltes Disaccharid zu erhalten, und falls nötig nach der Entschützung die Gruppe oder die Gruppen zur Reaktion gebracht wird/werden, um ein durch die Formel (I) dargestelltes Disaccharid zu erhalten.
Verwendung eines Disaccharids gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Arthrose.
Verwendung eines Disaccharids gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Entzündungserkrankungen.
Verwendung eines Disaccharids gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Regulierung der Blutgerinnung.
Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels, welches bei der Vorbeugung oder Behandlung von Arthrose, Entzündungserkrankungen und für die Blutgerinnung wirksam ist, wobei das Verfahren das Vermischen eines pharmazeutisch annehmbaren Vehikels und einer therapeutisch wirksamen Menge eines Disaccharids der Formel (I) beinhaltet.
Pharmazeutische Zusammensetzung, welche ein durch die Formel (I) nach Anspruch 1 dargestelltes Disaccharid und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.