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DE4022267C2 - N-Acyldipeptide und deren Verwendung - Google Patents

N-Acyldipeptide und deren Verwendung

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DE4022267C2
DE4022267C2 DE4022267A DE4022267A DE4022267C2 DE 4022267 C2 DE4022267 C2 DE 4022267C2 DE 4022267 A DE4022267 A DE 4022267A DE 4022267 A DE4022267 A DE 4022267A DE 4022267 C2 DE4022267 C2 DE 4022267C2
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Description

Gegenstand der Erfindung sind N-Acyldipeptide der Formel
R2-NH-CHR1-CO-AS (I) und (I′)
und deren Verwendung gemäß den Patentansprüchen.
Es ist bekannt, Glycyl- oder L-Alanyldipeptide als Quelle für bestimmte Aminosäuren als Bestandteil von Mischungen bzw. Lösungen für die künstliche Ernährung zu verwenden (EP 087 750 B1, DE 31 08 079 C2, EP 182 356 A2). Der Einsatz solcher Dipeptide ist vor allem dann angebracht, wenn die zu verabreichenden freien Aminosäuren schlecht wasserlöslich sind, wie Cystin, Tyrosin, Tryptophan, Valin, Leucin oder Isoleucin oder aber in wäßriger Lösung nicht beständig sind, wie Glutamin oder Cystein.
Es ist auch bekannt, Glycyl- oder L-Alanyldipeptide des Glutamins als Bestandteil von Nährmedien für Zellkulturen zu verwenden (EP 220 379 A1).
Sowohl Infusionslösungen als auch Nährmedien für Zellkulturen müssen in keimfreier Form eingesetzt werden. Die einfachste und üblicherweise angewandte Möglichkeit zur Sterilisation ist das kurzzeitige Erhitzen der fertigen Lösungen auf eine Temperatur um 120°. Unter diesen Bedingungen, aber auch schon bei längerer Lagerung der Lösungen können die bekannten Dipeptide zu 2,5-Diketopiperazinen cyclokondensieren.
Es ist jedoch bekannt, daß solche 2,5-Diketopiperazine eine höhere Epimerisierungstendenz aufweisen als die entsprechenden linearen Dipeptide (J. Am. Chem. Soc., Vol. 108 (1986), 7327-7332). Es ist infolgedessen bei der Verwendung von Dipeptidlösungen stets mit dem Vorhandensein der entsprechenden stereoisomeren 2,5-Diketopiperazine zu rechnen, über deren physiologische Wirkungen in den meisten Fällen bisher keinerlei Untersuchungen vorliegen.
Es ist auch bereits bekannt, in Infusionslösungen als Quelle für bestimmte Aminosäuren die entsprechenden N-Acetylderivate einzusetzen, die aber biologisch nur unvollständig verwertet werden. Die Spaltung sowohl von N-Acylaminosäuren als auch von bestimmten Dipeptiden findet zum überwiegenden Teil in den Nieren statt (Metalbolism. Vol. 35 (1986), 830-836; Z. Ernährungswiss. 21 (1982), 21-26). Dipeptide werden darüberhinaus auch schon im Blutplasma gespalten.
In EP 267 179 A2 wurde vorgeschlagen, als Ersatz für die thermisch nicht beständigen Di- und Tripeptide des Cystins entsprechende N-Acylpeptide, z. B. Bis-(acetyl­ glycyl)-L,L-cystin, in Nutrienszusammensetzungen einzusetzen. Untersuchungen an Ratten haben jedoch gezeigt, daß Bis-(acetylglycyl)-L,L-cystin bei der parenteralen Ernährung nicht als Cysteinquelle geeignet ist (Z. Ernährungswiss. 28 (1989), 32-35).
Nun wurde festgestellt, daß überraschenderweise aus bestimmten N-Acyldipeptiden, bei denen die C-terminale Aminosäure nicht Cystin ist, im lebenden Organismus sehr wohl zumindest die C-terminale Aminosäure abgespalten wird, so daß sie als Quelle für diese Aminosäure geeignet sind. Im Gegensatz zu den freien Dipeptiden werden diese N-Acyldipeptide zwar nicht schon im Blutplasma gespalten, aber in der Niere findet eine rasche Spaltung statt. Dies konnte durch in-vitro- Untersuchungen mit Schweinenierenhomogenisat eindrucksvoll belegt werden. Beispielsweise wird N-Acetyl-L-alanyl-L-tryrosin 10mal und N-Butyryl-L- alanyl-L-tyrosin sogar 15mal schneller als N-Acetyl- L-tyrosin gespalten. Da diese N-Acyldipeptide im Gegensatz zu den freien Dipeptiden darüberhinaus unter den üblichen Hitzesterilisationsbedingungen (5 bis 20 Minuten bei 121°C) absolut beständig sind, können sie mit Vorteil als Quelle für die jeweilige C-terminale Aminosäure, die infolge ihrer Schwerlöslichkeit oder ihrer Instabilität nicht direkt in Infusionslösungen und Nährmedien für Zellkulturen verwendbar ist.
Die erfindungsgemäßen bzw. die erfindungsgemäß zu verwendenden N-Acyldipeptide können mit freier endständiger Carboxylgruppe oder in Form ihrer physiologisch verträglichen carbonsauren Salze vorliegen. Als Kationen in solchen Salzen kommen in Frage beispielsweise Alkalimetalle. Erdalkalimetalle. Kationen von basischen Aminosäuren oder Kationen von Aminen der Formel NR3R4R5, wobei R3, R4 und R5 gleich oder verschieden sind und jeweils Wasserstoff, einen C2-C6-Hydroxyalkylrest oder C1-C6-Alkylrest bedeuten, oder zwei der Reste R3, R4 und R5 zu einem hetero­ cyclischen Ring geschlossen sind, der gegebenenfalls noch ein Sauerstoffatom oder ein weiteres Stickstoffatom enthält.
Bevorzugte Acylreste R² in den Formeln (I) und (I′) sind der Formyl-, Acetyl-, Propionyl-, Butyryl- oder Succinylrest.
Die erfindungsgemäßen bzw. die erfindungsgemäß zu verwendenden N-Acyldipeptide können auf verschiedene Weisen einfach hergestellt werden. Zum einen können entsprechende N-Acylglycine oder N-Acylalanine nach bekannten Verfahren der Peptidchemie, z. B. über Aktivester, gemischte Anhydride oder enzymatisch mit Aminosäuren oder C-terminal geschützten Aminosäuren gekoppelt werden (vgl. Houben-Weyl. Band 15, "Synthese von Peptiden", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974).
Zum anderen können auch bereits vorliegende freie Glycyl- oder Alanyldipeptide nachträglich mit Acylhalogeniden oder -anhydriden acyliert werden. Die Umsetzung mit Acylhalogeniden oder -anhydriden einer aliphatischen Carbonsäure mit 2 bis 6 C-Atomen erfolgt unter Schotten-Baumann-Bedingungen, vorzugsweise in Wasser. Wenn es die Löslichkeits­ eigenschaften der Dipeptide und/oder des Acylierungs­ reagenzes erfordern, können als Lösungsmittel auch Gemische aus Wasser und einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z. B. einem niederen Alkohol, Aceton oder Tetrahydrofuran, verwendet werden. Als Base für die Acylierungsreaktion wird Natriumhydroxid bevorzugt. Gegebenenfalls können zur Acylierung auch direkt wäßrige, salzhaltige Peptidlösungen eingesetzt werden, wie sie bei manchen Peptidsynthesen, z. B. bei der N-Carbonsäureanhydrid­ methode, anfallen.
Die Herstellung der N-Formyldipeptide kann analog zur Herstellung von N-Formylaminosäuren durch Umsetzung der freien Dipeptide mit dem gemischten Anhydrid aus Ameisensäure und Essigsäure erfolgen (vgl. Houben-Weyl, Band 15/1 "Synthese von Peptiden", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, Seiten 164 ff.).
In allen Fällen können die fertigen N-Acyldipeptide durch Ansäuern mit einer Mineralsäure in Freiheit gesetzt werden, wobei die in Wasser schwerlöslicheren N-Acyldipeptide direkt ausfallen. In Wasser leichtlösliche N-Acyldipeptide können mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert werden. In Wasser leicht lösliche N-Acyldipeptide können auch durch Behandeln mit einem stark sauren Ionenaustauscher in der H⁺-Form in Freiheit gesetzt werden, wobei man sie dann in Form einer wäßrigen Lösung erhält.
Die carbonsauren Salze der N-Acyldipeptide werden durch Lösen äquimolarer Mengen des N-Acyldipeptids und der entsprechenden Base in Wasser hergestellt. Durch Einengen der Lösung oder durch Ausfällen mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel können sie in fester Form gewonnen werden, vorzugsweise werden sie jedoch direkt in Form der erhaltenen wäßrigen Lösungen weiterverwendet.
Die Erfindung wird durch die nachfolgenden Beispiele näher erläutert:
Beispiel 1
0,1 Mol L-Alanyl-L-tyrosin wurden in 50 ml 2N- Natronlauge gelöst. Bei 0°C wurden 0,11 Mol Acetanhydrid in 18 ml Tetrahydrofuran und 27,5 ml 4N- Natronlauge so zugetropft, daß der pH-Wert des Reaktionsgemisches stets bei etwa 11 lag. Nach Beendigung der Zugabe wurde 1 Stunde lang nachgerührt, dann mit konzentrierter Salzsäure auf pH 1 angesäuert und das Volumen der Lösung auf die Hälfte eingeengt. Das N-Acetyl-L-alanyl-L-tyrosin kristallisierte aus, wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 11,08 g (38% der Theorie)
Schmelzpunkt: 206°C
1H-NMR (DMSO-d6) : 1,17 (d, 3H), 1,83 (s, 3H), 2,87 (dd, 2H), 4,30 (m, 2H), 6,63 (d, 2H), 6,98 (d, 2H), 7,94 (d, 1H), 7,96 (d, 2H), 9,19 (br · s, 1H), 12,60 (br · s, 1H)
Die Spaltung des N-Acetyl-L-alanyl-L-tyrosins durch Schweinenierenhomogenisat wurde wie folgt untersucht:
140 g schlachtfrische Schweineniere wurden in kleine Stücke geschnitten und mit 200 ml eiskalter physiologischer Kochsalzlösung homogenisiert. 1 ml des nach 30minütiger Zentrifugation bei 10 000 U/min erhaltenen Überstandes wurden mit 1 ml 0,1 M Tris/HCl (pH 7)-Puffer und 1 ml einer 30 mM Lösung des Substrates in 0,1 M Tris/HCl (pH7)-Puffer versetzt und bei 37°C inkubiert. Die zeitliche Abnahme der Substratkonzentration wurde durch HPLC verfolgt.
Die so bestimmte spezifische Aktivität des Nierenhomogenisats gegenüber N-Acetyl-L-alanyl-L- tyrosin betrug 420 nMol pro Minute und g Niere.
Gegenüber einer zum Vergleich in gleicher Weise untersuchten Probe N-Acetyl-L-tyrosin zeigte das Nierenhomogenisat eine spezifische Aktivität von 43 nMol pro Minute und g Niere.
Beispiel 2
Zu 0,1 Mol L-Alanyl-L-tyrosin in 50 ml 2N Natronlauge wurden 0,12 Mol Butyrylchlorid und 0,12 Mol 4N- Natronlauge so zugetropft, daß der pH-Wert des Reaktionsgemisches stets zwischen 10 und 11 lag. Nach beendeter Zugabe wurde mit konzentrierter Salzsäure auf pH 1 angesäuert und mit Essigsäureethylester extrahiert. Der Extrakt wurde unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Die Ausbeute an N-Butyryl-L- alanyl-L-tyrosin betrug 18,37 g (47% der Theorie).
Schmelzpunkt 27-28°C
1H-NMR (DMSO-d6): 0,83 (t, 3H), 1,17 (d, 3H), 1,50 (m, 2H), 2,08 (t, 2H), 2,80 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,34 (m, 2H), 6,65 (d, 2H), 6,99 (d, 2H), 7,87 (m, 2H), 9,18 (br · s, 1H), 12,50 (br · s, 1H)
Bei der im Beispiel 1 beschriebenen Untersuchung zeigte das Nierenhomogenisat gegenüber N-Butyryl-L- alanyl-L-tyrosin eine spezifische Aktivität von 660 nMol pro Minute und g Niere.
Beispiel 3*
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol L-Alanyl-L-valin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-L-alanyl-L-valin betrug 17,72 g (77% der Theorie).
Schmelzpunkt: 147°C
1H-NMR (DMSO-d6): 0,94 (d, 6H), 1,28 (d, 3H), 1,92 (s, 3H), 2,16 (m, 1H) 4,23 (dd, 1H), 4,49 (dq, 1H), 7,96 (d, 1H), 8,11 (d, 1H), 12,65 (br · s, 1H)
Beispiel 4*
0,1 Mol L-Alanyl-L-leucin wurden mit Acetanhydrid acyliert wie im Beispiel 1. Beim Ansäuern des Reaktionsgemisches auf pH 1 kristallisierte das N-Acetyl-L-alanyl-L-leucin sofort aus. Die Ausbeute betrug 17,8 g (73% der Theorie).
Schmelzpunkt: 145°C
1H-NMR (DMSO-d6): 0,84 (d, 3H), 0,90 (d, 3H), 1,18 (d, 3H), 1,62 (m, 2H), 1,61 (m, 1H), 1,82 (s, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 7,97 (d, 1H), 8,00 (d, 1H), 12,48 (br · s, 1H)
Beispiel 5
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol L-Alanyl-L-isoleucin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-L-alanyl-L-isoleucin betrug 19,44 g (80% der Theorie).
Schmelzpunkt: 124°C
1H-NMR (DMSO-d6): 0,87 (d, 3H), 0,87 (t, 3H), 1,18 (d, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,41 (m, 1H), 1,79 (m, 1H), 1,82 (s, 3H), 4,18 (dd, 1H), 4,39 (dq, 1H), 7,88 (d, 1H), 8,00 (d, 1H). 12,54 (br · s, 1H)
Beispiel 6
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol L-Alanyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-L-alanyl-L-glutamin betrug 13,44 g (52% der Theorie).
Schmelzpunkt 160°C
1H-NMR (DMSO-d6) 1,18 (d, 3H), 1,81 (s, 3H), 1,70-2,05 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 6,78 (br · s, 1H), 7,29 (br · s, 1H), 8,05 (d, 1H), 8,16 (d, 1H), 12,55 (br · s,1H)
Beispiel 7*
0,05 Mol L-Alanyl-L-tryptophan wurden in 25 ml 2N- Natronlauge gelöst. Bei 0°C wurden 0,055 Mol Acetanhydrid in 9 ml Tetrahydrofuran und 13,7 ml 4N- Natronlauge so zugetropft, daß der pH-Wert des Reaktionsgemisches stets bei etwa 11 lag. Nach Beendigung der Zugabe wurde 1 Stunde lang nachgerührt und dann mit konzentrierter Salzsäure auf pH 1 angesäuert. Dabei kristallisierte das N-Acetyl-L- alanyl-L-tryptophan aus. Es wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute betrug 14,74 g (93% der Theorie).
Schmelzpunkt 214°C (unter Zersetzung)
1H-NMR (DMSO-d6): 1,18 (d, 3H), 1,79 (s, 3H), 3,12 (m, 2H), 4,32 (dq, 1H), 4,46 (m, 1H), 7,00 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,33 (d, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,99 (d, 1H), 10,87 (br · s, 1H) 12,62 (br · s, 1H)
Beispiel 8*
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol Glycyl-L-valin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-glycyl-L-valin betrug 10,69 g (50% der Theorie).
Schmelzpunkt: 133°C
1H-NMR (D2O): 0,82 (d, 3H), 0,87 (d, 3H), 1,95 (s, 2H), 2,08 (m, 1H), 3,86 (s, 2H), 4,18 (d, 1H)
Beispiel 9*
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol Glycyl-L-leucin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-glycyl-L-leucin betrug 3,33 g (15% der Theorie).
Schmelzpunkt: 125°C
1H-NMR (DMSO-d6): 0,79 (d, 3H), 0,84 (d, 3H), 1,47 (m, 2H), 1,56 (m, 1H), 1,80 (s, 3H), 3,66 (d, 2H), 4,19 (m, 1H), 8,02 (m, 2H) 12,50 (br · s, 1H)
Beispiel 10*
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol Glycyl-L-tyrosin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-glycyl-L-tyrosin betrug 20,2 g (72% der Theorie).
Schmelzpunkt: 162°C
1H-NMR (DMSO-d6): 1,83 (d, 3H), 2,78 (dd, 1H), 2,92 (dd, 1H), 3,68 (m, 2H), 4,37 (m, 1H), 6,67 (d, 2H), 6,99 (d, 2H), 7,98 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 9,20 (br · s, 1H), 12,66(br · s, 1H)
Beispiel 11
Es wurde verfahren wie im Beispiel 1 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol Glycyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Acetyl-glycyl-L-glutamin betrug 23,70 g (96% der Theorie).
Schmelzpunkt: 193°C (unter Zersetzung)
1H-NMR (D2O): 1,90 (m, 1H), 2,02 (s, 3H), 2,10 (m, 1H), 2,27 (t, 2H), 3,81 (s, 2H), 4,32 (dd, 1H)
Beispiel 12
Zu einer Lösung von 0,1 Mol L-Alanyl-L-tyrosin in 200 ml Ameisensäure wurden unter Kühlung 70 ml Acetanhydrid so zugetropft, daß die Temperatur zwischen 5 und 15°C blieb. Es wurde 2 Stunden lang ohne Kühlung nachgerührt. Dann wurden 80 ml Eiswasser zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde zur Trockne eingedampft und der Rückstand aus Wasser umkristallisiert. Die Ausbeute an N-Formyl-L-alanyl- L-tyrosin betrug 17,46 g (62% der Theorie).
Schmelzpunkt 163°C
1H-NMR (DMSO-d6): 1,17 (d, 3H), 2,86 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 6,63 (d, 2H), 6,99 (d, 2H), 7,96 (s, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,18 (d, 1H)
Beispiel 13
Es wurde verfahren wie im Beispiel 12 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol L-Alanyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Der nach dem Eindampfen verbliebene Rückstand wurde aus Wasser/Ethanol umkristallisiert. Die Ausbeute an N-Formyl-L-alanyl-L-glutamin betrug 9,32 g (38% der Theorie).
Schmelzpunkt: 150°C
1H-NMR (DMSO-d6): 1,21 (d, 3H), 1,79 (m, 1H), 1,96 (m, 1H), 2,13 (m, 2H), 4,12 (m, 1H), 4,41 (dq, 1H), 6,77 (br · s, 1H), 7,27 (br · s, 1H), 8,22 (d, 2H), 12,30 (br · s, 1H)
Beispiel 14
Es wurde verfahren wie im Beispiel 12 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-tyrosin 0,1 Mol Glycyl-L-tyrosin eingesetzt wurden. Der nach dem Eindampfen verbliebene Rückstand wurde aus Ethanol/Aceton umkristallisiert. Die Ausbeute an N-Formyl-glycyl-L-tyrosin betrug 5,50 g (21% der Theorie).
Schmelzpunkt: 182°C
1H-NMR (DMSO-d6): 2,83 (m, 2H), 3,77 (m, 2H), 4,37 (m, 1H), 6,84 (d, 2H), 6,98 (d, 2H), 8,03 (s, 1H), 8,13 (m, 2H)
Beispiel 15
Zu einer Lösung von 0,05 Mol Glycyl-L-glutamin in 100 ml Ameisensäure wurden unter Kühlung 35 ml Acetanhydrid so zugetropft, daß die Temperatur zwischen 5 und 15°C blieb. Es wurde 2 Stunden lang ohne Kühlung nachgerührt. Dann wurden 40 ml Eiswasser zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde zur Trockne eingedampft und der Rückstand aus Methanol/Isopropanol umkristallisiert. Die Ausbeute an N-Formyl-glycyl-L-glutamin betrug 6,57 g (29% der Theorie).
Schmelzpunkt: 168°C (unter Zersetzung)
1H-NMR (DMSO-d6): 1,79 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,10 (m, 2H), 3,79 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 6,77 (br · s, 1H), 7,28 (br · s, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,20 (m, 2H)
Beispiel 16
0,1 Mol L-Alanyl-L-glutamin wurden in 50 ml 2N- Natronlauge gelöst. Bei 0°C wurden 0,11 Mol Propionsäureanhydrid in 18 ml Tetrahydrofuran und 27,5 ml 4N-Natronlauge so zugetropft, daß der pH-Wert des Reaktionsgemisches stets bei etwa 11 lag. Nach Beendigung der Zugabe wurde noch 1 Stunde lang nachgerührt, dann mit konzentrierter Salzsäure auf pH 1 angesäuert und das Volumen der Lösung auf die Hälfte eingeengt. Das N-Propionyl-L-alanyl-L-glutamin kristallisierte aus, wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 19,41 g (71% der Theorie)
Schmelzpunkt: 78-82°C
1H-NMR(D2O): 0,98 (t, 3H), 1,28 (d, 3H), 1,89 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,15 (m, 2H), 2,24 (q, 2H), 4,17 (q, 1H), 4,27 (dd, 1H)
Beispiel 17
Es wurde verfahren wie im Beispiel 16 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-glutamin 0,1 Mol L-Alanyl-L-tyrosin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Propionyl-L-alanyl-L-tyrosin betrug 17,28 g (56% der Theorie).
Schmelzpunkt: 64°C
1H-NMR(DMSO-d6): 0,98 (t, 3H), 1,18 (d, 3H), 2,10 (q, 2H), 2,87 (m, 2H), 4,32 (m, 2H), 6,67 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 7,90 (m, 2H)
Beispiel 18
Es wurde verfahren wie im Beispiel 16 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-glutamin 0,1 Mol Glycyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Propionyl-glycyl-L-glutamin betrug 21,49 g (83% der Theorie).
Schmelzpunkt: 130°C
1H-NMR(D2O): 1,12 (t, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,37 (m, 4H), 3,95 (s, 2H), 4,41 (m, 1H)
Beispiel 19
Zu 0,05 Mol L-Alanyl-L-leucin in 25 ml 2N-Natronlauge wurden 0,06 Mol Butyrylchlorid und 0,06 Mol 4N- Natronlauge so zugetropft, daß der pH-Wert des Reaktionsgemisches stets zwischen 10 und 11 lag. Nach beendeter Zugabe wurde mit konzentrierter Salzsäure auf pH 1 angesäuert und mit Essigsäureethylester extrahiert. Der Extrakt wurde unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Die Ausbeute an N-Butyryl-L-alanyl-L-leucin betrug 7,07 g (50% der Theorie).
Schmelzpunkt: 155°C
1H-NMR(DMSO-d6): 0,90 (m, 9H), 1,18 (d, 3H), 1,50 (m, 4H), 1,62 (m, 1H), 2,09 (t, 2H), 4,23 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,99 (d, 1H), 12,50 (br · s, 1H)
Beispiel 20
Es wurde verfahren wie im Beispiel 19 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von Butyrylchlorid 0,06 Mol Hexanoylchlorid eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Hexanoyl-L-alanyl-L-leucin betrug 8,77 g (58% der Theorie).
Schmelzpunkt: 112°C
1H-NMR(DMSO-d6): 0,90 (m, 9H), 1,18 (d, 3H), 1,24 (m, 4H), 1,52 (m, 4H), 1,62 (m, 1H), 2,10 (t, 2H), 4,21 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 7,91 (d, 1H), 7,96 (d, 1H), 12,60 (br · s, 1H)
Beispiel 21
Zu einer Lösung von 10 mMol L-Alanyl-L-isoleucin, 10 mMol Natriumhydroxid und 25 mMol Natriumhydrogencarbonat in 80 ml Wasser wurden 20 mMol Bernsteinsäureanhydrid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann mit konzentrierter Salzsäure auf pH 2 angesäuert. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft und der Rückstand mit 50 ml Isopropanol extrahiert. Aus dem Extrakt wurde durch Zugabe von Ether das N-Succinyl-L-alanyl-L-isoleucin ausgefällt.
Ausbeute: 1,32 g (43% der Theorie)
Schmelzpunkt 118-120°C
1H-NMR(DMSO-d6): 0,88 (m, 6H), 1,16 (m, 1H), 1,18 (d, 3H), 1,38 (m, 1H), 1,68 (m, 1H), 2,42 (m, 4H), 4,38 (m, 1H), 7,85 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 12,20 (br · s, 1H)
Beispiel 22
Es wurde verfahren wie im Beispiel 21 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-isoleucin 10 mMol L-Alanyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Succinyl-L-alanyl-L-glutamin betrug 2,27 g (78 Z der Theorie).
Schmelzpunkt: 106-108°C
1H-NMR(D2O): 1,19 (d, 3H), 1,80 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,17 (m, 2H), 2,42 (m, 4H), 4,13 (m, 2H)
Beispiel 23
Es wurde verfahren wie im Beispiel 21 mit dem einzigen Unterschied, daß anstelle von L-Alanyl-L-isoleucin 10 mMol Glycyl-L-glutamin eingesetzt wurden. Die Ausbeute an N-Succinyl-glycyl-L-glutamin betrug 2,23 g (82% der Theorie).
Schmelzpunkt: 98-100°C
1H-NMR(DMSO-d6): 1,78 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 2,16 (m, 2H), 2,46 (m, 4H), 3,76 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 8,12 (d, 1H), 8,20 (m, 1H), 10,60 (br · s, 2H)
Beispiel 24
Zu einer Lösung von 8 mMol L-Alanyl-L-tyrosin, 8 mMol Natriumhydroxid und 20 mMol Natriumhydrogencarbonat in 50 ml Wasser wurden 16 mMol Bernsteinsäureanhydrid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann mit konzentrierter Salzsäure auf pH 2 angesäuert. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft und der Rückstand mit 50 ml Isopropanol extrahiert. Das Isopropanol wurde unter vermindertem Druck abgedampft und es hinterblieben 1,32 g (50% der Theorie) N-Succinyl-L-alanyl-L-tyrosin in Form eines zähen Öls.
1H-NMR(D2O): 1,20 (d, 3H), 2,49 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 4,24 (q, 1H), 4,63 (m, 1H), 7,03 (d, 2H), 7,30 (d, 2H)
* Beispiele für ein Produkt zur künstlichen Ernährung oder für Nährmedien für Zellkulturen.

Claims (2)

1. N-Acyldipeptide der Formel R2-NH-CHR1-CO-AS (I)in der AS für Isoleucin, Tyrosin, Glutamin und Cystein steht, sofern R1 Wasserstoff und R2 eine Formylgruppe bedeuten,
oder AS für Valin, Isoleucin, Tyrosin, Glutamin und Cystein steht, sofern R1 eine Methylgruppe und R2 eine Formylgruppe bedeuten,
oder AS für Isoleucin, Glutamin und Cystein steht, sofern R1 Wasserstoff oder eine Methylgruppe und R2 eine Acetylgruppe bedeuten,
oder AS für Valin, Leucin, Isoleucin, Tyrosin, Glutamin und Cystein steht, sofern R1 Wasserstoff oder eine Methylgruppe und R2 einen Acylrest einer aliphatischen Mono- oder Dicarbonsäure mit 3 bis 6 C-Atomen bedeuten, ausgenommen Methacrylsäure und ausgenommen, wenn R1 Methyl und AS Isoleucin ist, 3-Methylbuttersäure,
und deren physiologisch verträgliche carbonsaure Salze.
2. Verwendung von N-Acyldipeptiden der Formel R2-NH-CHR 1-CO-AS (I′),in der AS für Valin, Leucin, Isoleucin, Tyrosin, Tryptophan, Glutamin und Cystein steht, R1 Wasserstoff oder eine Methylgruppe und R2 eine Formyl- oder Acetylgruppe oder einen Acylrest einer aliphatischen Mono- oder Dicarbonsäure mit 3 bis 6 C-Atomen bedeuten, und deren physiologisch verträglichen carbonsauren Salzen in Mischungen oder Lösungen für die künstliche Ernährung oder in Nährmedien für Zellkulturen.
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