DE3000225C2

DE3000225C2 -

Info

Publication number: DE3000225C2
Application number: DE3000225A
Authority: DE
Inventors: Sandor Dr. Bajusz; Geb. Hasenoehrl Erzsebet Szell; Eva Dr. Barabas; Daniel Dr. Budapest Hu Bagdy
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT
Current assignee: Teva Hungary Pharmaceutical Marketing PLC
Priority date: 1979-01-04
Filing date: 1980-01-04
Publication date: 1989-10-19
Also published as: JPS55122749A; AU533343B2; CA1133897A; FI67539B; SE448461B; FR2445826B1; CH643820A5; NO151085B; IL58978A0; FI800008A7; ATA1280A; IT1166917B; DE3000225A1; SU1366062A3; ZA796895B; IT7928304A0; AU5420779A; NO794327L; JPS5951936B2; NL191537C

Description

Die Erfindung betrifft D-Phenylalanyl-L- prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd und dessen Salze, ein Verfahren zu seiner Herstellung sowie diesen enthaltende Arzneimittel gemäß den voranstehenden Patentansprüchen. Diese Verbindung hat die Blutgerinnung hemmende Wirkung.

Es ist bekannt, daß Peptidaldehyde von geeigneter Struktur die eiweißspaltenden beziehungsweise proteolytischen Reaktionen der Serin- beziehungsweise Cystein-Enzyme hemmen können. Diese Enzymhemmung wird damit erklärt, daß die Aldehydgruppe

der Peptidaldehyde eine Additionsreaktion mit der reaktionsfähigen Hydroxy- beziehungsweise Mercaptogruppe (Gruppe der Formel -OH beziehungsweise -SH) der eiweißspaltenden beziehungsweise proteolytischen Enzyme eingehen kann; das durch diese Additionsreaktion entstehende Halbacetal tritt nämlich wie ein "unproduktives" Analogen des bei der Enzym-Substrat-Wechselwirkung sonst entstehenden tetrahedrischen Übergangskomplexes auf (vergleiche Westerik und Wolfenden, J. Biol. Chem. 247 [1972], 8 195).

Die ersten bekannten Vertreter dieser enzymhemmenden Verbindungen waren die Leupeptine natürlichen Ursprunges, des Acetyl-L-leucyl-L-leucyl-arginin-aldehyd-hydrochlorid und die Propionyl-L-leucyl-leucyl-arginin-aldehyd-hydrochloride, welche zur Hemmung von Plasmin, Trypsin und Papain fähig sind (vergleiche Kawamura und Mitarbeiter, Chem. Pharm. Bull. 17 [1969], 1 902; H. Umezawa, Enzyme Inhibitors of Microbial Origin, University Park Press, Baltimore-London- Tokyo, 1972, Seite 17 bis 29). Weitere Peptidyl-arginin- aldehyde, zum Beispiel das Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl- L-arginin-aldehyd-p-toluolsulfonat und das D-Phenylalanyl- L-propyl-L-arginin-aldehyd-acetat zeigen erhebliche die Blutgerinnung hemmende Wirkungen beziehungsweise Antithrombinwirkungen (vergleiche HU-PS 1 69 870).

Auf Grund von Untersuchungen der magnetischen Kernresonanzspektren (NMR-Untersuchungen) der Leupeptine wurden diese Acyl-arginin-aldehyd-hydrochloride als Gemische von schwankender Zusammensetzung (vergleiche Maeda und Mitarbeiter, J. Antibiotics (Tokyo), 24 [1971], 402; Kawamura und Mitarbeiter, Chem. Pharm. Bull. 17 [1969], 1 902), in welchen neben dem Acyl-arginin-aldehyd-hydrochlorid das entsprechende Aldehydhydrat und das cyclische Carbinolaminderivat als weitere Bestandteile zugegen sind, angesehen. Von diesen beiden Bestandteilen kann das Aldehydhydrat nicht unmittelbar bei der zur Enzymhemmung führenden Halbacetalbildung mitwirken (vergleiche Westerik und Wolfenden, J. Biol. Chem. 247 [1972], 8 195). Gerade dadurch, das heißt durch das ungewisse beziehungsweise schwankende Maß der Aldehydhydratbildung kann die eigene neuere Beobachtung erklärt werden, daß die enzymhemmende Wirkung der erwähnten synthetischen Produkte, zum Beispiel die die Blutgerinnung hemmende Wirkung von D-Phenylalanyl- L-prolyl-L-arginin-aldehyd-acetat oder -hydrochlorid ziemlich schwankend ist und die Wirksamkeit dieser Verbindungen beim Stehen im gelösten Zustand [zum Beispiel in Lösung in einem Tris-(hydroxymethyl)-methylaminhydrochlorid-Puffer einem pH-Wert von 7,4] mit der Zeit abnimmt.

Ferner ist es bekannt, daß die in basischen Medien durchgeführte Hydrogenolyse von durch eine Benzyloxycarbonylgruppe geschützten Peptidyl-arginin- aldehyden und die nachfolgende Salzbildung zu freien Peptidyl-arginin-aldehyd-salzen führt. So wurden zum Beispiel aus Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-propyl-N^G- benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd auf diesem Wege D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd-acetat und -hydrochlorid erhalten (vergleiche die HU-PS 1 69 870).

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, unter Behebung der Nachteile des Standes der Technik neue Peptidyl-arginin- aldehyd-derivate mit überlegenen pharmakologischen Wirkungen, insbesondere die Blutgerinnung hemmenden Wirkungen, welche im Vergleich zu den bekannten Produkten dieser Art eine stabilere und/oder höhere enzymhemmende Wirksamkeit aufweisen, ein einfaches Verfahren zur Herstellung derselben und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel zu schaffen.

Diese Aufgabe wird durch die neue Verbindung D-Phenylalanyl- L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd sowie deren Salze gemäß Patentanspruch 1 gelöst.

Es wurde überraschenderweise festgestellt, daß die am ω -Aminostickstoffatom der Argininseitenkette (im folgenden abgekürzt als N^G bezeichnet) eine Carboxylgruppe aufweisende erfindungsgemäße Verbindung eine stabilere und/oder stärkere enzymhemmende Wirkung als die die entsprechenden Aminosäuresequenzen aufweisenden Peptidyl-arginin-aldehyd- derivate ohne die genannte Carboxylgruppe zeigen.

Daß das erfindungsgemäße Verfahren des Patentanspruchs 2 zu D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd bzw. seinen Salzen führt, ist in Anbetracht der Tatsache überraschend, daß die in bekannten basischen Medien durchgeführte Hydrogenolyse von mit Benzyloxycarbonylgruppen geschützten Peptidyl-arginin-aldehyden und die nachfolgende Salzbildung zu freien Peptidyl-arginin-aldehyd-salzen ohne N^G-Carboxylgruppen führt.

Vorzugsweise wird das erfindungsgemäße Verfahren in einem Gemisch von Äthanol und Wasser durchgeführt, wobei nach erfolgter Umsetzung das Äthanol aus dem Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck abdestilliert und die als Rückstand verbleibende wäßrige Lösung lyophilisiert wird. Gegebenenfalls wird das erhaltene Lyophilisat in Wasser gelöst und nach Zugabe einer weniger als äquivalenten Menge einer Säure erneut lyophilisiert.

Vorteilhaft können die im erfindungsgemäßen Verfahren als Ausgangsstoffe verwendeten an der Guanidinogruppe und gegebenenfalls auch am anderen endständigen Aminostickstoffatom durch eine Schutzgruppe beziehungsweise Schutzgruppen, wie eine Benzyloxycarbonylgruppe beziehungsweise Benzyloxycarbonylgruppen geschützten Peptidyl-arginin-aldehyde durch Kondensation des entsprechend geschützten L-Arginin-lactames mit dem entsprechenden N-Acyldipeptid und Reduktion des erhaltenen geschützten Peptidyllactames hergestellt werden.

Die erfindungsgemäße Verbindung hat nämlich, wie bereits erwähnt, wertvolle pharmakologische, insbesondere die Blutgerinnung hemmende, Wirkungen. Dabei ist, wie bereits ebenfalls erwähnt, ihre enzymhemmende Wirkung stabiler und/oder stärker als die der keine N^G-Carboxylgruppe aufweisenden die entsprechenden Aminosäuresequenz aufweisenden freien Peptidyl-arginin-aldehyd-salze. So zeigt der D-Phenylalanyl-L-propyl-N^G-carboxy-L-arginin- aldehyd eine höhere die Blutgerinnung hemmende Wirksamkeit, das heißt eine stärkere hemmende Wirkung auf die Reaktion von Thrombin + Fibrinogen als das D-Phenylalanyl-L-prolyl- L-arginin-aldehyd-hydrochlorid beziehungsweise -acetat, welche schwächere und in Abhängigkeit von den Synthesebedingungen schwankende enzymhemmende Wirkungen zeigen. Die die Blutgerinnung hemmende Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindung bleibt nach 20 Stunden langem Stehen in einer Pufferlösung mit einem pH-Wert von 7,4 praktisch unverändert, während die Wirksamkeit der entsprechenden keine N^G-Carboxylgruppe aufweisenden Peptidyl-arginin-aldehyde unter den gleichen Bedingungen auf 10 bis 20% des Anfangswertes sinkt.

Überraschend ist, daß durch eine Salzbildung von D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd seine entzündungshemmende Wirkung weiter erhöht wird. So ist zum Beispiel das Halbhydrochlorid von D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L- arginin-aldehyd 5mal so wirksam, wie der entsprechende D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd, welcher keinen Chlorwasserstoff enthält. Die Stabilität der erfindungsgemäßen Verbindung nimmt zwar mit seiner Salzbildung ab, die Stabilität dieser Salze ist aber nach 20 Stunden langem Stehen in Pufferlösungen noch immer höher als die Stabilität der entsprechende Aminosäuresequenzen aufweisenden Peptidyl-arginin-aldehyd-salze ohne N^G-Carboxylgruppe unter den gleichen Bedingungen.

Zur Veranschaulichung der oben geschilderten Wirksamkeits- und Stabilitätsverhältnisse sind in der folgenden Tabelle die die Blutgerinnung hemmenden Wirksamkeiten des erfindungsgemäßen D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L- arginin-aldehydes, von dessen Halbhydrochlorid und von 2 Salzen des die gleichen Aminosäuresequenzen aufweisenden Peptidyl-arginin-aldehydes ohne N^G-Carboxylgruppe D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd und die Änderungen dieser Wirksamkeiten nach 20 Stunden langem Stehen in einem Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan/Chlorwasserstoff-Puffer (Tris/HCl-Puffer) (pH-Wert = 7,4) sowie die auf die Wirksamkeit von D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin- aldehyd unmittelbar nach seinem Lösen (Wirksamkeit = 100) bezogenen relativen Wirksamkeiten dieser Verbindungen unmittelbar nach ihrem Lösen beziehungsweise nach 20 Stunden langem Stehen in der genannten Pufferlösung zusammengestellt. Die die Blutgerinnung hemmenden Wirksamkeiten der einzelnen Verbindungen sind durch diejenigen Substanzmengen, welche zur 10fachen Verlängerung der Gerinnungszeit von mit Thrombin induziertem Fibrinogen erforderlich sind, gekennzeichnet. Die die Blutgerinnung hemmenden Wirksamkeiten der einzelnen Verbindungen wurden im folgenden System ermittelt:
0,2 cm³ 0,5%iges Rinderfibrinogen in 0,9%iger Kochsalzlösung,
0,1 cm³ einer Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan/Chlorwasserstoff- Pufferlösung (pH-Wert = 7,4), welche auch das zu untersuchende Peptid enthielt, und
0,1 cm³ 5 Einheiten/cm³ einer Lösung von US Standard Human Thrombin (NIH, Bethesda, Maryland, USA).

Die Gerinnungszeit dieses Systems ohne Peptidzusatz betrug 15 Sekunden.

Tabelle

Die Blutgerinnung hemmende Wirksamkeit

Aus der obigen Tabelle geht eindeutig die Überlegenheit der erfindungsgemäßen Verbindung gegenüber den Vergleichssubstanzen hervor.

Die Ergebnisse der Untersuchungen in vivo werden am Beispiel von D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin- aldehyd veranschaulicht. Die an 5 verschiedenen Tierarten (Mäusen, Ratten, Hasen, Hunden und Affen) durchgeführten Untersuchungen haben gezeigt, daß sich die erhöhte die Blutgerinnung hemmende Wirksamkeit der genannten Verbindung auch in vivo äußert. Diese Wirkung ist nicht nur bei interavenöser, intramuskulärer und subkutaner, sondern auch bei peroraler Verabreichung sehr bedeutend. Es ist für die die Blutgerinnung hemmende Wirksamkeit von D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd charakteristisch, daß er in peroralen Dosen von 50 mg/kg an Hunden die Gerinnungszeit des Blutes, gemessen im Thrombelastograph (Hellige, Wien, Österreich), auf das 4- bis 6fache erhöht; die Zeitdauer der Wirkung ist etwa 2 Stunden. Die Salze des entsprechenden D-Phenylalanyl-L- prolyl-L-arginin-aldehydes ohne N^G-Carboxylgruppe, zum Beispiel das D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd- hydrochlorid beziehungsweise -acetat, zeigen in peroralen Dosen von 50 mg/kg praktisch keinen Einfluß auf die Gerinnungszeit des Blutes.

Die Erfindung wird an Hand der folgenden Beispiele näher erläutert. Die R_f-Werte wurden durch Schichtchromatographie an einem Silicagel ("Kieselgel G", Produkt der Firma Reanal, Budapest) in den folgenden Lösungsmittelgemischen bestimmt:

1. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Volumenverhältnis von 480 : 20 : 6 : 11 (R_f ¹-Wert)
2. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Volumenverhältnis von 240 : 20 : 6 : 11 (R_f ²-Wert)
3. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Volumenverhältnis von 60 : 20 : 6 : 11 (R_f ³-Wert)
4. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Volumenverhältnis von 30 : 20 : 6 : 11 (R_f ⁴-Wert).

Beispiel 1 D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd

Es wurden 6,7 g (10 Millimol) Benzyloxycarbonyl-D- phenylalanyl-L-prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin- aldehyd in 100 ml 75%igem wäßrigem Äthanol gelöst und die Lösung wurde mit 1 g von 10% Palladium auf Aktivkohle als Katalysator versetzt und unter Normaldruck mit Wasserstoff behandelt. Das Fortschreiten der Hydrierung wurde durch Dünnschichtchromatographie kontrolliert (R_f ⁴-Wert des geschützten Tripeptidaldehydes Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L- prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd: 0,90 bis 0,95 und des freien N^G-Carboxylderivates D-Phenylalanyl-L-prolyl- N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd: 0,35 bis 0,40). Nach dem Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit 30 ml Wasser gewaschen und das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat wurde zum Entfernen des Äthanoles unter vermindertem Druck auf etwa 30 bis 40 ml eingeengt.

Der wäßrige Rückstand wurde mit 100 ml Wasser verdünnt, mit 30 ml Dichlormethan ausgeschüttelt, dann zum Gefrieren gebracht und lyophilisiert. So wurden 4,3 g (96,4% der Theorie) (die Ausbeute stellt hier und in den anderen Beispielen

dar) D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin- aldehyd erhalten.

R_f ⁴-Wert = 0,35 bis 0,40.
[α]-Wert = -123 ±1° (c = 1, in Wasser).
Aminosäureanalyse: Phenylalanin = 1,02, Arginin = 0,97 (gemessen als NH₃) und Prolin = 1,00 (Bezugsgrundlage).
Molekulargewicht auf Grund der Aminosäureanalyse berechnet: 471
Mit Schwefelsäure freisetzbares CO₂: 10,9 Gew.-%;
als BaCO₃ fällbares CO₂: 2,1 Gew.-%.

Der als Ausgangssubstanz verwendete Benzyloxycarbonyl- D-phenylalanyl-L-prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin- aldehyd ist wie folgt beschrieben hergestellt worden:

a) tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxycarbonyl- L-arginin-lactam

Es wurden 41,1 g (125 Millimol) tert.-Butyloxycarbonyl- L-arginin-hydrochlorid-hydrat (Yamashiro und Mitarbeiter, J. Am. Chem. Soc. 94 [1972], 2 855) in 125 ml einer 4-N-Natriumhydroxydlösung gelöst und die Lösung wurde auf -5 bis 0°C gekühlt und unter kräftigem Rühren beziehungsweise Schütteln mit 75 ml (500 Millimol) Chlorkohlensäurebenzylester und 125 ml einer 4-N-Natriumhydroxydlösung versetzt, wodurch der pH-Wert des Gemisches über 10 stieg. Das Rühren beziehungsweise Schütteln wurde bei etwa 0°C 1,5 Stunden fortgesetzt, dann wurde das Gemisch mit 100 ml Wasser verdünnt und 3mal mit je 100 ml Diäthyläther ausgeschüttelt und anschließend mit einer auf 4 bis 6°C gekühlten 3-N- Schwefelsäure unter Kühlen mit Eiswasser auf einen pH-Wert von 3 angesäuert (wozu etwa 130 ml der 3-N-Schwefelsäure erforderlich waren). Das abgeschiedene Produkt wurde 3mal mit je 250 ml Äthylacetat extrahiert und die Äthylacetatphasen wurden vereinigt, 2mal mit je 125 ml einer 15%igen Natriumchloridlösung ausgeschüttelt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wurde mit Diäthyläther verrieben, abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet. So wurden 37,5 g (73,5% der Theorie) tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L- arginin erhalten.
R_f ²-Wert: 0,17 bis 0,27.

Das so erhaltene tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxy carbonyl-L-argininprodukt wurde in 130 ml Tetrahydrofuran gelöst und die Lösung wurde mit 13,58 ml (97 Millimol) Triäthylamin versetzt und auf -10°C gekühlt. Bei dieser Temperatur wurden 12,8 ml (97 Millimol) Chlorkohlensäureisobutylester und anschließend nach 5 Minuten langem Rühren beziehungsweise Schütteln 13,6 ml (97,8 Millimol) Triäthylamin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde lang bei 0°C und dann ohne Kühlung noch 1 Stunde weitergerührt und danach in 600 ml Eiswasser eingegossen. Das ausgeschiedene Produkt wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und dann in einem Vakuumexsikkator über Phosphorpentoxyd getrocknet. So wurden 32,7 g (91% der Theorie, bezogen auf das eingesetzte tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L- arginin) tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L- arginin-lactam erhalten (die auf tert.-Butyloxycarbonyl- L-arginin-hydrochlorid-hydrat bezogene Ausbeute betrug 67% der Theorie).
R_f ¹-Wert: 0,85 bis 0,95.
Schmelzpunkt: 162 bis 164°C.

b) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-N^G- benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam

Es wurden 8,6 g (22 Millimol) wie im obigen Abschnitt a) beschrieben erhaltenes tert.-Butyloxycarbonyl-N^G-benzyloxycarbonyl- L-arginin-lactam in 20 ml Äthylacetat suspendiert und unter Rühren beziehungsweise Schütteln bei 5°C mit 40 ml einer 4-N-Salzsäure in Äthylacetat versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten lang unter Kühlen mit Eiswasser gerührt beziehungsweise geschüttelt und dann mit 100 ml gekühltem Äthylacetat verdünnt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und in einem Vakuumexsikkator über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das so erhaltene N^G-Benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam-hydrochlorid wurde in 20 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung wurde auf -10°C abgekühlt und mit 6,2 ml (44 Millimol) Triäthylamin versetzt. Es wurde eine Suspension erhalten, welche dann mit dem in der folgenden Weise hergestellten gemischten Anhydrid umgesetzt wurde.

Es wurden 8 g (20 Millimol) Benzyloxycarbonyl-D-phenyl alanyl-L-prolin (Nikolaides und Mitarbeiter, J. Med. Chem. 11 [1968], 74) in 25 ml Dimethylformamid gelöst und die Lösung wurde auf -15°C gekühlt und unter Rühren beziehungsweise Schütteln bei dieser Temperatur mit 2,22 ml (20 Millimol) N-Methylmorpholin und 2,64 ml (20 Millimol) Chlorkohlensäureisobutylester versetzt.

Nach 10 Minuten langem Rühren beziehungsweise Schütteln wurde die obige Lactamsuspension zugesetzt und der pH-Wert des Reaktionsgemisches erforderlichenfalls mit Triäthylamin auf 8 bis 9 eingestellt. Das Gemisch wurde 1 Stunde bei -15°C und noch 1 Stunde bei 0°C gerührt beziehungsweise geschüttelt und dann mit 50 ml Benzol verdünnt. Die ausgeschiedenen Salze wurden abfiltriert und 2mal mit je 20 ml Benzol gewaschen. Die Waschflüssigkeiten wurden mit dem Filtrat vereinigt, dann wurden 50 ml Wasser zugegeben, die Phasen wurden getrennt und die wäßrige Phase wurde 3mal mit je 20 ml Benzol ausgeschüttelt. Die Benzolphasen wurden vereinigt, 3mal mit je 30 ml einer 10%igen wäßrigen Natriumcarbonatlösung, dann 1mal mit 30 ml Wasser, danach 2mal mit je 30 ml einer 0,1-N-Salzsäure und schließlich 2mal mit je 30 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wurde mit 30 ml Diäthyläther verrieben, der Äther wurde abdekantiert und der Rückstand wurde mit Petroläther verrieben, abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und an der Luft getrocknet. So wurden 11,7 g (88% der Theorie, bezogen auf das eingesetzte Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolin, beziehungsweise 80% der Theorie, bezogen auf das eingesetzte tert.-Butyloxycarbonyl- N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam) Benzyloxycarbonyl- D-phenylalanyl-L-prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl- L-arginin-lactam erhalten.
R_f ¹-Wert = 0,72 bis 0,78.

c) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-N^G- benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd

Es wurden 10,05 g (15 Millimol) wie im vorstehenden Abschnitt b) beschrieben erhaltenes Benzyloxycarbonyl-D- phenylalanyl-L-prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam in 45 ml Tetrahydrofuran gelöst und die Lösung wurde auf -20°C gekühlt und unter kräftigem Rühren beziehungsweise Schütteln bei dieser Temperatur mit 11,25 Millimol in Tetrahydrofuran gelöstem Lithiumaluminiumhydrid (etwa 28 ml einer 0,4-M-Lösung) versetzt. Das Stattfinden der Reduktion wurde durch Dünnschichtchromatographie kontrolliert (R_f ¹-Wert des Lactames Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl- L-prolyl-N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam: 0,72 bis 0,78 und des Aldehydes Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl- N^G-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd: 0,32 bis 0,40); erforderlichenfalls konnte weitere Lithiumaluminiumhydridlösung zugegeben werden. Nach dem Ablauf der Reaktion wurde das Reaktionsgemisch mit einer N-Salzsäure vorsichtig auf einen pH-Wert von 2 angesäuert und mit so viel Wasser (etwa 100 ml) verdünnt, daß noch keine Fällung eintrat. Dann wurde das Gemisch 2mal mit je 30 ml n-Hexan und anschließend 3mal mit je 75 ml Dichlormethan ausgeschüttelt. Die mit Dichlormethan erhaltenen Auszüge wurden vereinigt, 3mal mit je 10 ml einer 10%igen wäßrigen Natriumcarbonatlösung und anschließend 2mal mit je 10 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wurde in 50 ml Benzol gelöst und die Lösung wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Das Lösen des Rückstandes in Benzol und das Verdampfen des Benzoles wurden noch 2mal wiederholt. Der zuletzt erhaltene Verdampfungsrückstand wurde mit Diäthyläther verrieben, abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet. So wurden 7,3 g (73% der Theorie) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-N^G-benzyloxy carbonyl-L-arginin-aldehyd erhalten.
R_f ¹-Wert = 0,32 bis 0,40.
Schmelzpunkt: 116 bis 117°C.

Beispiel 2 D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin- aldehyd-halbhydrochlorid

Es wurde 0,48 g (1 Millimol) wie im Beispiel 1 beschrieben hergestellter D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L- arginin-aldehyd in 5 ml Wasser gelöst und die Lösung wurde auf 3 bis 5°C gekühlt und bei dieser Temperatur mit 5 ml einer 0,1-N-Salzsäure versetzt. Das Gemisch wurde zum Gefrieren gebracht und lyophilisiert. So wurde 0,45 g (93% der Theorie) D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L- arginin-aldehyd-halbhydrochlorid erhalten.
R_f ⁴-Wert = 0,35 bis 0,40.
[α]-Wert = -120°C (c = 1, in Wasser).

Claims

1. D-Phenylalanyl-L-prolyl-N^G-carboxy-L-arginin-aldehyd der Formel I sowie dessen Salze.

2. Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man von einem an der Guanidinogruppe, und gegebenenfalls am endständigen Stickstoffatom, durch Schutzgruppen vom Urethantyp geschützten D-Phenylalanin-L-prolyl-L- arginin-aldehyd die Schutzgruppen durch Hydrogenolyse in Gemischen von niederen Alkanolen mit Wasser in Abwesenheit von Säuren und Basen abspaltet und gegebenenfalls die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I in Salze überführt.

3. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung nach Anspruch 1 zusammen mit üblichen pharmazeutischen Konfektionierungsmitteln.