DE2433209A1

DE2433209A1 - Hitzestabile plasmaproteinloesungen, verfahren zu ihrer herstellung und arzneipraeparate

Info

Publication number: DE2433209A1
Application number: DE2433209A
Authority: DE
Inventors: Ken-Ichi Izaka; Kazuo Takechi
Original assignee: Green Cross Corp Korea
Current assignee: GC Biopharma Corp
Priority date: 1974-02-18
Filing date: 1974-07-10
Publication date: 1975-08-21
Also published as: DE2433209C3; AT329758B; SE7408018L; DE2433209B2; US4017470A; JPS5417002B2; CA1024889A; ATA562074A; CH610761A5; JPS50111225A; SE431509B

Description

u.Z.: K 859 (Vo/Mü/kä)
Case A 159-04

THE GREEN CROSS CORPORATION
Osaka, Japan

" Hitzestabile Plasmaproteinlösungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneipräparate "

Priorität: 18. Februar 1974, Japan, Nr. 19 247/74

Die Erfindung betrifft hitzestabile Plasmaproteinlösungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneipräparate .

Hitzestabile Plasmaproteinlösungen eignen sich zur Schocktherapie bei akuten Blutungen, Verbrennungen und Hypoproteinämie, sowie als Proteinquellen. Zur Herstellung von hitzestabilen Proteinlösungen aus Plasma sind folgende Verfahren bekannt: 1. Modifiziertes Cohnsches Verfahren durch Fraktionierung mit Äthanol bei niedrigen Temperaturen; vgl. Japanisches Patent 265 704 und Japanische Patentveröffentlichung 5 297/60.

2. Zugabe von Zinkionen bei der Fraktionierung mit Äthanol bei tiefen Temperaturen; Douglas M. Surgenor et al., "Vox Sanguinis», Bd. 5 (1960), S. 272.

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3. Verfahren, bei dem die Ionenkonzentration des Plasmas mit Hilfe eines Ionenaustauscherharzes gesenkt und instabiles Globulin durch Fällung entfernt wird; Hs. Nitchmann et al., "Vox Sanguinis",-Bd. 1 "(1956) S. 183.

Bei der Cohnschen Plasmafraktionierung mit Äthanol bei niedrigen Temperaturen fällt eine als IV-1 bezeichnete, pastenartige Proteinfraktion an, die im allgemeinen verworfen wird.

Aufgabe der Erfindung ist es, ausgehend von dieser Plasmafraktion IV-1 hitzestabile Plasmaproteinlösungen zur Verfügung zu stellen, die keine blutdrucksenkende Wirkung haben und die vorgenannten wertvollen Eigenschaften von hitzestabilen Plasmaproteinfraktionen aufweisen.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von hitzestabilen Plasmaproteinlösungen, die keine blutdrucksenkende Wirkung aufweisen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die gemäß dem Cohnschen Verfahren zur Plasmafraktionierung mit Äthanol bei niedrigen Temperaturen erhaltene Paste IV-1 zur Ex-. traktion der wasserlöslichen Proteine mit destilliertem Wasser versetzt, den erhaltenen Extrakt bei einem pH-Wert von 4,5 bis

und bei Temperaturen von 50 bis 65⁰C

5,5/in Gegenwart einer organischen Säure mit 4 bis 8 Kohlenstoffatomen zur Ausfällung von Lipo- und Glykoproteinen behandelt, den Überstand zur Entfernung der restlichen Lipoproteine mit Rivanol (2-Äthoxy-6,9-diaminoacridin-lactat) versetzt und anschließend die im erhaltenen Überstand vorhandenen blutdruck- senkenden Substanzen durch Adsorption an einem anorganischen

Adsorptionsmittel oder einem Kationenaustauscher entfernt. L -J

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Fig. 1 ist ein Blutdruckdiagramm und zeigt den Einfluß eines wäßrigen Extraktes der Paste IV-1 auf den Blutdruck bei Hunden.

ein entsprechendes
Fig. 2 zeigt / Diagramm bei Verabfolgung einer aus der Paste IV-1 hergestellten hitzestabilen Plasmaproteinlösung. Fig. 3 zeigt den Einfluß von Bradykinin als Vergleichsverbindung und Fig. 4 zeigt die kontrahierende Wirkung eines wäßrigen Extraktes der Paste IV-1 sowie einer aus dieser Paste hergestellten 5prozentigen hitzestabilen Plasmaproteinlösung auf die glatte Muskulatur des Rattenuterus.

Da hitzestabile Plasmaproteinlösungen im allgemeinen in großen Dosen verabfolgt werden, ist es erforderlich, daß sie keine aus dem Plasma stammenden blutdrucksenkenden Substanzen enthalten. ■ Wie in der japanischen Patentveröffentlichung 5 297/60 ausgeführt wird, enthält die Paste IV-1 blutdrucksenkende Substanzen, wie Kininogen. Demgemäß ergibt sich bei der Verabfolgung dieser Paste an Tiere eine Blutdrucksenkung; vgl. Fig. 1. Außerdem enthält die Paste IV-1 große Mengen an Lipo- und Glykoproteinen. Diese Proteine sind in Wasser wenig löslich und können daher keine Bestandteile von hitzestabilen Plasmaproteinlösungen sein.

Es wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß ein Großteil der in der Paste IV-1 enthaltenen Lipo- und Glykoproteine durch Erhitzen in Gegenwart einer organischen Säure mit 4 bis 8 Kohlenstoffatomen ausgefällt und anschließend entfernt werden können. Die restlichen Lipoproteine, die eine leichte. Trübung des erhaltenen Überstands verursachen, können mit Rivanol (2-Äthoxy-6,9-diaminoacridin-lactat) ausgefällt und entfernt werden.

L _J

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Ferner- wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß in der Paste IV-1 ■ enthaltende Peptide mit blutdrucksenkender Wirkung und kontrahierender Wirkung auf die glatte Muskulatur des Rattenuterus, die während des Erhitzens aus blutdrucksenkenden Substanzen, wie den Kininogenen, gebildet werden, durch Adsorption an ein anorganisches Adsorptionsmittel oder einen Kationenaustauscher entfernt werden können.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist deshalb besonders wertvoll, da es erstmals gelungen ist, pharmakologisch bedeutsame Plasmaproteinpräparate ohne blutdrucksenkende Wirkung aus der pasten- · artigen Fraktion IV-1, die bisher als Abfall verworfen wurde, herzustellen.

Die Plasmafraktion IV-1 wird erhalten, indem man aus Plasma Fibrinogen und y-Globulin durch Zusatz von Äthanol und Salzen bei Temperaturen von -3 bis -6°C ausfällt und entfernt. Der Überstand wird anschließend bei einem pH-Wert von 5,2 und bei einer Temperatur von 6°C bis zu einer Konzentration von 19 Prozent mit Äthanol versetzt. Der dabei gebildete Proteinniederschlag ist die pastenartige Fraktion IV-1. Die Proteinbestandteile der Fraktion IV-1 sind in Tabelle I angegeben.

Im folgenden wird das erfindungsgemäße Verfahren näher erläutert.

(vorzugsweise in gefrorener Form) Die auf die vorstehend beschriebene weise erhaltene Pasre IV-1 / wird zerkleinert und pro 1 kg Paste mit 4 bis 10 Liter destilliertem Wasser versetzt. Das erhaltene Gemisch wird gründlich bei 10 bis 20⁰C gerührt. Sodann werden die Feststoffe abzentrifugiert. Der erhaltene Extrakt, der die wasserlöslichen Proteine L ^J

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-D-

enthält, wird bis zu einer Konzentration von 2 bis 6 Prozent (Gewicht/Volumen) mit einer wasserlöslichen organischen Säure versetzt und anschließend einer Hitzebehandlung unterzogen.

Die organische Säure bewirkt eine gesteigerte Hitzestabilität

hitze
des Albumins, hat jedoch keine/stabilisierende Wirkung auf Lipo- und Glykoproteine. Demzufolge werden die letztgenannten Proteine beim Erhitzen des Extraktes auf über 5O⁰C ausgefällt und können entfernt werden. Erhitzt man jedoch den die organische Säure in der genannten Konzentration enthaltenden Extrakt auf Temperaturen von mehr als 65⁰C, so verliert auch das Albu- -. min seine Hitzestabilität und wird in unerwünschter Weise zusammen mit den Lipo- und Glykoproteinen ausgefällt. Je größer der Zusatz an organischer Säure ist, desto größere Anteile an Lipo- und Glykoproteinen werden ausgefällt. Wenn jedoch zu große Mengen an organischer Säure zugesetzt werden, so fällt das Albumin beim anschließenden Erhitzen zusammen mit den genannten Proteinen aus, wodurch die Ausbeute an hitzestabiler Plasmaproteinlösung vermindert wird.

Der pH-Wert der genannten wäßrigen Lösung beträgt 4,5 bis 5,5, vorzugsweise 4,9. Die Hitzebehandlung erfolgt 1 bis 4 Stunden bei 50 bis 65°C, vorzugsweise 1 bis 2 Stunden bei 58 bis 60⁰C. Wie bereits erwähnt, werden durch diese Hitzebehandlung die im Extrakt enthaltenen Lipo- und Glykoproteine ausgefällt. Der Niederschlag wird abfiltriert oder abzentrifugiert und der erhaltene Überstand in einer Menge von 0,2 bis 3,0 g/Liter, vorzugsweise 0,5 bis 1,0 g/Liter mit Rivanol versetzt. Anschließend läßt man bei Raumtemperatur oder bei niedrigeren

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Temperaturen stehen. Dabei werden die restlichen Lipoproteine, die im Überstand vorhanden sind und eine Trübung des Überstands bewirken, ausgefällt. Bei einem Zusatz von mehr als 3,0 g/Liter Rivanol wird auch Albumin in unerwünschter Weise ausgefällt. Der Überstand wird zur Fällung der restlichen Lipoproteine 2 bis 12 Stunden, vorzugsweise 4 bis 6 Stunden stehengelassen. Der Niederschlag wird abfiltriert oder abzentrifugiert und der erhaltene Überstand mit einem anorganischen Adsorptionsmittel oder einem Kationenaustauscher behandelt, wodurch im Überstand vorhandene blutdrucksenkende Substanzen entfernt werden. Die Behandlung mit der organischen Säure oder dem Kationenaustauscher wird durchgeführt, indem man den Überstand mit dem Adsorptionsmittel oder dem Austauscher versetzt. Eine andere Möglichkeit besteht darin, den Überstand über eine mit dem Adsorptionsmittel oder dem Austauscher beschickte Säule zu geben. Auf die vorstehend beschriebene Weise läßt sich eine hitzestabile Plasmaproteinlösung erhalten, die keine blutdrucksenkenden Substanzen enthält.

Spezielle Beispiele für organische Säuren mit 4 bis 8 Kohlenstoffatomen, die im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden, sind Buttersäure, Caprylsäure und Mandelsäure. Besonders bevorzugt sind Buttersäure und Mandelsäure. Beispiele für anorganische Adsorptionsmittel sind Kieselgel und Aluminiumhydroxidgel. Besonders bevorzugt ist die Verwendung von Kieselgel. Beispiele für Kationenaustauscher sind CM-Sephadex (modifiziertes, dreidimensional vernetztes Dextran mit Carboxymethylgruppen) und CM-Cellulose, ( Carboxymethylcellulose).

Besonders bevorzugt ist die Verwendung von CM-Sephadex.

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In den folgenden Beispielen werden die Messung des Blutdrucks und der Kontraktion der glatten Muskulatur sowie die Elektrophoresen folgendermaßen durchgeführt.

(1) Messung des Blutdrucks an Hunden

Ein ausgewachsener männlicher Hundebastard von 10 kg Körpergewicht wird durch Verabfolgung von Urethan betäubt und in Rücken lage festgebunden. In die linke gemeinsame Carotisarterie wird eine Blutgefäßkannüle eingeführt. Der Carotisdruck wird mit Hil fe eines Blutdruckmeßgeräts gemessen. Durch einen in die rechte Oberschenkelvene eingeführten Katheter werden die Arznei präparate verabfolgt. Aus der Differenz zwischen dem durchschnittlichen Blutdruck vor der Medikation und dem durchschnitt lichen minimalen Blutdruck nach der Medikation wird nach folgen der Gleichung die Blutdrucksenkung bestimmt:

/Durchschnittlicher Durchschnittlicher \ ( Blutdruck vor der - Blutdruck nach der J

Blutdruck- _ xVerabfolgung Verabf ol^unp; - / _x in

Senkung (%) ■ Durchschnittlicher Blutdruck vor der

Verabfolgung

Fig. T zeigt ein Blutdruckdiagramm bei intravenöser Injektion von 30 ml einer 5prozentigen IV-1-Lösung (Dosis 150 mg/kg, Blutdrucksenkung 47,9 Prozent).

Fig. 2 zeigt ein Blutdruckdiagramm bei intravenöser Injektion von 30 ml einer aus der Paste IV-1 hergestellten 5prozentigen hitzestabilen Plasmaproteinlösung (Dosis 150 mg/kg, Blutdrucksenkung 4,5 Prozent).

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Fig. 3 zeigt ein Blutdruckdiagramm bei intravenöser Injektion von 0,1 pg/kg Bradykinin als Vergleichsverbindung (injiziertes Volumen 1 ml, Blutdrucksenkung 41,1 Prozent).

(2) Messung der Kontraktion an der glatten Muskulatur des Rattenuterus

Die Messung wird nach einem modifizierten Magnus-Verfahren unter

Verwendung eines Uterus einer jungfräulichen Ratte vom Wistardurchgeführt.

Stamm mit etwa 150 g Körpergewicht/ 18 Stunden vor der Uterusisolation werden der Ratte 5 mg Diöstradiol auf intraperitonealem Wege verabfolgt. Die Messung der Kontraktion wird in einer, de Jalon-Lösung'als physiologischer Lösung durchgeführt. Das Volumen dieser physiologischen Lösung im Bad beträgt 8,6 ml, das Probenvolumen 0,4 ml und die Reaktionszeit 90 Sekunden.

Fig. 4 zeigt die kontrahierende Wirkung auf die glatte Muskulatur des Rattenuterus einer 5prozentigen IV-1-Lösung und einer 5prozentigen hitzestabilen Plasmaproteinlösung, die aus der Paste IV-1 erhalten worden ist. Zum Vergleich werden wäßrige Lösungen verwendet, die 5 ng/ml bzw. 10 ng/ml Bradykinin enthalten.

(3) Proteinelektrophorese

1) Die Plasmaproteine werden durch Elektrophorese auf Celluloseacetat fraktioniert (pH-Wert 8,6, 0,06 μ Veronalpuffer, 0,6 mA/cm) und sodann mit Ponceau 3R gefärbt. Anschließend wird der Prozentsatz jeder Fraktion mit Hilfe eines Densitometers gemessen; vgl. Tadashi Kawai und Norio Aoki, "Serum Proteins according to Cellulose Acetate Electrophoresis", Yatsugi Shoten, Tokyo 1972,

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2) Die Glycoproteine werden durch Elektrophorese auf Cellulose-. acetat fraktioniert (pH-Wert 8,6, 0,06 u Veronalpuffer, 0,6 raA/cm) und anschließend nach dem PAS-Verfahren (Periodic Acid Schiff-Verfahren) gefärbt. Anschließend wird der Prozentsatz einer jeden Fraktion mit Hilfe eines Densitometers bestimmt; vgl. Tadashi Kawai et al., "Serum Proteins According to Cellulose Acetate Electrophoresis", S. 55.

3) Die Lipoproteine werden, durch Elektrophorese auf Papier

fraktioniert (pH-Wert 8,6, 0,06 u Veronalpuffer mit 1 Prozent

ß~naphthol Albumin, 200V/20cm) und mit Tetrazobenzol-/Starbt. Anschließend wird mit Hilfe eines Densitometers der Prozentsatz einer jeden

vgl.
Fraktion bestimmt;/Robert S. Lees und Frederick T. Hatch, "Sharper Separation of Lipoprotein Species by Paper Electrophoresis in Albumin-Containing Buffer", Journal of Laboratory and Clinical Medicine, Bd_e 61 (I963), S. 518.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

. 10 kg gefrorene Paste IV-1 werden zermahlen und anschließend zu 60 Liter destilliertem Wasser gegeben. Das erhaltene Gemisch ' wird 2 Stunden gerührt und anschließend zentrifugiert. Der gebildete Überstand wird bis zu einer Endkonzentration von 4 Prozent mit Buttersäure versetzt. Der die Buttersäure enthaltende Überstand wird auf den pH-Wert 4,9 eingestellt und anschließend 1 Stunde auf eine Temperatur von 57 bis 6O⁰C erhitzt. Der gebildete Niederschlag wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit 0,2 g/Liter Rivanol versetzt und 2 Stunden gerührt. Der gebilde--

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te Niederschlag wird abzentrifugiert. Der Überstand wird mit 3 Prozent (Gewicht/Volumen) saurem Ton versetzt und zur Adsorption des im Überstand enthaltenen restlichen Rivanols 1 Stunde gerührt. Anschließend wird der Ton abfiltriert. Das Filtrat wird zur Ausfällung der gesamten Proteine bis zu einer Konzentration von 75 Prozent mit Ammoniumsulfat versetzt. Die so erhaltene Plasmaproteinpaste wird gegen Wasser dialysiert. Das Dialysat wird mit 3 Prozent (Gewicht/Volumen) Kieselgel versetzt und 1 Stunde gerührt. Sodann wird das Kieselgel abfiltriert. Man erhält eine hauptsächlich Albumin enthaltende Plasmaproteinlösung.

Die in dieser Plasmaproteinlösung enthaltenen Plasmaproteine werden elektrophoretisch untersucht. Die Verhältnisse der Fraktionen und die Ausbeuten an Albumin und Gesamtprotein sind in Tabelle I im Vergleich mit den entsprechenden Werten der bei den einzelnen Verfahrensstufen erhaltenen Lösungen sowie mit den entsprechenden Werten von menschlichem Standardserum angegeben. Aus Tabelle I geht hervor, daß die Plasmaproteine der gemäß diesem Beispiel erhaltenen hitzestabilen Plasmaproteinlösung zu . 95 Prozent aus Albumin und zu 5 Prozent aus α-Globulin bestehen. Die Glykoproteine in der Blutplasma-Proteinlösung werden ebenfalls elektrophoretisch untersucht. Die Verhältnisse der Fraktionen und die Ausbeuten an Glykoproteinen sind in Tabelle II im Vergleich zu einem wäßrigen Extrakt der Paste IV-1 und zu Standardserum angegeben. Entsprechend werden auch die Lipoproteine in der Blutplasma -Proteinlösung untersucht. Die Verhältnisse der Fraktionen und die Ausbeuten an Lipoproteinen sind in Tabelle III im Vergleich mit einem wäßrigen Extrakt der Paste

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IV-1 und Standardserum angegeben.

Tabelle I

Stufe	Anteil der einzelnen Frak tionen (%)	α	ß	y	Proteinaus beute (%)	Gesamt- jorotein	i	14 ^;
Lösung der Paste IV-1 in Veronal- puffer	Al	67	14	7	Albumin	100	13
wäßriger Extrakt der Paste IV-1	26	24	19	13	100	-
Überstand nach der Zugabe von Buttersäure und nach der Hitzebe handlung	44	7	0	0	81
erhaltene Plasma proteinlösung	93	5	Ο"	0	51
Standardserum	95	11,0	12,5	12,0	47
64,5	-

Anmerkung: Al: Albumin; α: α-Globulin; ß: ß-Globulin; y: y-Globulin.

Tabelle II

Stufe	Anteil der einzelnen Fraktionen (%)	47	31	ß	y	Ausbeute an Glykoprotei- nen($)
wäßriger Extrakt der Paste IV-1	Al	53	47 ·	13	9	100
erhaltene Plasma proteinlösung	0	17,5	34,0	0	0	0,7
Standards erum	0		31,0	17,5	-
0

Anmerkung:

α,,: ^-Globulin;

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- 12 Tabelle III

Stufe	Anteil der einzelnen Frak tionen (%)	a	ß	V	Ausbeute an Lipoprotei- nen {%)
wäßriger Extrakt der Paste IV-1	Al	62	38	0	100
erhaltene Plasma proteinlösung	O	O	O	O	0,0
Standardserum	O	35	65	O	-
O

Um zu bestätigen, daß die so erhaltene hitzestabile Plasmaproteinlösung keine blutdrucksenkende Wirkung aufweist, werden die BlutdruckSenkung bei Hunden und die Kontraktion der glatten Muskulatur des Rattenuterus gemäß den vorstehenden Verfahren gemessen. Zum Vergleich werden wäßrige Extrakte der Paste IV-1 und Bradykinin verwendet. Die Ergebnisse sind in den Figuren 1 bis 4 wiedergegeben.

mit konstanter Geschwindigkeit vorgenommene Wie sich aus Fig. 1 ergibt, bewirkt die intravenöse/Injektion von 30 ml einer 5prozentigen Lösung der Paste IV-1 (Ausgangsmaterial) unmittelbar nach der Verabfolgung eine Blutdrucksenkung. Die maximale Blutdrucksenkung wird nach 30 Sekunden erreicht. Die Blutdrucksenkung dauert auch nach vollständiger Verabfolgung des Präparates an. 12 Minuten nach der Verabfolgung ist der Blutdruck im wesentlichen wieder normal. Die Blutdrucksenkung beträgt 47,9 Prozent.

Aus Fig. 2 ergibt sich, daß durch eine intravenöse Injektion von 30 ml einer 5prozentigen hitzestabilen Plasmaproteinlösung mit

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konstanter Geschwindigkeit keine signifikante Blutdrucksenkung bewirkt wird. Es läßt sich zwar eine 4,5prozentige Blutdrucksenkung berechnen, jedoch wird eine BlutdruckSenkung von weniger als 10 Prozent im allgemeinen nicht als signifikant betrachtet.

Aus Fig. 3 ergibt sich, daß der in diesem Versuch verwendete Hund gegenüber synthetischem Bradykinin sehr empfindlich reagierte.

Schließlich ergibt sich aus Fig. 4, daß die 5prozentige hitzestabile Plasmaproteinlösung keine kontrahierende Wirkung auf die. glatte Muskulatur des Rattenuterus ausübt, während die 5prozentige Lösung der Paste IV-1 eine ausgeprägte Kontraktion bewirkte'

Aus den vorstehenden Versuchen ergibt sich, daß die 5prozentige hitzestabile Plasmaproteinlösung der Erfindung keine blutdrucksenkenden Substanzen aus der Paste IV-1 enthält, welche zu einer Blutdrucksenkung beim Hund oder einer Kontraktion der glatten Muskulatur des Rattenuterus führen.

Beispiel 2

10 kg gefrorene Paste IV-1 werden fein zermahlen und anschließend mit 70 Liter destilliertem Wasser versetzt. Das erhaltene Gemisch wird 2 Stunden gerührt und anschließend zentrifugiert. Der gewonnene Überstand wird bis zu einer Konzentration von 5 Prozent mit Mandelsäure versetzt. Sodann wird der Überstand auf den pH-Wert 5,0 eingestellt und 1 Stunde auf Temperaturen von 58 bis 62⁰C erhitzt. Der gebildete Niederschlag wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit 1,0 g/Liter Rivanol versetzt und 2 Stunden ge-

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rührt. Der gebildete Niederschlag wird abzentrifugiert. Der Überstand wird mit 3 Prozent (Gewicht/Volumen) sauren Ton versetzt und 1 Stunde gerührt. Anschließend wird der Ton abfiltriert. Das Filtrat wird zur Ausfällung der gesamten Proteine bis zu einer Konzentration von 75 Prozent mit Ammoniumsulfat" versetzt. Die auf diese Weise erhaltene Plasmaproteinpaste wird gegen V/asser dialysiert. Das Dialysat wird über eine mit CM-Sephadex (Kationenaustauscher auf der Basis eines modifizierten, dreidimensional vernetzten Dextrans mit Carboxymethylgruppen der Firma Pharmacia Co.) beschickte Säule, die auf den pH-Wert 7,0 äquilibriert ist, gegeben. Dabei werden die in der Flüssigkeit enthaltenen blutdrucksenkenden Peptide adsorbiert. Man erhält eine hitzestabile Plasmaproteinlösung. Die Plasmaproteine dieser Lösung werden elektrophoretisch untersucht. Die Anteile der Fraktionen und die Ausbeuten der einzelnen Proteine sind in Tabelle IV aufgeführt.

Tabelle IV - - .

Stufe	Anteil der einzelnen Frak tionen (%)	α	ß	Y	Proteinaus beute (°/0 )	Gesamt protein
Lösung der Paste IV-1 in Veronalpuffer	Al	67	14	7	Albumin	100
erhaltene Plasma proteinlösung	26	7	0	0	100	13,7
93	49

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Claims

- 15 Patentansprüche

1. Verfahren zur Herstellung von hitzestaMlen Plasmaproteinlösungen, die keine- blutdrucksenkende Wirkung aufweisen, dadurch gekennzeichnet, daß man die gemäß dem Cohnschen Verfahren zur Plasmafraktionierung mit Äthanol bei niedrigen Temperaturen erhaltene Paste IV-1 zur Extraktion der wasserlöslichen Proteine mit destilliertem Wasser versetzt, den erhaltenen Extrakt bei einem pH-Wert von 4,5 bis 5,5

und bei Temperaturen von 50 bis 65⁰C

/in Gegenwart einer organischen Säure mit 4 bis 8 Kohlenstoffatomen zur Ausfällung von Lipo- und Glykoproteinen behandelt, den Überstand z\ir Entfernung der restlichen Lipoproteine mit Rivanol (2-Äthoxy-6,9-diaminoacridin-lactat) versetzt und anschließend die im erhaltenen Überstand vorhandenen blutdrucksenkenden Substanzen durch Adsorption an einem anorganischen Adsorptionsmittel oder einem Kationenaustauscher entfernt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als organische Säure Buttersäure, Caprylsäure oder Mandelsäure verwendet.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man den Überstand mit 0,2 bis 3,0 g/Liter Rivanol versetzt.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Kieselgel oder Aluminiumhydroxidgel als anorganisches Adsorptionsmittel verwendet.

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5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kationenaustauscher CM-Sephadex oder CM-Cellulose verwendet.

6. Hitzestabile Plasmaproteinlösungen ohne "blutdrucksenkende Wirkung, herstellbar nach Anspruch 1.

7. Arzneipräparate, bestehend aus einer gemäß Anspruch 1 hergestellten hitzestabilen Plasmaproteinlösung und üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen.

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