DE2410033C2

DE2410033C2 - Isolierung von in lipophilen Lösungsmitteln löslichen Inhaltstoffen wäßriger Lösungen

Info

Publication number: DE2410033C2
Application number: DE2410033A
Authority: DE
Inventors: Joachim Dipl.-Chem. Dr. Breiter; Roland Dipl.-Chem. Dr. Helger
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 1974-03-02
Filing date: 1974-03-02
Publication date: 1975-09-11
Also published as: DD117744A5; NL7502400A; JPS6147132B2; JPS5736005B2; IT1029907B; DE2410033B1; FR2262548A1; ZA751273B; IL46708A0; CS197244B2; SE400834B; CH591270A5; NL182622C; US4056468A; JPS57119831A; JPS50124883A; SE7502218L; GB1467599A; FR2262548B1; BE826102A

Description

45 Adsorptions- und Verteilungs-Chromatographie mit

einem der üblicherweise hierfür verwendeten aktiven Kieselgele beschrieben.

Das Kieselgel besitzt zwar eine Korngröße von 0,05

bis 0,2 mm, aber das beschriebene Verfahren zeigt,

50 daß durch die Eigenschaften dieses Materials die

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur polaren Inhahstoffc vom Kieselgel zurückgehalten Isolierung von in lipophilen Lösungsmitteln lös- werden. Auch die unpolaren Substanzen werden noch liehen Inhaltstoffen wäßriger Lösungen sowie die relativ stark absorbiert und nur verzögert wieder frei-Verwendung bestimmter Konzentrierungshilfmittel zur gegeben. Das ergibt sich unter anderem aus den zur Durchführung dieses Verfahrens. 55 Extraktion erforderlichen Lösungsmittelmengen und

Die Extraktion solcher Inhaltstoffe gewinnt zu- deren Zusammensetzung aus polaren und unpolaren nehmend an Bedeutung, insbesondere in der Dia- Lösungsmitteln. So werden z. B. für 1 Volumenteil gnostik, wo der Nachweis oder die Bestimmung von Probenflüssigkeit etwa 25 Volumenteile Lösungsmittel Inhaltstoffen von Körperflüssigkeiten bereits im verbraucht. Das Kieselgel besitzt also eine zu hohe großen Maße durchgeführt wird. Bei diesen biolo- 60 Aktivität. Darüber hinaus ist nach diesem vorbekanngischen und medizinischen Untersuchungen werden ten Verfahren eine mechanische Vermischung der Proin der Regel die zu bestimmenden Inhaltstoffe mit bcnflüssigkeit mit dem Kieselgel erforderlich. Das Hilfe lipophiler Lösungsmittel aus den wäßrigen aber ist bei einer anschließenden quantitativen BeFlüssigkeiten extrahiert. Dabei werden diese Inhalt- Stimmung eine weitere Fehlerquelle. Versucht man, stoffe von unerwünschten, häufig in großem Über- 65 die am Beispiel von Fettsäuren aufgezeigte Methodik schuß vorhandenen Begleitstoffen — z. B. Zuckern, auf die Extraktion von Arzneimitteln oder deren Meta· Salzen, Eiweißstoffen, Harnstoff — abgetrennt und boliten mit dem üblichen Kieselgel zu übertragen, se damit aufgereinigt. Durch Einengen der gewonnenen versagt die Methode. Die Metaboliten und ihn

Muttersubstanzen voe viüseitiger 'Struktur werden in nahezu idealer Weise in eine Festflüssig-Elution sogar aus der wäßrigen Lösung heraus adsorbiert. umgewandelt werden. Die erfrodungsgemäß zu ver-Eine Desorption erfolgt nur mit polaren Lösungs- wendenden Konzentrienmgshflfsmittel zeichnen sich mitteln and dann unter Mitextraktion des Wassers; dadurch aus, daß sie ausgezeichnete Phasentrennso aber kann das angestrebte Ziel, eine Aufreinigung S mittel sind und eine quantitative Extraktion ohne und Konzentrierung der Inhaltstoffe durchzuführen, mechanische Mischvorgänge bei der Beladung ermögnieht erreicht werden. lichee. Sie behalten ihre Körnigkeit während des ge-

Der vorliegenden Erfindung lag die Aufgabe zu- samten Verfahrens bei und können erstaunlicherweise gründe, die Nachteile der bekannten Verfahren zu bis zur Grenze ihrer Wasseraufnahmekapazität mit beseitigen und ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, io der wäßrigen Phase beladen werden, ohne daß bei der nach dem eine schonende und quantitative Extraktion Elation mit den lipophilen Lösungsmitteln Wasser abvon in lipophilen Lösungsmitteln löslichen Inhalt- getrieben wird. Auch kann der pH-Wert der auf dem stoffen wäßriger Lösungen möglich ist Konzentrierungshilfsmittel gebundenen wäßrigen Phase

Diese Aufgabe wurde durch die Verwendung durch Zugabe von sauren, alkalischen oder Pufferspezieller Konzentrierungshilfsmittel gelöst. 15 lösungen oder auch gasförmigen Säuren oder Basen Es wurde gefunden, daß bestimmte Konzentrie- verändert werden, so daß gezielte und differenzierte rungshilfsmittel die wäßrigen Lösungen unter Bei- Elutionen — auch mit unterschiedlichen lipophilen behaltung ihrer Rieselfähigkeit aufzunehmen ver- Lösungsmitteln — auch in Abhängigkeit von den mögen und daß die Inhaltstoffe aus dieser Mischung Eigenschaften der gelösten, zu extrahierenden Stoffe überraschenderweise auch mit sehr kleinen Lösungs- ao durchgeführt werden können. Ferner kann die auf mittelmengen quantitativ gewonnen werden können. dem Konzentrierungshilfsmittel gebundene wäßrige Diese Methode ist äußerst schonend, so daß weder Lösung durch andere Lösungen wieder verdrängt und die wäßrigen Flüssigkeiten noch die Inhaltstoffe durch auf diese Weise weiteren Untersuchungen zugänglich diese Behandlung verändert werden. Die Aufnahme gemacht werden.

der wäßrigen Lösungen erfolgt quantitativ, da die as Die zu verwendenden Konzentrierungshilfsmittel Menge des Konzentrierungshilfsmittels so abgestimmt sind weitporige Adsorbentien auf Kieselsäurebasis in wird, daß höchstens die maximale Wasseraufnahme- körniger Form (Granulate oder kugelförmige Agglokapazität erreicht wird. Die anschließende Desorption merate). Sie werden nach speziellen Verfahren aus der Inhaltstofle aus dem rieselfähigen beladenen Kon- natürlich vorkommenden oder synthetischen SiO₂-zentrierungshilfsmittel mit lipophilen Lösungsmitteln 3» Modifikationen hergestellt. Sie sind zum Teil im verläuft mühelos und quantitativ. Handel erhältlich, oder die gewünschten Parameter

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren werden durch literaturbekannte Verfahren eingestellt, zur Isolierung von Inhaltstoffen wäßriger Lösungen Wesentlich ist die Einhaltung bestimmter Korn-

durch Adsorption der wäßrigen Lösungen an Konzen- größen, der angegebenen Porenvolumina und der trierungshiifsmittel auf Basis von Kieselgel und/oder 35 geringen spezifischen Oberflächen. Durch das ZuKieselgur und anschließende Extraktion der Inhalt- sammenspiel dieser Charakteristika werden erstaunstoffe mit lipophilen Lösungsmitteln, das darin be- licherweise bisher nicht mögliche Effekte erzielt, steht, daß man als Konzentrierungshilfsmittel riesel- Kieselgele und Kieselgure können in gleicher Weise fähige Kieselgele und/oder Kieselgure mit einer mitt- und auch einzeln oder im Gemisch eingesetzt werden, leren Korngröße von 0,05 bis 1,0 mm, einem mittleren 40 Die Korngröße (Teilchendurchmesser) der einzelnen Porenvolumen von 0,2 bis 3 ml/g und einer spezi- Partikeln dieser Konzentrierungshilfsmittel liegt zwifischen Oberfläche von 0,2 bis 50 m^l/g verwendet. sehen 0,05 und 1 mm, vorzugsweise zwischen 0,15 und

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin die Ver- 0,4 mm. Es ist besonders vorteilhaft, aber nicht zwinwendung eines Konzentrierungshilfsmittels auf Basis gend, eine möglichst enge Korngrößenverteilung zu von Kieselgel und/oder Kieselgur mit den oben an- 45 wählen, bei der z. B. 60% der Teilchen Korngrößen gegebenen Parametern zur Durchführung des Ver- innerhalb des angegebenen Bereichs aufweisen. Die fahrens nach Anspruch 1. angegebene Teilchengröße ist entscheidend für die

Es war nicht vorherzusehen, daß gerade Kieselgele Packungsdichte, die Stabilität und die Durchfluß- und Kieselgure mit den oben definierten Charak- geschwindigkeit einer daraus hergestellten Säulenteristica den bisher verwendeten Konzentrierungs- 50 packung. Von der Packungsdichte wird wiederum die hilfsmitteln so wesentlich überlegen sein würden. Das Wasseraufnahmekapazität beeinflußt,
war um so weniger zu vermuten, als auch schon Die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Ver-

Kieselgele herkömmlicher Art ohne oder mit unzu- fahrens zu verwendenden Konzentrierungshilfsmittel reichendem Erfolg für diesen Zweck verwendet sollen ferner ein Porenvolumen von >0,2ml/g beworden sind Kieselgele oder Kieselgure mit anderen 55 sitzen. Je größer das Porenvolumen ist, desto besser Korngrößen, einem kleineren Porenvolumen oder sind die Mittel zur Durchführung dec Verfahrens einer wesentlich größeren spezifischen Oberfläche sind geeignet. Im allgemeinen haben sich Porenvolumina für das erfindungsgemäCe Verfahren nicht geeignet. zwischen 0,2 und 3 ml/g bewährt. Unter Berücksich-Mit uc: erfindungsgemäß zu verwendenden Konzen- tigung des Volumens und der mechanischen Stabilität trierungshilfsmitteln erzielt man dagegen erstmalig 60 des ^ranulierten Materials liegen die bevorzugten auch mit kleinsten Lösungsmittelmengen eine quanti- Werte zwischen 0,5 und 1,7 ml/g,
tative Desorption der Inhaltstoffe, so daß hiermit eine Die Porenvolumina beeinflussen die Wasserauf-

hervorragende und nahezu universell anwendbare nahmefähigkeit der Konzentrierungshilfsmittel, die Analysenmethode mit hoher Zuverlässigkeit zur Ver- ihrerseits ein wichtiger Faktor für die Eignung der zu fügung gestellt wird. Durch die Verwendung der in 65 verwendenden Konze.crierungshilfsmittel ist. Pro Wasser und Lösungsmitteln unlöslichen und unquell- Volumeneinheit dco geschütteten Materials mit der baren Konzentrierungshilfsmittel, die nicht ionogen, angegebenen Korngrößen ergibt sich für die Wasserriesel- und perkolationsfähig sind, kann die Extraktion aufnahmekapazität ein Wert zwischen 0,2 und 1 m

Wasser/cm* des Konzentrierungshilfsmittels, Vorzugs- wie Dichlonnethän, Chloroform, TetrachlormethaH,

«Käse 0,3 bis 0,8 ml/cm³. 1,2-Dichlorättian and Ul^-Trichloräthan oder aro-

Ein weiteres wichtiges Charakteristikum der Kon- matische oder aliphatisciie Kohlenwasserstoffe, z. B. Zentrierungshilfsmittel nach der Erfindung ist ihre Benzol, Toluol, Pentan, Hexan, Heptan, Petroläther Aktivist bzw. Inaktivität Diese läßt sich dusch die 5 oder Cydohexan. AUe diese Lösungsmittel können spezifische Oberfläche definieren. Fs feat sich erwiesen, jeweils allein oder im Gemiseh verwendet werden, daß Kieselgele oder Kieselgur« anderer, insbesondere Grundsätzlich können alle organischen Lösungsmittel höherer Aktivitätsstufen keine befriedigenden Ergeh- eingesetzt werden, die auch nach den bisher bekannten nisse liefern. Die spezifische Oberfläche der Teilchen Verfahren als geeignet zur Lösung der Inhaltstoffe angesoll deshalb zwischen 0,2 und 50 m^a/g liegen. Dabei ist io sehen worden sind. Ein ganz besonderer Vorteil der erfür Kieselgele der Bereich von etwa 0,3 bis 2Qm⁵Yg, findungsgemäß zu verwendenden Konzentrierungshilfsfür Kieselgure von etwa 0,5 bis 5 m*/g bevorzugt. mittel besteht in der Möglichkeit, zur Extraktion auch Diese relativ kleinen spezifischen Oberflächen werden niedere aliphatische Alkohole, also mit Wasser mischbei Kieselgelen mit mittleren Porendurchmessera von bare organische Lösungsmittel, einsetzen zu können, etwa 500 bis 40000 A erreicht, bei Kieselguren liegen 15 Dadurch wird in vielen Fällen die Menge der erforderdagegen die Porendurchmesser normalerweise zu über liehen Lösungsmittelmenge herabgesetzt. Man kann 65% über 40000 A. Nur diese im Hinblick auf nor- ζ. B. mit Lösungsmittelmengen, die volumenmäßig male Adsorptionsmittel relativ inaktiven Materialien den aufgegebenen Volumina der wäßrigen Lösung entermöglichen die erfindungsgemäß zu erreichenden sprechen, quantitative Extraktionen erzielen. Das war quantitativen Extraktionen. ao bisher nicht möglich. Bei der Verwendung von

Die erfindungsgemäßen Konze»,trierungshilfsmittel Mischungen der wassermischbaren Lösungsmittel mit

werden zum Teil aus Naturprodukten hergestellt und wasserunlöslichen Lösungsmitteln (z. B. Chloroform/

können je nach Provenienz störende Verunreinigungen Isopropanol 80/20) findet bei einem nicht zu hohen

enthalten, z. B. Eisensalze oder organische Verbin- Anteil an dem wassermischbaren Lösungsmittel

düngen. Die Reinheitsprüfung erfolgt in der Regel 25 (< 30 Volumprozent) eine einwandfreie Extraktion

dünnschichtchromatographisch und UV-spektrosko- statt, bei der das Wasser überraschenderweise in dem

pisch. Sofern eine Reinigung erforderlich ist, erfolgt Konzentrierungshilfsmittel gebunden bleibt. Weiterhin

diese am einfachsten in bekannter Weise durch lasren sich nach einer besonderen Ausführungsform

Waschen mit Salzsäure, Methanol und/oder Wasser. des erfindungsgemäßen Verfahrens bei Bedarf auch

Die erfindungsgemäß zu verwendenden Konzen- 30 Extraktionen mit z. B. niederen aliphatischen Alkotrierungshilfsmittel können infolge ihrer hohen Wasser- holen allein oder im Gemisch mit geringeren Anteilen retentionskapazität Flüssigkeiten ohne weiteres auf- an wasserunlöslichen lipophilen Lösungsmitteln durchsaugen. Die Vermischung erfolgt erstaunlicherweise führen. Diese niederen aliphatischen Alkohole verohne mechanische Einwirkung, so daß ein Rühren mögen z. B. auf den Konzentrierungshilfsmitteln ge- oder Umschütteln entfällt. Die Beladung kann bis zur 35 bundene Inhaltstoffe vom Serum, z. B. an Eiweiß maximalen Wasserretentionskapazität der Konzen- gebundene Triglyceride, zu spalten. Dadurch werden trierungshilfsmittel erfolgen. In Abhängigkeit vom die Triglyceride extrahierbar. Eventuell bei diesem Schüttgewicht der Konzentrierungshilfsmittel ist die Verfahren mitextrahierte, geringe Wassermengen sind Kapazitätsgrenze im allgemeinen erreicht, wenn die bei der nachfolgenden Analyse unerheblich,
wäßrigen Lösungen mit dem Konzentrierungshilfs- 40 Das erfindungsgemäße Verfahren hat eine besondere mittel etwa im Gewichtsverhältnis Wasser zu Kieselgur Bedeutung für die Untersuchung von Körperflüssigzwischen 1: 0,4 und 1:1,25 bzw. Wasser zu Kieselgel keiten. Unter Körperflüssigkeiten sollen hier inszwischen 1: 0,9 und 1:1,7 vermischt werden. Da beim besondere Urin, Blut, Plasma oder Serum verstanden Eluieren Reste des lipophilen Lösungsmittels zurück- werden, aber es kommen auch Magensaft, Lymphbleiben — was zu Verlusten führt — empfiehlt sich 45 flüssigkeiten, Gehirn- oder Rückenmarkliquor ih meist die Verwendung geringer Mengen an Konzen- Frage. Ferner sind von Bedeutung wäßrige Flüssigtrierungshilfsmitteln. keiten, die aus Gewebematerial oder Organteilen er-

Aus diesem rieselfähigen, beladenen Konzentrie- halten worden sind. Daneben können aber auch berungshilfsmittel kann nun durch Behandlung mit liebige andere wäßrige Lösungen extrahiert werden, lipophilen Lösungsmitteln eine Extraktion der ge- 50 ζ. B. Auszüge aus Pflanzen und Drogen (z. B. Opiumsuchten Inhaltstoffe vorgenommen werden. Diese tinkturen, Auszüge von Haschisch und Tabak) sowie Extraktion kann nach allen bekannten Methoden Waschflüssigkeiten und Abwässer. Aus allen diesen einer Flüssig-Fest-Extraktion erfolgen, z. B. im Batch- Flüssigkeiten können die in lipophilen Lösungsmitteln Verfahren oder kontinuierlich, z. B. auf einer Säule. Die löslichen Inhaltstoffe schnell, einwandfrei und quantierhaltenen Extrakte sind klare Lösungen und völlig 55 tativ isoliert werden.

frei von Emulsionen. Die in lipophilen Lösungsmitteln Besondere Bedeutung hat das erfindungsgemäße

löslichen Inhaltstoffe der eingesetzten wäßrigen Lö- Verfahren in der Diagnostik oder bei der Prüfung von

sungen gelangen quantitativ in diesen Extrakt. Körperflüssigkeiten auf ihren Gehalt an Arzneimitteln,

Als lipophile Lösungsmittel könne alle für die Lö- Drogen, Giftstoffen oder Arzneimittel-Metaboliten. sung der zu extrahierenden Inhaltstoffe geeigneten 60 So sind z. B. untei Verwendung der erfindungsausgewählt werden. Unter lipophilen Lösungsmitteln gemäßen Konzentrierungshilfsmittel bereits Analgesollen hier alle die organischen Lösungsmittel ver- tica, Sedativa, Hypnotica, Antiepileptica, Psychostanden sein, die Fette, Öle oder fettähnliche Sub- pharmaka.Sympathicomimetica.Antihistaminica, Narstanzen gut lösen. Solche Lösungsmittel sind z, b. cotica, Alkaloide und Antibiotica bzw. deren Metabo-Äther wie Diäthyläther oder Diisopropyläther, Ester 65 Uten nachgewiesen und bestimmt worden. Daneben wie Methylacetat oder Äthylacetat, Alkohole wie sind aber auch körpereigene Metaboliten, z. B. Lipide, Methanol, Äthanol, Propanol, Isopropanol, Butanol Trigliceride, Fettsäure, Steroide und Porphyrine ex- oder höhere Homologe, Halogenkohlenwasserstoffe trahiert und untersucht worden.

7 8

In manchen Fällen ist es zweckmäßig, die in den

Körperflüssigkeiten vorhandenen Inhaltstoffe durch Beispiel 1
eine pH-Änderung in die undissoziierte und infolgedessen in lipophilen Lösungsmitteln besser lösliche Zwei Glassäulen von 1 cm Durchmesser (am Aus-Form zu überführen. Auch enzymatische Spaltungen 5 lauf mit Watte verschlossen) wurden gleichmäßig mit (z. B. von konjugierten Metaboliten wie Glucuroniden je 5 g eines granulierten Kieseigurs mit einer Korn- und Sulfaten) können in der zu untersuchenden wäß- größe von etwa 0,125 bis 0,4 mm gefüllt. Die speririgen Lösung durchgeführt werden, und zwar auch fische Oberfläche des Kieseigurs lag bei etwa 1 m²/g, noch nach dem Zusammenbringen mit dem Konzen- das Porenvolumen bei etwa 0,3 ml/g. Bei Verwendung trierungshilfsmittel. Da das erfindungsgemäß zu ver- io in der Säule betrug die Wasserretention etwa 1 ml/g, wendende Konzentrierungshilfsmittel neutral und un- Auf jede Säule wurden je 5 ml eines Harnes aufempfindlich gegenüber pH-Wert-Änderungen ist, kann gegeben, der Codein, Diphenhydramin, Amphetamin hier jede beliebige wäßrige Lösung aufgetragen werden. und Morphin in Konzentrationen von je 20 fj-g/ml entin den erhaltenen Extrakten können die Inhaltstoffe hielt und der mit NH₄C1/NH₃-Puffer auf pH 9 einder aufgegebenen wäßrigen Lösungen nach bekannten 15 gestellt war. Die Flüssigkeit wurde von dem Kieselgur und in der Literatur im einzelnen beschriebenen Me- rasch aufgesaugt.

thoden nachgewiesen und bestimmt werden. In vielen Die eine Säule wurde mit Chloroform, die andere

Fällen ist es besonders vorteilhaft, mit Hilfe der lipo- mit einem Gemisch aus gleichen Teilen Chloroform

philen Lösungsmittel eine Lösung herzustellen, deren und Äthylacetat eluiert. Das Eluat war in beiden

Volumen dem der ursprünglichen Probe entspricht, da 20 Fällen völlig klar, das Wasser blieb auf der Säule ge-

die erhaltenen Werte für die Inhaltstoffe dann mit bunden. Die beiden Eluate wurden in Fraktionen zu

jenen der wäßrigen Lösung identisch sind. Auf der je 10 ml geschnitten und eingedampft. Die Rückstände

anderen Seite ist es selbstverständlich auch möglich, wurden dünnschichtchromatographisch untersucht,

nach dem erfindungsgemäßen Verfahren Lösungen mit Bei der Elution mit reinem Chloroform waren Codein,

wesentlich höheren Konzentrationen an den gesuchten 25 Diphenhydramin und Amphetamin vollständig in der

Inhaltstoffen herzustellen, wodurch der Nachweis ersten Fraktion enthalten, Morphin nur zu etwa 70%;

bzw. die Bestimmung dieser Stoffe wesentlich der Rest zog sich in die zweite Fraktion hinüber. Die

erleichtert werden kann. Zu diesem Zweck können dritte und die folgenden Fraktionen waren leer,

z. B. mehrere Extrakte eingeengt und vereinigt wer- Bei der Elution mit Chloroform-Äthylacetat wurden

den. 30 alle Substanzen, einschließlich Morphin, vollständig

Die erhaltenen Extrakte eignen sich insbesondere in der ersten Fraktion eluiert.
zum gas- und dünnschichtchromatographischen Nachweis der Inhaltstoffe. Es können jedoch auch alle Beispiel 2
übrigen bekannten Nachweis- und Bestimmungsmethoden angewendet werden, z. B. fotometrische 35 Quantitativer Vergleich zwischen Elution über die oder kolorimetrische Methoden. Säule und dreistufiger Flüssig-flüssig-Extraktion:

In vielen Fällen lassen sich mit Hilfe des erfindungs- Für die Versuche wurde ein Lösung von 1 mg Nagemäßen Verfahrens und der hier definierten Konzen- Barbital in 100 ml 1 M (Ammonchlorid-Weinsäure)-trierungshilfsmittel standardisierte Verfahren zur Er- Puffer von pH 2 verwendet. Als Konzentrierungshilfsmittlung bestimmter Inhaltstoffe von wäßrigen Lösun- 40 mittel v-urde ein agglomeriertes Kieselgur mit Korngen festlegen. Um diese Standardisierung zu er- großen von 0,15 bis 0,40 mm, einer spezifischen Oberleichtern und auch eine Anwendung in Massentests zu fläche von etwa 1 m^a/g, entsprechend einem mittleren ermöglichen, werden die erfindungsgemäßen Konzen- Porendurchmesser (>80%) von ">40 000Ä und trierungshilfsmittel zweckmäßig in bestimmten Fertig- einem Porenvolumen von 1,1 mlg/g verwendet. Als packungen angeboten. Die Fertigpackungen enthalten 45 Säulen dienten 50 ml Einmalspritzen aus Polypropylen die Konzentrierungshilfsmittel in Mengen von etwa mit trichterförmigem Auslauf und aufsteckbarer Ka-0,5 bis 50 g, wobei die Menge auf den jeweiligen Ver- nüle. Der Auslauf wurde durch einen Docht aus wendungszweck abgestimmt ist. Die Verpackung kann Baumwolle verschlossen.

zwar in beliebiger Form erfolgen, z. B. in kissen- oder 14 g des Konzentrierungshilfsmittels wurden in jede kugelförmigen Beuteln; Säulenpackungen, z.B. Glas- 50 Säule eingefüllt und eingerüttelt. Die Säulen mit einem oder Kunststoff säulen von etwa 5 bis 20 cm Länge Durchmesser von 27 mm wurden 80 mm hoch gefüllt, und einem Durchmesser von 1 bis 3 cm, sind jedoch Mit Hilfe eines feinmaschigen Netzes aus Polybevorzugt, propylen, gehalten durch einen Ring aus Polypropylen,

Geeignet sind z. B. auch die im Handel für Injek- wurde das Säulenbett nach oben abgeschlossen. Auf

tionszwecke erhältlichen Einmalspritzen, sofern das 55 jede Säule wurden 20 ml barbitalhalüge Pufferlösung

Kunststoffmaterial gegenüber dem zu verwendenden aufgegeben, die sofort einzogen. Je 2 Säulen wurden

lipophilen Lösungsmittel beständig ist. Die wäßrige mit Diäthyläther, zwei andere mit Chloroform eluiert.

Lösung braucht dann nur auf eine solche Säule ge- Mit Hilfe von aufsteckbaren Kanülen am Auslaui

geben bzw. aufgezogen zu werden, wobei die Durch- wurde der Durchfluß so geregelt, daß 20 ml Elutions-

mischang mit dem Konzentrierungshilfsmittel spontan 60 mittel in 10 Miauten die Sätde passierten. Pie Eluatt

erfolgt. In dieser Form ist die Probe auch transport- wurden io Fraktionen zu je 20 ml geschnitten. Etwj

fähig. Die Extraktion der Inhaltstoffe kann dann IS ml Elutionsmittel blieben mit der wässerigen Phaa

zentral aa einem anderen Ort erfolgen. Der Transport auf _dem Konzentrierungshilfsmittel zurück. Sowoh

soldler zur Untersuchung vorgesehenen Flüssigkeits- die Äther- als auch die Chtorofonn-Eluate waren klar

!proben wird auf diese Weise eAebßcli vereinfacht. Das 65 Aue ElnatfraktioeeH worden aof dem Wasserbad mi

erleichtert ζ. B. Screening-Programme und Massen- Stickstoff zur Trockene abgeblasen.

tl zur Prüfung auf Arznei- oder Drogen- Zum Vergleich wiatfen ebenfalls je 20 ml Barbital

lösung dreimal mit 40 ml Äther bzw. Chloroform ifi

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Scheidetrichter extrahiert; die Extrakte wurden über Phasentrennpapier filtriert und mit Stickstoff abgeblasen.

Die Rückstände der Flüssig-flüssig-Extraktion und der Elutiön mit Hilfe der Konzentrierungshilfsmittel

wurden nach der für Barbiture üblichen Bestimmungsmethode U V-spektroskopisch bei 255 nm in saurer und alkalischer Lösung quantitativ bestimmt. In der folgenden Tabelle sind die Extraktions- bzw. EIu¹, tionsausbeuten für beide Lösungsmittel wiedergegeben.

Fraktion, %
2. I 3.

insg.

Verbrauch
an Lösungsmittel

Elution

(Konzentrierungshilfsmittel)

Extraktion (flüssig-flüssig)

Elution

(Konzentrierungshilfsmittel)

Extraktion (flüssig-flüssig)

99
85

81
69

99
98

97
94

35 ml Äther
80 ml Äther

55 ml Chloroform
120 ml Chloroform

Die kontinuierliche Extraktion mit Hilfe des Konzentrierungshilfsmittels spart bei einander entsprechenden Ausbeuten gegenüber der Flüssig-flüssig-Extraktion also mehr als die Hälfte an Lösungsmittel ein. Die Extraktion von Barbital war bei Verwendung von Äther schon in der ersten Fraktion praktisch quantitativ.

Beispiel 3

Quantitativer Vergleich zweier Konzentrierungshilfsmittel bei der Extraktion von polaren und unpolaren Alkaloiden:

Es wurden die Säulen verwendet, die im Beispiel 2 beschrieben wurden. Als zu extrahierende Lösung wurde ein mit Ammoniumchlorid-Ammoniak abgepufferter Harn von pH 9,3 verwendet, der je 20 μg Morphin und Codein, gelöst in 20 ml, enthielt. Elutionsmittel war ein Gemisch aus Dichlormethan-Isopropanol (85/15). Die Eluate wurden in Fraktionen zu je 20 ml geschnitten. Eine ganz leichte Trübung in der zweiten Fraktion verschwand beim Einengen der Lösung.

Zum Vergleich wurden 20 ml Harn im Scheidetrichter zweimal mit 40 ml Lösungsmittel extrahiert (Flüssig-flüssig-Extraktion). Die Eluate und Extrakte wurden nach Abdampfen des Lösungsmittels durch Gaschromatografie quantitativ auf ihren Gehalt an Morphin und Codein untersucht.

Als Konzentrierungshilfsmittel wurden verwendet:

a) 14 g des im Beispiel 2 beschriebenen granulierten Kieseigurs.

b) 26 g eines weitporigen, granulierten Kieselgels, die das gleiche Volumen wie das Kieselgur nach a) einnahmen. Es handelte sich um ein kugelförmiges Kieselgel mit Korngrößen zwischen 0,15 und 0,30 mm. Die spezifische Oberfläche betrug 0,8 m²/g, der mittlere Porendurchmesser 40000 A, das Porenvolumen 0,7 ml/g.

Die Verteilung von Morphin und Codein auf die erste und zweite Fraktion zu je 20 ml zeigt die folgende Tabelle. Die Ausbeute nach zweimaliger Flüssigflüssig-Extraktion mit je 40 ml Lösungsmittel wurde als 100% eingesetzt.

Konzen trierungs hilfsmittel	1.	Morphin Fraktion	insg.	1.	Codein Fraktion 2.	insg.
a fe	15,9 μ₈ ä76% mm A 96%	4,8 μΕ ^23% Up« ^s%	20,7 μ_β - 99% 21,2μ₈ ± 1Θ2%	17 μg ^95% 17,6 jig £98^%	0,8 μ₈ ä4,5% ο,ι m	17,8 μg ^99,5% if,? m
Extraktion 2 · 4Ö in! CHiCyisopföpaaol (85/15)	20,8 pg ^100%		iij m

1 Fraktion

2QmI

geteiüber 8QfQt bei Ftüssig-§üssig-£xtrafetiefl

Ii

B ei spi e1 4

Entsprechend den Beispielen 2 und 3 wurden die folgenden, toxikologisch bedeutsamen Arzneimittel und Drogen bei pH 2 und pH 9 auf ihre Exträhierbarkeit mit den neuen Konzentrierungshilfsmitteln untersucht:

Bei pH 2 extrahierbar	Bei pH 9 extrahierbai
Hexobarbital	Thioridazin
Thiopental	Promethazin
Amobarbital	Levomepromazirt
Phenobarbital
Cyclobarbital	Amitryptilin
Hydroxypentobarbital
Secobarbital	4-Aminophenazon
Pentobarbital	4-Dimethylaminophenazon
Heptabarbital	Pentazocin
Brallobarbital	Methadon
Methylphenobarbital	Tüidin
Barbital	Propoxyphen
Carbromal	Meperidin
Bromural	Oxycodon
Acecarbromal
Ethinamat
Methaqualon	Morphin
Glutethimid	Hydromorphon
	Chinin
Diphenylhydantoin	Äthylmorphin
Meprobamat	Codein
Oxazepam	Nicotin
Medazepam	Papaverin
Chlordiazepoxid	Mescalin
Diazepam	Diphenhydramin
Nilrazepam	Norephedrin
	Phenmetrazin
Phenacetin	Ephedrin
Paracetamol	Amphetamin
Salicylsäure	Methamphetamin
	Chlorpheniramin
	Mephentermin
	Methylphenidat

Als lipophiles Lösungsmittel wurde jeweils Dichlormethan/Isopropanol (85/15) verwendet. Die Auswertung erfolgte teils halbquantitativ durch Dünnschichtchromatographie, teils UV-spektroskopisch.

Bei Vorgabe von 20 ml Harn wurden die basischen Substanzen bei pH 9 mit 35 ml Lösungsmittel mit Ausbeuten von 90 bis 100% extrahiert; Ephedrin, Amphetamin und Morphin wurden zu 70 bis 90% extrahiert. Entsprechende Extraktionsraten von 80 bis 100% zeigten die Barbiturate und die anderen ScSlafmrtteä bei pH 2. ÜJ allen Fäflen wurde durch Elatiöfi mit weiteren 20 ml Lösaä^mittd 100%ige

Beispiel S

EÖt6 Hflfflpttfbfe esa« Patieateii, der eiae Oberdosis feki^i AiTzlieiiäittdsgäigenomnTCtt kn l

ffiqkiem^ai^ö AiTzlieiiäittdsgäigenomnTCtt wutde t£ Mtntiten iüt kef&mntitet Salzsäare

XSl e&tSULBB (BlBS SiaiWaiUB, ÜÖEJCIge LÖSUHg,

koteeatrläter Naöt)ülaap äitf pH 9,5 eis- 6g wonle. 2Ö ad dieser Pröbfe wufd&n, ohne den

Üag abzufikriefeä, aaf due — im Beispid 1 fe — mit 16 g EJeseigur (&orügröÖe 0,15

bis 0_t40mm, spezifische Oberfläche l"itt"/fe Porenvolumen 0,64 ml/g) gefüllte Einmalspritze äüfgezbifeti und mit 35 ml Dichlormethan/Isopröpänöi (8Ö/2Ö) eluiert. Das klare Eluat (20mi) würde niit Sückstefl abgeblasen. Der Rückstand würde auf einer Kieseigel· Fertigplatte mit dem Laüfmittel Chloröförm/Acetbh (80/20) chromatograßert. Es wurde deutlich das Metabolitenmuster des MethäqUaloÖs gefutideh.
Bei der Extraktion desselben Harns mit den gifeichen

ίο Lösungsmitteln im Scheidetrichter entstand eine dichte Emulsion, die hur durch Zentrifugieren gebrochen werden konnte* Der Extrakt war durch Harhpigmente wesentlich stärker gefärbt als der ifiit Hjife des Konzentrierungshiifsmittels gewönnenei so daß

der chromatogräphische Nachweis erhebii6h gestört wurde.

Beispiel 6

Beim Massencreening auf Drogen und mißbrauch-Hch eingenommene Arzneimittel bieten die neuen Konzentrierungshilfsmittel ganz besondere Vorteile. So kann man überraschenderweise durch eine einzige Extraktion des Harns bei pH 8,5 bis 9 sowohl saure als auch basische Stoffe in zum Nachweis ausreichender Menge erhalten. Durch Elution mit 35 ml Dichlormethan/Isopropanol (85/15) lassen sich unter Verwendung der im Beispiel 2 beschriebenen Säulen und Konzentrierungshilfsmittel bei pH 8,5 bis 9 die in den Tabellen im Beispiel 4 genannten sauren und basischen Substanzen in Ausbeuten von 80 bis 100% gewinnen. Eine Ausnahme bilden lediglich die Barbituratmetaboliten, die nur zu etwa 50 % erhalten werden.

Beispiel 7

Analog Beispiel 3 wurde bei pH 9 10 ml Opiumtinktur extrahiert. Bei der anschließenden Dünnschichtchromatographie des erhaltenen Eluats auf Kieselgur-Fertigplatten mit dem Fließmittel Äthylenacetat/Methanol/Ammoniak (85/10/5) entstand das typische Fleckenmuster des Opiums.

Beispiel 8

Zu 10 ml Serum wurde 0,1 ml einer salzsauren Lösung von Diphenhydramin, Amphetamin, Morphin und Codein pipettiert. Die Konzentration im Serum betrug 50, 50, 50 bzw. 25 μg/10 ml. Eine Plastiksäule mit konischem Auslauf (Durchmesser 15 mm, Länge 150 mm) wurde mit 4 g granuliertem Kieselgur (Korngröße 0,15 bis 0,40 mm, Porenvolumen 0,9 ml/g,

spezifische Oberfläche >1 m^z/g) gefüllt und mit 5 mi Serum beladen. Nach 15 Minuten war das Serum restlos aufgesaugt. Die Säule wurde mit 15 ml Dichlormethan in 10 Minuten eluiert, das Eluat eingedampft und der Rückstand durch Dünnschicht-Chromatographie halbquantitativ bestimmt. Diphenhydramin, Codein, AmpHetamiü waren voüstäüdig, Morphin zn etwa 90% etalett tw»dea.

Beispie! 9

10 ml Vollblut eities Patienten mit Bärbftafatvergiftang witfrjen M einet verst3hliesßtjaa«n SO ad Einmafepritze mit If g 6iäes granuDertea ttM gewascheiieü Kiöeleufs (tetagr^ f*^a **" **
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1684

13 14

Das ausfließende Eluät war klar. Nach Abdampfen 0,15 bis 0,5 mm, spezifische Oberfläche 0,3m^!/g,

des Lösungsmittels wurde der Rückstand in 0,5 N-Na- Porenvolumen 0,7 ml/g) 4 cm hoch befüllt. Darauf

tronlauge aufgenommen und in üblicher Weise wurden 0,5 ml Serum pipettiert und 10 Minuten ein-

UV-spektroskopisch bei 255 nm untersucht, Es ergab ziehen gelassen. Nun wurde mit 7 ml Äther/Äthanol

sich eine Barbituratkonzentration von 1,8 mg/100 ml. 5 (3:1) in 10 Minuten eluiert. Von dem Eluat wurden

. die ersten 4 ml aufgefangen. Von diesen wurde ein

Beispiel 10 aliquoter Teil (0,4 ml) abpipettiert, und die darin ent-

Eine 50-ml-Einmalspritze wurde mit 14 g granu- haltenen Triglyceride wurden in bekannter Weise mit

liertem Kieselgur (Korngröße 0,15 bis 0,40 mm, KOH gespalten; das Glycerin wurde zu Formaldehyd

Porenvolumen 1,1 ml/g, spezifische Oberfläche 1 m²/g) io oxydiert und dieser durch Kondensation mit Acetyl-

gefüllt. 20 ml eines Harns, der Barbiturate und Mor- aceton quantitativ bestimmt. Als Standard diente

phin enthielt, wurden mit konzentrierter HCl auf Triolein, das wie die Serumprobe behandelt wurde.

pH 2 eingestellt und auf die Säule gegeben. Nach dem In 5 Sammelseren wurde ein Gehalt an Triglyceriden

Einziehen des Harns wurde mit 40 ml Dichlormethan von 160, 155, 145, 145 und 120 mg/100 ml ermittelt,

eluiert. Das Eluat zeigte am Schluß eine schwache 15 η · · 1 π

Trübung, jedoch keine Wasserabscheidung. Nach Beispiel IJ

Ende der Elution im sauren Medium wurde mit Am- 25 ml Harn eines Drogensüchtigen wurden mit 2 ml

moniak vermischte Luft durch die Säule gesaugt. Der 0,5 M-Natriumacetatpuffer pH 5,5 auf pH.5 einge-

zuerst abgesaugte Rest an Dichlormethan wurde ver- stellt und mit 5 mg Urease (4 U/mg) versetzt. Von die-

worfen. Nach wenigen Minuten trat Ammoniak am 20 ser Lösung wurden 20 ml auf eine Säule mit granu-

unteren Ende der Säule aus, die wäßrige Phase auf liertem Kieselgur analog Beispiel 10 aufgezogen; die

dem Konzentrierungshilfsmittel war alkalisch (pH 10). Säule wurde verschlossen und über Nacht aufbewahrt.

Nun wurde die Säule mit 40 ml Dichlormethan/Iso- Nach dieser Zeit besaß der adsorbierte Harn einen

propanol (85/15) eluiert. Beide Eluate wurden ein- pH-Wert von 9. Anschließend wurde analog Beispiel 10

gedampft und dünnschichtchromatographisch unter- 25 mit Dichlormethan/Isopropanol eluiert. Die im Eluat

sucht. Der Vergleich mit einer zweistufigen Flüssig- enthaltenen basischen Stoffe Cocain, Benzoylecgonin

fiüssig-Extraktion bei pH 2 und 9 ergab, daß die und Morphin wurden dünnschichtchromatographisch

Elution selektiv war. Im sauren Extrakt war nur getrennt und nachgewiesen.

Barbiturat, im alkalischen nur Morpholin enthalten. . . . ..

Die Elutionsausbeute im sauren Bereich war 100%, 30 Beispiel 14

im alkalischen bei Morpholin >90%. Untersucht wurde ein Harn nach einer Vergiftung

. I₁₁ ™t Methaqualon. Dieses wird im Harn als in orga-

Be 1 spiel 11 rüschen Lösungsmitteln unlösliches Konjugat aus-

a) Der nach Beispiel 10 zweifach extrahierte Harn geschieden, wird aber durch Erhitzen mit Salzsäure sollte auf nicht extrahierbare, weil konjugierte Anteile 35 oder durch enzymatisch^ Hydrolyse in extrahierbare an Morphin geprüft werden. Dazu mußte die wäßrige Form übergeführt.

Phase von dem Konzentrierungshilfsmittel verdrängt 10 ml Harn wurden mit 1,5 ml 2 M-Na-Acetat-

werden. Zu diesem Zweck wurden auf die Säule nach puffer pH 5,5 und 0,1 ml Arylsulfatase/Glucuronidase

der Extraktion mit Dichlormethan/Isopropanol 35 ml vermischt und auf eine Plastiksäule mit 8 g granu-

gesättigte Kochsalzlösung aufgegeben. Der im Säulen- 40 liertem Kieselgur (Korngröße 0,15 bis 0,5 mm, Po-

bett enthaltene Rest ap Lösungsmittel und die Harn- renvolumen 1,1 ml/g, spezifische Oberfläche 1,5 m²/g)

lösung wurden durch die konzentrierte Salzlösung aufgezogen. Die Säule wurde verschlossen und 8 Tage

abgetrieben. Es wurden 20 ml einer gelbgefärbten aufbewahrt. Nach dieser Zeit wurde die Säule ohne

wäßrigen Lösung erhalten. Diese wurde mit 20 ml weitere Vorbehandlung mit 20 ml Chloroform eluiert.

25 % HCl versetzt, am Rückfluß erhitzt und dann 45 Gleichzeitig wurde ein anderer Teil desselben Harns

analog Beispiel 10 mit Hilfe des Konzentrierungs- mit Salzsäure erhitzt und, wie im Beispiel 5 beschrie-

hilfsmittels extrahiert. Das Morphin wurde im Eluat ben, über Konzentrierungshilfsmittel eluiert.

bestimmt. Die nach beiden Methoden erhaltenen Eluate

b) Analog Beispiel Ha) wurde der im sauren wurden mittels Dünnschichtchromatographie und eluierte Harn mit 35 ml gesättigtem Ammonchlorid/ 50 durch UV-Spektroskopie bei 235 und 275 nm (in Ammoniakpuffer (pH 9,5) von der Säule verdrängt. 2 N-HCl) verglichen. Dünnschichtchromatographisch Es wurden 20 ml einer wäßrigen Lösung erhalten, die ergaben beide Methoden das gleiche Metaboliteneinen pH-Wert von 8,8 besaß. Diese wurde erneut auf muster in vergleichbarer Intensität.

eine trockene Säule mit dem im Beispiel 10 beschrie- Der Vergleich der Extinktionen bei 235 und 275 nm

benen granulierten Kieselgur aufgezogen und mit Di- 55 ergab übereinstimmend, daß bei der enzymatischen

eMonaethan/lsopropaaiol (85/15) eluiert. Im Eluat Hydrolyse auf dem Konzentrierungshilfsmittel die

konnte Morphin nachgewiesen werden. l,3fache Msnge an extrabiefbaiea MetaboBten frei*

. . gesetzt wurde wie durch Hydrolyse mit Salzsäure.

Beispiel 12 J₅J₆₈₆ ^_n ^ eazynjaJisehen Hydrolyse steSt soaaü

Eine Plastiksäule mit konischem Auslauf (Durch- 60 eine ausgezeichnete Vorbereitung der Proben zur Ex- messer 1 cm, FäHvolumea 12 ud) lyorde mit 1,5 g traktion dar, da viele StoSe im Harn ab Koajugatt

kugelförmigem, weäporigem Kieselgel (Korngröße ausgeschieden werden.

Claims

Extrakte können auch in nur geringer Menge vorPatentansprüche: handenc Inhaltstoffe angereichert «erden. Zum Teil werden sie erst auf diese Weise Analysenmethoden zu-

1. Verfahren zur Isolierung von Inhaltsioffen gänglich.

wäSriger Lösungen durch Adsorption der wäßrigen S Die bisher zur Verfügung stehenden Methoden

Lösungen an Konzentrierungshilfsmitteln auf Ba- befriedigen jedoch nicht und weisen insbesondere bei

sis von Kieselgel und/oder Kieselgur und an- der Extraktion von Inhaltstoffen von Körperflüssig-

schließende Extraktion der Inhaltstoffe mit lipo- keiten wie Urin, Blut, Serum oder Extrakten von

phflen Lösungsmitteln, dadurch gekenn- Organteilen oder Geweben erhebliche Nachteile auf.

zeichnet, daß man als Konzentrierungshilfs- io Bei einer direkten Extraktion der wäßrigen Phasen

mittel rieselfähige Kieselgele und/oder Kieselgure mit lipophilen Lösungsmitteln gestaltet sich erfahrungs-

mit einer mittleren Korngröße von 0,05 bis 1,0 mm gemäß die Phasentrennung sehr schwierig, da sich

einem mittleren Porenvolumen von 0,2 bis 3 ml/g häufig Emulsionen ausbilden, die sich nicht oder nur

und einer spezifischen Oberfläche von 0,2 bis schwierig trennen lassen und somit eine quantitative

50 m*/g verwendet. 15 Extraktion unmöglich machen. Das Brechen der Emul-

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn- sion erfordert außerdem zusätzlichen Zeitaufwand, zeichnet, daß man ein Kieselgel mit einer mittleren was besonders bei Reihenuntersuchungen von NachKorngröße von 0,15 bis 0,4 mm. einem mittleren teil ist.

Porenvolumen von 0,5 bis 1,7 ml/g und einer spe- Es ist bereits versucht worden, eine Isolierung

zifischen Oberfläche von 0,3 bis 20 m^a/g verwendet. 20 dieser Inhaltstoffe durch Behandlung mit Konzen-

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn- trierungshilfsmitteln zu erreichen. Hierfür sind zahlzeichnet, daß man ein Kieselgur mit einer mittleren reiche Stoffe vorgeschlagen worden, z. B. wasser-Korngröße von 0,15 bis 0,4 mm, einem mittleren freies Natrium- und Magnesiumsulfat, Adsorbentien Porenvolumen von 0,5 bis 1,7 ml/g und einer spe- auf Silikatbasis wie übliches Silicagel oder Florisil, zifischen Oberfläche von 0,5 bis 5 m*/g verwendet. 25 Molekularsiebe oder ionogene Zelluloseäther. Zwar

4. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, da- besitzen diese Konzentrierungshilfsmittel hohe Wasserdurch gekennzeichnet, daß man als wäßrige retentionskapazitäten, aber aus ihren Gemischen mit Lösungen Körperflüssigkeiten einsetzt. Körperflüssigkeiten können die zu bestimmenden

5. Verwendung eines Konzentrierungshilfsmittels Inhaltstoffe, bedingt durch Einschlüsse, irreversible auf Basis von Kieseigel und/oder Kieselgur mit 30 Adsorptionen oder Ionenaustauschvorgänge, nicht einer mittleren Korngröße von 0,05 bis 1,0 mm, quantitativ extrahiert werden. Insbesondere die bisher einem mittleren Porenvolumen von 0,2 bis 3 ml/g verwendeten silikatischen Adsorbentien besitzen den und einer spezifischen Oberfläche von 0,2 bis Nachteil, daß eine Desorption der zu untersuchenden 50 m^s/g zur Durchführung des Verfahrens nach Inhaltstoffe mit Hilfe von lipophilen Lösungsmitteln Anspruch 1. 35 infolge der Aktivität bzw. Polarität der Oberfläche

6. Fertigpackungen bzw. Fertigsäulen, enthal- dieser Adsorbentien nicht quantitativ möglich ist. Potend das nach Anspruch 1 zu verwendende Kon- lare Verbindungen wie etwa Morphin werden selbst Zentrierungshilfsmittel in einer für die Aufnahme durch Mischungen aus lipophilen und polaren Löder jeweiligen Analysenmenge der wäßrigen Flüssig- sungsmitteln ohne gleichzeitige Desorption des Waskeit ausreichenden Menge von etwa 0,5 his 50 g. 40 sers nicht extrahiert.

Das gilt z. B. auch für das in Clinical Chemistry, S. 593 bis 596, 1973, beschriebene Verfahren zur Bestimmung von organischen Säuren im Harn.
Dort wird eine selektive Extraktion durch eine