DE2260774A1 - Mukolytische zubereitung zum konservieren von cytologischen praeparaten und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents
Mukolytische zubereitung zum konservieren von cytologischen praeparaten und verfahren zu ihrer herstellungInfo
- Publication number
- DE2260774A1 DE2260774A1 DE2260774A DE2260774A DE2260774A1 DE 2260774 A1 DE2260774 A1 DE 2260774A1 DE 2260774 A DE2260774 A DE 2260774A DE 2260774 A DE2260774 A DE 2260774A DE 2260774 A1 DE2260774 A1 DE 2260774A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- parts
- preparation
- solution
- water
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 68
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 title claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 230000000510 mucolytic effect Effects 0.000 title claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 33
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 claims description 25
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 claims description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 9
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 claims 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 238000005243 fluidization Methods 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 9
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 9
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 9
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 235000012735 amaranth Nutrition 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- WLDHEUZGFKACJH-ZRUFZDNISA-K Amaranth Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C12=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C12 WLDHEUZGFKACJH-ZRUFZDNISA-K 0.000 description 2
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004178 amaranth Substances 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059033 Neonatal aspiration Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001514 alkali metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001617 alkaline earth metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001680 brushing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- OIQPTROHQCGFEF-UHFFFAOYSA-L chembl1371409 Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 OIQPTROHQCGFEF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 1
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 description 1
- 229940051147 fd&c yellow no. 6 Drugs 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000012756 tartrazine Nutrition 0.000 description 1
- UJMBCXLDXJUMFB-GLCFPVLVSA-K tartrazine Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=NN(C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C(=O)C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 UJMBCXLDXJUMFB-GLCFPVLVSA-K 0.000 description 1
- 239000004149 tartrazine Substances 0.000 description 1
- 229960000943 tartrazine Drugs 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000037997 venous disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
ρ,.,.._...„.■·,,„_ ' 12. Dezember 1972
D:n!-:■ ·. Λ. .-ünsckee ρ
Mund:in :.S. -..-czhu · ■·. ■■'; -!3
Irwin S. Lerner
341 Shore Hoad, Greenwich, Connecticut 06830, USA
341 Shore Hoad, Greenwich, Connecticut 06830, USA
Mulvolytische Zubereitung zum Konservieren von. cytologäschen
Präparaten und Verfahren zu ihrer Herstellung
Die Erfindung betrifft eine mukolytische Zubereitung zum
Konservieren von cytologischen Präparaten;, sie betrifft insbesondere
die Konservierung von cytologischen Präparaten und die Verflüssigung des in solchen Präparaten enthaltenen
Mukus (Schleims) sowie Zubereitungen zur Durchführung dieser Verfahren und Verfahren zu ihrer Herstellung.
Es sind bereits zahlreiche cytologische Fixiermittel bekannt,
in denen von den konservierenden Eigenschaften von Formaldehyd und/oder Thymol Gebrauch gemacht wird (vgl. z.B. die
US-Patentschrift 2 554 944). Darüber hinaus sind auch viele
Pufferlösungen bekannt. In dem Buch "Clinical Laboratory Methods
and Diagnosis"' von E.B.H. Gradwohl, 5. Auflage, The
CV. Mosby Co., 1956, Seite 2 063, ist eine auf· einen pH-Y/ert
von 6,0 abgepufforte Salzlösung (KaCl-Lösung)beschrieben,
die eine sehr geringe Menge an Formaldehyd enthält. Diese
309826/1057
BAD ORIGINAL
Lösung wird in einem Objektträgertest zur Bestimmung von
Venenerkrankungen verwendet, sie hat jedoch aufgrund ihrer Zusammensetzung, wenn überhaupt, dann nur eine sehr geringe
konservierende Wirkung auf Zellen. Der Formaldehyd in dieser Zusammensetzung wird lediglich dazu verwendet, die Lösung
haltbar au machen.
Es sind bereits viele Versuche unternommen worden, um das Problem der Konservierung von Zellen und der Eliminierung
des durch den Mukus verursachten Hintergrundes zu lösen. So
wurden beispielsweise Verdauungsenzyme, wie z.B., Trypsin,
verwendet (vgl, Pharr et al in "Atea Cytological", 6, 447-454,
September-Oktober 1962). Die Schwierigkeit, die auftritt, wenn man zur Eliminierung des Mukus eine Verdauungsmethoö.e
anwendet, besteht darin, daß das Enzym frisch hergestellt sein muß und daß die Zeit, während der das Präparat von dem
Enzym angegriffen wird, kontrolliert werden muß, um die enzymatische
Wirkung so weit wie möglich auf den Mulms zu beschränken,
ohne daß die gewünschten Zellen zerstört v/erden. Dies führt natürlich zu einem Kompromiß, da die Zellen unweigerlich
gleichzeitig v/ie der Mukus angegriffen werden. Der Mukus (Schleim) wird schneller verdaut (zersetzt) als die
Zellen und er verschwindet, während die Zellen weniger stark angegriffen werden.
Andere Versuche bestanden darin, daß man Konservierungsmittel, wie z.B. Alkohol oder Formaldehyd, für das Präparat verwendete.
Dieses Verfahren hat jedoch den Nachteil, daß die Zellen zwar ausreichend geschützt (konserviert) werden, daß jedoch
der Mukus gehärtet wird, so daß die Zellen nicht leicht aus dem Präparat extrahiert werden können. Auf diese Weise kann
der Mukus nicht nach bekannten Verfahren, beispielsweise durch enzymatisch© Reaktion, eliminiert werden, da diese mit dem
gehärteten Protein des Mukus nicht funktionieren. In den nachfolgend angegebenen Literaturstellen sind andere Versuche zur
309826/1057 bad original
Lösung der auf diesem Gebiet auftretenden. Probleme beschrieben·
Bei keinem dieser Versuche trat eine gleichzeitige rnukolyti- "
eche und konservierende Wirkung auf. Bei diesen Literatur-steilen handelt es sich um folgende:
Chang et al, "Liqüefication and Membrane Filtration of Sputum
for the Diagnosis of Cancer" in "The American Journal of Clinical Pathology", Band 37, Hr. 6, Seiten 584-592 (Juni 1962)j
Collins et al, "Preserving Sputum for Examination in the Cytology Laboratory" in "The American Journal of Clinical
Pathology", Band 36, Hr. 1, Seiten 92-93 (Juli 1961);
Farber, "Clinical Appraisal of Pulmonary Cytology" in "The Journal of the American MedicalAssoc.", Band 175, Nr. 5,
Seiten 345-348 (Februar 1961);
Hinson et al, "The Diagnosis of Lung Cancer by Examination of Sputum" in "Thorax", 18, Seiten35O-353 (Dezember 1963)j
Lielop et al, "Sputum Collection for Cytologie Study" in
"Modern Midicine" (18. September 1961); Home et al, "Sputum Specimens Versus Bronchial Aspirates in
Diagnosis of Bronchogenic Cancer" in "Journal of American Medical Assoc", Band 104, Hr. 2, Seiten Λ67-169 (Mai 1957);
Takahashi et al, "A Hew Cell Concentration Method for Cancer Cytology of Sputum" in "Cancer", Band 16, Seiten 199-204
(Februar 1963), und '
Tassoni, "Sputum Cytology Can Brighten Lung Cancer Prognosis" in "Journal of American Medical Assoc." (18. Mai 1963).
Man ist daher seit langem auf der Suche nach einem Verfahren zum Sammeln von cytologisehen Präparaten, zum Konservieren
dieser Präparate und gleichzeitigen Eliminieren des Problems
des Mulcus in dem fertigen Präparat, bei dem gleichzeitig die
Anstrengungen für den Operator minimal gehalten werden.
Formaldehyd ist früher bereits als Konservierungsmittel oder Fixiermittel für die Verwendung in der Cytologie oder bei der
Haltbarmachung bzw. Konservierung von Gewebe vorgeschlagen worden. Damit der Formaldehyd wirksam ist, muß er aber in einer ·
309826/1057
BAD ORIQtNAU
sehr großen Menge verwendet werden. Die in den bekannten Verfahren angewendete hohe IPormaldehydkonzentration führt
jedoch dazu, daß die Zellen und/oder das Gewebe härten. Der Formaldehyd härtet auch den Mukus, so daß es unmöglich wird,
für die Untersuchung ohne die sichtbare Hintergrundstörung, die durch den Mukus verursacht wird, die Zellen von dem
Mukus zu trennen. Ein ähnlicher Effekt tritt auf, wenn ein cytologisches Präparat in Alkohol gesammelt wird. Das heißt,
das Präparat wird konserviert, jedoch wird der Mukus gehärtet wie mit Formaldehyd, so daß die Zellen für die Untersuchung
nicht leicht zugänglich sind.
Ziel der Erfindung war es daher, eine Zubereitung und ein Verfahren zur Konservierung von cytologischen Präparaten
und zur Verflüssigung des in diesen Präparaten enthaltenen Mukus anzugeben, bei dem die vorstehend geschilderten Nachteile
nicht auftreten.
Es wurde nun gefunden, daß dieses Ziel dadurch erreicht werden kann, daß man ein frisches cytologisches Präparat, das Mukus
enthält, mit einer isotonischen Lösung· behandelt, die auf
einen physiologischen pH-V/ert abgepuffert ist und ein Konservierungsmittel enthält, wodurch die Zellen in dem Präparat
konserviert werden und der Mukus verflüssigt und leicht von den Zellen abtrennbar gemacht wird.
Gegenstand der Erfindung ist gemäß ihrem breitesten Aspekt
eine mukolytische Zubereitung zum Konservieren von cytologischen Präparaten, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie
besteht aus einer auf einen physiologischen pH-Y/ert abge- >
pufferten isotonischen Lösung, die mindestens ein Zellkonservierungsmittel in einer zum Konservieren eines cytologischen
Präparats ausreichenden Menge enthalte
Die erfindungsgemäße Zubereitung ist insbesondere anwendbar auf dem Gebiet der Cytologie. Sie hat eine zweifache Funktion.
309826/1057 BAD OffiGjNAL
Eine Funktion besteht darin, die Zellen in einem cytologischen Präparat zu konservieren bei gleichzeitiger Aufrechterhaltung
der Morphologie, Größe und Färbungseigenschaften der Zellen, während die zweite Funktion darin besteht, den in dem Präparat
vorhandenen Mulms aufzulösen 'oder zu verflüssigen. Es ist
wichtig, daß der Mukus aus dem Präparat entfernt wird, weil der in den meisten Präparaten vorhandene Mukus die mikroskopische
Untersuchung der Zellen, in der Probe stört und weil seine Anwesenheit die Cytodiagnose sehr schwierig macht.
In der erfindungsgemaßen Zubereitung kann Formaldehyd als eines
der Konservierungsmittel in der Lösung verwendet werden, wobei durch die Anwendung der erfindungsgemaßen Kombination der
Mukus verflüssigt wird und die Zellen durch Filtrieren oder Zentrifugieren leicht abgetrennt werden könneno
Unter dem hier verwendeten Ausdruck "physiologischer pH-Wert"
ist jeder pH-Wert zu verstehen, der dem normalen pH-Wert der lebenden Zellen entspricht. So kann der pH-Wert der erfindungsgemäßen
Zubereitung je nach dem Typ der Zellen, die behandelt werden sollen, variieren. Der pH-Wert der meisten lebenden
Zellen liegt beispielsweise bei etwa 7» in. einigen Fällen kann er jedoch zwischen et v/a 5 und etv/a 9 liegen. Wesentlich ist,
daß der pH-Wert der Zubereitung im wesentlichen der gleiche ist wie der pH-Wert der jeweils behandelten Zellen.,
Der isotonische Charakter der Lösung wird dadurch erzielt, daß man irgendein Salz verwendet, wie es üblicherweise für diesen
Zweck verwendet wird0 Beispiele für solche Salze sind Lithium-,
Natrium- oder Kaliumchlorid, vorzugsweise wird jedoch aus den weiter unten angegebenen Gründen Lithiumchlorid verwendete
Die Lösung kann mit jeder Kombination von Puffern, wie sie üblicherweise
zur Erzielung eines pH-Wertes innerhalb des angegebenen Bereiches verwendet werden, abgepuffert werden* Vorzugsweise
wird jedoch eine Kombination von dibasischem Natrium-
309826/10S7
BAD ORIGINAL
™" Ό ·"*
phosphat (Na2HPO.) und monobasischem' Kaliumphosphat g^
verwendet. Der pH-Wert der Lösung wird dadurch kontrolliert, daß man die Mengenverhältnisse der Phosphatsalze zueinander
variiert«
Das Konservierungsmittel, das in der Lösung enthalten isc,
besteht aus den bekanntenZellkonservierungsmitteln Aldehyd und Thymol. Eine 1-%ige Formalinlösung ist selbst ebensowenig
vollständig bakteriostatisch wie eine 0,03 %-ige Thymollösung.
Die Kombination dieser beiden Konservierungsmittel mit den Puffersalzen und LiGl ergibt jedoch überlegene gerimicide und
bakteriostatische Eigenschaften„ Außerdem kann die erfindungsgemäße
Zubereitung eine kleinere Menge eines Farbstoffes enthalten, um das unerfreuliche Aussehen vieler cytologischer
Präparate, die mit der Zubereitung behandelt werden können, zu maskieren.
Gemäß einer bevorzugten Ausgestaltung besteht die erfindungsgemäße
Zubereitung im wesentlichen aus 1 Teil eines Konzentrats, das im wesentlichen besteht aus 9 Teilen Na^HPO^ „7Ho0., 4,5 Teilen
KH2PO^, 180 Teilen LiCl, 9 Teilen Thymol und 300 Teilen Formalin
(37 %-ige wäßrige Formaldehydlösung), gelöst in einer Mischung von 1800 Teilen Wasser und 900 Teilen absolutem Äthanol, und
9 Teilen Wasser. Der pH-Wert dieser bevorzugten Zubereitung beträgt 6,7. Natürlich kann auch die bevorzugte Ausführungsform
der Zubereitung auch noch geringere Mengen des oben beschriebenen Farbstoff es. enthalten,,
Die Auswahl des pH-Wertes des Konservierungsmittels ist nur dadurch
beschränkt, daß sein pH-Wert in der Nähe des pH-Wertes der physiologischen Lösungen und Materialien liegen sollte.
Das heißt, es sollte nahezu neutral sein (pH 7), es kann aber
auch nach oben oder nach unten variiert werden, so lange der pH-Wert sich von dem pH-Wert des zu konservierenden Materials
nicht wesentlich unterscheidet. Wenn der pH-Wert davon ver- · schieden ist, werden die Zellen verzerrt und können je nach
309826/1057
Grad des pH-Wertunterschiedes sogar -zerstört werden.
Die beiden Phosphatsalze sind die Komponenten, die zur Bestimmung
des pH-Wertes ausgewählt werden. Es sind auch viele andere Kombinationen möglich, wie z.B, Hydroxymethyl-aminomethan
(Tris) , Natriumbicarbonat, Propanolamin, Kaliumchlorid
usw. Andere geeignete Puffer sind.in "Handbook of ^Chemistry
and Physics"j Seite D?3, 46. Auflage, 1965, publiziert von
der Chemical Rubber Company, angegeben.
Die Menge des verwendeten Lithiumchlorids ergibt sich aus dem Erfordernis, die Endlösung isotonisch zu machen,, Das heißt,
es ist erwünscht, osmotische Drucke aufrechtzuerhalten, die gleich denjenigen sind, wie" sie in lebenden Zellen vorkommen.
Auch dies kann unter Verwendung von verschiedenen Materialien, wie z.B. Lithiumchlorid, Natriumchlorid oder irgendwelcher
anderer Alkali- oder Erdalkalimetallchloride, erzielt werden. Die Menge des jeweils gewählten Salzes variiert jedoch in
Abhängigkeit von dem verwendeten spezifischen Salz.
Die Auswahl von Lithiumchlorid gegenüber den anderen Chloriden, wie z.B. Natrium-, Kalium-, Barium-, Calcium- oder Magnesiumchlorid,
wurde empirisch getroffen. Es wurde festgestellt, daß Lithiumchlorid die Neigung hat, die Zellwandstruktur zu konservieren
(zu bewahren) und die Permeabilität der Zellwand für andere Kationen herabzusetzen. Es ist möglich, daß der Radius
des Lithiumions (das außerordentlich klein ist) als Pfropfen in der Molekülstruktur der Zellwand wirkt„
Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer solchen Zubereitung,, Nach
diesem Verfahren werden eine Reihe von Lösungen, wie nachfolgend
angegeben, hergestellt, wobei es wichtig ist, daß die LiCl-Losung unmittelbar vo-r der Herstellung der Zubereitung
frisch hergestellt wird:
309826/1057
(a) 9 g Na2IIPO4.7H2O in 500 ecm destilliertem Wasser;
(b) 4,5 g KH2PO4 in 100 ecm destilliertem Wasser j
(c) 300 ml Formalin in 200 ecm destilliertem Wasaeri
(d) 180 g LiCl in 1000 ecm destilliertem Wasser;
(e) 9ε Thymol in 900 ecm absolutem Äthanol.
Die Lösungen (a), (b) und (c) werden miteinander gemischt. Danach wird die von der Lösungswärme noch warme Lösung (d)
unter konstantem Rühren der Mischung zugegeben und unter Fortsetzung
des Rührens wird die Lösung (e) zugegebene Dann wird unter weiterem ständigem Rühren 1 Teil der obigen Mischung
sofort mit 9 Teilen destilliertem Wasser verdünnt. Die verdünnte Lösung stellt die Zubereitung dar, die zum Konservieren
des cytologischen Präparats verwendet wird» Wenn es erwünscht
ist, der Zubereitung einen Farbstoff einzuverleiben, so kann ein solcher Farbstoff jeder der Lösungen in einer Menge von
etwa 1 g zugegeben werden oder er kann zugegeben werden, nachdem alle Lösungen miteinander gemischt worden sind. Es kann
jeder der vielen Farbstoffe verwendet werden. Beispiele für geeignete Farbstoffe sind folgende:
FD & C Red Nr. 2 (Amaranth); FD & C Yellow Hr. 5 (Tartrazin);
FD & C Red Nr. 3 (Erytarosin); FD & C Yellow Nr. 6 (Sunset
yellpw) und Methylenblau.
Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Zubereitung ist es
wichtig, daß die Lösungen (d) und (e) in der angegebenen Reihenfolge zugegeben werden und daß das Rühren von dem Zeitpunkt
der Zugabe der LiCl-Lösung bis zur Beendigung der Verdünnung
fortgesetzt wird, um sicherzustellen, daß die verschiedenen Komponenten in der Lösung gelöst bleiben*
LiCl ist gegenüber jedem anderen Salz zur Herstellung der isotonischen
Lösung bevorzugt, weil festgestellt wurde, daß bei Verwendung von LiCl alle Komponenten in Lösung bleiben, während
bei Verwendung von ITaCl einige der Komponenten ausfallen, wenn die Lösungen miteinander gemischt werden. Noch wichtiger ist
309826/1057
jedoch der charakteristische Effekt des Lithiums auf die
Zellwandstruktur, der die Aufrechterhaltung einer langen
Eonservierung der Probe unterstützt,ohne zu einer vollständigen
Fixierung oder Härtung zu führen.
Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Konservieren von Zellen in einem c;/tologischen
Präparat und zum Verflüssigen des darin enthaltenen
Mukus. Nach diesem Verfahren wird der erfindungsgemäßen Zubereitung ein frisches cytologiscb.es Präparat zugesetzt und die
dabei erhaltene Mischung wird entweder von Hand oder mechanisch gründlich gemischt, bis der Mukus verflüssigt ist. Danach
werden die konservierten Zellen von dem verflüssigten Mukus auf übliche Weise, beispielsweise durch filtrieren, Zentrifugieren
oder unter der Einwirkung der Schwerkraft abgetrennt, so daß das Präparat auf einen Mikroskopobjektträger zur Untersuchung
aufgebracht und angefärbt iverden kann. Die Menge der
Zubereitung, die zur richtigen Konservierung der Zellen und Verflüssigung des Mukus erforderlich ist, kann.von 1/10 <?es
Volumens des Präparats bis zu dem 2- oder Mehrfachen des Volumens variieren, je nach Viskosität des Mukus»
Die erfindungsgemäßen Zubereitungen und Verfahren können unter
Erzielung optimaler Ergebnisse auf jedes frische und nichtfixierte
cytologische Präparat angewendet werden,- beispielsweise
auf Bronchien-Spülungen (washings), -Aspirationen und Auspinselungen; Sinus-, Luftröhren-, Magen- oder Dickdarm-Spülungen
oder -Aspirationen; Thoracentesis- und Gystenflüssigkeiten;
Urin; Sputum; Vaginal-, Cervical-, Gebärmutterschleimhaut-,
Blindsack-j Brust- und Fruchtwasser-Aspirationen oder -Irrigationen; Gerebrospinalflüssigkeiten und Mundschleimhautabstriche.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert
, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein*
309826/1057
BAD ORJGINAl.
Herstellung einer raukolytischen Zubereitung zum Konservieren ,
von cytologischen Präparaten :
Es wurden die folgenden Lösungen hergestellt:
(a) 9 S NapHPQ^„7HpO in 500 ecm destilliertem Wasser;
(b) 4,5 g KH2 P04 in 100 ecm destilliertem Wasser;
(c) 300 ml Formalin und 1 g FD & C Red Nr. 2 (Amaranth) in
200 ecm destilliertem Wasser;
(d) frisch hergestellte Lösung von 180 g LiCl in 1000 ecm
destilliertem Wasser und
destilliertem Wasser und
(e) 9g Thymol in 900 ecm absolutem Äthylalkohol.
Bei UrabegungstGiiiT)eratür wurden die Lösungen (a), (b) und (c)
miteinander gemischto Unter Rühren der Mischung wurde die
Lösung (d) zugegeben und das Rühren wurde fortgesetzt, während die Lösung (e) zugegeben wurdeo Unter weiterem ständigen Rühren wurdo 1 Teil der obigen Mischung mit 9 Teilen destilliertem
Wasser verdünnt.
Lösung (d) zugegeben und das Rühren wurde fortgesetzt, während die Lösung (e) zugegeben wurdeo Unter weiterem ständigen Rühren wurdo 1 Teil der obigen Mischung mit 9 Teilen destilliertem
Wasser verdünnt.
Eine 3 ccm-Probe von frischem Sputum wurde zu einem gleichen Volumen der Zubereitung des Beispiels 1 zugegeben und die
Mischung wurde durch etwa 1-minütiges Schütteln gründlich
gemischt, bis sich der gesamte sichtbare Liukus verflüssigt
hatte. Danach wurden die in der Probe (dem Präparat) enthaltenen Zellen auf übliche Weise abgetrennt' und auf einem Objektträger fixierte Nach dem Anfärben der Zellen auf übliche Weise war das Präparat für die riikroskpopische Untersuchung geeignet. ., ,
Mischung wurde durch etwa 1-minütiges Schütteln gründlich
gemischt, bis sich der gesamte sichtbare Liukus verflüssigt
hatte. Danach wurden die in der Probe (dem Präparat) enthaltenen Zellen auf übliche Weise abgetrennt' und auf einem Objektträger fixierte Nach dem Anfärben der Zellen auf übliche Weise war das Präparat für die riikroskpopische Untersuchung geeignet. ., ,
Die Erfindung wurde zwar vorstellend an Hand bevorzugter Ausführung
sfοniien näher erläutert, sie ist jedoch darauf nicht
beschränkt und diese können in vielerlei Hinsicht abgeändert und modifiziert werden, ohne daß dadurch der Eahnan dar vorliegenden Erfindung verlassen wird»
beschränkt und diese können in vielerlei Hinsicht abgeändert und modifiziert werden, ohne daß dadurch der Eahnan dar vorliegenden Erfindung verlassen wird»
3 0 9 8 2 6/1057 Patentansprüche;
BAD ORfStNAL
Claims (11)
1. Mukolytische Zubereitung zum Konservieren von cytologischen
Präparaten, dadurch gekennzeichnet, daß sie besteht aus einer auf einen physiologischen pH-Sert abgepufferten
isotonischen Lösung, die mindestens ein.Zellkonservierungsmittel
in einer zum Konservieren eines cytologischen Präparats ausreichenden Menge enthält.
2. Zubereitung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ihr pH-Wert zwischen etwa 5 und etwa 9 liegt.
Z>. Zubereitung nach Anspruch 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet,
daß es sich bei der isotpnischen Lösung um eine
Lithiumchloridlösung handelt und daß das Zellkonservierungsrnittcl
aus Formalin und Thymol besteht.
4-, Zubereitung nach Anspruch 3j dadurch gekennzeichnet, daß
die isotonische LithiumChloridlösung mit dibasischem Natriumphosphat
und iaonobasischem Kaliumphosphat abgepuffert ist.
5·. Zubereitung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4-,
dadurch gekennzeichnet, daß sie im wesentlichen besteht
(a) aus 1 Teil eines Konzentrats, das im wesentlichen aus 9 Teilen Ua2HPO4.7H3O, 4,
5 Teilen KH2PO4, 180 Teilen LiCl,
9 Teilen Thymol und JOG Teilen Formalin, gelöst in einer
Mischung von 1800 Teilen Wasser und 900 "Teilen absolutem
Äthanol, besteht,und
(b) aus 9 Teilen Wasser.
6. Zubereitung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 5»
dadurch gekennzeichnet, daß sie außerdem einen Farbstoff enthält.
309826/1057
BAD
7. Verfahren zur Herstellung der Zubereitung nach Ansprijch 5)
dadurch gekennzeichnet, daß iuan, eine Lösung von 9 Teilen
.7HpO in 500 Teilen Wasser ku einer Lösung von 4,5 Teilen
p in 100 Teilen. Wasser zugibt, der dabei erhaltenen Mischung eine Lösung von 300 ml !"Ormalin in 200 Teilen Wasser
zusetzt, zu der erhaltenen Mischung unter ständigem Bühren
eine frisch hergestellte Lösung von 180 Teilen LiCl in 1000 Teilen V/asser und eine Lösung von 9 Teilen Thymol in 900 Teilen
Äthanol zugibt unter Bildung eines Konzentrats und unter ständigem
Kühren das Konzentrat mit 9 Teilen Wasser verdünnt,
8., Verfahren nach Anspruch 7» dadurch gekennzeichnet, daß ■·
man irgendeiner der Lösungen oder der fertigen Zubereitung etwa 1 Teil eines Farbstoffs zusetzt.
9. Vorfahren zum Konservieren eines cytologischen Präparats
und zum Vorflüssigen des darin enthaltenen Mukus, um das
Präparat für die mikroskopische Untersuchung geeignet zu machen, dadurch gekennzeichnet, daß man ein frisches oytologisches
Präparat zu et v/a 1/10 bis zum etwa doppelten Volumen der Zubereitung nach mindestens,einem der Ansprüche 1 bis 6
zusetzt, die dabei erhaltene Mischung mischt, bis der in dem Präparat enthaltene Mukus verflüssigt ist, und die Zellen von
der Mischung abtrennte
10. Verfahren nach Anspruch 95 dadurch gekennzeichnet, daß
man die Zellen durch Filtrieren, Zentrifugieren oder unter der Einwirkung der Schwerkraft von der Mischung abtrennt.
11. Verfahren nach Anspruch 9 und/oder 10, dadurch gekennzeichnet,
daß man zur mikroskopischen Untersuchung die abgetrennten Zellen anfärbt und auf einem Objektträger fixiert.
309826/1057 bad original
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US00208960A US3813465A (en) | 1971-12-16 | 1971-12-16 | Cytological preservative and mucolytic composition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2260774A1 true DE2260774A1 (de) | 1973-06-28 |
Family
ID=22776760
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2260774A Pending DE2260774A1 (de) | 1971-12-16 | 1972-12-12 | Mukolytische zubereitung zum konservieren von cytologischen praeparaten und verfahren zu ihrer herstellung |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3813465A (de) |
| CA (1) | CA987602A (de) |
| DE (1) | DE2260774A1 (de) |
| FR (1) | FR2163598A1 (de) |
| GB (1) | GB1369389A (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2727730A1 (de) * | 1976-10-18 | 1978-04-20 | Technicon Instr | Loesliche, haltbare blutzusammensetzung |
| US4765275A (en) * | 1984-02-07 | 1988-08-23 | Biotechnology Australia Pty. Ltd. | Nematode storage and transport |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPQ077199A0 (en) * | 1999-06-03 | 1999-06-24 | Fremantle Heart Institute Pty Ltd | A method using potassium dihydrogen phosphate to reduce calcification of tissue |
| ES2251307B2 (es) * | 2004-10-05 | 2006-12-16 | Universidad Complutense De Madrid | Solucion para el mantenimiento indefinido de los acidos nucleicos en su celula de origen. |
| US20060088814A1 (en) * | 2004-10-26 | 2006-04-27 | Cytyc Corporation | Enhanced cell preservative solution and methods for using same |
-
1971
- 1971-12-16 US US00208960A patent/US3813465A/en not_active Expired - Lifetime
-
1972
- 1972-12-12 DE DE2260774A patent/DE2260774A1/de active Pending
- 1972-12-14 FR FR7244462A patent/FR2163598A1/fr not_active Withdrawn
- 1972-12-15 CA CA159,002A patent/CA987602A/en not_active Expired
- 1972-12-18 GB GB5842572A patent/GB1369389A/en not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2727730A1 (de) * | 1976-10-18 | 1978-04-20 | Technicon Instr | Loesliche, haltbare blutzusammensetzung |
| US4765275A (en) * | 1984-02-07 | 1988-08-23 | Biotechnology Australia Pty. Ltd. | Nematode storage and transport |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US3813465A (en) | 1974-05-28 |
| GB1369389A (en) | 1974-10-09 |
| FR2163598A1 (de) | 1973-07-27 |
| CA987602A (en) | 1976-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3017151C2 (de) | ||
| DE60300218T2 (de) | Fixierungslösung | |
| DE2951783A1 (de) | Mittel zum eichen von geraeten zum messen der haematologischen werte von vollstaendigen blutproben und verfahren zu seiner herstellung | |
| EP2823282A1 (de) | Formalinfreie fixierungsmittel für histologische färbungen von gewebeproben | |
| DE69427115T2 (de) | Verfahren zur messung der antithrombin-iii-aktivität | |
| DE2602997A1 (de) | Loesliches kollagen und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE2822540C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines nichthygroskopischen lactulosehaltigen Pulvers | |
| EP0009596B1 (de) | Wässrige Lipid-Standardlösung | |
| DE2260774A1 (de) | Mukolytische zubereitung zum konservieren von cytologischen praeparaten und verfahren zu ihrer herstellung | |
| Elbadawi | Hexachrome modification of Movat's stain | |
| DE3007579A1 (de) | Selektives medium zur isolierung von choleravibrionen | |
| EP0067394B1 (de) | Wässrige Cholesterin-Standardlösung und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| EP0141922B1 (de) | Verfahren zur Verringerung einer Trübung in Kontrollseren | |
| EP0131606B1 (de) | Verfahren und reagenz zur differenzierten bestimmung von isoenzymen der alkalischen phosphatase | |
| Kudo | On the nature of structures characteristic of cnidosporidian spores | |
| CH636965A5 (de) | Kuenstlicher stuhl. | |
| DE2256331A1 (de) | Verfahren zur harnsaeurebestimmung | |
| DE69119576T2 (de) | Verfahren zur Abtrennung, Identifizierung und Quantifizierung von Isoenzymen und Isoformen der alkalischen Phosphatase | |
| DE4003783C2 (de) | Phospholipidhaltiges Gel, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung | |
| DE2212285C3 (de) | Verfahren zur Bestimmung der carcinogenen Aktivität und heptatoxischen Eigenschaften von Substanzen | |
| Gömöri | Microtechnical demonstration of insoluble lime salts in tissues | |
| DE2724438C2 (de) | Künstlicher Stuhl zu diagnostischen Zwecken | |
| DE631658C (de) | Verfahren zur Herstellung von haltbaren Suspensionen tierischer Gewebezellen | |
| DE737439C (de) | Verfahren zur Herstellung einer in Wunden aufsaugbaren Paste aus Bindegewebe | |
| EP3592331B1 (de) | Kontrastmittel für mikroangiografie |