DE2258080A1

DE2258080A1 - Polypeptide from pancreatic tissue - as non-oral veterinary laxative

Info

Publication number: DE2258080A1
Application number: DE19722258080
Authority: DE
Inventors: Ronald Eugene Chance; William Eugene Jones
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1972-11-27
Filing date: 1972-11-27
Publication date: 1974-05-30
Also published as: DE2258080B2; DE2258080C3

Abstract

The cpds. of formula:- HAla-X-Leu-Glu-Pro-Y-Tyr-PRO-Gly-Asp-Asp-Ala-Thr-Pro-Z-Gln-Met-Al- a-Gln-Tyr-Ala-Ala-Z'-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Met-Leu-Thr-Arg-Pro-- Arg-Tyr-C(O)-NH2 (where X = Pro, Y = Gln, Z = Glu, Z' = Glu or X = Pro, Y = Val, Z = Glu, Z' = Glu or X = Ser, Y = Glu, z = Gln Z' = Glu or X = Pro, Y = Val, Z = Glu, Z' = Asn or X = Pro, Y = Val, z = Asn, Z' = Glu) are prepd. by extn. from pancreatic tissue at pH 2-8 followed by chromatography and purification.

Description

Polypeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung Die Erfindung bezieht sich auf neue Proteine oder Polypeptide mit Molekulargewichten zwischen Insulin und Glucagon sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung. Polypeptides and Methods for Their Production The invention relates to focus on new proteins or polypeptides with molecular weights between insulin and glucagon and a process for their production.

Das Protein, das routinemäßig aus Rinderpancreas extrahiert wird, läßt sich (unter Anwendung der üblichen Nomenklaturabkürzungen für Polypeptide; vgl. JACS 67, 1524, 1530) durch folgende Formel wiedergeben NH2-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Gln-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-6 12 Thr-Pro-Glu-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Leu-13 18- 24 Wie es bei natürlichen Polypeptiden zu erwarten ist, liegen alle Aminosäurereste in der linksdrehenden optisch isomeren Form vor.The protein that is routinely extracted from bovine pancreas can be represented (using the usual nomenclature abbreviations for polypeptides; see JACS 67, 1524, 1530) by the following formula: NH2-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Gln-Tyr- Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-6 12 Thr-Pro-Glu-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Leu-13 18-24 As is to be expected with natural polypeptides, all amino acid residues are in the levorotatory optically isomeric form.

Das entsprechende Polypeptid aus Schweinepancreas ist mit dem oben angegebenen identisch, mit der Ausnahme, daß in der Position 6, in der das Rinderpolypeptid einen Glutaminrest aufweist, das Schweinepolypeptid einen Valinrest zeigt.The corresponding porcine pancreas polypeptide is the same as above indicated identical, with the exception that in position 6, in which the bovine polypeptide has a glutamine residue, the porcine polypeptide shows a valine residue.

Xhnlich unterscheidet sich das Schafpolypeptid von dem Rinderpolypeptid durch einen Serinrest in Position 2, in der das Rinderpolypeptid einen Prolinrest aufweist , und das Humanpolypeptid von dem Rinderpolypeptid durch einen Asparaginrest, von dem angenommen wird, daß er in Position 23 vorliegt, der sich aber möglicherweise in Position 15 befindet, während das Rinderpolypeptid an der gleichen Stelle einen Glutaminrest aufweist, zusätzlich zu dem Ersatz eines Glutaminrests durch einen Valinrest in Position 6 wie bei dem Schweinepolypeptid. Solche kleineren Artunterschiede sind auf dem Gebiet der Drüsenextraktion wohl bekannt. Die Substanzen weisen aber ein ähnliches chemisches und pharmakologisches Verhalten auf und können einander bei der Anwendung ersetzen oder es können gemischte Produkte verwendet werden.Similarly, the sheep polypeptide is different from the bovine polypeptide by a serine residue in position 2, in which the bovine polypeptide has a proline residue and the human polypeptide from the bovine polypeptide by an asparagine residue, which is believed to be in position 23, but which may be is in position 15, while the bovine polypeptide is in the same position Has glutamine residue, in addition to replacing a glutamine residue with one Valine residue in position 6 as for the porcine polypeptide. Such minor species differences are well known in the art of gland extraction. But the substances show a similar chemical and pharmacological behavior and can each other Replace in use or mixed products can be used.

Das erfindungsxemäße Protein hat also in anderer Darstellung die Zusammensetzung NH2-Ala-X-Leu-Glu-Pro-Y-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-Thr-Pro-6 12 13 Z-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Z'-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-24 25 Wobei in den jeweiligen Ausführungsformen X, Y, Z und Z' folgende Bedeutungen haben X Y Z Rind Pro Gln Glu Glu Schwein Pro Val Glu Glu Schaf Ser Gln Glu Glu Mensch Pro Val Glu Asn oder Pro Val Asn Glu.In a different representation, the protein according to the invention thus has the composition NH2-Ala-X-Leu-Glu-Pro-Y-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-Thr-Pro-6 12 13 Z-Gln-Met-Ala -Gln-Tyr-Ala-Ala-Z'-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-24 25 Whereby in the respective embodiments X, Y, Z and Z 'have the following meanings, XYZ cattle Pro Gln Glu Glu pig Pro Val Glu Glu sheep Ser Gln Glu Glu human Pro Val Glu Asn or Pro Val Asn Glu.

Die Erfindung hat ferner ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Proteins zum Gegenstand, das dadurch gekennzeichnet ist, daß eine Pancreasdrüse in einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel bis zu einem nahezu emulgierten Zustand gemahlen wird, die Drüse mit wässrigem Alkohol, der auf einen pH-Wert von etwa 2,8 angesäuert ist, behandelt wird, die unlöslichen Gewebesubstanzen durch Filtration entfernt werden, die Lösung durch Zusatz von Alkalimetallhydroxid auf einen pH-Wert von 8 bis 8,5 eingestellt wird, bei diesem pH-Wert aus dem erhaltenen konzentrierten Präparat Fette und Ammoniumphosphat durch Fällung abgetrennt werden, mit einer Säure auf einen pH-Wert von etwa 5,2 eingestellt wird, diese Lösung mit einer Mischung von Diäthyläther und Äthanol verdünnt wird und anschließend diese Mischung zur Abscheidung und Gewinnung der Polypeptide für eine Zeit von 12 Stunden oder-mehr stehengelassen wird.The invention also has a method of making one Protein to the subject, which is characterized in that a pancreas gland in a water-immiscible solvent to an almost emulsified one State is ground the gland with aqueous alcohol brought to a pH of about 2.8 is acidified, the insoluble tissue substances are treated by Filtration can be removed, the solution by adding alkali metal hydroxide a pH of 8 to 8.5 is adjusted, at this pH from the obtained concentrated preparation fats and ammonium phosphate are separated by precipitation, this solution is adjusted to a pH of about 5.2 with an acid a mixture of diethyl ether and ethanol is diluted and then this Mixture for the separation and recovery of the polypeptides for a period of 12 hours or-more is left standing.

Das neue Produkt ist in handelsüblichem kristallinem Insulin in niedrigen Konzentrationen enthalten. In höheren Konzentrationen liegt es in dem-rohen Pancreasextrakt vor, der bei der Abtrennung von Insulin erzeugt wird und in der Fachwelt als "Salzkuchen" bekannt ist. Das Produkt ist in der Mutterlauge des alkalischen Insulinkristallisationsverfahrens enthalten und ist daraus extrahiert worden. Es kann ferner aus Pancreas selbst und aus rohen flüssigen Pancreasextrakten extrahiert werden.The new product is available in commercially available crystalline insulin in low levels Concentrations included. It is found in higher concentrations in the raw pancreatic extract before, which is generated when insulin is separated and in the professional world as "salt cake" is known. The product is in the mother liquor of the alkaline insulin crystallization process and has been extracted from it. It can also come from the pancreas itself and extracted from raw liquid pancreatic extracts.

Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Produkts kann vorzugsweise von ganzem Pancreas ausgegangen werden, der sauber aus dem Körper eines frisch getöteten Tieres herausgelöst wurde, beispielsweise bei der Fleischproduktion. Die Drüse wird abgewaschen und sofort eingefroren. Wenn sie länger als für kurze Zeit aufbewahrt werden soll, wird sie in gefrorenem Zustand gehalten. Die verwendete Drüsenmenge ist nicht wesentlich, für eine zweckmäßige Ausbeute von 30 bis 50 mg Produkt werden jedoch etwa 10 kg benötigt. Alle folgenden Arbeitsgänge, die anschließend beschrieben werden, werden sauber, hygienisch, nach Bedarf aseptisch und bei 4+ 0,5 0C durchgeführt. Lösungsmittel und ähnliche Stoffe werden bei der angegebenen Temperatur eingeführt.For the production of the product according to the invention can preferably from whole pancreas are assumed to be clean from the body of a freshly killed Animal, for example in meat production. The gland will washed off and frozen immediately. If kept for longer than a short time is to be kept in a frozen state. The amount of glands used is not essential for a convenient yield of 30 to 50 mg of product however, about 10 kg is required. All of the following operations described below are carried out clean, hygienic, aseptic if necessary and at 4+ 0.5 ° C. Solvents and similar substances are introduced at the specified temperature.

Die Drüse wird bis zu einem fast emulgierten Zustand fein gemahlen und die gemahlene Drüse wird mit wässrigem Alkohol versetzt, der auf etwa pH 2,8 angesäuert ist. Die erhaltene Aufschlämmung wird gerührt und dann werden unlösliche Gewebesubstanzen durch Filtration entfernt. Die betreffende Fraktion befindet sich in der Lösung. Zur Einstellung des benötigten pH-Werts können Phosphorsäure, Salzsäure, Schwefelsäure und andere Säuren verwendet werden. Ebenso ist zwar äthanol das Lösungsmittel der Wahl, jedoch können auch andere mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel angewandt werden, darunter Aceton, andere wasserlösliche Ketone, Acetaldehyd, andere wasserlösliche Aldehyde und dergleichen.The gland is finely ground to an almost emulsified state and aqueous alcohol adjusted to about pH 2.8 is added to the milled gland is acidified. The obtained slurry is stirred and then become insoluble Tissue substances removed by filtration. The parliamentary group in question is in the solution. Phosphoric acid, hydrochloric acid, Sulfuric acid and other acids can be used. Ethanol is also the solvent of choice, but other water-miscible organic solvents can also be used may be used, including acetone, other water-soluble ketones, acetaldehyde, others water soluble aldehydes and the like.

Die gewebe freie saure Lösung wird durch vorsichtige Zugabe von Alkalimetallhydroxid oder vorzugsweise wässrigem Ammoniak auf pH 8 bis 8,5 eingestellt. Bei diesem pH-Wert scheiden sich aus dem erhaltenen konzentrierten Präparat etwas Fett und Ammoniuntphosphat ab. Die Lösung wird abgetrennt, beispielsweise durch Dekantieren, Filtrieren oder beide Maßnahmen.The tissue-free acidic solution is made by careful addition of alkali metal hydroxide or, preferably, aqueous ammonia adjusted to pH 8 to 8.5. At this pH Some fat and ammonium phosphate separate from the concentrated preparation obtained away. The solution is separated off, for example by decanting, filtering or both measures.

Die gewonnene Lösung wird dann auf einen pH-Wert von etwa 5,2 eingestellt, beispielsweise mit Essigsäure. Diese Lösung wird dann mit einer Mischung aus vier Volumenteilen Diäthyläther und zwei Volumenteilen Äthanol verdünnt. Die Mischung wird dber Nacht oder für eine äquivalente oder längere Zeitdauer stehengelassen. In dieser Zeit scheiden sich fast alle Proteine, darunter das erfindungsgemäße Produkt ab. Die erhaltene Teilsuspension-wird zentrifugiert und der Niederschlag wird gewonnen. Der Niederschlag wird im Vakuum vom Wasser befreit, zur Entfernung restlicher Fette, falls vorhanden, mit Äther gewaschen und dann im Vakuum von restlichem Äther befreit. Das getrocknete Produkt wird dann in molarer Essigsäure aufgenommen. In dem sauren Medium lösen sich verschiedene Proteine. Die Lösung wird hierauf an einer Kolonne mit Sephadex G-50 (fein) chromatographiert, wodurch eine Trennung ungefähr nach dem Molekulargewicht erfolgt.The obtained solution is then adjusted to a pH of about 5.2, for example with acetic acid. This solution is then made with a mixture of four Diluted parts by volume of diethyl ether and two parts by volume of ethanol. The mixture left to stand overnight or for an equivalent or longer period of time. During this time, almost all proteins, including the product according to the invention, separate away. The partial suspension obtained is centrifuged and the precipitate is collected. The precipitate is freed from water in a vacuum, to remove residual fats, if present, washed with ether and then freed from residual ether in vacuo. The dried product is then taken up in molar acetic acid. In the sour Different proteins dissolve in the medium. The solution is then on a column Chromatographed with Sephadex G-50 (fine), causing a separation approximately after the molecular weight takes place.

Glucagon hat ein Molekulargewicht von etwa 3500. Das neue Protein hat ein Molekulargewicht von etwa 4200, bei einer Bestimmung der Rinderform genau 4231, während Insulin ein Molekulargewicht von etwa 5800 aufweist.Glucagon has a molecular weight of about 3500. The new protein has a molecular weight of about 4200, when accurately determined as bovine shape 4231, while insulin has a molecular weight of about 5800.

Ferner enthält Glucagon einen Tryptophanrest, durch den das Molekül in gewissem Ausmaß die Fähigkeit zur Sorption auf Sephadex erhält. Aus diesem Grund ist die Trennung von Glucagon und des neuen Proteins mit Sephadex etwas besser, als aufgrund des Molekulargewichts allein zu erwarten wäre.Glucagon also contains a tryptophan residue, through which the molecule to some extent the ability to sorb on Sephadex. For this reason the separation of glucagon and the new protein with Sephadex is a little better, than would be expected based on molecular weight alone.

Erfindungsgemäß wird daher die Trennung mit Sephadex bevorzugt.According to the invention, separation with Sephadex is therefore preferred.

Nach diesem Verfahren werden das erfindungsgemäße Protein und einige andere von Stoffen geschieden, die in diesem Zusammenhang nicht von Interesse sind. Das Eluat kann mittels Ultraviolettabsorption überwacht werden. Dabei wird jede Proteineluatbande durch eine starke Absorption bei 276 bis 280 m/u angezeigt. Wenn die Abnahme eines solchen Extinktionsmaximums festgestellt wird, wird das Auffanggefäß gewechselt und gegebenenfalls nochmals gewechselt, wenn das Auftreten eines weiteren Extinktionsmaximums beobachtet wird. Bei einer anderen Arbeitsweise werden die Auffanggef8ße nach einem Zeitplan gewechselt und durch visuelle Beobachtung oder mittels eines Meßblatts mit Zeitkoordinate festgestellt, welche getrennt aufgefangenen Proben von Interesse sind. Die Fraktion, die das erfindungsgemäße Protein enthält, enthält gewöhnlich auch Insulin und Glucagon.According to this method, the protein of the invention and some divorced others from matters not of interest in this context. The eluate can monitored by ultraviolet absorption. Each protein eluate band is characterized by a strong absorption at 276 to 280 m / u displayed. If the decrease in such an absorbance maximum is noted, the collecting vessel is changed and, if necessary, changed again if that Occurrence of a further extinction maximum is observed. With another Working method, the collecting vessels are changed according to a schedule and by visual Observation or by means of a measuring sheet with time coordinate determined which separately collected samples are of interest. The fraction that the invention Containing protein usually also contains insulin and glucagon.

Diese Mischung wird dann bei der bevorzugten Arbeitsweise zu einer trocknen Substanz lyophilisiert. Diese trockene Substanz wird dann in einer Pufferlösung aufgenommen, die 0,01 molar in bezug auf Tris(hydroxymethyl>aminomethan, 0,001 molar in bezug auf Tetranatriumäthylendiamintetraacetat und 7 molar in bezug auf Harnstoff ist,und der pH-Wert der entstandenen Lösung (ursprünglich etwa 11) wird mit HC1 auf etwa 9,0 eingestellt.This mixture then becomes one in the preferred procedure dry substance lyophilized. This dry substance is then placed in a buffer solution included, the 0.01 molar in relation to tris (hydroxymethyl> aminomethane, 0.001 molar in terms of tetrasodium ethylenediamine tetraacetate and 7 molar in terms of Is urea, and the pH of the resulting solution (originally around 11) will be set to about 9.0 with HC1.

Wenn die trockne Substanz in einer ausreichenden Mindestmenge des Puffers völlig gelöst ist, wird die entstandene Lösung durch eine Kolonne mi t mit Diäthylaminoäthylcellulose unter Verwendung weiterer Anteile der gleichen Pufferlösung als Eluiermittel chromatographiert.When the dry substance is in a sufficient minimum amount of the The buffer is completely dissolved, the resulting solution is passed through a column with Diethylaminoethyl cellulose using further portions of the same buffer solution chromatographed as the eluent.

Bei dieser Elution werden Spuren von unerwünschten Stoffen, die hier nicht von Interesse sind, zuerst eluiert, gefolgt von Glucagon. Nach dem Glucagon wird das erflndungsgemäß Protein sauber eluiert. Bei der hier beschriebenen bevorzugten Arbeitsweise bleibt Insulin in der Chromatographiekolonne gebunden. Es kann, wenn' diens gewünscht wird, mittels stärkerer Salzlösungen eluiert werden, diese Maßnahme bildet jedoch keinen Teil der Erfindung.During this elution, traces of undesirable substances are found here are of no interest, eluted first, followed by glucagon. After the glucagon the protein is eluted cleanly according to the invention. With the one described here preferred How it works, insulin remains bound in the chromatography column. It can if ' If it is desired to be eluted by means of stronger salt solutions, this measure however, it does not form part of the invention.

Das Eluat in Pufferlösung wird dann an einer Kolonne mit Sephadex G-25 (grob) mit 2-prozentiger wässriger Essigsäure als Eluiermittel chromatographiert. In dieser Stufe werden nichtwässrige Pufferkomponenten fast vollständig entfernt.The eluate in buffer solution is then passed on to a column with Sephadex G-25 (coarse) chromatographed with 2 percent aqueous acetic acid as the eluent. At this stage, non-aqueous buffer components are almost completely removed.

Die erhaltene Lösung wird erneut lyophilisiert und das getrocknete Produkt, das nach dem Lyophilisieren verbleibt, ist das erfindungsgemäße Protein.The solution obtained is lyophilized again and the dried one The product that remains after lyophilization is the protein according to the invention.

Die saubere Durchführung der vorher im einzelnen beschriebenen Stufen führt mit Zuverlässigkeit zu dem Produkt. Das Produkt läßt sich jedoch gewünschtenfalls leicht folgendermaßen weiter charakterisieren. Eine bevorzugte erste Charakterisierungsnethode ist die Analyse auf die N-terminale Aminosäure. Dazu wird ein Teil des Produkts in bekannter Weise mit 1-Dimethylaminonaphthalln-5-sulfonylchlorid umgesetzt, das ein N-terminales Addukt bildet. Das Addukt wird hyd:ly1ert, wodurch die terminale Aminosäure als solches Addukt entfernt wird.The proper implementation of the stages described in detail above leads to the product with reliability. However, the product can be used if desired easily further characterize as follows. A preferred first method of characterization is the analysis for the N-terminal amino acid. This becomes part of the product reacted in a known manner with 1-dimethylaminonaphthalln-5-sulfonyl chloride, the forms an N-terminal adduct. The adduct is hyd: ly1ert, whereby the terminal Amino acid as such an adduct is removed.

Dieses wird dann einer Dünnschichtchromatographie unterworfen und im Ultraviolettlicht auf einen einzigen fluoreszierenden Fleck des 1-Dimethylaminonapthalin-5-sulfonylchlorid-Addukts von Alanin geprüft.This is then subjected to thin layer chromatography and in ultraviolet light on a single fluorescent spot of the 1-dimethylaminonapthalene-5-sulfonyl chloride adduct checked by alanine.

Wenn die Ergebnisse dieses Test befriedigend ausfallen, wird das Produkt durch Polyacrylamidscheibengel-Elektrophorese in einem Trisboratpuffer in einer Produktkonzentration von 0,1 * geprüft. Nach 2 Stunden bei einem konstanten elektrophoretischen Strom von 2 mAmpere wird das Gel mit Coomassie-Brilliantblau in einer Konzentration von etwa 0,025 % in 10-prozentiger wässriger Trichloressigsäure angefärbt. Dieser Test soll eine einzelne blaue Zone mit beträchtlicher Dichte ergeben, die dem erfindungsgemäßen einzigen Protein entspricht.If the results of this test are satisfactory, the product will by polyacrylamide disk gel electrophoresis in a trisborate buffer in a Product concentration of 0.1 * tested. After 2 hours at a constant electrophoretic The gel with Coomassie brilliant blue in one concentration becomes a current of 2 mAmpere about 0.025% in 10 percent aqueous trichloroacetic acid stained. This test is designed to reveal a single blue zone of considerable density, which corresponds to the single protein according to the invention.

Wenn dieser Test befriedigende Ergebnisse liefert, kann mit der Probe gewünschtenfalls eine partielle oder vollständige Aminosäurensequenzanalyse durchgeführt werden.If this test gives satisfactory results, the sample can be used if desired, a partial or complete amino acid sequence analysis is carried out will.

Das trockne isolierte Produkt ist eine weiße kristalline Substanz, die sich beim Erwärmen zersetzt, bevor eine definierte Schmelztemperatur festgestellt wird. Die Analyse durch eine Folge von subtraktiven Edman-Schritten führt zu der vorher angegebenen Struktur.The dry isolated product is a white crystalline substance, which decomposes when heated before a defined melting temperature is determined will. Analysis through a series of subtractive Edman steps leads to this previously specified structure.

Das Produkt zeigt verschiedene biologische Wirkungen. Es verstärkt die Darmmobilität, verengt den Gallengang und entspannt die Gallenblase.The product shows various biological effects. It amplifies the intestinal mobility, constricts the bile duct and relaxes the gallbladder.

Es ist als Veterinärabführmittel vorteilhaft, das keine orale Verabreichung erfordert. Für solche Zwecke wird es in bekannter Art und Weise so verabreicht, daß das Polypeptid undenaturiert in den Blutstrom gelangt. Die Verabreichung des Mittels führt zu einer unwillkürlichen Defäkation des Dickdarminhalts. Wenn eine rasche Wirkung gewünscht wird, wird es intravenös verabreicht. Wenn eine länger anhaltende Wirkung, die langsamer einsetzt, gewünscht wird, wird es als Depot verabreicht, aus dem es langsam in den Blutstrom abgegeben wird, zum Beispiel subkutan in einem Gebiet mit guter peripherer Kreislaufversorgung.It is beneficial as a veterinary laxative that does not require oral administration requires. For such purposes it is administered in a known manner in such a way that that the polypeptide enters the bloodstream undenatured. The administration of the Means leads to an involuntary defecation of the colon contents. When a If rapid action is desired, it is administered intravenously. If one is longer long-lasting effect that starts more slowly is desired, it is administered as a depot, from which it is slowly released into the bloodstream, for example subcutaneously in one Area with good peripheral circulation.

Die Dosierungsmengen werden entsprechend der Tierart, der Stärke der gewünschten Wirkung und anderen Faktoren eingestellt, die üblicherweise bei der Festlegung von Dosierungsmengen berücksichtigt werden. Bei Hunden wurden mit dem erfindungsgemäßen Produkt bei intravenösen Injektionen von 5 bis 5Q Mikrogramm pro kg Körpergewicht gute Ergebnisse eræielt, was als allgemeine Richtlinie dienen kann. Dosierungen von nur 0,5 Mikrogramm pro kg sind ebenfalls wirksam.The dosage amounts are determined according to the species, the strength of the desired effect and other factors set, usually should be taken into account when determining dosage levels. In dogs were with the product according to the invention for intravenous injections of 5 to 5Q micrograms good results per kg of body weight have been obtained, which should serve as a general guideline can. Dosages as low as 0.5 micrograms per kg are also effective.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e

1. Polypeptide of the formula NH2-Ala-X-Leu-Glu-Pro-Y-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-1 12 Thr-Pro-Z-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala -Ala-Z'-Leu-13 18 24 where X = Pro, Y = Gln, Z - Glu, Z '= Glu, or X = Pro, Y = Val, Z 2 Glu, Z' = Glu, or X = Ser, Y m Gln, Z = Glu, Z '= Glu, or X = Pro, Y = Val, Z = Glu, Z' = Asn, or X = Pro, Y = Val, Z = Asn, Z '= Glu.

2. Polypeptide according to claim 1, characterized in that it has the formula NH2 -Ala-Pro-Leu-Glu-Prc-G ln-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Al a-1 6 12 Thr-Pro-Glu -Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Leu-13 18 24 Has.

3. Polypeptide according to claim 1, characterized in that it has the formula NH2-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-1 6 12 Thr-Pro-Glu-Gln -Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Leu-13 18 24 Has.

4. Process for the preparation of polypeptides of the formula NH2-Ala-X-Leu-Glu-Pro-Y-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-1 6 12 Thr-Pro-Z-Gln-Met-Ala- Gln-Tyr-Ala-Ala-Z'-Leu-13 18 24 where X = Pro, Y = Gln, Z = Glu, Z '= Glu, or X = Pro, Y = Val, Z = Glu, Z' = Glu, or X = Ser, Y = Gln, Z = Glu, Z '= Glu, or X = Pro, Y = Val, Z = Glu, Z' = Asn, or X = Pro, Y - Val, Z = Asn, Z '= Glu, characterized in that an animal pancreas gland is in one with Water-immiscible solvent is ground to an almost emulsified state, the ground gland is treated with aqueous alcohol acidified to about pH 2.8, the insoluble tissue substances are removed by filtration, the solution is removed by adding alkali metal hydroxide to pH 8 to 8.5, some fat and ammonium phosphate are precipitated from the concentrated preparation obtained at this pH value, adjusted to a pH value of about 5.2 with an acid, this solution is diluted with a mixture of diethyl ether and ethanol and then the mixture is allowed to stand for a period of 12 hours or more to precipitate and recover the polypeptides.

5. The method according to claim 4, characterized in that a polypeptide of the formula NH2-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Gln-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-1 6 12 Thr-Pro-Glu- Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Leu 13 18 24 is won.

6. The method according to claim 4, characterized in that a polypeptide of the formula NH2-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-1 6 12 Thr-Pro-Glu- Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Aia-Glu-Leu-13 18 24 is won.