DE2164564A1 - Neue Antibiotica und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents
Neue Antibiotica und Verfahren zu ihrer HerstellungInfo
- Publication number
- DE2164564A1 DE2164564A1 DE19712164564 DE2164564A DE2164564A1 DE 2164564 A1 DE2164564 A1 DE 2164564A1 DE 19712164564 DE19712164564 DE 19712164564 DE 2164564 A DE2164564 A DE 2164564A DE 2164564 A1 DE2164564 A1 DE 2164564A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- antibiotic
- chloroform
- extinction coefficient
- medium
- acetone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims description 24
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 57
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- HELPZWNRUYNCJQ-QWJSOBSRSA-N (e)-3-[4-[(5z)-3,4-dihydroxy-5-[2-(3-hydroxy-4,5-dimethoxy-6-methyloxan-2-yl)oxy-1-methoxyethylidene]oxolan-2-yl]oxyphenyl]-n-[5-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]-2-methylprop-2-enamide Chemical compound OC1C(OC)C(OC)C(C)OC1OC\C(OC)=C\1C(O)C(O)C(OC=2C=CC(\C=C(/C)C(=O)NC3C(C(OC3CO)N3C4=NC=NC(=C4N=C3)N(C)C)O)=CC=2)O/1 HELPZWNRUYNCJQ-QWJSOBSRSA-N 0.000 claims description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 12
- 241000936887 Saccharothrix mutabilis subsp. capreolus Species 0.000 claims description 11
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 4
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000155 melt Substances 0.000 claims description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 13
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 10
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 8
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 4
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.ClC(Cl)Cl OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000588694 Erwinia amylovora Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- 241000194022 Streptococcus sp. Species 0.000 description 2
- 241000958274 Streptomyces alboflavus Species 0.000 description 2
- 241000520747 Streptomyces canescens Species 0.000 description 2
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000012474 bioautography Methods 0.000 description 2
- 230000035425 carbon utilization Effects 0.000 description 2
- 230000001013 cariogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRMCBQLZVBXOSJ-PCFSSPOYSA-N (e)-3-[(6r,6as)-4-hydroxy-6-methoxy-3-methyl-11-oxo-5,6,6a,7-tetrahydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-yl]prop-2-enamide Chemical compound CO[C@H]1NC2=C(O)C(C)=CC=C2C(=O)N2C=C(\C=C\C(N)=O)C[C@@H]12 YRMCBQLZVBXOSJ-PCFSSPOYSA-N 0.000 description 1
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N Alumina Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000611205 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 241000221671 Ophiostoma ulmi Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001045770 Trichophyton mentagrophytes Species 0.000 description 1
- 241001123669 Verticillium albo-atrum Species 0.000 description 1
- 241001135144 Vibrio metschnikovii Species 0.000 description 1
- 241000194062 Xanthomonas phaseoli Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 210000004712 air sac Anatomy 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000002815 broth microdilution Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- OLOZVPHKXALCRI-UHFFFAOYSA-L calcium malate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C(O)CC([O-])=O OLOZVPHKXALCRI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001362 calcium malate Substances 0.000 description 1
- 229940016114 calcium malate Drugs 0.000 description 1
- 235000011038 calcium malates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- QSKWJTXWJJOJFP-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethoxyethane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCOCC QSKWJTXWJJOJFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940007078 entamoeba histolytica Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N keto-D-fructose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 235000015113 tomato pastes and purées Nutrition 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 244000045561 useful plants Species 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N vanadium atom Chemical compound [V] LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07G—COMPOUNDS OF UNKNOWN CONSTITUTION
- C07G11/00—Antibiotics
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Χ-3320/28
OL-86 026
OL-86 026
Neue Antibiotica und Verfahren zu ihrer Herstellung
Die Erfindung bezieht sich auf neue Antibiotica und ihre Herstellung und betrifft insbesondere zwei neue stickstoffhaltige
Antibiotica, für die hierin die Bezeichnungen A-201A und A-201B verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen Antibiotica werden durch Züchten des Organismus Streptomyces capreolus, Stamm NRRL 3817,
in einem wässrigen Nährmedium unter submers-aeroben Fermentationsbedingungen erzeugt. Die Antibiotica werden
aus der Fermentationsbrühe durch Extrahieren mit einem üblichen nicht mischbaren Lösungsmittel, zum Beispiel
Chloroform, isoliert, und die Mischung wird durch Säulenchromatographie an einem aktiven Adsorbens, zum Beispiel
Kieselgel, getrennt, und mit Aceton bzw. einer Mischung aus Aceton und Methanol (9:1) eluiert. Antibioticum
A-201A wird durch Umkristallisieren aus kaltem Aceton gereinigt. Antibioticum A-201B ist bei Raumtemperatur
ein öl und wird durch Konzentrieren des zum Eluieren verwendeten Lösungsmittels Aceton/Methanol (9:1) erhalten.
209828/1003
Die neuen Antibiotica A-201A und A-2O1B nach der Erfindung
weisen Wirksamkeit gegen Bakterien, Pilze und Amoeben auf.
Die neuen Antibiotica nach der Erfindung sind stickstoffhaltige Verbindungen, die keine titrierbaren Gruppen enthalten.
Die unten angegebenen Kenndaten beziehen sich auf Antibioticum A-201A als kristalline Substanz und Antibioticum
A-201B als flüssige Substanz bei Raumtemperatur. Die Antibiotica werden zweckmäßig in diesen Formen isoliert und
charakterisiert.
Antibioticum A-201A ist eine weiße kristalline Verbindung, die bei Kristallisation aus Aceton bei etwa 170 bis 172 0C
schmilzt. Sie ist sehr gut löslich in Alkoholen und löslich in Aceton, Chloroform und Äthylacetat. Sie ist unlöslich in
Wasser, Kohlenwasserstoffen und Äther.
Die elektrometrische Titration von A-201A in 67-prozentigem
Dimethylformamid zeigt einen Anfangs-pH-Wert von 7,8 und ergibt keine titrierbaren Gruppen in dem pH-Bereich von 3,5
bis 13,5.
Die Mikroanalyse ergibt folgende ungefähre Elementarzusammensetzung
von A-201A: C 55,20; H 6,72; N 10,45; 0 28,05; und das Molekulargewicht beträgt aufgrund des Massenspektrums
etwa 693.
Das Infrarotspektrum von A-201A als kristalline Verbindung in Chloroformlösung ist in Figur 1 der beigefügten Zeichnungen
dargestellt. Es werden folgende unterscheidbare Banden im Infrarotabsorptionsspektrum in dem Bereich von 2,0 bis
15,0 Mikron beobachtet: 2,96 (breit), 3,45, 3,53, 5,89, 6,06, 6,26, 6,33, 6,40, 6,67, 6,92, 7,06, 7,15, 7,28, 7,46,
7,60, 7,76, 7,92, 8,10, 8,30, 8,60, 8,87, 9,06, 9,14, 9,32, 9,54, 9,65, 10,12, 10,23, 10,59, 11,01, 11,30, 11,60 und
12,00 Mikron.
209828/1003
Das Ultraviolett-AbsorptionsSpektrum von Ά-201Α in einer
Lösung in 95-prozentigem wässrigem Äthanol zeigt ein Absorptionsmaximum
bei etwa 208 nm mit einem Extinktions-
1%
koeffizienten von E* = 535 und ein Absorptionsmaximum bei etwa 275 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von 4L -490·
koeffizienten von E* = 535 und ein Absorptionsmaximum bei etwa 275 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von 4L -490·
Ein Pulverröntgenbeugungsdiagramm von kristallinem A-201A unter Verwendung von vanadiumgefilterter Chromstrahlung
und einem Wellenlängenwert von 2,2896 8 zur Berechnung der Netzebenenabstände ergibt folgende Werte:
I/I.
14,0 0,20
9,5 0,05
6.7 1,00 5,0 0,50 4,5 0,05 4,2 0,10
3.8 0,05 3,5 0,10
Das Verhalten von kristallinem A-201A in papierchromatographischen
Untersuchungen zeigen die nachstehend angegebenen Rf-Werte. Die Rf-Werte wurden in den angegebenen
Losungsmittelsystemen erhalten, wobei in jedem Fall Whatman-Papier
Nr. 1 verwendet wurde. Der Ort des Äntibioticums auf dem Chromatogramm wurde durch Bioautographie unter Verwendung
von Sarcina lutea als Testorganismus bestimmt.
209828/1003
| - 4 - | Rf-Werta) | 2164564 |
| Lösungsmittelsystem | 0,87 | |
| 1 | 0,89 | |
| 2 | 0,88 | |
| 3 | 0,44 | |
| 4 | 0,47 | |
| 5 | 0,48 | |
| 6 | 0,70 | |
| 7 | 0,87 | |
| 8 | 0,88 | |
| 9 | 0,13 | |
| 10 · | 0,83 | |
| 11 | ||
a)Der Rf-Wert ist als das Verhältnis der Strecke, die
das Antibioticum vom Ursprung aus gewandert ist, zu der Strecke, die die Lösungsmittelfront von der Ursprungsstelle
aus zurückgelegt hat, definiert.
Erläuterung der Lösungsmittelsysteme:
1. Mit Wasser gesättigtes Butanol
2. Mit Wasser gesättigtes Butanol plus 2 % para-Toluolsulfonsäure
3. Mit Wasser gesättigtes Butanol plus 2 % para-Toluol· sulfonsäure plus 2 % Piperidin
4. Mit Wasser gesättigtes Methylisobutylketon
5. Mit Wasser gesättigtes Methylisobutylketon plus 2 % para-Toluolsulfonsäure
6. Mit Wasser gesättigtes Methylisobutylketon plus 2 % Piperidin
209828/100 3
7. Wasser/Methanol/Aceton (12:3:1); diese Lösung wird mit NH4OH auf pH 10,5 eingestellt und dann mit H3PO4
auf pH 7,5 erniedrigt
8. 80-prozentiges Äthanol mit 1,5 % NaCl; Papier wird mit Im Natriumsulfatlösung imprägniert
9. Methanol/O,In HCl (3:1)
10. Mit Wasser gesättigtes Benzol
11. Wasser/Äthanol/Essigsäure (70:24:6)
Dünnschichtchromatogramme von kristallinem A-201A, die
auf Kieselgelplatten (Brinkman silica gel F-254 plates) entwickelt wurden, zeigten folgende R--Werte:
Lösungsmittelsystem Rf_ Nachweis
Äthylacetat/Äthanol (4:1) 0,49 (Naphthorescorcin-Re-
( agens
Äthylacetat/Äthanol (1:1) 0,83 H2SO4,UV-Licht-oder Bio-
autogramm
25 Der spezifische Drehwert von A-201A beträgt ^alpha^
-129,6 °(C = 1, Methanol). D
209828/1003
Das NMR-Spektrum von kristallinem A-2O1A zeigt die Anwesenheit
von 4 bis 5 Methylgruppen, aromatischen Bindungen und Hydroxylgruppen. Acetyliertes A-201A enthält etwa 21,17 %
Acetylgruppen, und das NMR-Spektrum zeigt die Anwesenheit von Triacetyl-A-2O1A.
Antibioticum Ä-2O1B ist ein farbloses bis hellbraunes öl
bei 25 C. Es ist in Alkoholen, Aceton, Chloroform und Äthylacetat löslich und in Wasser, Kohlenwasserstoffen und
Äther unlöslich. Aus einer Kieselgelkolonne kann es zweckmäßig mit einer Mischung von Aceton und Methanol (9:1)
eluiert werden.
Die elektrometrische Titration von A-2O1B in 67-prozentigem
Dimethylformamid zeigt einen Anfangs-pH-Wert von 7,3
und ergibt keine titrierbaren Gruppen in dem pH-Bereich von 3,5 bis 13,5.
Die Mikroanalyse liefert folgende ungefähre Elementarzusammensetzung
von A-201B in Prozent: C 65,41; H 9,03; N 5,76; 0 17,78; und das nach der osmotischen Dampfdruckmethode
ermittelte Molekulargewicht beträgt etwa 417.
Das Infrarotspektrum von A-201B in einer Chloroformlösung ist in Figur 2 der beigefügten Zeichnungen dargestellt.
Es werden folgende unterscheidbare Banden in dem Infrarotabsorptionsspektrum in dem Bereich von 2,0 bis 16,0 Mikron
beobachtet: 2,77, 3,05, 3,45, 3,51, 5,90, 6,05, 6,20, 6,60, 6,86, 6,95, 7,10, 7,30-7,40, 8,30, 8,90-9,00, 9,64, 10,10,
11,20, 12,30 und 15,23 Mikron.
Das Ultraviolett-Absorptionsspektrum von A-201B in 95-prozentigem
wässrigem Äthanol zeigt ein Absorptionmaximum bei etwa 222 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von
1%
E = 515, ein Absorptionsmaximum bei etwa 242 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von E, = 4O5, ein
E = 515, ein Absorptionsmaximum bei etwa 242 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von E, = 4O5, ein
209828/1003
Absorptionsmaximum bei etwa. 327 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von E" =150 und ein Absorptionsmaximum bei
etwa 340 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von Elcm =
Das Verhalten von A-201B in papierchromatographischen Untersuchungen zeigen die nachstehend angegebenen R^-Werte. Die
Rf-Werte werden in den angegebenen Lösungsmittelsystemen
erhalten, wobei in jedem Pall Whatman-Papier Nr. 1 verwendet
wird. Die Lage des Antibioticums auf dem Chromatogramm wird durch Bioautographie unter Verwendung von Sarcina lutea als
Testorganismus ermittelt.
1 0,65
2 0,92
a)Rf-Wert wie oben definiert
1. Mit Methylisobuty!keton gesättigtes Wasser plus 2 %
para-Toluolsulfonsäure und 1 % Piperidin
2. 80-prozentiges Äthanol mit 1,5 % NaCl-Papier wird
mit Im Natriumsulfatlösung imprägniert.
Die neuen Antibiotica nach der Erfindung zeichnen sich durch
hemmende Wirkung gegen das Wachstum von Mikroorganismen, zu
denen sowohl Bakterien als auch Pilze gehören, aus, welche für Tiere und Pflanzen pathogen sind, und sind deshalb zur
Unterdrückung des Wachstums solcher Organismen vorteilhaft.
Die minimale Hemmkonzentration der neuen Antibiotica nach der Erfindung in Mikrogramm pro Milliliter, die nach der
Rohrchenverdünnungsmethode für eine Reihe von repräsenta tiven Mikroorganismen ermittelt wurde, ist in der folgenden
Tabelle I angegeben.
209828/1003
Tabelle I Aktivität der Antiblotica A-201A und A-201B
minimale Hemmkonzentration Testorganismus (mcg/ml)
Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Erwinia amylovora . Botrytis cinerea
Trichophyton mentagrophytes Xanthomonas phaseoli Lactobacilus casei Leuconostoc citrovorum
Vibrio metschnikovii Mycobacterium avium Diplococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis Mycoplasma gallispeticum Pasteurella hemolytica Pasteurella multocida
Escherichia coli Escherichia insidioa Salmonella spp.
Candida tropicalis Ceratocystis ulmi
Fusarium oxysporium F. lycopersici
Verticillium albo-atrum N.T. 12,50 a/ N.T. = nicht getestet
209878/1003
| A-201A | A-201B |
| 1,56 | 6,25 |
| 12,50 | 25,00 |
| 12,50 | 25,00 |
| 100,00 | 0,39 |
| 25,00 | 3,12 |
| 50,00 | 50,00 |
| 12,50 | N.T.ä/ |
| 0,20 | N.T. |
| 25,00 | N.T. |
| 1,56 | N.T. |
| 6,25 | N.T. |
| '. 25,00 | N.T. |
| 0,78 | N.T. |
| 50,00 | N.T. |
| 3,12 | > 100,00 |
| 50,00 | y> 100,00 |
| 50,00 | N.T. |
| 50,00 | >100,00 |
| N.T. | 50,00 |
| N. T. | 0,39 |
| N.T. | 50,00 |
Das Antibioticum A-201A weist Aktivität in vivo gegen Infektionen von Küken durch Mycoplasma gallisepticum auf.
Wenn beispielsweise 5 mg A-201A subkutan in den Hals von Küken, die mit diesem Organismus infiziert sind, injiziert
werden, zeigt sich die Aktivität an der Abnahme der Zahl von Luftsackschäden.
Bei oraler Verabreichung in einer Dosis von 100 mg/kg ist die Mischung der Antibiotica A-201 zur Behandlung von
jungen Ratten, die mit Entamoeba histolytica infiziert sind, wirksam.
Die A-201-Antibioticummischung ist ferner bei intraperetonealer
Verabreichung von 50 mg/kg zur Bekämpfung von Infektionen bei Mäusen durch Borrelia novyi wirksam.
Bei subkutaner Injektion von Mäusen weist Antibiticum A-201A antimikrobielle Aktivität in vivo gegen infektiöse Organismen
auf; beispielsweise ergeben sich bei beispielhaften Infektionen, wenn eine Dosis angewandt wird, folgende EDgQ-Werte
(wirksame Dosis zum Schutz von 50 % der Prüftiere): Staphylococcus aureus, 6,5 mg/kg; Diplococcus pneumoniae,
100 mg/kg; Streptococcus pyogenes C2O3, 12 mg/kg. Die Toxizität von A-201A beträgt LD50 (i.p.) 400 mg/kg bei Mäusen.
Antibioticum A-201A ist ferner zum Hemmen des Wachstums von Mikroorganismen wirksam, welche Periodontium-Erkrankungen
hervorrufen. Beispielsweise v/eist eine Lösung von A-201A antimikrobielle Aktivität gegen belagbildende Organismen
auf, wie folgender Versuch zeigts Röhrchen mit Nährbrühe,
die 5 % Saccharose enthält, v/erden mit einem carlogenen Mikroorganismus beimpft. In das Medium werden Glasstäbe
getaucht, und die Röhrchen werden über Nacht bei 37 0C inkubiert,
worauf sich auf der Oberfläche des Stabs eine
209828/1003
Schicht aus Belägen (hautsächlich Zellen und Dextran) bildet. Dann werden die Stäbe in Lösungen überführt, die verschiedene
Konzentrationen an A-201A enthalten, und 5, 10 und 15 Minuten in Berührung mit dem Antibioticum belassen. Nachdem
die betreffende Zeit verstrichen ist, werden die Stäbe zweimal mit sterilem deionisiertem Wasser abgespült und in ein
nicht-beimpftes Medium eingetaucht, das 5 % Saccharose enthält, Nach Inkubation über Nacht bei 37 0C wird jedes Medium mit
Bromthymolblau versetzt. Ein Wachstum wird durch die Farbänderungen von Blau nach Gelb infolge der Bildung von Säure
durch die Organismen bei Züchtung auf einem Saccharose enthaltenden Medium nachgewiesen. In dem Test mit A-201A werden
zwei cariogene Streptococcenstamme, nämlich A-31036 und
A-31037, verwendet. Das Wachstum beider Organismen wird durch
A-201A in einer Konzentration von 1,0 % verhindert, wenn die Lösung mit dem Teststab 5 Minuten in Berührung steht.
A-201A hemmt ferner das Wachstum von cariogenen Mikroorganismen
in einem Brüheverdünnungstest. Beispielsweise werden folgende minimale Hemmkonzentrationen (MIC) an A-201A
für die angegebenen Testorganismen gefunden:
Testorganismus minimale Hemmkonzentration (MIC) mcg/ml
Streptococcus mutans, NCPC 10449 1,O
(National Collection Type
Culture, London)
Culture, London)
Streptococcus sp. (unidentifiziert), 2,0
Stamm-A31O36
Streptococcus sp. (unidentifiziert), 1,5
Streptococcus sp. (unidentifiziert), 1,5
Stamm-A31O37
fadenartige Stäbchen,(unidentifiaiert), 2,5 Stamm-A31O38
fadenartige Stäbchen,(unidentifiaiert), 2,5 Stamm-A31O38
209828/1003
Der Zusatz von A-2O1A zu einer geeigneten Zahnpaste, Gel,
Pulver oder dergleichen oder einem geeigneten Mundwasser oder anderen oralen Hygiene-Mitteln kann eine wirksame
Methode zur Hemmung des Auftretens von Zahnkaries bieten. Alternativ kann eine Lösung von A-201A in geeigneter Konzentration
mit einem geeigneten Bausch auf die Oberfläche des Zahnfleisches und der Zähne aufgetracht werden.
Antibioticum A-201A hat Sich auch zur Wachstumsförderung
von Tieren als wirksam erwiesen. Wenn A-201A dem Grundfutter von 4 Tage alten Küken in einer Menge von 5Og/t
(45.4 g./ton) zugesetzt wird, zeigt sich, daß die Gewichtszunahme und die Futterverwertung in einer Zeit von 10 Tagen
verbessert wird. Küken, die das Antibioticum A-20IA zusammen
mit dem Grundfutter erhalten, weisen eine Gewichtszunahme von 160 g auf, während diejenigen Küken, die nur das
Grundfutter erhalten, um 148 g zunehmen. Außerdem wird die
Futterverwertung so verbessert, daß diejenigen Küken, die das Antibioticum A-201A erhalten, nur 1,38 kg Futter pro
kg Gewichtszunahme benötigen, während die Tiere, die nur das Grundfutter fressen, 1,52 kg Futter je kg Gewichtszunahme
benötigen.
Die neuen Antibiotica nach der Erfindung werden durch Züchten
eines A-201 erzeugenden Stamms des Genus streptorayces
in einem geeigneten Kulturmedium unter submers-aeroben Bedingungen,
bis das Kulturmedium beträchtliche antibiotische Aktivität enthält, erzeugt. Die Antibiotica können durch
verschiedene übliche Isolierungs- und Reinigungsmethoden gewonnen werden. Das antibioticum-haltige Kulturmedium
liefert eine Antibioticum-Mischung aus den Antibiotica A-201A und A-201B. Die einzelnen Antibiotica können voneinander
und von anderen Nebenkomponenten der Fermentationsmischung getrennt werden. Antibioticum A-201A kann durch
Chromatographie und Kristallisation in kristalliner Form
209828/1003
erhalten werden. Antibioticum A-2O1B kann durch Chromatographie
als öl bei Raumtemperatur erhalten werden.
Der Actinomyceten-Stamm, der erfindungsgemäß zur Produktion
der Antibioticummischung verwendet wird, wurde als Stamm von Streptomyces capreolus Higgens identifiziert und ohne
Beschränkung der Abgabe an Dritte bei der ständigen Kulturensammlung des Northern Utilization Research and Development
Laboratory, Agriculture Research Service, United States Department
of Agriculture, Peoria, Illinois, hinterlegt und erhielt die Kennbezeichnung Nr. NRRL 3817. Der Stamm wurde
aus einer aus Venezuela stammenden Bodenprobe isoliert. Zur Isolierung des Organismus aus der Bodenprobe wurden Teile
der Probe in sterilem destilliertem Wasser suspendiert, und die Suspension wurde in Streifen auf Nähragar aufgestrichen.
Die beimpften Nähragarplatten wurden bei 25 bis 35 C inkubiert, bis Wachstum beobachtet wurde. Am Ende der Inkubationsdauer
wurden Kolonien der A-201-bildenden Organismen mit Hilfe einer sterilen Platinschlinge auf Schrägagar
übertragen. Die Schrägagarkulturen wurden dann zur Erzeugung geeigneter Mengen Inokulum für die Produktion von
A-201 inkubiert.
Die hauptsächlichen morphologischen Merkmale des erfindungsgemäß verwendeten A-201-bildenden Stamms von Streptomyces
capreolus sind: ovale bis leicht zylindrisch geformte glatte Sporen sind in langen gewellten verschlungenen Ketten
angeordnet, die im allgemeinen 10 bis 50 Sporen pro Kette aufweisen, wobei einige Ketten mehr als 50 Sporen pro Kette
haben. Die Sporen haben Abmessungen von 1,005 bis 2,01 Mikron χ 0,67 bis 1,005 Mikron. Die Sporenfarbe in Masse
reicht von Weiß bis Gelb oder Rot auf verschiedenen Medien /Shirling, E.B. und Gottlieb, Inter. Bull. Systemic Bacteriol.,
16, 313-40 (1966)/. Diese Kultur kann unter die weiße, gelbe und rote Gruppe nach Tresner und Backus,
Applied Microbiology, 11, 335-8 (1963) eingeordnet werden.
209828/1003
Zellwandanalysen nach der Methode von Becker et al., App. Microbiol., 12, 421-3 (1964) zeigen die Anwesenheit des
Mesoisomeren von Diaminopimelinsäure. Die Kultur ist
melanin-negativ. Die Kultur ist zu gutem Wachstum bei
Inkubationstemperaturen von 35 c oder mehr fähig.
Andere Arten des Genus Streptomyces, die der A-201-bildenden
ähnlich sind, sind Streptomyces alboflavus und Streptomyces canescus. Streptomyces alboflavus bildet jedoch
ein Melaninpigment und Streptomyces canescus kugelförmige Sporen.
Für die taxonomischen Untersuchungen des A-201-bildenden
Stamms von Streptomyces capreolus NRRL 3817 wurden die Methoden angewandt, die für das internationale Streptomyces-Projekt
zur Charakterisierung von Streptomyces-Arten empfohlen wurden £Shirling und Gottlieb, ibid/. Die Ergebnisse
der taxonomischen Untersuchungen sind im folgenden zusammengefaßt. Farbbezeichnungen wurden nach der
Methode von Inter Society Color Conneil, National Bureau of Standards, (ISCC. NBS) method ^KeIIy, K. L. und Judd,
D.B., U.S. Department of Commerce, Circ. 553 (1955)/ zugeordnet. Die Buchstaben in runden Klammern beziehen sich
auf Farbblöcke und die unterstrichenen Buchstaben und Zahlen auf Farbplättchen nach Tresner und Backus, ibid. Die Zahlen
in eckigen Klammern beziehen sich auf Farbblöcke nach Maerz, A., und Paul, M.R., Dictionary of Color, McGraw-Hill,
New York (1950). Die ISP-Zahlen beziehen sich auf die Medien des internationalen Streptomyces-Projekts, deren
Zusammensetzung in der Veröffentlichung von Shirling und Gottlieb, ibid, angegeben ist. Die Beobachtungen wurden
nach 14 Tage langer Inkubation bei 30 0C vorgenommen, wenn nichts anderes angegeben ist.
209828/1003
Mikroskopische Morphologie, Kulturmerkmale und Physiologie
von Streptomyces capreolus NRRL 3817
Die Sporen haben ovale bis schwach zylindrische Form und sind in langen, gewellten, verschlungenen Ketten mit 10
bis 50 Sporen pro Kette oder mehr angeordnet. Die Oberfläche der Sporen ist glatt, wie im Elektronenmikroskop
beobachtet wird. Die Abmessungen der Sporen reichen von 1,005 bis 2,0 Mikron χ 0,67 bis 1,005 Mikron.
Tomatenpaste-Hafermehl-Agar: Gutes Wachstum mit spärlichem
Luftmycel und Sporen (W) weiß b. Unterseite hellgraugelblich-braun /13B5/. Kein lösliches Pigment.
Czapek's-Agar: Gutes Wachstum mit spärlichem Luftmycel
und Sporen (R) blaß-orange-gelb 3ca, /10B3/. Unterseite
blaß-gelb /1QB2/. Kein lösliches Pigment.
Hefeextrakt-Agar: Reichliches Wachstum ohne Luftmycel oder
Sporen. Unterseite kräftig gelblich-rosa /2F9/. Kein lösliches
Pigment.
Bennett-Agar: Reichliches Wachstum ohne Luftmycel oder
Sporen. Unterseite mäßig rot /3H10/. Kein lösliches Pigment.
Nähragar; Mittleres Wachstum ohne Luftmycel oder Sporen.
Unterseite hell-gräulich-braun. Kein lösliches Pigment.
Emerson-Agar: Gutes Wachstum ohne Luftmycel oder Sporen.
Unterseite dunkel-gräulich-gelb /13K3/· Kein lösliches
Pigment.
209828/1003
Glucose-Asparagin-Agar: Gutes Wachstum ohne Luftmycel oder
Sporen. Unterseite stark gelblich-rosa. Kein lösliches
Pigment.
Calcium-Malat-Agar: Das Wachstum auf diesem Medium ist
so schlecht, daß keine Farbzuordnung durchgeführt wurde.
Tyrosin-Agar: Mittleres Wachstum mit spärlichem Luftmycel
und Sporen (Y) blaB-gelb 2db /11Cl/. Unterseite blaß-gelbgrün /10Bl/. Kein lösliches Pigment.
ISP-Medium Nr. 2: Reichliches Wachstum ohne Luftmycel oder Sporen. Unterseite gräulich-rötlich-orange /11A8/. Kein
lösliches Pigment.
ISP-Medium Nr. 3: Mittleres Wachstum mit mittlerem Luftmycel
und Sporen (R) gräulich-gelblich-rosa 5cb ^4A9/.
Kein lösliches Pigment.
ISP-Medium Nr. 4; Spärliches Wachstum mit spärlichem Luftmycel
und Sporen (W) weiß b. Unterseite blaß-gelb-grün /10Bl/. Kein lösliches Pigment.
ISP-Medium Nr. 5: Das Wachstum auf diesem Medium ist so schlecht, daß keine Farbzuordnung durchgeführt wurde.
Gelatineverflüssigung negativ
Nitratreduktion positiv Melaninpigmentbildung
(a) Pepton-Hefeextrakt-Eisen-Agar negativ
(b) Trypton-Hefeextrakt-Brühe negativ
Zwischen 26 und 30 0C wird nur vegetatives Wachstum beobachtet.
Bei 37 C zeigt sich gutes vegetatives Wachstum. Bei
209828/100 3
bis 49 0C werden gutes vegetatives Wachstum und gutes
Luftmycel beobachtet. Kein Wachstum bei 55 0C.
Reaktion der Substratfarbe auf pH-Änderung: unbeeinflußt,
In Tabelle II sind die Ergebnisse der Kohlenstoffverwertungstests zusammengefaßt, die mit dem A-201-bildenden
Stamm von Streptomyces capreolus NRRL 3817 durchgeführt wurden. Die in der Tabelle verwendeten Symbole haben folgende
Bedeutung:
+ " = Verwertung positiv
f (+) = Verwertung wahrscheinlich
(-) = Verwertung fraglich = keine Verwertung
Kohlenstoffquelle Response
L-Arabinose (-)
Cellobiose +
i-Inosit (-)
D(+)-Xylose + D-Mannit
E(-)-Fructose (-) D(+)-Raffinose
Saccharose (-)
L(+)-Rhamnose -
Dextrose + Kontrolle (kein Kohlenstoff)
209828/1003
Wie erwähnt, kann Streptomyces capreolus, Stamm NRRL 3817 zur Produktion der Antibiotica A-201A und A-201B in einem
Kulturmedium gezüchtet werden. Als Kulturmedium kann eines von vielen verschiedenen Medien verwendet werden. Zur Erzielung
wirtschaftlicher Produktion, maximaler Ausbeute
und leichter Isolierung werden jedoch bestimmmte Medien
bevorzugt. Im allgemeinen bietet ein Mehrkomponentenmedium, in dem verschiedene Quellen für Kohlenhydrat und Stickstoff zur Verfügung stehen, das beste Wuchsmedium. Kohlenhydrat stammt aus Quellen wie Dextrinen, Melasse, Glucose, Glycerin und dergleichen. Gute Stickstoffquellen sind Aminosäuremischungen, Peptone und dergleichen. Sojabohnenmehl liefert sowohl Kohlenhydrat als auch Stickstoff.
und leichter Isolierung werden jedoch bestimmmte Medien
bevorzugt. Im allgemeinen bietet ein Mehrkomponentenmedium, in dem verschiedene Quellen für Kohlenhydrat und Stickstoff zur Verfügung stehen, das beste Wuchsmedium. Kohlenhydrat stammt aus Quellen wie Dextrinen, Melasse, Glucose, Glycerin und dergleichen. Gute Stickstoffquellen sind Aminosäuremischungen, Peptone und dergleichen. Sojabohnenmehl liefert sowohl Kohlenhydrat als auch Stickstoff.
In den Kulturmedien sind anorganische Nährsalze enthalten, welche die üblichen Salze umfassen, die Natrium-, Kalium-,
Ammonium-, Calcium-, Phosphat-, Sulfat-, Chlorid-, Bromid-, Nitrat- und Carbonationen und ähnliche Ionen liefern. Der
Zusatz von Magnesium- und Eisensalzen, vorzugsweise als
Sulfate, hat eine besonders günstige Wirkung auf die
Produktion der A-201-Antibioticum-Mischung. Wie es für
das Wachstum und die Entwicklung anderer Mikroorganismen erforderlich ist, sollen dem Kulturmedium für die
Züchtung des erfindungsgemäßen Mikroorganismus ebenso
wesentliche Spurenelemente zugesetzt werden. Solche
Spurenelemente werden gewöhnlich als zufällige Verunreinigungen bei der Zugabe der anderen Bestandteile
des Kulturmediums eingeführt.
Sulfate, hat eine besonders günstige Wirkung auf die
Produktion der A-201-Antibioticum-Mischung. Wie es für
das Wachstum und die Entwicklung anderer Mikroorganismen erforderlich ist, sollen dem Kulturmedium für die
Züchtung des erfindungsgemäßen Mikroorganismus ebenso
wesentliche Spurenelemente zugesetzt werden. Solche
Spurenelemente werden gewöhnlich als zufällige Verunreinigungen bei der Zugabe der anderen Bestandteile
des Kulturmediums eingeführt.
209828/1003
Der zur Produktion von A-201A und A-201B verwendete Mikroorganismus ist in einem weiten pH-Bereich
wachstumsfähig. Beispielsweise kann der pH-Wert der verschiedenen Medien, die zur Züchtung des Organismus
verwendet werden können, von pH 6,2 bis pH 7,2 reichen. Wie es bei den meisten Streptomyceten der
Fall ist, wird das Medium während der Wachstumsperiode allmählich alkalischer und kann einen pH-Wert von
etwa 6,5 bis 8,0 erreichen. Zur Zeit des Aberntens am Ende der Wachstumsperiode beträgt der pH-Wert jedoch
gewöhnlich etwa 6,8 bis 7,2.
ψ Vorzugsweise wird eine submers-aerobe Fermentation in
großen tiefen Tanks für die Produktion großer Mengen der A-201-Antibioticummischung angewandt. Kleine Mengen
der Antibiotica können mit Schüttelkolbenkulturen erzeugt werden. Bei der Produktion dieser Antibioticummischung
wird die Verwendung eines vegetativen Inoculums bevorzugt, da bei Verwendung der Sporenform des Organismus
eine zeitliche Verzögerung bei der Inoculation von großen Tanks auftritt. Das vegetative Inoculum wird dann
in den größeren Tank überführt. Das Medium, das zur Züchtung des vegetativen Inoculums verwendet wird, kann
das gleiche Medium sein, wie es für große Fermentationen verwendet wird. Es können aber auch andere Medien verwendet
werden.
Der A-201 bildende Mikroorganismus kann bei Temperaturen
zwischen 30 und 50 0C gezüchtet werden. Die höchsten Ausbeuten
der Antibiotica werden offenbar bei einer Temperatur zwischen 35 0C und 40 0C produziert.
Die Bildung antibiotischer Aktivität während der Fermentation kann durch Prüfung der Fermentationsbrühe
auf antiobiotische Aktivität gegen Mikroorganismen,
209828/100 3
die bekanntermaßen gegen das Antibioticum empfindlich
sind, verfolgt werden. Ein solcher Testorganismus, der
für die erfindungsgemäßen Zwecke vorteilhaft ist, ist Bacillus subtilis. Der Biotest kann nach der Papierscheibenmethode
oder mit Agarplatten durchgeführt werden.
Um ein wirksameres Wachstum des Organismus und eine vermehrte Antibioticumbildung zu erreichen, wird sterile
Luft durch das Kulturmedium geleitet. Das Luftvolumen, das pro Minute durch das Kulturmedium gepumpt wird,
beträgt gewöhnlich wenigstens 10,0 % des Volumens des Kulturmediums. Im allgemeinen ist das Wachstum um so
wirksamer und die Antibioticumproduktion um so höher, je größer das Luftvolumen ist, das durch das Kulturmedium
gepreßt wird, bis hinauf zu der Menge, die zu einer wallenden Bewegung führt. Gewöhnlich wird die
maximale Bildung von antibiotischer Aktivität in etwa 72 bis 120 Stunden erreicht.
Die A-201-Antibiotica können durch Filtration, Extraktion und Adsorption von anderen Substanzen, die vorhanden sein können,
abgetrennt werden. Die Flüssigkeit, welche die antibiotische Aktivität enthält, wird aus dem Wachstumsmedium
durch Filtration abgetrennt. Das feste Mycel wird verworfen. Dabei wird gewöhnlich eine übliche Filterhilfe
verwendet. Die Antibiotica A-201A und A-201B werden aus dem Filtrat in ein übliches, damit nicht mischbares
Lösungsmittel extrahiert. Der Überführung der Antibioticummischung in das Lösungsmittel geht eine
Einstellung des pH-Werts des Filtrats auf etwa 8,5 mit 5 η Natriumhydroxidlösung voraus. Nach dem Extrahieren
wird die rohe A-201-Antibioticuiranischung durch
Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum gewonnen. Dabei hinterbleibt ein trockener Rückstand, der in Methanol
209828/1003
gelöst wird. Die Auflösung in Methanol ist unvollständig und das ungelöste Material wird abfiltriert und verworfen.
Die verbleibende Methanollösung wird im Vakuum zur Trockne eingeengt und der so erhaltene getrocknete Rückstand
wird in Chloroform gelöst. Diese Lösung wird zu 5 Volumenteilen Petroläther gegeben, wodurch sich ein
Niederschlag bildet, der die antibiotische Aktivität enthält. Die ausgefällte rohe Mischung aus Antibioticum
A-201A und A-201B wird abfiltriert und im Vakuum getrocknet .
Aus der Mischung von Antibioticum A-201A und A-201B
* können die einzelnen Substanzen abgetrennt und isoliert
werden. Die Antibioticummischung wird in 10 Volumenteilen Chloroform gelöst und an einer Kolonne mit Kieselgelfüllung
(Grace 62, Davison Chemical Company) chromatographiert und dadurch in die Antibiotica A-201A
und A-201B in praktisch reiner Form getrennt.Alternativ kann
die Antibioticummischung an einer Kolonne mit einer chromatographischen Füllung wie aktiviertem Aluminiumoxid,
Aktivkohle und dergleichen zur Gewinnung der getrennten einzelnen Antibiotica in praktisch reiner Form
chromatographiert werden. Antibioticum A-201A, wie es bei der Chromatographie erhalten wird, wird durch Umkristallisieren
aus einem geeigneten Lösungsmittel weiter gereinigt. Antibioticum A-201B, wie es beim
Chromatographieren erhalten wird, ist eine Flüssigkeit bei Raumtemperatur.
Das chromatographische Verfahren zur Trennung der Antibioticummischung
in ihre einzelnen Komponenten wird im folgenden ausführlicher beschrieben.
209828/100 3
Die rohe Antibioticummischung, die aus der Petroläther-Chloroform-Verteilung
als Niederschlag erhalten wird, wird im Vakuum zur Trockne gebracht, in Aceton gelöst und
oben auf eine Kolonne mit Kieselgel (Grace 62; Davison Chemical Co.) aufgegeben. Die Kolonne wird durch Aufschlämmen
des Kieselgels in einer 1 : 1-Lösung von Chloroform/Aceton und Absinkenlassen des Kieselgels bei ablaufendem
Träger gefüllt. Nachdem sich die Füllung gesetzt hat, wird die Kolonne mit drei Volumenteilen der 1:1-Chloroform-Aceton-Lösung
gewaschen. Nach Aufgabe der Chloroformlösung der Antibioticummischung auf die Kolonne
wird die Kolonne erneut mit 1 Volumenteil der 1 : l-Chloroform-Aceton-Lösung gewaschen und das Antibioticum
A-201A wird mit Aceton eluiert. Das Eluat wird aus der Kolonne in Anteilen abgenommen und auf antibiotische
Aktivität geprüft. Die Fraktionen, die antibiotische Aktivität enthalten, werden vereinigt und im Vakuum zur
Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in warmem Aceton
aufgenommen, die Lösung wird filtriert und das Filtrat wird 8 Stunden auf -20 C abgekühlt. Der Niederschlag,
der sich in der kalten Acetonlösung bildet, besteht aus Antibioticum A-201A. Die Kristalle werden abfiltriert und
im Vakuum getrocknet. Die Kieselgelkolonne, aus der die gesamte Aktivität an Antibioticum A-201A durch Eluieren mit
Aceton entfernt ist, wird mit einer 9 : 1 Aceton-Methanol-Lösung eluiert. Das Eluat wird in Anteilen aufgefangen
und auf antibiotische Aktivität getestet. Die Fraktionen, die antibiotische Aktivität zeigen, werden vereinigt und
zur Trockne eingedampft. Der Rückstand ist eine Flüssigkeit, die mit Aceton gewaschen und erneut zur Trockne
eingedampft wird. Die lösungsmittelfreie Flüssigkeit besteht aus Antibioticum A-201B, einem farblosen bis hellbraunen
öl.
209828/1003
Wie bereits erwähnt wurde, ist die A-201-Antibioticum-Mischung
gegen PPLO-Organisitien und verschiedene Arten von Pasteurella, Salmonella, Straptococci, Staphylococci
und dergleichen wirksam und zeigt hemmende Wirkung gegen verschiedene pflanzenpathogene Mikroorganismen. Daher
kann das gereinigte Antibioticum A-201A in jedem geeigneten Mittel verwendet werden, das gewöhnlich zur Behandlung
von infizierten Tieren oder Pflanzen Anwendung findet. Beispielsweise kann Antibioticum A-201A als
Lösung Schweinen, die mit Pasteurella-Arten infiziert
fe sind, injiziert oder zur Bekämpfung der Infektion dem
Futter oder Trinkwasser der Tiere zugesetzt werden. Wie oben gezeigt wurde, hat Antibioticum A-201B antibakterielle
Aktivität und kann zur Behandlung und Bekämpfung von solchen pathogenen Organismen wie Erwinia amylovora
(Erreger des Feuerbrands bei Birnen) durch Zusatz von A-201B zu üblichen BlattwerksprühmitteIn verwendet
werden, die gewöhnlich zur Behandlung und Bekämpfung des Bakteriums auf Birnenbäume aufgetragen werden. Ausserdem
hat A-2O1B antifungale Aktivität und kann zur Bekämpfung von Pilzen, zum Beispiel Botrytis cinerea, eines Erregers,
der verschiedene Zier- und Nutzpflanzen infiziert, verwendet werden.
Durch die folgenden Beispiele wird die Erfindung näher erläutert.
Beispiel 1 Schüttelkolbenfermentation von Antibioticum A-201
Eine Nähragar-Schrägkultur mit folgender Zusammensetzung wird mit Sporen von Streptomyces capreolus NRRL 3817
beimpft.
209828/1003
Glucose 5 g
Hefeextrakt IO g
Agar 20 g
destill. Wasser 1 1
Die Schrägkulturen werden mit den Sporen von NRRL 3817 beimpft und sechs Tage bei 30 0C inkubiert.
Die reifen Schrägkulturen werden dann mit sterilem destilliertem Wasser bedeckt und zur Ablösung der Sporen
mit einer sterilen Schlinge abgeschabt. Die erhaltene Sporensuspension wird dann zur Erzielung einer gleichmäßigen
Verteilung intensiv durchgemischt und 1 ml der Suspension wird zum Beimpfen von 100 ml eines vegetativen
Wuchsmediums mit folgender Zusammensetzung verwendet.
| Bestandteil | Menge |
| Dextrose | 15 g |
| Soj abohnenmehl | 15 g |
| Maisquellwasserfeststoffe | 5 g |
| CaCO3 | 2 g |
| NaCl | 5 g |
| Leitungswasser | 1 1 |
209828/100 3
Das vegetative Wuchsmedium wird vor dem Beimpfen 30 Minuten im Autoklaven bei 120 0C sterilisiert.
Das beimpfte vegetative Medium wird 48 Stunden bei 30 0C unter ständigem Schütteln auf einer Rotationsschuttelvorrichtung,
die mit 250 UpM betrieben wird, wachsen gelassen.
Anteile von 100 ml des Produktionsmediums mit der gleichen Zusammensetzung, wie sie oben für das vegetative Inoculum
angegeben wurde, werden in 500 ml Erlenmeyer-Kolben gegeben und 30 Minuten bei 120 0C sterilisiert. Nach
Abkühlen werden die Kolben mit Anteilen von 5 ml des inkubierten vegetativen Med
schrieben erhalten wurde.
schrieben erhalten wurde.
gegeben und 30 Minuten bei 120 0C sterilisiert. Nach
kubierten vegetativen Mediums beimpft, das wie vorher be-
Die Produktionskultur wird 72 Stunden bei 30 0C auf
einer Rotationsschuttelvorrichtung, die mit 250 Upm betrieben wird, geschüttelt. Der pH-Wert des Mediums vor
dem Beimpfen beträgt etwa 7,0. Während der Fermentationsdauer steigt der pH-Wert allmählich an und beträgt beim
Abernten etwa 7,5. Die antibiotische Aktivität wird aus der Fermentationsbrühe nach allgemein bekannten Methoden
extrahiert.
B e i s ρ ie I 2
A. 946 1 (250 gallon) Tankfermentation von A-201-Antibiotica
Eine Nähragar-Schrägkultur mit der nachstehend angegebenen Zusammensetzung wird mit Sporen von Streptomyces capreolus
NRRL 3817 beimpft:
209828/100 3
| Glucose | ad | 5 | g |
| Hefeextrakt | 10 | g | |
| Agar | 20 | g | |
| destill. Wasser | 1 | 1 | |
Die beimpfte Schrägkultur wird etwa 5 Tage bei etwa 30 0C inkubiert. Dann wird eine kleine Menge steriles
destilliertes Wasser zugesetzt und die Agaroberflächw wird zur Ablösung der Organismen und Gewinnung einer
wässrigen Suspension vorsichtig mit einer sterilen Platindrahtschlinge abgeschabt.
1/2 ml der so erhaltenen Suspension wird zum Beimpfen von 50 ml eines sterilen vegetativen Wuchsmediums mit
folgender Zusammensetzung verwendet:
Bestandteil Menge
| Dextrose | 15 g |
| Bactopeton | 10 g |
| Glycerin | 10 g |
| Amber ALB -J | 10 g |
| Blackstrap(dunkler | |
| Likör)-Melasse | 5 g |
| Nadrisol -/ | 10 g |
destill. Wasser ad 11 I/
Amber ALB ist eine Handelsbezeichnung für ein Milch-Albumin-Produkt
der Firma Amber Laboratories, Juneau, Wisconsin 55039.
—'Nadrisol ist eine Handelsbezeichnung für ein Maisbrennerprodukt
aus getrockneten löslichen Stoffen (Corn Distiller's dried solubles) der Firma National Distillers Products
Company, New York. 209828/1003
Der pH-Wert dieses Wuchsmediums wird vor dem Sterilisieren
mit 5 η Natriumhydroxid auf 7,0 bis 7,2 eingestellt. Nach dem Sterilisieren beträgt der pH-Wert des Mediums 6,5 bis
6,6. Das beimpfte vegetative Wuchsmedium wird 72 Stunden bei etwa 30 0C unter ständiger Durchmischung auf einer
Rotationschütte!vorrichtung, die mit 250 UpM betrieben
wird, wachsen gelassen.
Mit einem Anteil von 20 ml des so erzeugten vegetativen Inoculums werden als zweite Stufe 400 ml eines vegetativen
Wuchsmediums mit der gleichen Zusammensetzung wie oben angegeben beimpft. Dieses zweite Inoculum wird etwa
48 Stunden bei 30 C unter konstanter Durchmischung auf einer Rotationsschüttelvorrichtung, die mit 250 UpM betrieben
wird, wachsen gelassen.
42 1 eines Saatmediums mit der gleichen Zusammensetzung, wie sie oben für das vegetative Wuchsmedium der ersten
Stufe angegeben wurde, mit einem Zusatz von 0,2 g eines Entschäumungsmittels pro 1 Medium werden nach 30 Minuten
langem Sterilisieren bei 120 C in einen Fermentationstank gegeben. Das Saatmedium wird mit etwa 400 ml des
vegetativen Inoculums der zweiten Stufe versetzt. Die Fermentation des Saatwuchsmediums wird etwa 24 Stunden bei
etwa 30 0C unter Rühren mit einem Rührer mit 135 üpm und
einer Belüftungsgeschwindigkeit von 0,0184 m /Minute (0,65 cubic feet/minute) durchgeführt. Nach etwa 24 Stunden
langer Fermentation werden etwa 8,0 1 der Saattankkultur zum Beimpfen von 946 1 (250 gallons) eines sterilen Produktionsmediums
mit folgender Zusammensetzung verwendet:
209828/1003
| - 27 - | Bestandteil | 2164564 | % (Gew./Vol.) |
| Entschäumer | 0,02 | ||
| Dextrose | 5,00 | ||
| Soj abohnenschrot | 1,50 | ||
| Blackstrap-Melasse | 0,30 | ||
| Calciumcarbonat | 0,25 | ||
| destill. Wasser | ad 100,0 |
Die Fermentation wird bei einer Temperatur von etwa 30 °C mit einer Rührgeschwindigkeit von etwa 250 Upm
und einer Belüftungsgeschwindigkeit von 0,396 m /Minute (14 cubic feet/minute) etwa 48 Stunden lang durchgeführt.
Zu diesem Zeitpunkt wird eine sterile Lösung von 472 kg Dextrose in 42 1 Wasser zugesetzt. Die Fermentation
wird etwa 48 weitere Stunden fortgesetzt. Dann wird die Fermentation beendet und mit dem Abernten begonnen.
B. Isolierung der Antibioticummischung
900 1 Fermentationsbrühe, die wie unter A beschrieben erhalten wurde, werden unter Zusatz von 27 kg einer
üblichen Filterhilfe (Hyflo Super-Cel) filtriert und
das Filtrat wird mit 5 η Natriumhydroxidlösung auf pH 8,5 eingestellt. Das alkalische Filtrat wird zweimal mit
0,5 Volumenteilen Chloroform extrahiert. Die Chloroformextrakte werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft.
Der erhaltene Rückstand wird in 2 1 Methanol gelöst und die unlöslichen Teilchen werden abfiltriert
und verworfen. Das Methanolfiltrat wird im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wird in
470 ml Chloroform gelöst und zu 10 1 Petroläther gegeben. Dabei bildet sich ein Niederschlag. Der Niederschlag
209828/1003
wird abfiltriert und im Vakuum getrocknet, wodurch 82,6 g rohe Antibioticum A-201-Mischung erhalten werden.
C. Auftrennung der A-201 Antibioticum-Mischung
63 g der rohen Antibioticum A-201-Mischung, die wie unter B beschrieben erhalten wurde, werden in 500 ml Chloroform
gelöst. Eine chromatographische Kolonne mit den Abmessungn 7 cm χ 60 cm wird mit Kieselgel (Grace 62, Davison Chemical
Co.) als Aufschlämmung in einer 1 : 1-Mischung von Chloroform und Aceton gefüllt. Der Träger wird abgelassen,
wodurch sich das Kieselgel absetzt. Die Chloroformlösung der rohen A-201-Antibioticummischung wird oben auf die
Kolonne aufgegeben und die Antibxoticumlosung wird durch die Kieselgelfüllung strömen gelassen. Nachdem 500 ml .
Chloroform aus der Kolonne abgelaufen sind, wird die Kieselgelfüllung mit 10 1 einer 1 : 1-Chloroform-Aceton-Mischung
gewaschen. Der Abfluß und die Waschlösung werden verworfen.
Dann wird Aceton durch die Kolonne geleitet und das Filtrat wird auf antibiotische Aktivität geprüft. Die
Fraktionen, die antibiotische Aktivität enthalten, werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingeengt. Der so
erhaltene Rückstand wird mit etwa 500 ml Aceton versetzt. Die Lösung wird erwärmt und dann über Nacht bei -20 °C
stehengelassen, um das Antibioticum A-201A zu kristallisieren, Die Kristalle werden abfiltriert und im Vakuum getrocknet,
wodurch 13,3 g Antibioticum A-201A mit einem Schmelzpunkt von 170 bis 172 °C erhalten werden.
Nach dem Eluieren des Antibioticums A-201A wird eine
Mischung aus Aceton und Methanol (9:1) durch die Kolonne
209828/100 3
geleitet und in Fraktionen abgelassen, die auf antibiotische Aktivität geprüft werden. Alle Eluatfraktionen,
die antibiotische Aktivität aufweisen, werden vereinigt und im Vakuum zur Trockne eingedampft, wodurch
etwa 5 g Antibioticum A 201B als schwachgefärbtes weißes bis hellbraunes Öl bei 25 0C erhalten werden.
209828/100 3
Claims (4)
1. Antibioticum A-201A, eine weiße kristalline Verbindung, die in Alkoholen, Aceton, Chloroform und
Äthylacetat löslich und in Wasser, Kohlenwasserstoffen und Äther unlöslich ist, bei etwa 170 bis 172 0C
schmilzt, eine ungefähre Zusammensetzung aus 55r2O %
Kohlenstoff, 6,72 % Wasserstoff, 10,45 % Stickstoff und 28,05 % Sauerstoff hat, ein massenspektroskopisch
bestimmtes Molekulargewicht von 693 aufweist, ein Ultraviolettabsorptionsmaximum
bei etwa 208 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von E1° = 535 und ein Absorptionsmaximum bei etwa 275 nm mit einem Extinktionskoeffizienten
1%
von E1 = 490 aufweist und bei Auflösung in Chloroform
folgende unterscheidbare Banden im Infrarotabsorptionsspektrum zeigt: 2,96 (breit), 3,45, 3,53, 5,89, 6,06,
6,26, 6,33, 6,40, 6,67, 6,92, 7,06, 7,15, 7,28, 7,46, 7,60, 7,76, 7,92, 8,10, 8,30, 8,60, 8,87, 9,06, 9,14,
9,32, 9,54, 9,65, 10,12, 10,23, 10,59, 11,01, 11,30, 11,60 und 12,00 Mikron.
2. Antibioticum A-201B, ein öl bei 25 0C, das
in Alkoholen, Aceton, Chloroform und Äthylacetat löslich und in Wasser,. Kohlenwasserstoffen, und Äther
unlöslich ist, ein ungefähre Zusammensetzung aus etwa 65,41 % Kohlenstoff, 9,03 % Wasserstoff, 5,76 % Stickstoff
und 17,78 % Sauerstoff hat, ein nach der osmotischen Dampfdruckmethode ermitteltes Molekulargewicht von 417 aufweist,
ein ültraviolettabsorptionsmaximum bei etwa 222 nm mit einem Extinktionskoeffizienten von
209828/100 3
ΕΓ = 515 , ein Absorptionsraaximum bei etwa 242 nra
lern -^
mit einem Extinktionskoeffizienten von Elcm = 405, ein
Absorptionsmaximum bei etwa 327 nm mit einem Extinktions-
ig.
koeffizienten von E-V= 150 und ein Absorptionsmaximum bei etwa 340 nm mit einem Extinktionskoeffizienten
von E, = 225 hat und in Chloroform gelöst folgende unter-1
cm
scheidbare Banden im Infrarotabsorptionsspektrum zeigt; 2,77, 3,05, 3,45, 3,51, 5,90, 6,05, 6,20, 6,60, 6,86,
6,95, 7,10, 7,30, 7,40, 8,30, 8,90, 9,00, 9,64, 10,10,
11,20, 12,30 und 15,23 Mikron,
3. Verfahren zur Erzeugung der Antibiotica nach
Anspruch 1 und Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man den Mikroorganismus Streptomyces capreolus, Stamm
NRRL 3817, in einem flüssigen Kulturmedium, das assimilierbare Quellen für Kohlenstoff, Stickstoff und
anorganische Salze enthält, unter submers-aeroben Bedingungen
züchtet, bis das Kulturmedium eine beträchtliche Menge an antibiotischer Aktivität enthält.
4. Verfahren zur Isolierung der Antibiotica nach Anspruch 1 und nach Anspruch 2 als getrennte Substanzen,
dadurch gekennzeichnet, daß man die nach dem Verfahren von Anspruch 3 erzeugte antibiotische Aktivität mit einem
nichtmischbaren Lösungsmittel extrahiert, das Lösungsmittel verdampft, die antibiotische Aktivität in einem
Lösungsmittel löst, die in der Lösung enthaltene antibiotische Aktivität an einem Chromatograph!sehen Adsorbens
adsorbiert und jedes Antibioticum aus dem chromatographischen Adsorbens fraktioniert eluiert.
209828/100^
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10137770A | 1970-12-24 | 1970-12-24 | |
| US00188058A US3843784A (en) | 1970-12-24 | 1971-10-12 | Antibiotics a201a and a201b and process for the production thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2164564A1 true DE2164564A1 (de) | 1972-07-06 |
| DE2164564C2 DE2164564C2 (de) | 1984-04-05 |
Family
ID=26798175
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2164564A Expired DE2164564C2 (de) | 1970-12-24 | 1971-12-24 | Antibiotikum A-201A und Verfahren zu seiner Herstellung |
| DE19712167325 Expired DE2167325C2 (de) | 1970-12-24 | 1971-12-24 | Antibiotikum A-201B und Verfahren zu seiner Herstellung |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19712167325 Expired DE2167325C2 (de) | 1970-12-24 | 1971-12-24 | Antibiotikum A-201B und Verfahren zu seiner Herstellung |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3843784A (de) |
| JP (1) | JPS5530839B1 (de) |
| AU (1) | AU456679B2 (de) |
| BE (1) | BE777246A (de) |
| CA (1) | CA985192A (de) |
| CH (1) | CH547351A (de) |
| CY (1) | CY869A (de) |
| DE (2) | DE2164564C2 (de) |
| DK (1) | DK129465B (de) |
| FR (1) | FR2119086B1 (de) |
| GB (1) | GB1315430A (de) |
| HK (1) | HK54676A (de) |
| IE (1) | IE36770B1 (de) |
| IL (1) | IL38479A (de) |
| MY (1) | MY7600252A (de) |
| NL (1) | NL174959C (de) |
| SE (1) | SE375545B (de) |
| YU (1) | YU35620B (de) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50135292A (de) * | 1974-04-17 | 1975-10-27 | ||
| US4173629A (en) * | 1975-07-08 | 1979-11-06 | Sandoz Ltd. | Antibiotic S 31794/F-1 |
| JPS5373501A (en) * | 1976-12-11 | 1978-06-30 | Kitasato Inst | Novel antibiotics amm2282 and process for preparing same |
| US4143141A (en) * | 1977-09-14 | 1979-03-06 | Eli Lilly And Company | Method of treating acne with antibiotic a201a |
| US4296101A (en) * | 1978-02-13 | 1981-10-20 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antibiotic kristenin |
| US4205164A (en) * | 1979-03-02 | 1980-05-27 | Eli Lilly And Company | Antibiotic A201C, A201D and A201E |
| CL2009000300A1 (es) * | 2008-02-15 | 2010-09-10 | Lanxess Distrib Gmbh | Formulacion que comprende sales de calcio y sales de formiatos mas un acido organico con un pka entre 2y 6; usos y metodos que emplean esta formulacion para combatir el tizon provocado en plantas por la bacteria erwinia amylovora. |
| DE102009032895B4 (de) | 2009-07-10 | 2016-06-23 | Chevita Tierarzneimittel-Gesellschaft M.B.H. | Zusammensetzung und Verfahren zur Prävention und Behandlung von Feuerbrand |
| DE102010008504A1 (de) | 2010-02-18 | 2011-08-18 | Lanxess Distribution GmbH, 40764 | Nanoskaliges Silber enthaltende Mittel |
| CN105061537B (zh) * | 2015-07-29 | 2018-02-02 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一类核苷类抗生素及其在制备抗菌药物中的应用 |
-
1971
- 1971-10-12 US US00188058A patent/US3843784A/en not_active Expired - Lifetime
- 1971-12-20 SE SE7116300D patent/SE375545B/xx unknown
- 1971-12-22 CA CA130,824A patent/CA985192A/en not_active Expired
- 1971-12-23 CY CY869A patent/CY869A/xx unknown
- 1971-12-23 DK DK631771AA patent/DK129465B/da unknown
- 1971-12-23 AU AU37294/71A patent/AU456679B2/en not_active Expired
- 1971-12-23 GB GB6011471A patent/GB1315430A/en not_active Expired
- 1971-12-23 IE IE1642/71A patent/IE36770B1/xx unknown
- 1971-12-23 CH CH1886071A patent/CH547351A/fr not_active IP Right Cessation
- 1971-12-24 DE DE2164564A patent/DE2164564C2/de not_active Expired
- 1971-12-24 NL NLAANVRAGE7117796,A patent/NL174959C/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-12-24 JP JP406572A patent/JPS5530839B1/ja active Pending
- 1971-12-24 YU YU3249/71A patent/YU35620B/xx unknown
- 1971-12-24 BE BE777246A patent/BE777246A/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-12-24 DE DE19712167325 patent/DE2167325C2/de not_active Expired
- 1971-12-24 FR FR7146604A patent/FR2119086B1/fr not_active Expired
- 1971-12-29 IL IL38479A patent/IL38479A/xx unknown
-
1976
- 1976-09-08 HK HK546/76*UA patent/HK54676A/xx unknown
- 1976-12-30 MY MY252/76A patent/MY7600252A/xx unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| NICHTS-ERMITTELT * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2119086B1 (de) | 1975-06-13 |
| GB1315430A (en) | 1973-05-02 |
| DK129465B (da) | 1974-10-14 |
| US3843784A (en) | 1974-10-22 |
| NL174959B (nl) | 1984-04-02 |
| IL38479A0 (en) | 1972-02-29 |
| CA985192A (en) | 1976-03-09 |
| BE777246A (fr) | 1972-06-26 |
| IE36770B1 (en) | 1977-02-16 |
| NL7117796A (de) | 1972-06-27 |
| HK54676A (en) | 1976-09-17 |
| FR2119086A1 (de) | 1972-08-04 |
| MY7600252A (en) | 1976-12-31 |
| YU35620B (en) | 1981-04-30 |
| AU3729471A (en) | 1973-06-28 |
| SE375545B (de) | 1975-04-21 |
| CH547351A (fr) | 1974-03-29 |
| IL38479A (en) | 1975-02-10 |
| DE2164564C2 (de) | 1984-04-05 |
| DE2167325C2 (de) | 1984-05-24 |
| DK129465C (de) | 1975-03-10 |
| YU324971A (en) | 1980-10-31 |
| AU456679B2 (en) | 1975-01-09 |
| NL174959C (nl) | 1984-09-03 |
| JPS5530839B1 (de) | 1980-08-13 |
| CY869A (en) | 1976-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2167325C2 (de) | Antibiotikum A-201B und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE2004686C3 (de) | Makrolid-Antibioticum SF-837 und dessen Diacetylderivat und deren pharmakologisch nichtgiftige Säureanlagerungssalze sowie Verfahren zur Herstellung des Antibioticums SF-837 | |
| DE2040141C3 (de) | Dipeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE2402956C2 (de) | Antibioticum A-287 und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| CH646712A5 (de) | Istamycine und deren herstellung. | |
| DE2209018C2 (de) | Glycopeptid-Antibioticum-A-4696-Hydrochlorid und dieses enthaltendes Tierfuttermittel | |
| DE2839668A1 (de) | Als antibiotika wirksame saframycine a, b, c, d und e und verfahren zu ihrer herstellung | |
| DE2737943C2 (de) | Antibiotisch wirksames Oligosaccharid, Verfahren zu seiner Herstellung sowie dieses enthaltende Arzneimittel | |
| DE2252937A1 (de) | Antibioticum a477 und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE2725163C2 (de) | ||
| DE2039184C3 (de) | 7-(5-Amino-5-carboxyvaleramido)-7methoxycephalosporansäure (Antibiotikum A 16884) und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE2703731A1 (de) | Antibiotica | |
| AT312167B (de) | Verfahren zur Herstellung neuer Antibiotika | |
| DE2342404C3 (de) | 3-(5,7-Dimethyl-2-hydroxy-4-oxo-6,8-decadienyI)-glutarimid sowie Verfahren zu dessen Herstellung | |
| CH633964A5 (de) | Verfahren zur herstellung von pepsin-inhibitoren. | |
| DE2830856A1 (de) | Neue antibiotisch wirksame verbindungen, verfahren zu deren herstellung und arzneimittel | |
| DE2408121A1 (de) | Platomycin a und b, verfahren zu ihrer herstellung, arzneimittel und ihre verwendung als desinfektionsmittel | |
| DE1929107C3 (de) | Antibiotika Axenomycin A und B, Verfahren zu deren Herstellung und ein die Antibiotika enthaltendes Arzneimittel | |
| DE926271C (de) | Verfahren zur Gewinnung eines neuen Antibiotikums | |
| DE934429C (de) | Verfahren zur Erzeugung und Gewinnung eines Antibiotikums | |
| DE1617451C2 (de) | Antibiotika-Komplex aus Tenebrimycin I,I', II, III, IV, V und VI und ein Verfahren zu dessen Herstellung | |
| AT216143B (de) | Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums | |
| AT220290B (de) | Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums | |
| DE1077380B (de) | Herstellung des Antibiotikums Lemacidin | |
| DE2649604C2 (de) | Neue antibiotische Substanz SF-1771-B, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OD | Request for examination | ||
| 8128 | New person/name/address of the agent |
Representative=s name: SPOTT, G., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. PUSCHMANN, H., |
|
| 8172 | Supplementary division/partition in: |
Ref country code: DE Ref document number: 2167325 Format of ref document f/p: P |
|
| Q171 | Divided out to: |
Ref country code: DE Ref document number: 2167325 |
|
| 8125 | Change of the main classification |
Ipc: C12P 1/06 |
|
| D2 | Grant after examination | ||
| AH | Division in |
Ref country code: DE Ref document number: 2167325 Format of ref document f/p: P |
|
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |