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DE2031447A1 - Verfahren zur Prüfung von Zellproben - Google Patents

Verfahren zur Prüfung von Zellproben

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DE2031447A1
DE2031447A1 DE19702031447 DE2031447A DE2031447A1 DE 2031447 A1 DE2031447 A1 DE 2031447A1 DE 19702031447 DE19702031447 DE 19702031447 DE 2031447 A DE2031447 A DE 2031447A DE 2031447 A1 DE2031447 A1 DE 2031447A1
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radioactively labeled
sample
labeled substance
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DE19702031447
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DE2031447C3 (de
DE2031447B2 (de
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N J Nodine John Hazen Wayne Pa Waite John Herbert Haddonfield (V St A) A61k
Original Assignee
Advanced Diagnostics Inc , BaIa Cynwyd, Pa (VStA)
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Publication date
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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    • C12Q1/16—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor using radioactive material
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Description

Prioritäten: vom 25. Juni 1969 in USA, Ser.-ffo. 836 439 VOtD 3. April 1970 in USA, vom 9. Juni 1970 in USA,
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Prüfung von Zellen auf Krankbeitserschelnungen. Speziell befaßt sich die Erfindung mit einer Methode zur Behandlung einer Zellprobe aus einem Körper durch Untersuchung mit einer radioaktivj6arkierten Substanz, die von ein oder mehreren vorbestimmten Zelltypen, die identifiziert werden sollen, se le let iv absorbiert wird. Die Information über das Vorhandensein oder Ulohtvorhandensein einer Krankheit wird durch Abfüblen der Badioaktlvitätsmenge der Probe bestimmt. Außerdem kann die Methode bei der Massenklassierung angewendet werden, bei der man Proben benutzt, die von mehreren Subjekten gesammelt wurden, indem man einen
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BAD ORIGINAL
vorbestimmten allgemeinen Bestrahlungsstandard anwendet, um jene Proben auszuschalten, die klar frei von Krankheit sind,
Die Technologie medizinischer Färbemittel beruht auf den kolorimetrischen Eigenschaften des Färbemittels und der Affinität bestimmter Färbemittel, sich molekular an spezielle medizinische Proben anzuhängen. Biese Erfindung umfaßt die Anfügung radioaktiver Eigenschaften an das !Färbemittel, indem man das erwünschte Färbemittel radioaktiv markiert«, welches dann ein Signal ausschickt, das durch Seintillationszähler entdeckt und für Komputerverfahren und Komputeranalyse digitalisiert werdenc kann. Die Erfindung, wie sie nachfolgend aufgezeigt ist, macht es jedoch möglich, den Verlaß auf visuelle Entdeckung durch Anfärbung auszuschalten, und da das Abfüblen auf der radioaktiven Eigenschaft des "!Färbemittels11 berufet 9 gestattet die Erfindung die Verwendung einer vollständig farblosen radioaktiv markierten Substanz, die von den zu identifizierenden Zellen selektiv absorbiert wird.
-Die Erfindung betrifft, wie sie ursprünglich konsiplert beispielsweise ein Verfahren zur Prüfung. ayt©logischer Protea in Verbindung mit den fapanioolaou-Yerfahsen aur ItartifisJermag von Krebs. Speziell befaßt sich die EriMiing Bit eimer Metb©äe zur Anfärbung einer Gewebeprobe (beispielsweise ©Ines Vagiaa-Abstriches) mit einem radioaktiv maskierte» farbstoff reren solchen Farbstoffen, öle in@lGkul@r @a Zellsubstenisen gebunden werden« Als E: und eines Vasohverfahrens ist es möglich, zwischen
BAD-ORIGINAL'
Zellen, kranken Zellen und entzündeten Zellensa unterscheiden und auf diese Weise Krebsverdacht zu identifizieren,,
In der Vergangenheit wurden Verfahren zur Anfärbung von Zellen, Bakterien, Viren, Pilzen und Gewebeproben mit Farbstoffen entwickelt, die beispielsweise von normalen Zellen abgewiesen, von Zellen, die von einer speziellen Krankheit befallen sind, wie beispielsweise von Krebs, aber absorbiert werden«, Es wurden zahlreiche Farbstoffe entwickelt, die in dieser Weise verwendet werden können, und verschiedene Farbstoffe sind als brauchbar in Verbindung mit verschiedenen Krankheiten oder Störungen bekannte . ·
Das Anfärben von Zellen in einer Gewebeprobe erwies sich als sehr genauer sichtbarer Indikator bestimmter Krankheiten oder Störungen, wie Krebs. Die Schw3a?igkeit, auf diese Weise Analysen herzustellen, ist die, daß diese Methode zeitraubend und langwierig ist und der Zytologe oder der die Prüfung ausführende Spezialist große Erfahrung besitzen muß. Somit ist das Verfahren nicht nur teuer, sondern es ist aus praktischen Gründen auch unmöglich, Prüfungen dieses Typs durchzuführen oder das Verfahren auf einer Massengrundlage zu automatisieren. Selbst für Krebs alleine, wo vielleicht 5$ 3ene-r Personen, die eine solche Prüfung benötigen, sie tatsächlich erhalten, sind nur ' · unzureichend ausgebildete Techniker für starke zusätzliche Arbeitsbelastung zu den laufenden Arbeiten verfügbar.
Die Beschränkungen des Verfahrens liegen in der Prüfung der ·
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Probe. Die langsame und mühselige visuelle Prüfung kann nicht beschleunigt werden, ohne Genauigkeit der Ergebnisse zu ver- · lieren. -Ein solcher Verlust kann jedoch nicht in Kauf genommen werden. Andererseits wurden Methoden zur Massenhandhabung und -bearbeitung von Objektträgern^ die die Probe tragen, perfektioniert, selbst wo damit komplizierte Arbeiten oder sehr
empfindliche chemische Verfahren verbunden sind® Diese Verfahren sind bekannt und können ausreichend und sorgfältig mit Hilfe
von Methoden kontrolliert werden, die automatische oder halbautomatische Anlagen verwenden,,
Die vorliegende Erfindung ist ein Ergebnis von Untersuchungen zur Ermittlung einer Methode, die histologische Information
an ihrer Quelle, d„ h. der Zelle selbst, zu digitalisieren.
Die kolorimetrischen Verfahren beschrinkten die Zellforschung auf optische Systeme, wo das Anfangssignal zu schwach war, um " einen guten Signal-Geräuschpegel zu erhalten^ was eine Automation vereita&ec, die aber ein Erfordernis für eine ■Massenuntersuchung ist» Die vorliegende Erfindung basiert auf der Erfor§chung einer Einrichtung zur Ausschaltung der Notwendigkeit visueller mikroskopischer Betrachtung aller behandelten Objektträger. Die vorliegende Erfindung liefert ein solches Mittel. Sie gestattet die automatische Prüfung von Gewebeproben durch
nichtraenschliche Sensoren, wie Strahlungsdetektoren verschiedener bekannter Typen, und erfordert nur in verhältnismäßig
wenigen Fällen eine zusätzliche Prüfung zur Bestätigung durch menschliche visuelle Analyse0
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Speziell gestattet die vorliegende Erfindung das Ersetzen des Indikatorfarbstoffes duroh eine Substanz, die radioaktiv markiert ist. Solch eine Substanz kann ein Farbstoff sein, der eine Anzeige duroh Anfärbüng ergibt, wie dies ±1 der Technik bereits erfolgt ist, oder sie kann eine Substanz sein, deren Farbe keine Bedeutung hat oder die vollständig farblos 1st.
Das Konzept der vorliegenden Erfindung wurde derart verbreitert, daß es nicht mehr auf die Krebsentdeckung oder sogar nicht mehr auf die Entdeckung abnormer Zellen in einer Gewebeprobe, die auch normale Zellen enthalten kann, beschränkt ist. In ihrem vorliegenden Konzept betrifft die vorliegende Erfindung die Entdeckung radioaktiv markierter Zellen. Diese Zellen werden mit einer radioaktiv markierten Substanz behandelt, die selektiv von fellen eines oder mehrerer vorbestimmter Zelltypen, die identifiziert werden sollen, absorbiert wird. Sie kann beispielsweise auf Kulturen krankheitserzeugender Zellen sowie auf Gewebe und Blut oder andere Körperflüssigkeitsproben angewendet werden. Unter dem Begriff "Zelle", wie er hier verwendet wird, sollen auch Bakterien, Pilze und andere Mikroorganismen sowie Viren fallen, vorausgesetzt, daß sie zur selektiven Absorption radioaktiv markierter Substanzen geeignet sind.
Die vorliegende Erfindung, wie sie oben vorgeschlagen wurde, macht auch eine neue Methode einer Massenuntersuchung oder Massenklasaierung möglich. Bei dieser Methode werden ähnliche Proben von einer Vielzahl von Subjekten gesammelt und hinsiohtlich ihrer Subjektherkunft identifiziert. Die Proben werden wie oben ausgeführt behandelt und untersucht. Danaoh werden
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unter Verwendung eines vorbestimmten allgemeinen Strahlungsstandards jene Proben ausgesondert, die klar frei von Krankheit sind, wobei nur jene oberhalb des Pegels für visuelle Untersuchung oder andere Yersuche zurückbleiben.
Zu einem besseren Verständnis der vorliegenden Erfindung wird Bezug genommen auf die Zeichnung, die ein scheraatisches Diagramm darstellt und die Stufen des Verfahima nach der vorliegenden Erfindung zeigt.
Die Herstellung von Proben durch herkömmliche Mittel 10 erfolgt durch Ärzte oder Techniker auf die gegenwärtig übliche Weise. Die Herstellung der radioaktiv markierten Substanzen 12 kann speisMle Methoden und Betriebserfahrungen zur Herstellung eines bestimmten färbstofftyps erfordern« Waschen der Probe mit der radioaktiv markierten Substans und anschließendes Spülen, 14? markiert die Probe mit radioaktivem flfeterial und gestattet, daß die abnormen Zellen die Substans absorbieren und anschließend die überschüssigen unabsorbierten Mengen weggewaschen v/erden, wie erforderlich ist. Diese Verfabrensstufen können von einem Zytologen oder anderen erfahrenen Technikern durohgeführt werden. In vielen Fällen erfolgt äies in einer Weise, die mit den gegenwärtigen hochentwickelten Anfärbetechniken verwandt ist und ähnliche VerfahrensraaSnahmen einsohliessen kann,
Wenn die Probe erst hergestellt und markiert ist,ist sie für die Prüfung fertig. Statt unter Verwendung eines Mikroskops wird ;jedooh dör Absorptionsspiegel für die radioaktiv markierte
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Substanz rait Hilfe geeigneter strahlungsabfühlender Einriohtungen angefühlt, wie beispielsweise mit Hilfe eines Strahlungsdetektors verschiedener handelsüblicher Formen geeigneter Empfindlichkeit. Das Abfühlen des Absorptionsgrades der radioaktiv markierten Substanz, 16, ist verwandt mit anderen Strahlungsmessungen, die heute ausgeführt werden, Ss kann von Technikern oder in einer geeigneten Apparatur automatisch durchgeführt werden. Das Zählergebnis des StrahlungsZählers während eines vorbestimmten Zeitraumes kann als Wert für ein automatisches Behandlungssystem, 18, verwendet werden, das diese Werte mit kritischen Werten vergleicht und eine Analyse, 20, des Vergleichs mit herkömmlichen Druckeinrichtungen, wie jenen, die mit Digitalkomputern verbunden sind, ausdruckt.
Die folgenden Beisjfcle dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung.
Beispiel 1
Negative, krebspositive und"entzündete Proben von Gebärmutterhalsabstrichen wurden unter Verwendung des Papanicolaou-Verfahrens nach herkömmlichen Methoden hergestellt«,
Die zur Anfärbung der Objektträger verwendete radioaktiv mar-
14 kierte Substanz war eine 1#ige wässrige Lösung' von C-Methy- · ienblau (Methylenblau, das aufgrund seiner Synthse 1,3MiIIicurie/Gramm enthielt).
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14 Die Gewebeproben wurden rait einem Tropfen der C-Methylenblaulösung gewaschen, und abnorme Zellen absorbierten das radioaktiv markierte Material. Die Proben wurden dann mit Wasser gespült und bei Raumtemperatur getrocknet. Dieses Waschen und Spülen erfolgte nach herkömmlichen Methoden für das Anfärben von Objektträgern.
Danach wurde die markierte Probe mit einem HTüssigkeits-Sointillationsstrahlungszähler (Modell 724) der Nuclear Chicago abgefühlt, nachdem die Objektträger zerschnitten worden waren* um Stücke einer Größe zu erhalten, die in den Zähler paßte. Eine herkömmliche Xylollösung der Standardpulver POP und POPOP wurde verwendet.
Die nach herkömmlicher Analyse erhaltenen Ergebnisse wurden mit den radioaktiv markierten Ergebnissen verglichen, wobei man fand, daß sie in genauer Über-einstimmung waren.
Die Zählungen selbst variierten nach der folgenden !Tabelle:
von bis
Zählung von Zählung von negative ^ ^c
positive uooo 2.000
entzündete -1.0.000 !50.00C
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und bei den Zählergebnissen wurde bestimmt, daß sie Krebs , durch die entdeckte Strahlungsmenge (d. h. die Scintillationszählung) aufzeigten. In all diesen Fällen war die verwendete radioaktiv markierte Substanz zur visuellen Prüfung geeignet. Unabhängig wurde eine visuelle Prüfung der Probe vorgenommen, und die Ergebnisse waren in den beiden Situationen in 1OO$iger Übereinstimmung.
Beispiel 1(a)
In einem weiteren Versuch wurden leere Objektträger sowie Objektträger, die normale Gebärmutterhalszellen, Gebärmutterbalskarzinom anzeigende Zellen und entzündete Gebärmutterhalszellen (Cervioitis) trugen, hergestellt, indem man unter herkömmlichen Methoden das Papanicolaou-Verfahren anwendete. ■
Um die Objektträger anzufärben, wurde die radioaktiv markierte Substanz C-Methylenblau (1^ige wässrige Lösung) verwendet. Die Gewebeproben wureLen mit einem Tropf en der radioaktiv markierten Substanz gewaschen, und die Zellen absorbierten das radioaktiv markierte Material in unterschiedlichen Mengen. Die Proben wurden mit Wasser gewaschen und getrooknet. Das zum Waschen verwendete Verfahren war mit Ausnahme der Verwendung des radioaktiven Methylenblaus herkömmlich. Bin Objektträger
14 ohne eine Gewebeprobe wurde mit einem Tropfen der O-Methylenblaul8sung behandelt, gespült und getrooknet, um als Blindprobe oder Kontrollprobe zu dienen.
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Sodann wurden die markierten Proben mit Hilfe eines Flussigkeits-Scintillationsstrahlungszählers (Modell 724) der Nuclear Chicago wie in Beispiel 1 abgeftihlt. Die entdeckten Zählergebnisse für die verschiedenen Objektträger sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:
Spezielles Beispielί Bereich verachie-
dener Proben
Zählwerte/Minute Zählwerte/Mi
nute
Blindprobe 20 - 10-37
normale Gebärnutterhals-
zellen		 140 8-250
Gebäroutterhalskarzinom 414 300-2.400
Oervioitis (Entzündung) 12.953 8.000-30.000
Die bei der herkömmlichen visuellen Analyse mit Hilfe eines Mikroskops erhaltenen Ergebnisse wurden mit den bei Verwendung des Strahlungszählers erhaltenen radioaktiv markierten Ergebnissen verglichen, wobei man fand, daß beide Ergebnisse vollständig übereinstimmten.
Beispiel 2
Leere Objektträger sowie Objektträger, die normale Gebär- ^i mutterhalszellen, Gebänmitterhalskarzinom zeigende-Zellen und entzündete GebärmutterhalszeIlen (Oarvioitis) trugen, wurden unter Verwendung des Papanicolaou-Verfahrens naoh herkömmlichen
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Möthoden hergestellt.
Die radioaktiv markierte Substanz, H-Hämatoxylin (durch katalytische Tritiumbehandlung markiertes Hämatoxylin,. 750.000
Mikrocur~ie/Gramm) wurde verwendet, um die Objektträger anzufärben. Die Gewebeproben und die Blindprobe wurden mit der radioaktiv markierten Lösung (2$ige Konzentration in Wasser) gewaschen, und die Zellen absorbierten das radioaktiv markierte Material in unterschiedlichen Mengen. Die Objektträger wurden mit Wasser gewaschen und.nach dem herkömmlichen Verfahren wie im Beispiel 1 getrocknet.
Danach wurden die markierten Proben -mit Hilfe eines PlUssigkeits-Scintillationsstrahlungszählers von Nuclear Chicago wie im Beispiel 1 abgefühlt. Die für die verschiedenen Objektträger ermittelten Zählergebnisse sind in der folgenden labelle zusammengestellt;
Speeielfes Beispiel Bereich verschiedener Proben
Zählwert/Minute Zählwert/Mi-■ '- - nute
Blindprobe 12 8-22
normale Gebärmutterhalszellen 60 '.·■·■ 35-105
Gebärroutterhalskarzinom 180 120-450
Oarvicitis (Entzündung) 3.460 800-12.000
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Die bei der herkömmlichen visuellen Analyse mit Hilfe eines Mikroskops erhaltenen Ergebnisse wurden mit den Ergebnissen der radioaktiven Markierung, die man mit dem Stahlu:qg?-zähler erhielt, verglichen, wobei man fand, daß die Ergebnisse vollständig übereinstimmten.
Beispiel 3
Leere Objektträger und Objektträger, die abnormale Prostatassellen von Prostatahypertroph iß und Prostata-Adenokarzinora trugen, wurden untersucht. Es wurde kein normales Prostata-Gewebe untersucht. Die Proben wurden in herkömmlicher Weise unter Verwendung von Standardpraffinblockschnitten, Paraffinblockmethoden und Paraffinentferungsmethoden hergestellt.
Die zur Anfärbung der Objektträger verwenctefce radioaktiv markierte Substanz war Η-basisches !Fuchsin (basisches Fuchsin, das durch katalytisch^ Trit-^iurabehandlung markiert worden war, 43 Millicurie/30 Milligramm, gelöst in 100 ml 95$igen Alkohols).
3 Die Lösung wurde hergestellt, indem man zn einem ml der H-basischen Fuchsinlösung 0,4 g normales basisches Fuchsin, 0,8 g Phenol, 2 ml 95$igen Alkohol und 10 ml destilliertes Wasser zusetzte. Die Gewebeproben und die Blindprobe wurden mit der radioaktiv markierten Substanz gewaschen, und die unterschiedlichen Zelltypen absorbierten die radioaktiv markierte Substanz in unterschiedlichen Mengen. Die Objektträger wurden mit Wasser gewaschen und getrocknet. Das hierfür angewendete Verfahren war herkömmlich.
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Danach wurden einige der Objektträger jedes Typs unter Verwendung einer Standard-Entfärbungslösung von 1 mm HOl (konzentrierte) undf 99 ml 95#igen Alkohols während 2 min gebleicht und anschließend mit Leitungwasser 5 min gewaschen.
Die unter Verwendung des Verfahrens des Beispiels 1 für die verschiedenen Objektträger erhaltenen Zählwerte sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt:
Blindprobe
Spezielles" Beispiel Bereich verschiede· ; ner Proben
Zählwe rte/Minut e
Prostata-Hypertrophie (gefärbt) . 39.510
Prostata-Adenokarzinom (gefärbt) 47.014
Prostata-Hypertrophie (gebleicht) 7.471
Prostata-Adenokarzi-(gebleicht) 12.514
Zählwerte/Minute
13-48
20.000-40.000 42.000-76.000 4.000-8.500
9.000-22.000
Aus den obigen Werten ist ersichtlich, daß mit dem Bleichen eine verbesserte Spanne auftrat. Wiederum wurden die durch herkömmliche visuelle Analyse mit Hilfe eines Mikroskops erhaltenen Ergebnisse mit den Ergebnissen der radioaktiven Markierung verglichen, die man unter Verwendung des Strahlungszählers erhielt, wobei man fand, daß die Ergebnisse genau übereinstimmten,
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203H47
Beispiel 4 ■ ·
Das Verfahren des Beispiels 3 wurde mit der Ausnahme wiederholt, daß nur gebleichte Proben verwendet wurden und kein nor-
3
males basisches Puchsin zu dem Η-basischen Fuchsin zugesetzt wurde. So trat keine mikroskopisch sichtbare Farbaufnahme, auf, und es war nur radioaktive Bestimmung möglich. Die Ergebnisse waren folgende:
Spezielles Beispiel Bereich verschiedener Proben
Zählwe rt e/Minute Zählwerte/Minute
Blindprobe 22 13-48
Prostata-Hvpertrophie
(gebleicht)		 14.842 13.000-15.000
Prostata-Adenokarzinom
(gebleicht)		 17.567 T5.000-18.000
Beispiel 5
Das Verfahren und Material des Beispiels 3 wurden für visuelle und radioaktive Feststellung von Malariaerreger« Staphylococcus, Pneumoooccus, Tuberkulose, Kolibakterien, Leukämie und Trypanosomiasis verwendet. Die nachfolgenden Proben 2, 3 und 9 waren infizierte Mäuseblut-und Mensohenblutproben. Die Proben 4, 5 und 7 waren Kulturen von Agar des bezeichneten Mikroorganismus, der von den kranken Patienten abgenommen worden war.
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Probe 6 war ein Standard-Paraffinschnitt einer kranken menschlichen Lunge. Probe 8 war eine Mäuseherzkultur des bezeichneten MikroorganiSTDus, der von einem kraken Patienten abgenommenworden war. Die Ergebnisse waren folgende:
Spezielles Beispiel Bereich verschiedener Proben
Zählwerte/Minute
Zählwerte/Minute
1. Blindprobe
2. Plasmodium vivax (menschliche Malaria)
3. Plasmodium berghei (Mäusemalaria)
4* Staphylococcus aureus
5. Pneuraococcus
6. Tuberkulose (menschliche)
7. E. coli
8. Trypanosoma cruzi (menschliche Schlafkra?ik-
heit) .
9. Leukämie (menschliche)
22
13-48
1.096 800-1.200
- 833 600-900
3.513 2.5OO-4.OOO
1.046 800-1.200
2.029 1.500-2.500
818 100-900
2.296 1.800-3.000
1.377 1.000-1.800
Beispiel 6
Proben der gleichen Typen, wie sie im Beispiel 5 untersucht wurden, wurden unter Verwendung des Verfahrens des Beispiels 1
14
und unter Verwendung von C-Methylenblaulösung des Beispiels 1 behandelt. Die Ergebnisse waren folgende:
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Spezielles Beispiel Bereih verschiedener Proben
Zählwerte/Minute 1.966 Zählwerte/Minute
1. Blindprobe 18 352 16-22
2. Plasmodium vivax
(menschliche Malaria)		 59 152 43-78
3. Plasmodium berghei
(MäusemaTaria)		 351 250-500
4. Staphylococcus aureus 1.353 1.000-7.000
5. Pneumococcus 114 80-200
6. Tuberkulose (menschliche) 207' 150-300
7. E. CoIi 1.650-2„550
8. Trypanosoma cruzi
(menschliche Schlaf
krankheit)		 250-500
9. Leukämie (menschliche) 100-200
Obwohl in den vorausgehenden Beispielen Methoden unter Verwendung von Objektträgern für die Proben beschrieben wurden, ist es selbstverständlich, daß die vorliegende Erfindung nicht auf die Prüfung von Proben auf Objektträgern beschränkt ist, sondern auch auf Proben in anderen IOriaen, wie in flüssiger Form angewendet werden kann,, die man in der Weise gewinnen kann, daß man die Probe beispielsweise in einem Behälter mit der radioaktiv markierten Substanz behandelt, Wasser zusetzt, um unabsorbierte radioaktiv markierte Substanz wegzuspülen, und die markierte Probe beispielsweise durch Zentrifugieren von der flüssigen Phase abtrennt. Auch kann mit Hilfe verschiedener'
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herkömmücher Mittel, wie mit Ultraschall und/oder mit mechanischen Mitteln eine Zelldispersion hergestellt werden.
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Claims (1)

  1. Patentansprüche
    1. Verfahren zur Prüfung von Zollen auf Krankheit«er»eheinungen, dadurch gekennzeichnet, daß man dl« asu unter« suchend« Zellprobe aus einem Körper mit einer radioaktiv markierten Substanz behandelt, die von Zellen ®±n oder mehrerer zu identifizierender Zelltypon selektiv absorbiert wird, den Radioaktivitätsgrad der Pr©b@ abfühlt und aus dem Chrad der Absorption der radioaktiv markierten Substanz die Anwesenheit oder Abwesenheit von Krasikheiteersoheinungen ableitet·
    2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gokennz®iehuet, daß die entdockten Zollen krankheitserzougende Zellen oder Zellen einer durch Krankheit abnormal gewordenen Gewebeprobe sind·
    3· Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daB es zur Feststellung von Krebs, vorsu£sw®ieo Lungenkrebs odor Prostatakrebs, Vaginainfektionon, anderer infektiöser Krankheiten, Malaria$ Trypanasomiasis, von Parasitenkrankheiten, Tuborkulose, Staphylococcus, Pneutaococous, Infektionen dos Verdauungssystems, Luiig«ninfek°> tionen, Pneumonia3 Schlafkrankheit odor Leuk&ml® wendet wird· ■
    k. Verfahren nach Anspruch 1 - 38 dadurch gekema©lohnet 9
    "Ή-basisohes Fuchsin oder C-Methylon-bla
    109808/2065 BAD original
    3 daß man als radioaktiv markierte Sub©taaa- H-Hfimatoxylln, Ή-basisohes Fuchsin oder C-Methylon-blau verwendet.
    109808/2065
    5· Verfahren nach Ansprach 1 - k9 dadurch gekennzeichnet, daß man eine radioaktiv markierte Substanz verwendet, die die Zellen des vorbastimmten Typs auch anfärbt und von den anderen abgewiesen wird.
    6. Verfahren nach Anspruch 1 - ht dadurch gekennzeichnet, daß man eine Gewebeprobe verwendet, bei der es von Bedeutung ist, nicht- colorimetrisch radioaktiv zu markieren.
    7. Verfahren nach Anspruch 1 - ht dadurch gekennzeichnet, daß man eine Gewebeprobe verwendet, die Zellen des vorbestimmten Typs einer Größe enthält, die au klein für eine colorimetri sch.« Anfärbemethode sind aber die radioaktiv markierte Substanz in ausreichender Menge für eine positive Identifizierung absorbieren·
    8. Verfahren nach Anspruch 1 - kt dadurch gekennzeichnet, daß die Information über den Gehalt in der Gewebeprobe selbst direkt durch die radioaktive Emission digitalisiert und direkt als Computereingang verwendet wird.
    9. Verfahren nach Anspruch 1 - h9 dadurch gekennzeichnet, daß ein Verteilungsbild der Zellen des vorbestimmten Typs unter Verwendung der Verteilung der radioaktiven Emission der Probe radioaktiv produziert wird.
    10. Verfahren nach Anspruoh 1-9 zur Massenklassierung einer Vielzahl von Proben, dadurch gekennzeichnet, daß man ähnliche Proben aus einer Vielzahl von Subjekten verwendet,
    109808/2065 ' BAD ORIGINAL
    2031U7
    den bestimmten Grad der Absorption der radioaktiv markierten Sub*tans mit einer vorbestimmten allgemeinen Standard- :> etrahlunfamence veröle loht und aufgrund dlepes Vergleiche· jene Proben auesondert, die klar frei von Krankheit sind und gegebenenfalls die restlichen Proben in an sieh bekannter Weise untersucht.
    BAD ORIGINAL
    109808/2065
DE2031447A 1969-06-25 1970-06-25 Verfahren zur Prüfung von Körperzellen auf Krankheitserscheinungen Expired DE2031447C3 (de)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US83643969A 1969-06-25 1969-06-25
US2544170A 1970-04-03 1970-04-03
US4481870A 1970-06-09 1970-06-09

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