DE20007861U1 - Hergestellte Artikel mit Phosphodiesterase-Inhibitor - Google Patents

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BOEHMERT & BOEHMERT

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Boehmert & Boehmcn · P.O.B. 1071 27 · D-28O7I Bremen

Deutsches Patent- und Markenamt Zweibrückenstr. 12 80297 München

DR.-ING. KARL BOEHMERT, &Rgr;&Lgr; (\H99-I97)) DIPU-INO. ALBERT BOEHMERT, PA (190MW!) WILHELM J. H. STAHLBERG, RA. Bremen DR.-ING. WALTER HOORMANN. PA-. Brawn DIPL.-PH YS. DR. HEINZ GODDAR, PA·, Manchen DR.-ING. ROLAND LIESEGANG, PA·. München WOLF-DIETER KUNTZE, RA, Bremen Ali™»* DIPL.-PHYS. ROBERT MONZHUBER. Pa (153S-I DR. LUDWIG KOUKER, RA. Bremen DR. (CHEM.) ANDREAS WINKLER. PA·, Bremen MICHAELA HUTH-DIERIG, RA, München DIPL.-PHYS. DR. MARION TÖNHARDT, PA·, DR. ANDREAS EBERT-WEIDENFELLER. RA, DIPL-ING. EVA LIESEGANG, &Rgr;&Lgr;·, Manchen DR. AXEL NORDEMANN, RA, IMin DIPL.-PHYS. DR. DOROTHEE WEBER-BRULS,PA',Frankf\«i DIPL.-PHYS. DR. STEFAN SCHOHE, PA·. München DR-ING. MATTHIAS PHILIPP, PA·, Bidclcld DR. JAN BERND NORDEMANN, LL.M., RA, Bertin PA - PolcntunftTiII/Puienl Attorney RA - Rechtsern wall/Attorney al Low

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PROF. DR. WILHELM NORDEMANN, RA, nramlciibure DIPL.-PHYS. EDUARD BAUMANN. PA·, I isbenkirdien DR.-ING. GERALD KLÖPSCH, &Rgr;&Lgr;·. &Ggr;»»&Lgr;&Igr;<«·&Ggr; OlPU-tNG. HANS W. GROENING. PA·. München D[PL-ING. SIEGFRIEDSCHIRMER, PA·. DaWkU DIPL.-PHYS. LORENZ HANEWINKEL, PA·. P«kituni DIPL-ING. DR. JAN TÖNNIES, PA. RA, &Kgr;&ohgr; DIPL.-PHYS. CHRISTIAN BIEHL, PA·, Kid MARTIN WIRTZ, RA, Mtu/cldcrf DR. DETMARSCHÄFER, RA. Bremen DIPL-PHYS. DR.-ING. UWE MANASSE, PA·. Bremen DR. CHRISTIAN CZYCHOWSKI, RA. Berlin DR. CARL-RICHARD HAARMANN. RA, Manchen DIPL.-BIOL. DR. ARMIN K. BOHMANN, PA,München DtPL-PHYS. DR. THOMAS L BITTNER, PA·. Berlin DR. VOLKER SCHMITZ, RA, München DR. FRIEDRICH NICOLAUS HEBE, RA, Pmxtaii DIPL-PHYS. CHRISTIAN W. APPELT, PA. Manchen DR. ANKE NORDEMANN-SCHIFFEL, Ra. Pouim) KERSTIN MAUCH, RA. P««tan

In Ziuammcnmfait mil/in cconeroliun with DIPL-CHEM. DR. HANS ULRICH MAY, PA-. München

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20. April 2000

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Hergestellte Artikel mit Phosphodiesterase-Inhibitor

BEZUGNAHME AUF VERBUNDENE ANMELDUNGEN

Diese Anmeldung beansprucht den Zeitrang der vorläufigen Patentanmeldung mit der Anmeldungsnummer US 60/132,036, eingereicht am 30. April 1999.

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-2-GEBIET DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf hochselektive Phosphordiesterase (PDE)- Enzyminhibitoren und auf ihre Verwendung in pharmazeutischen hergestellten Artikeln. Insbesondere bezieht sich die vorliegende Erfindung auf wirkstarke Inhibitoren des für zyklisches Guanosin-1',5'-Monophosphat spezifischen Phosphodiesterase-Typs 5 (PDE5), die zur Behandlung sexueller Funktionsstörungen hilfreich sind, wenn sie in einem pharmazeutischen Erzeugnis enthalten sind. Die hier beschriebenen hergestellten Artikel sind durch eine selektive PDE-5-Inhibierung gekennzeichnet und stellen entsprechend einen Nutzen in therapeutischen Bereichen zur Verfügung, wo eine Inhibierung von PDE5 erwünscht ist, mit Minimierung oder Eliminierung schädlicher Nebenwirkungen, die sich aus der Inhibierung anderer Phosphodiesteraseenzyme ergeben.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Die biochemischen, physiologischen und klinischen Wirkungen der für zyklisches Guanosin-3',5'-monophosphat spezifischen Phosphodiesteraseinhibitoren (cGMP-spezifische PDE) legen deren Nützlichkeit bei einer Vielzahl von Krankheitszuständen nahe, bei denen eine Einstellung der Funktion der glatten Muskulatur, der Nieren, die Hämostase betreffend, Entzündungen betreffend und/oder das Endokrinum betreffend, erwünscht ist. Typ 5 cGMP-spezifische Phosphodiesterase (PDE5) ist das hauptsächliche cGMP hydrolysierende Enzym in vaskulärer glatter Muskulatur und über seine Expression im Schwellkörper des Penis (corpus cavernosum) wurde berichtet (Taher et al., J. Urol, 149: 285A (1993)). Daher ist PDE5 ein attraktives Ziel bei der Behandlung sexueller Funktionsstörungen (Murray, DNaP 6 (3): 150-56(1993)).

Ein pharmazeutisches Erzeugnis, das einen PDE5-Inhibitor bereitstellt, ist gegenwärtig unter dem Markennamen VIAGRA® erhältlich und verkauft. Der aktive Inhaltsstoff von VIAGRA® ist Sildenafil. Das Produkt wird als ein hergestellter Artikel verkauft, der 25, 50 und 100 mg

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Tabletten mit Sildenafil und eine Packungsbeilage enthält. Die Packungsbeilage stellt dar, daß Sildenafil ein wirkstärkerer Inhibitor von PDE5 als von anderen bekannten Phosphodiesterasen ist (mehr als 80-fach für PDEl-Inhibierung, mehr als 1000-fach fur PDE2-, PDE3- und PDE4-Inhibierung). Die IC50 für Sildenafil gegen PDE5 wurde als 3 nM (Drugs of the Future, 22(2), S. 128 - 143 (1997)) und als 3,9 nM angegeben (Boolell et al., int. J. of Impotence Res., 8, S. 47 - 52 (1996)). Sildenafil wird beschrieben, daß es eine 4000-fache Selektivität für PDE5 gegenüber PDE3 aufweist und nur eine 10-fache Selektivität fur PDE5 gegenüber PDE6. Sein relativer Mangel an Selektivität für PDE6 wird als Grundlage für Anomalitäten, die sich auf das Farbsehen beziehen, theoretisiert.

Während Sildenafil bedeutenden kommerziellen Erfolg erreichte, war es wegen seiner bedeutenden abträglichen Nebenwirkungen, einschließlich Gesichtsrötung (10 % Häufigkeit) nicht mehr ausreichend. Ab'trägliche Nebenwirkungen begrenzen die Verwendung von Sildenafil bei Patienten, die unter Sehanomalitäten, Hochdruck leiden und, am bedeutendsten, von Einzelpersonen, die organische Nitrate verwenden (Welds et al., Amer. J. of Cardiology, 83 (5A), S. 21(C) - 28(C) (1999)).

Von der Verwendung von Sildenafil bei Patienten, die organische Nitrate nehmen, wird angenommen, daß sie eine klinisch bedeutsame Senkung des Blutdruckes hervorruft, was den Patienten in Gefahr bringen könnte. Entsprechend bietet das Verpackungsetikett für Sildenafil strenge Gegenanzeigen gegen seine Verwendung in Zusammenstellung mit organischen Nitraten (z.B. Nitroglycerin, Isosorbidmononitrat, Isosorbiddinitrat, Erythrityltetranitrat) und anderen Spendern von Stickstoffoxyden jeder Form, entweder regelmäßig oder abschnittsweise, da Sildenafil die blutdrucksenkenden Wirkungen von Nitraten potenziert. Siehe S.R. Conti et al,. Amer. J. of Cardiology, 83(5A), S. 29C - 34C (1999). Daher bleibt ein Bedarf, verbesserte pharmazeutische Erzeugnisse zu identifizieren, die bei der Behandlung sexueller Funktionsstörungen hilfreich sind, sogar bei der Verfügbarkeit von Sildenafil.

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Die vorliegende Erfindung stellt ein hergestelltes Erzeugnis für die menschliche pharmazeutische Verwendung bereit, das eine Packungsbeilage, einen Behälter und eine orale Dosierungsform umfaßt, die einen selektiven PDE5-Inhibitor bei Einheitsdosierungen von etwa 1 bis etwa 20 mg/Dosierungsform umfaßt. Die nützlichen Wirkungen der vorliegenden Erfindung wurden in klinischen Studien beobachtet und durch die Entdeckung, daß ein selektiver PDE5-Inhibitor, der die folgenden Kriterien erfüllt, die wirksame orale Verabreichung von etwa 1 bis etwa 20 mg/Dosierungsform ohne Gegenanzeigen ermöglicht, die im allgemeinen bei Erzeugnissen mit PDE5-Inhibitor nötig sind, so wie die Warnungen, die sich auf Sehanomalitäten richten. Ein selektiver PDE5-Inhibitor der vorliegenden Erfindung weist auf:

1) einen wenigstens 100-fachen Unterschied der IC50-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6 für einen besonderen PDE5-Inhibitor (d.h. der IC₅o-Wert gegenüber PDE5 ist wenigstens 100-fach niedriger als der ICso-Wert gegenüber PDE6);

2) einen wenigstens 1000-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDEIc; und

3) einen ICso-Wert von weniger als 10 nM.

Bedeutenderweise enthüllten die klinischen Studien auch, daß ein wirksames Erzeugnis bereitgestellt werden kann, das eine verminderte Neigung bei empfanglichen Einzelpersonen aufweist, eine Errötung hervorzurufen. Völlig unerwartet kann das Erzeugnis auch mit klinisch unbedeutenden Nebenwirkungen verabreicht werden, die mit den kombinierten Wirkungen eines PDE5-Inhibitors und eines organischen Nitrates in Beziehung stehen. Daher ist eine Gegenanzeige unnötig, die einmal für ein Erzeugnis für notwendig gehalten wurde, das einen PDE5-Inhibitor enthält, wenn ein selektiver PDE5-Inhibitor, wie oben definiert, wie hier offenbart, verwendet wird. Daher stellt die vorliegende Erfindung eine wirksame Therapie für sexuelle Funktionsstörungen bei Einzelpersonen bereit, die zuvor nicht zu behandeln waren oder unter unannehmbaren Nebenwirkungen litten, einschließlich Einzelpersonen mit

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einer kardiovaskulären Krankheit, wie bei Einzelpersonen, die eine Nitrattherapie benötigen, die einen Herzinfarkt mehr als drei Monate vor Beginn der Therapie auf sexuelle Funktionsstörung erlitten und die unter dekompensierter Herzinsuffizient der Klasse 1 leiden, wie von der New York Heart Association (NYHA) festgelegt, oder Einzelpersonen, die unter Sehanomalitäten leiden.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung stellt einen hergestellten Artikel zur menschlichen pharmazeutischen Verwendung bereit, der eine Packungsbeilage, einen Behälter und eine orale Dosierungsform umfaßt, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors pro Dosierungsform umfaßt.

Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin ein Verfahren zur Behandlung von Zuständen bereit, bei denen die Inhibierung von PDE5 erwünscht ist, die die Verabreichung einer oralen Dosierungsform an einen diese benötigenden Patienten umfaßt, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors enthält, wie erforderlich, bis zu einer Gesamtdosis von 20 mg/Tag. Die Erfindung stellt weiterhin die Verwendung einer oralen Dosierungsform bereit, die einen selektiven PDE5-Inhibitor bei einer Dosierung von etwa 1 bis etwa 20 mg umfaßt, zur Behandlung einer sexuellen Funktionsstörung.

Besondere Zustände, die mit dem Verfahren und dem Artikel der vorliegenden Erfindung behandelt werden können, schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf die männliche erektile Funktionsstörung und weibliche sexuelle Funktionsstörung, insbesondere die weibliche Funktionsstörung der Vigilität.

Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung einen hergestellten Artikel für die menschliche pharmazeutische Verwendung bereit, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors umfaßt, mit

(i) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

(ii) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDEIc,

(in) einem IC50 von weniger als 10 nM und

(iv) ausreichender Bioverfügbarkeit, um bei oralen Dosierungen in Einheiten von etwa 1 bis etwa 20 mg wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die darstellt, daß der PDE5-Inhibitor geeignet ist, sexuelle Funktionsstörungen bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln und die von Gegenanzeigen frei ist, die mit der Verabreichung von organischen Nitraten in Beziehung stehen; und

c) einen Behälter.

Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin einen hergestellten Artikel für die menschliche pharmazeutische Verwendung zur Verfügung, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors umfaßt, mit

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(i) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

(ii) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDEIc₅

(iii) einem IC50 von weniger als 10 nM und

(iv) einer ausreichenden Bio Verfügbarkeit, um in oralen Dosierungen in Einheiten von etwa 1 bis etwa 20 mg wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die erläutert, daß der PDE5-Inhibitor geeignet ist, die sexuelle Funktionsstörungen bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln, der auch ein organisches Nitrat verwendet; und

c) einen Behälter.

Die vorliegende Erfindung stellt auch einen hergestellten Artikel zur menschlichen pharmazeutischen Verwendung zur Verfügung, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors umfaßt, mit

(i) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der IC50-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

(ii) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDElc,

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einem IC50 von weniger als 10 nM und

(iv) einer ausreichenden Bioverfügbarkeit, um in oralen Einheitsdosierungen von etwa 1 bis etwa 20 mg wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die erläutert, daß der PDE5-Inhibitor geeignet ist, die sexuelle Funktionsstörung bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln und der unter einem Zustand leidet, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Netzhautkrankheit, der Neigung zum Erröten, der Neigung zu Sehanomalitäten, dekompensierter Herzinsuffizienz der Klasse 1, einem Herzinfarkt 90 Tage oder mehr vor Beginn der Behandlung auf sexuelle Funktionsstörmung und Zusammenstellungen davon besteht; und

c) einen Behälter.

GENAUE BESCHREBUNG

Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung, wie hier offenbart und beschrieben, werden die folgenden Ausdrücke und Abkürzungen folgendermaßen festgelegt.

Der Ausdruck &ldquor;Behälter" meint jedes Gefäß und Deckel dafür, das zum Lagern, Transportieren, Verteilen und/oder Handhaben eines pharmazeutischen Erzeugnisses geeignet ist.

Der Ausdruck &ldquor;IC50" ist ein Maß für die Wirkstärke einer Verbindung, ein besonderes PDE-Enzym zu inhibieren (z.B. PDEIc, PDE5 oder PDE6). Die IC₅₀ ist die Konzentration einer Verbindung, die zu einer 50 %igen Enzyminhibierung in einem Experiment mit einfacher Dosis-Antwort führt. Die Bestimmung des IC50-Wertes einer Verbindung wird einfach mit einer bekannten in vitro-Verfahrensweise durchgeführt, die allgemein in Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22, S. 3099-3108 (1973) beschrieben ist.

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Der Ausdruck &ldquor;Packungsbeilage" bedeutet Information, die das Erzeugnis begleitet, die eine Beschreibung bereitstellt, wie das Erzeugnis zu verabreichen ist, mit den Sicherheits- und Effizienzwerten, die erforderlich sind, um dem Arzt, Apotheker und Patienten zu erlauben, eine informierte Entscheidung hinsichtlich der Verwendung des Erzeugnisses zu treffen. Die Packungsbeilage wird im allgemeinen als das &ldquor;Etikett" für ein pharmazeutisches Erzeugnis betrachtet.

Der Ausdruck &ldquor; orale Dosierungsform" wird in einem allgemeinen Sinn verwendet, um pharmazeutische Erzeugnisse, die oral verabreicht werden, in Bezug zu nehmen. Orale Dosierungsformen werden vom Fachmann dahingehend erkannt, daß sie solche Formen wie flüssige Formulierungen, Tabletten, Kapseln und Gelkapseln einschließen.

Der Ausdruck &ldquor;selektiver PDE5-Inhibitor" wird als ein PDE5-Inhibitor definiert, der aufweist:

1) einen ICso-Wert für die Inhibierung von PDE5 von wenigstens 100-fach geringer als der IC₅₀-WeIt für die Inhibierung von PDE6;

2) einen ICso-Wert für die Inhibierung von PDE5 von wenigstens 1000-fach geringer als der ICso-Wert für die Inhibierung von PDEIc; und

3) einen ICso-Wert für die Inhibierung von PDE5 geringer als 10 nM.

Selektive PDE5-Inhibitoren können beträchtlich in der chemischen Struktur abweichen und ihre Verwendung in der vorliegenden Erfindung hängt nicht von der chemischen Struktur ab, sondern vielmehr von den Parametern der Selektivität und Wirkstärke, die hier offenbart werden.

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Der Ausdruck &ldquor;Sehanomalitäten" bedeutet eine anomale Sehfähigkeit, die vom Blau-Grün-Sehen gekennzeichnet ist, von der angenommen wird, daß sie von der PDE6-Inhibierung hervorgerufen wird.

Der Ausdruck &ldquor;Erröten" bedeutet eine episodenhafte Röte des Gesichts und Nackens, das auf eine Vasodilatation zurückgeht, die von der Aufnahme eines Arzneimittels hervorgerufen wird, üblicherweise von einem Wärmegefühl im Gesicht und Nacken begleitet, und manchmal von Schwitzen begleitet.

Der Ausdruck &ldquor;freies Arzneimittel" bedeutet feste Partikel aus Arzneimittel, die nicht innig in ein polymeres Copräzipitat eingebettet sind.

Wie zuvor dargelegt, ist die vorliegende Erfindung auf einen hergestellten Artikel zur menschlichen pharmazeutischen Verwendung gerichtet, der eine Packungsbeilage, einen Behälter und eine Dosierungsform umfaßt, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors pro Einheitsdosierungsform umfaßt. Ein selektiver PDE5-Inhibitor, der in der vorliegenden Erfindung geeignet ist, ist ein PDE5-Inhibitor mit:

1) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6;

2) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der ICso-Werte fur die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDEIc; und

3) einem ICso-Wert von weniger als 10 nM;

und der ausreichend bioverfügbar ist, um in Einheitsdosierungen von etwa 1 bis etwa 20 mg wirksam zu sein.

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Der Unterschied wird als ein PDE6/PDE5-Verhältnis der IC50-Werte ausgedrückt, d.h. das Verhältnis des ICso-Wertes gegenüber PD6 zu dem IC₅₀-Wert gegenüber PDE5 (PDE6/PDE5) ist größer als 100, bevorzugter größer als 300 und am bevorzugtesten größer als 500.

Auf ähnliche Weise ist das Verhältnis des ICso-Wertes gegenüber PDEIc zum ICso-Wert gegenüber PDE5 (PDE1C/PDE5) größer als 1000. Bevorzugte PDE5-Inhibitoren haben einen größer als 3000-fachen Unterschied zwischen der Inhibierung von PDE5 und PDEIc, bevorzugter größer als einen 5000-fachen Unterschied zwischen ICso-Wert gegenüber PDE5 und PDEIc. Die Wirkstärke des Inhibitors, wie er durch den ICso-Wert gegenüber PDE5 dargestellt wird, ist geringer als 10 nM, bevorzugt geringer als 5 nM, bevorzugter geringer als 2 nM und am bevorzugtesten geringer als 1 nM.

Die Packungsbeilage liefert eine Beschreibung, wie ein pharmazeutisches Erzeugnis zu verabreichen ist, neben den Sicherheits- und Effizienzwerten, die erforderlich sind, um einem Arzt, Apotheker und Patienten zu ermöglichen, eine informierte Entscheidung hinsichtlich der Verwendung des Erzeugnisses zu treffen. Die Packungsbeilage wird im allgemeinen als das Etikett des pharmazeutischen Erzeugnisses betrachtet. Die Packungsbeilage, die in dem vorliegenden hergestellten Artikel enthalten ist, gibt an, daß der selektive PDE5-Inhibitor für die Behandlung von Zuständen geeignet ist, bei denen die Inhibierung von PDE5 erwünscht ist. Die Packungsbeilage liefert auch Anweisungen, eine oder mehrere der 1 bis etwa 20 mg Einheitsdosierungsformen wie erforderlich zu verabreichen, bis zu einer maximalen Gesamtdosis von 20 mg pro Tag. Vorzugsweise ist die verabreichte Dosis etwa 5 bis etwa 20 mg/Tag, bevorzugter etwa 5 bis etwa 15 mg und am bevorzugtesten etwa 5 mg oder etwa 10 mg Dosierungsform, einmal pro Tag verabreicht, wie erforderlich.

Bevorzugte zu behandelnde Zustände schließen sexuelle Funktionsstörung (einschließlich männlicher erektiler Funktionsstörung und weiblicher sexueller Funktionsstörung und bevorzugter die weibliche Funktionsstörung der Vigilität (female arousal disorder (FAD)) ein. Der bevorzugt zu behandelnde Zustand ist die männliche erektile Funktionsstörung.

Bedeutsamerweise unterstützt die Packungsbeilage die Verwendung des Erzeugnisses, um die sexuelle Funktionsstörung bei Patienten zu behandeln, die an einer Netzhautkrankheit leiden, zum Beispiel diabetischer Retinopathie oder Retinitis Pigmentosa, oder bei Patienten, die organische Nitrate verwenden. Daher ist die Packungsbeilage vorzugsweise von Gegenanzeigen frei, die mit diesen Zuständen in Beziehung stehen und insbesondere der Verabreichung der Dosierungsform mit einem organischen Nitrat. Bevorzugter ist die Packungsbeilage auch frei von Warnhinweisen oder Warnungen, die sowohl mit Netzhautkrankheiten, insbesondere Retinitis Pigmentosa in Beziehung stehen, als auch mit Einzelpersonen in Beziehung stehen, die zu Sehanomalitäten neigen. Bevorzugt berichtet die Packungsbeilage auch von Auftreten von Erröten unterhalb 2 %, bevorzugt unterhalb 1 %, und am bevorzugtesten unterhalb 0,5 % bei Patienten, denen die Dosierungsform verabreicht wurde. Die Häufigkeitsrate des Errötens weist eine deutliche Verbesserung gegenüber vorherigen pharmazeutischen Erzeugnissen, die einen PDE5-Inhibitor enthalten, auf.

Der Behälter, der in dem vorliegenden hergestellten Artikel verwendet wird, ist im pharmazeutischen Gebiet üblich. Im allgemeinen ist der Behälter eine Blisterverpackung, ein Folienpaket, eine Glas- oder Plastikflasche mit passendem Deckel oder Verschluß oder ein anderer solcher Artikel, der zur Verwendung durch den Patienten oder Apotheker geeignet ist. Vorzugsweise ist der Behälter bemessen, um 1-1000 feste Dosierungsformen aufzunehmen, vorzugsweise 1 bis 500 feste Dosierungsformen und am bevorzugtesten 5 bis 30 feste Dosierungsformen.

Orale Dosierungsformen werden von den Fachleuten anerkannt, daß sie zum Beispiel solche Formen wie flüssige Formulierungen, Tabletten, Kapseln und Gelkapseln einschließen. Vorzugsweise sind die Dosierungsformen feste Dosierungsformen, insbesondere Tabletten, die

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etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors umfassen. Jede pharmazeutisch annehmbaren Arzneimittelträger zur oralen Verwendung sind für die Herstellung solcher Dosierungsformen geeignet. Geeignete pharmazeutische Dosierungsformen schließen Copräzipitatformen, die zum Beispiel in Butlers US-Patent Nr. 5,985,326, das hier durch Bezugnahme enthalten ist, beschrieben sind. In bevorzugten Ausführungsformen ist die Einheitsdosierungsform der vorliegenden Erfindung eine feste Freie einer Co-präzipitatform des PDE5-Inhibitors, enthält jedoch vielmehr einen festen PDE5-Inhibitor als einen freien Wirkstoff.

Vorzugsweise umfassen die Tabletten pharmazeutische Arzneimittelträger, die im allgemeinen als sicher angesehen werden, wie Laktose, mikrokristalline Zellulose, Stärke, Calciumcarbonat, Magnesiumstearat, Stearinsäure, Talkum und kolloidales Silikondioxid und werden durch übliche pharmazeutische Herstellungsverfahren hergestellt, die in Remington 's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990) beschrieben sind. Solche Verfahren schließen zum Beispiel Feuchtgranulieren gefolgt von Trocknen, Mahlen und Pressen in Tabletten mit oder ohne Filmbeschichten ein; Trockengranulieren, gefolgt von Mahlen, Pressen in Tabletten mit oder ohne Filmbeschichten; Trockenmischen, gefolgt von Pressen in Tabletten, mit oder ohne Filmbeschichten; Formtabletten; Feuchtgranulieren, getrocknet und in Gelatinekapseln gefüllt; Trockenmischung, in Gelatinekapseln gefüllt; oder Suspension und Lösung, in Gelatmekapseln gefüllt, ein. Im Allgemeinen haben die festen Dosierungsformen Identifizierungskennzeichen, die auf die Oberfläche eingeprägt oder aufgedruckt sind.

Die vorliegende Erfindung beruht auf detaillierten Experimenten und klinischen Versuchen und den unerwarteten Beobachtungen, daß die Nebenwirkungen durch Auswahl eines selektiven PDE5-Inhibitors, der die besonderen Eigenschaften, die hier dargestellt sind, aufweist, auf klinisch unbedeutende Spiegel reduziert werden können, von denen zuvor geglaubt wurde, daß sie ein Anzeichen für die PDE5-Inhibierung seien, nämlich:

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1) Einen wenigstens 100-fachen Unterschied bei den IC50-Werten für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6;

2) Einen wenigstens 1000-fachen Unterschied bei den IC50-Werten für die Irihibierung von PDE5 gegenüber PDEIc; und

3) Einen ICso-Wert für die Inhibierung von PDE5 geringer als 10 nM.

Diese unerwartete Beobachtung ermöglichte die Entwicklung von hergestellten Artikeln, die einen selektiven PDE5-Inhibitor in etwa 1 bis etwa 20 mg Einheitsdosierungsformen enthalten, die unerwünschte, zuvor für unvermeidbar gehaltene Nebenwirkungen minimieren, wenn sie oral verabreicht werden. Diese Nebenwirkungen schließen Gesichtsrötung, Sehanomalitäten und eine bedeutende Erniedrigung des Blutdruckes ein, wenn der PDE5-Inhibitor allein oder in Zusammenstellung mit einem organischen Nitrat verabreicht wird. Die minimale Wirkung eines vorliegenden PDE5-Inhibitors, der in etwa 1 bis etwa 20 mg Einheitsdosierungsformen verabreicht wird, auf PDE6, erlaubt auch die Verabreichung eines selektiven PDE5-Inhibitors an Patienten, die an einer Netzhautkrankheit, wie diabetischer Retinopathie oder Retinitis pigmentosa, leiden.

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Ein solcher selektiver PDE5-Inhibitor, z.B. (6R-trans)-6-(l,3-Benzodioxol-5-yl)-2,3,6,7, 12,12a-hexahydro-2-methylpyrazino[l',2':l,6]pyrido[3,4-b]indol-l,4-dion, alternativ (6R, 12aR)-2₎3,6,7,12,12a-Hexyhydro-2-methyl-6-(3,4-methylen-dioxyphenyl)pyrazino [2',1 ':6,l]pyrido[3_s4-b]indol-l₅4-dion genannt, wird in US Patent Nr. 5,859,006 an Daugan offenbart und wird durch die Strukturformel (I) dargestellt:

Von der Verbindung der Formel (I) wurde in menschlichen klinischen Studien bewiesen, daß sie einen minimalen Einfluß auf den systolischen Blutdruck ausübt, wenn sie zusammen mit organischen Nitraten verabreicht wird. Im Unterschied dazu weist Sildenafil, wenn mit Nitraten verabreicht, eine so groß wie vierfach größere Erniedrigung des systolischen Blutdrucks gegenüber einem Placebo auf, was zu den Gegenanzeigen in der Beilage zu VIAGRA® führt und zu Warnungen an bestimmte Patienten.

Selektive PDE5-Inhibitoren variieren beträchtlich in ihrer chemischen Struktur und die Verwendung eines selektiven PDE5-Inhibitors, wie er in der vorliegenden Erfindung definiert ist, hängt nicht von einer besonderen chemischen Struktur ab, sondern vielmehr von den hier dargelegten kritischen Parametern. Jedoch können bevorzugte Verbindungen, die die erforderliche Wirkstärke und Selektivität aufweisen, auf einfache Weise durch Tests identifiziert werden, die hier beschrieben sind, aus denjenigen, die in Daugans US Patent Nr. 5,859,006,

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Daugan et al., US Patent Nr. 5,981,527 und Daugan et al., US Patent Nr. 6,001,847 beschrieben sind, von denen jedes hier durch Bezugnahme enthalten ist.

Bevorzugte Verbindungen von Daugans US Patent Nr. 5,859,006 und Daugan et al. US Patent Nr. 5,981,527 sind durch die Strukturformel (&Pgr;) dargestellt:

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wobei R⁰ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Halogen und Cu-alkyl besteht;

R¹ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Ci^-alkyl, C2-6-alkenyl, C2-6-alkynyl, Halo-C[.₆-alkyl, Cs-g-cycloalkyl, C3-_g-cycloalkyl.Ci-3-alkyl, Aryl-Ci-3-alkyl besteht, wobei Aryl ein Phenyl oder Phenyl, substituiert mit einem bis drei Substituenten, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Halogen, Ci-6-alkyl, Cj-6-alkoxy, Methylendioxy und Mischungen daraus besteht, und Heteroaryl-Ci-3-alkyl, wobei Heteroaryl Thienyl, Furyl oder Pyridyl ist, jedes wahlweise substituiert mit einem bis drei Substituenten, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Halogen, Ci-6-alkyl, Ci-6-alkoxy und Mischungen daraus besteht, ist;

R² einen wahlweise substituierten monozyklischen aromatischen Ring darstellt, der aus Benzol, Thiophen, Furan und Pyridin ausgewählt ist, oder ein wahlweise substituierter bizyklischer Ring

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-17-

an den Rest des Moleküls über eines der Benzolring-Kohlenstoffatome angehängt ist, und wobei der kondensierte Ring A ein 5- oder 6-gliedriger Ring ist, gesättigt oder teilweise oder vollständig ungesättigt, und Kohlenstoffatome und wahlweise eines oder zwei Heteroatome umfaßt, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Sauerstoff, Schwefel und Stickstoff besteht;

R³ ein Wasserstoff oder Cu-alkyl darstellt, oder R¹ und R³ zusammen stellen eine 3- oder A-gliedrige Alkyl- oder Alkenylkette dar; und Salze und Solvate davon.

Andere bevorzugte Verbindungen sind diejenigen der Formel (II), wobei:

R⁰ Wasserstoff, Halogen oder Ci-6-alkyl ist;
R¹ Wasserstoff oder Ci-6-alkyl ist;
R² der bizyklische Ring

ist, der wahlweise durch eine oder mehrere Gruppen substituiert sein kann, die unter Halogen und Ci-3-alkyl ausgewählt sind; und

R³ Wasserstoff oder Ci-3-alkyl ist.

Die folgende Tabelle 1 erläutert PDE5- und PDE6-IC50-Werte für stellvertretende selektive PDE5-Inhibitoren, die in US Patent Nr. 5,859,006 offenbart sind, wie sie durch die hier beschriebenen Verfahren bestimmt wurden.

Tabelle 1

Verbindung | PDE5 IC₅₀ (nM) | PDE6IC₅₀ (nM)

PDE6/PDE5

1	5	663	133
2	2	937	469
3	2	420	210
4	5	729	146
5	2,5	3400	1360

Verbindung 5 in Tabelle 1 hat die Strukturformel (I) und zeigt zusätzlich eine IC50 gegenüber PDEIc von 10000 und ein Verhältnis von PDElc/PDE5 von 4000.

Die Strukturen der Verbindungen Nm. 1 - 5 in Tabelle 1 sind wie in der Strukturformel (II), wobei R⁰, R¹, R² und R³ folgendermaßen sind:

Compound

R¹

-NH-SO₃-CFj

CHj

CH,

&mdash;CK,

,NH-SOs-CFj

CH,

CH₃

· j j

Die Werte in Tabelle 1 zeigen an, daß eine Verbindung der Strukturformel (I), wobei R¹ Wasserstoff oder Ci-6-alkyl ist, R²

ist und R Wasserstoff ist, besonders bevorzugt ist. Vorzugsweise ist A

-O

Bevorzugte Verbindungen sind:

(6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexyhydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyphenyl) pyrazino[2^p,l ':6,l]pyrido[3,4-b]indol-l,4-dion; und

(3S, 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-2,3-dimethyl-6-(3,4-methylendioxyphenyl)pyrazino[2'_sr:6,l]-pyrido[3,4-b]indol-l_>4-dion;

und physiologisch annehmbare Salze und Solvate (z.B. Hydrate) davon.

Andere beispielhafte Verbindungen, die in der vorliegenden Erfindung zweckmäßig sind, sind diejenigen, die in Daugan et al., US Patent Nr. 6,001,847 und WO97/43287 offenbart sind, hier durch Bezugnahme enthalten.

Weitere beispielhafte Verbindungen zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung sind in der PCT-Anmeldung PCT/EP98/O6O5O offenbart, die die Vereinigten Staaten von Amerika benennt, mit dem Titel &ldquor;Chemical Compounds", Erfinder A. Bombrun und F. Gellibert, deren Offenbarung besonders durch Bezugnahme hier enthalten ist. Diese Klasse von Verbindungen hat die Strukturformel (&Igr;&Pgr;):

-20-

(R¹⁴)

.' &eegr;

(III) und Salze und Solvate (z.B. Hydrate), wobei

C eine 5- oder 6-gliedrige Heteroarylgruppe darstellt, die wenigstens ein Heteroatom enthält, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel besteht;

R¹² Wasserstoff oder Halogen darstellt; R¹³ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Nitro (NO₂), Trifluormethyl, Trifiuormethoxy, . Halogen, Cyan (CN),

einer 5- oder 6-gliedrigen heterozyklischen Gruppe, die wenigstens ein Heteroatom enthält, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel besteht, wahlweise substituiert mit C (= O) OR* oder Ci-4-alkyl,

Ci-6-alkyl, wahlweise substituiert mit 0R^h, Ci-3-alkoxy, C(=0)R\ OC( = 0)OR^h,

-21-

C( = 0)0R^h, Cj-4-alkylen-Het, C_M-alkylen-C(=0)0R^h, OCM-alkylen-C (= O) 0R^h, C_Malkylen-OC_M-alkylen-C (= O) 0R^h, C (= O) NR-SO₂R^j, C (= O) d-4-alkylen-Het, C_M-alkylen-NR^hR',

C (= O) NR¹¹R¹, C (= O) NR¹¹R', C (= O) NR^M-alkylen-OR¹, C (= O) NR^hC_M-alkylen-Het, OR*,

OC₂.4-alkylen-NR^hR', OCi-4-alkylen-CH(OR^h)CH2NR^hR', OCM-alkylen-Het, OC₂-4-alkylen-OR^h OC₂-4-alkylen-NR^hC (= O) OR^h NR^hR',

NR^hC_M-alkylen-NR^hR', NR^hC (= O) R' NR^h (= O) NR^hR', N(SO₂C_M-alkyl)₂, NR^h(SO₂C_M-alkyl), SO₂NR¹¹R',

und OSO₂-trifluormethyl

besteht;

-22-

R¹⁴ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Halogen, 0R^h, Ci-6-alkyl, NO2 und NR¹¹R¹ besteht;

oder R¹³ und R¹⁴ zusammengenommen sind, um eine 3- oder 4-gliedrige Alkylen- oder Alkenylen-Kettenverbindung eines 5- oder 6-gliedrigen Ringes zu bilden, wahlweise wenigstens ein Heteroatom enthaltend;

R¹⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Halogen, NO7, Trifluormethoxy, C1-6-alkyl, OC].₆-alkyl und C (= O) 0R^h besteht;

R¹⁶ Wasserstoff ist,

oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammengenommen sind, um eine 3- oder 4-gliedrige Alkylen- oder Alkenylen-Kettenverbindung eines 5- oder 6-gliedrigen Ringes zu bilden, wahlweise wenigstens ein Heteroatom enthaltend;

Het eine 5- oder 6-gliedrige heterozyklische Gruppe darstellt, die wenigstens ein Heteroatom enthält, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel besteht, und wahlweise mit Ci^-alkyl substituiert ist;

R^h und R¹ gleich oder verschieden sein können und unabhängig voneinander aus Wasserstoff und Ci-6-alkyl ausgewählt sind;

R^j Phenyl oder C^-cycloalkyl darstellt, wobei das Phenyl oder C^ö-cycloalkyl wahlweise mit einem oder mehreren Halogenatomen substituiert sein kann, einem oder mehreren C (= O)-0R^h, einem oder mehreren 0R^h; und

&eegr; eine ganze Zahl 1,2, oder 3 ist; und
m eine ganze Zahl 1 oder 2 ist.

-23-HERSTELLUNGEN

Herstellung menschlicher PDE5

Die rekombinante Produktion von humaner PDE5 wurde durchgeführt, wie im wesentlichen in Beispiel 7 des US Patentes Nr. 5,702,936 beschrieben, hier durch Bezugnahme enthalten, außer, daß der verwendete Transformationsvektor für Hefe, der von dem grundlegenden ADH2-Plasmid, das in V. Price at al., Methods in Enzymology, 1985, Seiten 308 - 318 (1990) beschrieben ist, vielmehr die Hefesequenzen des ADH2-Promoters und-Terminators enthielt, als die ADHl-Promoter- und -Terminatorsequenzen und der Saccharomyces cerevisiae Wirt der Protease-Mangelstamm BJ2-54 war, der am 31. August 1998 bei der American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, unter der Zugangsnummer ATCC 74465 hinterlegt wurde. Transformierte Wirtszellen wurden in 2X SC-Leu-Medium, pH 6,2 mit Spurenmetallen und Vitaminen angezogen. Nach 24 Stunden wurde YEP-Medium, das Glycerin enthielt, auf eine Endkonzentration von 2X YEP/3 % Glycerin zugegeben. Etwa 24 Stunden später wurden die Zellen geemtet, gewaschen und bei - 7O⁰C gelagert.

Zellpellets (29 g) wurden auf Eis mit einem gleichen Volumen Lysepuffer (25 mM Tris-Cl, pH 8, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 1 mM Benzamidin und 10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄) aufgetaut. Die Zellen wurden in einem Mikroverflüssiger mit N2 bei 1379 bar (20.000 psi) lysiert. Das Lysat wurde zentrifugiert und durch 0,45 &mgr;&pgr;&igr; Einwegfilter filtriert. Das Filtrat wurde auf eine 150 mL Säule mit Q-Sepharose Fast Flow (Pharmacia) aufgebracht. Die Säule wurde mit 1,5 Volumina Puffer A (20 mM Bis-Tris-Propan, pH 6,8,1 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 10 &mgr;&Mgr; ZnSO-O gewaschen und mit einem Schrittgradienten von 125 mM NaCl in Puffer A, gefolgt von einem linearen Gradienten von 125 - 1000 mM NaCl in Puffer A eluiert.

Aktive Fraktionen aus dem linearen Gradienten wurden auf eine 180 mL Hydroxyapatit-Säule in Puffer B (20 mM Bis-Tris-Propan (pH 6,8), 1 mM MgCl₂, 0,25 mM Dithiothreitol, 10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄ und 250 mM KCl) aufgebracht. Nach dem Laden wurde die Säule mit 2 Volumina

BOEHMEKtÄßÖEHMfeRT * I Il :

-24-

Puffer B gewaschen und mit einem linearen Gradienten von 0-125 mM Kaliumphosphat in Puffer B eluiert. Aktive Fraktionen wurden vereint, mit 60 % Ammoniumsulfat gefällt und in Puffer C (20 mM Bis-Tris-Propan, pH 6,8,125 mM NaCl, 0,5 mM Dithiothreitol und 10 &mgr;&Mgr; ZnSC>4) resuspendiert. Der Pool wurde auf eine 140 mL-Säule mit Sephacryl S-300 HR aufgebracht und mit Puffer C eluiert. Aktive Fraktionen wurden auf 50 % Glycerin verdünnt und bei - 20⁰C gelagert. Die erhaltenen Präparate waren gemäß SDS-PAGE zu etwa 85 % rein.

Test auf PDE-Aktivität

Aktivität von PDE5 kann durch Standardtests des Fachgebietes gemessen werden. Zum Beispiel kann die spezifische Aktivität jeder PDE folgendermaßen bestimmt werden. PDE-Tests, die ein Trennverfahren mit Kohle verwenden, wurden durchgeführt, wie im wesentlichen bei Loughney et al., (1996), The Journal of biological Chemistry, 271: 796 - 806 beschrieben. In diesem Test setzt die PDE5-Aktivität [³²P]cGMP zu [³²P]5'GMP im Verhältnis zur Menge der vorliegenden PDE5-Aktivität um. Das [³²P] 5'-GMP wird dann quantitativ in freies [³²P]-Phosphat und unmarkiertes Adenosin durch die Wirkung der 5 '-Nukleotidase aus Schlangengift umgesetzt. Folglich ist die Menge freigesetzten [³²P]-Phosphates zur Enzymaktivität proportional. Der Test wird bei 3O⁰C in einer 100 \iL Reaktionsmischung durchgeführt, die 40 mM Tris-Cl (pH 8,0), 1 &mgr;&Mgr; ZnSC>4, 5 mM MgCb und 0,1 mg/mL Rinderserumalbumin (Endkonzentrationen) enthält. PDE5 liegt in Mengen vor, die < 30 % Gesamthydrolyse des Substrates (lineare Testbedingungen) ergeben. Der Test wird durch Zugabe des Substrates (1 mM [³²P]CGMP) gestartet und die Mischung wird für 12 Minuten inkubiert. Fünfundsiebzig (75) &mgr;g Gift von Crotalus atrox wird dazugegeben und die Inkubation wird fur 3 weitere Minuten (insgesamt 15 Minuten) fortgesetzt. Die Reaktion wird durch Zugabe von 200 mL Aktivkohle (25 mg/mL Suspension in 0,1 M NaH₂PCM, pH 4) gestoppt. Nach Zentrifugieren (750 &khgr; g für 3 Minuten), um die Kohle abzusetzen, wird eine Probe des Überstandes zur Bestimmung der Radioaktivität in einem Szintillationszähler entnommen und die PDE5-Aktivität wird errechnet. Die Präparate hatten spezifische Aktivitäten von etwa 3 &mgr;&Mgr;&ogr;&Igr; cGMP, das pro Minute pro Milligram Protein hydrolysiert wurde.

-25-Herstellung von Rinder-PDE6

Rinder-PDE6 wurde von Dr. N. Virmaux, INSERM U338, Straßburg geliefert. Rindernetzhäute wurden wie von Virmaux et al., FEBS Letters, 12 (6), S. 325 - 328 (1971) beschrieben, hergestellt, siehe auch A. Sitaramayya et al., Exp. Eye Res., 25, S. 163 - 169 (1977). Kurz gesagt, außer wenn anders dargestellt, wurden alle Vorgänge im kalten und im schwachen Rotlicht durchgeführt. Die Augen wurden im Kalten und im Dunkeln für bis zu vier Stunden nach dem Schlachten gehalten.

Die Herstellung der äußeren Netzhautsegmente von Rindern (ANS) folgte im wesentlichen Verfahren, die von Schichi et al., J. Biol Chem., 224 : 529 (1969) beschrieben wurden. In einem üblichen Experiment wurden 35 Netzhäute von Rindern in einem Mörser mit 35 mL 0,066 M Phosphatpuffer, pH 7,0, mit Saccharose auf 40 % eingestellt, gemahlen, gefolgt von Homogenisieren in einem Homogenisator nach Potter (20 Auf- und Abbewegungen). Die Suspension wurde bei 25.000 &khgr; g für 20 Minuten zentrifugiert. Das Pellet wurde in 7,5 mL 0,006 M Phosphatpuffer (40 % Saccharose) homogenisiert und vorsichtig unter 7,5 mL Phosphatpuffer geschichtet (enthielt keine Saccharose). Die Zentrifugation wurde in einem Ausschwingrotor bei 45.000 &khgr; g für 20 Minuten durchgeführt und erzeugte ein Pellet, das am Boden schwarz ist und auch eine rote Bande an der Grenzschicht 0,066 M Phosphat-40 % Saccharose/0,066 M Phosphat (rohe ANS). Das rote Material an der Grenzschicht wurde entfernt, mit Phosphatpuffer verdünnt, zu einem Pellet runterzentrifugiert und erneut in der gepufferten 40 %igen Saccharose, wie oben beschrieben, verteilt. Dieses Verfahren wurde zwei- oder dreimal wiederholt, bis kein Pellet gebildet wurde. Die gereinigten ANS wurden in Phosphatpuffer gewaschen und schließlich bei 25.000 &khgr; g für 20 Minuten zu einem Pellet herunterzentrifugiert. Alle Materialien wurden bis zur Verwendung gefroren gehalten.

Hypotonische Extrakte wurden durch Suspendieren isolierter ANS in 10 mM Tris-Cl, pH 7,5, 1 mM EDTA und 1 mM Dithioerythritol, gefolgt von Zentrifugieren bei 100.000 &khgr; g für 30 Minuten isoliert.

Von der Präparation wurde berichtet, daß sie eine spezifische Aktivität von etwa 35 &mgr;&Mgr;&ogr;&Igr; cGMP, das pro Minute pro Milligram Protein hydrolysiert werde, aufweise.

Herstellung von PDEIc aus Spodoptera fugiperda-Zellen (Sf9)

Zellpellets (5 g) wurden auf Eis mit 20 mL Lysepuffer (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂,1 mM DTT, 2 mM Benzamidin-HCl, 5 Kg/mL jeweils Pepstatin, Leupeptin und Aprotenin) aufgetaut. Die Zellen wurden durch Passieren durch eine French-Presse (SLM-Aminco) lysiert, während die Temperaturen unterhalb 10⁰C gehalten wurden. Das erhaltene Zellhomogenat wurde bei 36.000 upm bei 4⁰C für 45 Minuten in einer Beckman Ultrazentrifuge unter Verwendung eines Typ TI 45 Rotors zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das erhaltene Pellet wurde in 40 mL Solubilisierungspuffer (Lysepuffer enthaltend 1 M NaCl, 0,1 M MgCl₂,1 mM CaCl₂,20 &mgr;g/rnL Calmodulin und 1 % Sulfobetain SB 12 (Z3-12) durch Ultrabeschallen unter Verwendung eines VibraCell Steuergerätes mit einer Mikrospitze für 3 &khgr; 30 Sekunden resuspendiert. Dieses wurde in einer Mischung aus zerstoßenem Eis/Salz zum Kühlen durchgeführt. Im Anschluß an die Ultrabeschallung wurde die Mischung langsam für 30 Minuten bei 4⁰C gemischt, um das Solubilisieren membrangebundener Proteine zu beenden. Diese Mischung wurde in einer Beckman Ultrazentrifuge unter Verwendung eines Typ TI45-Rotors bei 36.000 upm für 45 Minuten zentrifugiert. Der Überstand wurde in Lysepuffer, enthaltend 10 &mgr;g/mL Calpaininhibitor I und &Pgr;, verdünnt. Das gefällte Protein wurde für 20 Minuten bei 9000 upm in einem Beckman JAIO-Rotor zentrifugiert. Der aufgenommene Überstand wurde dann einer Nachahmungschromatographie an Blau AP-Agarose (Mimetic Blue AP Agarose) unterworfen.

Um die Nachahmungs-Agarosesäule Blau AP (Mimetic Blue AP Agarose) laufen zu lassen, wurde das Harz anfänglich durch Aufbringung von 10 Bettvolumina 1 % Polyvinylpyrrolidin (d.h. MG von 40.000) abgeschirmt, um unspezifische Bindestellen zu blockieren. Das lose gebundene PVP-40 wurde durch Waschen mit 10 Bettvolumina 2M NaCl und 10 mM Natriumcitrat, pH 3,4 entfernt. Kurz vor der Zugabe der solubilisierten PDElc-Probe wurde die

Säule mit 5 Bettvolumina Säulenpuffer A (50 mM MPOS, pH 7,4,10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄, 5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM Benzamidin-HCl) equilibriert.

Die solubiliserte Probe wurde mit einer Fließrate von 2 mL/min mit Rückführung auf die Säule aufgetragen, so daß die gesamte Probe 4 bis 5 mal in 12 Stunden aufgetragen wurde. Nachdem das Beladen abgeschlossen war, wurde die Säule mit 10 Säulenvolumina Säulenpuffer A gewaschen, gefolgt von 5 Säulen Volumina Säulenpuffer B (Säulenpuffer A enthält 20 mM 5 '-AMP), und gefolgt von 5 Säulenvolumina Säulenpuffer C (50 mM MOPS, pH 7,4, 10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂,1 mM Dithiothreitol und 2 mM Benzamidin-HCl). Das Enzym wurde in drei aufeinanderfolgenden Pools eluiert. Der erste Pool bestand aus Enzym aus einem Waschschritt mit 5 Bettvolumina mit Säulenpuffer C, der 1 mM cAMP enthielt. Der zweite Pool bestand aus Enzym aus einem Waschschritt mit 10 Bettvolumina mit Säulenpuffer C, der 1 M NaCl enthielt. Der letzte Pool bestand aus Enzym aus einem Waschschritt mit 5 Bettvolumina mit Säulenpuffer C, der 1 M NaCl und 20 mM cAMP enthielt.

Die aktiven Pools des Enzyms wurden gesammelt und das zyklische Nukleotid über herkömmliche Gelfiltrationschromatographie oder Chromatographie an Hydroxyapatit-Harz entfernt. Im Anschluß an die Entfernung der zyklischen Nukleotide wurden die Enzympools gegen Dialysepuffer, der 25 mM MOPS, pH 7,4,10 &mgr;&Mgr; ZnSO₄, 500 mM NaCl, 1 mM CaCl₂,1 mM Dithiothreitol, 1 mM Benzamidin-HCl enthielt, dialysiert, gefolgt von Dialyse gegen Dialysepuffer, der 50 % Glycerin enthielt. Das Enzym wurde mit Hilfe von Trockeneis schnell gefroren und bei - 7O⁰C gelagert.

Die erhaltenen Präparate waren gemäß SDS-PAGE etwa > 90 % rein. Diese Präparate hatten spezifische Aktivitäten von etwa 0,1 bis etwa 1,0 &mgr;&pgr;&igr;&ogr;&iacgr; cAMP, das pro Minute pro Milligramm Protein hydrolysiert wurde.

. .BOEHMERT &%0]SßSftEKT

-28-Bestimmungen der ICgn-Werte

Der Parameter von Interesse beim Einschätzen der Wirkstärke eines kompetitiven Enzyminhibitors von PDE5 und/oder PDEIc und PDE6 ist die Inhibierungskonstante, d.h. Kj. Dieser Parameter kann durch Bestimmen der IC50 angenähert werden, die die Inhibitorkonzentration ist, die zu einer 50 %igen Enzyminhibierung fuhrt, in einem einzigen Dosis-Antwort-Experiment unter den folgenden Bedingungen.

Die Konzentration an Inhibitor ist immer viel größer als die Konzentration des Enzymes, so daß die freie Inhibitorkonzentration (die unbekannt ist) durch die Gesamtkonzentration Inhibitor angenähert werden kann (die bekannt ist).

Ein geeigneter Bereich der Inbibitorkonzentration wird gewählt (z.B. liegen in dem Experiment Inhibitorkonzentrationen wenigstens mehrfach höher und mehrfach geringer als die K, vor). Typischerweise betrugen die Inhibitorkonzentrationen von 10 nM bis 10 &mgr;&Mgr;.

Die Konzentrationen von Enzym und Substrat werden so gewählt, daß weniger als 20 % des Substrates in Abwesenheit von Inhibitor verbraucht wird, (liefert z.B. eine maximale Substrathydrolyse von 10 bis 15 %), so daß die Enzymaktivität während des Tests annähernd konstant ist.

Die Konzentration von Substrat ist weniger als ein Zehntel der Michaelis-Konstante (K_m). Unter diesen Bedingungen wird sich der IC50 dicht an die Ki annähern. Dieses tritt auf, da die Cheng-Prusoff-Gleichung diese zwei Parameter in Beziehung setzt: IC50 = K,- (1 + S/Km), wobei (1 + S/Km) bei niedrigen Werten für S/K_m etwa 1 ist.

Der IC5o-Wert wird aus diesen Wertpunkten durch Anpassen der Werte in ein geeignetes Modell der Enzym-Inhibitor-Wechselwirkung abgeschätzt. Wenn diese Wechselwirkung dahingehend bekannt ist, daß sie einen einfachen Wettbewerb des Inhibitors mit dem Substrat betrifft, kann ein Modell mit zwei Parametern verwendet werden:

&bull; ·

:..BOEHME&f *&^;e.(3fifitClERT I: J -29-

wobei das Y die Enzymaktivität ist, die bei einer Inhibitorkonzentration von &khgr; gemessen wird, A die Aktivität in Abwesenheit des Inhibitors ist und B die IC50 ist. Siehe Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol, 22: 3099 - 3108 (1973).

Die Wirkungen von Inhibitoren der vorliegenden Erfindung auf die enzymatische Aktivität von Präparaten von PDE5 und PDE6, wie oben beschrieben, wurden in einem von zwei Tests geprüft, die voneinander prinzipiell auf Grundlage der Größe abwichen und im wesentlichen die gleichen Ergebnisse hinsichtlich der IC50-Werte lieferten. Beide Tests betrafen die Abwandlung des Verfahrens nach Wells et al., Biochim. Biophys. Ada, 384: 430 (1975). Der erste der Tests wurde in einem Gesamtvolumen von 200 &mgr;&idiagr;, durchgeführt, enthaltend 50 mM Tris, pH 7,5, 3 mM Mg-Acetat, 1 mM EDTA, 50 &mgr;g/mL Nukleotidase aus Schlangengift und 50 nM [³H]-cGMP (Amersham). Verbindungen der Erfindung wurden in DMSO aufgelöst, das schließlich in 2 % im Test vorlag. Die Tests wurden für 30 Minuten bei 30⁰C inkubiert und durch Zugabe von 800 &mgr;&idiagr;, von 10 mM Tris, pH 7,5,10 mM EDTA, 10 mM Theophyllin, 0,1 mM Adenosin und 0,1 mM Guanosin abgestoppt. Die Mischungen wurden auf 0,5 mL QAE-Sephadex-Säulen geladen und mit 2 mL 0,1 M Formiat (pH 7,4) eluiert. Die eluierte Radioaktivität wurde durch Szintillationszählen im Optiphase Hisafe 3 gemessen.

Ein zweiter PDE-Test auf Mikrotiterplatte wurde unter Verwendung von Multiscreen-Platten und einem Vakuumverteiler entwickelt. Der Test (100 &mgr;&igr;) enthielt 50 mM Tris, pH 7,5, 5 mM Mg-Azetat, 1 mM EDTA und 250 &mgr;g/mL Nukleotidase aus Schlangengift. Die anderen Bestandteile der Reaktionsmischung waren wie oben beschrieben. Am Ende der Inkubation wurde das Gesamtvolumen der Tests auf eine QAE-Sephadex-Mikrosäulenplatte durch Filtration geladen. Freie Radioaktivität wurde mit 200 &mgr;&igr; Wasser eluiert, von dem 50 &mgr;&idiagr;, AIiquots durch Szintillationszählen analysiert wurden, wie oben beschrieben.

Die folgenden Beispiele werden dargestellt, um die Herstellung der beanspruchten Erfindung weiter zu erläutern. Der Umfang der vorliegenden Erfindung ist nicht so aufzufassen, daß er nur aus den folgenden Beispielen bestünde.

Beispiel 1

Die Verbindung der Strukturformel (I) wurde wie in US Patent 5,859,006 beschrieben hergestellt und mittels Feuchtgranulierung in Tabletten formuliert. Povidon wurde in Wasser gelöst, um eine 10 %ige Lösung herzustellen. Die aktive Verbindung, mikrokristalline Zellulose, Croscarmellose-Natrium (vernetzte Carboxymethylzellulose-Na) und Natriumlaurylsulfat in einen hoch scherenden Mixer gegeben und für 2 Minuten gemischt. Die Puder wurden mit der Povidonlösung und extra Wasser, wie erforderlich, um die Granulierung zu vervollständigen, feucht granuliert. Die erhaltene Mischung wurde in einem Wirbelschichttrockner mit Einlaßluft bei 7O⁰C ± 5⁰C getrocknet, bis der Verlust beim Trocknen unterhalb 2,5 % lag. Die Granula wurden durch ein Comil mit geeignetem Rost (oder einem Sieb) hindurchtreten gelassen und zu einem geeigneten Mischer gegeben. Das außergranuläre Croscarmellose-Natrium und Natriumlaurylsulfat und das kolloidale wasserfreie Silica wurden durch ein geeignetes Sieb (z.B. 500 Mikron) hindurchtreten gelassen, zu dem Mischer gegeben und 5 Minuten gemischt. Magnesiumstearat wurde hinzugegeben und für 2 Minuten gemischt. Die Mischung wurde auf eine Zielpressung/Gewicht von 250 mg unter Verwendung eines 9 mm runden normalen konkaven Werkzeugsatzes gepreßt.

Die Kerntabletten wurden mit einer wässrigen Suspension Opadry OY-S-7322 und Verwendung einer Accelacota (oder ähnlichen Beschichtungspfanne) überzogen, unter Verwendung von Einlaßluft bei 5O⁰C bis 7O⁰C, bis das Tablettengewicht um annähernd 8 mg erhöht war. Opadry OY-S-7322 enthält Methylhydroxypropylzellulose Ph.Eur., Titandioxid Ph.Eur., GIycerintriacetat USP. Opadry erhöht das Gewicht jeder Tablette auf etwa 258 mg. Die Menge der pro Tablette aufgebrachten Filmbeschichtung kann geringer als die angegebene sein, abhängig von der Verfahrenseffizienz.

Die Tabletten werden in Blisterpackungen gefüllt und von einer Packungsbeilage begleitet, die die Sicherheit und Wirksamkeit der Verbindung beschreibt.

Bestandteil	Formulierungen (mg pro Tablette)	5	q.s.	5,00
Selektiver PDE5-Inhibitorl)	1	5	2,50
Hydroxypropylmethylzellulosephthalat	1	213,87	0,50
Mikrokristalline Zellulose	221,87	5,00	1,25
Croscarmellose-Natriurn	5,00	2,50	250,00
Natriumlaurylsulfat	2,50	9,38	Etwa 8 mg
Sulfat Povidon K30	9,38
Gereinigtes Wasser, USP (Wasser zur Besprühung)	q.s.
Croscarmelose-Natrium	5,00
Natriumlaurylsulfat	2,50
Kolloidales wasserfreies Silica	0,50
Magnesiumstearat	1,25
Zwischensumme gesamter Kern	250,00
(Filmbeschichtung Opadry OY-S-7322)	etwa 8 mg

Verbindung der Strukturformel (I)

Beispiel 2

Die folgende Formel wird zur Herstellung einer fertiggestellten Dosierungsform verwendet, die 10 mg der Verbindung der Strukturformel (I) enthält.

&bull; ·

&bull; ·

&bull; ·

&bull;&bull;ÖOEHMERT i bc -32-

1:

Inhaltsstoff	Menge (mg)
Granulierung
	10,00
Selektiver PDE5-Inhibitorl}	153,80
Laktosemonohydrat	25,00
Laktosemonohydrat (sprühgetrocknet)	4,00
Hydroxypropylzellulose	9,00
Croscarmellose-Natrium	1,75
Hydroxypropylzellulose (EF)	0,70
Natriumlaurylsulfat	35,00
Äußere Puder	37,50
	7,00
Mikrokristalline Zellulose (granulär-102)	1,25
Croscarmellose-Natrium	Gesamt 250 rag
Magnesiumstearat (pflanzlich)	Filmbeschichtung (annähernd) 11,25

Gereinigtes Wasser, USP, wird bei der Herstellung der Tabletten verwendet. Das Wasser wird während des Verfahrens entfernt und minimale Spiegel verbleiben im fertiggestellten Erzeug

Die Tabletten werden unter Verwendung eines Feuchtgranulierungsverfahrens hergestellt. Eine schrittweise Beschreibung des Verfahrens ist folgendermaßen. Das Arzneimittel und Arzneimittelträger, die zu granulieren sind, werden zur Sicherheit gesiebt. Der selektive PDE5-Inhibitor wird mit Laktosemonohydrat (sprühgetrocknet), Hydroxypropylzellulose, Croscarmellulose-Natrium und Laktosemonohydrat trockengemischt. Die erhaltene Pudermischung wird mit einer wässrigen Lösung Hydroxypropylzellulose und Natriumlaurylsulfat mit

einem Powrex oder anderem geeigneten hochscherenden Granulator granuliert. Zusätzliches Wasser kann zugegeben werden, um den erwünschten Endpunkt zu erreichen. Eine Mühle kann verwendet werden, um die Feuchtgranulierung zu zerkleinern und das Trocknen zu erleichtern. Die Feuchtgranulierung wird entweder mit einem Wirbelschichtrockner oder einem Trockenofen getrocknet. Wenn das Material einmal getrocknet ist, kann es klassiert werden, um große Agglomerate zu entfernen. Mikrokristalline Zellulose, Croscarmellose-Natrium und Magnesiumstearat werden zur Sicherheit gesiebt und zu den trocken klassierten Granula zugegeben. Diese Arzneimittelträger und die trockene Granulierung werden mit einer Taumeltrommel, einem Bandmischer oder anderer geeigneter Mischausrüstung bis zur Einheitlichkeit gemischt. Das Mischverfahren kann in zwei Phasen getrennt werden. Die mikrokristalline Zellulose, Croscarmelose-Natrium und die trockene Granulierung werden zu dem Mischer gegeben und während der ersten Phase gemischt, gefolgt von der Zugabe des Magnesiumstearates zu dieser Granulierung und einer zweiten Mischungsphase.

Die gemischte Granulierung wird dann mit einer Rotationspreßmaschine in Tabletten gepreßt. Die Kerntabletten werden mit einer wässrigen Suspension der geeigneten Farbmischung in einer Beschichtungspfanne, (z.B. Accela Cota) filmbeschichtet. Die überzogenen Tabletten können mit Talkum leicht bestäubt werden, um die Handhabungseigenschaften der Tabletten zu verbessern.

Die Tabletten werden in Plastikbehälter gefüllt (30 Tabletten/Behälter) und von einer Pakkungsbeilage begleitet, die die Sicherheit und Wirksamkeit der Verbindung beschreibt.

Beispiel 3

Die folgende Formel wird zur Herstellung einer fertiggestellten Dosierungsform von 5 mg der Verbindung der Strukturformel (I) verwendet.

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Inhaltsstoff	Menge (mg)	2,50
Granulierung		79,395
Selektiver PDE5-Inhibitor1}	12,50
Laktosemonohydrat	2,00
Laktosemonohydrat (sprühgetrocknet)	4,50
Hydroxypropylzellulose	0,875
Croscarmellose-Natrium	0,35
Hydroxypropylzellulose (EF)
Natriumlaurylsulfat	18,75
Äußere Puder	3,50
Mikrokristalline Zellulose (granulär-102)	0,63
Croscarmellose-Natrium	Gesamt 125 mg
Magnesiumstearat (pflanzlich)	Filmbeschichtung (annähernd) 6,875

Die Dosierungsform nach Beispiel 3 wurde in identischer Art und Weise wie die Dosierungsform nach Beispiel 2 hergestellt.

Beispiel 4

Lösungskapsel	Inhaltsstoff	mg/Kapsel	10	Prozentgehalt (%)
Selektiver PDES-Inhibitor1'	490	2
PEG400 NF	500	98
Füllgewicht	100

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Die Gelatinekapseln werden durch Pumpen eines genauen Füllvolumens vorgelöster Arzneirnttelformulierung in die teilweise verschlossene Ausnehmung einer Kapsel genau gefüllt. Sofort im Anschluß an die Einspritzfüllung der Arzneimittellösungsformulierung wird die Kapsel vollständig heißgesiegelt.

Die Kapseln werden in Plastikbehälter gefüllt und von einer Packungsbeilage begleitet.

Beispiel 5

Diese Untersuchung war eine zufällig verteilte, doppelt blinde, Placebo-kontrollierte Arzneimittelwechselwirkungsstudie der klinischen Pharmakologie mit zweifach überkreuztem Aufbau, die die hämodynamischen Wirkungen der gleichzeitigen Verabreichung eines selektiven PDE5-Inhibitors, des Studienarzneimittels, abschätzt (d.h. der Verbindung der Strukturformel (I)) und kurz wirkender Nitrate auf gesunde männliche Freiwillige. In dieser Studie erhielten die Personen entweder das Studienarzneimittel bei einer Dosis von 10 mg oder ein Placebo während sieben Tagen täglich. Am sechsten oder siebten Tag erhielten die Personen Nitroglycerin (0,4 mg) unter die Zunge, während sie auf dem Rücken auf einem Kipptisch lagen. Das Nitroglycerin wurde drei Stunden nach der Dosierung des Studienarzneimittels verabreicht und alle Personen hielten die Nitroglycerintablette unter ihrer Zunge, bis sie sich vollständig auflöste. Die Personen wurden auf 70° mit dem Kopf oben alle 5 Minuten für insgesamt 30 Minuten mit Messung von Blutdruck und Pulsfrequenz gekippt. Unter den 22 gesunden männlichen Personen (Alter von 19 bis 60 Jahre) gab es keine Abbruche, die in diese Studie eingingen.

In einer vorläufigen Analyse dieser Studie wurde das Studienarzneimittel gut vertragen und es gab keine ernstlichen abträglichen Ereignisse. Es gab keine mit dem Studienarzneimittel verbundene Veränderungen der Laborsicherheitsüberprüfungen oder 12-adrigen ECGs. Die üblichsten abträglichen Ereignisse waren Kopfschmerzen, Dyspepsie und Rückenschmerzen.

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Die Studie belegte minimale Wirkungen auf den mittleren systolischen Blutdruck und auf die mittlere maximale Absenkung des systolischen Blutdruckes, die durch Nitroglycerin hervorgerufen wurde, und die maximale Absenkung des systolischen Blutdruckes, die durch Nitroglycerin hervorgerufen wurde, bei allen Patienten.

Beispiel 6

In zwei zufällig verteilten, doppelt blinden, Placebo-kontroliierten Studien wurde die Verbindung der Strukturformel (I) im Dosisbereich von sowohl täglicher Dosierung als auch in der Therapie nach Bedarf für sexuelle Begegnungen und Verkehr in der Hausumgebung an dafür bedürftige Patienten verabreicht. Dosen von 5 bis 20 mg der Verbindung der Strukturformel (I) waren wirksam und zeigten keine Errötung und keine Berichte von Sehanomalitäten. Es wurde gefunden, daß eine 10 mg Dosis der Verbindung der Strukturformel (I) vollständig wirksam war und nur minimale Nebenwirkungen aufwies (kein Erröten und keine Berichte über Blausehen).

Die Erektionsfunktion wurde anhand des International Index of Erectile Function (IIEF) (Rosen et al., Urology, 49, S. 822 - 830 (1997)), Tagebücher sexueller Vorhaben und einer allgemeinen Frage nach Befriedigung geprüft. Die Verbindung der Strukturformel (I) verbesserte die Erektionsfunktion beträchtlich, wie sie von allen Endpunkten geprüft wurde. Bei Dosierungskuren sowohl "nach Bedarf als auch täglich verbesserte die Verbindung der Strukturformel (I) die Erektionsfunktion beträchtlich in Dosen zwischen 1 und 20 mg.

Beispiel 7

Eine dritte klinische Studie war eine zufällig verteilte, doppelt blinde, Placebo-kontrollierte Studie, die eine Verbindung der Strukturformel (I) (Studienarzneimittel) verwendete, die &ldquor;nach Bedarf an Patienten mit männlicher erektiler Funktionsstörung verabreicht wurde. Das Studienarzneimittel wurde über eine Zeitdauer von 8 Wochen bei der Behandlung der männlichen erektilen Funktionsstörung (EF) verabreicht. Die erektile Funktionsstörung (EF) ist als

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die andauernde Unfähigkeit definiert, eine Erektion zu erzielen und/oder beizubehalten, die angemessen ist, um eine befriedigende sexuelle Leistung zu erlauben.

Die Dosierung &ldquor;nach Bedarf ist definiert als Verabreichung des Studienarzneimittels mit Unterbrechungen vor der erwarteten sexuellen Aktivität.

Die Studienpopulation bestand aus 212 Männern, im Alter wenigstens 18 Jahre, mit leichter bis schwerer erektiler Funktionsstörung. Das Studienarzneimittel wurde oral als Tabletten von Copräzipitat verabreicht, das gemäß Butlers US Patent Nr. 5,985,326 hergestellt wurde. Das Studienarzneimittel wurde in 2 mg, 5 mg, 10 mg und 25 mg Dosen verabreicht, &ldquor;nach Bedarf und nicht mehr als einmal alle 24 Stunden. Die Behandlung mit allen Nitraten, Azol-Antifungiziden (z.B. Ketozonazol oder Itrazonazol), Warfarin, Erythromycin oder Antiandrogenen war während keiner Zeit der Studie erlaubt. Keine anderen genehmigten oder experimentellen Medikationen, Behandlungen oder Vorrichtungen, die zum Behandeln von EF verwendet werden, waren erlaubt. Einundvierzig Personen wurde in Placebo verabreicht.

Die zwei primären Wirksamkeitsvariablen waren die Fähigkeit einer Person, seine Partnerin zu penetrieren und seine Fähigkeit, eine Erektion während des Verkehrs beizubehalten, wie durch den International Index of Erectile Function (IIEF) gemessen wurde. Der EGEF-Fragebogen enthält 15 Fragen und ist ein kurzes, verläßliches Maß der Erektionsfunktion. Siehe R. C. Rosen et al., Urology, 49, S. 822 - 830 (1997).

Sekundäre Wirksamkeitsvariablen waren Bewertungen des IIEF-Bereiches der erektilen Funktion, der Orgasmusfunktion, des sexuellen Begehrens, der Befriedigung beim Verkehr und Gesamtbefriedigung; die Fähigkeit des Patienten eine Erektion zu erzielen, die Fähigkeit, seinen Penis in die Vagina seiner Partnerin einzuführen, die Vervollständigung des Verkehrs mit Ejakulation, Zufriedenheit mit der Härte seiner Erektion und Gesamtzufriedenheit, alles wie durch das Sexual Encounter Profile (SEP)-Tagebuch gemessen und eine allgemeine Einschätzungsfrage, die am Ende des Behandlungszeitraums gestellt wurde. Das SEP ist ein Ta-

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gebuchinstrument des Patienten, das jede sexuelle Begegnung während des Verlaufs der Studie dokumentiert.

Die Sicherheitsanalyse der Studie schloß alle eingetragenen Personen ein und wurde durch Einschätzen aller berichteten abträglichen Ereignisse und Veränderungen klinischer Laborwerte, Lebenszeichen, physikalischer Untersuchungsergebnisse und Ergebnisse von Elektrocardiogrammen überprüft.

Am Endpunkt waren die Patienten, die ihre Penetrationsfähigkeit (IIEF Frage 3) als &ldquor;fast immer oder immer" einstuften, folgendermaßen: 17,5 % in der Placebogruppe, 38,1 % in der 2 mg Gruppe, 48,8 % in der 5 mg Gruppe, 51,2 % in der 10 mg Gruppe und 83,7 % in der 25 mg Gruppe. Der Vergleich enthüllte statistisch bedeutende Unterschiede in der Veränderung der Penetrationsfähigkeit zwischen Placebo und allen Dosisspiegeln des Studienarzneimittels.

Am Endpunkt waren die Patienten, die ihre Fähigkeit, eine Erektion während des Verkehrs beizubehalten (IIEF Frage 4) als &ldquor;fast immer oder immer" einstuften, wie folgt: 10,0 % in der Placebogruppe, 19,5 % in der 2 mg Gruppe, 32,6 % in der 5 mg Gruppe, 39,0 % in der 10 mg Gruppe und 69,0 % in der 25 mg Gruppe. Der Vergleich enthüllte statistisch bedeutende Unterschiede in der Veränderung der Penetrationsfähigkeit zwischen Placebo und den drei höheren Dosisspiegeln des Studienarzneimittels.

Insgesamt bewies diese Studie, daß alle vier Dosen des Studienarzneimittels, nämlich 2 mg, 5 mg, 10 mg und 25 mg &ldquor;nach Bedarf genommen, eine bedeutende Verbesserung bei der sexuellen Leistung von Männern mit erektiler Funktionsstörung relativ zum Placebo hervorrufen, wie durch das IIEF von Patiententagebüchern, die die Häufigkeit erfolgreichen Verkehrs und Befriedigung beim Verkehr prüften, und durch eine Gesamtprüfung geprüft wurde. Diese Verbesserung wurde in einer breiten Studienpopulation nachgewiesen, die Patienten einschloß, die alle Schweregrade erektiler Funktionsstörung aufzeigten. Die abträglichsten Ereignisse waren in ihrer Schwere mild oder mäßig. Bedeutsamerweise waren keine abträgli-

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chen Ereignisse mit Bezug auf Störungen beim Farbsehen von einem Patienten berichtet worden.

Die zusammengenommenen Ergebnisse der klinischen Studien zeigte, daß die Verabreichung einer Verbindung der Strukturformel (I) wirksam die männliche erektile Funktionsstörung behandelt,.wie in der nachfolgenden Tabelle dargestellt.

IIEF erektiler Funktionsbereich (Änderungen von Grundlinie)	Einheitsdosis	&eegr;	Mittel ± SA	P
Placebo	131	0,8 ± 5,3
2 mg	75	3,9 ±6,1	< 0,001
5 mg	79	6,6 ±7,1	< 0,001
10 mg	135	7,9 ±6,7	< 0,001
25 mg	132	9,4 ± 7,0	< 0,001
50 mg	52	9,8 ±5,5	< 0,001
100 mg	49	8,4 + 6,1	< 0,001

&eegr; ist die Anzahl der Personen, SA ist die Standardabweichung.

Jedoch wurde aus den zusammengenommenen klinischen Studien beobachtet, daß der Prozentgehalt während der Behandlung auftretender abträglicher Ereignisse mit ansteigender Einheitsdosis der Verbmdung der Strukturformel (I) anstieg, wie in der folgenden Tabelle erläutert ist:

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Während der Behandlung auftretende abträgliche Ereignisse (%)	Ereignis	Placebo	2	5	10	25	50	100
Einheitsdosis (mg)	Kopfschmerz	10	12	10	23	29	34	46
Dyspepsie	6	3	14	13	19	20	25
Rückenschmerzen	5	3	3	15	18	24	22
Muskelschmerzen	3	0	3	9	16	20	29
Schnupfen	3	7	3	4	4	0	2
Bindehautentzündung	1	0	1	1	0	2	5
Ödem des Augenlids	0	0	0	1	1	2	3
Erröten	0	0	0	<1	0	3	7
Sehanomalitäten	0	0	0	0	0	0	0

Die obige Tabelle zeigt einen Anstieg abträglicher Ereignisse bei 25 mg bis 100 mg Einheitsdosen. Entsprechend müssen die abträglichen Ereignisse, die für 25 mg bis 100 mg Dosen beobachtet wurden, berücksichtigt werden, sogar obwohl die Wirksamkeit bei der Behandlung von EF bei 25 mg bis 100 mg Dosen beobachtet wurde.

In Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung behandelt eine Einheitsdosis von etwa 1 bis 20 mg, vorzugsweise etwa 2 bis etwa 20 mg, bevorzugter etwa 5 bis etwa 20 mg und am bevorzugtesten etwa 5 bis etwa 15 mg, bis zu einem Maximum von 20 mg pro 24 Stunden Zeitdauer verabreicht, sowohl wirksam EF als auch das Auftreten abträglicher Nebenwirkungen minimiert oder vermieden wird. Wichtigerweise wurden keine Sehanomalitäten berichtet und Erröten wurden im wesentlichen vermieden. Überraschenderweise können auch Personen, die sich einer Nitrattherapie unterziehen, auch auf EF durch das Verfahren und die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung zusätzlich zur Behandlung von EF bei Personen mit einem Minimum abträglicher Nebenwirkungen mit etwa 1 bis etwa 20 mg Einheitsdosen der Verbindung der Strukturformel (I) behandelt werden.

Die Prinzipien, bevorzugten Ausfuhrungsformen und Arten der Ausführung der vorliegenden Erfindung wurden in der vorangegangenen Beschreibung beschrieben. Die Erfindung, die hier geschützt werden soll, ist jedoch nicht so auszulegen, daß sie auf eine besondere offenbarte Form beschränkt sei, da sie als eher erläuternd denn als einschränkend betrachtet werden sollen. Abweichungen und Veränderungen können von Fachleuten vorgenommen werden, ohne vom Geist der Erfindung abzuweichen.

Claims (15)

1. Arzneimittel zur Behandlung sexueller Funktionsstörungen, dadurch gekennzeichnet, daß es als aktiven Inhaltsstoff mindestens eine Verbindung umfaßt, die die Phosphodiesterase 5 mit einer IC₅₀ von wenigstens 100-fach niedriger hemmt als die Phosphodiesterase 6, die die Phosphodiesterase 5 mit einer IC₅₀ von wenigstens 1000-fach niedriger hemmt als die Phosphodiesterase 1c und eine IC₅₀ für PDE5 von unterhalb 10 nM aufweist.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der aktive Inhaltsstoff (6R- trans)-6-(1,3-Benzodioxol-5-yl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methylpyrazino[1', 2':1,6]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion ist.

3. Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die sexuelle Funktionsstörung aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus erektiler Funktionsstörung des Mannes und mangelnder Vigilität der Frau besteht.

4. Hergestellter Artikel für die menschliche pharmazeutische Verwendung, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5- Inhibitors umfaßt, mit

a) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der ICso-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

b) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied bei den IC₅₀-Werten für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE1c,

c) einem IC50 für die Inhibierung von PDE5 von weniger als 10 nM und

d) ausreichender Bioverfügbarkeit, um in etwa 1 bis etwa 20 mg oralen Einheitsdosierungen wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die darstellt, daß der PDE5-Inhibitor zweckmäßig ist, um die sexuelle Funktionsstörung bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln, und die frei von Gegenanzeigen ist, die mit der Verabreichung von organischen Nitraten in Beziehung stehen; und

c) einen Behälter.

5. Hergestellter Artikel zur menschlichen pharmazeutischen Verwendung, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die von etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5- Inhibitors umfaßt, mit

a) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der IC₅₀-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

b) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der IC₅₀-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDElc,

c) einem IC₅₀ von geringer als 10 nM und

d) einer ausreichenden Bioverfügbarkeit, um bei etwa 1 bis etwa 20 mg oraler Einheitsdosierung wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die erläutert, daß der PDE5-Inhibitor zweckmäßig ist, um die sexuelle Funktionsstörung bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln und der ein organisches Nitrat verwendet; und

c) einen Behälter.

6. Hergesteller Artikel für die menschliche pharmazeutische Verwendung, der umfaßt:

a) eine orale Dosierungsform, die etwa 1 bis etwa 20 mg eines selektiven PDE5- Inhibitors umfaßt, mit

a) einem wenigstens 100-fachen Unterschied der IC₅₀-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE6,

b) einem wenigstens 1000-fachen Unterschied der IC₅₀-Werte für die Inhibierung von PDE5 gegenüber PDE1c,

c) einem IC₅₀ unterhalb 10 nM, und

d) einer ausreichenden Bioverfügbarkeit, um in etwa 1 bis etwa 20 mg oralen Einheitsdosierungen wirksam zu sein;

b) eine Packungsbeilage, die erläutert, daß der PDE5-Inhibitor geeignet ist, die sexuelle Funktionsstörung bei einem Patienten mit Bedarf dafür zu behandeln und der an einem Zustand leidet, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus einer Netzhautkrankheit, Neigung zum Erröten, Neigung zu Sehanomalitäten, dekompensierter Herzinsuffizienz der Klasse 1, einem Herzinfarkt 90 Tage oder mehr vor Beginn der Behandlung auf sexuelle Funktionsstörung und Zusammenstellung daraus besteht; und

c) einen Behälter.

7. Artikel nach Anspruch 6, bei dem die Netzhautkrankheit diabetische Retinopathie oder Retinitis pigmentosa ist.

8. Artikel nach Anspruch 6, bei dem die Packungsbeilage mitteilt, daß Häufigkeiten des Errötens niedriger als bei 2% der behandelten Patienten ist.

9. Artikel nach einem der vorangehenden Ansprüche, bei dem die orale Dosierungsform etwa 5 mg, etwa 10 mg oder etwa 20 mg eines selektiven PDE5-Inhibitors umfaßt.

10. Artikel nach einem der vorangehenden Ansprüche, bei dem die Packungsbeilage eine maximale Dosierung des selektiven PDE5-Inhibitors von etwa 20 mg pro 24 Stunden Zeitdauer angibt.

11. Pharmazeutische Formulierung, die an die Behandlung einer sexuellen Funktionsstörung bei einem Patienten angepaßt ist, der mit einem organischen Nitrat behandelt wird, die als wirksamen Inhaltsstoff einen selektiven PDE5-Inhibitor umfaßt.

12. Pharmazeutische Formulierung, die an die Behandlung einer sexuellen Funktionsstörung bei einem Patienten angepaßt ist, der zum Erröten neigt, die als aktiven Inhaltsstoff einen selektiven PDE5-Inhibitor umfaßt.

13. Pharmazeutische Formulierung, die an die Behandlung der sexuellen Funktionsstörung bei einem Patienten angepaßt ist, der unter einer Netzhautkrankheit leidet, die als aktiven Inhaltsstoff einen selektiven PDE5-Inhibitor umfaßt.

14. Pharmazeutische Formulierung, die an die Behandlung einer sexuellen Funktionsstörung bei einem Patienten angepaßt ist, der unter einer dekompensierten Herzinsuffizienz der Klasse 1 oder einem Herzinfarkt 90 Tage oder mehr vor Beginn der Behandlung auf sexuelle Funktionsstörung leidet, die als aktiven Inhaltsstoff einen selektiven PDE5- Inhibitor umfaßt.

15. Artikel nach einem der Ansprüche 1 bis 7, bei dem der selektive PDE5-Inhibitor die Struktur aufweist: