DE19834308A1 - Verfahren zur Herstellung von Säureamiden - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von SäureamidenInfo
- Publication number
- DE19834308A1 DE19834308A1 DE1998134308 DE19834308A DE19834308A1 DE 19834308 A1 DE19834308 A1 DE 19834308A1 DE 1998134308 DE1998134308 DE 1998134308 DE 19834308 A DE19834308 A DE 19834308A DE 19834308 A1 DE19834308 A1 DE 19834308A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- carboxylic acid
- proteases
- protease
- production
- organic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 8
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 7
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 11
- 108090001092 clostripain Proteins 0.000 claims description 10
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 8
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 5
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 5
- -1 carboxylic acid esters organic acid Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 claims 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 6
- AVFWZLGQLMJESO-UHFFFAOYSA-N N(C(=N)N)C1=CC=C(C=C1)OC(C(CC)C1=CC=CC=C1)=O Chemical compound N(C(=N)N)C1=CC=C(C=C1)OC(C(CC)C1=CC=CC=C1)=O AVFWZLGQLMJESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 4
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 4
- 108010024026 Nitrile hydratase Proteins 0.000 description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006179 O-acylation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- DPBLXKKOBLCELK-UHFFFAOYSA-N pentan-1-amine Chemical compound CCCCCN DPBLXKKOBLCELK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- ULEBESPCVWBNIF-BYPYZUCNSA-N L-arginine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N ULEBESPCVWBNIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 1
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710097834 Thiol protease Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006470 amide elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- WTSXICLFTPPDTL-UHFFFAOYSA-N pentane-1,3-diamine Chemical compound CCC(N)CCN WTSXICLFTPPDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100684 pentylamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur biokatalytischen Herstellung eines organischen Säureamids. DOLLAR A Im Unterschied zu allgemein angewendeten chemischen Verfahren oder solchen, die Amidasen als Enzyme einsetzen, werden Proteasen als Biokatalysatoren eingesetzt. DOLLAR A Der Vorteil besteht in hohen Ausbeuten, nebenproduktfreier Synthese, einfacher Reinigung und des nur minimalen Schutzerfordernisses der Edukte. DOLLAR A Das Syntheseverfahren ist allgemein anwendbar.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur biokatalytischen Herstellung von organisch
chemischen Verbindungen, die eine Säureamidbindung enthalten, und die
Verwendung von Biokatalysatoren.
Zur Herstellung von Säureamiden als Vorstufen für verschiedenartige kommerzielle
Produkte werden gegenwärtig hauptsächlich verschiedene organisch-chemische
Verfahren (vgl. Übersicht: Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Band
E5, Carbonsäuren und Carbonsäure-Derivate (Hrsg.: J. Falbe) 1985, S. 934-1312)
eingesetzt. Im Verlauf chemischer Amidsynthesen, insbesondere von solchen mit
zusätzlichen funktionellen Gruppierungen, werden sehr oft unerwünschte
Nebenreaktionen beobachtet, wenn man sich nicht bei den Reaktionen zur Knüpfung
der Amidbindung einer selektiven Schutzgruppen-Taktik bedient. Ein besonders
schwerwiegender Nachteil herkömmlicher chemischer Verfahren ist das ungelöste
Problem des Erhalts der chiralen Integrität. Da sich Stereoisomere äußerst schwierig
vollständig separieren lassen, jedoch die optische Reinheit des Syntheseproduktes
für eine spezifische Wirkung eine notwendige Voraussetzung ist, besitzt die
industrielle Synthese von Säureamiden mittels organisch-chemischer Verfahren
erhebliche Nachteile. Demgegenüber existiert ein zunehmender Bedarf an chiralen
Amiden und Umweltaspekte fordern darüber hinaus nachdrücklich, milde
biokatalytische Produktionsprozesse zu entwickeln.
Gegenwärtig sind zwei biokatalytische Methoden für die Produktion einfacher Amide
bekannt. Bei der ersten Methode werden unter der Katalyse der Nitrilhydratase (EC
4.2.1.84) organische Nitrile (im weiteren nur als Nitrile bezeichnet) zu den
entsprechenden Amiden hydrolysiert, während beim zweiten Verfahren geeignete
Enzyme die Ammonolyse von Carbonsäureestern katalysieren.
Die chemische Konversation von Nitrilen ist mit verschiedenen Nachteilen belastet,
wie das Erfordernis von stark sauren oder basischen Reaktionsbedingungen, einen
hohen Energieverbrauch, die Bildung unerwünschter Beiprodukte, niedrige
Ausbeuten sowie durch Umweltprobleme bei der Generierung der Abfallsalze. Die
Biokonversation von Nitrilen (vgl. Übersichten: T. Nagasawa u. H. Yamada (1989)
TIBTECH 7, 153-158; J.M. Wyatt u. E.A. Linton, The industrial potential of microbial
nitrile biochemistry, in D. Evered und S. Harnett (eds.) Cyanide compounds in
biology, Ciba Foundation Symposium 1988, 140, 32-48) wird durch die in der Natur
weitverbreiteten Nitril-hydrolysierenden Enzyme katalysiert. Nachteilig ist hierbei,
daß z. B. Nitrilhydratase-produzierende Mikroorganismen daneben noch Enzyme
synthetisieren, die in einem Folgeschritt das Amid zur Säure hydrolysieren und somit
unerwünschte Nebenprodukte bilden (A. de Raadt, N. Klempier, K. Faber, H.
Griengl, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1992, 1, (1) 137-140). Außerdem sind selektive
Nitril-hydrolysierende Enzyme gegenwärtig nicht als kommerzielle Produkte
erhältlich.
Das zweite, nur wenig genutzte Verfahren der enzymatischen Amidbildung durch
Ammonolyse von Carbonsäureestern ist insofern eingeengt, daß nur am
Amidstickstoff unsubstituierte Amide hergestellt werden können.
Aufgabe der Erfindung ist die biokatalytische Herstellung von organischen
Säureamiden unter möglichst vollständigem Ausschluß von Nebenreaktionen.
Diese Aufgabe wird gelöst mit einem Verfahren gemäß Anspruch 1.
Gemäß der vorliegenden Erfindung erfolgt die biokatalytische Herstellung eines
organischen Säureamids nicht wie gewöhnlich mit Amidasen, sondern entgegen der
vorherrschenden Meinung der Fachwelt mit Proteasen, wobei durch eine
programmierte Substratmanipulation die übliche Spezifität der eingesetzten Protease
ausgeschaltet und dadurch die Katalyse der Knüpfung von Säureamidbindungen
auch nichtpeptidischer Edukte ermöglicht. Da Proteasen gewöhnlich
Peptidbindungen, d. h. substituierte Amide spalten, und diese proteolytischen
Aktivitäten mit der Substratspezifität für spezifische Seitenkettenfunktionen der
Aminosäurebausteine gekoppelt sind, sind die erfindungsgemäßen Ergebnisse sehr
überraschend.
Vorzugsweise werden für die erfindungsgemäßen biokatalytischen Amidsynthesen
die bei Amidsynthesen durchaus üblichen Edukte in Form eines Carbonsäure- und
eines primären Aminderivates eingesetzt. Als Carbonsäurederivate sind Ester
geeignet, deren Abgangsgruppen Spezifitätsdeterminanten der eingesetzten Serin-
oder Cysteinprotease enthalten und nachfolgend als Substratmimetika bezeichnet
werden (Tab. 1). Dies schließt den Einsatz ladungstragender Esterabgangsgruppen
für Proteasen mit einer nativen Spezifität für hydrophobe Aminosäureseitenketten
ein, die ebenfalls hochspezifische Enzym-Substratkontakte vermitteln können. Die
gesamte Verfahrensweise, d. h. die Wahl der Edukte, des Puffers, des Mediums, der
Reaktionszeit, etc., ist verhältnismäßig unkritisch und kann vom Fachmann für
biokatalytische Transformationen einfach ermittelt werden.
Als Carbonsäurederivate können auch chirale Substratmimetika eingesetzt werden.
In der Regel müssen an der Umsetzung nicht involvierte funktionelle Gruppen
während der enzymatischen Amidknüpfungsreaktion nicht temporär blockiert
werden.
Als Aminkomponente eignen sich in Abhängigkeit von der eingesetzten Protease
Edukte mit einer vorrangig primären aber auch sekundären Aminofunktion, wobei
andere acylierbare Drittfunktionen frei vorliegen können.
Die Wahl eventueller Derivatisierungen und Ausgangssubstrate richtet sich dabei
grundsätzlich nach dem gewünschten Endprodukt und dem eventuellen Erfordernis,
Nebenreaktionen zu verhindern. Diese Wahl liegt daher im üblichen fachmännischen
Handeln.
Das erfindungsgemäße Verfahren offenbart aufgrund der Stereo- und
Regioselektivität gegenüber der bisherigen Verwendung chemischer Verfahren den
besonderen Vorteil, daß Edukte mit chiralen Zentren und anderen acylierbaren
Funktionen ohne experimentell aufwendige und zu zusätzlichen Nebenreaktionen
führenden temporären selektiven Blockierungsmaßnahmen eingesetzt werden
können.
Erfindungsgemäß werden organische Säureamide bevorzugt hergestellt aus einem
Carbonsäurederivat, dessen in Reaktion tretende Carboxylgruppe als Ester mit einer
Spezifitätsdeterminante in der Abgangsgruppe vorliegt, die dem eingesetzten Enzym
entspricht, und einem organischen Aminderivat, bei dem die in Reaktion tretende
Aminofunktion unblockiert ist, in Gegenwart einer Protease, z. B. einer Thiolprotease
wie Clostripain in Lösung oder Suspension bei Raumtemperatur, die ggf. Anteile
organischer Lösungsmittel und/oder Puffersubstanzen enthält, oder auch bei tieferen
Temperaturen.
Vorzugsweise wird die Reaktion in einem wäßrigen Medium durchgeführt, wobei u. U.
tiefe Temperaturen vorteilhaft sind.
Die gebildeten Amide können mit geeigneten chromatographischen oder extraktiven
Techniken präparativ separiert werden. Nach beendeter Aufarbeitung können ggf.
vorhandene Schutzgruppen nach bekannten Methoden entfernt werden.
Im Gegensatz zu beschriebenen Verfahren zur Synthese von Amiden unter Nutzung
anderer Enzyme wird durch den erfinderischen Einsatz von Proteasen in
Kombination mit den Substratmimetika die Gefahr unerwünschter Amidspaltungen
verhindert. Erstmalig wird für die Stoffklasse der organischen Säureamide ihre
biokatalytische Synthese mit Proteasen durchgeführt. Der Effekt der Erfindung ist
insofern überraschend als mit proteolytischen Enzymen eine nichtpeptidische
Amidknüpfung nicht erwartet werden konnte.
Die mit der vorliegenden Erfindung herstellbaren Amide eignen sich, ggf. nach
Abspaltung von essentiellen Schutzgruppen, z. B. als Wirkstoffe bzw.
Zwischenprodukte von Wirkstoffen.
Die vorliegende Erfindung wird im folgenden anhand von Beispielen näher
ausgeführt.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 34 mM Argininamid (effektiver Anteil:
1/1,72) und 30 µM Chymotrypsin werden bei 25°C unter pH-Kontrolle gerührt. Nach
10 min wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in Methanol/Wasser
(1 : 1; v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch bestimmt und
beträgt 90% d. Th. Parallelansätze nach 1, 2 und 5h führten zu den gleichen
Ausbeuten.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 39 mM Alanylalaninamin (effektiver
Anteil: 1/1,96) und 30 µM Chymotrypsin werden bei 25°C unter pH-Kontrolle gerührt.
Nach 10 min wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in
Methanol/Wasser (1 : 1; v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch
bestimmt und beträgt 80% d. Th. Parallelansätze nach 1, 2 und 5h führten zu den
gleichen Ausbeuten.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 109 mM Pentylamin (effektiver Anteil:
1/448) und 7 µM Clostripain werden bei 25°C unter pH-Kontrolle gerührt. Nach 1h
wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in Methanol/Wasser (1 : 1;
v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch bestimmt und beträgt
81.5% d. Th. Parallelansätze nach 2, 5 und 24h führten zu den gleichen Ausbeuten.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 38 mM 1-Amino-3-propanol (effektiver
Anteil: 1/92) und 7 µM Clostripain werden bei 25°C unter pH-Kontrolle gerührt. Nach
1 h wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in Methanol/Wasser
(1:1; v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch bestimmt und beträgt
39.0% d. Th. Eine O-Acylierung wurde nicht festgestellt. Parallelansätze nach 2, 5
und 24h führten zu den gleichen Ausbeuten.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 25 mM 3-Amino-1,2-propandiol
(effektiver Anteil: 1/27) und 7 µM Clostripain werden bei 25°C unter pH-Kontrolle
gerührt. Nach 1h wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in
Methanol/Wasser (1 : 1; v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch
bestimmt und beträgt 81.1% d. Th. Eine O-Acylierung wurde nicht festgestellt.
Parallelansätze nach 2, 5 und 24h führten zu den gleichen Ausbeuten.
1 ml 0,05 M HEPES-Puffer, pH 8, enthaltend 0,1 M NaCl, 0,01 M CaCl2, 2 mM
Phenylbuttersäure-4-guanidinophenylester, 51,7 mM 1,3-Diaminopentan (effektiver
Anteil: 1/160) und 7 µM Clostripain werden bei 25°C unter pH-Kontrolle gerührt.
Nach 1h wird die Reaktionslösung mit 0,5 proz. Trifluoressigsäure in
Methanol/Wasser (1 : 1; v/v) auf pH 2 gebracht. Die Ausbeute wird HPLC analytisch
bestimmt und beträgt 35% d. Th. Eine N-Acylierung der primären Aminofunktion in
Position 3 wurde nicht festgestellt. Parallelansätze nach 2, 5 und 24h führten zu den
gleichen Ausbeuten.
Claims (5)
1. Verfahren zur biokatalytischen Herstellung eines organischen Säureamids,
dadurch gekennzeichnet,
daß man als Biokatalysator eine geeignete Protease gekoppelt mit einem
Substratmimetikum, einsetzt.
2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet,
daß man das Säureamid aus einem Carbonsäureester mit der
Spezifitätsdeterminante der eingesetzten Protease in der Esterabgangsgruppe
und einem Aminderivat aufbaut.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2,
dadurch gekennzeichnet,
daß man die Reaktion in einem wäßrigen Medium durchführt.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß man als Protease Clostripain, Trypsin, Chymotrypsin, V8 Protease, Subtilisin
bzw. Mutanten dieser Enzyme und als Substratmimetika Carbonsäureester mit
den enzymspezifischen Spezifitätsdeterminanten in der Esterabgangsgruppe
einsetzt.
5. Verwendung von Proteasen als Biokatalysatoren,
dadurch gekennzeichnet,
daß durch Proteasen in Verbindung mit Carbonsäureestern die Herstellung von
organischen Säureamiden katalysiert wird, soweit die Carbonsäureester
ihrerseits Substratmimetika darstellen.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1998134308 DE19834308C2 (de) | 1998-07-30 | 1998-07-30 | Verfahren zur Herstellung von Säureamiden |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1998134308 DE19834308C2 (de) | 1998-07-30 | 1998-07-30 | Verfahren zur Herstellung von Säureamiden |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19834308A1 true DE19834308A1 (de) | 2000-02-03 |
| DE19834308C2 DE19834308C2 (de) | 2002-11-07 |
Family
ID=7875808
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE1998134308 Expired - Fee Related DE19834308C2 (de) | 1998-07-30 | 1998-07-30 | Verfahren zur Herstellung von Säureamiden |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE19834308C2 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002026772A1 (de) * | 2000-09-27 | 2002-04-04 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur selektiven modifizierung von peptiden und proteinen |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DD218904A1 (de) * | 1983-10-04 | 1985-02-20 | Univ Leipzig | Verfahren zur herstellung von peptiden |
| DE3803124A1 (de) * | 1988-02-03 | 1989-08-10 | Degussa | Verfahren zur enzymatischen peptidsynthese |
| EP0359399B1 (de) * | 1988-08-12 | 1994-03-16 | Carlbiotech Ltd. A/S | Verfahren zur enzymatischen Herstellung von Dipeptiden |
| DE19523151A1 (de) * | 1995-02-03 | 1996-08-14 | Basf Ag | Racematspaltung primärer und sekundärer heteroatomsubstituierter Amine durch Enzym-katalysierte Acylierung |
| US5580751A (en) * | 1990-09-14 | 1996-12-03 | Carlsberg A/S | Process for the preparation of C-terminally amidated peptides |
| DE19727517A1 (de) * | 1997-06-30 | 1999-01-07 | Basf Ag | Racematspaltung von Aminosäureestern durch Enzym-katalysierte Acylierung |
-
1998
- 1998-07-30 DE DE1998134308 patent/DE19834308C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DD218904A1 (de) * | 1983-10-04 | 1985-02-20 | Univ Leipzig | Verfahren zur herstellung von peptiden |
| DE3803124A1 (de) * | 1988-02-03 | 1989-08-10 | Degussa | Verfahren zur enzymatischen peptidsynthese |
| EP0359399B1 (de) * | 1988-08-12 | 1994-03-16 | Carlbiotech Ltd. A/S | Verfahren zur enzymatischen Herstellung von Dipeptiden |
| US5580751A (en) * | 1990-09-14 | 1996-12-03 | Carlsberg A/S | Process for the preparation of C-terminally amidated peptides |
| DE19523151A1 (de) * | 1995-02-03 | 1996-08-14 | Basf Ag | Racematspaltung primärer und sekundärer heteroatomsubstituierter Amine durch Enzym-katalysierte Acylierung |
| DE19727517A1 (de) * | 1997-06-30 | 1999-01-07 | Basf Ag | Racematspaltung von Aminosäureestern durch Enzym-katalysierte Acylierung |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002026772A1 (de) * | 2000-09-27 | 2002-04-04 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur selektiven modifizierung von peptiden und proteinen |
| DE10047857A1 (de) * | 2000-09-27 | 2002-04-18 | Univ Leipzig | Verfahren zur selektiven biokatalytischen Modifizierung von Peptiden und Proteinen |
| DE10047857B4 (de) * | 2000-09-27 | 2004-11-18 | Universität Leipzig | Verfahren zur selektiven biokatalytischen Modifizierung von Peptiden und Proteinen |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19834308C2 (de) | 2002-11-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0720655B1 (de) | Racematspaltung primärer und sekundärer amine durch enzym-katalysierte acylierung | |
| DE69914458T2 (de) | Verfahren zur enzymatischen auflösung von laktamen | |
| EP0475255A2 (de) | Verfahren zur Herstellung optisch reiner (S)-alpha-[(tert-Butylsulfonyl)methyl]hydrozimtsäure | |
| DE3733198A1 (de) | Enzymatisches verfahren zur herstellung von dipeptiden | |
| EP0382113B1 (de) | Verfahren zur enzymatischen Trennung von 2-Amino-4-methylphosphinobuttersäurederivaten | |
| DE19834308A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Säureamiden | |
| EP0890649B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von acylierten Aminosäureestern und Racematspaltung von Aminosäureestern durch Enzym-katalysierte Acylierung | |
| DE19955283A1 (de) | Verfahren zur enantioselektiven Gewinnung von Aminosäuren und Aminosäurederivaten unter Verwendung von Racemisierungskatalysatoren | |
| EP0581250B1 (de) | Verfahren zur Biotechnischen Herstellung von L-Thienylalaninen in enantiomerenreiner Form aus 2-Hydroxy-3-thienyl-acrylsäuren und ihre Verwendung | |
| DE69715955T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von optisch-aktiven Aminopolycarbonsäuren | |
| DE10220740A1 (de) | Verfahren zur enzymatischen Herstellung enantiomerenangereicherter beta-Aminosäuren | |
| DE10220739A1 (de) | Verfahren zur enzymatischen Herstellung enantiomerenangereicherter ß-Amionsäuren | |
| IE820220L (en) | Amino protected asp-phe alkyl ester | |
| DE69905218T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von L-Allysin Acetal | |
| DE69633619T2 (de) | Verfahren zur herstellung von l-2-aminoadipinsäure | |
| EP0534992B1 (de) | Verfahren zur herstellung von peptiden | |
| DE19529211C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von (R)-tertiär-Leucin | |
| EP0759426B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven 1-Aryl-alkylaminen | |
| EP0529601B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von optisch aktivem Vinylglycin in freier oder geschützter Form über eine enzymatische, enantioselektive Hydrolyse | |
| DE3803124C2 (de) | ||
| DE60123513T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von D-Asparaginderivaten | |
| EP0623680B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Peptiden und Verwendung | |
| EP0944730A1 (de) | Verfahren zur herstellung von d-prolinderivaten | |
| DE4325746C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Peptiden | |
| DE3706724A1 (de) | Verfahren zur zuechtung eines mikroorganismus des genus pseudomonas, welcher aminosaeureracemase bildet |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| 8122 | Nonbinding interest in granting licenses declared | ||
| D2 | Grant after examination | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |