DE19707497A1

DE19707497A1 - Reaction bag device for carrying out multistage cultivation / separation processes and / or reactions

Info

Publication number: DE19707497A1
Application number: DE19707497A
Authority: DE
Original assignee: Boehringer Mannheim GmbH
Current assignee: Roche Diagnostics GmbH
Priority date: 1996-08-16
Filing date: 1997-02-25
Publication date: 1998-02-19
Also published as: AU4118497A; JP2000504942A; CA2264206A1; WO1998007829A8; CA2264205A1; EP0941307A1; EP0918846A1; AU4299297A; JP2000503546A; WO1998007829A2; WO1998007828A1

Abstract

The present invention relates to the use of flexible plastic tanks for extracorporeal operations in gene therapy.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Reaktionsbeutelvor richtung zur Durchführung von mehrstufigen Kultivierungs/Sepa rations-Vorgängen und/oder Reaktionen, beispielsweise zum Züchten von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulie renden Zellen.The present invention relates to a reaction bag direction to carry out multi-stage cultivation / Sepa rations processes and / or reactions, for example to Cultivation of anti-tumor cells or anti-tumor cells stimulie cells.

Eine Vorgehensweise zur Behandlung von Tumoren ist die Züch tung von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulierende Zellen ex vivo, d. h. außerhalb des menschlichen Körpers. Nach durchgeführter Züchtung, d. h. entsprechend intensiver Vermeh rung, der Antitumor-Zellen werden diese wieder in den mensch lichen Körper injiziert.One approach to treating tumors is breeding device of antitumor cells or antitumor cells stimulating Cells ex vivo, i. H. outside the human body. After performed breeding, d. H. correspondingly more intensive tion, the anti-tumor cells will return them to humans body injected.

Um derartige Zellen außerhalb des menschlichen Körpers züchten zu können, wird einem Patienten eine Blutprobe entnommen, in der in geringer Anzahl auch Zellen vorhanden sind, die auf einen zu behandelnden Tumor spezifisch ansprechen, die soge nannten Antitumor-Zellen.To grow such cells outside the human body to be able to take a blood sample from a patient, in which are also present in small numbers on specifically address a tumor to be treated, the so-called called anti-tumor cells.

Diese in der Blutprobe enthaltenen Antitumor-Zellen können in einem Züchtgefäß in einer Nährlösung dadurch zur Vermehrung angeregt werden, daß sie mit ganzen Tumorzellen oder sogenann ten Vesikeln der Tumorzellen in Kontakt gebracht werden.These antitumor cells contained in the blood sample can be in a culture vessel in a nutrient solution for reproduction be excited that they with whole tumor cells or so-called vesicles of the tumor cells are brought into contact.

Tumorzellen können beispielsweise aus dem in einem Patienten vorhandenen Tumorgewebe erhalten werden. Durch Lyse der Tumor zellen und anschließendes Filtrieren wird die Erbinformation entfernt, so daß man nur noch die Zellmembran oder Bruchstücke dieser zurückbehält, die die vorangehend erwähnten Vesikel bilden. Diese Vesikel weisen die für Tumorzellen charakteri stischen Oberflächenmerkmale auf, so daß sie von Antitumor-Zellen als Tumorzellen erkannt werden und zu einer dementspre chenden Anregung der Vermehrung der Antitumor-Zellen führen. Da die Vesikel lediglich über die Oberflächenmerkmale der Tumorzellen, jedoch nicht mehr über die Erbinformation der Tumorzellen verfügen, können sie nicht z. B. durch Abgabe von Inhibitoren auf die sich vermehrenden Antitumor-Zellen einwir ken.Tumor cells can, for example, be found in a patient existing tumor tissue can be obtained. By lysis the tumor cells and subsequent filtering becomes the genetic information removed so that you only have the cell membrane or fragments this retains the vesicles mentioned above form. These vesicles have the characteristics of tumor cells ical surface features so that they are from anti-tumor cells recognized as tumor cells and corresponding to a appropriate stimulation of the multiplication of the antitumor cells. Since the vesicles only have the surface characteristics of the Tumor cells, but no longer via the genetic information of the Tumor cells have, they can not z. B. by submitting Inhibitors act on the multiplying antitumor cells ken.

Während der Wachstums- bzw. Vermehrungsstimulation der Antitu mor-Zellen durch Tumorzellen oder Vesikel wird die Nährlösung ausgetauscht, und die Zellen werden auf mehrere Züchtbehälter portioniert.During the stimulation of growth or multiplication of the antitu mor cells through tumor cells or vesicles become the nutrient solution exchanged, and the cells are placed on several growth tanks portioned.

Ist die Vermehrung in ausreichendem Maße durchgeführt worden, so werden in einem Selektionsschritt die Antitumor-Zellen von einem unerwünschten Hintergrund getrennt. Hierzu werden die Antitumor-Zellen beispielsweise mit Hilfe von lyophilisierten oder auf sonstige Weise vorbereiteten Retroviren markiert. Diese Retroviren führen an der Oberfläche der Antitumor-Zellen zur Expression z. B. des l-NGFR-Rezeptors, der in einer nach folgenden Separationsstufe zur Anreicherung der Antitumor-Zellen beiträgt. Nach durchgeführter Separation, d. h. Anrei cherung der Antitumor-Zellen, ist es möglich, diese entweder erneut einer Separation zu unterziehen, um die Anreicherungs rate zu erhöhen, oder einem weiteren Wachstumsschritt zu un terziehen, beispielsweise unter Hinzufügung eines wachstums fördernden Mittels.If the propagation has been carried out to a sufficient extent, the antitumor cells of separated from an unwanted background. For this, the Antitumor cells, for example, with the help of lyophilized or other prepared retroviruses. These retroviruses run on the surface of the anti-tumor cells for expression z. B. the l-NGFR receptor, which in one after following separation stage for the enrichment of the anti-tumor cells contributes. After separation, d. H. Anrei If the antitumor cells are preserved, it is possible to either undergo another separation to enrichment rate increase, or a further growth step to un educate, for example with the addition of growth promoting agent.

Bei der Durchführung derartiger Kultivierungs/Separations-Vorgänge ebenso wie anderer mehrstufiger chemischer oder bio logischer Reaktionen ist es wichtig, daß die einzelnen Reak tionsstufen sowie die Übertragung von Materialien zwischen einzelnen Reaktionsstufen derart durchgeführt werden können, daß einerseits die Einbringung von Kontaminierungen in ein zelne Reaktionsstufen vermieden wird, daß andererseits jedoch eine Kontaminierung der Umgebung mit in einzelnen Reaktions stufen erzeugten Reaktionsprodukten vermieden werden kann. Darüber hinaus ist zur Anpassung derartiger mehrstufiger Vor gänge an verschiedene Erfordernisse eine relativ große Flexi bilität bei der Auswahl der verschiedenen Stufen erforderlich, um beispielsweise zusätzliche Reaktionsstufen hinzufügen zu können oder Reaktionsstufen weglassen zu können. Beispiels weise ist es bekannt, Reaktionen in Reaktionsbeuteln durch zuführen, die eine Eingabeöffnung für ein Ausgangsmaterial, eine Eingabeöffnung für die Reagenzien sowie eine Ausgabeöff nung aufweisen, aus der das durch die Reaktion des Aus gangsmaterials mit den Reagenzien erzeugte Produkt aus dem Beutel entnommen werden kann. Für jede Reaktion, d. h. jede Stufe, ist daher ein einziger Beutel vorgesehen, in den ver schiedene Materialien einzugeben sind bzw. aus dem Materialien zu entnehmen sind. Insbesondere beim Eingeben bzw. Entnehmen von jeweiligen Materialien besteht die Gefahr, daß durch diese Materialien die Umgebung kontaminiert wird oder daß Kontami nierungen in das Material eingebracht werden.When performing such cultivation / separation operations just like other multi-level chemical or bio logical reactions, it is important that the individual Reak stages as well as the transfer of materials between individual reaction stages can be carried out in such a way that on the one hand the introduction of contamination into a individual reaction stages is avoided, but on the other hand contamination of the environment with in individual reaction stage-generated reaction products can be avoided. In addition, to adapt such multi-stage before would have a relatively large flexi to meet different requirements required for the selection of the different levels, for example to add additional reaction stages to can or to be able to omit reaction stages. Example wise it is known to carry out reactions in reaction bags feed that an input opening for a starting material, an input opening for the reagents and an output opening have from which the result of the reaction of the off with the reagents produced product from the Bag can be removed. For each reaction, i.e. H. each Stage, therefore a single bag is provided in the ver different materials are to be entered or from which materials can be seen. Especially when entering or removing of respective materials there is a risk that through this Materials contaminate the environment or that contaminants nations into the material.

Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Reaktionsbeutelvorrichtung zur Durchführung von mehrstufigen Kultivierungs/Separations-Vorgängen und/oder Reaktionen, bei spielsweise zum Züchten von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulierenden Zellen, vorzusehen, mit der bei hoher Flexibilität hinsichtlich der durchzuführenden Stufen ein im wesentlichen kontaminierungsfreies Arbeiten ermöglicht wird.It is therefore an object of the present invention to Reaction bag device for carrying out multi-stage Cultivation / separation processes and / or reactions, at for example for growing anti-tumor cells or anti-tumor cells stimulating cells to be provided with those at high Flexibility with regard to the stages to be carried out essential contamination-free work is made possible.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe gelöst durch eine Reak tionsbeutelvorrichtung zur Durchführung von mehrstufigen Kultivierungs/Separations-Vorgängen und/oder Reaktionen, bei spielsweise zum Züchten von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulierenden Zellen, umfassend:According to the invention, this object is achieved by a reak tion bag device for carrying out multi-stage Cultivation / separation processes and / or reactions, at for example for growing anti-tumor cells or anti-tumor cells stimulating cells comprising:

- A plurality of reaction bag chambers in one Reaction bags, each came with a reaction bag always a source material for the respective level can be arranged and with reagents for the respective Stage for generating a reaction product of each step can be brought into contact,
- Output opening means for outputting a reaction products from each reaction bag chamber.

Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung werden also die Reaktio nen der einzelnen Stufen in einem Reaktionsbeutel mit mehreren Reaktionsbeutelkammern durchgeführt, in der einerseits zur Durchführung der Reaktion der jeweiligen Stufe ein Ausgangs material für die Stufen anordenbar und andererseits dieses Ausgangsmaterial in Kontakt mit einem Reagenz für die Stufe gebracht werden kann. Da die Reaktion also in einer vollstän dig abgeschlossenen Umgebung stattfinden kann, besteht nicht die Gefahr einer Kontaminierung der Umgebung oder Einbringung von Verunreinigungen in die Reaktion der jeweiligen Stufen. Die erfindungsgemäße Vorrichtung ist relativ einfach und ko stengünstig herstellbar und sieht aufgrund der Möglichkeit des beliebigen Hinzufügens bzw. Integrierens von zusätzlichen Reaktionsbeutelkammern in einen Vorgang bzw. das Herausnehmen einer Reaktionsbeutelkammer aus einem Vorgang eine hohe Flexi bilität bei der Durchführung von Reaktionen vor.In the device according to the invention, the reaction the individual stages in a reaction bag with several Reaction bag chambers carried out in the one hand for Carrying out the reaction of each stage an output material can be arranged for the steps and on the other hand this Starting material in contact with a reagent for the step can be brought. So since the reaction is complete dig closed environment does not exist the risk of contamination of the environment or introduction of impurities in the reaction of the respective stages. The device according to the invention is relatively simple and knockout inexpensive to manufacture and looks due to the possibility of any addition or integration of additional Reaction bag chambers in one process or the removal a reaction bag chamber from one process a high flexi in carrying out reactions.

Der in dem vorliegenden Text verwendete Ausdruck "Ausgangs material" ist derart zu verstehen, daß er jegliche Art von Material, d. h. Zellen und sonstiges biologisches oder chemi sches Material, umfaßt, das in einer jeweiligen Reaktionsstufe zu einem Reaktionsprodukt dieser Stufe weiterverarbeitet, ver mehrt oder verändert werden soll. In entsprechender Weise ist der in diesem Text verwendete Ausdruck "Reagenzien" derart zu verstehen, daß er jegliche Art von Material, d. h. biologi sches, chemisches oder sonstige Materialien, sowie Kombinatio nen verschiedener Materialien oder Reagenzien umfaßt, die in Zusammenwirkung mit dem Ausgangsmaterial der jeweiligen Stufe zu einer Weiterverarbeitung, Bearbeitung, Vermehrung o. dgl. des Ausgangsmaterials beitragen.The term "output." material "is to be understood in such a way that it can be Material, d. H. Cells and other biological or chemi cal material, included in a particular reaction step processed to a reaction product of this stage, ver should be increased or changed. In a similar way the term "reagents" used in this text understand that it can handle any type of material, i.e. H. biological chemical, chemical or other materials, as well as combinations encompasses various materials or reagents described in Interaction with the starting material of the respective stage for further processing, processing, multiplication or the like of the source material.

Wenigstens eine der Reaktionsbeutelkammern kann eine Eingabe öffnung zum Eingeben eines Ausgangsmaterials in diese von außen bezüglich des Reaktionsbeutels aufweisen und die Reak tionsbeutelkammern können in Sequenz zur Übertragung des Reak tionsprodukts einer in der Sequenz vorangehenden Reaktions beutelkammer als Ausgangsmaterial in wenigstens eine in der Sequenz folgende Reaktionsbeutelkammer ausgebildet sein. Da bei dieser Ausgestaltung das Reaktionsprodukt direkt zwischen den Reaktionsbeutelkammern übertragen wird und somit keinen Kontakt zur Umgebung bekommt, ist auf diese Art und Weise eine besonders sichere und kontaminationsfreie Durchführung der Reaktionen oder der Kultivierungs/Separations-Vorgänge gewähr leistet.At least one of the reaction bag chambers can have an input opening for inputting a starting material into this from have outside with respect to the reaction bag and the Reak Bag pouches can be used in sequence to transmit the reac tion product of a reaction preceding the sequence bag chamber as starting material in at least one in the Sequence following reaction bag chamber can be formed. There in this embodiment, the reaction product directly between is transferred to the reaction bag chambers and therefore none In this way, getting in touch with the environment is one Particularly safe and contamination-free implementation of the Reactions or the cultivation / separation processes granted accomplishes.

Um einen gesteuerten Transfer von Reaktionsprodukten bzw. Ausgangsmaterialien zwischen den verschiedenen Reaktonsbeutel kammern vorsehen zu können, wird vorgeschlagen, daß zwischen wenigstens zwei in der Sequenz aufeinanderfolgenden Reaktions beutelkammern öffenbare Fluidflußunterbrechungsmittel vorgese hen sind, vorzugsweise zerstörbare Fluidflußunterbrechungs mittel, welche eine Ausgabeöffnung der in der Sequenz vorange henden Reaktionsbeutelkammer bilden.For a controlled transfer of reaction products or Starting materials between the different reaction bags To be able to provide chambers, it is proposed that between at least two sequential reactions Bag chambers openable fluid flow interruption device hen, preferably destructible fluid flow interruption medium, which precedes an output opening of the in the sequence Form the reaction bag chamber.

Um nach Durchführung einer Reaktion Zugriff auf das dabei erzeugte Reaktionsprodukt zu erhalten, wird vorgeschlagen, daß wenigstens eine der Reaktionsbeutelkammern, vorzugsweise die in der Sequenz letzte Reaktionsbeutelkammer, eine Ausgabeöff nung zum Ausgeben des Reaktionsprodukts aus dieser nach außen bezüglich des Reaktionsbeutels aufweist.To access after doing a reaction To obtain generated reaction product, it is proposed that at least one of the reaction bag chambers, preferably that in the sequence last reaction bag chamber, an output opening to discharge the reaction product from the outside with respect to the reaction bag.

Ferner kann vorgesehen sein, daß bei zwei in der Sequenz auf einander folgenden Reaktionsbeutelkammern eine vorangehende Reaktionsbeutelkammer eine Ausgabeöffnung aufweist und eine nachfolgende Reaktionsbeutelkammer eine Eingabeöffnung auf weist. Dies ist insbesondere dann vorteilhaft, wenn das in der vorangehenden Reaktionsbeutelkammer gewonnene Reaktionsprodukt in einer externen Vorrichtung weiter verarbeitet wird und nachfolgend wieder in den in der Reaktionsbeutelvorrichtung durchzuführenden Vorgang einzubringen ist, nämlich in die nachfolgende Reaktionsbeutelkammer. It can further be provided that two in the sequence successive reaction bag chambers a previous one Reaction bag chamber has an output opening and one subsequent reaction bag chamber an input opening points. This is particularly advantageous if that in the previous reaction bag chamber obtained reaction product is further processed in an external device and subsequently again in the in the reaction bag device process to be carried out, namely in the subsequent reaction bag chamber.

Gemäß einer erfindungsgemäßen Ausgestaltung der Reaktionsbeu telvorrichtung kann diese wenigstens eine Reaktionsbeutelkam mer umfassen, die eine Reaktionsbeutelkammer für eine Mehrzahl von aufeinander folgenden Stufen ist, wobei jeweils das Reak tionsprodukt einer vorangehenden Stufe das Ausgangsmaterial für eine nachfolgende Stufe bildet. Bei derartiger Ausgestal tung bleibt also das zu verarbeitende, zu vermehrende o. dgl. Material in der wenigstens einen Reaktionsbeutelkammer enthal ten, so daß auch dabei kontaminationsfrei gearbeitet werden kann.According to an embodiment of the reaction bag according to the invention This device can have at least one reaction bag mer comprise a reaction bag chamber for a plurality of successive stages, with the Reak tion product of a previous stage the starting material for a subsequent stage. With such a configuration So what remains to be processed, increased or the like Contain material in the at least one reaction bag chamber ten, so that contamination-free work is also carried out can.

Bei Verwendung einer Reaktionsbeutelvorrichtung, die mehrere Reaktionsbeutelkammern enthält, kann das in den Reaktionsbeu telkammern enthaltene flüssige, fluidartige oder gallertartige Material, beispielsweise durch Abstreifen mit den Fingern, vorwärtstransportiert, d. h. in eine nächste Reaktionsbeutel kammer transportiert werden. Um dabei einen sehr effizienten Übertragungsvorgang zu gewährleisten, ohne dabei irgendwelches in einer Reaktionsbeutelkammer enthaltenes Reaktionsprodukt zu verlieren, wird vorgeschlagen, daß in der Sequenz aufeinander folgende Reaktionsbeutelkammern durch Trennwandungen vonein ander getrennt sind, die auf einen Fluidtransferbereich zwi schen den aufeinander folgenden Reaktionsbeutelkammern in einer Fluidtransferrichtung im wesentlichen trichterförmig zulaufen.When using a reaction bag device, the multiple Contains reaction bag chambers, the can in the reaction contained liquid, fluid-like or gelatinous Material, for example by wiping it with your fingers, transported forward, d. H. in a next reaction bag chamber are transported. To do a very efficient Ensure transfer process without doing anything reaction product contained in a reaction bag chamber lose, it is suggested that in the sequence on top of each other following reaction bag chambers by partitions from one another other are separated, which on a fluid transfer area between between the successive reaction bag chambers in a fluid transfer direction essentially funnel-shaped approach.

Insbesondere bei der Verwendung der erfindungsgemäßen Reak tionsbeutelvorrichtung zur Züchtung von Antitumor-Zellen ist es bei der Vermehrung von Antitumor-Zellen vorteilhaft, wenn das Ausgangsmaterial, das eine relativ geringe Anzahl an Anti tumor-Zellen enthält, in einem relativ kleinen Volumenbereich angesammelt wird, da eine Zunahme der Konzentration an Antitu mor-Zellen zu einem beschleunigten Wachstum führt. Um bei der erfindungsgemäßen Reaktionsbeutelvorrichtung in wenigstens einer Reaktionsbeutelkammer eine derartige Ansammlung bzw. Konzentration vorsehen zu können, wird vorgeschlagen, daß in wenigstens einer Reaktionsbeutelkammer wenigstens ein durch vorzugsweise V-förmig aufeinander zulaufende Wandungsab schnitte gebildeter Ausgangsmaterial/Reaktionsprodukt-Ansam melbereich gebildet ist. Dabei ist vorteilhafterweise der wenigstens eine Ausgangsmaterial/Reaktionsprodukt-Ansammelbe reich sich in der Fluidtransferichtung erweiternd ausgebildet.Especially when using the reak according to the invention tion bag device for the cultivation of antitumor cells it is beneficial in the multiplication of antitumor cells if the starting material that has a relatively small number of anti contains tumor cells in a relatively small volume range is accumulated since an increase in the concentration of antitu mor cells leads to accelerated growth. To at the Reaction bag device according to the invention in at least such a collection or a reaction bag chamber To be able to provide concentration, it is proposed that in at least one reaction bag chamber at least one through preferably V-shaped toward each other cuts formed starting material / reaction product accumulation Melbereich is formed. It is advantageously the at least one starting material / reaction product accumulation richly expanding in the direction of fluid transfer.

Zur Vereinfachung der Herstellung der Reaktionsbeutelvorrich tung wird vorgeschlagen, daß die trichterförmig aufeinander zulaufenden Trennwandungen wenigstens bereichsweise die Wan dungsabschnitte des Ausgangsmaterial/Reaktionsprodukt-Ansam melbereichs bilden.To simplify the manufacture of the reaction bag device tion is proposed that the funnel-shaped one on top of the other tapering partitions at least in some areas the tub sections of the starting material / reaction product accumulation form the range.

Wird das Wachstum bzw. die Vermehrung von Antitumor-Zellen in mehreren in Sequenz angeordneten Reaktionsbeutelkammern durch geführt, beispielsweise jeweils unter Hinzufügung verschiede ner Wachstumsstimulanzen, so muß darauf geachtet werden, daß die sich vermehrenden Antitumor-Zellen eine bestimmte Konzen tration nicht überschreiten, da dies zu einer Hemmung des Wachstums bzw. der Vermehrung führt; d. h. mit zunehmendem Fortschreiten des Wachstumsvorgangs ist dafür zu sorgen, daß für die sich vermehrenden Antitumor-Zellen mehr Volumen zur Verfügung steht. Dies kann in einfacher Weise dadurch erreicht werden, daß in der Sequenz aufeinander folgende Reaktionsbeu telkammern ein zunehmendes Kammervolumen aufweisen.Is the growth or multiplication of antitumor cells in several reaction bag chambers arranged in sequence led, for example, each adding various ner growth stimulants, it must be ensured that the multiplying antitumor cells have a certain concentration tration, as this will inhibit the Leads to growth or multiplication; d. H. with increasing Progress of the growth process is to ensure that more volume for the multiplying antitumor cells Available. This can be achieved in a simple manner be that in the sequence successive Reaction telkammern have an increasing chamber volume.

Um in einer Reaktionsbeutelkammer das Ausgangsmaterial mit den Reagenzien der jeweiligen Stufe in Kontakt bringen zu können, ist es gemäß einer besonders einfachen und praktischen Aus führungsform möglich, daß wenigstens eine der Reaktionsbeutel kammern bereits vor Eingabe des Ausgangsmaterials mit den Reagenzien vorbeschickt ist. Bei einer derartigen Ausgestal tung muß also bei der nachfolgenden Verwendung lediglich das Ausgangsmaterial eingegeben werden.To in a reaction bag chamber the starting material with the To be able to bring reagents of the respective stage into contact, it is according to a particularly simple and practical way leadership possible that at least one of the reaction bags chambers before entering the source material with the Reagents are loaded. With such a configuration tion must therefore only in the subsequent use Starting material can be entered.

Ferner ist es möglich, daß bei wenigstens einer Reaktionsbeu telkammer wenigstens eine Reagenzienkammer vorgesehen ist, die durch öffenbare Fluidflußunterbrechungsmittel, vorzugsweise zerstörbare Fluidflußunterbrechungsmittel, in Reagenzienüber tragungsverbindung mit der Reaktionsbeutelkammer bringbar ist, und daß in der Reagenzienkammer die Reagenzien für die jewei lige Stufe enthalten sind. Bei einer derartigen Ausgestaltung können die für eine jeweilige Stufe vorgesehenen Reagenzien, beispielsweise nach Einbringen des Ausgangsmaterials für die Stufe, zu einem beliebigen Zeitpunkt in Kontakt mit dem Aus gangsmaterial gebracht werden.It is also possible that at least one reaction bag telkammer at least one reagent chamber is provided, the by openable fluid flow interruption means, preferably destructible fluid flow disrupting agents, in reagents can be brought into connection with the reaction bag chamber, and that in the reagent chamber the reagents for each level are included. With such a configuration the reagents intended for each stage, for example after introducing the starting material for the Stage, at any time in contact with the off bring gear.

Dabei ist es beispielsweise möglich, daß wenigstens eine Reak tionsbeutelkammer mit einer Mehrzahl von Reagenzienkammern für verschiedene Stufen versehen ist, die zur sequentiellen Durch führung der mehreren Stufen nacheinander in Reagenzienüber tragungsverbindung mit der Reaktionsbeutelkammer bringbar sind. Es werden dabei also die Reaktionen mehrerer aufeinander folgender Stufen in einer einzigen Reaktionsbeutelkammer durchgeführt und jeweils lediglich die in den verschiedenen Reagenzienkammern enthaltenen Reagenzien sequentiell entspre chend der Reihenfolge der Stufen in die Reaktionsbeutelkammer übertragen, d. h. das bei einer Reaktion zwischen Reagenzien und Ausgangsmaterial erzeugte Reaktionsprodukt bildet dabei das Ausgangsmaterial für die Reaktion der nächsten Stufe, das dann mit den Reagenzien für die nächste Stufe in Kontakt zu bringen ist.It is possible, for example, that at least one reak tion bag chamber with a plurality of reagent chambers for different stages is provided, for sequential through transfer of the several stages in succession into reagents Carrying connection can be brought with the reaction bag chamber are. So there will be the reactions of several to each other following stages in a single reaction bag chamber carried out and each only in the different Reagents contained in the reagent chambers correspond sequentially according to the order of the steps in the reaction bag chamber transferred, d. H. that in a reaction between reagents and starting material generated reaction product forms the starting material for the next stage reaction, the then in contact with the reagents for the next stage bring is.

Ferner kann bei wenigstens einer Reaktionsbeutelkammer eine dicht verschließbare Reagenzieneingabeöffnung zum Eingeben von Reagenzien in die Reaktionsbeutelkammer aus einem externen Behälter vorgesehen sein.Furthermore, in at least one reaction bag chamber tightly sealable reagent entry opening for entering Reagents into the reaction bag chamber from an external Containers may be provided.

Zur Durchführung der vorangehend angesprochenen Separation bei der Antitumor-Zellen-Züchtung kann ferner zwischen wenigstens zwei in der Sequenz aufeinander folgenden Reaktionsbeutelkam mern eine Separationssäulenvorrichtung zum Fluidtransfer durch diese hindurch vorgesehen sein. To perform the separation mentioned above the anti-tumor cell culture can further be between at least two reaction bags in sequence came mern through a separation column device for fluid transfer these can be provided.

Bei einer besonders vorteilhaften Ausführungsform der erfin dungsgemäßen Reaktionsbeutelvorrichtung ist die Separations säulenvorrichtung in eine die wenigstens zwei Reaktionsbeutel kammern trennende Wandung eingegliedert, d. h. selbst zur Durchführung der Separation ist es nicht erforderlich, das Reaktionsprodukt einer Stufe nach außen zu führen, durch eine Separationssäule o. dgl. hindurchzuleiten und das daraus ge wonnene, konzentrierte Material wieder in einen Beutel ein zugeben, beispielsweise zur weiteren Zellvermehrung.In a particularly advantageous embodiment of the inventions The reaction bag device according to the invention is the separations column device in one of the at least two reaction bags partitions dividing chambers, d. H. even for It is not necessary to carry out the separation To lead the reaction product to the outside by one stage Separation column or the like. To pass through and the ge recovered, concentrated material in a bag admit, for example for further cell proliferation.

Gemäß einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung ist eine Reaktionsbeutelvorrichtung zur Durchführung von gewünsch tenfalls mehrstufigen Kultivierungs/Separations-Vorgängen und/oder Reaktionen, beispielsweise zum Züchten von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulierenden Zellen, vorgese hen, umfassend einen Reaktionsbeutel mit einer Reaktionsbeu telkammer, in der ein Ausgangsmaterial für eine Stufe anorden bar und mit Reagenzien für die Stufe zum Erzeugen eines Reak tionsprodukts der Stufe in Kontakt bringbar ist, wobei der Reaktionsbeutel eine Eingabeöffnung zum Eingeben von Ausgangs material in diesen sowie eine Ausgabeöffnung zum Ausgeben eines in dem Reaktionsbeutel erzeugten Reaktionsprodukts auf weist und wobei die Reaktionsbeutelvorrichtung die Reagenzien enthält und mit diesen zu einer Reaktionseinheit vorbereitet ist.According to another aspect of the present invention a reaction bag device for performing desired If necessary, multi-stage cultivation / separation processes and / or reactions, for example for growing anti-tumor cells or anti-tumor cell stimulating cells hen comprising a reaction bag with a reaction bag telkammer in which to arrange a raw material for a stage bar and with reagents for the stage to generate a reak tion product of the stage can be brought into contact, the Reaction bag an input opening for entering output material in these as well as a dispensing opening for dispensing of a reaction product generated in the reaction bag has and wherein the reaction bag device, the reagents contains and prepared with these to a reaction unit is.

Bei dieser erfindungsgemäßen Ausgestaltung eines Reaktions beutels muß also lediglich das Ausgangsmaterial in die Reak tionsbeutelkammer eingebracht werden und kann dort zur Reak tion mit den bereits in jedem Reaktionsbeutel bereitgehaltenen Reagenzien gebracht werden, d. h. auch bei einer derartigen Reaktionsbeutelvorrichtung ist die Gefahr des Einbringens von Kontaminierungen über die Reagenzien verringert.In this embodiment of a reaction according to the invention So all you have to do is put the raw material in the reak tion bag chamber can be introduced and there to the reac tion with those already in each reaction bag Reagents are brought d. H. even with such Reaction bag device is the risk of introducing Contaminant contamination decreased.

Zur Vorbereitung der Reaktionseinheit kann beispielsweise vorgesehen sein, daß die Reaktionsbeutelkammer mit den Reagen zien vorbeschickt ist. To prepare the reaction unit, for example be provided that the reaction bag chamber with the reagents is preloaded.

Alternativ oder zusätzlich ist es möglich, daß der Reaktions beutel wenigstens eine Reagenzienkammer umfaßt, die durch öf fenbare Fluidflußunterbrechungsmittel, vorzugsweise zerstör bare Fluidflußunterbrechungsmittel, in Reagenzienübertragungs verbindung mit der Reaktionsbeutelkammer bringbar ist, und daß in der wenigstens einen Reagenzienkammer die Reagenzien für die jeweilige Stufe enthalten sind.Alternatively or additionally, it is possible for the reaction bag comprises at least one reagent chamber, which is open by openable fluid flow interruption means, preferably destroy bare fluid flow interrupter, in reagent transfer connection to the reaction bag chamber can be brought, and that in the at least one reagent chamber the reagents for the respective level are included.

Gemäß einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung kann vor gesehen sein, daß die Reaktionsbeutelkammer eine Reaktions beutelkammer für eine Mehrzahl von aufeinander folgenden Stu fen ist, wobei jeweils das Reaktionsprodukt einer vorangehen den Stufe das Ausgangsmaterial für eine nachfolgende Stufe bildet, d. h. auch bei derartiger Ausgestaltung kann in einem Reaktionsbeutel, d. h. in einer einzigen Reaktionsbeutelkammer, eine Mehrzahl an Reaktionsstufen aufeinanderfolgend durchge führt werden, ohne daß jeweils das Reaktionserzeugnis aus dem Beutel ausgegeben werden muß.According to a particularly advantageous embodiment, can be seen that the reaction bag chamber is a reaction bag chamber for a plurality of successive stu fen, the reaction product being preceded by one the stage is the starting material for a subsequent stage forms, d. H. even with such a configuration can in one Reaction bags, d. H. in a single reaction bag chamber, a plurality of reaction stages in succession are carried out without the reaction product from the Bags must be issued.

Dabei ist es vorteilhaft, wenn der Reaktionsbeutel eine Mehr zahl von Reagenzienkammern für verschiedene Stufen umfaßt, welche Reagenzienkammern zur sequentiellen Durchführung der mehreren Stufen nacheinander in Reagenzienübertragungsverbin dung mit der Reaktionsbeutelkammer bringbar sind.It is advantageous if the reaction bag has a more number of reagent chambers for different stages, which reagent chambers for sequential execution of the several stages in a row in reagent transfer compound can be brought with the reaction bag chamber.

Zusätzlich ist es möglich, daß bei der Reaktionsbeutelkammer ferner eine dicht verschließbare Reagenzieneingabeöffnung zum Eingeben von Reagenzien in die Reaktionsbeutelkammer aus einem externen Behälter vorgesehen ist. Auch somit lassen sich mehr stufige Reaktionen in einem Reaktionsbeutel durchführen, wenn beispielsweise eine erste Reaktion durch Einbringen eines Ausgangsmaterials in einen - beispielsweise vorbeschickten - Reaktionsbeutel durchgeführt wird, das Reaktionserzeugnis dieser Stufe in der Reaktionsbeutelkammer belassen wird und nachfolgend durch Eingeben von Reagenzien aus einem externen Behälter eine zweite Reaktionsstufe durchgeführt wird. In addition, it is possible for the reaction bag chamber also a tightly sealable reagent inlet for Enter reagents into the reaction bag chamber from one external container is provided. So you can do more perform step reactions in a reaction bag if for example a first reaction by introducing a Starting material in a - for example pre-loaded - Reaction bag is carried out, the reaction product this stage is left in the reaction bag chamber and subsequently by entering reagents from an external Container a second reaction stage is carried out.

Um das Ausgangsmaterial in möglichst einfacher Art und Weise in die jeweilige Reaktionsbeutelkammer einbringen zu können und/oder Ausgangsmaterial aus einer Reaktionsbeutelkammer entnehmen zu können, wird vorgeschlagen, daß die Eingabe- und/ oder die Ausgabeöffnungen durch Ventile, zerstörbare oder wie derverschließbare Verschlußmittel o. dgl. verschlossen sind.To the starting material in the simplest possible way to be able to insert into the respective reaction bag chamber and / or starting material from a reaction bag chamber it is suggested that the input and / or the discharge openings through valves, destructible or like the closable closure means or the like are closed.

Die erfindungsgemäße Reaktionsbeutelvorrichtung ist vorzugs weise aus flexiblem, vorzugsweise gasdurchlässigem jedoch flüssigkeitsundurchlässigem, Kunststoff hergestellt. Dies trägt einerseits zu einer besonders einfachen und kostengün stigen Herstellbarkeit bei, andererseits ist die Gefahr einer Beschädigung derartiger Reaktionsbeutelvorrichtungen aus fle xiblem Kunststoff, beispielsweise durch Zerbrechen, praktisch ausgeschlossen.The reaction bag device according to the invention is preferred wise from flexible, but preferably gas-permeable liquid-impermeable, plastic manufactured. This on the one hand contributes to a particularly simple and inexpensive constant manufacturability, on the other hand, there is a risk of Damage to such reaction bag devices from fle xiblem plastic, for example by breaking, practical locked out.

Ferner ist die jeweilige Reaktionsbeutelkammer vorzugsweise mit der wenigstens einen Reagenzienkammer integral ausgebil det.Furthermore, the respective reaction bag chamber is preferred integrally formed with the at least one reagent chamber det.

Um bei der Verwendung der erfindungsgemäßen Reaktionsbeutel vorrichtung zur Zellvermehrung die Vermehrung immer in einer geeigneten Umgebung durchführen zu können, wird vorgeschlagen, daß die jeweilige Reaktionsbeutelkammer zur Eingabe frischer Nährlösung bzw. zur Entnahme verbrauchter Nährlösung ausgebil det ist.To when using the reaction bag according to the invention device for cell multiplication the multiplication always in one suitable environment, it is suggested that the respective reaction bag chamber for fresher input Nutrient solution or used to remove used nutrient solution det.

Beispielsweise kann die jeweilige Reaktionsbeutelkammer einen durch eine Kanüle o. dgl. durchdringbaren Membranbereich auf weisen, der nach Entfernen der Kanüle einen fluiddichten Ab schluß selbsttätig wieder herstellt.For example, the respective reaction bag chamber can be one through a cannula or the like have a fluid-tight Ab after removing the cannula restores automatically.

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner ein modulares Reak tionsbeutelsystem, umfassend eine oder eine Mehrzahl von er findungsgemäßen Reaktionsbeutelvorrichtungen. Je nach Verwen dungszweck kann dann das modulare Reaktionsbeutelsystem aus geeignet vorbereiteten Reaktionsbeutelvorrichtungen zusammen gestellt werden, wobei die Reaktionsbeutelvorrichtung jeweils beispielsweise mit den Reagenzien für gewünschte Reaktions stufen beschickt sind oder diese in bestimmten Reaktionskam mern enthalten. Aus einer bestimmten Anzahl verschiedener Reaktionsbeutelvorrichtungen kann dann für einen bestimmten durchzuführenden mehrstufigen Vorgang ein geeignetes Beutelsy stem zusammengestellt werden, in dem lediglich diejenigen Reaktionsbeutelkammern enthalten sind, die für den Vorgang tatsächlich benötigt werden.The present invention further relates to a modular reak tion bag system comprising one or a plurality of er reaction bag devices according to the invention. Depending on the use The modular reaction bag system can then be used for this purpose suitably prepared reaction bag devices together be placed, the reaction bag device each for example with the reagents for the desired reaction stages are loaded or in certain reaction times included. From a certain number of different Reaction bag devices can then be used for a particular one suitable bag to be carried out stem are compiled in which only those Reaction bag chambers are included that are necessary for the process actually needed.

Soll das modulare Reaktionsbeutelsystem zur Zellvermehrung, beispielsweise zur Vermehrung von Antitumor-Zellen, verwendet werden, so ist es vorteilhaft, wenn dieses System ferner we nigstens eine Separationssäuleneinheit umfaßt.Should the modular reaction bag system for cell proliferation, for example to multiply antitumor cells be, it is advantageous if this system we further at least one separation column unit.

Um in die Reaktionskammern gewünschtenfalls von außen Reagen zien eingeben zu können, wird vorgeschlagen, daß ferner wenigstens eine Behälter für Reagenzien vorgesehen ist, um Reagenzien in wenigstens eine Reaktionsbeutelkammer von außen bezüglich eines Reaktionsbeutels einzugeben.To reagent from the outside of the reaction chambers if desired To be able to enter zien, it is proposed that further at least one container for reagents is provided to Reagents in at least one reaction bag chamber from the outside with regard to a reaction bag.

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner die Verwendung einer erfindungsgemäßen Reaktionsbeutelvorrichtung und/oder eines erfindungsgemäßen modularen Reaktionsbeutelsystems zur Züchtung von Antitumor-Zellen oder Antitumor-Zellen stimulierenden Zellen.The present invention further relates to the use of a Reaction bag device according to the invention and / or one Modular reaction bag system for breeding according to the invention of antitumor cells or stimulating antitumor cells Cells.

Die vorliegende Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Durchführung von Kultivierungs/Separations-Vorgängen mit einer oder mehreren Stufen und/oder mehrstufigen Reaktionen, bei spielsweise zum Züchten von Antitumor-Zellen oder Antitumor zellen stimulierenden Zellen.The present invention further relates to a method for Carrying out cultivation / separation processes with a or more stages and / or multi-stage reactions, at for example for growing anti-tumor cells or anti-tumor cell stimulating cells.

Die Erfindung wird nachfolgend mit Bezug auf die beiliegenden Zeichnungen anhand bevorzugter Ausführungsformen detailliert beschrieben. The invention is described below with reference to the accompanying Drawings in detail based on preferred embodiments described.

Es zeigt:It shows:

Fig. 1 eine schematische Ansicht eines erfindungsgemäßen Reaktionsbeutels, der vier Reaktionsbeutelkammern enthält, die jeweils in Sequenz miteinander in Ver bindung gebracht werden können; Fig. 1 is a schematic view of a reaction bag according to the invention, which contains four reaction bag chambers, each of which can be connected to one another in sequence;

Fig. 2 eine alternative Ausführungsform eines erfindungs gemäßen Reaktionsbeutels mit zwei Reaktionsbeutel kammern, wobei jede der Reaktionsbeutelkammern mit einer Mehrzahl von Reagenzienkammern in Verbindung bringbar ist;Chambers 2 shows an alternative embodiment of a fiction, modern reaction bag with two reaction bag, each of said reaction chambers bag is engageable with a plurality of reagent chambers in communication.

Fig. 3 eine weitere alternative Ausgestaltungsform eines erfindungsgemäßen Reaktionsbeutels, wobei der Über gang zwischen in der Sequenz aufeinanderfolgenden Reaktionsbeutelkammern durch V-förmig aufeinander zulaufende Wandungen gebildet ist; und Fig. 3 shows a further alternative embodiment of a reaction bag according to the invention, wherein the transition between successive reaction bag chambers in the sequence is formed by V-shaped converging walls; and

Fig. 4 eine schematische Ansicht eines Reaktionsbeutelsy stems, bei dem separate Reaktionsbeutel mit jeweils einer Reaktionsbeutelkammer vorgesehen sind. Fig. 4 is a schematic view of a reaction bag system, in which separate reaction bags are provided, each with a reaction bag chamber.

In Fig. 1 ist eine erste Ausführungsform eines erfindungsgemä ßen Reaktionsbeutelsystems 10a dargestellt. Das Reaktionsbeu telsystem 10a umfaßt einen einzigen Reaktionsbeutel 70a, der durch Wandungsabschnitte 72a, 74a, 76a und 78a in vier Reak tionsbeutelkammern 18a, 26a, 38a und 52a unterteilt ist. Das Reaktionsbeutelsystem 10a, wie es in Fig. 1 dargestellt ist, ist zur Expansion von Antitumor-Zellen geeignet. Es ist jedoch selbstverständlich, daß es für verschiedenste andere Zwecke ausgelegt werden kann.In Fig. 1 a first embodiment of an inventive SEN reaction bag system 10a is illustrated. The Reaction bag system 10 a comprises a single reaction bag 70 a, which is divided by wall sections 72 a, 74 a, 76 a and 78 a into four reaction bag chambers 18 a, 26 a, 38 a and 52 a. The reaction bag system 10 a, as shown in Fig. 1, is suitable for the expansion of anti-tumor cells. However, it goes without saying that it can be designed for a wide variety of other purposes.

Die in einer Reaktionssequenz erste Reaktionsbeutelkammer 18a weist eine Eingabeöffnung 16a zum Eingeben von außen auf, in die - wie durch einen Pfeil 12a angedeutet - Zellpopulationen, die eine geringe Anzahl an Antitumor-Zellen enthalten, einge geben werden. An einen Randabschnitt der ersten Reaktionsbeu telkammer 18a ist eine Reagenzienkammer 80a angeformt. In der Reagenzienkammer 80a sind die Reagenzien für die erste Reak tionsstufe enthalten. Die Reagenzienkammer 80a ist von der ersten Reaktionsbeutelkammer 18a durch zerstörbare Fluidfluß unterbrechungsmittel, wie z. B. eine zerstörbare, d. h. zer brechbare, Membran 81 getrennt. Entweder bevor oder nachdem das Ausgangsmaterial, d. h. z. B. Zellen, in die erste Reak tionsbeutelkammer 18a eingegeben worden ist, wird durch die Finger eines Verwenders die zerbrechbare Membran zerbrochen, so daß die Reagenzien durch Abstreifen mit den Fingern in die erste Reaktionsbeutelkammer 18a gedrückt werden und dort mit dem Ausgangsmaterial der ersten Stufe reagieren können. Die erste Reaktionsstufe ist wiederum eine Stimulationsstufe, in der die Antitumor-Zellen durch OKT 3 und/oder durch Vesikel zum Wachstum angeregt werden.The first reaction bag chamber 18 a in a reaction sequence has an input opening 16 a for input from the outside, into which - as indicated by an arrow 12 a - cell populations which contain a small number of antitumor cells are entered. A reagent chamber 80 a is formed onto an edge section of the first reaction bag chamber 18 a. The reagents for the first reaction stage are contained in the reagent chamber 80 a. The reagent chamber 80 a is interrupted by the first reaction bag chamber 18 a by destructible fluid flow, such as. B. a destructible, ie zer breakable, membrane 81 separated. Either after the starting material, ie, for example cells in the first reac a has been inputted tion bag chamber 18 before or by the fingers of a user broken, the frangible membrane so that the reagents pressed by stripping with the fingers in the first reaction bag chamber 18 a and can react there with the starting material of the first stage. The first reaction stage is again a stimulation stage in which the anti-tumor cells are stimulated to grow by OKT 3 and / or by vesicles.

Nachdem die Stimulationsreaktion in ausreichendem Maße durch geführt worden ist, wird durch den Verwender eine weitere zerbrechbare Membran 82a zerbrochen, die in dem Wandungsab schnitt 72a ausgebildet ist, der die erste Reaktionsbeutelkam mer 18a von der zweiten Reaktionsbeutelkammer 26a trennt, d. h. nach dem Öffnen eine Ausgabeöffnung der Reaktionsbeutelkammer 18a vorsieht. Durch Abstreifen mit den Fingern kann das Aus gangsmaterial für die zweite Reaktionsstufe, d. h. das Reak tionsprodukt der ersten Reaktionsstufe, in die zweite Reak tionsbeutelkammer 26a transferiert werden. Die zweite Reak tionsbeutelkammer 26a weist wiederum eine Reagenzienkammer 84a auf, die in ihrem Aufbau der vorangehend beschriebenen Reagen zienkammer Boa entspricht. In der Reagenzienkammer 84a sind beispielsweise wieder Retroviren enthalten, die nach ihrem Inkontaktbringen mit dem Ausgangsmaterial in der Reaktions beutelkammer 26a, d. h. den Antitumor-Zellen, die darin enthal ten sind, einen Markierungsvorgang einleiten, d. h. dazu füh ren, daß an der Oberfläche der Antitumor-Zellen ein Selek tionsmarker eingelagert wird. After the stimulation reaction has been carried out to a sufficient extent, the user breaks a further breakable membrane 82 a, which is formed in the wall section 72 a that separates the first reaction bag chamber 18 a from the second reaction bag chamber 26 a, ie after the opening provides a discharge opening of the reaction bag chamber 18 a. By stripping with your fingers, the starting material for the second reaction stage, ie the reaction product of the first reaction stage, can be transferred into the second reaction bag chamber 26 a. The second reac tion bag chamber 26 a in turn has a reagent chamber 84 a, the structure of which corresponds to the reagent chamber Boa described above. In the reagent chamber 84 a, for example, retroviruses are again present which, after being brought into contact with the starting material in the reaction bag chamber 26 a, ie the antitumor cells which are contained therein, initiate a labeling process, ie lead to that on the surface a selection marker is stored in the antitumor cells.

Nachdem diese Reaktion durchgeführt worden ist, wird eine weitere zerbrechbare Membran 86a zerbrochen, die in der Wan dung 74a ausgebildet ist, die die zweite Reaktionsbeutelkammer 26a von der dritten Reaktionsbeutelkammer 38a trennt. Auch die dritte Reaktionsbeutelkammer 38a weist wiederum eine Reagen zienkammer B8a auf, in der beispielsweise biotinylierte Anti körper zur Anlagerung an den l-NGFR-Rezeptor der Antitumor-Zellen enthalten sind. Auch die Reagenzienkammer 88a ist durch eine zerbrechbare Membran o. dgl. von der dritten Reaktions beutelkammer 38a getrennt.After this reaction has been carried out, another breakable membrane 86 a is broken, which is formed in the wall 74 a, which separates the second reaction bag chamber 26 a from the third reaction bag chamber 38 a. In turn, the third reaction chamber bag 38 a has a Reagan zienkammer B8a, in the example, biotinylated anti-contained body for attachment to the l-NGFR receptor of the anti-tumor cells. The reagent chamber 88 a is separated by a breakable membrane or the like from the third reaction bag chamber 38 a.

Ist die Reaktion in der dritten Reaktionsbeutelkammer 38a durchgeführt, so kann über eine Ausgabeöffnung 90a das Reak tionsprodukt der dritten Reaktionsstufe über eine Leitung 92a in eine Separationssäuleneinheit 44a eingegeben werden. Die aus der Separationssäuleneinheit 44a ausgegebenen Antitumor-Zellen, die von einem störenden Hintergrund befreit sind, können - wie durch einen strichlierten Pfeil 94a angedeutet - direkt in einen menschlichen Körper eingegeben werden, oder sie können in eine Eingabeöffnung 98a einer vierten Reaktions beutelkammer 52a eingegeben werden, um dort einer weiteren Expansion unterzogen zu werden. Zu diesem Zweck weist die Reaktionsbeutelkammer 52a wiederum eine Reagenzienkammer 100a auf, in der beispielsweise lyophilisiertes oder auf andere Weise vorbereitetes IL 2 enthalten ist, das in Verbindung mit den aus der Separationssäuleneinheit 44a erhaltenen Antitumor-Zellen zu einem weiteren Wachstum derselben führt. Abgesehen von einer Positiv-Selektion können auch im Rahmen einer Nega tiv-Selektion in der Säule unerwünschte Zellen aus der Zell population entfernt werden. Nach Durchführung dieses weiteren Expansionsschrittes kann das Reaktionsprodukt der vierten Reaktionsstufe durch eine Ausgabeöffnung 54a ausgegeben werden und - wie durch einen Pfeil 56a angedeutet - in einen mensch lichen Körper eingegeben werden.If the reaction is carried out in the third reaction bag chamber 38 a, the reaction product of the third reaction stage can be entered via a line 92 a into a separation column unit 44 a via an outlet opening 90 a. The from the separation column unit 44 a issued anti-tumor cells, which are freed from a disturbing background, can - as indicated by a dashed arrow 94 a - directly entered into a human body, or they can in an input opening 98 a of a fourth reaction bag chamber 52 a can be entered to undergo further expansion there. For this purpose, the reaction bag chamber 52 a in turn has a reagent chamber 100 a, which contains, for example, lyophilized or otherwise prepared IL 2, which in conjunction with the antitumor cells obtained from the separation column unit 44 a leads to a further growth of the same. Apart from a positive selection, unwanted cells can also be removed from the cell population as part of a negative selection in the column. After implementation of this step, the reaction product further expansion of the fourth reaction stage may be through a discharge opening 54 a and be output - as indicated by arrow 56 a indicated - in a human physical body to be entered.

Wie bei der ersten Reaktionsbeutelkammer 18a in Fig. 1 ange deutet, ist es möglich, daß die verschiedenen Reaktionsbeutel kammern eine weitere Eingabeöffnung 102a aufweisen, durch die Reagenzien aus einem externen Behälter, beispielsweise einer Flasche o. dgl., eingegeben werden können.As indicated in the first reaction bag chamber 18 a in Fig. 1, it is possible that the various reaction bag chambers have a further input opening 102 a through which reagents from an external container, for example a bottle or the like, can be entered.

Ferner kann - wie in Fig. 1 strichliert dargestellt - eine Separationssäuleneinheit 44a′ direkt in den die dritte Reak tionsbeutelkammer 38a von der vierten Reaktionsbeutelkammer 52a trennenden Wandungsabschnitt 76a integriert sein. In die sem Fall entfällt das Entnehmen des Reaktionsprodukts der dritten Reaktionsstufe aus dem Reaktionsbeutel 70a und das nachfolgende Eingeben in diesen. Es kann somit die Gefahr einer Kontamination weiter vermindert werden.Furthermore, as shown in dashed lines in FIG. 1, a separation column unit 44 a 'can be integrated directly into the wall section 76 a separating the third reaction bag chamber 38 a from the fourth reaction bag chamber 52 a. In this case, the removal of the reaction product of the third reaction stage from the reaction bag 70 a and the subsequent input into this is omitted. The risk of contamination can thus be further reduced.

Jede der Reaktionsbeutelkammern kann einen Membranbereich aufweisen, der durch eine Kanüle durchdringbar ist, um in die verschiedenen Reaktionsbeutelkammern frische Nährlösungen eingeben zu können bzw. verbrauchte Nährlösungen abziehen zu können, wobei nach Herausziehen einer Kanüle aus einem der artigen Membranbereich der Membranbereich wieder einen fluid dichten Abschluß herstellt.Each of the reaction bag chambers can have a membrane area have, which can be penetrated by a cannula in order to different reaction bag chambers fresh nutrient solutions to be able to enter or deduct used nutrient solutions can, after pulling out a cannula from one of the like membrane area the membrane area again a fluid creates a tight seal.

Obgleich vorangehend nicht beschrieben, ist es ebenso möglich, den gesamten Reaktionsbeutel 70a zur Durchführung wenigstens der zweiten Reaktionsstufe, d. h. des Einleitens der Markierung mit Retroviren, einer Zentrifugation zu unterziehen.Although not described above, it is also possible to subject the entire reaction bag 70 a to centrifugation in order to carry out at least the second reaction step, ie the initiation of the labeling with retroviruses.

Die verschiedenen Reaktionsbeutelkammern mit ihren diese be grenzenden Wandungsabschnitten können wiederum - wie vorange hend beschrieben - durch Ultraschallverschweißen, Verkleben o. dgl. zweier - möglicherweise transparenter - Lagen von Kunst stoffmaterial gebildet werden. Bei diesem Vorgang können gleichzeitig die verschiedenen zerstörbaren Membranen, die verschiedene Kammern voneinander trennen, sowie die Reagen zienkammern selbst angeformt bzw. mit dem Reaktionsbeutel 70a integral ausgebildet werden. The various reaction bag chambers, with their wall sections bordering them, can in turn - as described above - be formed by ultrasonic welding, gluing or the like. Two - possibly transparent - layers of plastic material. In this process, the various destructible membranes that separate different chambers from each other, as well as the reagent chambers themselves can be integrally formed or formed integrally with the reaction bag 70 a.

In der Darstellung sind die Reaktionskammern nach Art eines Quadrats miteinander verbunden. Sie können jedoch auch in linearer, kreisförmiger oder sonstiger Weise in Sequenz mit einander verbunden sein.In the illustration, the reaction chambers are of the type Connected together. However, you can also in linear, circular or otherwise in sequence with be connected.

In Fig. 2 ist ein alternatives Reaktionsbeutelsystem 10b dar gestellt. Das Reaktionsbeutelsystem 10b umfaßt einen Reak tionsbeutel 70b, der durch Wandungsabschnitte 106b, 108b in zwei Reaktionsbeutelkammern 110b, 112b unterteilt ist. Die erste Reaktionsbeutelkammer 110b weist wiederum ein Eingabe öffnung 16b auf, in die - wie durch den Pfeil 12b angedeutet - Zellen als Ausgangsmaterial eingegeben werden.In Fig. 2 an alternative reaction bag system 10 b is provided. The reaction bag system 10 b comprises a reaction bag 70 b, which is divided by wall sections 106 b, 108 b into two reaction bag chambers 110 b, 112 b. The first reaction bag chamber 110 b in turn has an input opening 16 b, into which - as indicated by the arrow 12 b - cells are input as the starting material.

An einem Randabschnitt der Reaktionsbeutelkammer 110b ist eine Mehrzahl von Reagenzienkammern 80b, 81b, 84b, 88b vorgesehen, die jeweils wieder durch zerstörbare Fluidflußunterbrechungs mittel, beispielsweise durch Fingerdruck zerstörbare Membra nen, von der Reaktionsbeutelkammer 110b getrennt sind. Nach Einleiten der Zellpopulationen, welche die Antitumor-Zellen enthalten, in die Reaktionsbeutelkammer 110b als Ausgangsmate rial für die erste Stufe werden die Reagenzien, die in der Reagenzienkammer 80b enthalten sind, beispielsweise OKT 3 und/oder Vesikel, in die Reaktionsbeutelkammer 110b eingelei tet und zur Reaktion mit dem Ausgangsmaterial gebracht, d. h. es wird eine erste Wachstumsstimulation durchgeführt.At an edge portion of the reaction bag chamber 110 b, a plurality of reagent chambers 80 b, 81 b, 84 b, 88 b are provided, each of which is again separated from the reaction bag chamber 110 b by destructible fluid flow interruption means, for example by membrane pressure destructible membranes. Following introduction of the cell populations, which comprise the anti-tumor cell, in the reaction bag chamber 110 b as starting mate rial for the first stage, the reagents contained b in the reagent chamber 80, for example, OKT3 and / or vesicles, into the reaction bag chamber 110 b initiated and reacted with the starting material, ie a first growth stimulation is carried out.

Nach erfolgter Vermehrung der Antitumor-Zellen verbleiben diese als Ausgangsmaterial für die zweite Reaktionsstufe in der Reaktionsbeutelkammer 110b. Es werden dann die in der zweiten Reagenzienkammer 81b enthaltenen Reagenzien, bei spielsweise IL 2, d. h. ein weiteres Wachstumsstimulationsmit tel, in die Reaktionsbeutelkammer 110b eingeleitet, und ein weiterer Wachstumsschritt wird durchgeführt. Das Reaktions produkt dieser Stufe verbleibt wiederum in der Reaktionsbeu telkammer 110b, und es werden nachfolgend die Reagenzien aus der Reagenzienkammer 84b eingeleitet. Dies sind beispielsweise wieder Retroviren, die einen Markierungsschritt einleiten. After the antitumor cells have multiplied, they remain as starting material for the second reaction stage in the reaction bag chamber 110 b. Then the reagents contained in the second reagent chamber 81 b, for example IL 2, ie another growth stimulating agent, are introduced into the reaction bag chamber 110 b, and a further growth step is carried out. The reaction product of this stage again remains in the reaction bag chamber 110 b, and the reagents are subsequently introduced from the reagent chamber 84 b. These are, for example, retroviruses that initiate a labeling step.

Nachfolgend werden die Reagenzien der Reagenzienkammer 88b eingeleitet, d. h. z. B. biotinylierte Antikörper, die sich an die Antitumor-Zellen anlagern und eine weitere Markierung vorsehen. Ebenso können Zellen markiert werden, die selektiv aus der Zellpopulation entfernt werden sollen. Dieses erhal tene Reaktionsprodukt wird dann, beispielsweise wiederum durch Abstreifen mit den Fingern eines Verwenders, durch eine in die Wandungsabschnitte 106b, 108b integrierte Separationssäulen einheit 44b′ hindurchgeleitet, die eine Ausgabeöffnung für die Reaktionsbeutelkammer 110b bildet, so daß in die zweite Reak tionsbeutelkammer 112b angereichterte Antitumor-Zellen ein treten. Der zweiten Reaktionsbeutelkammer 112b sind wiederum Reagenzienkammern 100b, 101b zugeordnet, die Wachstumsförde rungsmittel, beispielsweise IL 2, IL 10, IFNγ o. dgl., enthal ten können, um nach der Separation eine oder mehrere weitere Wachstums- bzw. Expansionsstufen durchzuführen. Nach Durch führung dieser Stufen wird das Reaktionsprodukt, d. h. die stark vermehrten Antitumor-Zellen, wieder aus der Ausgabeöff nung 54b abgezogen und - wie durch den Pfeil 56b angedeutet - in einen menschlichen Körper eingeleitet.The reagents in the reagent chamber 88 b are subsequently introduced, ie, for example, biotinylated antibodies which attach to the antitumor cells and provide a further label. Cells can also be marked which are to be selectively removed from the cell population. This received reaction product is then, for example again by stripping with the fingers of a user, passed through a separation column unit 44 b 'integrated in the wall sections 106 b, 108 b', which forms an output opening for the reaction bag chamber 110 b, so that in the second Reaction bag chamber 112 b enriched anti-tumor cells enter. The second reaction bag chamber 112 b is in turn assigned reagent chambers 100 b, 101 b which can contain growth-promoting agents, for example IL 2, IL 10, IFNγ or the like, in order to carry out one or more further growth or expansion stages after the separation . After carrying out these steps, the reaction product, ie the strongly proliferated antitumor cells, is withdrawn again from the outlet opening 54 b and - as indicated by the arrow 56 b - introduced into a human body.

Bei der Ausführungsform der Fig. 2 bilden also die Reaktions beutelkammern 110b, 112b jeweils Reaktionsbeutelkammern für mehrere nacheinander durchzuführende Reaktionsstufen, wobei das Reaktionsprodukt einer vorangegangenen Stufe das Ausgangs material für die nachfolgende Stufe bildet. Es wird somit der Aufbau des Reaktionsbeutels vereinfacht, da auf die verschie denen Reaktionsbeutelkammern trennende Wandungen und ebenso in diesen Wandungen vorgesehene zerstörbare Fluidflußunterbre chungsmittel o. dgl. verzichtet werden kann. Auch die Reak tionsbeutelkammern 110b, 112b der Ausführungsform der Fig. 2 weisen wieder die Möglichkeit auf, in diese jeweils Nährlösung einzugeben bzw. verbrauchte Nährlösung abzuziehen. Ferner kann - ähnlich wie bei der Ausführungsform gemäß Fig. 1 - vorgese hen sein, daß zusätzlich oder alternativ zum Eingeben von Reagenzien aus den Reagenzienkammern zusätzliche Eingabeöff nungen vorhanden sind, in die aus externen Behältern, wie z. B. Reagenzienflaschen o. dgl., Reagenzien eingeleitet werden können. Darüber hinaus ist es wiederum möglich, daß analog zur Ausführungsform gemäß Fig. 1 anstelle des Integrierens der Separationssäuleneinheit 44b′ in die Wandungsabschnitte 106b, 108b die erste Reaktionsbeutelkammer 110b eine Ausgabeöffnung aufweist, aus der das Reaktionsprodukt der letzten in dieser Reaktionsbeutelkammer durchgeführten Stufe abgezogen wird, durch eine Separationssäuleneinheit geleitet wird, die extern angeordnet ist, und nachfolgend durch eine Eingabeöffnung der zweiten Reaktionsbeutelkammer 112b in diese eingeleitet wird.In the embodiment of FIG. 2, the reaction bag chambers 110 b, 112 b each form reaction bag chambers for a plurality of reaction stages to be carried out in succession, the reaction product of a previous stage forming the starting material for the subsequent stage. The structure of the reaction bag is thus simplified, since the walls separating the reaction bag chambers and the destructible fluid flow interrupters or the like provided in these walls can be dispensed with. The reac tion bag chambers 110 b, 112 b of the embodiment of FIG. 2 again have the option of entering nutrient solution into this or withdrawing the used nutrient solution. Furthermore, similar to the embodiment according to FIG. 1, provision may be made for additional or alternative openings to be provided in addition to or as an alternative to entering reagents from the reagent chambers, into which openings from external containers, such as, for. B. reagent bottles or the like, reagents can be introduced. In addition, it is again possible that, analogously to the embodiment according to FIG. 1, instead of integrating the separation column unit 44 b 'into the wall sections 106 b, 108 b, the first reaction bag chamber 110 b has an outlet opening from which the reaction product of the last one carried out in this reaction bag chamber Stage is withdrawn, passed through a separation column unit, which is arranged externally, and is subsequently introduced into the second reaction bag chamber 112 b through an input opening.

Fig. 3 zeigt eine weitere alternative Ausgestaltungsform eines erfindungsgemäßen Reaktionsbeutelsystems. Das Reaktionsbeutel system 110e umfaßt wiederum einen Reaktionsbeutel 70c mit einer Mehrzahl von Reaktionsbeutelkammern 114c, 116c, 118c. Die Reaktionsbeutelkammer 114c weist eine Eingabeöffnung 16c auf, durch die Ausgangsmaterial in diese eingegeben werden kann. Ferner sind der Reaktionsbeutelkammer 114c zwei Reagen zienkammer 80c, 80c′ zugeordnet, die über zerbrechbare Fluid flußunterbrechungsmittel, z. B. zerbrechbare Membranen 120c, 120c′, in Verbindung mit der Reaktionsbeutelkammer 114c bring bar sind. Die erste Reaktionsbeutelkammer 114c ist von der in der Reaktionssequenz auf diese folgenden zweiten Reaktions beutelkammer 116c durch im wesentlichen trichterförmig aufein ander zulaufende Wandungsabschnitte 122c, 124c getrennt. In einem Fluidtransferbereich 126c ist eine Separationssäulen einheit 44c′ angeordnet, durch die das Reaktionsprodukt der ersten Reaktionsbeutelkammer 114c in die zweite Reaktionsbeu telkammer 116c transferiert werden kann. Auch der zweiten Reaktionsbeutelkammer 116c sind wiederum zwei im wesentlichen gegenüberliegend angeordnete Reagenzienkammern 84c, 84c′ zu geordnet, die über zerstörbare Membranen 130c, 130c′ in Ver bindung mit der Reaktionsbeutelkammer 116c bringbar sind. Fig. 3 shows a further alternative embodiment shows a reaction bag system of the invention. The reaction bag system 110 e in turn comprises a reaction bag 70 c with a plurality of reaction bag chambers 114 c, 116 c, 118 c. The reaction bag chamber 114 c has an input opening 16 c, through which starting material can be input. Furthermore, the reaction bag chamber 114 c two reagent chamber 80 c, 80 c 'are assigned, the flow interruption means, such. B. breakable membranes 120 c, 120 c ', in connection with the reaction bag chamber 114 c bring bar. The first reaction bag chamber 114 c is separated from the second reaction bag chamber 116 c in the reaction sequence following this by essentially funnel-shaped converging wall sections 122 c, 124 c. In a fluid transfer area 126 c, a separation column unit 44 c 'is arranged through which the reaction product of the first reaction bag chamber 114 c can be transferred into the second reaction bag chamber 116 c. Also the second reaction bag chamber 116 c, in turn, two substantially opposite reagent chambers 84 c, 84 c 'are assigned, which can be brought into connection with the reaction bag chamber 116 c via destructible membranes 130 c, 130 c'.

Wie in Fig. 3 erkennbar, sind in der zweiten Reaktionsbeutel kammer 116c zwei sich von den Wandungen 122c, 124c weg er streckende Wandungsabschnitte 132c ausgebildet. Die Wandungs abschnitte 132c bilden zusammen mit den Wandungsabschnitten 122c bzw. 124c sich in einer Fluidtransferrichtung R im we sentlichen V-förmig erweiterende Ansammelbereiche. In diesen Bereichen können sich beispielsweise bei der Vermehrung die Antitumor-Zellen, die ein Ausgangsmaterial bilden, zusammen mit Nährlösung durch die Schwerkraftwirkung ansammeln, so daß aufgrund der V-förmigen Ausbildung in einem unteren Bereich der jeweiligen Ansammelbereiche eine erhöhte Antitumor-Zellen- Konzentration vorliegt, was zu einer verstärkten Vermehrung führt. Entsprechende Ansammelbereiche sind zwischen den Wan dungen 122c, 124c und die Reaktionsbeutelkammer 116c nach außen hin abgrenzenden Wandungen 136c, 138c des Reaktionsbeu tels 70c gebildet.As can be seen in Fig. 3, in the second reaction chamber bag 116 c two of the walls 122 c, 124 c, he away stretching wall sections 132 formed c. The wall sections 132 c form together with the wall sections 122 c and 124 c in a fluid transfer direction R, essentially V-shaped expanding areas. In these areas, for example, the antitumor cells, which form a starting material, can accumulate together with nutrient solution due to the force of gravity during the multiplication, so that due to the V-shaped formation, an increased antitumor cell concentration is present in a lower region of the respective accumulation areas , which leads to an increased multiplication. Corresponding accumulation areas are formed between the walls 122 c, 124 c and the reaction bag chamber 116 c, walls 136 c, 138 c of the reaction bag 70 c delimiting towards the outside.

Die zweite Reaktionsbeutelkammer 116c ist von der dritten Reaktionsbeutelkammer 118c durch Wandungsabschnitte 140c, 142c getrennt, die auf einen Fluidtransferbereich 144c im wesentli chen trichterförmig zulaufen.The second reaction bag chamber 116 c is separated from the third reaction bag chamber 118 c by wall sections 140 c, 142 c, which run towards a fluid transfer area 144 c in a funnel-shaped manner.

In diesem Fluidtransferbereich ist eine Separationssäulenein heit 44c′ angeordnet. Der dritten Reaktionsbeutelkammer 118c sind Reagenzienkammern 88c, 88c′ zugeordnet, die wieder über zerbrechbare Membranen o. dgl. 146c, 146c′ in Verbindung mit der Reaktionsbeutelkammer 118c bringbar sind. Ferner sind in der dritten Reaktionsbeutelkammer 118c wieder mehrere Wandungsabschnitte 132c angeordnet, die zusammen mit den Wan dungen 142c, 140c sich in der Fluidtransferrichtung R erwei ternde Ansammelbereiche bilden, in denen das Ausgangsmaterial zur Zellvermehrung o. dgl. angesammelt werden kann.In this fluid transfer area, a separation column unit 44 c 'is arranged. The third reaction bag chamber 118 c are assigned reagent chambers 88 c, 88 c ', which can again be brought into connection with the reaction bag chamber 118 c via breakable membranes or the like. 146 c, 146 c'. Furthermore, in the third reaction bag chamber 118 c, a plurality of wall sections 132 c are again arranged, which together with the walls 142 c, 140 c form expanding regions in the fluid transfer direction R, in which the starting material for cell multiplication or the like can be accumulated.

Den Ausgang aus der dritten Reaktionsbeutelkammer 118c bildet wieder eine Separationssäuleneinheit 44c′.The exit from the third reaction bag chamber 118 c again forms a separation column unit 44 c '.

Bei der Ausgestaltungsform der Fig. 3 sind - wie in der Figur zu erkennen - die verschiedenen Reaktionsbeutelkammern durch V-förmig aufeinander zulaufende Wandungen getrennt. Dies hat einerseits den Vorteil, daß zum Fluidtransfer zwischen den einzelnen Reaktionsbeutelkammern in der Fluidtransferrichtung R eine Trichterwirkung der Wandungen erzeugt wird, so daß das in einer Reaktionsbeutelkammer erzeugte Reaktionsprodukt nahezu verlustfrei in die nächste Reaktionsbeutelkammer trans feriert werden kann. Ferner dienen diese Wandungen gleichzei tig dazu, in den verschiedenen Reaktionsbeutelkammern Ansam melbereiche zu bilden, in denen dann zur Durchführung von Reaktionen Zellen o. dgl. angesammelt werden, um eine erhöhte Zellkonzentration vorsehen zu können.In the embodiment of FIG. 3 - as can be seen in the figure - the various reaction bag chambers are separated by walls which converge in a V-shape. On the one hand, this has the advantage that a funnel effect of the walls is generated for fluid transfer between the individual reaction bag chambers in the fluid transfer direction R, so that the reaction product generated in one reaction bag chamber can be trans fered into the next reaction bag chamber almost without loss. Furthermore, these walls simultaneously serve to form accumulation areas in the various reaction bag chambers, in which cells or the like are then accumulated in order to carry out reactions in order to be able to provide an increased cell concentration.

Wie in Fig. 3 erkennbar, nimmt das Volumen von aufeinander folgenden Reaktionsbeutelkammern 114c, 116c, 118c zu. Dies wird dadurch bedingt, daß beispielsweise bei der Zellvermeh rung eine vorbestimmte Zellkonzentration nicht überschritten werden darf, da dies eine weitere Vermehrung behindern würde, d. h. für die verschiedenen Schritte, in denen jeweils eine Zellvermehrung auftreten soll, muß dementsprechend mehr Volu men für die sich vermehrenden Zellen bereitgestellt werden.As can be seen in FIG. 3, the volume of successive reaction bag chambers 114 c, 116 c, 118 c increases. This is due to the fact that, for example, a predetermined cell concentration may not be exceeded in the case of cell multiplication, since this would hinder further multiplication, ie for the different steps in which a cell multiplication is to occur in each case, accordingly, more volume for the multiplying Cells are provided.

Jede der Reaktionsbeutelkammern kann wiederum durchdringbare Membranmittel aufweisen zum Eingeben bzw. zum Entnehmen von Nährlösung. Darüber hinaus ist es möglich, daß neben dem Vor sehen jeweiliger Reagenzienkammern für die verschiedenen Reak tionsbeutelkammern Eingabeöffnungen vorgesehen sind, durch die aus externen Behältern Reagenzien eingegeben werden können.Each of the reaction bag chambers can in turn be penetrable Have membrane means for entering or removing Nutrient solution. In addition, it is possible that in addition to the front see respective reagent chambers for the different reac tion bag chambers are provided through which reagents can be entered from external containers.

In der Darstellung der Fig. 3 ist der dort gezeigte Reaktions beutel 70c zur Verwendung bei mehreren aufeinanderfolgend durchzuführenden Expansionsschritten dargestellt. So können die verschiedenen Reagenzienkammern wachstumsfördernde oder -inhibierende Reagenzien wie OKT 3, IL 2, IL 10, IL 12, IFNγ TNFα, GM-CSF o. dgl. enthalten. Grundsätzlich ist es in allen erfindungsgemäßen Ausführungsformen möglich daß solche Rea genzien Wachstumsinhibitoren enthalten, die das Wachstum be stimmter Zelltypen hemmen. In the illustration of FIG. 3, the reaction is shown there bag 70 c shown for use in a plurality of sequentially carried out expansion steps. The various reagent chambers can contain growth-promoting or inhibiting reagents such as OKT 3, IL 2, IL 10, IL 12, IFNγ TNFα, GM-CSF or the like. In principle, it is possible in all embodiments according to the invention that such reagents contain growth inhibitors which inhibit the growth of certain cell types.

In Fig. 4 ist ein modular aufgebautes Reaktionsbeutelsystem gezeigt, wie es beispielsweise zur Gewinnung von Zelltrans plantaten für die Immuntherapie bzw. Gentherapie verwendbar ist. Insbesondere wird der Aufbau des Reaktionsbeutelsystems 10 der Fig. 4 nachfolgend anhand der Züchtung von Antitumor-Zellen beschrieben.In Fig. 4 a modular reaction bag system is shown, as it can be used for example for the production of cell transplants for immunotherapy or gene therapy. In particular, the structure of the reaction bag system 10 of FIG. 4 is described below with reference to the cultivation of antitumor cells.

Beispielsweise wird aus einem menschlichen Körper zunächst eine Zellpopulation, z. B. Blutprobe, entnommen, die einen ge ringen Anteil der zu züchtenden Antitumor-Zellen enthält. Diese Probe wird, wie durch einen Pfeil 12 in Fig. 4 angedeu tet, in einen ersten Reaktionsbeutel 14 durch eine Eingabeöff nung 16 eingegeben. Im ersten Reaktionsbeutel 14, der einen Stimulationsbeutel bildet, d. h. einen Beutel, in dem die in der Blutprobe enthaltenen Antitumor-Zellen vermehrt werden sollen, ist bereits vor der Eingabe der Blutprobe ein Wachs tumsstimulierungsmittel für die Antitumor-Zellen enthalten, beispielsweise lyophilisiertes oder auf andere Weise vorberei tetes OKT 3 und/oder die vorangehend beschriebenen Vesikel. Die Blutprobe mit den darin enthaltenen Antitumor-Zellen bil den das Ausgangsmaterial für die Reaktionsstufe, die im Reak tionsbeutel 14 durchzuführen ist; das OKT 3 und/oder die Vesi kel, mit denen der erste Reaktionsbeutel 14 vorbeschickt ist, bilden die Reagenzien für die Reaktion der ersten Stufe. Zu sätzlich weist der erste Reaktionsbeutel 14, ebenso wie die nachfolgend beschriebenen weiteren Reaktionsbeutel, in seiner Wandung eine Membran auf, die beispielsweise durch eine Kanüle durchdringbar ist, so daß in den Reaktionsbeutel 14, d. h. in eine in diesem ausgebildete Reaktionsbeutelkammer 18, Nähr lösung eingegeben bzw. verbrauchte Nährlösung entnommen werden kann.For example, a cell population, e.g. B. blood sample taken, which contains a low percentage of the antitumor cells to be grown. This sample is, as indicated by an arrow 12 in FIG. 4, entered into a first reaction bag 14 through an input opening 16 . In the first reaction bag 14 , which forms a stimulation bag, ie a bag in which the antitumor cells contained in the blood sample are to be multiplied, a growth stimulating agent for the antitumor cells is contained, for example lyophilized or otherwise, before the blood sample is entered Way prepared OKT 3 and / or the vesicles described above. The blood sample with the antitumor cells contained therein the starting material for the reaction stage, which is to be carried out in the reaction bag 14 ; the OCT 3 and / or the vesicles with which the first reaction bag 14 is preloaded form the reagents for the reaction of the first stage. In addition, the first reaction bag 14 , like the other reaction bags described below, has a membrane in its wall, which can be penetrated, for example, through a cannula, so that in the reaction bag 14 , ie in a reaction bag chamber 18 formed therein, nutrient solution entered or used nutrient solution can be removed.

Nachdem die erste Stufe abgeschlossen ist, d. h. die Antitumor-Zellen sich in dem ersten Reaktionsbeutel ausreichend vermehrt haben, werden diese durch eine Ausgabeöffnung 20, beispiels weise über eine flexible Leitung 22 und eine Eingabeöffnung 28, nach außen und in einen zweiten Reaktionsbeutel 24 über tragen. Im zweiten Reaktionsbeutel werden die vermehrten Anti tumor-Zellen mit einem Retrovirus als das Reagenz in dieser zweiten Stufe in Kontakt gebracht, um somit Zellen gentech nisch zu behandeln und, wenn notwendig, eine Zellmarker-Ex pression in Gang zu setzen.After the first stage has been completed, ie the antitumor cells have multiplied sufficiently in the first reaction bag, they are transferred through an output opening 20 , for example via a flexible line 22 and an input opening 28 , to the outside and into a second reaction bag 24 . In the second reaction bag, the increased anti-tumor cells are brought into contact with a retrovirus as the reagent in this second stage in order to treat cells genetically and, if necessary, to initiate a cell marker expression.

Um in der Reaktionsbeutelkammer 26 des zweiten Reaktionsbeu tels 24 eine verstärkte bzw. beschleunigte Reaktion der Retro viren mit den Antitumor-Zellen zu erreichen, kann dieser Beu tel in einer in den Figuren nicht dargestellten Zentrifuge einem Zentrifugiervorgang unterzogen werden. Nachfolgend wird der Inhalt der zweiten Reaktionsbeutelkammer 26 durch eine Ausgabeöffnung 30 des zweiten Reaktionsbeutels 24, bei spielsweise wieder vermittels einer flexiblen Leitung 32, über eine Eingabeöffnung 34 in einen dritten Reaktionsbeutel 36 eingegeben. In der Reaktionsbeutelkammer 38 des dritten Reak tionsbeutels 36 sind als Reagenzien Antikörper enthalten. Unter Verwendung von immun-adsorptiven Separationssäulen auf Basis von Avidin oder Sreptavidin können dies beispielsweise biotinylierte Antikörper sein. Der Kontakt der Antitumor-Zel len in der Reaktionsbeutelkammer 26 des zweiten Reaktionsbeu tels 24 z. B. mit Retroviren führt dazu, daß an einer Zello berfläche der Antitumor-Zellen ein Rezeptor für die Zellsepa ration exprimiert wird. Dies kann z. B. ein niederaffiner NGF- Rezeptor sein. An diesem Rezeptor lagern sich in der Reak tionsbeutelkammer 38 des dritten Reaktionsbeutels 36 die bio tinylierten Antikörper an und führen somit zu einer verstärk ten Markierungswirkung der Antitumor-Zellen.In order to achieve an intensified or accelerated reaction of the retroviruses with the antitumor cells in the reaction bag chamber 26 of the second reaction bag 24 , this bag can be subjected to a centrifugation process in a centrifuge (not shown in the figures). The content of the second reaction bag chamber 26 is subsequently entered into a third reaction bag 36 through an outlet opening 30 of the second reaction bag 24 , for example again by means of a flexible line 32 , via an entry opening 34 . Antibodies are contained in the reaction bag chamber 38 of the third reaction bag 36 as reagents. Using immuno-adsorptive separation columns based on avidin or sreptavidin, these can be, for example, biotinylated antibodies. The contact of the anti-tumor cells len in the reaction bag chamber 26 of the second reaction bag 24 z. B. with retroviruses leads to a cell surface of the anti-tumor cells, a receptor for the cell separation is expressed. This can e.g. B. be a low affinity NGF receptor. The bio-tinylated antibodies accumulate on this receptor in the reaction bag chamber 38 of the third reaction bag 36 and thus lead to an enhanced labeling effect of the antitumor cells.

Die derart markierten Antitumorzellen werden über eine Aus gabeöffnung 40 des dritten Reaktionsbeutels 36 über eine Lei tung 42 in eine Separationssäuleneinheit 44 eingegeben. Der in der Separationssäuleneinheit 44 durchgeführte Separationspro zeß ist derart ausgelegt, daß die markierten Antitumor-Zellen ungehindert durch die Separationssäuleneinheit 44 hindurch treten können, wogegen nicht markierte Zellen zurückgehalten werden. Am Austritt der Separationssäuleneinheit 44 kann ein nicht dargestelltes Wegeventil angeordnet sein, das in einem ersten Weg über eine Leitung 46 zu einer Eingabeöffnung 48 eines vierten Reaktionsbeutels 50 führt. In der Reaktionsbeu telkammer 52 des vierten Reaktionsbeutels 50 ist als Reagenz ein weiteres Wachstumsstimulierungsmittel, beispielsweise lyophilisiertes oder auf andere Weise vorbereitetes IL 2, ent halten, das zu einer weiteren Zellexpansion führt. Nach durch geführter Zellexpansion können die Antitumor-Zellen dann durch eine Ausgabeöffnung 54 des vierten Reaktionsbeutels 50, wie durch einen Pfeil 56 angedeutet, erhalten werden und bei spielsweise in einen menschlichen Körper injiziert werden.The anti-tumor cells marked in this way are input via an output opening 40 of the third reaction bag 36 via a line 42 into a separation column unit 44 . The process performed in the separation column unit 44 Separationspro process is designed such that the labeled anti tumor cells can pass freely through the separation column unit 44, while non-labeled cells are retained. At the outlet of the separation column unit 44, an unillustrated directional control valve may be arranged in a first path via a line 46 to an input port 48 of a fourth reaction leads bag 50th In the reaction bag chamber 52 of the fourth reaction bag 50 , a further growth stimulating agent, for example lyophilized or otherwise prepared IL 2, is contained as a reagent, which leads to a further cell expansion. After cell expansion has been carried out, the antitumor cells can then be obtained through an outlet opening 54 of the fourth reaction bag 50 , as indicated by an arrow 56 , and injected into a human body, for example.

Ein zweiter Weg des Wegeventils, das sich an die Separations säuleneinheit 44 anschließt, führt über eine Eingabeöffnung 60 in einen fünften Reaktionsbeutel 58. Der Reaktionsbeutel 58 kann derart ausgebildet sein, daß er im wesentlichen dem drit ten Reaktionsbeutel 36 entspricht, d. h. z. B. biotinylierte Antikörper enthält, um die aus der Separationssäuleneinheit erhaltenen Antitumor-Zellen in seiner Reaktionsbeutelkammer 62 erneut zu markieren und diese dann über eine Ausgabeöffnung 64 und eine strichliert dargestellte Leitung 66 wieder zum Ein gang der Separationssäuleneinheit 44 zu leiten.A second way of the directional control valve, which connects to the separation column unit 44 , leads via an input opening 60 into a fifth reaction bag 58 . The reaction bag 58 can be designed such that it essentially corresponds to the third reaction bag 36 , ie contains, for example, biotinylated antibodies, in order to mark the antitumor cells obtained from the separation column unit again in its reaction bag chamber 62 and then via an output opening 64 and a line 66 shown in dashed lines again to lead to the input of the separation column unit 44 .

Das in der Fig. 4 dargestellte Reaktionsbeutelsystem 10 umfaßt eine Mehrzahl verschiedener Reaktionsbeutel 14, 24, 36, 50, 58, die jeweils eine Reaktionsbeutelkammer 18, 26, 38, 52, 62 aufweisen, die mit den Reagenzien für die verschiedenen Stufen der mehrstufigen Reaktion vorbeschickt sind; d. h. bereits bei der Herstellung der Reaktionsbeutel werden in die jeweiligen Reaktionsbeutelkammern derselben die Reagenzien eingebracht, um sie dann zur Reaktion mit dem in die jeweiligen Reaktions beutel eingegebenen Ausgangsmaterial vorzubereiten. Selbstver ständlich kann für verschiedene Reaktionen das System auch nur einen einzigen derartigen Beutel umfassen.The reaction bag system 10 shown in FIG. 4 comprises a plurality of different reaction bags 14 , 24 , 36 , 50 , 58 , each of which has a reaction bag chamber 18 , 26 , 38 , 52 , 62 , which contains the reagents for the different stages of the multi-stage reaction are loaded; ie already during the manufacture of the reaction bags, the reagents are introduced into the respective reaction bag chambers of the same, in order then to prepare them for reaction with the starting material entered into the respective reaction bags. Of course, the system can also comprise only a single such bag for different reactions.

Jeder der Reaktionsbeutel besteht vorzugsweise aus einem fle xiblen Kunststoffmaterial bzw. aus Lagen flexiblen Kunststoff materials, die in einem die verschiedenen Reaktionsbeutelkam mern bildenden Randbereich durch Verschweißen, Verkleben o. dgl. miteinander verbunden sind. Zur Beobachtung der Reaktio nen kann das Material der Beutel wenigstens bereichsweise transparent sein. Die Reaktionsbeutel sind im wesentlichen rechteckig ausgebildet, können jedoch beliebige andere Kon figurationen annehmen.Each of the reaction bags preferably consists of a fle xiblen plastic material or from layers of flexible plastic materials that came in one the different reaction bags edge forming by welding, gluing or the like. are interconnected. To observe the reaction NEN the material of the bag can at least partially be transparent. The reaction bags are essentially rectangular, but can be any other Kon accept figurations.

Die Eingabe- und Ausgabeöffnungen der verschiedenen Reaktions beutel können derart sein, daß sie mit den jeweiligen Verbin dungsschläuchen zwischen den einzelnen Reaktionsbeuteln be reits verbunden sind oder Mittel zur Verbindung mit derartigen Schläuchen aufweisen. Ferner können im Bereich der Eingabe bzw. Ausgabeöffnungen bzw. der Verbindungsschläuche Mittel vorgesehen sein, durch die die Eingabe- bzw. Ausgabeöffnungen jeweils verschlossen werden können; dies können beispielsweise Ventile, Klemmen o. dgl. sein. Darüber hinaus ist es möglich, die Eingabe- bzw. Ausgabeöffnungen verschweißbar auszubilden, so daß beispielsweise nach einmal durchgeführtem Eingeben eines Ausgangsmaterials in einen Reaktionsbeutel die zugehö rige Eingabeöffnung verschweißt wird und somit das weitere Eingeben bzw. Entweichen von Material durch diese Eingabeöff nung nicht mehr möglich ist. Entsprechendes trifft für die Ausgabeöffnungen zu.The input and output ports of the various reactions Bags can be such that they connect with the respective connec be between the individual reaction bags are already connected or means for connection with such Have hoses. Furthermore, in the area of input or discharge openings or the connecting hoses means be provided through which the input or output openings can be locked in each case; for example Valves, clamps or the like. In addition, it is possible to design the input and output openings so that they can be welded, so that, for example, after entering once of a starting material in a reaction bag input opening is welded and thus the further Input or escape of material through this input opening is no longer possible. The same applies to the Output openings.

Das Inkontaktbringen des jeweiligen Ausgangsmaterial mit den in den Beuteln enthaltenen Reagenzien kann beispielsweise durch Vorwärtsstreichen des fluidartigen oder flüssigen Aus gangsmaterials durch die flexiblen Beutel hindurch mit den Fingern eines Verwenders durchgeführt werden. Darüber hinaus ist es möglich, die Beutel zu schütteln oder sie, wie vorange hend mit Bezug auf den zweiten Reaktionsbeutel 24 beschrieben, einer Zentrifugation zu unterziehen.The contacting of the respective starting material with the reagents contained in the bags can be carried out, for example, by moving the fluid-like or liquid starting material forward through the flexible bags with the fingers of a user. In addition, it is possible to shake the bags or to centrifuge them, as described above with reference to the second reaction bag 24 .

Die Reagenzien in den verschiedenen Reaktionsbeuteln können dort in flüssiger oder gallertartiger Form enthalten sein. Darüber hinaus ist es bei verschiedenen Reaktionen möglich, die Reagenzien in getrockneter Form an der Innenoberfläche der Reaktionsbeutel anzuordnen, so daß sie erst bei Eingabe eines flüssigen Ausgangsmaterials gelöst werden. Insbesondere bei Verwendung flüssiger Reagenzien in den verschiedenen Reak tionsbeuteln ist es wichtig, daß sowohl die Eingabe- als auch die Ausgabeöffnungen normalerweise verschlossen sind und erst bei Verbindung mit einem Leitungsschlauch, einer Nadel o. dgl. in einen geöffneten Zustand gebracht werden können. Beispiels weise ist es möglich, daß im Bereich der Eingabe- und Ausgabe öffnungen wiederum Membranen vorgesehen sind, die durch Nadeln durchdringbar sind und nach Entfernen der Nadeln wieder einen dichten Abschluß herstellen.The reagents in the different reaction bags can be contained there in liquid or gelatinous form. In addition, with different reactions, it is possible the reagents in dried form on the inner surface of the Arrange reaction bags so that they only when you enter a liquid starting material can be solved. Especially at Use of liquid reagents in the different reaks pouches, it is important that both the input and the delivery openings are normally closed and only when connected to a hose, needle or the like can be brought into an open state. Example it is possible that in the area of input and output openings in turn membranes are provided which are formed by needles are penetrable and after removing the needles again create a tight seal.

Es ist selbstverständlich, daß verschiedene Ausgestaltungs merkmale der verschiedenen vorangehend beschriebenen Ausfüh rungsformen bei anderen Ausführungsformen angewandt werden können. So ist es beispielsweise möglich, die Reaktionsbeutel der Fig. 4 jeweils derart aufzubauen, daß sie mehrere Reak tionsbeutelkammern enthalten oder daß sie eine oder mehrere Reagenzienkammern 17 aufweisen, die Reagenzien zum nachfolgen den Inkontaktbringen mit Ausgangsmaterialien enthalten und von den Reaktionskammern durch zerstörbare Membranen 19 o. dgl. getrennt sind. Ferner können auch dort zusätzliche Eingabeöff nungen zur Eingabe von Reagenzien von außen vorgesehen sein.It goes without saying that various design features of the various embodiments described above can be applied to other embodiments. So it is for example possible to construct the reaction bag of FIG. 4 respectively such that they contain tion bag chambers several reac or that they have one or more reagent compartments 17, the reagents for ranking after the contacting with the starting materials included and on the reaction chambers by frangible membranes 19 o are separated. Furthermore, additional input openings for the input of reagents from outside can also be provided there.

Auch bei der Ausgestaltung der Fig. 1 ist es möglich, das Reaktionsprodukt einer der Reaktionsbeutelkammern über eine Ausgabeöffnung nach außen zu transferieren, in einer extern angeordneten Separationssäuleneinheit zu separieren und dann wieder in eine Reaktionsbeutelkammer einzuleiten.Also in the embodiment of FIG. 1, it is possible to transfer the reaction product of the reaction bag chambers through a discharge opening to the outside, to separate in an externally arranged separating columns unit, and then again initiate a reaction in the bag chamber.

Bei allen erfindungsgemäßen Ausgestaltungsformen, insbesondere jedoch bei denjenigen, in denen ein Reaktionsbeutel mehrere Reaktionsbeutelkammern enthält, so daß die gesamte Reaktions abfolge praktisch in einem Reaktionsbeutel durchgeführt werden kann, ist ein nahezu kontaminationsfreies Arbeiten möglich. In all embodiments according to the invention, in particular however, those in which one reaction bag has multiple Contains reaction bag chambers so that the entire reaction sequence can be practically carried out in a reaction bag almost contamination-free work is possible.

Durch das Vorsehen verschiedener Reaktionsbeuteltypen, die beispielsweise mit verschiedenen Reagenzien vorbeschickt sind und/oder mit verschiedenen Reagenzienkammern kombiniert sind, ist es möglich, durch Kombinieren verschiedener vorbeschickter oder mit Reagenzienkammern kombinierter Reaktionsbeutel Sy steme für eine Vielzahl verschiedener mehrstufiger Vorgänge oder Reaktionen vorzusehen. Beispielsweise ist es auch mög lich, einen Reaktionsbeutel mit wenigstens einer Reaktions kammer vorzusehen, die eine Vielzahl verschiedener Reagenzien kammern aufweist, wobei jedoch dann zur Verwendung lediglich diejenigen Reagenzienkammern geöffnet werden, die für einen bestimmten Reaktionstyp benötigt werden.By providing different types of reaction bags, the for example, are pre-loaded with various reagents and / or combined with different reagent chambers, it is possible to combine different pre-loaded or reaction bag Sy combined with reagent chambers systems for a multitude of different multi-stage processes or to provide reactions. For example, it is also possible Lich, a reaction bag with at least one reaction chamber to provide a variety of different reagents has chambers, but then only for use those reagent chambers that are open to you certain reaction type are needed.

Ferner ist es ebenso möglich, daß bei den Ausgestaltungsformen gemäß den Fig. 1 bis 3 wenigstens eine der verschiedenen Reak tionsbeutelkammern bereits mit den Reagenzien vorbeschickt ist, wie es bei der Ausgestaltungsform gemäß Fig. 4 der Fall ist.Furthermore, it is also possible that in the embodiment according to FIGS . 1 to 3 at least one of the various reaction bag chambers is already pre-loaded with the reagents, as is the case with the embodiment according to FIG. 4.

Neben der bei den Ausführungsformen dargestellten immun-ad sorptiven Separation ist ebenso die Anwendung einer immun magnetischen Separation möglich.In addition to the immune ad shown in the embodiments sorptive separation is also the application of an immune magnetic separation possible.

Zusätzlich oder anstelle der vorangehend beschriebenen Reak tionsmittel ist auch der Einsatz anderer zellaktivierender und/oder zellwachstumsstimulierender Stoffe möglich.In addition to or instead of the previously described reak The use of other cell-activating agents is also a means of treatment and / or substances that stimulate cell growth.

Bei allen vorangehend beschriebenen Ausführungsformen können die Reagenzien auch durch die Eingabeöffnungen für das Aus gangsmaterial eingegeben werden, die dann vorzugsweise wieder verschließbar ausgebildet sind.In all of the above-described embodiments the reagents also through the entry openings for the off gangs material are entered, which then preferably again are designed to be lockable.

Claims

1. A reaction bag device for carrying out multi-stage cultivation / separation processes and / or reactions, for example for growing anti-tumor cells or anti-tumor cell stimulating cells, comprising:

- A plurality of reaction bag chambers ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) in a reaction bag, wherein in each reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) a starting material for a particular stage can be arranged and can be brought into contact with reagents for the respective stage to produce a reaction product of the respective stage,
- Dispensing opening means ( 82 a, 86 a, 54 a; 54 b; 44 c) for dispensing a reaction product from each reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c , 118 c).

2. Reaction bag device according to claim 1, characterized in that at least one ( 18 a) of the reaction bag chambers ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a) an input opening ( 16 a) for entering a starting material in this from the outside with respect to the reaction bag and that the reaction bag chambers ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a) are formed in sequence for transferring the reaction product of a reaction bag chamber preceding in the sequence as a starting material in at least one reaction bag chamber following in the sequence.

3. Reaction bag device according to claim 2, characterized in that between at least two sequential reaction bag chambers ( 18 a, 26 a, 38 a) openable fluid flow interruption means ( 82 a, 86 a) are provided, preferably destructible fluid flow interruption means, which has a dispensing opening the reaction bag chamber preceding in the sequence.

4. Reaction bag device according to claim 2 or 3, characterized in that at least one ( 52 a) of the reaction bag chambers ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a), preferably the last reaction bag chamber in the sequence ( 52 a), one Dispensing opening ( 54 a) for dispensing the reaction product from the outside with respect to the reaction bag.

5. Reaction bag device according to claim 4, characterized in that in two sequential reaction bag chambers ( 38 a, 52 a) a preceding reaction bag chamber ( 38 a) has a dispensing opening ( 90 a) for dispensing to the outside and a subsequent Reaction bag chamber ( 52 a) has an input opening ( 98 a) for input from the outside.

6. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that at least one reaction bag chamber ( 110 b, 112 b) is a reaction bag chamber for a plurality of successive stages, wherein the reaction product of a preceding stage forms the starting material for a subsequent stage .

7. reaction bag device according to one of claims 2 to 6, characterized in that in the sequence of successive reaction bag chambers ( 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) by partition walls ( 106 b, 108 b; 122 c, 124 c, 140 c, 142 c) are separated from one another, which run towards a fluid transfer region ( 126 c, 144 c) between the successive reaction bag chambers in a fluid transfer direction (R) essentially in a funnel shape.

8. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that in at least one reaction bag chamber ( 116 c, 118 c) is formed at least one by preferably V-shaped converging wall sections ( 132 c) formed starting material / reaction product accumulation area.

9. reaction bag device according to claim 8, characterized ge indicates that the at least one starting material / Reaction product accumulation area itself in fluid transfer direction (R) is expanded.

10. Reaction bag device according to claim 7 and one of claims 8 or 9, characterized in that the funnel-shaped converging partitions ( 122 c, 124 c, 140 c, 142 c) form at least in regions the wall sections of the starting material / reaction product accumulation area.

11. Reaction bag device according to one of claims 2 to 10, characterized in that in the sequence one after the other reaction bag chambers ( 114 c, 116 c, 118 c) have an increasing chamber volume.

12. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that at least one of the reaction bag chambers ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ) is preloaded with the reagents.

13. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that in at least one reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) at least one reagent chamber ( 80 a, 84 a, 88 a, 100 a; 80 b, 81 b, 84 b, 88 b, 100 b, 101 b; 80 c, 80 c ′, 84 c, 84 c ′, 88 c, 88 c ′) is provided by openable fluid flow interruption means ( 120 c, 120 c ', 130 c, 130 c', 146 c, 146 c '), preferably destructible fluid flow interruption means, in reagent transfer connection with the reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a , 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) can be brought, and that in the reagent chamber ( 80 a, 84 a, 88 a, 100 a; 80 b, 81 b, 84 b, 88 b, 100 b, 101 b; 80 c, 80 c ′, 84 c, 84 c ′, 88 c, 88 c ′) the reagents for the respective stage are included.

14. Reaction bag device according to claim 6 and 13, characterized in that at least one reaction bag chamber ( 110 b, 112 b) with a plurality of reagent chambers ( 80 b, 81 b, 84 b, 88 b, 100 b, 101 b) is provided for different stages, which can be brought into connection with the reaction bag chamber ( 110 b, 112 b) for the sequential implementation of the plurality of stages one after the other in reagent transfer.

15. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that in at least one reaction bag chamber ( 18 a) a tightly sealable reagent input opening ( 102 a) is provided for the input of reagents into the reaction bag chamber ( 18 a) from an external container.

16. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that between at least two successive in the sequence reac tion bag chambers ( 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) a separation column device ( 44 a, 44 a '; 44 b'; 44 c ') is provided for fluid transfer through them.

17. Reaction bag device according to claim 16, characterized in that the separation column device ( 44 a '; 44 b'; 44 c ') in one of the at least two reaction bag chambers ( 110 b; 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) separating Wall ( 76 a; 106 b, 108 b; 122 c, 124 c, 140 c, 142 c) is incorporated.

18. Reaction bag device for carrying out desired multistage cultivation / separation processes and / or reactions, for example for growing anti-tumor cells or cells stimulating anti-tumor cells, comprising a reaction bag with a reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ), in which a starting material can be arranged for a stage and can be brought into contact with reagents for the stage for producing a reaction product of the stage, the reaction bag ( 14 , 24 , 36 , 50 , 58 ) having an input opening ( 16 , 28 , 34 , 48 , 60 ) for inputting starting material therein and an outlet opening ( 20 , 30 , 40 , 54 , 64 ) for outputting a reaction product generated in the reaction bag ( 14 , 24 , 36 , 50 , 58 ), and wherein the reaction bag device contains the reagents and is prepared with them for a reaction unit.

19. Reaction bag device according to claim 18, characterized in that the reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ) is preloaded with the reagents.

20. Reaction bag device according to claim 18 or 19, characterized in that the reaction bag comprises at least one reagent chamber ( 17 ) which can be brought into connection with the reaction bag chamber by means of openable fluid flow interruption means ( 19 ), preferably destructible fluid flow interruption means, and in that at least one reagent chamber containing the reagents for the respective stage.

21. Reaction bag device according to one of claims 18 to 20, characterized in that the reaction bag chamber a reaction bag chamber for a plurality of each other at the following stages, the reaction product of a previous stage the starting material for a subsequent stage.

22. Reaction bag device according to claim 21, characterized characterized in that the reaction bag has a plurality of Reagent chambers for various stages included, which Reagent chambers for the sequential execution of the several stages in a row in reagent transfer are connectable to the reaction bag chamber.

23. Reaction bag device according to one of claims 18 to 22, characterized in that in the reaction bag chamber also a sealable reagents Entry port for adding reagents to the reac tion bag chamber provided from an external container is.

24. Reaction bag device according to one of the preceding Claims, characterized in that the input and / or the discharge openings through valves, destructible or reclosable fasteners or the like Chen are closed.

25. Reaction bag device according to one of the preceding Claims, characterized in that they are made of flexible, preferably gas permeable but liquid impermeable casual, plastic is made.

26. Reaction bag device according to claim 13, 20 or 22 and, if desired, another of the preceding claims, characterized in that the respective reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) with the at least one reagent chamber ( 80 a, 84 a, 88 a, 100 a; 80 b, 81 b, 84 b, 88 b, 100 b, 101 b; 80 c, 80 c ′, 84 c, 84 c ', 88 c, 88 c') is integrally formed.

27. Reaction bag device according to one of the preceding claims, characterized in that the respective reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ; 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c , 118 c) is designed to enter fresh nutrient solution or to remove used nutrient solution.

28. Reaction bag device according to claim 27, characterized in that the respective reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ; 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) has a membrane region which can be penetrated by a cannula or the like and which, after removal of the cannula, actively restores a fluid-tight seal.

29. Modular reaction bag system comprising one or one A plurality of reaction bag devices according to one previous claims.

30. Modular reaction bag system according to claim 29, further comprising at least one separation column unit ( 44 b).

31. Modular reaction bag system according to claim 29 or 30, further comprising at least one container for reagent to put reagents in at least one reaction bag mer to enter from the outside with respect to a reaction bag en.

32. Use of a reaction bag device according to one of claims 1 to 28 and / or a modular reak tion bag system according to one of claims 29 to 31 for Cultivation of anti-tumor cells or anti-tumor cells sti mulating cells.

33. A method for performing cultivation / separation processes with one or more stages and / or more stage reactions, in particular by means of a reaction bag device according to one of claims 1 to 28 and / or a modular reaction bag system according to one of claims 29 to 31, comprising the steps:

a) providing at least one reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ; 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c);
b) introducing a starting material into the at least one reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ; 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c);
c) contacting the starting material in the at least one reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ; 18 a, 26 a, 38 a, 52 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c); with reagents for at least one stage by:
- - Prior loading of the at least one reaction bag chamber ( 18 , 26 , 38 , 52 , 62 ) with the reagents and / or
- - Bring one of the at least one reaction bag chamber ( 18 a, 26 a, 38 a, 52 a, 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) associated reagent chamber ( 80 a, 84 a, 88 a, 100 a; 80 b, 81 b, 84 b, 88 b, 100 b, 101 b; 80 c, 80 c ′, 84 c, 84 c ′, 88 c, 88 c ′) with the reaction bag chamber ( 18th a, 26 b, 38 a, 52 a, 62 a; 110 b, 112 b; 114 c, 116 c, 118 c) and / or
- - Introducing reagents into the at least one reaction bag chamber from an external container through a reagent input opening ( 102 a),
d) withdrawing the reaction product of one stage from the reaction bag chamber through a discharge opening, optionally with a separation step being carried out beforehand or afterwards.