DE19649151A1 - Wäßrige Lösung enthaltend Salze und Puffersubstanzen - Google Patents

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine wäßrige Lösung gemäß Oberbegriff des Anspruchs 1 und deren Verwendung zur Bindung von Nukleinsäuren an mineralischen Träger.

Bei der Präparation von Nukleinsäuren ist die Anwendung von Elektrophoreseschritten oft notwendig. Die Elektrophorese wird bei pH-Werten durchgeführt, die regelmäßig alkalisch sind. Hinzu kommt, daß die Alkalität bei mehrmaliger Anwendung des Elektro­ phorese-Puffers steigt. Werden Nukleinsäuren dann aus dem Elektrophoresegel entfernt, werden nicht unbeträchtliche Mengen an Alkalien in den nächstfolgenden Aufarbeitungsschritt ver­ schleppt. Dies kann dann dazu führen, daß Nukleinsäuren aufgrund der Alkalität des Mediums nicht mehr an Chromatographie-Materia­ lien auf Silikagel-Basis binden. Zwar ist es möglich, durch Zugabe von sauren Pufferlösungen, wie beispielsweise einer 3 M Natriumacetatlösung mit dem pH 5,0, den pH-Wert zu korrigieren, jedoch ist es im einzelnen Fall oft schwierig und aufwendig, den pH-Wert der betreffenden Lösung zu bestimmen.

Das der Erfindung zugrunde liegende technische Problem besteht darin, ein Mittel bereitzustellen, welches es in einfacher Weise erlaubt, einen kritischen pH-Wert, bei dem eine Bindung an mineralischen Träger der Nukleinsäuren nicht mehr erfolgt, erkennbar zu machen.

Überraschenderweise wird das der Erfindung zugrunde liegende technische Problem in einfacher Weise dadurch gelöst, daß man der wäßrigen Lösung zur Aufgabe der aus der Elektrophorese isolierten Nukleinsäure einen pH-Indikator zugibt. Die so hergestellte Nukleinsäurepräparation kann dann mit mineralischen Träger behandelt werden. Die wäßrigen Lösungen, mit denen die entsprechend präparierten Nukleinsäuren auf chromatographische Säulen gebracht oder mit chromatographischen Materialien in Kontakt gebracht werden, sind wäßrigen Lösungen, die Puffer­ substanzen enthalten. Der pH-Indikator soll erfindungsgemäß im Bereich über pH 1, insbesondere 5 bis 7, mindestens eine pH- abhängige Farbänderung erfahren. Dies hat den Vorteil, daß durch Abgleich mit einer geeichten Farbskala in an sich bekannter Weise der pH-Wert so genau bestimmt werden kann, daß eine Aussage möglich ist, ob in dem Gemisch enthaltende Nukleinsäuren an dem zur Isolierung ausgewählten mineralischen Trägermateria­ lien, insbesondere Silikagel-Materialien, binden.

Als mineralische Träger kommen poröse oder nicht-poröse Materia­ lien auf der Basis von Metalloxiden und Metallmischoxiden in Frage, wie solche aus Silikagel, Materialien, die überwiegend aus Glas bestehen, Aluminiumoxid, Zeolithe, Titanoxid, Zirkon­ dioxid. Die Partikelgröße der mineralischen Trägermaterialien beträgt vorzugsweise 0,1 µm bis 1000 µm. Werden poröse minerali­ sche Träger verwendet, wie beispielsweise poröses Silikagel, poröses Glas, poröses Aluminiumdioxid, Zeolithe, weisen die Poren vorzugsweise eine Porengröße von 2 bis 1000 nm auf. Das Trägermaterial kann beispielsweise in Form loser Schüttungen vorliegen. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das mineralische Trägermaterial eine netzartige Membran aus Silikagel-, Glas- oder Quarzfaser, mit einer Porengröße < 0,5 µm, an die die freigesetzte Nukleinsäure adsorbiert werden kann. Eine ebenfalls bevorzugte Ausführungsform stellt eine Vorrichtung dar, bei der das mineralische Trägermaterial ein partikelförmiges anorganisches Polymer, wie Kieselgel oder Quarzgel, mit einer Partikelgröße von 15 bis 25 µm ist.

Der in der erfindungsgemäßen wäßrigen Lösung verwendbare pH- Indikator weist vorzugsweise im neutralen bis schwach alkali­ schen Bereich mindestens eine pH-abhängige Farbänderung auf.

Vorzugsweise beträgt die Menge der Indikatorsubstanz in einer wäßrigen Lösung 1 bis 10 Vol.-%, ausgehend von einer Stammlösung aus einer gesättigten Lösung der betreffenden Indikatorsubstanz.

Als geeignet haben sich insbesondere die Farbstoffe Kresolrot und/oder m-Kresolpurpur erwiesen.

Die genannten Farbstoffe besitzen den Vorteil, daß sie zum einen nicht mit den zu isolierenden Nukleinsäuren interferieren und darüber hinaus eine gute Ablesbarkeit im Bereich zwischen pH 7 und pH 9 gewährleisten. Es haben sich insbesondere 3 bis 5 Vol.-% Kresolrot und/oder m-Kresolpurpur in der wäßrigen Lösung bewährt.

Die Verwendung der erfindungsgemäßen wäßrigen Lösung ist zur Bindung von Nukleinsäuren an Silikagel-Materialien geeignet, obwohl nicht unbeträchtliche Mengen an Indikatorsubstanz vorhan­ den sind.

Claims (4)

1. Wäßrige Lösung enthaltend Salze und/oder Puffersubstanzen, dadurch gekennzeichnet, daß die Lösung eine pH-Indikator­ substanz enthält, die im Bereich über pH 1 mindestens eine pH-abhängige Farbänderung erfährt.

2. Wäßrige Lösung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Indikatorsubstanz in einer wäßrigen Lösung in einer Konzentration von 1 bis 10 Vol.-% vorliegt, ausgehend von einer Stammlösung aus einer gesättigten Indikatorsubstanz­ lösung.

3. Wäßrige Lösung nach Anspruch 1 und/oder 2, dadurch gekenn­ zeichnet, daß als Indikator Kresolrot und/oder m-Kresol­ purpur verwendet wird.

4. Verwendung einer wäßrigen Lösung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Bindung von Nukleinsäuren an mineralischen Trägern.