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DE19514523A1 - Neue Cytosin- und Cytidinderivate - Google Patents

Neue Cytosin- und Cytidinderivate

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Publication number
DE19514523A1
DE19514523A1 DE1995114523 DE19514523A DE19514523A1 DE 19514523 A1 DE19514523 A1 DE 19514523A1 DE 1995114523 DE1995114523 DE 1995114523 DE 19514523 A DE19514523 A DE 19514523A DE 19514523 A1 DE19514523 A1 DE 19514523A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
pyrrolo
tetrahydro
hydrogen
pyrimidin
fluorine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE1995114523
Other languages
English (en)
Inventor
Helmut Prof Vorbrueggen
Konrad Krolikiewicz
Michael Dr Schirner
Martin Prof Schneider
Herbert Dr Wiesinger
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Pharma AG
Original Assignee
Schering AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering AG filed Critical Schering AG
Priority to DE1995114523 priority Critical patent/DE19514523A1/de
Priority to AU54000/96A priority patent/AU5400096A/en
Priority to PCT/EP1996/001595 priority patent/WO1996032403A2/de
Publication of DE19514523A1 publication Critical patent/DE19514523A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/14—Pyrrolo-pyrimidine radicals

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  • Engineering & Computer Science (AREA)
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  • Genetics & Genomics (AREA)
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Description

Die Erfindung betrifft Cytosin- und Cytidinderivate, deren Herstellung und Verwendung in Arzneimitteln.
Die therapeutische Anwendung von Cytidinen, insbesondere von Aracytidin und anderen Cytosin-Derivaten als Cytostatika oder Virustherapeutika wird beeinträchtigt durch ihre schnelle Deaktivierung durch Cytidin-Deaminasen, wobei aus den biologisch potenten Cytidinen bzw. Cytosin-Derivaten die entsprechenden inaktiven Uridine bzw. Uracil-Derivate entstehen wie von G. W. Camiener et al., Biochem. Pharmacol 14, 1405 (1965), 16, 1681 (1967) und W. Kreis et al., Helv. Chim. Acta 61, 1011 (1978) beschrieben wird. Daher ist es von großem therapeutischen Interesse, Cytidine bzw. Cytosin-Derivate zu synthetisieren, die nicht Substrate der Cytidin-Deaminase sind und eine längere Wirkdauer in vivo besitzen.
Es wurde nun überraschend gefunden, daß Ansa-Cytosin- und Ansa-Cytidin-Derivate, die eine Dimethylengruppierung zwischen dem C⁵-Kohlenstoff-Atom und dem N⁴-Stickstoff- Atom aufweisen, biologisch potente Moleküle darstellen, die nicht Substrate der Cytidin- Deaminase sind und daher nicht die oben erwähnten Nachteile der bereits zum Stand der Technik gehörenden Cytosin- und Cytidin-Derivate besitzen.
Gegenstand der Erfindung sind Cytosin- und Cytidin-Derivate der allgemeinen Formel 1,
worin
R Wasserstoff, CHO, COR⁶ mit R⁶ in der Bedeutung von C₁-C₁₇-Alkyl und Phenyl, oder COOR⁷ mit R⁷ in der Bedeutung von C₁-C₄-Alkyl oder Benzyl
R′ Wasserstoff oder die Gruppen
worin
n 1 oder 2
X O, S, CH₂ oder NR,
R² Wasserstoff, Fluor, CH₃ oder CN,
R³ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy oder -OCH₃,
R⁴ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy, N₃ oder NH₂,
R⁵ Wasserstoff oder PO(OH)₂,
R², R³ gemeinsam =CH₂,
R³, R⁴ gemeinsam eine Doppelbindung bilden und deren Salze.
Falls n=2 ist, können alle Substituenten R² und R³ unterschiedlich sein.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel 1 lassen sich beispielsweise folgendermaßen dar­ stellen:
Das bekannte 5-Hydroxyäthylcytosin 7 (J. D. Fissekis et al.; J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) läßt sich z. B. mit Triphenylphosphin-Dihalogeniden wie Bromid oder Chlorid und Triethylamin oder nach Mitsunobu zum neuen, noch nicht beschriebenen Ansa-Cytosin 1 (R =R₁=H) cyclisieren, das sich zu den N-Acylderivaten wie dem N⁴-Acetylderivat 1 (R= COCH₃; R′=H) acylieren läßt. Silylierung von 1 (R=R₁=H) mit Hexamethyldisilazan (HMDS) in Gegenwart einer katalytischen Menge Trimethylchlorsilan (TCS) in abs. Acetonitril gibt die 2,4-Bistrimethylsilylverbindung 8a, die sich mit 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O- benzoyl-β-D-ribofuranose 9 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat (oder SnCl₄) in Lösungsmitteln wie abs. 1,2-Dichlorethan oder Acetonitril in das geschützte kristalline Ansacytidin 10 umwandeln läßt. Analog reagiert die monosilylierte N⁴-Acetylverbindung 8b zum N⁴-acetylierten 2′,3′,5′-Tri-O-benzoyl-ribofuranosid (10 mit N⁴-Acetylgruppe). Verseifung des Tribenzoates 10 ergibt das freie, kristalline Ansacytidin 11. Alternativ liefert die Umsetzung von persilyliertem 5-Hydroxyethyluracil mit 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl­ β-D-ribose 9 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat (oder SnCl₄) das 5-Hydroxyethyl-2′,3′,5′- tri-O-benzoyl-uridin 12. Umsetzung von 12 mit POCl₃ (oder mit Triphenylposphin/1,2-Di­ bromtetrachloräthan) in Acetonitril ergibt die geschützte Dichlor- (oder Di-brom-)verbindung 13, die sich mit methanolischem Ammoniak in Gegenwart von tertiären Basen wie Triethylamin, Ethyldiisopropylamin oder DBU unter gleichzeitiger Verseifung der O- Benzoylgruppen zum freien Ansacytidin 11 cyclisiert.
a) R⁵ = H, b) R⁵ = PO(OH)₂, c) R⁵ = PO(OH)ONa
Das Ansacytidin 11 läßt sich nach den üblichen Methoden, z. B. durch Reaktion von 11 mit 2-Acetoxyisobuttersäurechlorid (J. G. Moffatt et al.; J. Org. Chem. 39, 2182 (1974)) oder 2- Acetoxybenzoylchlorid (J. J. Fox et al.; Synthesis 533 (1976)) bei 24°C in Acetonitril bzw. durch Erhitzen mit Diphenylcarbonat in Gegenwart von Natriumbicarbonat (C. B. Reese et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 1172 (1982)), oder Ethylencarbonat (Ajinomoto Inc., DOS 2.261215) ins 2,2′-Anhydro-ansacytidin-Hydrochlorid 14 überführen. Nachfolgende Behand­ lung mit wäßrigem Ammoniak oder 1 N NaOH, Abdampfen, und Kristallisation aus Methanol liefert das kristalline Ansa-ara-cytidin 15a. Umsetzung mit äquivalenten Mengen an methanolischer HCl und vorsichtigen Konzentrieren bei T < 20° ergibt das kristalline Ansa- ara-cytidin-Hydrochlorid 15a HCl. Phosphorierung mit POCl₃ in Triethylphosphat ergibt das Phosphat 15b aus dem sich über Nacht das Monophosphat 15c herstellen läßt.
Alternativ läßt sich 2,2′-Anhydro-ansacytidin 14 aus dem Oxazolin 16, das aus D-Arabinose und Cyanamid einfach zugänglich ist (R. A. Sanchez und L. E. Orgel, J. Mol Biol. 47, 531 (1970); D. H. Shannahoff und R. A. Sanchez, J. Org. Chem. 38, 593 (1973)), durch Kon­ densation mit 2-Formyl-pyrrolidon 17 herstellen. Kondensation von 17 mit Harnstoff oder N¹,N²-bis-Trimethylsilylharnstoff ergibt Ansacytosin 1 (R=H; DPTBS; BOC).
Selektiver Schutz der 5′-Hydroxylgruppe in 11 (oder dem entsprechenden N⁴-Acetylderivat) durch Tritylierung oder Silylierung, anschließende Mesylierung der 2′,3′-Hydroxylgruppen und Behandlung mit Li₂Te liefert die 5′-geschützte 2′,3′-Didehydro-2′,3′-dideoxyverbindung, aus der sich durch Hydrierung und anschließende Entfernung der 5′-Schutzgruppe das 2′,3′- Dideoxyansa-ara-cytidin herstellen läßt. Reaktion der Silylverbindung 8b mit 1-α-Chloro-2- desoxy-3,5-di-O-toluolyl-D-ribofuranose 18 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat in abs. 1,2-Dichlorethan ergibt ein α/β-Gemisch der geschützten 2′-Deoxyverbindungen, aus dem sich das β-Anomer 19 kristallin vom α-Anomer 20 abtrennen läßt.
Verseifung von 19 mit methanolischem Ammoniak führt zum freien kristallinen 2′-Desoxy­ ansacytidin 21.
Reaktion von 8b mit dem 2-Fluorderivat 22 (vgl. J. A. Martin et al., J. Med. Chem. 33, 2137 (1990)) gefolgt von Verseifung und Trennung ergibt neben dem β-Anomer 23 das α-Anomer 24.
Umsetzung von 8b mit dem 2,2-Difluorzucker 25 (T. S. Chou, P. C. Heath, L. E. Patterson, L. M. Poket, R. E. Lakin und A. H. Hunt, Synthesis 565 (1992)) in Gegenwart von Trime­ thylsilyltriflat in 1,2-Dichlorethan liefert nach Trennung und Verseifung das 2′-Desoxy-2′,2′- difluor-ansacytidin 26 sowie das entsprechende α-Anomer 27.
Reaktion des 2′-Desoxyansacytidins 21 mit tert.-Butyldiphenylsilylchlorid und nachfolgen­ dem Erhitzen mit Diphenylcarbonat/NaHCO₃ ergibt das 2′-Deoxy-2,3′-anhydro-ansa-cytidin 28, das sich mit HN₃ oder AlF₃ und nachfolgender Abspaltung der TBDPS-Gruppe mit F⁻ in das 3′-Azidoderivat 29 sowie das 3′-Fluoroderivat 30 umwandeln läßt.
Das 3′-Azidoderivat 29 läßt sich zum 3′-Aminoderivat hydrieren. Reaktion des N-acetylierten Ansacytidins 31 mit TIPS-Cl₂ und anschließende CrO₃-Oxydation ergibt das 2′-Keton 32, das in einer Wittig-Reaktion gefolgt von Fluorid-Behandlung das freie 2′-Methylennucleosid 33 liefert. Reaktion des Ketons 22 mit NaCN/NaHCO₃ in Et₂O/H₂O führt zum Cyanohydrin 34. Acylierung von 34 mit C₆H₅-O-CS-Cl in Gegenwart von Triethylamin-DMAP und nach­ folgende radikalische Reduktion mit Bu₃SnH/ AIBN und schließlich Abspaltung der Silyl­ gruppen liefert das 2′-Desoxy-2-cyanoansacytidin 35 (vgl. A. Matsuda et al., Tetrahedron Lett. 32, 6003 (1991)).
Die Umsetzung von 8b mit reaktiven Zwischenstufen wie z. B. den entsprechenden Halo­ genderivaten ergibt die Secoderivate 3′ (vgl. A. Holy, Coll Czech. Commun. 58, 649 (1993), P. R. Brodfuehrer et al., Tetrahedron Lett. 35, 3243 (1994)), 4′ und 5′, während die
Reaktion von 8 mit 5-Acetoxy-2-acetoxymethylthiazolidin in Gegenwart von Trimethyl­ silyltriflat und nachfolgende Verseifung ein cis/trans-Gemisch liefert, aus dem sich das Nucleosid 6 rein abtrennen läßt.
Gegenstand der Erfindung ist das Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel 1
worin die Reste R′ und R die oben angegebene Bedeutung haben, dadurch gekennzeichnet, daß man
  • a) eine Verbindung der Formel 7 mit Triphenylphosphindihalogenid und einem tertiären Amin umsetzt oder
  • b) ein Formylpyrrolidon-Derivat der Formel 17 worin R¹³ Wasserstoff, einen SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶-Rest, in dem R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ gleich oder ver­ schieden sind und Phenyl oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten, oder tert.-Butyloxycarbonyl bedeutet,
    mit einem Harnstoffderivat oder einem Isoharnstoffderivat wie 16,
    worin R¹⁷, R¹⁸ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶ bedeuten,
umsetzt und gewünschtenfalls anschließend in 7-Stellung formyliert, acyliert oder COOR⁷ einführt oder
in 3-Stellung den gegebenenfalls Hydroxyschutzgruppen enthaltenden Rest R′ einführt und anschließend gewünschtenfalls N₃, NH₂, Fluor, CN oder =CH₂ einführt oder R³, R⁴ in der Bedeutung einer Doppelbindung einführt und diese gewünschtenfalls hydriert oder 5′ Hydroxylgruppen in das 5′-Phosphat überführt und gegebenenfalls Schutzgruppen abspaltet oder die Salze bildet.
Als Salze der 5′-Phosphate sind Alkalisalze wie Natrium- und Kalisalze und Ammoniumsalze geeignet. Als Hydroxyschutzgruppen können die gebräuchlichen Gruppen eingesetzt werden. Unter Alkyl sind geradkettige und verzweigte Alkyle zu verstehen, insbesondere C1-4-Alkyle und C₁₅- und C₁₆-Alkylenreste.
Als bevorzugte Bedeutung des Restes R′ ist die Gruppe 2 zu betrachten, wobei insbesondere n=1 und X=O bevorzugt sind.
Die Nucleoside der Formel 1 mit freien 5′-Hydroxylgruppen lassen sich mit Hilfe bekannter Methoden (M. Yoshikawa, T. Kato und T. Takenishi, Bull Chem. Soc. Jap. 42, 3505 (1969) sowie T. Sowa und S. Ouchi, Bull Chem. Soc. Jap. 48, 2084 (1975)) leicht in die entsprechenden 5′-Phosphate und deren Salze überführen.
Die aufgeführten neuen Ansacytidine der allgemeinen Formel 1 sowie ihre 5′-Phosphate und Salze zeichnen sich speziell durch langanhaltende in vitro und in vivo Wirkung in verschiedenen Mäuse-Leukämiemodellen, insbesondere bei der L1210-Leukämie der Maus, der Zellkultur HL 60 sowie bei verschiedenen Viruskrankheiten aus.
Insbesondere die Verbindung 21 sowie die entsprechenden Phosphoramidate von 21, eignen sich hervorragend für die Bildung von stabiler Triplex-DNA (vgl. 5-Methyl-2′deoxycytidin: G. C. Best und P. B. Dervan, J. Amer. Chem. Soc. 117; 1187 (1995)).
Zur Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als Arzneimittel werden diese in die Form eines pharmazeutischen Präparats gebracht, das neben dem Wirkstoff für die enterale oder parenterale Applikation geeignete pharmazeutische, organische oder anorganische inerte Trägermaterialien, wie zum Beispiel, Wasser, Gelantine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Öle, Polyalkylenglykole usw. enthält. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, zum Beispiel als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln oder in flüssiger Form, zum Beispiel als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls enthalten sie drüber hinaus Hilfsstoffe wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel oder Emulgatoren, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks oder Puffer.
Für die parenterale Anwendung sind insbesondere Injektionslösungen oder Suspensionen, insbesondere wäßrige Lösungen der aktiven Verbindungen in polyhydroxyethoxyliertem Rizinusöl, geeignet.
Als Trägersysteme können auch grenzflächenaktive Hilfsstoffe wie Salze der Gallensäuren oder tierische oder pflanzliche Phospholipide, aber auch Mischungen davon sowie Liposome oder deren Bestandteile verwendet werden.
Für die orale Anwendung sind insbesondere Tabletten, Dragees oder Kapseln mit Talkum und/oder Kohlenwasserstoffträger oder -binder, wie zum Beispiel Lactose, Mais- oder Kartoffelstärke, geeignet. Die Anwendung kann auch in flüssiger Form erfolgen, wie zum Beispiel als Saft, dem gegebenenfalls ein Süßstoff beigefügt ist.
Die Dosierung der Wirkstoffe kann je nach Verabfolgungsweg, Alter und Gewicht des Patienten, Art und Schwere der zu behandelnden Erkrankung und ähnlichen Faktoren variieren.
Soweit die Herstellung der Ausgangsverbindungen nicht beschrieben wird, sind diese bekannt oder analog zu bekannten Verbindungen oder hier beschriebenen Verfahren herstellbar.
Die nachfolgenden Beispiele sollen das erfindungsgemäße Verfahren erläutern:
Beispiel 1 Herstellung des 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]pyrimidin-2-on 1 (R = R′=H)
Zu einer gerührten Suspension von 7,75 g (50 mmol) des bekannten 5-(2-Hydroxy­ ethyl)cytosins 7 (J. D. Fissekis et al., J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) und 15,73 g (60 mmol) Triphenylphosphin wurde bei +4 → 7° eine Lösung von 17,91 g (55 mmol) 1,2- Dibromotetrachlorethan in 75 ml abs. DMF innerhalb von 1 h zugetropft und noch 0,5 h bei +6° gerührt. Nach Aufwärmen auf 21° wurde die Reaktionsmischung nach 18 h bei 21°C belassen, dann 25,85 g (200 mmol) N-Ethyl-N-diisopropylamin zugegeben und die Reak­ tionsmischung 2 h bei 82-84° Ölbadtemperatur erhitzt, wobei anfangs eine klare Lösung entstand, aus der aber nach ca. 45 Minuten wieder Kristalle ausfielen. Nach Abkühlen auf 65° wurde filtriert und die abgesaugte Substanz mit 35 ml DMF gewaschen, wobei 2,51 g reines 1 erhalten wurde. Das Filtrat wurde bei 65-70° im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit 500 ml CH₂Cl₂ und 20 ml N-Ethyl-N-diisopropylamin gerührt und die ungelöste Substanz abgesaugt und nochmals mit 100 ml CH₂Cl₂ sowie 10 ml N-Ethyl-N-diisopro­ pylamin gewaschen und getrocknet, wobei weitere 5,03 g 1 erhalten wurden. Beide Positio­ nen 1 wurden in 150 ml H₂O suspendiert und unter Rühren so lange ges. NaHCO₃-Lösung zugegeben, bis ein pH = 8-9 erreicht wurde. Nach einer weiteren Stunde Rühren bei 24° wurde abgedampft und der Rückstand aus 50 ml H₂O unter Zusatz von Aktivkohle umkri­ stallisiert, wobei 4,8 g 1, Schmp. 310° (zers.) (Sublimation bei 260°) erhalten wurden (¹H- NMR (DMSO-D₆ δ: 2.68-2.73 (tr, CH₂-C), 3.56-3.63 (tr, CH₂-N), 7.18 (s, H-C=C).
Beispiel 2 Darstellung von 7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 1 (R = COCH₃; R′ = H)
3,7 g (29,98 mmol) 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on wurden in 50 ml abs. Pyridin suspendiert und 8 ml Acetanhydrid zugegeben, worauf sich die Reaktionsmischung auf 28° erwärmte. Die nach einer Stunde Rühren klar gewordene Lösung wurde nach 18 h im Vakuum abgedampft, dreimal nach Zugabe von jeweils 30 ml abs. Xylol eingeengt und der Rückstand an der Ölpumpe getrocknet. Bei der Umkristallisation aus 50 ml Methanol und 2 ml H₂O wurden 1,58 g N-Acetylverbindung, Schmp. 274-279° und bei der Konzentration der Mutterlauge auf 25 ml weitere 0,68 g = insgesamt 2,26 g N- Acetylverbindung erhalten. Die abgedampfte Mutterlauge wurde mit 25 ml Pyridin - 5 ml Acetanhydrid nachacetyliert und nach 20 h mit Xylol mehrfach im Vak. abgedampft, wobei weitere 2,1 g praktisch reine N-Acetylverbindung erhalten wurden. Schmp. 274-279°C, ¹H- NMR (DMSO-D₆) δ: 2,56 (s, CH₃CO), 2,72-2,78 (m, CH₂-C=), 3,88-3,92 (m, CH₂-N), 7,56 (s, H-C=C), 11,05 (br, HN)
Beispiel 3 3-(2′,3′,5′-Tri-O-benzoyl-β-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3- d]pyrimidin-2-on 10
Ca. 5-6 g rohes 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 1 (R′ = R = H) wurden mit 20 ml abs. Pyridin mit 125 ml Hexamethyldisilazan 12 h gekocht, dann im Vakuum ein­ geengt und der Rückstand zweimal mit je 50 ml Xylol abgedampft und schließlich an der Ölpumpe getrocknet, wobei 10,41 (36,97 mmol) kristalline Bisilylverbindung 8a erhalten wurde. Die Silylverbindung wurde mit 18,64 g (36,97 mmol) 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O- benzoyl-β-D-ribofuranose 9 unter Stickstoff in 200 ml abs. 1,2-Dichloräthan gelöst, darauf 8 ml (44 mmol) Trimethylsilyltriflat in 75 ml 1,2-Dichlorethan innerhalb von 30 min unter Rühren bei 24° zugetropft und die Reaktionsmischung 72 h bei 24° belassen. Nach Verdünnen mit 250 ml CH₂Cl₂ wurde mit 200 ml eiskalter gesättigter NaHCO₃-Lösung geschüttelt, die Phasen getrennt und die wäßrige Phase mit 2 × 200 ml CH₂Cl₂ nachextrahiert. Nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen wurde der amorphe Rückstand (22,4 g) CH₂Cl₂ an einer Säule von 450 g SiO₂ chromatographiert, wobei 1 l CH₂Cl₂ sowie weitere 2 l CH₂Cl₂- Isopropanol (98 : 2) nur 3,15 g Nebenprodukte enthielten, während weitere Elution mit 2-3 l des 98 : 2-Gemisches 17,25 g (80,23%) reines homogenes Nucleosid 10 lieferte, das aus wenig Methanol kristallisierte. Schmp. 224-226°C, ¹H-NMR (DMSO-D₆) δ: 2.99 (tr, 2 H; CH₂-C=C), 3,74 (tr, 2 H; CH₂-N), 3,79-3,92 (m, 2 H; H₅′), 4,13 (m, 1 H, H₄′) 4,21 (m, 1 H, H₃′), 4,28-4,32 (m, 1 H; H₂′), 7,48 (s, 1 H, H-C=C)
Beispiel 4 3-β-D-Ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 11
16,15 g (27,8 mmol) 2′,3′,5′-Tri-O-benzoat 10 wurden 72 h in 250 ml gesättigtem methanoli­ schem Ammoniak belassen, wonach das Dünnschichtchromatogramm im System n-Butanol : AcOH : H₂O = 4 : 1: 5 (obere Phase) kein Ausgangsmaterial 10 mehr anzeigte. Beim Ab­ dampfen begann bereits das freie Nucleosid 11 zu kristallisieren. Der Rückstand wurde in 300 ml H₂O und 200 ml Methyl-t-butylether aufgenommen und nach Trennung der Phasen die wäßrige Phase nochmals mit 200 ml Methyl-t-butylether nachextrahiert. Nach Einengen der wäßrigen Phase auf 150 ml wurden 2 g Aktivkohle zur gelben, heißen wäßrigen Lösung gegeben, die abfiltrierte Kohle mit 75 ml heißem H₂O nachgewaschen und die vereinigten H₂O-Filtrate eingedampft, wobei 7,8 g rohes kristallines Nucleosid erhalten wurden. Bei der Umkristallisation aus einem Gemisch von 175 ml Ethanol und 40 ml H₂O wurden 4,8 g 11, Schmp. 224-226°, erhalten sowie aus der Mutterlauge noch 1,84 g 11. Gesamtausbeute = 6,64 g (88,8%) ¹H-NMR (D₂O) δ: 3,7-3,9 (m); 4,07-4,12 (n, H₄′) 4,17-4,22 (m, H₃′), 4,27-4,30 (m, H₂′), 5,92-5,95 (m, H₁′), 7,47 (s, H-C=C)
Beispiel 5 2,2′-Anhydro-3(β-D-arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin- 2-on-hydrochlorid 14
Zu einer Suspension von 1,35 g (5 mmol) der Verbindung 11 in 50 ml abs. Acetonitril wur­ den 3,29 g (20 mmol) Acetoxyisobuttersäurechlorid bei 21° gegeben und die Reaktionsmi­ schung 4 h bei 21° gerührt, wobei sich nach ca. 1 h eine klare, farblose Lösung bildete und nach 4 h das Ausgangsmaterial 11 im System obere Phase von n-Butanol-Essigsäure-H₂O (4 : 1 : 5) nicht mehr nachweisbar war. Nach Abdampfen und dreimaligen Ausrühren des farblosen viskosen Rückstandes mit jeweils 100 ml Diäthylether wurden 75 ml 1-molare methanolische HCl zugegeben und bei 21° ca. 18 h gerührt, wobei farblose Kristalle ausfie­ len, die mit 40 ml abs. Methanol gewaschen und getrocknet wurden, 1,14 g (79%) 14, Schmp. 235° (Zers.). Nach Abdampfen des Filtrates verblieben 0,16 g im Rückstand. ¹H- NMR (DMSO-D₆) δ: 3,03-3,07 (m, CH₂-C=C), 3,4-3,43 (m, CH₂OH), 3,82-3,86 (m, N- CH₂), 4,22 (s, H-4′), 4,48 (s, H-3′), 5,04 (m, 5-OH), 5,4 (d, H₂′), 6,5 (d, H₁′), 7,96 (s, H-C=C)
Beispiel 6 3-(β-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d)pyrimidin-2-on 15a und Hydrochlorid 15a·HCl
a) Eine Suspension von 2,69 g (10 mmol) des Ribofuranosids 11 in 150 ml Acetonitril wurde mit 9,875 g (60 mmol) α-Acetoxyisobuttersäurechlorid versetzt und 5 h bei 24 ° gerührt. Nach Abdampfen des Acetonitrils wurde der Rückstand zweimal mit 300 ml Diethylether je­ weils 15 Minuten gerührt, wobei sich ein feiner weißer Niederschlag absetzte. Die Etherphase wurde dekantiert, der Niederschlag mit 25 ml konz. Ammoniak versetzt und die sich bildende klare Lösung 48 h stehen gelassen. Nach Abdampfen wurde zweimal mit jeweils 30 ml H₂O und 30 ml Methanol abgedampft. Nach Versetzen mit 50 ml Methanol fielen farblose Kristalle aus, die abfiltriert wurden = 0,27 g 15, Schmp. 230-234° (Zers.). Nach Einengen der Mutterlauge und Zugabe von 30 ml Methanol konnten nach 18 h weitere 0,743 g 15 abfiltriert werden, Schmp. 231-235° (Zers.). Nach Abdampfen der Mutterlauge wurde der Rückstand mit 30 ml Pyridin und 15 ml Acetanhydrid 18 h bei 22° gerührt. Die hellgelbe Lösung lieferte nach Abdampfen und zweimaliger Kodestillation mit 2 × 40 ml Toluol einen Rückstand, der mit 60 ml eiskalter gesättigter NaHCO₃-Lösung - 100 ml CH₂Cl₂ geschüttelt wurde. Die CH₂Cl₂-Phase wurde mit Na₂SO₄ getrocknet und abgedampft. Nach Lösen in Essigester wurde über eine Säule von 100 g Silicagel filtriert. Nach 750 ml Vorlauf ergaben die nächsten 750 ml Eluat 1,9 g reines 2′,3′,5′-Tri-O-Acetat, das mit 50 ml methanolischer NH₃ über Nacht verseift wurde. Nach Abdampfen kristallisierte der Rückstand (1,8 g) aus Methanol und ergab in zwei Portionen weitere 0,7 g 15a, Schmp. 232-235°. Gesamtausbeute an 15a = 1,71 g (63,5%). MS (EI) m/z = 269 (M⁺), 251 (M-H₂O), 238, 208, 177, 166, 150, 138, 121, 110, 95, 82, 70, 55, 43. ¹H-NMR (DMSO) 2,82 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂-C) 3,53 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂-N) 3,59 (m, 2 H, C₅-CH₂) 3,61 (m, 1 H, H₄′) 3,89 (m, 1 H, H₃′) 3,92 (m, 1 H, H₂′) 4,9 (tr, J = 5 Hz, 1 H, 5′ OH) 5,3 (d, J = 6 Hz, OH) 5,33 (tr, J = 4 Hz, 1 H, OH) 6,02 (d, J = 4 Hz, 1 H, H₁′) 7,37 (d, 1 H, H-C=C) 7,76 (s, NH).
b) Ausgehend von 4,03 g (15 mmol) des D-Ribofuranosids 11 ergab die analoge Umsetzung (vgl. Beispiel 5) mit 9,875 g (60 mmol) α-Acetoxyisobutteräurechlorid 3,5 g rohes 2,2′- Anhydroprodukt 14, das mit 10% wäßrigem Ammoniak 3 Tage bei 22° gerührt wurde. Nach Abdampfen und zweimaliger Zugabe von jeweils 30 ml H₂O wurde der ölige Rückstand in 120 ml Methanol mit 30 ml 2 N NaOH versetzt und abgedampft. Nach Suspendieren in 100 ml Methanol und 15minütigem Rühren wurde der farblose Niederschlag abfiltriert und mit 30 ml Methanol gewaschen. Die Filtrate wurden mit soviel methanolischer HCl versetzt, bis ein pH von 3 erreicht wurde, wobei NaCl ausfiel. Nach 30minütigem Rühren wurde das NaCl abfiltriert und mit 30 ml Methanol gewaschen. Die Filtrate wurden abgedampft und mit absolutem Ethanol extrahiert, wobei 3,28 g Ansa-aracytidin-Hydrochlorid 15a-HCl, Schmp. = 212-216° (Zers.) ausfiel, das mit 25 ml Methanol gewaschen wurde. Die abge­ dampften Mutterlaugen wurden in 35 ml Methanol heiß gelöst, wobei beim Abkühlen weitere 0,23 g 15a·HCl, Schmp. 212-216° (Zers.) gewonnen wurden. Gesamtausbeute an 15· HCl = 3,51 g (76,53%), MS (CI) m/z = 270 (M + 1)168, 138, ¹H-NMR (D₂O) δ: 2,95 (m, 2 H; CH₂-C=C), 3,6 (m, 2 H; H₅′), 3,78 (m, 1 H, H₄′), 3,58 (m, 2 H; CH₂N), 3,92 (m, 1 H; H₃′), 4,04 (m, 1 H; H₂′), 5,49 (m, 1 H, H₁′), 7,72 (s, 1 H; H-C=C)
Beispiel 7 3-(β-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on-5′-O- phosphat 15b
Eine Suspension von 0,404 g (1,5 mmol) 3-(β-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H- pyrrolo-(2,3-d)-pyrimidin-2-on 15 in 7.5 ml Triethylphosphat wurde bei -25° unter Rühren während einer Stunde langsam mit Hilfe einer Spritze mit 0,173 ml (1.88 m mol) Phosphoroxychorid versetzt und anschließend noch 1 Stunde bei ca. -20° gerührt und dann im Eisbad noch 2 Stunden bei +2° gerührt. Nach Einrühren in 25 ml Eiswasser wurde noch 2 Stunden bei 22° gerührt und das Triethylphosphat durch Extraktion mit 6 × 25 ml CH₂Cl₂ aus der wässrigen Lösung extrahiert. Die wässrige Phase wurde dann langsam zu einer Lösung von 1 ml 1,2-Butylenoxyd in 180 ml Ethanol gegeben. Nach 5 Stunden Rühren bei 22° wurde die ausgefallene farblose Substanz abfiltriert und mit 20 ml Ethanol gewaschen, wobei 0,39 g 5′-Phosphat 15b erhalten wurden. Nach Abdampfen des Filtrats, Lösen in 5 ml H₂O nach Einrühren in 75 ml Ethanol fielen weitere 0,093 g 5′-Phosphat 15b aus. Gesamtausbeute = 0,483 g = 92,35% an 15b. MS (FAB/m/z = 372 (M·HO³).
Beispiel 8 Natriumsalz des 3(β-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3]pyrimidin- 2-on-5′-O-phosphats 15c
Von dem unter Beispiel 9 beschriebenen 5′-O-Phosphats wurden 0,200 g (0,57 mmol) in 10 ml H₂O suspendiert und mit 1 N NaOH der pH-Wert der Lösung auf 7 gebracht, wobei sich ein klare Lösung bildete. Nach Einrühren in 70 ml Ethanol wurde 2 Stunden bei 22° gerührt, abfiltriert und mit 15 ml Ethanol gewaschen, wobei nach Trocknen im Vakuum 0,196 g (92,9%) reines Mononatriumsalz des 5′-O-phosphats-15c- erhalten wurde, MS (FAB) m/z = 394 (M+Na) 372 (M-HO³) 237, 133 IR/KBr) 1680, 1575, 1505, 1315 cm-1
Beispiel 9 3-(2′-Desoxy-3′,5′-di-O-toluoyl-β-D-ribofuranosyl)-7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H- pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-on 19 und 3-(2′-Desoxy-3′,5′-di-O-toluoyl)-α-D- ribofuranosyI)-7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]-pyrimid-in-2-on 20
1,79 g (10 mmol) 7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-on 1 (R = COCH₃; R′ = H) wurden mit 2,1 ml (10 mmol) Hexamethyldisilazan (HMDS) und 1,27 ml (10 mmol) Trimethylchlorsilan (TCS) in 45 ml Acetonitril 2 h am Rückfluß gekocht, wobei sich eine klare Lösung bildete und NH₄Cl in den Kühler sublimierte. Nach Abdampfen wurde der Rückstand noch dreimal mit jeweils 15 ml abs. Xylol abgedampft. Den kristallinen Rück­ stand suspendierte man in 120 ml abs. 1,2-Dichlorethan und fügte 3,86 g (10 mmol) 3,5- Di-O-toluolyl-2-desoxy-α-D-ribofuranosylchlorid sowie anschließend bei +5° 1,99 ml (11 mmol) Trimethylsiltriflat in 40 ml abs. 1,2-Dichlorethan während 30 min. unter Rühren hinzu. Nach weiteren 15 min bei +7° wurde ca. 4 h bei +21° gerührt und die Reaktionsmi­ schung 18 h bei +4° im Kühlschrank aufbewahrt. Bei Aufarbeitung mit 120 ml eiskalter NaHCO₃-Lösung fiel etwas rotbraune Substanz aus, und es bildete sich eine Emulsion. Nach Filtration über ein G 4 Fritte und Nachwaschen mit CH₂Cl₂ wurden die Phasen getrennt und die wäßrige Phase mit zweimal 60 ml CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigte organische Phase lieferte nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen 4,75 g bräunliches amorphes Rohprodukt, das in 40 ml Essigester - CH₂Cl₂ (1 : 1) gelöst und an einer Säule von 180 g Silicagel chromatographiert wurde. Elution mit 1 l Essigester - CH₂Cl₂ (1 : 1) lieferte 0,15 g rotbraunes Öl, während die nächsten 0,5 l 3,4 g fast farbloses, partiell kristallines α/β-Gemisch von 19 und 20 ergab. Elution mit einem weiteren Liter Essigester : CH₂Cl₂ Gemisch ergab 0,43 g fast reines α-Nucleosid 20, das aus wenig Aceton kristallisierte. Kristallisation der 3,4 g α/β- Gemisch aus ca. 100 ml Aceton -CH₂Cl₂ ergab 1,5 g (28,2%) kristallines reines β-Nucleosid 19, Schmp. 203-205°. Die Mutterlauge enthielt gemäß der Dünnschicht (obere Phase von Toluol-Essigsäure-H₂O = 5 : 5: 1) hauptsächlich das α-Anomer 20 und wurde deshalb mit kristallinem α-Anomer in wenig Aceton angeimpft, wobei weiteres kristallines α-Anomer 20, Schmp. 148-150° anfiel.
β-Anomer 19 ¹H-NMR (CDCl₃) δ: 2,26-2,23 (m, 1 H, CH₂-N), 2,41 + 2,44 (s, 2 × CH₃-Ar), 2,40-2,50 (m, 1 H, CH₂-N), 2,60-2,70 (m, 1 H, H₂′), 2,69 (s, CH₃CO), 3,07 (d, d, d, J = 15 Hz; 1 H; H₂′) 3,83-3,90 + 3,94-4,02 (m, 2 × 1 H; N-CH₂), 4,60 (dd, J = 3 Hz, 11 Hz, 1 H, H₅′), 4,63 (dd; J = 2 Hz, J = 3 Hz; 1 H; H4′), 4,68 (dd, J = 2 Hz; J = 11 Hz; 1 H; H₅′), 5,62 (d, J = 7 Hz; 1 H; H₃′), 6,39 (dd; J = 6 Hz; J = 8 Hz; 1 H, H₁′), 7,24 (d, J = 8 Hz, Ar-H), 7,28 (d, J=8Hz, Ar-H), 7,64 (s, 1H; C=C-H), 7,85 (d; J=8Hz, ArH), 7,97 (d; J=8Hz, ArH)
Beispiel 10 3-(2′-Desoxy-β-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]-pyrimidin-2-on- 21
Eine Suspension von 1,3 g (2,45 mmol) 3-(2′-Desoxy-3′,5′-di-O-toluoyl-β-D-ribofuranosyl)- 7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]-pyrimidin-2-on 19 in 150 ml methanolischem Ammoniak wurde 48 h bei 22° gerührt, wobei sich eine gelbliche klare Lösung bildete. Nach Abdampfen wurde der Rückstand in 150 ml H₂O und 100 ml Methyl-t-butylether auf­ genommen. Nach Trennung der Phasen wurde die wäßrige Phase abgedampft. Der farblose, kristalline Rückstand (0,68 g) wurde aus 5 ml H₂O umkristallisiert, wobei 0,22 reines 21, Schmp. 135-140° → 223-226° erhalten wurde. Umkristallisation der abgedampften Mutterlauge aus 8 ml Ethanol-H₂O (9 : 1) ergab weitere 0,17 g 19, Schmp. 134-140° → 224-228°. Gesamtausbeute = 0,39 g 21 (63%).
Beispiel 11 3-(2 O-Acetyl-5-O-benzoyl-2-deoxy-2-fluor-β-D-arabinofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6,7- tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on
Das Ansacytoxin I (R = Ac: R′ = H) 0,896 g (5 mmol) wurde in 40 ml abs. Acetonitril mit überschüssigem Hexamethyldisilazan (HMDS)-Trimethylchlorsilan (TCS) 30 Minuten gekocht, wobei sich eine klare Lösung der silylierten Verbindung 8b bildete und NH₄Cl in den Rückflußkühler sublimierte. Nach Abdampfen der Lösung im Vakuum unter Feuchtigkeitsausschluß wurde der Rückstand zweimal mit jeweils 15 ml abs. Xylol im Vakuum abgedampft, in 20 ml 1,2 abs. Dichlorethan gelöst und eine Lösung von 1,206 g (5mmol) von 3-0-Acetyl-5-0-benzoyl-2-deoxy-2-fluor-α-D-arabinofuranosylbromid 22 zugegeben und die Reaktionsmischung 14 Stunden unter Stickstoff gekocht. Nach Abkühlen und Verdünnen der Lösung mit 50 ml CH₂Cl₂ schüttelte man mit 75 ml eiskalter ges. NaHCO₃-Lösung aus und extrahierte die wässrige Lösung noch mit 2 × 30 ml CH₂Cl₂. Nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen wurden die 2,53 g Rohprodukt in 20 ml Oberphase des Gemisches Toluol : Essigsäure : Wasser = 5 : 1: 1 gelöst und an einer Säule von 120 g Silicagel chromatographiert. Nach einem Vorlauf von 500 ml ergaben die nächsten 150 ml 0,812 g (35,35%) des einen β-Anomers, während die nächsten 150 ml 0,210 g β-α Gemischs und die letzten 150 ml 0,040 g (1,7%) reines α-Anomer ergaben.
Gesamtausbeute an Nucleosid = 1,062 g (46,2%)
β-Anomer: MS (EI) m/z = 459 (M⁺), 439 (M-1+F) 380, 338, 318, 281, 258, 219, 180, 137, 105 MS (CI) = 460 (M + H³)
1H-NMR (CDCl₃) 2,18 (s, 3H, COCH₃) 2.7 (s,3H, N-COCH₃) 2,68 (m, 2H, CH₂CH₂N) 4,05 (tr, 2H,J = 8Hz, CH₂N) 4,4 (tr, 2H, H₄) 4,68 (dd, 2H, J = 4, 12Hz, H-5′) 4,76 (dd, 2H, J = 3 + 12Hz H-5′, 5,30 (dd, 1H, J = 2 + 17Hz, H′₂), 6,28 + 6,34 (dd, 1H; J = 2, 17Hz, H′₁) 7,2- 8,08 (m, arom.) 7,58 (s, 1H, H-C = C), 4.05 (tr. 2H; J = 8 Hz, CH₂N)
Beispiel 12 3-(2-Deoxy-2-fluor-β-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3- d]pyrimidin-2-on 23
0,77 g (0,168 m mol) reines β-Anomer 3-(2′-O-Acetyl-5′-O-benzoyl-2′-deoxy-2′-fluor-β-D- arabinofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6.7-tetrahydro-2H-pyrrolo-[2,3-d]pyr-imidin-2-on wurden 20 Stunden bei 22° mit 50 ml methanolischem Ammoniak gerührt und im Vakuum abgedampft. Der Rückstand wurde mit 150 ml Wasser und 75 ml Methyl-t-butylether (MBE) aufgenommen und nach Trennen der Phasen die wässrige Phase noch zweimal mit jeweils 50 ml MBE sowie mit 75 ml CH₂Cl extrahiert. Nach Abdampfen der wässrigen Phase wurde der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst, mit 0,2 g Aktivkohle versetzt und die abfiltrierte Aktivkohle mit 10 ml Wasser nachgewaschen. Nach Abdampfen der wässrigen Phase erhielt man 0,54 g Rohprodukt, das nach Lösen in 30 ml kochendem Ethanol beim Abkühlen 0,290 g reines 23 Schmelzpunkt 219-221° und beim Einengen der Mutterlauge auf 10 ml weitere 0,038 g 23 zusammen lieferte.
MS (EI) m/z = 271 (MO³), 251 (M-H₂O), 204, 177, 137, 121, 110, 93, 82 MS (CI) m/7 = 272 (M+1)252, 177,138.
¹H-NMR (DMSO) 285 (tr, 2H, J = 8Hz, CH₂CH₂N), 3,5-3,6 (m, 3H, CH₂N) 3,78 (m, 1H, H4′) 4,12-4,21 (m, 1H, H₃′), 4,83 (dd, J = 2 + 3Hz, H′₂), 6,08 + 6,13 (dd, J = 3 + 17 Hz, H′₁) 7,4 (s, 1H, H-C=C)
Beispiel 13 3-(3,5-Di-0-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluor-β-D-ribofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6,7- tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on
Eine Suspension von 0,896 g (5 m mol) 1 (R = Ac, R′ = H) in 50 ml abs. Acetonitril wurde mit überschüssigem Hexamethyldisilazan (HMDS) und Trimethylchlorsilan (TCS) 90 Minuten gekocht, wobei sich die silylierte Verbindung 8b bildete und NH₄Cl in den Rückflußkühler sublimierte. Nach Abdampfen wurde der Rückstand (8b) 3 bis 4 Stunden bei 40-50° (10-² Bar) getrocknet und in 100 ml abs. 1,2-Dichlorethan gelöst. Man gab 2,2 g (4,8 m mol) 3,5-Di-0-benzoyl-2,2-difluor-D-ribofuranosylmesylat 25 zur Lösung und tropfte während 15 Minuten eine Lösung von 0,93 ml (5 m mol) Trimethylsilyltriflat in 20 ml abs. 1,2-Dichlorethan bei 22° unter Rühren zu. Anschließend wurde die Reaktionsmischung 14 Stunden am Rückfluß gekocht, weitere 0,37 ml (2 m mol) Trimethylsilyltriflat in 20 ml abs. 1,2-Dichlorethan bei 22° unter Rühren zu. Anschließend wurde die Reaktionsmischung 19 Stunden am Rückfluß gekocht, weitere 0,37 ml (2 m mol) Trimethylsilyltriflat zugegeben und nochmals 5 Stunden gekocht, wonach nur noch Spuren der Ausgangsbase im DC. System (Obere Phase von Toluol : Essigsäure : H₂O = 5 : 5: 1) sichtbar waren. Nach Aufarbeitung mit CH₂Cl₂, eiskalter NaHCO₃-Lösung wurde die CH₂Cl₂-Phase getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und abgedampft. Die 2.64 g rötlich braunes, öliges Rohprodukt wurden dann mit der Oberphase von Toluol : Essigsäure : H₂O = 5 : 5: 1 an einer Säule von 120 g Silicagel chromatographiert. Nach ca. 550 ml Vorlauf ergaben die nächsten 550 ml Eluat 0.73 g Gemisch während die nächsten 550 ml 0,48 g reines geschütztes α-Anomer lieferte. Eine zweite Chromatographie des 0,73 g Gemisches wiederum an 120 g Silicagel lieferte nach ca. 650 ml Vorlauf 0,540 g reines β-Anomer sowie 0,050 g reines α-Anomer.
β-Anomer: MS (CI) m/z = 540 (M⁺ + H); 498; 478; 436
¹H-NMR (CDCl₃) δ = 2.48 (tr; 2H: j= 8Hz, CH₂CH₂N) 2.53 (s, 3H; CH₃CO) 4.3 (tr; 2H; J = 8Hz, CH₂N) 4.6 (m, 1H, H₄′), 4.68-4.9 (m, 2H, H₅′), 5.63-5.68 (m, 1H, H₃′) 6.58-6.63 (m, 1H, H′₁) 7,41 (s, 1H, H-C=C), 7.45-8,13 (m, arom. H).
Beispiel 14 3-(2-Deoxy-2,2-difluor-β-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]- pyrimidin-2-on 26
Eine Suspension von 0,480 g (0,89 m mol) 3-[3,5-Di-O-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluor-β-D- ribofuranosyl)N-7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimid-in-2on in 40 ml methanolischem Ammoniak wurde 18 Stunden bei 22 gerührt, wobei sich nach ca. 30 Minuten eine klare Lösung bildete. Nach Abdampfen und Aufarbeitung mit Wasser -CH₂Cl₂ und nachfolgender Extraktion der wässrigen Phase mit CH₂Cl₂ und Essigester, wurde die wässrige Phase eingeengt und der Rückstand (0,26 g) aus 5 ml Wasser umkristallisiert, wobei in zwei Positionen 0,161 g (62,5%) reines 26, Schmelzpunkt 167-170° erhalten wurden. MS (CI) m/z = 290 (M+ H) 138, MS (EI) m/z = 290, 289 (M⁺) 272, 215, 208, 200, 95, 172, 164, 138, 137, 121, 110, 109, 93, 82, 60, 44
¹H-NMR(DMSO-D₆) δ = 3,58 (tr, 3H, J = 8Hz, CH₂CH₂N), 3.63-3.68 (m, 1H, H₄′), 3,76 (m, 1H, H₅′) 4.13-4.18 (m, 1H, H₃′) 6.1-6.15 (m, 1H, H₁′), 7.43 (s, 1H, H-C=C).

Claims (4)

1. Cytosin- und Cytidin-Derivate der allgemeinen Formel I worin
R Wasserstoff, CHO, COR⁶ mit R⁶ in der Bedeutung von C₁-C₁₇-Alkyl und Phenyl, oder COOR⁷ mit R⁷ in der Bedeutung von C₁-C₄-Alkyl oder Benzyl
R′ Wasserstoff oder die Gruppen worin
n 1 oder 2
X 0, S, CH₂ oder NR,
R² Wasserstoff, Fluor, CH₃ oder CN,
R³ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy oder -OCH₃,
R⁴ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy, N₃ oder NH₂,
R⁵ Wasserstoff oder PO(OH)₂,
R², R³ gemeinsam =CH₂,
R³, R⁴ gemeinsam eine Doppelbindung bilden und deren Salze.
2. 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on
7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on
3-β-D-Ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on
3-(β-D-Arabiflofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d)pyrimidin-2-on
3-(β-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin--2-on-5′-O- phosphat
3-(2′-Desoxy-β-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-o-n
3-(2-Deoxy-2-fluor-β-D-arabinofurano syl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3- d]pyrimidin-2-on.
3. Verwendung der Verbindungen nach Anspruch 1 und 2 zur Herstellung von Arzneimitteln.
4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I worin die Reste R′ und R die oben angegebene Bedeutung haben, dadurch gekennzeichnet, daß man
  • a) eine Verbindung der Formel 7 mit Triphenylphosphindihalogenid und einem tertiären Amin umsetzt oder
  • b) ein Formylpyrrolidon-Derivat der Formel 17 worin R¹³ Wasserstoff, einen SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶-Rest, in dem R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ gleich oder ver­ schieden sind und Phenyl oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten, oder tert.-Butyloxycarbonyl bedeutet,
    mit einem Harnstoffderivat oder einem Isoharnstoffderivat wie 16,
    worin R¹⁷, R¹⁸ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶ bedeuten, umsetzt und gewünschtenfalls anschließend in 7-Stellung formyliert, acyliert oder COOR⁷ einführt oder
    in 3-Stellung den gegebenenfalls Hydroxyschutzgruppen enthaltenden Rest R′ einführt und anschließend gewünschtenfalls N₃, NH₂, Fluor, CN oder =CH₂ einführt oder R³, R⁴ in der Bedeutung einer Doppelbindung einführt und diese gewünschtenfalls hydriert oder 5′ Hydroxylgruppen in das 5′-Phosphat überführt und gegebenenfalls Schutzgruppen abspaltet oder die Salze bildet.
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