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DE1617585C3 - Leucomycin-Antibiotica A3 bis A9 - Google Patents

Leucomycin-Antibiotica A3 bis A9

Info

Publication number
DE1617585C3
DE1617585C3 DE1967K0063272 DEK0063272A DE1617585C3 DE 1617585 C3 DE1617585 C3 DE 1617585C3 DE 1967K0063272 DE1967K0063272 DE 1967K0063272 DE K0063272 A DEK0063272 A DE K0063272A DE 1617585 C3 DE1617585 C3 DE 1617585C3
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
leucomycin
benzene
antibiotics
mixture
white
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE1967K0063272
Other languages
English (en)
Other versions
DE1617585B2 (de
DE1617585A1 (de
Inventor
Jinnosuke Shizuoka Abe
Toju Hata
Akihiro Matsumae
Satoshi Omura
Tetsuo Musashino Tokio Watanabe
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toyo Jozo KK
Original Assignee
Toyo Jozo KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toyo Jozo KK filed Critical Toyo Jozo KK
Priority to DE1967K0063272 priority Critical patent/DE1617585C3/de
Publication of DE1617585A1 publication Critical patent/DE1617585A1/de
Publication of DE1617585B2 publication Critical patent/DE1617585B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE1617585C3 publication Critical patent/DE1617585C3/de
Expired legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins

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  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

3 4
Die Erfindung betrifft die Leucomycin-Antibiotica A3 bis A9 der Formel
OH H CHO CHj CH3
0-R2
CH, O
in der R1 und R2 jeweils die folgende Bedeutung besitzen:
Rest R1 "-CH3 Rest R2 CH3 -C-CH2-CH
3 O CH3
A.,: — C—CH,
H		 — H — C-CH,—CH2-CH,
Ii
Il
O 		Il
O
A4: f — C —CH,
H		 -C-CH2-CH2-CH3
( Il
O 		I
O
As: — H -C-CH1-CH,
Il
Il
O
K- — C — CH., -C-CH2-CH3
O O
A7: — H
O
A8: — C —CH,
Ν
Il
O
A9:
und deren pharmakologisch nicht giftige Salze.
Es sind bereits verschiedene Leucomycin-Macrolid-Antibiotica bekannt aus Journal of Antibiotics, Ser. A, Bd. VI, Nr. 2 (1953) Seiten 87-89 sowie Chemical Abstracts, Bd. 51 (1957), Seite 11 665 letzter Absatz bis 11 666 Absatz 1, Bd. 53 (1959) Seiten 10 323i bis 10 324c und Bd. 55 (1961) Seiten 21 475i bis 21 476a und die als Leucomycine Ai, A2, Bi, B2, B3 und B4 bezeichnet werden. Die Gewinnung dieser bekannten Leucomycin-Antibiotica und die Eigenschaften dieser Substanzen sind in den Japanischen Patentschriften 2 14 984, 2 78 546 und 2 78 547 beschrieben. Diese bekannten Leucomycine haben zwar gute antibakterielle Wirksamkeit und vergleichsweise niedrige Toxizität, jedoch liegt die inhibierende Konzentration gegen verschiedene Testorganismen, wie Salmonella typhosa, Salmonelly thyphimurium, Shigeiia dysentariae, Proteus vulgaris, Candida albicans, Aspergillus niger, relativ hoch.
Die erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica A3 bis A9 besitzen überraschenderweise gegenüber den bekannten Leucomycin-Antibiotica unterschiedliche Wirkungsspektren und haben gegen bestimmte pathogene Mikroorganismen eine erheblich bessere Wirkung als das bekannte Leucomycin. Die inhibierende Konzen-
tration liegt für die erfindungsgemäßen Leucomycine zum Teil um Zehnerpotenzen niedriger. Ein weiterer Vorteil besteht darin, daß auch die Toxizität der erfindungsgemäßen Leucomycine etwas geringer ist.
Das antimikrobielle Wirkungsspektrum der erfindungsgemäßen Antibiotica ist aus der nachfolgenden Tabelle I ersichtlich und in der zum Vergleich dasjenige des bekannten Leucomycins Ai angegeben ist.
In dieser Tabelle sind die Werte für die geringste inhibierende Konzentration in mcg/ml für die betreffen- ι ο den Verbindungen angegeben, die, wie in der eingangs erwähnten Veröffentlichung aus Journal of Antibiotics, a. a. Ο., Seite 88 angegeben, mittels des für die Routine-Diagnostik bekannten Agar-Plattentests ermittelt wurden. Es wurden je zwei Verdünnungsreihen von jedem Antibioticum in Glucose-Boullion-Agar herge-
Tabelle I
Geringste inhibierende Konzentration in mcg/ml stellt. Das Kulturmedium wurde durch Erwärmen auf 50 bis 600C verflüssigt und mit der Antibioticum-Verdünnung in einer Menge von 9 Teilen Kulturmedium zu 1 Teil Antibioticumverdünnung gut vermischt, dann auf Petrischalen verteilt, in denen das Gemisch verfestigte. Die Verdünnungsreihen bestanden aus folgenden Ansätzen: 10, 5, 2,5, 1,25, 0,6, 0,3, 0,2, 0,15, 0,08 mcg/ml. Nach dem Verfestigen wurde jede Platte in dem Fachmann bekannter Ausstrichtechnik mit den Testorganismen beimpft, die mittels steriler Platinöse (Innendurchmesser ca. 1 mm) strichförmig in etwa 2 cm langen Linien aufgeimpft wurden. Die Testorganismen waren zuvor in einem flüssigen Medium gezüchtet worden.
Diejenige Antibioticum-Konzentration, die das Wachstum unterbindet, ist als geringste inhibierende Konzentration in mcg/ml angegeben.
Test-Organismus
Bekann- Leucomycin-Antibiotica
tes Leu-
comycin
A ι Aj Aj- A4
Tartrat A5
Aft
A7
As
A.,
Komposi tion aus Aj-A1,
Staphylococcus aureus 0,39
FDA 209 P
Staphylococcus albus 3,12
Staphylococcus aureus -
LM, EM R*)
Micrococcus flavus -
Bacillus subtilis PCI 219 -
Bacillus anthracis 0,39
Mycobacterium ATCC 607 3,12
Mycobacterium asteroides 6,25
Mycobacterium avium 12,5
Escherichia coli NIHJ -
Escherichia coli B -
Salmonella typhosa H 901 W >100
Salmonella typhimurium >100
0,15 0,2 0,15 0,08 0,3
0,15 0,3 0,6 0,2
5,0 5,0
0,3 0,6 1,25
2,5 2,5
0,3 0,6 1,25
0,35
1,25
1,25
Shigella dysenteriae E-I
Shigella flexneri E-20
Shigella sonnei E-33
Vivrio comma Typ A
Streptococcus hemolyticus
Diplococcus pneumoniae II
Corynebacterium diphtheriae
50,0
5 5
5 0,8
5 5
5 0,8
2,5 2,5
10 10
0,15 0,6
0,3 1,25
0,3 1,5
0 10
2,5 0,6
0 10
10
10
10
10
5
5
5,0 5,0
2,5
0,15 0,3 0,6 0,3 0,3 1,25 2,5 0,6 0,6 1,25 1,25 1,25
2,5
10
2,5
5 5
0,8 0,8
0,39 0,78
0,04
0,15 0,2 0,3 0,15 0,3
0,08 0,1 0,15 0,08 0,3 0,04 0,08 0,15 0,04 0,3
5 5 > 10 5
0,8 0,8 0,8 0,8
0,15 0,6 1,25 0,3
0,08 0,15 0,3 0,08
0,08 0,3 0,6 0,04
Fortsetzung
Test-Organismus
Bekann- Leucomycin-Antibiotica
tcs Leu-
comycin
A ι Λι Aj- A4 Aj
Tiirtrat Komposi tion
aus
A3-A.,
Neisseria gonorrhoeae
Uemophilus influenza
Pseudomonas aeruginosa
Proteus vulgaris OX 19
0,19 0,6 0,6 0,6 0,3 0,6 0,15 0,2 0,15 0,15 0,3
< 100 >10 >10 >10 >10 10
> 100 >10 >10 >10 >10 10
Klebsiella pneumoniae PCI 602 12,5 10 10
*) Für Leucomycin und Erythromycin widerstandsfähiger Stamm.
10
0,6 1,25 5,0 0,6 0,15 0,3 0,6 0,2
10 >10 >10
Die akute Toxizität der erfindungsgemäßen Leuco- eins angegeben.
mycin-Antibiotika Aj bis A9, als LD50, bei Mäusen, nach 25 Die Substanzen wurden den Tieren, gelöst in
intravenöser und oraler Verabreichung, ist in der physiologischer Kochsalzlösung, der notwendigenfalls
nachfolgenden Tabelle II zusammengestellt. Als Ver- zum Löslichmachen einzelne Tropfen HCl zugesetzt
gleich sind die Toxizitätswerte des bekannten Leucomy- worden waren, verabreicht.
Tabelle II Toxizität, venös, LD50
mg/kg		 Toxizität, oral, LD50
mg/kg
Erfindungsgemäßes
Leucomycin-Antibioticum		 >650 >1000
A., >650 >1000
Aj-Tartrat >500 >1000
A4 >500 >1000
A5 >500 >1000
A6 >500 >1000
A7 >500 >1000
A8 >500 >1000
A9 650 > 800
Bekanntes
Leucomycin-Antibioticum
(beschrieben in Journal of
Antibiotics, Ser. A (1953), Bd. VI
Nr. 2, S.87-88)
Die erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica A3 bis Ag werden in üblicher Weise durch Züchtung des Mikroorganismus Streptomyces kitasatoensis NRRL 2486 oder 2487 in einem flüssigen Kulturmedium, das assimilierbares Kohlenstoff- und Stickstoffquellen enthält, erhalten. Als assimilierbare Kohlenstoffquelle eignet sich beispielsweise Lactose, Maltose, Dextrin, Melasse, Stärke, Glucose, Maissirup, Zucker, Glycerin, Fettsäuren, wie beispielsweise Stearinsäure, Palmitinsäure, Essigsäure, Propionsäure. Als Quelle für assimilierbaren organischen oder anorganischen Stickstoff ist beispielsweise Getreideweichflüssigkeit, Hefe oder deren Extrakte, Fleischextrakt, Fleischsaft, Pepton, Milch, Baumwollsamenöl, Caseinhydrolysat, Aminosäuren, Sojabohnenpulver oder ein anorganisches Nitrat, oder Ammoniumsalz geeignet. Es können als Kohlenstoff- bzw. Stickstoffquelle auch Gemische der genannten Stoffe benutzt werden. Das Kulturmedium enthält ferner anorganische Anionen und Kationen, wie Kalium, Natrium, Kalzium, die beispielsweise als Phosphat, Carbonat, Chlorid vorliegen können, sowie Spurenelemente, wie Bor, Molybdän, Kupfer, Nickel, Kobalt, Eisen, die in Form von Ferro-, Ferri-chlorid, -sulfat bzw. als Cupro- oder Cupri-Verbindung zugesetzt werden
65 können.
Die Züchtung führt man im allgemeinen bei Temperaturen zwischen 20 bis 4O0C, vorzugsweise 25 bis 350C aus. Wenn man unter Belüftung arbeitet,
030 111/3
ίο
erstreckt sich die Züchtungsperiode im allgemeinen auf 2 bis 10 Tage. Zweckmäßigerweise bricht man die Züchtung dann ab, wenn die Nährlösung ihre höchste Antibioticum-Bildungsfähigkeit erreicht hat.
Die gebildeten rohen Antibiotica-Produkte werden mittels üblicher Verfahren, beispielsweise durch Lösungsmittelextraktion, Adsorptionsbehandlung, Verteilungs-Chromatographie, Kristallisation aus Lösungsmitteln, von der Nährlösung abgetrennt und gereinigt.
Die nach Abtrennung des Mycels gewonnene Kulturflüssigkeit extrahiert man im allgemeinen bei einem pH-Wert von 7 bis zu alkalischen pH-Werten, vorzugsweise bei pH 7,5 bis 9, mit einem in Wasser unlöslichen organischen Lösungsmittel, wie einem Alkohol, zum Beispiel Butanol, Propanol, einem Keton, zum Beispiel Methyläthylketon, einem Ester, zum Beispiel Äthylacetat, Butylacetat, mit Chloroform, Benzol, Xylol oder Toluol. Den erhaltenen Extrakt mischt man mit saurem Wasser mit einem pH-Wert von
2 bis 4, damit die Antibiotica in die wäßrige Phase übergehen, und vermischt dann erneut mit einem wasserunlöslichen organischen Lösungsmittel, wobei man den pH-Wert auf 7,5 bis 9 einstellt. Diese Überführungsoperation wird mehrmals wiederholt. Wenn genügend Antibiotica in der organischen Lösung vorhanden sind, unterwirft man diese der Vakuumdestillation oder einem Kondensationsverfahren. Alternativ kann man Petroläther zusetzen, so daß die Antibiotica sedimentieren. Wahlweise kann man die Lösung zur Abscheidung der Antibiotica auch lyophilisieren. Durch Einstellung der konzentrierten Lösung auf einen pH-Wert von 7 bis 9 kann man alternativ die wirksamen Antibiotica in Form ihrer freien Base ausfällen.
In den nachfolgenden Tabellen III und IV sind physikalische Daten und einige Eigenschaftsangaben der erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica Aj bis Aq zusammengestellt.
Tabelle III
Physikalische Daten und Eigenschaftsangaben für die einzelnen Antibiotica
Leuco- Zusammensetzung II % N% berechnet 11% N% Formel MoI.- Schmelz Aussehen
mycin gefunden 8,36 1,75 C% 8,40 1,69 Gew.1) punkt
C% 8,13 1,65 60,92 8,30 1,72 C
A3 60,94 8,83 1,95 60,50 8,50 1,81 C42H64NO15 835±15 120-121 weißes Pulver
A4 60,80 8,10 1,71 60,66 8,19 1,75 C41H67NO15 820+15 126-127 weißes Pulver
A5 60,98 8,40 1,90 60,06 3,88 1,85 Cv)H65NOn 78Od=IO 115-117 weißes Pulver
A6 60,15 60,22 C40H65NO1S 801±10 136-137 weiße Kristalle
A7 60,10 8,12 1,80 8,08 1,78 C3SH63NO14 770±15 111-113 weißes kristal
8,31 1,91 59,60 8,27 "1,88 lines Pulver
A« 59,71 59,74 C31)H63NO15 79Od=IO 147-149 weiße Kristalle
A,, 59,65 C37H61NO14 760±10 120-121 weißes kristal
I. ~ lines Pulver
) Durch Titration ermittelt.
Tabelle IV
Physikalische Daten und Eigenschaftsangaben für die einzelnen Antibiotica
Leuco- Optische pKa4) Ultravioleltabsoptions- Löslichkcitseigcnschaften
mycin Drehung spektrcn
in ma Methanol, Wasser
Äthanol, Aceton
Äthylacetat
Butylacclal,
Benzol, Chloroform, Mcthyliso-
Petrol-
älher
-55,4°') 6,70 ι Methanol *-■ I cm butylkclon schwerlöslich unlöslich
-50°') 6,71 231-232 351 löslich schwerlöslich unlöslich
A4 -52°') 6,69 231 325 löslich schwerlöslich unlöslich
A5 -56°') 6,72 232 370 löslich schwerlöslich unlöslich
A6 -65°2) 6,73 231 375 löslich schwerlöslich unlöslich
A7 -58,3°3) 6,75 232 405 löslich schwerlöslich unlöslich
A8 -65,102) 6,75 232 380 löslich schwerlöslich unlöslich
A, , Chloroform 232 395 löslich
I)C=I. , 3, Chloroform
2) C=I. , 8, Chloroform
3) C=I. 4) 50%ig-Äthanol
Die Infrarotabsorptionsspektren für die erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica Aj bis A9 in Tetrachlorkohlenstofflösung sind in den F i g. 1 bis 7 und die kernmagnetischen Resonanzspektren in den F i g. 8 bis 14 wiedergegeben.
Die erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica Aj bis Ag geben folgende Farbreaktionen:
Negativ: Adamkiewicz's-Reaktion; Biuret-Reaktion; Milon-Reaktion;Xanthoprotein-Reaktion.
Positiv: Anthron-Reaktion; Schriwanoff's-Reaktion; Molisch's-Reaktion; Reaktion mit konzentrierter Schwefelsäure; Tetrazolium-Reaktion.
Die erfindungsgemäßen Leucomycin-Antibiotica Aj bis Ag können als freie Basen oder in Form von pharmakologisch nicht giftigen Salzen einzeln oder im Gemisch miteinander als antibiotische Komposition verwendet werden.
Beispiel 1
Herstellung und Isolierung des Leucomycins Aj
In einen 500 ml fassenden Sakaguchi-Kolben wurden 100 ml eines wäßrigen Kulturmediums mit 0,5% Pepton, 0,5% Fleischextrakt, 2% Glucose, 0,5% Natriumchlorid, 0,3% trockener Hefe und 0,3% Kalziumcarbonat eingefüllt, auf einen pH-Wert von 7 eingestellt, das Ganze mit Dampf von 1,05 kg/cm2 60 Minuten lang bei 1200C sterilisiert, dann mit dem Mikroorganismus Streptomyces kitasatoensis NRRL 2486 beimpft und dann 72 Stunden lang unter Schütteln bei 27°C bebrütet.
In ein 30 Liter fassendes Fermentationsgefäß wurden 20 Liter einer Nährlösung mit 3% Sojabohnenpulver, 2% Stärke, 1% Glucose, 0,5% Natriumchlorid, 0,3% Ammoniumsulfat, 0,5% trockener Hefe, 0,3% Kalziumcarbonat, 0,1% zweibasischem Kaliumphosphat und 0,01% Harnstoff eingefüllt und wie üblich sterilisiert. Zu dieser Mischung wurde die obige bebrütete Fermentationslösung gegeben. Das Fermentationsgemisch wurde hierauf 50 Stunden bei 27°C unter Belüften mit steriler Luft (20 Liter je Minute) und unter Rühren bebrütet. Anschließend wurde die Kulturflüssigkeit unter aseptischen Bedingungen in einen 400 Liter fassenden, aus Edelstahl bestehenden Fermentationsbehälter übergeführt und darin mit 200 Litern eines Fermentationsmediums und der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend beschrieben, vermischt. Das ganze Gemisch wurde weitere 85 Stunden bei 27°C unter Rühren und Belüften mit steriler Luft (200 Liter je Minute) bebrütet. Danach wurde das Myzelium von der Kulturflüssigkeit abzentrifugiert und das Filtrat zur Gewinnung der Antibiotica aufgearbeitet.
Zunächst wurde das nach dem Entfernen des Myzeliums verbleibende Filtrat auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und zweimal mit 50 Litern Butylacetat extrahiert. Die separierte Butylacetat-Phase wurde durch Zugabe von 30 Litern wäßriger Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 eingestellt und stark gerührt. Danach wurde die wäßrige Phase durch Zugabe von wäßriger Natronlauge auf einem pH-Wert von 8,5 gebracht und danach zweimal mit 8 Litern Butylacetat extrahiert. Die vereinigten Butylacetat-Phasen wurden mit 6 Litern wäßriger Salzsäure von pH 3,5 extrahiert. Die erhaltene wäßrige Phase wurde nun mit wäßriger Natronlauge auf einen pH-Wert von 9 eingestellt und zweimal mit 6 Litern Benzol extrahiert. Die Benzolphasen wurden vereinigt und im Vakuum konzentriert.
Dabei wurden als Rückstand 130 g eines weißen Pulvers erhalten, bei dem es sich um ein Gemisch der Leucomycine A3 bis Ag in Form der freien Basen handelte. Die Wirksamkeit betrug 1150 mcg/mg.
250 mg des erhaltenen Gemisches der Leucomycine Aj bis A9 wurden in 1 ml Benzol aufgelöst. Diese Lösung wurde auf eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 1 cm, die mit 10 g Silikagel in Benzol gefüllt war, aufgegeben. Die Säule wurde vollständig mit
ίο Benzol gewaschen. Anschließend wurde ein Benzol/ Aceton-Gemisch (5:1) mit einer Durchflußgeschwindigkeit von '/4 V/V/h hindurchgeleitet. Das Eluat wurde in 1 ml großen Fraktionen in einem Fraktionskollektor gesammelt.
r, Die Fraktionen Nr. 15 bis 25 wurden vereinigt, das Lösungsmittel wurde unter Vakuum abdestilliert, der Rückstand wurde bei 60°C in Benzol gelöst und über Nacht in einer eiskalten Kammer stehen gelassen. Dabei schied sich das Leucomycin A3 als freie Base kristallin in Form von weißen Prismen ab. Die Ausbeute betrug 30mg. Die Infrarotspektrum ist in Fig. 1 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in Fig.8 wiedergegeben. Die physikalischen Daten der Verbindung sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Beispiel 2
Leucomycin Aj-Tartrat
4 g des nach Beipsiel 1 gewonnenen weißen jo Pulvergemisches der Leucomycine Aj bis Ag mit einer Wirksamkeit von 1150 mcg/mg wurden einer Gegenstromverteilung unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems, bestehend aus Benzol/Chloroform/Methanol/1/15 Mol Zitronensäurepuffer (Gewichtsverhältnis j-, 20 : 6 : 20 : 8) mit pH 4,9 unterworfen und in 300 je 10 ml große Fraktionen aufgeteilt. Die Fraktionen Nr. 65 bis 80 wurden vereinigt, das Lösungsmittel unter Vakuum abdestilliert, der Rückstand bei 60°C in Benzol gelöst ,und über Nacht in einem eiskalten Raum stehen gelassen. Dabei schied sich das Leucomycin A3 als freie Base in Form eines weißen Pulvers ab. Dieses wurde abgetrennt und in 5 ml Äthyläther gelöst. Diese Lösung wurde unter Rühren in 5 ml einer 2%igen Weinsäurelösung in Äthyläther eingetropft. Das ausgefallene
Leucomycin A3-Tartrat wurde mit Äthyläther gewaschen, abgetrennt und getrocknet. Man erhielt 400 mg des Tartrats in Form eines weißen Pulvers vom F. 122-123°C.
ίο B e i s ρ i e 1 3
Leucomycin A4
Die im Beispiel 1 beim Chromatographieren des Gemisches der Leucomycine A3 bis Ag erhaltenen Fraktionen Nr. 28 bis 35 wurden vereinigt und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum abdestilliert. Das zurückbleibende weiße Pulver wurde in 1 ml Benzol aufgenommen und die Lösung an einer Chromatographiesäule mit 6 mm Durchmesser und die mit 5 g
b() Silikagel in Benzol gefüllt war, chromatographiert, indem mit einem Benzol/Aceton-Gemisch (4 :1) eluiert wurde. Aus dem Eluat wurde das Lösungsmittel abdestilliert, und der Rückstand wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt das Leucomycin A4
fa5 als Base in Form von kristallinen weißen Prismen. Die Ausbeute betrug 20 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in F i g. 2 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in F i g. 9 wiedergegeben. Die
physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Beispiel 4
Leucomycin A5 Γ)
Die im Beispiel 2 bei der Gegenstromverteilung des gemäß Beispiel 1 erhaltenen Pulvergemisches der Leucomycine A3 bis Ag gewonnenen Fraktionen Nr. 45 bis 68 wurden vereinigt, das Lösungsmittel unter Vakuum abdestilliert, das zurückbleibende Pulver in 1 ml Benzol gelöst und die Lösung unter Verwendung eines Benzol/Aceton-Gemisches (3 :1) chromatographiert. Aus dem Eluat wurde das Lösungsmittel abdestilliert, und der Rückstand wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt das Leucomycin A5 als freie Base in Form eines weißen Pulvers. Die Ausbeute betrug 35 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in Fig.3 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in Fig.5 wiedergegeben. Die physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Beispiel 5
y 2r>
Leucomycin Αβ
250 mg des nach Beispiel 1 gewonnenen weißen Pulvergemisches der Leucomycine A3 bis Ag mit einer Wirksamkeit von 1150mcg/mg wurden in 1 ml Benzol jo gelöst und dann wurde diese Lösung wie in Beispiel 1 beschrieben und mit der dort angegebenen Durchflußgeschwindigkeit mittels eines Benzol/Aceton-Gemisches (4:1) chromatographiert. Das Eluat wurde in 1 ml großen Fraktionen in einem Fraktionskollektor gesam- y-, melt. Die Fraktionen Nr. 26 bis 40 wurden vereinigt und das Lösungsmittel abdestilliert. Das verbleibende weiße Pulver wurde in 1 ml Benzol gelöst und an einer Chromatographiersäule mit einem Durchmesser von 6 mm, die mit 5 g aktiviertem, mit Benzol vermischtem Aluminiumoxid gefüllt war, chromatographiert, wobei .mit einem Benzol/Äthylacetat-Gemisch (2 :3) eluiert wurde. Man erhielt 30 ml eines Eluats. Das Lösungsmittel des Eluats wurde im Vakuum abdestilliert, und der Rückstand wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt das Leucomycin Ab als freie Base in Form von weißen Prismen. Die Ausbeute betrug 15 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in F i g. 4 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in F i g. 11 wiedergegeben. Die physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen IU und IV angegeben.
Beispiel 6
Leucomycin A7
Es wurden wie in Beispiel 5 beschrieben 250 mg des Pulvergemisches der Leucomycine A3 bis Ag chromatographiert, wobei jedoch mit einem Benzol/Aceton-Gemisch (3 :1) eluiert wurde. Das Eluat wurde in 1 ml großen Fraktionen in dem Fraktionskollektor gesam- b0 melt. Die Fraktionen Nr. 35 bis 55 wurden vereinigt und das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Der als weißes Pulver erhaltene Rückstand wurde in einer geringen Menge Benzol gelöst und einer zweiten chromatographischen Behandlung an einer Silikagel- b5 säule mit einem Durchmesser von 6 mm, die mit 5 g mit Benzol vermischtem Silikagel gefüllt war, unterzogen, wobei mit einem Benzol/Aceton-Gemisch (3:1) eluiert wurde. Das Lösungsmittel des Eluats wurde im Vakuum abdestilliert, und der Rückstand wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt ein Leucomycin A7 als freie Base in Form eines weißen Pulvers. Die Ausbeute betrug 10 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in F i g. 5 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in Fig. 12 wiedergegeben. Die physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Beispiel 7
Leucomycin Ag
35 g des nach Beispiel 1 gewonnenen weißen Pulvergemisches der Leucomycine A3 bis A9 mit einer Wirksamkeit von 1150 mcg/mg wurden in 70 ml Benzol gelöst. Die Lösung wurde an einer mit 700 g aktiviertem Aluminiumoxid in Benzol beladenen Chromatographiersäule mit einem Durchmesser von 6 cm chromatographiert. Es wurde zunächst mit Benzol gewaschen und dann mit einem Benzol/Äthylacetat-Gemisch (1 :2) mit einer Durchflußgeschwindigkeit von 1/4 V/V/h eluiert. Das Eluat wurde in je 20 ml großen Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen Nr. 13 bis 40 wurden vereinigt. Das Lösungsmittel wurde dann im Vakuum abdestilliert und der Rückstand in 30 ml Benzol gelöst. Dann wurde erneut an einer mit 375 g Silikagel in Benzol beladenen Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 5 cm mit einem Benzol/Aceton-Gemisch (3 :1) eluiert. Das Eluat wurde in 20 ml großen Einzelfraktionen aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 150 bis 1970 wurden vereinigt, das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand im Vakuum getrocknet. Der gewonnene Rückstand wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt das Leucomycin A8 in Form von weißen nadeiförmigen Kristallen. Die Ausbeute betrug 500 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in Fig.6 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in Fig. 13 wiedergegeben. Die physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Beispiel 8
Leucomycin A9
Es wurde wie in Beispiel 7 beschrieben gearbeitet und die beim Chromatographieren und Eluieren wie dort mittels eines Benzol/Äthylacetat-Gemisches (1 :2) erhaltenen Eluatfraktionen Nr. 60 bis 80 wurden vereinigt. Dieses Eluat wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand in 30 ml Benzol gelöst. Die Lösung wurde an einer mit 350 g Silikagel in Benzol beladenen Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 5 cm mittels eines Benzol/Aceton-Gemisches (3:1) eluiert. Das Eluat wurde in 20 ml großen Einzelfraktionen aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 150 bis 170 wurden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Das dabei isolierte weiße Pulver wurde aus heißem Benzol umkristallisiert. Man erhielt das Leucomycin A9 in Form eines weißen kristallinen Pulvers. Die Ausbeute betrug 700 mg. Das Infrarotspektrum der Verbindung ist in F i g. 7 und das kernmagnetische Resonanzspektrum in Fig. 14 wiedergegeben. Die physikalischen Daten sind in den vorstehenden Tabellen III und IV angegeben.
Hierzu 14 Blau Zcichiuiniicn

Claims (1)

  1. Patentanspruch: Leucomycin-Antibiotica A3 bis A9 der Formel
    OH H CHO
    CH3 O
    in der R1 und R2 jeweils die folgende Bedeutung besitzen:
    Rest R, Rest R,
    A3: -
    A4: -
    A,: —
    An: —
    A7: -
    A8: -
    AQ: —
    und deren pharmakologisch nicht giftige Salze.
    C CH3 -C-CH2-CH O O CH3 C-CH3 -C-CH2-CH2-CH3 Il
    O     Il
    O         H C CH2 CH2 CH3
    Il     O C-CH1 C CH2' CH3 Il
    O     Il
    O         H -C-CH2-CH3 O C-CH1 -C-CH3
    Il         Il
    O     Il
    O         H Vj- L Γι ί
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