DE1643504C

DE1643504C - Dekapeptid L-Pyroglutamyl-Lglutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonylglycyl-L-tryptophanyl-L-rnethionyl-Laspartyl-L-phenylalanylamid, und seine Salze sowie Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE1643504C
Application number: DE19671643504
Authority: DE
Inventors: Luigi; Bosisio Germano; Castiglione de Roberto; Goffredo Onofrio; Mailand Bernardi (Italien)
Original assignee: Farmaceutici Italia SpA
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1966-08-09
Filing date: 1967-08-04
Publication date: 1973-09-06

Description

NH, OH OAc

2. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try- Met-Asp- Phe - NH₂

NH₂ OSO₃H OAc

3. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂

NH₂ OSO₃H OH

4. H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNFi₂

5. Verfahren zur Herstellung des neuen Dekapeptids L - Pyroglutamyl -L- glutaminyl -L- aspartyl - L - tyrosyl - L - threonyl -glycy 1 -L- tryptophanyl-L - methionyl - L - aspartyl -L- phenylalanylamid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Acylrest blockiert ist, mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbare Salze, dadurch gekennzeichnet, daß das Polypeptid der obigen Formel gemäß an sich in der Polypeptidchemie bekannten Verfahren hergestellt wird.

Die Erfindung bezieht sich auf ein neues, therapeutisch verwendbares Dekapeptid l - Pyroglutamyl-L - glutaminyl -L- aspartyl -L- tyrosyl - l - threonyl - glycyl - L - tryptophanyl - L - methionyl -L- aspartyi - L - phenylalanylamid. worin die Phenolgruppe des Tyrosylrestes frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert ist und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei oder durch einen aliphatischen Acylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen blockiert ist, und seine pharmazeutisch verwendbaren Salze.

Das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid und seine Derivate zeigen eine hohe mehrfache biologische

Affektionen sowohl bei Menschen als auch bei Tierer angewendet werden.

Es gibt zahlreiche Möglichkeiten der Synthese des erfindungsgemäßen Dekapeptids, die im wesentlichen darin bestehen, daß man nach bekannten Verfahren der Poiypcptidchemie die geschützten Aminosäuren oder Polypeptide in geeigneter Reihenfolge kondensiert, wobei diese Kondensation so durchgeführt wird, daß das erhaltene Dekapeptid die gewünschte Folge von zehn Aminosäuren aufweist.

Die Amino- und Carboxylgruppen der stufenweise kondensierten Aminosäuren und Polypeptide, die an der Bildung der Peptidkettc nicht teilnehmen sollen, werden durch eine Schutzgruppe blockiert, welche auf an sich bekannte Art durch Acidolyse oder Hydrolyse wieder entfernt werden kann.

Zum Schutz der Aminogruppe können die folgenden Schutzgruppen verwendet werden: TosyL, Carbo-

benzoxy, Carbo-tbutoxy, Trityl, Formyl, Trifluoracetyl und andere gewöhnlich in der Polypeptidchemie angewendete Gruppen.

Zum Schutz der Carboxylgruppe können beispielsweise die folgenden Schutzgruppen angewendet

werden: Methyl, Äthyl, t.-Butyl, Benzyl, p-Nitrophenyl und andere auf diesem Gebiet gewöhnlich angewendete Gruppen.

Die Kondensation zwischen der Aminogruppe eines Moleküls und der Carboxylgruppe eines anderen Moleküls zur Bildung der Peptidkette kann gemäß in der Peptidchemie bekannten Verfahren durchgeführt werden, beispielsweise durch ein geeignetes aktiviertes Acylderivat, wie ein gemischtes Anhydrid, ein Azid, einen p-Nitrophenylester und 2,4,5-Trichlor-

phenylester, oder durch direkte Kondensation zwischen der freien Aminogruppe und der freien Carboxylgruppe in Anwesenheit eines geeigneten Kondensationsmittels, wie eines Carbodiimide ζ. B. Dizyklohexyicarbodiimid oder i-Zykionexy!-3-aiörphoiinylcarbodiimid sowie andere in der Literatur bekannte. Die Kondensation kann in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden, z. B. Ν,Ν-Dialkylformamide. niedrige aliphatische Nitrile und Pyridine, beispielsweise Dimethylformamid, Acetonitril und Pyridin; die Reaktion beginnt bei -20⁰C bis Raumtemperatur und kann bei Raumtemperatur bis 35° C während eines Zeitraumes von 12 bis 120 Stunden vollendet werden.
Tvpischs Sslzs dss ?riind^ljn£?g'?r'¹3ß erhältlichen Dekapeptids sind das Natriumsalz, Kaliumsalz, Magnesiumsalz, Kalziumsalz, Glukonat, Tartrat, Malat, Athylendiaminsalz und andere pharmazeutisch veiwendbare Salze.

Wie oben erwähnt, gibt es viele mögliche Synthesen für das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid.

Zur näheren Erläuterung der Erfindung werden im nachstehenden einige Beispiele zu dessen Herstellung angegeben.
Das Tetrapeptid L - Pyroglutamyl - L - ghitaminyl-L - aspartyl - L - tyrosin - azid (I) wird mit dem Hexapcptid L-Threonyl-glycyl-L-tryptophanyl-L-methionyl-L-aspartyl -L-phenylalanylamid (II), dessen Hydroxylgruppe des Threonylrestcs durch einen Acylrest

blockiert ist, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Schließlich wird durch milde alkalische Hydrolyse

Dimethylformannd, kondensiert, wobei das Deka- des Dekapeptids (IV) das Dekapeptid

peptidL-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl- ¹^ _ncnu

f. tyrosyl - L - threonyl - giycyl - l - trypiophanyl- UiU₃H

r - methionyl - l - aspartyl - l - phenylalanylamid (III) 5 '

erhalten wird, dessen Hydroxygruppe des Threonyl- L-Pyroglutamyl-L-glutanunyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-

testes durch einen Acylrest blockiert ist. Das Deka- L-threonyl-glycyl-L-tryptophanyl-L-methionyl-

peptid (HD wird bei niedriger Temperatur mit dem J b»j j ' , , , -_Λ

komplexen wasserfreien Pyridin-Schwefelsäureanhy- L-aspartyl-L-phenylalanylamid (V)

dnd behandelt, wobei schließlich das Dekapeptid so

_L. pyroglutamyl - L- glutaminyl - l - aspartyl - l - ty- erhalten, worin die Hydroxygruppe des Threonylrestes

rosyl - L - threonyl - giycyl - L - tryptopharyl - L - methio- frei ist.

_nyl - L - aspartyl - L - phenylalanylamid (IV) erhalten Die obigs Kondensation kann durch das folgende

wird, dessen Phenolgruppe des Tyrosylrestes durch Formelschema dargestellt werden, wobei die Symbole

einen Schwefelsaurerest und die Hydroxylgruppe des 15 den gewöhnlich in der Polypeptidchemie angewende-

Threonylrestes durch einen Acylrest geschützt ist. ten Symbolen entsprechen:

NH₂ OAc

1

H-Pyr-GIu-Asp-Tyr-N₃ + H-Thr-GIy-Try-Met-Asp-Phe-NHj I II

NH₂ OAc

> H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNHj

III

NH₂ OSO₃H OAc Pyridin-SO, j Il > H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met-Asp-PheNH₂

IV NH₂ OSO₃H OH

oh- I I · I

^k H-Pyr-Glu-Asp-Tyr Thr-Gly-Try-Met~Asp-PheNH₂

worin Ac einen aliphatischen Acylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet.

Wie oben angeführt, gibt es verschiedene Möglichkeiten zur Herstellung des Dekapeptids (III, IV, V) gemäß den in der Polypeptidchemie bekannten und zur Bildung einer Polypeptidkette verwendeten Verfahren. Ein Beispiel dafür ist folgendes:

NH₂ OAc

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-N, + H-Gly-Try-Met-Asp-PheNH₂ VI VII

NH₂ OAc

» H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NHj

III

Ass dem Dekapeptid (III) wird. ^w'e ohen beschrie- schiedenen Sekretionen der damit verbundenen Drüben, das Dekapeptid (V) erhalten. sen.

Analoge Ergebnisse werden erzielt, wenn eine Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfin-

andere Kondensation durch p-Nitrophenylester oder dung näher erläutern. 2,4,5-Tricblorphenylester an Stelle derjenigen durch 60 das Azid angewendet wird. · 1

Das erfindungsgemäß erhältliche Dekapeptid mit B e 1 s ρ 1 e 1

einem Schwefelsäurerest ergibt Salze mit organischen

und anorganischen Basen; sowohl dieses Produkt als Herstellung des ersten Zwischenproduktes

auch dessen Derivate besitzen eine starke vielseitige 65 biologische Wirksamkeit: tatsächlich zeigen sie eine NH₂

hypotensive Wirksamkeit und stimulieren die Bewe- |

gungsfähigkeit des Magen-Darm-Kanals und die ver- H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH₂(I)

7,5 g Carbo-tbutoxy-L-tyrosin (J. Am. Chem. Soc, 75, 1953, S. 950) werden durch das gemischte Äthoxy-Ameisensäureanhydrid gemäß dem von Greenst ei η et al in Aminoacid Chemistry, 1961, S. 978, beschriebenen Verfahren mit 4,150 g Carbobenzoxy- S hydrazin (Ben, 47, 1914, S. 2183) kondensiert. Nach Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur wird die Mischung im Vakuum zur Trockne eingedampft: der in Äthylacetat gelöste ölige Rückstand wird in der Kälte mit 0,5 η-Salzsäure, mit einer wäßrigen ίο Lösung von Natriumbicarbonat und mit Wasser bis zur Neutralität gewa«chen.

Die Mischung wüd im Vakuum zur Trockne eingedampft und der Rück. i»'-d aus Äther-Petroläther kristallisiert. Duich aaft'- 'nderfolgende Umkristailisierung aus Ätby!are»-t "etroläther werden 7,700 g

CTB «> —NH-NH-CBO

erhalten, Fp. .18 bis 120⁰C; [a]f = -1,7° (c = 1 in Dimethylformamid) 2,2 g dieses Produktes werden bei Raumtemperatur 40 Minuten lang in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure in Eisessig (1,33 n) stehengelassen. Die Mischung wird im Vakuum zur Trockne eingedampft: der ölige Rückstand wird aufgenommen und mit wasserfreiemÄther verrieben. Das so erhaltene feste Produkt wird filtriert, mit wasserfreiem Äther gewaschen und getrocknet. Es werden 1.89 g

H —Tyr —NH-NH-CBOHCl

mit einem Fp. von 125 bis 128°C (Zers.) erhallen; Ia]I' = 38,3° (c — 1 in 95%iger Essigsäure), E_li2 = 0,75 GIu. Einer Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an Triäthylamin wird in der Kälte ein Äquivalent des gemischten Anhydrids, hergestellt in wasserfreiem Tetrahydrofuran aus 1,616 g

OBz

CTB-Asp-OH

(J. Am. Chem. Soc, 81,1965, S. 620) und 0,542 gÄthylchloroformiat nach Greensteinetal (oben zitiert), zugesetzt. Nach Stehenlassen über Nacht bei Raumtemperatur wird die Mischung im Vakuum zur Trockne eingedampft, der ölige Rückstand mit Äthylr.cetat aufgenommen, mit 0,5 η-Salzsäure, einer wäßrigen Lösung von Natriumbicarbonat und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der ölige Rückstand aus Chloroform- Petroläther kristallisiert, und es werden 2,Sg

OBz

55

CBz

CTB-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

H-Asp-Tyr-NH-NH-CBO HCI (VIII) |

(E₁ = 0 65 GIu) erhallen. Einei Lösung dieses Pro- ,_? duktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines * Äquivalents an Triäthylamin werden 0,624 g

NH,

CTB-GIu-ONP

zugesetzt (dieses Produkt mit einem Fp. von 150 bis 153°C kann aus

NH₂

CTB-GIu- OH

und p-Nitrophenyl in Anwesenheit eines Kondensationsmittels, wie Dizyklohexylcarbodiimid, hergestellt werden). Ue Mischung wird 2 Tage lang unter Rühren bei 35° C gehalten. Sie wird im Vakuum zur Trockne eingedampft, ui;d der ölige Rückstand wird mit Äthylacetat aufgenommen. Nach saurem und alkalischem Waschen wird er aus Methanol-Benzol und danach aus Aceton-Petroläthe. kristallisiert.

NH₂ OBz

! i

CTB-Glu-Äsp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einem Fp. von 173 bis 175 C wird erhalten; [„]*· = -22,2^Cl (c = 1 in Dimethylformamid). 2,55 g dieses Produktes werden 40 Minuten lang hei Raumtemperatur in einer Lösung von Salzsäure in'Eisessig (1,33 n) stehengelassen. Das Lösungsmittel wird entfernt, der verbleibende Schaum aufgenommen und mil wasserfreiem Äther verrieben. Er wird filtriert, getrocknet, und es werden 2,08 g

NH₂ OBz
H-Giu-/i.sp Tyr NH-NH-CBO-HC!

erhalten; E₁₂ = 0,59 GIu.

Der Lösung dieses Produktes in Dimethylformamid in Anwesenheit eines Äquivalents an Triäthylamin werden 1,114 g CBO- Pyr— ONP, hergestellt nach Ann. 640, 1961, S. 145, zugesetzt und bei 35' C 2 Tage lang gehalten und sodann zur Trockne eingedampft; der Rückstand wird mit Äthylacelat und Wasser aufgenommen. Das unlösliche Fiiirat wird am gleichen Filici' iiiii 1 normaler \vi*ßn»/^ Salzsäure in der Kälte, mit Natriumbicarbonatlösung und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen. Die Mischung wird getrocknet und aus Methanol kristallisiert. Es werden

erhalten, Fp. 138 bis 140⁰C; [a]l° = - 20,7° (c = 1 in Dimethylformamid). 1,100 g dieses Produkte« werden 40 Minuten lang bei Raumtemperatur in einer Lösung von wasserfreier Salzsäure (1,33 n) in Eisessig stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt, der weiße zurückbleibende Schaum in wasserfreiem Äther verrieben und der so erhaltene Feststoff filtriert und getrocknet. Es werden 1,03 g

60 NH₂ OBz
CBO-Pyr-GIu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einem Fp. von 200 bis 205' C erhalten; [u]? = -28,3° (c = 1 in Dimethylformamid). 2g dieses Produktes werden in 30 ml Dimethylformamid gelöst und in Anwesenheit von 10% Palladium-auf-Kohle hydriert. Der Katalysator wird abnitriert, stark mii

!Dimethylformamid gewaschen und das Filtrat im aVakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand !wird mit wasserfreiem Äther aufgenommen, filtriert fund getrocknet. Es werden 1,00 g

NH₂
H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH;,

mit einem Fp. von 198 bis 200 C (Zers.J erhalten. E_1-2 = 0,54GIu.

Herstellung des zweiten Zwischenproduktes

9Ac
i
H-Thr-Gly-Try-Met-Asp PhC-NH₂HaΠΙ) ab j Fp. IStrC, (ft]V = + Wie = 1 in Dimethylformamid): 13,2 g dieses Salzes werden bei 0'^JC mit einer Lösung von phosphoriger Säure gegen Kongorot angesäuert: es scheidet sieh ein Ol ab, das mit Äthylacetat extrahiert wird. Nach Abdampfen des Lösungsmittels werden 7,3 g

OAc
to CTB-Thr -OH

in Form eines Schaums erhalten. Diesem in 6öml Äthylacelat gelöstem Produkt werden SB g 2,4,5-Trichlorpheriol und 6.2 g DizyklohexylcarbodHmid zugc- >5 setzt. Nach 2 Tagen wird die Mischung filtriert und zur Trockne eingedampft. Es werden 13.2 g .

OAc

Einer Lösung von 1.04 g H — Try - Met - Asp ic — Phe — NH₂ (hergestellt gemäß J. Chem. Soc. 1966. S. 555) in 7 ml Dimethylformamid werden 0.46 ml Triethylamin und 0,563 g CTB — GIy — ONP (hergestellt gemäß HcIv. Chim Ada. 45, J963. S. 16*7» zugesetzt und 4 Tage lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft der Ruckstand mit Wasser und Äthylaceiai aufgenommen, die organische Schicht mit verdünnter Salzsäure und sodann mi« einer 5%igen wäßrigen ί <»'ing von Natriumbicarboijaf gewaschen, die Mischung zur Trockne eingedampft und aus Methanol-Äther kristallisiert. Es werden 0.95 g

CTB -CIy -Try-Mei -Α«* -Phe- N'H, (KU

erhalten. Fp. 190 C in der Zwischenzeit wird der Tncblorphenyleslcr ton Carbo-l.buio\y-O-acetyJ- i -ibreonin der folgenden Formel

OAc

CTB Thr OCP
jui folgende Art hergestelii 8 g

OAc
H -Thr-OH

«hergestellt gemäß J- Org. Chem.. 29, 1964. S. 1629), gelosl in 100 ml Dimethylformamid, werden mit 11.9 g p-Nitrophenyl-Lbutylcarbonat und mit 14 ml Triethylamin behandelt. Nach 4 Tagen iverden weitere 2.4 g Nitrophenyl-l.butylcarbonai zugesetzt, und die Losung wird weitere 2 Tage stehengelassen. Die Lö-•vune wird zur Trockne eingedampft und mit einer 5%igen wäßrigen lösung von Natriumbicarbonat und Äther aufgenommen. Die wäßrige Lösung wird angesäuert und mit Älher extrahiert. Nach Entfernung des Äthers werden 3.7 g eines öligen Rückstandes erhalten, der mit 30 ml Äthylacelat verdünnt wird, worauf 3,14 g Dizvklohexylamin (DCEA) zugesetzt werden. Nach Zusatz von Äther scheiden sich 4.9 g

OAc

ί
CTB-Thr-OH-DCEA

JS

40

45 CTB -Thr -OCP

in Form eines Öls erhalten, das als solches verwendet wird.
0.9 g

H-Gly-Tr>-Mei-Asp-Phe-NH₂

werden in W mi Dimethylformamid gelösL und es werden 0.95 s

OAc

CTB-Thr-OCP

und Ö2,ml Triäihylamin zugesetzt. Die Mischung wird 5 Tage lang bei 32" C gehalten, das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, der Rückstand mit Wasser aufgenommen und aus Dimethylformamid-Älhyiacetat kristallisiert, wobei ein Produkt mit einem Fp. von 183 bis 185 C erhalten wird, [α]? = - 17 (c= 1 in Dimethylformamid).
0,6 g des so erhaltenen

OAc
!
CTB-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NHj

werden 30 Minuten lang bei Raumtemperatur in einer Lösung von wasserfreie. Salzsäure in Eisessig (1.5 n) stehengelassen. Nach Zusatz von Äther wird

OAc

H-Thr-Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂-HCl

ausgefällt E,., = 0.51 Leu: Fp. I55"C (Zers.); [«]£ = —8 (c = i in 95%iger Essigsäure).

Herstellung der Dekapeptide (III), (IV) und (V)

0.41g H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH₂, gelöst in 7 ml Dimethylformamid, werden bei —20"C mit 0.75 ml einer Lösung von 2normaler «/asserfreier Salzsäure in Tetrahydrofuran und- danach mit 0.09 m¹ t.-Butyinitrit behandelt. Nach 6 Minuten verdeu 0,35 ml Triethylamin und eine auf —10⁰C gekühlte Lösung von 0,41 g

OAc -

H-thr-GIy-Try-Met-Asp-Phe-NHj-HCI

209 526/20?

I 643 504

in 2,5 ml Dimethylformamid zugesetzt. Nach 5 Minuten wird 0,1 ml Triäthylamin zugesetzt und 1 Stunde lang bei -15° C und 5 Tage lang bei OX gehalten. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand in einer Lösung von Zitronensäure verrieben, wonach er zur Trockne eingedampft und sodann mit Äther und danr wiederholt mit Äthylacetat gewaschen wird. Es werden 0,42 g

OAc

Zitronensäure, mit einer 5%igen Lösung von Natriumbicarbonat und sodann mit einer 30%igen Lösung von Natriumchlorid gewaschen. Nach Trocknen über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit Äther verrieben. Die Mischung wird filtriert und das Lösungsmittel zur Trockr ζ eingedampft. Es werden 6,68 g

NH₂
H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂ (III)

erhalten; Fp. 215 bis 217 C (Zers.): [«]₀ = -21 (c = 1,1 in Dimethylformamid); E₅₈ = 0,33GIu.

0,42 g dieses Produktes in 6 ml wasserfreiem Pyridin werden bei einer Temperatur von -10⁰C ζJ 2 g des Komplexes Pyridin — SO₃, suspendiert in 10 ml wasserfreiem Pyridin, zugesetzt. Die Mischung wird eine Nacht lang bei Raumtemperatur gehalten. Sie wird in Wasser gegossen und der Rückstand mit einer I normalen wäßrigen Lösung von Natriumhydroxyd bis zum dauernden Umschlag von Thymolphthalein behandelt, worauf er im Gegenstrom mit dem System Butanol-Äthanol-Essigsäure-Wasser (80:16:16:128) (80 übergänge K = 4,3) gereinigt wird. Es werden 0,15 g

NH₂

OSO₃H

H-Pyr-GIu-Asp-Tyr-Thr

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NHj (V)

erhalten; E₁₉ = 0,54 Cys (SO₃H); E₅₈ = 0,41 GIu. Das so erhaltene Produkt kann leicht mit einer organischen oder anorganischen Base in die entsprechenden Salze verwandelt werden.

Beispiel 2

Die Herstellung des Dekapeptids (V) wird wie im Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch erfolgt an Stelle der Herstellung des Zwischenproduktes Tetrapeptid (IX) aus dem Dipeptid (VIII) folgende: 2,465 g

NH₂
CTB-GIu-OH

werden kondensiert, und zwar durch das gemischte Äthoxyameisensäureanhydrid (obiges Zitat) mit 5,71 g

OBz

H-Asp-Tyr-NH-NH-CBO-HCl

(hergestellt wie im Beispiel 1 beschrieben). Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur über Nachi stehengelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Wasser und Äthylacetat gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt und in der Kälte mit einer 3%igen Lösung von NH₂ OBz

I I

CTß-Glu-Asp-Tyr-NH -NH-CBO

erhalten, Fp. 173 bis 175'C. Nach Umkristallisieren aus Aceton-Petroläther verändert sich der Fp- nicht: '5 C«]c = -22,5 U = 1 in Dimethylformamid).
0.526 g

OH

CBO-Pyr

werden durch das gemischte Anhydrid mit 1,418 g NH₂ OBz

I . I

H-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO-HCl
erhalten durch Behandlung von

NH₂ OBz
CTB-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

mit einer 1,33 normalen Lösung von Salzsäure in Eisessig, kondensiert.

Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmi'iel wird im Vakuum abgedampft und der feste Rückstand in der Kälte mit einer 3%igen Lösung von Zitronensäure verrieben, fest mit Wasser gewaschen und sodann wiederum mit Äthylacetat und T.ther verrieben. Die Mischung wird filtriert und das Lösungsmittel zur Trockne eingedampft. Nach Umkristallisieren aus Methanol werden 135 g

4^ NH₂ OBz

ί I

CBO-Pyr-Glu-Asp-Tyr-NH-NH-CBO

erhalten; Fp. 200 bis 205⁰C. Ein analytisches Muster hat einen Fp. von 205 bis 207⁰C; [aJS⁷ = -28,3*- (c = 1 in Dimethylformamid).

Beispiel 3

Die Herstellung des Dekapeptids (V) wird wie im Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch erfolgt an

Stelle der Herstellung des Zwischenproduktes Pentapeptid(XI) aus dem Tetrapeptid (X) folgende: Eine

Lösung von 8,47g CTB-GIy-ONP, 12,08 g,

H—Try—Met—Asp—Phe—NH₂-HQPQ

5,32 ml Triäthylamin, 1,34 g 1,2,4-Triazo! and 0,2 ml Eisessig in 60 ml Dimethylformamid wird 1 Woche lang bei 28⁰C stehengelassen.

Die Lösung wird filtriert, im Vakuum konzentriert, in der Kälte mit einer gesättigten Lösung von Zitronensäure angesäuert und mit Wasser verdünnt. Der so erhaltene Niederschlag wird gewaschen und mit

Äther verrieben; die Mischung wird filtriert und abwechselnd mit Äther und Wasser gewaschen. Nach ' Umkristallisieren aus Methanol-Äthylacetat-Äther werden 11,10 g

CTB — GIy — Try — Met—Asp — Phe — NH₂ PCI)

erhalten, Fp. 192° C (Zers.). Ein aus Dimethylformamid-Äthylacetat-Äther umkristallisiertes analytisches Muster hat einen Fp. von 196⁰C (Zers.); (Vj? = -27,3° (c = 1 in Dimethylformamid). Eine Suspension von 10,00 g

CTB — GIy — Try — Met—Asp — Phe — NH₂

15

in 120 ml einer 1,33 normalen Lösung von Chlorwasserstoff in Eisessig wird 35 Minuten lang bei 25° C gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit wasserfreiem Äther aufgenommen, filtriert und aus Methanol-Isopropanol umkristallisiert. Es werden 8,43 g

H — GIy — Try — Met — Asp — Phe — NH₂ · HCl tion mit der oberen Schicht des obengenannten Lösungsmittelsystems, werden 700 mg des rohen Dekapeptids (V) erhalten; Fp. 224 bis 226⁰C (Zers.). Das so erhaltene Produkt kann durch Chromatographie gereinigt werden.

Pharmakologie

Die biologische Wirksamkeit der erfindungsgemäß erhältlichen Produkte und in erster Linie die Wirksamkeit auf die gastrische Sekretion, die Gallenblasenbeweglichkeit, die Pankreassekretionen, die Gallensekretion und die Strömung des arteriellen Blutes wurde bestimmt. Die bei diesen Versuchen erzielten Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen angegeben, wobei die Wirksamkeit eines der erfindungsgemäß erhältlichen Produkte

Pyr—GIu(NH₂)- Asp—Tyr(SO₃H)—Thr—*31y—1

■— Try —

Try — Met—Asp — Phe—NH₂ (V)

erhalten; Fp. 182 bis 183°C (Zers.); [α]" = -17° 25 gleich 100 gesetzt und gewichtsmäßig mit der Wirk-

(c = 1 in 95%iger Essigsäure); E_{1 2} = 0,59 GIu, samkeit des entsprechenden blockierten Dekapeptids 0,55 Leu.

Beispiel 4 Pyr-GIu(NH₂)-Asp-Tyr(SO₃H)-Thr-

Die Herstellung des Dekapeptids V wird wie im Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, jedoch wird der Schritt der Herstellung von V aus III durch den folgenden ersetzt: 1 g

NH₂ OAc

H-Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr

35 (OAc)-GIy-Tra—Met—Asp— Phe—NH₂(IV)

ferner mit der Wirksamkeit des menschlichen Gastrins, das aus dem Polypeptid

Pyr — GIy — Pro — Try — Leu — (GIu)₅—AIa

Gly-Try-Met-Asp-Phe-NH₂ (III)

40

in 30 ml wasserfreiem Dimethylformamid wird bei -10⁰C zu 15,9 g des Pyridin — SO₃- Komplexes, suspendiert in 80 ml wasserfreiem Pyridin, zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und sodann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der feste Rückstand wird in 150 mi der unteren Schicht einer Mischung von n-Butanol-Äthanol-Wasser (5:1:8) gelöst und der pH-Wert mit 1 n-Natriumhydroxyd auf 3,2 eingestellt.

Die Mischung wird fünfmal mit 100 ml der oberen Schicht der obengenannten Mischung extrahiert. Die Extrakte werden im Vakuum eingedampft, der Rückstand wird mit Chloroform aufgenommen. Die Mischung wird filtriert, das Filtrat mit Chloroform und Diäthyläther gewaschen und sodann zur Trockne eingedampft. Es werden 900 mg

NH₂ OSO₃H OAc

I Il

H-Pyr-Glu-Asp-Ty Thr

60

L-GIy-Try-Met-Asp-Phe-NH₂ (IV)

erhalten. Nach schwacher alkalischer Hydrolyse dieses Produktes, gefolgt von einer Ansäuerung und Extrak-L-Tyr — GIy — Try — Met — Asp — Phe — NH₂

besteht, und mit der des gastrinähnlichen synthetischen Pentapeptids (I.C.I. 50, 123)

CTB — β—Ala — Try — Met — Asp — Phe — NH₂

verglichen wird. Dieses gastrinähnliche synthetische Pentapeptid wird von der britis'-h'-n Firma LCI. hergestellt.

Seine internationale Bezeichnung (Englisch »generic name«) ist »Pentagastrin«. I. C. I. hat Pentagastrin mit dem Warenzeichen Peptavlon® auf den Markt gebracht (vgl. »Merck Index« 8. Auflage, S. 793).

Insbesondere zeigt die Tabelle I die Werte entsprechend den folgenden pharmakologischen Wirksamkeiten.

Spalte I: Wirksamkeit auf die Salzsäuresekretion:

Sie wurde in vivo nach dem Volumszuwachs des Magensaftes und nach der Stärke der Säure des ausgeschiedenen Saftes berechnet. Die zu' prüfenden Produkte wurden bei Hunden und Ratten subkutan verabreicht.

Spalteil: Wirksamkeit auf die Gallenblasenbeweglichkeit:

Sie wurde in situ auf die Gallenblase von Meer schweinchen bei intravenöser Verabreichung dei Produkte berechnet.

I 643

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Spalte III: Wirksamkeit auf die Gallensekretion:

Sie wurde bestimmt durch den Zuwachs des Gallenflusses und der Chelestennkonzentration der Galle bei Ratten naoh intravenöser Verabreichungder Produkte.

Tabelle I

Spalte IV: Wirksamkeit auf die Strömung des arteriellen Blutes:

Sie wurde durch einen Strömungsmesser bestimmt, der in der Pankreasduodenalarterie angebracht war, nach intravenöser Verabreichung des Produktes an Hunde.

Verbindungen

Pyr — GIu(NH₂)—Asp—Tyr(S O₃H) — Thr

GIy — Try — Mat — Asp — Phe - NH₂ (V)..
Pyr—GIu(NH₂)—Asp — Tyr(SO₃H) — Thr

(OAc) — GIy — Try — Met — Asp

Phe - NH₂ (IV)

Vergleichsstofle:

menschliches Gastrin

CTB-/Ϊ—Ate—Try—Met—Asp—Phe - NH₂

I Salzsäurcsckretion

Hund

100

95

30

RaUc

Il

Gallenblascn-

bcwcglichkcii

(Meer-

schwcinchcn)

100

III

Gallcnsckrcticm (Halle)

100

IV

Strömung des

arteriellen Blutes

(Hund!

100

110

0.03
0.005

90

2
0.2

In die Tabelle II ist die kleinste aktive Dosis (MD) des Dekapeptids

Pyr—GIu(NH₂)-Asp—T;t(SO₃H)—Thr —Gly —Try- Met—Asp - Phe -N⁵H₂(V)
und die des Dekopeptids

Pyr —GIu(NH₂)-Asp —Tyr(SOjH)—Thr —(OAc)-GIy -Try — Met - Asp - Phe - Nh, (IV)
— bestimmt bei verschiedenen Versuchen — angegeben.

Tabelle II

Versuche

Dekapeplid (VJ j Dckapcptid (IVj

ArI der Vcrabreichuns

10Ong,lcg
ng/kg
0.0025 ng/ml

ng/kg

nicht bestimm!

Salzsäuresekretion des Magens (Hund)

Salzsäuresekretion des Magens (Ratte)

Magensekretion (Frosch)

Externe Pankreassekretion (Hund)

Externe Pankreassekreiion (Katze)

Gallenblasenbeweglichkeit (Meerschweinchen)

Gallensekretion (Ratte)

Vasodüatation des pankrealen Duodenalteiles (Hund) Verminderung des arteriellen Blutdruckes (Hund)

I ng = 0.001 ng.

Die erfindungsgemäß erhältliciien Produkte können insbesondere in der Cholsocysto-raphie _7Ur Stimulation der Pankreas- und Magensekretion, bei der arteriellen Hypertension und /um Alkalischmii-hc^ dci Duodenalinhaltes im Falle von Zwölffingerdarmgeschwüren klinisch angewendet werden

Die Produkte können oral oder parenteral in Form der therapeutisch gewöhnlich verwendeten Zusamme nsetzungen verabreicht werden.

3 ng/kg	2 ng,Tcg
IO ng/kg	10 ng/kg
0,2 ng/kg	0.15 ng/kg
1000 ng/kg	870 ng/kg
4 ng/kg	nicht bestimmt
100 ng/kg	Π0 ng,·ks.

subkutan

intravenös

in vitro

intravenös

Claims

Patentansprüche:

1. Dekapeptid L-Pyroglutamyl-L-glutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonyl-glycyl-L-tryptophanyl -L -methionyl - L - aspartyl - L- phenylalanylamid, wobei die Phenolgruppe des Tyrosylresles frei oder durch einen Schwefelsäurerest blockiert und die Alkoholgruppe des Threonylrestes frei, oder durch einen aliphatischen Acylrest blockiert ist, mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und dessen pharmazeutisch verwendbare Salze.