DE1289668B - Stabilisierungsmittel fuer enzymatische Testreagenzien - Google Patents

Description

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Um enzymatische Untersuchungen (ζ. B. die Mes- Die nach der Lehre der vorliegenden Erfindung

sung von Enzym-Aktivitäten für diagnostische erhältlichen Reagenzienkompositionen sind, so her-

Zwecke) routinemäßig und rasch durchführen zu gestellt, in Wasser sehr schnell und leicht lösliche,

können, ist es für den Praktiker von großer Bedeu- poröse Pulver, die jahrelang haltbar sind. Sie stellen tung, die für den Ablauf der betreffenden enzyma- 5 einen erheblichen Fortschritt auf dem Gebiete der

tischen Reaktion erforderlichen Stoffe (Hilfsenzyme, Reagenzien-Zusammenstellungen für enzymatische

Coenzyme, Substrate, Puffersubstanzen usw.) ge- Untersuchungen dar. Der Praktiker hat nunmehr

brauchsfertig — im richtigen Verhältnis dosiert — weiter nichts zu tun, als den Inhalt des betreffenden

zur Verfugung zu haben. Behälters in einer bestimmten Menge Wasser zu

Im Interesse der Arbeitsrationalisierung soll eine io lösen, die zu untersuchende Substanz hinzuzugeben

Reagenzienkomposition für enzymatische Unter- und gemäß Vorschrift zu messen (z. B. Messung der

suchungen schon möglichst viele der zur Durchfüh- Extinktion in einem Photometer),

rung der betreffenden Reaktion benötigten Stoffe ver- Im folgenden sind einige Reagenzienkompositionen

einen, um zeitraubende Pipettierungen u. dgl. sowie angegeben, bei denen erfindungsgemäß Glutathion

Fehlerquellen auf ein Minimum herabzusetzen. 15 als Stabilisierungsmittel Verwendung findet.

So sind Diagnostiziermittel bekannt, die sämtliche

für den enzymatischen Nachweis einer Verbindung Beispiele

erforderlichen Substanzen enthalten. In der deutschen j Bestimmune

Auslegeschrift 1 075 869 ist ein Testreagenz für _der Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT)

Glucose beschrieben, das die Komponenten auf ao ττργ» ο

einem saugfähigen Träger aufweist. Die für die Test- tf⁶ § ^^a?ViJ;⁴ ' ί

reaktion erforderlichen Reagenzien können auch in ϊ'η< ai · ^

Pulverform vorliegen, wobei die Herstellung der f'«⁸¹⁰¹;,,"¹,' .

trockenen Reagenzienkomposition, wie in der bei- U,35 g a-Ketoglutarat,

gischen Patentschrift 627 961 beschrieben, durch 25 005ΌΡΝΗ "'

Gefriertrocknung der Lösungen zu sehr aktiven und .'„„Α _ΎJ ^ ~ , _Λ

schnell wieder in Lösung gehenden Präparaten führt. 0,0015 gLactat-Dehydrogenase,

Die in vielen Testkombinationen notwendigen U,3U g Lrlutatnion

beiden Coenzyme Di- und Triphosphopyridinnucleo- werden in 90 ml bidest. Wasser gelöst und der pH-

tid müssen, um voll aktiv zu sein, in reduzierter 30 Wert mit verdünnter Natronlauge auf 7,6 eingestellt.

Form vorliegen (DPNH und TPNH). Leider sind sie Dann wird die Lösung mit bidest. Wasser auf 100 ml

in dieser Form nicht sehr stabil. aufgefüllt, anschließend eingefroren und lyophisiert.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein

Stabilisierungsmittel zu finden, das die Stabilisierung 2. Bestimmung

dieser Coenzyme bewirkt, jedoch sonst praktisch 35 der Glutamat,Oxalacetat-Transaminase (GOT)

keinen Einfluß, zumindest nicht negativer Art, auf 2 43 s Na HPO · 2 H O

die Testreaktionen ausübt. 0^21 g NaH^ · 2 HA

Es wurde nun überraschenderweise festgestellt, 1,80 g Natriumaspartat;

daß als Stabilisierungsmittel für enzymatische Test- 0 35 ε α-Ketoglutarat

reagenzien, welche das Di- oder Triphosphopyri- 40 030 g Serumalbumin',

dinnucleotid in reduzierter Form enthalten, Glut- 0 05 2 DPNH

athion mit Erfolg verwendet werden kann, wobei das ₀'₀₀₁₅ Lact'at-Dehydrogenase,

Glutathion in reduzierter Form also mit freier 0,0015 g Malat-Dehydrogenase,

SM-Gruppe vorliegen muß. Durch die erfindungs- 0 3Oe Glutathion

gemäße Verwendung des Glutathione gelingt es nun, 45 '

diese Coenzyme in Mischungen mit den anderen er- Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben,
forderlichen Reagenzien auch bei längerer Lagerung

aktiv zu halten. 3. Bestimmung der Lactat-Dehydrogenase (LDH)

Die Herstellung der Reagenzienkompositionen er- 2,43 g Na₂HPO₄ · 2 H₂O,

folgt durch Mischen aller für die Durchführung der 50 o,21 g NaH₂PO₄ · 2 H₀O,

bezweckten enzymatischen Reaktionen erforderlichen 0,004 g Natriumpyruvat,

Stoffe wie Hilfsenzyme, Coenzyme, Substrate, Puffer- o'3O g Serumalbumin,

substanzen, Hilfsstoffe und dem erfindungsgemäßen o,O5 g DPNH,

Stabilisator sowie gegebenenfalls Füllstoffe in dem 0,30 g Glutathion,

für den Ablauf der Testreaktionen optimalen Ver- 55 ' .._,.., _Λ ,

hältnis mit Wasser zu einer Lösung, deren Volumen Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben.

und pH-Wert in üblicher Weise eingestellt werden ₄_ _{Bestim von} ^_{01386 (ALD)}

kann. Diese Testlosungen werden dann gemäß der tron

jeweils gewünschten Einheitsmenge auf geeignete r^? S ^.^a|?pjr* ' ;r iprj'

Behälter aufgeteilt und durch Gefriertrocknung 60 £²* S NaH₂PO₄ ·.2H₂C>>

(Lyophilisierung) des Inhalts dieser Behälter und 0,14 g Fructose-l,6-diphsophat,

sofortigen Verschluß derselben in haltbare Test- ">™⁵ g Jodacetat,

Präparate übergeführt. °>30 g Serumalbumin,

Als Füllstoffe können solche mchtionogenen orga- ^ ™Ä- ™ , , τ^ , j

nischen Verbindungen verwendet werden, weiche 6₅ 0,0015 g Glycerophosphat-Dehydrogenase,

— wie Gelatine, Polyvinylpyrrolidon, Albumin 0_;0015gTriosephosphat-Isomerase,

usw. — in an sich bekannter Weise den Lyophilisie- ^υ'^3υ § Wutatnion.

rungsvorgang erleichtern. Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Verwendung von Glutathion als Stabilisierungsmittel für enzymatische Testreagenzien, welche Di- oder Triphosphopyridmnucleotid in reduzierter Form enthalten.