DE1134669B

DE1134669B - Process for the preparation of 9ª ‡ -Oxy-3-keto-? 4-steroids of the androstane, 19-norandrostane and pregnane series

Info

Publication number: DE1134669B
Application number: DES64780A
Authority: DE
Inventors: Robert D Muir; Raymond M Dodson
Original assignee: GD Searle LLC
Current assignee: GD Searle LLC
Priority date: 1958-09-08
Filing date: 1959-09-05
Publication date: 1962-08-16

Description

Verfahren zur Herstellung von 9 a-Oxy-3-keto-44-steroiden der Androstan-, 19-Norandrostan-und Pregnanreihe Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur mikrobiologischen Einführung einer Hydroxylgruppe in die 9a-Stellung von 3-Keto-44-steroidverbindungen mit Mikroorganismen der Species Nocardia corallina.Process for the preparation of 9 a-oxy-3-keto-44-steroids of androstane, 19-norandrostane and pregnane series The invention relates to a process for microbiological introduction of a hydroxyl group in the 9a-position of 3-keto-44-steroid compounds with microorganisms of the species Nocardia corallina.

Es sind bereits Verfahren bekannt, wonach auf mikrobiologischem Wege eine Hydroxylgruppe in die 9a-Stellung von Progesteron und Reichsteins Verbindung S eingeführt wird. Der in diesen Verfahren verwendete Streptomyces aureofaciens wirkt jedoch nicht selektiv, so daß neben der 9a-Oxyverbindung andere Oxydationsprodukte entstehen, die auf chromatographischem Wege von dem erwünschten Verfahrensprodukt getrennt werden müssen. Demgegenüber ermöglicht das erfindungsgemäße Verfahren die selektive Einführung einer 9a-ständigen Hydroxylgruppe, ohne daß weitere Oxydationsprodukte gebildet werden, die eine chromatographische Trennung erforderlich machen.Processes are already known according to which microbiological means a hydroxyl group in the 9a position of progesterone and Reichstein's compound S is introduced. The Streptomyces aureofaciens used in these procedures does not act selectively, however, so that other oxidation products in addition to the 9a-oxy compound arise, which by chromatography of the desired process product need to be separated. In contrast, the method according to the invention enables selective introduction of a 9a hydroxyl group without any further oxidation products which require a chromatographic separation.

Im erfindungsgemäßen Verfahren kann das Steroidmaterial, das der Einwirkung von Mikroorganismen der Gattung Nocardia ausgesetzt werden soll, entweder der als Impfstoff verwendeten Mikroorganismenkultur oder dem Nährmedium vor dessen Sterilisierung oder Beimpfung zugesetzt werden. Das Nährmedium sollte assimilierbare Stickstoff-und Kohlehydratquellen enthalten und mit steriler Luft belüftet werden, indem man entweder eine große Oberfläche der Kultur steriler Luft aussetzt oder durch eine submerse Kultur Luft leitet.In the method according to the invention, the steroid material that is exposed to the action to be exposed to microorganisms of the genus Nocardia, either as Vaccine used microorganism culture or the nutrient medium before its sterilization or inoculation can be added. The nutrient medium should be nitrogen and assimilable Sources of carbohydrate contain and can be ventilated with sterile air by either exposing a large surface of the culture to sterile air or by a submerse Culture air directs.

Als Stickstoffquellen können in üblicher Weise natürlich vorkommende organische Stoffe, wie Sojamehl, Maisquellwasser, Fleischextrakte, Molke, Pepton und/oder bei der Alkoholdestillation zurückbleibende lösliche Stoffe oder synthetische Materialien wie Nitrate oder Ammoniumverbindungen verwendet werden.Naturally occurring nitrogen sources can be used in the usual manner as nitrogen sources organic substances such as soy flour, corn steep liquor, meat extracts, whey, peptone and / or soluble substances or synthetic substances remaining during the alcohol distillation Materials such as nitrates or ammonium compounds can be used.

Als Kohlehydratquellen eignen sich Glukose, Fruktose, Dextrose, Saccharose, Lactose, Maltose, Dextrine und Stärke. Diese Produkte können in gereinigtem Zustand als Konzentrate oder als Gemische verwendet werden. Der bevorzugte Konzentrationsbereich des Steroids im Kulturmedium liegt zwischen etwa 0,025 und 0,1o%. Die Dauer der Einwirkung des Mikroorganismus oder des von ihm erzeugten Enzyms auf das Steroidmaterial beträgt zweckmäßig zwischen 2 und 96 Stunden.Suitable sources of carbohydrates are glucose, fructose, dextrose, sucrose, Lactose, maltose, dextrins and starch. These products can be cleaned be used as concentrates or as mixtures. The preferred concentration range of the steroid in the culture medium is between about 0.025 and 0.1o%. The duration of the Action of the microorganism or the enzyme produced by it on the steroid material is expediently between 2 and 96 hours.

GeeigneteAusgangsstoffe für das erfindungsgemäße Verfahren sind Androstendion, Testosteron, Progesteron, Desoxycorticosteron und 17a,21-Dioxy-4-pregnen-3,20-dion. Nach Beendigung der Fermentation wird das Verfahrensprodukt durch Extraktion mit einem Lösungsmittel, z. B. Methylenchlorid, gewonnen. Durch Umkristallisieren des vom Lösungsmittel befreiten Extraktes erhält man das reine Produkt.Suitable starting materials for the process according to the invention are androstenedione, Testosterone, progesterone, deoxycorticosterone and 17a, 21-dioxy-4-pregnen-3,20-dione. After the fermentation is complete, the process product is extracted with a solvent, e.g. B. methylene chloride obtained. By recrystallizing the From the extract freed from the solvent, the pure product is obtained.

Das erfindungsgemäße Verfahren liefert eine hochspezifische Methode für die Einführung einer 9a-ständigen Hydroxylgruppe in eine Vielzahl von Steroidverbindungen. Die 9a-Oxysteroide können leicht zu in 9(11)-Stellung ungesättigten Steroiden dehydratisiert werden, die wertvolle Ausgangsstoffe für therapeutisch wirksame Steroidverbindungen darstellen.The method according to the invention provides a highly specific method for the introduction of a 9a hydroxyl group in a variety of steroid compounds. The 9a oxysteroids can easily become dehydrated into 9 (11) unsaturated steroids the valuable starting materials for therapeutically effective steroid compounds represent.

In den folgenden Beispielen bedeuten die angegebenen Mengen, falls nichts anderes vermerkt ist, Gewichtsteile. Die Volumteile verhalten sich zu den Gewichtsteilen wie ein Liter zu einem Kilogramm.In the following examples, the amounts given mean if nothing else is stated, parts by weight. The volume parts relate to the Parts by weight like a liter to a kilogram.

Beispiel 1 Ein aus 6 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 10 Teilen handelsüblichem Pepton und 2000 Teilen destilliertem Wasser hergestelltes Medium wird durch 1stündiges Erhitzen auf etwa 110 bi- 120° C sterelisiert, gekühlt und dann mit einer Kultur Nocardia corallina geimpft. Die Kultur läßt man etwa 72 Stunden bei etwa 25' C wachsen.Example 1 A medium prepared from 6 parts of commercially available beef extract, 10 parts of commercially available peptone and 2000 parts of distilled water is sterilized by heating to about 110-120 ° C. for 1 hour, cooled and then inoculated with a culture of Nocardia corallina. The culture is allowed to grow at about 25 ° C for about 72 hours.

Ein aus 75 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 125 Teilen handelsüblichem Pepton, 25 000 Teilen Leitungswasser und 5 Teilen eines Silikon-Antischaummittels bestehendes Medium wird in einem Gärbehälter aus nichtrostendem Stahl gemischt und durch Einleiten von Frischdampf unter Druck bei etwa 110 bis 120' C bis zur Erreichung eines Endvolumens von etwa 30 000 Teilen sterilisiert. Zu diesem sterilen Medium werden nach dem Abkühlen auf 25' C 2000 Teile eines nach dem obigen Verfahren hergestellten Impfstoffes gegeben.A made from 75 parts of commercial beef extract, 125 parts of commercial Peptone, 25,000 parts of tap water and 5 parts of a silicone antifoam existing medium is mixed in a fermentation tank made of stainless steel and by introducing live steam under pressure at about 110 to 120 ° C until it is reached sterilized to a final volume of about 30,000 parts. About this sterile medium after cooling to 25 ° C., 2000 parts of a prepared by the above process Given the vaccine.

Unter Rühren wird durch das Gemisch sterile Luft mit einer Geschwindigkeit von etwa 10 000 Volumteilen je Minute geleitet. Man läßt den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen etwa 65,5 Stunden bei 25'C wachsen. Nachdem die Wachstumsphase des Mikroorganismus abgeschlossen ist, wird eine Lösung von 10 Teilen Androstendion in 197 Teilen Aceton zugegeben und die Fermentierung 24 Stunden fortgesetzt. Darauf wird das Gemisch etwa 90 Minuten mit 18900 Teilen Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird im Vakuum zur Trockne eingedampft und der erhaltene Rückstand mit 214 Teilen Äther behandelt. Die Ätherlösung wird filtriert und der unlösliche Rückstand aus wäßrigem Aceton und danach aus einem Gemisch von Aceton und Petroläther umkristallisiert. Man erhält 9a-Oxyandrostendion, das bei etwa 222 bis 223,5' C schmilzt. Die Verbindung zeigt im ultravioletten Bereich ein Absorptionsmaximum bei 241,5 mix; a - 15 600.With stirring, sterile air is passed through the mixture at a rate of about 10,000 parts by volume per minute. The microorganism is allowed to grow at 25 ° C. for about 65.5 hours under these conditions. After the growth phase of the microorganism has ended, a solution of 10 parts of androstenedione in 197 parts of acetone is added and the fermentation is continued for 24 hours. The mixture is then extracted with 18,900 parts of methylene chloride for about 90 minutes. The methylene chloride extract is evaporated to dryness in vacuo and the residue obtained is treated with 214 parts of ether. The ether solution is filtered and the insoluble residue is recrystallized from aqueous acetone and then from a mixture of acetone and petroleum ether. 9a-Oxyandrostendione, which melts at about 222 to 223.5 ° C., is obtained. The compound shows an absorption maximum at 241.5 mix in the ultraviolet range; a - 15 600.

Beispiel 2 Ein aus 5 Teilen handelsüblichem Pepton, 3 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt und 1000 Teilen Leitungswasser bestehendes Medium wird durch 1 stündiges Erhitzen auf etwa 110 bis 120' C sterilisiert, gekühlt und mit einer Kultur von Nocardia corallina geimpft: Die Kultur läßt man etwa 72 Stunden bei 22 bis 27' C wachsen.Example 2 A peptone made from 5 parts of a commercially available peptone and 3 parts of a commercially available peptone Beef extract and 1000 parts of tap water are mixed through 1 hour heating to about 110 to 120 ° C, sterilized and cooled with a Culture of Nocardia corallina inoculated: The culture is left for about 72 hours at 22 grow to 27'C.

Ein Medium der gleichen Zusammensetzung wird durch Einleiten von Frischdampf unter Druck 15 Minuten bei 120' C sterilisiert und dann gekühlt. Zu 1000 Teilen des sterilen Mediums werden 10 Teile der oben hergestellten Kultur gegeben. Das Gemisch wird unter Hindurchleiten von steriler Luft gerührt. Man läßt den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen bei 25° C so lange wachsen, bis die Wachstumsphase abgeschlossen ist. Dann werden zu etwa 1000 Teilen Kultur 10 Teile einer Acetonlösung zugegeben, die 0,25 Teile 11-Desoxycorticosteron enthält. Die Fermentation wird in Gegenwart des Steroids 48 Stunden fortgesetzt. Darauf wird das Steroidprodukt mit Methylenchlorid extrahiert. Nach dem Abdampfen des Methylenchlorids erhält man 9a-Oxydesoxycorticosteron, das durch Umkristallisieren aus wäßrigem Aceton gereinigt werden kann; F. = 198 bis 203'C.A medium of the same composition is created by introducing live steam sterilized under pressure at 120 ° C. for 15 minutes and then refrigerated. To 1000 parts 10 parts of the culture prepared above are added to the sterile medium. That The mixture is stirred while sterile air is passed through. The microorganism is left grow under these conditions at 25 ° C until the growth phase is complete is. Then 10 parts of an acetone solution are added to about 1000 parts of culture, which contains 0.25 part of 11-deoxycorticosterone. The fermentation is in the presence of the steroid continued for 48 hours. Then the steroid product is mixed with methylene chloride extracted. After evaporation of the methylene chloride, 9a-Oxydesoxycorticosterone is obtained, which can be purified by recrystallization from aqueous acetone; F. = 198 to 203'C.

Beispiel 3 Ein aus 6 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 10 Teilen handelsüblichem Pepton und 2000 Teilen destilliertem Wasser bestehendes Medium wird durch 1stündiges Erhitzen auf etwa 110 bis 120'C sterilisiert, abgekühlt und dann mit einer Kultur Nocardia corallina geimpft. Die Kultur läßt man etwa 72 Stunden bei etwa 25' C wachsen.Example 3 A commercial beef extract made from 6 parts, 10 Parts of commercial peptone and 2000 parts of distilled water of existing medium is sterilized by heating to about 110 to 120 ° C for 1 hour, cooled and then inoculated with a culture of Nocardia corallina. The culture is left for about 72 hours grow at about 25'C.

Ein aus 75 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 125 Teilen handelsüblichem Pepton, 50 Teilen handelsüblichem Hefeextrakt, 10 Teilen eines Öl-Antischaummittels und 25 000 Teilen Leitungswasser bestehendes Medium wird in einem Gärbehälter aus nichtrostendem Stahl gemischt und durch Zugabe von Frischdampf unter Druck bei etwa 110 bis 120° C sterilisiert, bis ein Endvolumen von etwa 30 000 Teilen erhalten ist. Zu dem sterilen Medium werden nach dem Abkühlen auf 25' C 2000 Teile eines nach dem oben beschriebenen Verfahren hergestellten Impfstoffes gegeben. Unter Rühren wird durch das Gemisch sterile Luft mit einer Geschwindigkeit von etwa 10 000 Volumteilen je Minute geleitet. Man läßt den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen etwa 25 Stunden bei 25' C wachsen. Nach Abschluß der Wachstumsphase wird eine Lösung von 10 Teilen Progesteron in 197 Teilen Aceton zugesetzt und die Fermentierung 18 Stunden fortgesetzt. Das Gemisch wird zweimal mit 18 900 Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridextrakte werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in 400 Teilen eines Gemisches aus 10°/o Äthylacetat und 90o/0 Benzol gelöst und dann auf eine Kieselerdegel-Säule aufgebracht. Die Säule wird mit Benzol, das steigende Mengen Äthylacetat enthält, ausgewaschen. Durch Auswaschen mit einer Mischung aus 40% Äthyläcetat und 60% Benzol und Umkristallisieren des nach Entfernung des Lösungsmittels erhaltenen Rückstandes aus einem Gemisch von Aceton und Cyclohexan und dann aus wäßrigem Methanol gewinnt man 9a-Oxyprogesteron, das bei etwa 193 bis 194,5' C schmilzt; [a]n = 185'.A medium consisting of 75 parts of commercial beef extract, 125 parts of commercial peptone, 50 parts of commercial yeast extract, 10 parts of an oil antifoam and 25,000 parts of tap water is mixed in a fermentation tank made of stainless steel and heated by adding live steam under pressure at about 110 to 120 ° C sterilized until a final volume of about 30,000 parts is obtained. After cooling to 25 ° C., 2000 parts of a vaccine prepared by the method described above are added to the sterile medium. With stirring, sterile air is passed through the mixture at a rate of about 10,000 parts by volume per minute. The microorganism is allowed to grow under these conditions at 25 ° C. for about 25 hours. After the growth phase has ended, a solution of 10 parts of progesterone in 197 parts of acetone is added and the fermentation is continued for 18 hours. The mixture is extracted twice with 18,900 parts of methylene chloride. The methylene chloride extracts are combined and concentrated in vacuo. The residue is dissolved in 400 parts of a mixture of 10% ethyl acetate and 90% benzene and then applied to a silica gel column. The column is washed with benzene containing increasing amounts of ethyl acetate. By washing with a mixture of 40% ethyl acetate and 60% benzene and recrystallizing the residue obtained after removal of the solvent from a mixture of acetone and cyclohexane and then from aqueous methanol, 9a-oxyprogesterone is obtained, which at about 193 to 194.5 ° C melts; [a] n = 185 '.

Mit einem Gemisch aus 70% Athylacetat und 30010 Benzol wird eine zweite Substanz ausgewaschen, die aus Aceton umkristallisiert 9a-Oxytestosteron vom Schmelzpunkt 197 bis 199' C ergibt.With a mixture of 70% ethyl acetate and 30010 benzene is a second Substance washed out, which recrystallized from acetone 9a-oxytestosterone from the melting point 197 to 199 ° C.

Beispiel 4 Ein aus 6 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 10 Teilen handelsüblichem Pepton und 2000 Teilen destilliertem Wasser bestehendes Medium wird durch 1stündiges Erhitzen auf etwa 110 bis 120'C sterilisiert, gekühlt und mit einer Kultur Nocardia corallina geimpft. Die Kultur läßt man etwa 72 Stunden bei etwa 25'C wachsen.Example 4 A commercial beef extract made from 6 parts, 10 Parts of commercial peptone and 2000 parts of distilled water of existing medium is sterilized by heating to about 110 to 120 ° C for 1 hour, cooled and inoculated with a culture of Nocardia corallina. The culture is left for about 72 hours grow at about 25'C.

Ein aus 75 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 125 Teilen handelsüblichem Pepton, 50 Teilen handelsüblichem Hefeextrakt, 10 Teilen eines Öl-Antischaummittels und 25 000 Teilen Leitungswasser hergestelltes Medium wird in einem Gärbehälter aus nichtrostendem Stahl gemischt und durch Zugabe von Frischdampf unter Druck bei etwa 110 bis 120' C sterilisiert, bis ein Endvolumen von etwa 30 000 Teilen erhalten ist. Zu dem sterilen Medium werden nach dem Abkühlen auf 25' C 2000 Teile eines nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren hergestellten Impfstoffes gegeben. Unter Rühren leitet man durch das Gemisch sterile Luft mit einer Geschwindigkeit von etwa 10 000 Volumteilen je Minute. Man läßt den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen etwa 25 Stunden bei 25' C wachsen. Nach Abschluß der Wachstumsphase wird eine Lösung von 10 Teilen 17a,21-Dioxy-4-pregnen-3,20-dion in 790 Teilen Aceton zugegeben. Die Fermentierung setzt man dann noch 24 Stunden fort. Das Gemisch wird zweimal mit 18 900 Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridextrakte werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhält 9a,17a,21-Trioxy-4-pregnen-3,20-dion, F. = 231 bis 235° C; Infrarot-Absorptionsmaxima bei etwa 2,81, 5,81, 6,07 und 6,19 Beispiel 5 Ein aus 6 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 10 Teilen handelsüblichem Pepton und 2000 Teilen destilliertem Wasser hergestelltes Medium wird durch 1stündiges Erhitzen auf etwa 110 bis 120°C sterilisiert, gekühlt und dann mit einer Kultur Nocardia corallina geimpft. Die Kultur läßt man etwa 72 Stunden bei etwa 25° C wachsen.A medium prepared from 75 parts of commercially available beef extract, 125 parts of commercially available peptone, 50 parts of commercially available yeast extract, 10 parts of an oil antifoam agent and 25,000 parts of tap water is mixed in a fermentation tank made of stainless steel and by adding live steam under pressure at about 110 to 120 'C sterilized until a final volume of about 30,000 parts is obtained. After cooling to 25 ° C., 2000 parts of a vaccine prepared by the method described above are added to the sterile medium. With stirring, sterile air is passed through the mixture at a rate of about 10,000 parts by volume per minute. The microorganism is allowed to grow under these conditions at 25 ° C. for about 25 hours. After the growth phase has ended, a solution of 10 parts of 17a, 21-dioxy-4-pregnen-3,20-dione in 790 parts of acetone is added. The fermentation is then continued for another 24 hours. The mixture is extracted twice with 18,900 parts of methylene chloride. The methylene chloride extracts are combined and concentrated in vacuo. This gives 9a, 17a, 21-trioxy-4-pregnen-3,20-dione, mp = 231 to 235 ° C; Infrared absorption maxima at about 2.81, 5.81, 6.07 and 6.19 Example 5 A medium prepared from 6 parts of commercially available beef extract, 10 parts of commercially available peptone and 2000 parts of distilled water is heated to about 110 to 120 ° for 1 hour C sterilized, refrigerated and then inoculated with a culture of Nocardia corallina. The culture is allowed to grow at about 25 ° C. for about 72 hours.

Ein aus 75 Teilen handelsüblichem Rindfleischextrakt, 125 Teilen handelsüblichem Pepton, 50 Teilen handelsüblichem Hefeextrakt, 10 Volumteilen eines Öl-Antischaummittels und 25 000 Teilen Leitungswasser hergestelltes Medium wird in einem Gärbehälter aus nichtrostendem Stahl gemischt und durch Zugabe von Frischdampf unter Druck bei etwa 110 bis 120°C bis zur Erreichung eines Volumens von etwa 30 000 Teilen sterilisiert. Zu dem sterilen Medium werden nach dem Abkühlen auf 25° C 2000 Teile eines nach dem oben beschriebenen Verfahren hergestellten Impfstoffes gegeben. Unter Rühren wird durch das Gemisch sterile Luft mit einer Geschwindigkeit von etwa 10 000 Völumteilen je Minute geleitet. Man läßt den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen etwa 25 Stunden bei 25° C wachsen. Nach Abschluß der Wachstumsphase wird eine Lösung von 10 Teilen 17a-Oxyprogesteron in 790 Teilen Aceton zugegeben und die Fermentierung 30 Stunden fortgesetzt. Das Gemisch wird zweimal mit 18 900 Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridextrakte werden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Man erhält 9a,17a-Dioxyprogesteron, das durch Umkristallisieren aus wäßrigem Aceton gereinigt werden kann. Infrarot-Absorptionsmaxima bei etwa 2,92, 5,87, 5,99 und 6,18 p. (in HBr).A made from 75 parts of commercial beef extract, 125 parts of commercial Peptone, 50 parts of commercial yeast extract, 10 parts by volume of an oil antifoam and 25,000 parts of tap water produced medium is placed in a fermentation tank made of stainless steel and mixed by adding live steam under pressure about 110 to 120 ° C until a volume of about 30,000 parts is reached. After cooling to 25 ° C., 2000 parts of one are added to the sterile medium given the vaccine prepared using the procedure described above. While stirring sterile air is passed through the mixture at a rate of about 10,000 volumetric volumes directed per minute. The microorganism is left under these conditions for about 25 Grow at 25 ° C for hours. When the growth phase is complete, a solution of 10 parts of 17a-oxyprogesterone in 790 parts of acetone are added and fermentation Continued for 30 hours. The mixture is twice with 18,900 parts of methylene chloride extracted. The methylene chloride extracts are combined and concentrated in vacuo. 9a, 17a-dioxyprogesterone is obtained, which is obtained by recrystallization from aqueous acetone can be cleaned. Infrared absorption maxima at about 2.92, 5.87, 5.99 and 6.18 p. (in HBr).

Beispiel 6 Nach dem Verfahren des Beispiels 5 erhält man bei Verwendung von 19-Norandrost-4-en-3,17-dion als Ausgangsmaterial 9a-Oxy-19-norandrost-4-en-3,17-dion vom Schmelzpunkt etwa 223 bis 226°C; [a] 'D' = 128 (CHC13) Ultraviolettmaximum bei etwa 241 m[.; - = 14260.Example 6 Following the procedure of Example 5, using 19-norandrost-4-en-3,17-dione as starting material, 9a-oxy-19-norandrost-4-en-3,17-dione with a melting point of about 223 bis 226 ° C; [a] 'D' = 128 (CHC13) ultraviolet maximum at about 241 m [.; - = 14260.

Claims

PATENT CLAIM: Process for the production of 9a-oxy-3-keto-J4-steroids the androstane, 19-norandrostane and pregnane series by incubating the corresponding 9-Deoxysteroids with or from an oxidizing microorganism generated oxidizing enzymes, characterized in that the microorganism Nocardia corallina used.