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DE10234905B4 - Method for improving the acoustically induced molecule transfer - Google Patents

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DE10234905B4 DE2002134905 DE10234905A DE10234905B4 DE 10234905 B4 DE10234905 B4 DE 10234905B4 DE 2002134905 DE2002134905 DE 2002134905 DE 10234905 A DE10234905 A DE 10234905A DE 10234905 B4 DE10234905 B4 DE 10234905B4
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Abstract

Verfahren zum Transferieren von Molekülen, insbesondere DNA oder Oligos, in Zellen von Menschen, Tieren oder Pflanzen, mit der Maßgabe, dass es sich nicht um humane embryonale Stammzellen handelt, mittels durch akustische Energie erzeugten Scherkräften, dadurch gekennzeichnet, dass die Scherkräfte durch Einwirkung der akustischen Wellen auf in dem gesamten Probenvolumen verteilte Streukörper (1, 11, 12) erzeugt werden.method for transferring molecules, in particular DNA or oligos, in cells of humans, animals or Plants, with the proviso that they are not human embryonic stem cells, by means of shearing forces generated by acoustic energy, characterized that the shear forces by the action of the acoustic waves on the entire sample volume distributed scattering bodies (1, 11, 12) are generated.

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Figure 00000001

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Transferieren von Molekülen medizinisch wirksamer Stoffe (Agenzien)- wie zum Beispiel DNA, Oligos, bestimmte Chemikalien etc. -in Zellen von Menschen, Tieren und/oder Pflanzen mittels durch akustische Energie erzeugten Scherkräften, und zwar in vitro wie auch in vivo.The This invention relates to a method of transferring molecules medically active substances (agents) - such as DNA, oligos, certain Chemicals etc. in cells of humans, animals and / or plants by means of shear forces generated by acoustic energy, and although in vitro as well as in vivo.

Die Membran lebender Zellen bildet sowohl bei Einzellern in Nährlösungen wie bei Vielzellern im Gewebeverband einen natürlichen Schutz gegen das Eindringen unerwünschter Moleküle, Gene oder Viren.The Membrane of living cells forms in single cells in nutrient solutions such as in multicellular tissue in the tissue a natural protection against penetration undesirable molecules Genes or viruses.

Im Rahmen der Biotechnologie oder der Therapie ist es jedoch erforderlich, die Zellmembran zu überwinden und bestimmte Moleküle mit meist höherem Molekulargewicht – sogenannte Biomoleküle, Genabschnitte (Oligos) oder Gene – in das Zytoplasma der Zelle einzubringen, ohne die Lebens- und/oder die Proliferationsfähigkeit der Zellen zu beeinträchtigen. Hierzu kommen heute physikalische Verfahren, wie zum Beispiel die Elektroporation wie auch biologische Methoden, zum Beispiel in Form von viralen Vektoren zur Anwendung. Leider haben diese Verfahren auch Nachteile vor allem in Bezug auf die Überlebensrate der zu transfizierenden Zellen.in the Biotechnology or therapy, however, it is necessary to to overcome the cell membrane and certain molecules with mostly higher Molecular weight - so-called Biomolecules, gene segments (Oligos) or genes - in to introduce the cytoplasm of the cell, without the life and / or the proliferation ability affecting the cells. These come today physical methods, such as the Electroporation as well as biological methods, for example in the form of viral vectors for use. Unfortunately, these procedures also have Disadvantages especially in relation to the survival of the transfected Cells.

Seit einiger Zeit verspricht auch der Einsatz akustischer Energie in Form von Ultraschall oder Stoßwellen, wie dies in der DE 19962904 A1 oder der DE 19945441 A1 gezeigt ist, Fortschritte im Hinblick auf Effektivität und Anwendungsbreite, was in zahlreichen Versuchen mittels akustischer Verfahren nachgewiesen wurde.For some time, the use of acoustic energy in the form of ultrasound or shock waves, as promised in the DE 19962904 A1 or the DE 19945441 A1 Progress has been made in terms of effectiveness and breadth of application, which has been demonstrated in numerous experiments using acoustic methods.

Weiterhin offenbart die DE 3821354 A1 ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Desintegration von Zellen mittels Ultraschallbehandlung. Während der Beschallung enthält eine Suspension mit den zu zerstörenden Zellen zusätzlich Ultraschallaktivatoren. Diese Aktivatoren bestehen aus kavitationsresistentem Material, wie harter Keramik, und verstärken das Auftreten von Kavitationen.Furthermore, the disclosure DE 3821354 A1 a method and apparatus for disintegrating cells by sonication. During the sonication, a suspension containing the cells to be destroyed additionally contains ultrasonic activators. These activators are made of cavitation-resistant material, such as hard ceramic, and enhance the occurrence of cavitation.

Aus der US 2002/0039783 A1 ist eine Vorrichtung zur Lyse von Zellensporen oder Mikroorganismen in einer flüssigen Probe bekannt, die eine Kartusche mit einer Lysezelle aufweist, in der die Probe aufgenommen wird. In der Lysezelle ist mindestens eine Festphase enthalten, um die aufzuschließenden Probenkomponenten zu fixieren. Ein Ultraschallwandler ist mit einer Wand der Lysezelle so gekoppelt, dass Ultraschallenergie auf die festgehaltenen Probenkomponenten übertragen wird. In dem Lysekanal oder der Lysekammer können außerdem Teilchen oder Perlen enthalten sein, die die Zellen bei der Ultraschallbeschallung aufbrechen.Out US 2002/0039783 A1 is a device for lysing cell spores or microorganisms in a liquid Sample having a cartridge with a lysis cell, in which the sample is taken. In the lysis cell is at least contain a solid phase to the aufzuschließenden sample components fix. An ultrasonic transducer is connected to a wall of the lysis cell coupled so that ultrasound energy is transferred to the retained sample components becomes. In the lysis channel or the lysis chamber can also particles or beads be contained, which break the cells in the ultrasonic irradiation.

Bei der akustischen Transfektion, der sogenannten Sonication, stand an erster Stelle die zuerst von Delius vertretene Hypothese, dass die Ausbildung von Kavitationsjets das eigentliche Wirkprinzip sei; durch diese Jets würden die in der Umgebung der Zelle befindlichen Moleküle, Genabschnitte, Oligonukleotide oder Gene mitgerissen und im Zytoplasma der Zellen deponiert. Dieser Mechanismus erklärt einen Teil der Effekte angesichts der Erkenntnis, dass durch Überdruck der Molekültransfer erheblich reduziert werden kann. Diese Hypothese erklärt auch die Beobachtung, dass nur ein kleiner Teil der Zellen pro Puls transfiziert wird, jedoch ein erheblicher Teil der Zellen der Zerstörung anheimfällt. Ein Vergleich der Größenverhältnisse der zu transfizierenden Zellen (5 bis 30 μm) mit denjenigen der Kavitationsereignisse (40 bis 1000 μm) erklärt diese Problematik.at the acoustic transfection, the so-called Sonication stood First, the hypothesis first proposed by Delius that the formation of cavitation jets is the actual principle of action; through these jets would the surrounding molecules, gene segments, oligonucleotides or genes are entrained and deposited in the cytoplasm of the cells. This Mechanism explained a part of the effects given the realization that by overpressure the molecule transfer can be significantly reduced. This hypothesis also explains the observation that only a small part of the cells transfected per pulse but a significant portion of the cells will be destroyed. A comparison the proportions the cells to be transfected (5 to 30 μm) with those of the cavitation events (40 to 1000 μm) explained this problem.

Eine zweite Hypothese sieht in der Einwirkung von Scherkräften auf die Zellen den vorwiegenden Wirkungsmechanismus für den Molekültransfer, wobei die Scherkräfte sekundär durch Kavitationsereignisse hervorgerufen werden.A second hypothesis looks at the action of shear forces the cells have the predominant mechanism of action for molecule transfer, wherein the shear forces secondary caused by cavitation events.

Flotierende Zellen können physikalisch als eine Hülle mit hoher Formanpassungsfähigkeit betrachtet werden, die eine Flüssigkeit umschließt, die ihrerseits durch das Zytoskelett gegenüber der Umgebung eine erhöhte Viskosität mit höheren inneren Reibungsverlusten aufweist. Das Zytoskelett ist eine Art Faserstruktur, die den Innenraum der Zelle ausfüllt und mit der Zellmembran in Verbindung steht, was einer Formveränderung der Zelle durch äußere Kräfte entgegenwirkt. Bei einer Deformation der Zelle über eine bestimmte Schwelle hinaus kann es zu kurzzeitiger Durchlässigkeit der Zellmembran kommen; bei weiterer Deformation stellen sich jedoch irreversible Schäden an den Zellen ein.floated Cells can physically as a shell with high conformability to be considered a liquid encloses which in turn by the cytoskeleton to the environment an increased viscosity with higher internal friction losses having. The cytoskeleton is a type of fibrous structure that defines the interior filling in the cell and communicates with the cell membrane, causing a change in shape counteracts the cell by external forces. At a deformation of the cell over a certain threshold can lead to short-term permeability the cell membrane come; with further deformation, however, arise irreversible damage at the cells.

Die Deformation einer flotierenden Zelle wird bewirkt durch Zug- oder Scherspannungen, die in Fluiden durch inhomogene Strömungen erzeugt werden können.The Deformation of a floating cell is caused by tensile or Shear stresses generated in fluids by inhomogeneous flows can be.

Es wird heute davon ausgegangen, dass eine Zelle unter Einwirkung von Scherspannungen auslösenden Strömungen ihre Form derart ändert, dass sich dadurch kurzzeitig ihre Zellmembran für den Transfer von Molekülen aus dem extrazellulären Raum öffnet. Beobachtungen an Vollblut, das bei turbulenten Strömungen mit hohen Scherkräften der Hämolyse unterliegt, legt die Wirkung von Scherkräften auf Zellen nahe. Als Schwelle für die Zerstörung von roten Blutkörperchen werden Scherspannungen von 500 dyn/cm2 angegeben. Außerdem wurde in durchströmten Blutgefäßen mit turbulenzerhöhenden Hindernissen im Epithel die Abgabe von Wirkstoffen aus den Zellen gemessen. Physiologische Scherspannungen liegen dagegen im Bereich von 2 bis 5 dyn/cm2.Today it is assumed that a cell changes its shape under the influence of shear-induced currents in such a way that it briefly opens its cell membrane for the transfer of molecules from the extracellular space. Whole blood observations, which undergo hemolysis in turbulent high-shear flows, suggest the effect of shear on cells. Shear voltages of 500 dynes / cm 2 are given as the threshold for the destruction of red blood cells. It was also in Flowed through blood vessels with turbulence-increasing obstacles in the epithelium, the delivery of drugs from the cells measured. By contrast, physiological shear stresses are in the range of 2 to 5 dynes / cm 2 .

Der Erfindung liegt damit die Aufgabe zugrunde, zur Verbesserung des Molekültransfers in Zellen von Lebewesen unter gleichzeitiger Erhöhung der Überlebensrate der Zellen beim Transferieren in der betreffenden Nährlösung bzw. Suspensionsflüssigkeit Scherkräfte zu erzeugen, die gleichmäßig über das gesamte Probenvolumen verteilt, vorteilhaft in der Größenordnung von 5 bis 500 dyn/cm2 liegen.The invention is thus based on the object to improve the molecule transfer in cells of living beings while increasing the survival rate of the cells when transferring in the respective nutrient solution or suspension fluid shear forces to produce that evenly distributed over the entire sample volume, advantageously in the order of 5 to 500 dyn / cm 2 lie.

Gelöst ist diese Aufgabe im wesentlichen durch das Kennzeichen des Patentanspruches 1. Die Erfindung ist damit primär darin zu sehen, dass die Scherkräfte durch Einwirkung der akustischen Wellen auf in dem gesamten Probenvolumen verteilte Streukörper erzeugt werden. Die Streukörper fungieren als akustische Hindernisse. Ihre Größenordnung entspricht in etwa derjenigen der Zellen. Ihre Schalldichte weicht jedoch von derjenigen der Nährlösung mit den darin enthaltenen Zellen und den zu transferierenden Molekülen deutlich ab. Die erfindungsgemäß zu erzeugenden Scherkräfte entstehen, sobald das Probenvolumen mit einer akustischen Welle durchschallt wird. Letztere kann in Form von gepulstem Ultraschall oder beispielsweise auch als akustische Stoßwelle eingestrahlt werden.This is solved Task essentially by the characterizing part of claim 1. The invention is thus primary to see in it that the shear forces by the action of the acoustic waves on the entire sample volume distributed scattering bodies be generated. The scattering bodies act as acoustic obstacles. Their size corresponds approximately that of the cells. Their sound density, however, differs from that the nutrient solution with the cells contained therein and the molecules to be transferred clearly from. The invention to be produced shear arise as soon as the sample volume is penetrated by an acoustic wave becomes. The latter can be in the form of pulsed ultrasound or for example also as an acoustic shockwave be irradiated.

Die erfindungsgemäß möglichst gleichmäßig in der Nährlösung verteilten Streukörper erfahren infolge ihrer unterschiedlichen Schalldichte bei der Pulsbeaufschlagung durch die Schallwelle eine Eigenbewegung, die dem Durchlauf der akustischen Welle nachfolgt. Die Eigenbewegung der Streukörper gipfelt in einer Relativbewegung gegenüber ihrer Umgebung, wodurch kurzzeitig lokale Scherspannungen in Streukörpernähe erzeugt werden bzw. entstehen. Die Scherspannungen können durch die Intensität und durch das Zeitprofil der akustischen Welle, durch die Größe und Schalldichte der erfindungsgemäßen Streukörper, durch die hydrophilen Eigenschaften der Oberfläche der Streukörper und durch die Viskosität der Probenflüssigkeit bedarfsweise modifiziert bzw. so eingestellt werden, dass sie die jeweilige Transferaufgabe so optimal wie möglich lösen.The according to the invention possible evenly in the Nutrient solution distributed diffuser experienced due to their different sound density in the pulse through the sound wave a proper movement, the passage of the acoustic wave follows. The proper movement of the scattering body culminates in a relative movement opposite their environment, causing short-term local shear stresses close to Streuerörpernähe be or arise. The shear stresses can be due to the intensity and through the time profile of the acoustic wave, the size and sound density the scattering body according to the invention, by the hydrophilic properties of the surface of the scattering body and by the viscosity the sample liquid If necessary, modified or adjusted so that they solve each transfer task as optimally as possible.

Weitere Einzelheiten im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens ergeben sich aus den Patentansprüchen 2 bis 9.Further Details in the context of the method according to the invention arise from the claims 2 to 9.

In den Abbildungen ist die Erfindung zeichnerisch anhand von Beispielen erläutert.In In the figures, the invention is illustrated by way of example explained.

Es zeigen:It demonstrate:

1a einen Großausschnitt aus einem Probengefäß mit zu transfizierenden Molekülen, Zellen und Sreukörpern. 1a a large section of a sample vessel with transfected molecules, cells and Sreukörpern.

1b eine vergrößerte Darstellung eines Streukörpers mit seiner unmittelbaren Umgebung gemäß Ausschnitt 7 aus der 1a. 1b an enlarged view of a scattering body with its immediate environment according to detail 7 from the 1a ,

2 ein Diagramm „Verformung V über der Zeit t" mit Ortskurven eines Partikels der Suspension und eines Streukörpers. 2 a diagram "deformation V over time t" with loci of a particle of the suspension and a scattering body.

3 drei Probengefäße vergleichsweise nebeneinander mit unterschiedlichen Streukörpern. 3 three sample containers comparatively next to each other with different scattering bodies.

Gemäß 1a befinden sich in einem ausschnittweise dargestellten Probengefäß neben Zellen 2a, 2b und zu transferierenden Molekülen 3 sogenannte akustische Hindernisse in Form von Streukörpern 1. Alle Teilmengen 1 bis 3 schweben in einer Nähr- bzw. Suspensionslösung 4.According to 1a are located in a sample container shown in sections next to cells 2a . 2 B and molecules to be transferred 3 so-called acoustic obstacles in the form of scattering bodies 1 , All subsets 1 to 3 float in a nutrient or suspension solution 4 ,

Wie weiterhin aus der 1 hervorgeht, sind die erfindungsgemäßen Streukörper 1 und die Zellen 2a, 2b größen- und zahlenmäßig in etwa gleich bemessen; erfindungsgemäß unterscheiden sie sich jedoch deutlich hinsichtlich ihrer Schalldichte, die vorteilhafterweise bei den Streukörpern 1 wesentlich größer ist als bei den Zellen 2a, 2b und der Flüssigkeit. Des weiteren ist in der 1a zeichnerisch angedeutet, dass das vorgenannte Gemisch aus den Teilmengen 1 bis 4 mit akustischen Pulsen 5, beispielsweise mit Stoßwellen beaufschlagbar ist. Die erfindungsgemäße Folge einer Pulsbeaufschlagung ist aus der 1b erkennbar, die eine starke Vergrößerung des Ausschnitts 7 aus der 1a darstellt.As continues from the 1 shows are the scattering bodies according to the invention 1 and the cells 2a . 2 B Size and number are approximately equal; According to the invention, however, they differ significantly in terms of their sound density, which advantageously in the scattering bodies 1 is much larger than the cells 2a . 2 B and the liquid. Furthermore, in the 1a graphically indicated that the aforementioned mixture of the subsets 1 to 4 with acoustic pulses 5 , For example, can be acted upon by shock waves. The sequence according to the invention of pulsing is known from the 1b recognizable, which is a strong enlargement of the detail 7 from the 1a represents.

Gemäß 1b befindet sich eine noch nicht transfizierte Zelle 2a kurz vor dem Auftreffen auf einen Streukörper 1, der durch seine schnellere Bewegung in seiner Umgebung Scherspannungen im Bereich der Stromlinien 6 erzeugt. Bei den gestrichelten Linien 6a handelt es sich um Linien gleicher Scherspannungen.According to 1b there is a not yet transfected cell 2a just before hitting a scattering body 1 Due to its faster movement in its environment, shear stresses in the area of the streamlines 6 generated. At the dashed lines 6a these are lines of equal shear stress.

Sobald die Zellen 2a in den Bereich der Stromlinien 6 gelangen, erfahren sie eine Deformation durch die dort vorherrschenden Scherspannungen, während der sie ihre Membran zur Aufnahme der Moleküle 3 kurzzeitig öffnen. Nach Verlassen des Stromlinienbereiches 6 nehmen die Zellen 2b im wesentlichen wieder ihre ursprüngliche Form an; in diesem Zustand befinden sich dann allerdings in ihrem Inneren die transferierten Moleküle 3.Once the cells 2a in the area of streamlines 6 they experience a deformation due to the shear stresses prevailing there, while they use their membrane to take up the molecules 3 open briefly. After leaving the streamline area 6 take the cells 2 B essentially their original shape; in this state, however, the transferred molecules are inside 3 ,

Die 2 zeigt in einem Diagramm „Verformung V über der Zeit t" die Ortskurve 9 eines Streukörpers 1 im Vergleich zu der Ortskurve 8 eines Partikels 3 der Suspension 4.The 2 shows in a diagram "Verfor tion V over time t "the locus 9 a scattering body 1 compared to the locus 8th of a particle 3 the suspension 4 ,

Gemäß dem Probengefäß 10a in 3 sind die Streukörper 1 vorteilhafterweise kugelförmig ausgebildet, damit sie durch ihre glatte Oberfläche keine Verletzungsgefahr für die Zellen 2 darstellen.According to the sample vessel 10a in 3 are the scatterers 1 advantageously spherical designed so that their smooth surface no risk of injury to the cells 2 represent.

Das Probengefäß 10b zeigt im Rahmen der Erfindung Streukörper in Form von Streunetzen 11 innerhalb der Suspensionslösung 4.The sample vessel 10b shows in the context of the invention scattering bodies in the form of stray nets 11 within the suspension solution 4 ,

Ein weiteres Beispiel für mögliche Streukörperausbildungen zeigt das Probengefäß 10c in 3, in welchem sich Sreuwolle bzw. Streugewebe 12 als akustisches Hindernis befindet. Die charakteristischen Durchmesser 13 der Streukörper 1, 11, 12 liegen in der Größenordnung der zu transfizierenden Zellen, das heißt im Bereich von 5 bis 30 μm.Another example of possible Streukörperausbildungen shows the sample vessel 10c in 3 , in which there are cotton or scattered tissue 12 as an acoustic obstacle. The characteristic diameter 13 the scattering body 1 . 11 . 12 are in the order of the cells to be transfected, that is in the range of 5 to 30 microns.

Streukörper in Form von Netzen 11 und Geweben 12 haben den Vorteil, dass sie nach der Transfektion einfach entfernt werden können, während Streukörper in Partikelform zum Entfernen zentrifugiert oder sedimentiert werden müssen.Scattering bodies in the form of nets 11 and tissues 12 have the advantage that they can be easily removed after transfection, while particles in the form of particles must be centrifuged or sedimented for removal.

11
Streukörper (akustische Hindernisse)Scattering body (acoustic obstacles)
2a2a
Zellen vor ihrem Transfercell before her transfer
2b2 B
Zellen nach ihrem Transfercell after her transfer
33
Zu transfizierende MoleküleTo transfecting molecules
44
Nähr- bzw. SuspensionslösungNutrient or suspension solution
55
Akustischer Puls (hier Stosswelle)audible Pulse (here shockwave)
66
Stromlinienstreamlines
77
Ausschnittvergrößerung aus 1a Cutout enlargement 1a
88th
Ortskurve eines Partikels 3 der Suspension 4 Locus of a particle 3 the suspension 4
99
Ortskurve des Streukörpers 1, 11, 12 Locus of the scatterer 1 . 11 . 12
10a bis 10c10a to 10c
Probengefäßesample containers
1111
Streukörper in Form von NetzenScattering body in Form of networks
1212
Streukörper in Form von Wolle bzw. GewebeScattering body in Shape of wool or fabric
1313
Charakteristischer Durchmesser der Streucharacteristically Diameter of the litter
körperbody

Claims (9)

Verfahren zum Transferieren von Molekülen, insbesondere DNA oder Oligos, in Zellen von Menschen, Tieren oder Pflanzen, mit der Maßgabe, dass es sich nicht um humane embryonale Stammzellen handelt, mittels durch akustische Energie erzeugten Scherkräften, dadurch gekennzeichnet, dass die Scherkräfte durch Einwirkung der akustischen Wellen auf in dem gesamten Probenvolumen verteilte Streukörper (1, 11, 12) erzeugt werden.Method for transferring molecules, in particular DNA or oligos, into cells of humans, animals or plants, with the proviso that they are not human embryonic stem cells, by means of shear forces generated by acoustic energy, characterized in that the shear forces are generated by the action of the acoustic waves on scattering bodies distributed throughout the sample volume ( 1 . 11 . 12 ) be generated. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sich die Schalldichte der Streukörper (1, 11, 12) von der Schalldichte der Trägerflüssigkeit (4) mit den darin enthaltenen Zellen (2a, 2b) und den zu transferierenden Agenzien (3) unterscheidet.A method according to claim 1, characterized in that the sound density of the scattering body ( 1 . 11 . 12 ) of the sound density of the carrier liquid ( 4 ) with the cells contained therein ( 2a . 2 B ) and the agents to be transferred ( 3 ) is different. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Streukörper (1, 11, 12) aus inertem Material mit hoher Schalldichte, vorzugsweise aus Quarz, aus Keramik und/oder aus Edelmetallen bestehen.Method according to claim 1 and 2, characterized in that the scattering bodies ( 1 . 11 . 12 ) consist of inert material with high sound density, preferably made of quartz, ceramic and / or precious metals. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Größe der Streukörper (1) der Größe der Zellen (2a, 2b) entspricht.Process according to claims 1 to 3, characterized in that the size of the scattering body ( 1 ) the size of the cells ( 2a . 2 B ) corresponds. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Streukörper (1) kugelförmig sind und in Suspension gehalten werden.Process according to claims 1 to 4, characterized in that the scattering bodies ( 1 ) are spherical and are kept in suspension. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Streukörper in Form von Fasern, Netzen (11), Wolle, Fäden und/oder Gewebe (12) und dergleichen in das Probenvolumen für die Zeit des Molekültransfers eingebracht werden.Process according to claims 1 to 4, characterized in that the scattering bodies in the form of fibers, nets ( 11 ), Wool, threads and / or fabric ( 12 ) and the like are introduced into the sample volume for the time of molecule transfer. Verfahren nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Anzahl der Streukörper (1) pro Volumeneinheit der Zahl der zu transferierenden Zellen (2a, 2b) entspricht.Method according to at least one of claims 1 to 6, characterized in that the number of scattering bodies ( 1 ) per unit volume of the number of cells to be transferred ( 2a . 2 B ) corresponds. Verfahren nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Streukörper (1, 11, 12) durch geeignete Vorbehandlungen hydrophil sind.Method according to at least one of claims 1 to 7, characterized in that the scattering body ( 1 . 11 . 12 ) are hydrophilic by suitable pretreatments. Verfahren nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Streukörper (1, 11, 12) durch geeignete Vorbehandlungen die zu transferierenden Moleküle (3) an sich binden.Method according to at least one of claims 1 to 8, characterized in that the scattering body ( 1 . 11 . 12 ) by suitable pretreatments the molecules to be transferred ( 3 ) bind to itself.
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