DE102009015070A1

DE102009015070A1 - Aminocabonylamino-substituierte Anilino-Pyrimidinderivate als Tyk-Inhibitoren, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel

Info

Publication number: DE102009015070A1
Application number: DE102009015070A
Authority: DE
Inventors: Bernd Dr. Buchmann; Knut Dr. Eis; Ulrich Dr. Bothe; Arne Dr. Bonin; Ulf Dr. Bömer
Original assignee: Bayer Schering Pharma AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2009-03-30
Filing date: 2009-03-30
Publication date: 2010-10-14

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ausgewählte Aminocarbonylamino-substituierte Anilino-Pyrimidinderivate der Formel (I), deren Verfahren zur Herstellung sowie deren Verwendung als Medikament zur Behandlung verschiedener Erkrankungen. $F1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ausgewählte Aminocarbonylamino-subsituierte Anilino-Pyrimidinderivate, deren Verfahren zur Herstellung sowie deren Verwendung als Medikament zur Behandlung verschiedener Erkrankungen.
Pyrimidine und Analoga sind bereits als Wirkstoffe beschrieben wie beispielsweise die 2-Anilino-Pyrimidine als Fungizide ( DE 4029650 ) oder substituierte Pyrimidinderivate zur Behandlung von neurologischen oder neurodegenerativen Erkrankungen ( WO 99/19305 ). Als CDK-Inhibitoren werden unterschiedlichste Pyrimidinderivate beschrieben, beispielsweise 2-Amino-4-substituierte Pyrimidine ( WO 01/14375 ), Purine ( WO 99/02162 ), 5-Cyano-Pyrimidine ( WO 02/04429 ), Anilinopyrimidine ( WO 00/12486 ) und 2-Hydroxy-3-N,N-dimethylaminopropoxy-Pyrimidine ( WO 00/39101 ).
Insbesondere wurden in WO 02/096888 und WO 03/076437 Pyrimidinderivate offenbart, die inhibitorische Wirkungen bezüglich CDKs aufweisen.
WO 2005/037800 offenbart offene sulfoximinsubsituierte Anilino-Pyrimidinderivate als Inhibitoren der Zyklin-abhängigen Kinasen.
WO 2004/048343 offenbart ebenfalls Anilino-Pyrimidinderivate, die unter anderem auch Alkylcarbonlyamino- oder Alkylaminocarbonylamino-Substituenten aufweisen können. Die Strukturen der WO 2004/048383 sind allerdings konzipiert als Inhibitoren der onkologischen Kinasen CHK, AKT, Pdk und anderen.
Den strukturell nächstliegenden Stand der Technik zu den Strukturen der vorliegenden Erfindung bilden spezifisch offenbarte Strukturen der WO2004/048343 , insbesondere die Beispiele 334, 422 und 549.
Für zahlreiche chronisch entzündliche Erkrankungen, wie z. B. Rheumatoider Arthritis, Morbus Crohn, Asthma und Multipler Sklerose, ist ein überreagierendes Immunsystem mit verantwortlich. Durch ein vermehrtes Freisetzen von proinflammatorischen Zytokinen kommt es zu Schädigungen von körpereigenen Gewebestrukturen. Hierbei ist das Zusammenspiel von angeborenem und adaptiven Immunsystem von zentraler Bedeutung (Akira et al., 2001). Eine Modulation des Immunsystems mit Substanzen, die mit der Aktivierung von Zellen des angeborenen und/oder des adaptiven Immunsystem interferieren, wirkt anti-inflammatorisch und kann damit den pathologischen Phänotyp in den oben exemplarisch genannten Erkrankungen abmildern.
Der JAK-STAT-Signalweg stellt für eukaryotische Zellen eine Möglichkeit dar, die Information extrazellulärer Signalpeptide, z. B. inflammatorischer Zytokine, von der Zellmembran, intrazellulär zu den Promotoren der Zielgene im Zellkern weiterzuleiten (Schindler et al., 1995; Shuai et al., 2002). Aus der Gruppe der Zytokine sind neben Interferonen auch proinflammatorische Interleukine (IL-12, IL-23) (Trinchieri et al., 2003), sowie aus der Gruppe der Hormone, Erythropoietin, Prolaktin und Wachstumshormon typische Liganden für die beteiligten Zytokinrezeptoren.
Im Allgemeinen werden extrazelluläre Signalpeptide wie Wachstumsfaktoren auf Zielzellen von spezifischen transmembranen Rezeptoren mit intrinsischer Tyrosinkinaseaktivität gebunden. Im Gegensatz dazu besitzen die meisten Zytokinrezeptoren des JAK-STAT Weges keine eigene Tyrosinkinaseaktivität. Anstelle dessen wird diese von rezeptorassoziierten zytoplasmatischen Proteinen der Januskinase (JAK). Familie bereitgestellt (Darnell et al., 1994). JAKs sind evolutionär konserviert, wobei vier verschiedene Varianten in Säugetierzellen zu finden sind (JAK1, JAK2, JAK3 und TYK2). JAKs binden an spezifische Stellen intrazellulärer Rezeptordomänen und katalysieren ihre gegenseitige ligandeninduzierte Tyrosinphosphorylierung, was ihre Kinaseaktivität erhöht. Anschließend kommt es zur Phosphorylierung von Tyrosinen des Rezeptors (O'Shea et al., 1997).
Die neu entstandenen Phosphotyrosine am Rezeptor sind für die Weiterleitung des Signals entscheidend. Sie stellen Bindungsstellen für Src-homology 2 (SH2) Domänen dar, die Bestandteil aller Signaltransduktoren und Aktivatoren der Transkription (STATs) sind. Nach Bindung der STATs über ihre SH2-Domäne an den phosphorylierten Rezeptor werden auch sie von den JAKs an einem Tyrosin (z. B. Y701 im Fall von STAT1) phosphoryliert, so dass auch auf ihrer Oberfläche Bindungsstellen für SH2-Domänen entstehen. Nach Dissoziation vom Rezeptor werden die Phosphotyrosine zweier STATs reziprok erkannt, wobei die SH2-Domäne eines STAT jeweils das Phosphotyrosin des anderen bindet und ein aktiviertes Dimer entsteht. In Säugetieren gehören ihrer Familie sieben Mitglieder an (STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5a, STAT5b und STAT6). Bei Aktivierung des Rezeptors kommt es abhängig von Rezeptor und Ligand zur Homo- oder Heterodimerisierung bestimmter STATs (Kissileva et al., 2002). Ebenso sind liganden- und rezeptorspezifische JAKs beteiligt. So führt Interferon γ unter Beteiligung von JAK1 und JAK2 zur Homodimerisierung von STAT1 und Interferon α/β unter Beteiligung von JAK1 und TYK2 zur Heterodimerisierung von STAT1 und STAT2.
Das von den aktivierten Dimeren exponierte nukleäre Lokalisationssignal (NLS) führt unmittelbar zu deren Translokation in den Kern, wo sie ihrer Aufgabe als Transkriptionsfaktoren nachgehen. Der JAK-STAT Signalweg stellt demnach eine direkte Route in den Kern dar und kommt ohne second messenger aus. Für die Erkennung spezifischer Promotorsequenzen ist die DNA-Bindungsdomäne (DBD) verantwortlich. Nach Bindung des STAT-Dimers am Promoter steigt dessen Transkriptionsrate stark an, was die Fähigkeit der STATs belegt, weitere Coaktivatoren zu rekrutieren, die Chromatinmodifikationen und die Kommunikation mit generellen Transkriptionsfaktoren vermitteln (Rawlings et al., 2004).
Ausgehend von diesem Stand der Technik besteht die Aufgabe der vorliegenden Erfindung darin, Verbindungen bereitzustellen, die die onkologische Kinase Jak2 mindestens um den Faktor 20 (Verhältnis der IC50 Werte Jak2/Tyk2 > 20) schwächer inhibieren als Tyk 2, das in entzündlichen Prozessen involviert ist und/oder dessen Inhibition eine Immunmodulation bewirkt. Darüber hinaus sollen möglichst auch andere onkologische Kinasen wie CDK, CHK, AKT oder PdK deutlich schwächer inhibiert werden als Tyk2.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht daher darin, Strukturen bereitzustellen, die Tyk2 potent inhibieren und eine Selektivität gegen Jak2 aufweisen. Andere onkologische Kinasen wie CDK oder KDR sollen ebenfalls bei höheren Konzentrationen inhibiert werden als Tyk2.
Es wurde nun gefunden, dass eine spezielle Untergruppe von Verbindungen der WO 2004/048343 eben onkologische Kinasen wie CDK, KDR oder Jak2 erst bei weitaus höheren Konzentrationen inhibieren als Tyk2 und somit die erfindungsgemäßen Verbindungen eine hohe Selektivät gegen diese Kinasen aufweisen.
Die Aufgabe wird gelöst durch substituierte Pyrimidine der allgemeinen Formel (I),
in der
R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für
ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder Phenylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit
Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen oder einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, der

(i) gegebenenfalls zusätzlich ein oder zwei weitere Heteroatome enthält und/oder
(ii) gegebenenfalls durch ein oder mehrere -(CO)- -Gruppen unterbrochen ist, und/oder
(iii) gegebenenfalls Doppelbindungen beinhaltet und/oder
(iv) gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₆-Alkylrest, -NR^1aR^1b oder der Gruppe -NH(CO)-R⁸ wobei R⁸ für einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder einen Phenylrest steht, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem C₁-C₆-Alkylthiorest, einem C₃-C₆-Cycloalkylrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest oder einem Phenylrest, und

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Der Erfindung liegen folgende Definitionen zu Grunde:
C_n-Alkyl:

Monovalenter, geradkettiger oder verzweigter, gesättigter Kohlenwasserstoffrest mit n Kohlenstoffatomen.

Ein C₂-C₆ Alkylrest umfasst unter anderem beispielsweise:
Ethyl-, Propyl-, Butyl-, Pentyl-, Hexyl-, iso-Propyl-, iso-Butyl-, sec-Butyl, tert-Butyl-, iso-Pentyl-, 2-Methylbutyl-, 1-Methylbutyl-, 1-Ethylpropyl-, 1,2-Dimethylpropyl, neo-Pentyl-, 1,1-Dimethylpropyl-, 4-Methylpentyl-, 3-Methylpentyl-, 2-Methylpentyl-, 1-Methylpentyl-, 2-Ethylbutyl-, 1-Ethylbutyl-, 3,3-Dimethylbutyl-, 2,2-Dimethylbutyl-, 1,1-Dimethylbutyl-, 2,3-Dimethylbutyl-, 1,3-Dimethylbutyl- 1,2-Dimethylbutyl-.
C_n-Alkenyl:

monovalenter, geradkettiger oder verzweigter Kohlenwasserstoffrest mit n Kohlenstoffatomen und mindestens einer Doppelbindung.

Ein C₂-C₆ Alkenylrest umfasst unter anderem beispielsweise:
Vinyl-, Allyl-, (E)-2-Methylvinyl-, (Z)-2-Methylvinyl-, Homoallyl-, (E)-But-2-enyl-, (Z)-But-2-enyl-, (E)-But-1-enyl-, (Z)-But-1-enyl-, Pent-4-enyl-, (E)-Pent-3-enyl-, (Z)-Pent-3-enyl-, (E)-Pent-2-enyl-, (Z)-Pent-2-enyl-, (E)-Pent-1-enyl-, (Z)-Pent-1-enyl-, Hex-5-enyl-, (E)-Hex-4-enyl-, (Z)-Hex-4-enyl-, (E)-Hex-3-enyl-, (Z)-Hex-3-enyl-, (E)-Hex-2-enyl-, (Z)-Hex-2-enyl-, (E)-Hex-1-enyl-, (Z)-Hex-1-enyl-, Isopropenyl-, 2-Methylprop-2-enyl-, 1-Methylprop-2-enyl-, 2-Methylprop-1-enyl-, (E)-1-Methylprop-1-enyl-, (Z)-1-Methylprop-1-enyl-, 3-Methylbut-3-enyl-, 2-Methylbut-3-enyl-, 1-Methylbut-3-enyl-, 3-Methylbut-2-enyl-, (E)-2-Methylbut-2-enyl-, (Z)-2-Methylbut-2-enyl-, (E)-1-Methylbut-2-enyl-, (Z)-1-Methylbut-2-enyl-, (E)-3-Methylbut-1-enyl-, (Z)-3-Methylbut-1-enyl-, (E)-2-Methylbut-1-enyl-, (Z)-2-Methylbut-1-enyl-, (E)-1-Methylbut-1-enyl-, (Z)-1-Methylbut-1-enyl-, 1,1-Dimelhylprop-2-enyl-, 1-Ethylprop-1-enyl-, 1-Propylvinyl-, 1-Isopropylvinyl-, 4-Methylpent-4-enyl-, 3-Methylpent-4-enyl-, 2-Methylpent-4-enyl-, 1-Methylpent-4-enyl-, 4-Methylpent-3-enyl-, (E)-3-Methylpent-3-enyl-, (Z)-3-Methylpent-3-enyl-, (E)-2-Methylpent-3-enyl-, (Z)-2-Methylpent-3-enyl-, (E)-1-Methylpent-3-enyl-, (Z)-1-Methylpent-3-enyl-, (E)-4-Methylpent-2-enyl-, (Z)-4-Methylpent-2-enyl-, (E)-3-Methylpent-2-enyl-, (Z)-3-Methylpent-2-enyl-, (E)-2-Methylpent-2-enyl-, (Z)-2-Methylpent-2-enyl-, (E)-1-Methylpent-2-enyl-, (Z)-1-Methylpent-2-enyl-, (E)-4-Methylpent-1-enyl-, (Z)-4-Methylpent-1-enyl-, (E)-3-Methylpent-1-enyl-, (Z)-3-Methylpent-1-enyl-, (E)-2-Methylpent-1-enyl-, (Z)-2-Methylpent-1-enyl-, (E)-1-Methylpent-1-enyl-, (Z)-1-Methylpent-1-enyl-, 3-Ethylbut-3-enyl-, 2-Ethylbut-3-enyl-, 1-Ethylbut-3-enyl-, (E)-3-Ethylbut-2-enyl-, (Z)-3-Ethylbut-2-enyl-, (E)-2-Ethylbut-2-enyl-, (Z)-2-Ethylbut-2-enyl-, (E)-1-Ethylbut-2-enyl-, (Z)-1-Ethylbut-2-enyl-, (E)-3-Ethylbut-1-enyl-, (Z)-3-Ethylbut-1-enyl, 2-Ethylbut-1-enyl-, (E)-1-Ethylbut-1-enyl-, (Z)-1-Ethylbut-1-enyl-, 2-Propylprop-2-enyl-, 1-Propylprop-2-enyl-, 2-Isopropylprop-2-enyl-, 1-Isopropylprop-2-enyl-, (E)-2-Propylprop-1-enyl-, (Z)-2-Propylprop-1-enyl-, (E)-1-Propylprop-1-enyl-, (Z)-1-Propylprop-1-enyl-, (E)-2-Isopropylprop-1-enyl-, (Z)-2-Isopropylprop-1-enyl-, (E)-1-Isopropylprop-1-enyl-, (Z)-1-Isopropylprop-1-enyl-, (E)-3,3-Dimethylprop-1-enyl-, (Z)-3,3-Dimethylprop-1-enyl-, 1-(1,1-Dimethylethyl)ethenyl.
C_n-Alkoxy:

Geradkettiger oder verzweigter C_n-Alkyletherrest der Formel -OR mit R = Alkyl.

C_n-Alkylthio

Geradkettiger oder verzweigter C_n-Alkylthioetherrest der Formel -S-R mit R = Alkyl.

C_n-Cycloalkyl:

Monovalenter, cyclischer Kohlenwasserstoffring mit n Kohlenstoffatomen.

C₃-C₆-Cyclolalkylring umfasst:
Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
Bevorzugt ist ein Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cylopentyl- oder ein Cyclohexylring.
Heteroatome
Unter Heteroatomen sind Sauerstoff-, Stickstoff- oder Schwefel-Atome zu verstehen.
Heteroaryl
Heteroaryl ist ein monovalentes, aromatisches Ringsystem mit mindestens einem von einem Kohlenstoff verschiedenen Heteroatom. Als Heteroatome können Stickstoffatome, Sauerstoffatome und/oder Schwefelatome vorkommen. Die Bindungsvalenz kann an einem beliebigen aromatischen Kohlenstoffatom oder an einem Stickstoffatom sein.
Wenn nicht anders angegeben umfasst Heteroaryl nur monocyclische und bicyclische Ringe.
Ein monocyclischer Heteroarylring gemäß der vorliegenden Erfindung hat 5 oder 6 Ringatome.
Heteroarylringe mit 5 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Thienyl, Thiazolyl, Furanyl, Pyrrolyl, Oxazolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Oxadiazolyl, Triazolyl, Tetrazolyl- und Thiadiazolyl.
Heteroarylringe mit 6 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Pyridyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl und Triazinyl.
Ein bicyclischer Heteroarylring gemäß der vorliegenden Erfindung hat 9 oder 10 Ringatome.
Heteroarylringe mit 9 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Phthalidyl-, Thiophthalidyl-, Indolyl-, Isoindolyl-, Indazolyl-, Benzothiazolyl-, Indolonyl-, Isoindolonyl-, Benzofuranyl, Benzothienyl, Benzimidazolyl, Benzoxazolyl, Azocinyl, indolizinyl, Purinyl.
Heteroarylringe mit 10 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Isoquinolinyl-, Quinolinyl-, Benzoxazinonyl-, Phthalazinonyl, Quinolonyl-, Isoquinolonyl-, Quinazolinyl-, Quinoxalinyl-, Cinnolinyl-, Phthalazinyl-, 1,7- or 1,8-Naphthyridinyl-, Quinolinyl-, Isoquinolinyl-, Quinazolinyl- oder Quinoxalinyl-Monocyclische Heteroarylringe mit 5 oder 6 Ringatomen sind bevorzugt.
Heterocyclyl
Heterocyclyl im Sinne der Erfindung ist ein vollständig hydriertes Heteroaryl (vollständig hydriertes Heteroaryl = gesättigtes Heterocyclyl) d. h. ein nicht aromatisches Ringsystem mit mindestens einem von einem Kohlenstoff verschiedenen Heteroatom. Als Heteroatome können Stickstoffatome, Sauerstoffatome und/oder Schwefelatome vorkommen. Die Bindungsvalenz kann an einem beliebigen Kohlenstoffatom oder an einem Stickstoffatom sein.
Heterocycylring mit 3 Ringatomen umfasst beispielsweise:
Aziridinyl.
Heterocycylring mit 4 Ringatomen umfasst beispielsweise:
Azetidinyl, Oxetanyl.
Heterocycylringe mit 5 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Pyrrolidinyl, Imidazolidinyl, Pyrazolidinyl und Tetrahydrofuranyl.
Heterocyclylringe mit 6 Ringatomen umfassen beispielsweise die Ringe:
Piperidinyl, Piperazinyl, Morpholinyl, Tetrahydropyranyl und Thiomorpholinyl Wenn nicht anders angeben bedeutet Heterocyclyl ein Heterocyclylrest mit 3 bis 6 Ringatomen.
Halogen
Die Bezeichnung Halogen umfasst Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Eine bevorzugte Untergruppe bilden Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der
R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für
ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₅-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen monocyclischen Heteroarylrest oder Phenylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit
Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen oder einem monocyclischen Heteroarylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, der

(i) gegebenenfalls zusätzlich ein weiteres Heteroatom enthält und/oder
(ii) gegebenenfalls durch eine -(CO)- -Gruppe unterbrochen ist, und/oder
(iii) gegebenenfalls eine Doppelbindung beinhaltet und/oder
(iv) gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₆-Alkylrest und/oder -NH₂, und

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Eine besonders bevorzugte Untergruppe bilden die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der
R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für
ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₅-Alkylrest, C₂-C₅-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 4 bis 6 Ringatomen, der gegebenenfalls ein Sauerstoff- oder Schwefelatom als zusätzliches weiteres Heteroatome enthält und/oder gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₃-Alkylrest oder -NH₂, und
R² für einen mit Hydroxy ein- oder mehrfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest steht, und
R³ für Wasserstoff oder, Fluor steht, und
R⁴ für Wasserstoff oder Fluor steht, und
R⁵ und R⁶ für Wasserstoff stehen,
sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Eine außerordentlich bevorzugte Untergruppe bilden die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der
R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für
ein Wasserstoffatom oder einen C₁-C₄-Alkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Azetidinyl, Thiomorpholinyl, Morpholinyl oder Piperidinylrest, und
R² für einen mit Hydroxy einfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest steht, und
R³ für Wasserstoff oder Fluor steht, und
R⁴ für Wasserstoff oder Fluor steht, und
R⁵ und R⁶ für Wasserstoff stehen,
sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
In der allgemeinen Formel (I) können R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für: ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder Phenylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit
Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen oder einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, der

(i) gegebenenfalls zusätzlich ein oder zwei weitere Heteroatome enthält und/oder
(ii) gegebenenfalls durch ein oder mehrere -(CO)- -Gruppen unterbrochen ist, und/oder
(iii) gegebenenfalls Doppelbindungen beinhaltet und/oder
(iv) gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, -NR^1aR^1b oder der Gruppe -NH(CO)-R⁸ wobei R⁸ für einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder einen Phenylrest steht, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem C₁-C₆-Alkylthiorest, einem C₃-C₆-Cycloalkylrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest oder einem Phenylrest.

Bevorzugt stehen R^1a und R^1b unabhängig voneinander für:
ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen monocyclischen Heteroarylrest oder Phenylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit
Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen oder einem monocyclischen Heteroarylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, der

(i) gegebenenfalls zusätzlich ein weiteres Heteroatom enthält und/oder
(ii) gegebenenfalls durch eine -(CO)- -Gruppe unterbrochen ist, und/oder
(iii) gegebenenfalls eine Doppelbindung beinhaltet und/oder
(iv) gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₆-Alkylrest und/oder -NH₂

Besonders bevorzugt stehen R^1a und R^1b unabhängig voneinander für
ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₅-Alkylrest, C₂-C₅-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 4 bis 6 Ringatomen, der gegebenenfalls ein Sauerstoff- oder Schwefelatom als zusätzliches weiteres Heteroatome enthält und/oder gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₃-Alkylrest oder -NH₂
Außerordentlich bevorzugt stehen R^1a und R^1b unabhängig voneinander für:
ein Wasserstoffatom oder einen C₁-C₄-Alkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest,
oder
R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Azetidinyl, Thiomorpholinyl, Morpholinyl oder Piperidinylrest.
In der allgemeinen Formel (I) kann R² stehen für
einen mit Hydroxy ein- oder mehrfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest.
Bevorzugt steht R² für einen mit Hydroxy einfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest.
Besonders bevorzugt steht R² auch für einen mit Hydroxy ein- oder mehrfach substituierten C₃-C₆-Alkylrest.
Außerordentlich bevorzugt steht R² für einen mit Hydroxy einfach substituierten C₃-C₆-Alkylrest.
In der allgemeinen Formel (I) kann R³ stehen für Wasserstoff oder Fluor. Bevorzugt steht R³ für Fluor.
In der allgemeinen Formel (I) können R⁴ und R⁵ unabhängig voneinander stehen für: Wasserstoff, Halogen, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe.
Bevorzugt stehen R⁴ und R⁵ unabhängig voneinander für Wasserstoff, Fluor, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe.
In der allgemeinen Formel (I) kann R⁶ stehen für Wasserstoff oder Halogen.
Bevorzugt steht R⁶ für Wasserstoff oder Fluor.
Besonders bevorzugt steht R⁴ für Wasserstoff oder Fluor und R⁵ und R⁶ für Wasserstoff.
Ebenfalls als von der vorliegenden Erfindung als erfasst anzusehen sind alle Verbindungen, die sich ergeben durch jede mögliche Kombination der oben genannten möglichen, bevorzugten und besonders bevorzugten Bedeutungen der Substituenten.
Besondere Ausführungsformen der Erfindung bestehen darüber hinaus in Verbindungen, die sich durch Kombination der direkt in den Beispielen offenbarten Bedeutungen für die Substituenten ergeben.
Ebenfalls als von der vorliegenden Erfindung als erfasst anzusehen sind die Salze der Verbindungen.
Die Formulierung der erfindungsgemäßen Verbindungen zu pharmazeutischen Präparaten erfolgt in an sich bekannter Weise, indem man den oder die Wirkstoffe mit den in der Galenik gebräuchlichen Hilfsstoffen in die gewünschte Applikationsform überführt.
Als Hilfsstoffe können dabei beispielsweise Trägersubstanzen, Füllstoffe, Sprengmittel, Bindemittel, Feuchthaltemittel, Gleitmittel, Ab- und Adsorptionsmittel, Verdünnungsmittel, Lösungsmittel, Cosolventien, Emulgatoren, Lösungsvermittler, Geschmackskorrigentien, Färbemittel, Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks oder Puffer zum Einsatz kommen. Dabei ist auf Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed. Mack Publishing Company, East Pennsylvania (1980) hinzuweisen.
Die pharmazeutischen Formulierungen können
in fester Form, zum Beispiel als Tabletten, Dragees, Pillen, Suppositorien, Kapseln, transdermale Systeme oder
in halbfester Form, zum Beispiel als Salben, Cremes, Gele, Suppositiorien, Emulsionen oder
in flüssiger Form, zum Beispiel als Lösungen, Tinkturen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen.
Hilfsstoffe im Sinne der Erfindung können beispielsweise Salze, Saccharide (Mono-, Di-, Tri-, Oligo-, und/oder Polysaccharide), Proteine, Aminosäuren, Peptide, Fette, Wachse, Öle, Kohlenwasserstoffe sowie deren Derivate sein, wobei die Hilfsstoffe natürlichen Ursprungs sein können oder synthetisch bzw. partial synthetisch gewonnen werden können.
Für die orale oder perorale Applikation kommen insbesondere Tabletten, Dragees, Kapseln, Pillen, Pulver, Granulate, Pastillen, Suspensionen, Emulsionen oder Lösungen in Frage.
Für die parenterale Applikation kommen insbesondere Suspensionen, Emulsionen und vor allem Lösungen in Frage.
Aufgrund ihrer anti-entzündlichen und zusätzlichen immunsuppressiven Wirkung können die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) als Medikamente zur Behandlung oder Prophylaxe folgender Krankheitszustände bei Säugetieren und Menschen, für die lokale und systemische Applikation Verwendung finden:

(i) Lungenerkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – Chronisch obstruktive Lungenerkrankungen jeglicher Genese, vor allem Asthma bronchiale – Bronchitis unterschiedlicher Genese – Adult respiratory distress syndrome (ARDS), akutes Atemnotssyndrom – Bronchiektasen – Alle Formen der restriktiven Lungenerkrankungen, vor allem allergische Alveolitis, – Lungenödem, insbesondere allergisches – Sarkoidosen und Granulomatosen, insbesondere Morbus Boeck
(ii) Rheumatische Erkrankungen/Autoimmunerkrankungen/Gelenkerkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – Alle Formen rheumatischer Erkrankungen, insbesondere rheumatoide Arthritis, akutes rheumatisches Fieber, Polymyalgia rheumatica, Morbus Behcet – Reaktive Arthritis – Entzündliche Weichteilerkrankungen sonstiger Genese – Arthritische Symtome bei degenerativen Gelenkerkrankungen (Arthrosen) – Vitiligo – Kollagenosen jeglicher Genese, z. B. systemischer Lupus erythematodes, Sklerodermie, Polymyositis, Dermatomyositis-Sjögren-Syndrom, Still-Syndrom, Felty-Syndrom – Sarkoidosen und Granulomatosen – Weichteilrheumatismus
(iii) Allergien oder pseudoallergische Erkrankungen, die mit entzündlichen, und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – alle Formen allergischer Reaktionen, z. B. Quincke Ödem, Heuschnupfen, Insektenstich, allergische Reaktionen auf Arzneimittel, Blutderivate, Kontrastmittel etc., Anaphylaktischer Schock, Urtikaria, allergische und irritative Kontakdermatitis, allergische Gefäßerkrankungen – Vasculitis allergica
(iv) Gefäßentzündungen (Vaskulitiden) – Panarteriitis nodosa, Arteriitis temporalis, Erythema nodosum – Polyarteritis nodosa – Wegner Granulomatose – Riesenzellarteriitis
(v) Dermatologische Erkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – Atopische Dermatitis (vor allem bei Kindern) – Sämtliche Ekzemformen wie z. B. atopisches Ekzem (v. a. bei Kindern) – Exantheme jedweder Genese oder Dermatosen – Psoriasis und Parapsoriasis-Formenkreis – Pityriasis rubra pilaris – Erythematöse Erkrankungen, ausgelöst durch unterschiedlichen Noxen, z. B. Strahlen, Chemikalien, Verbrennungen etc. – Bullöse Dermatosen wie z. B. autoimmuner Pemphigus vulgaris, bullöses Pemphigoid – Erkrankungen des lichenoiden Formenkreises, – Pruritus (z. B. allergischer Genese) – Rosacea-Formenkreis – Erythema exsudativum multiforme Manifestation von Gefäßerkrankungen – Haarausfall wie Alopecia areata – Kutane Lymphome
(vi) Nierenerkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – Nephrotisches Syndrom – Alle Nephritiden, z. B. Glomerulonephritis
(vii) Lebererkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – akute Hepatitis unterschiedlicher Genese – chronisch aggressive und/oder chronisch intermittierende Hepatitis
(viii) Gastrointestinale Erkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – regionale Enteritis (Morbus Crohn) – Colitis Ulcerosa – Gastroenteritiden anderer Genese, z. B. einheimische Sprue
(ix) Augenerkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – allergische Keratitis, Uveitis, Iritis, – Konjunktivitis – Blepharitis – Neuritis nervi optici – Chorioiditis – Ophthalmia sympathica
(x) Erkrankungen des Hals-Nasen-Ohren-Bereiches, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – allergische Rhinitis, Heuschnupfen – Otitis externa, z. B. bedingt durch Kontaktekzem
(xi) Neurologische Erkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen: – Hirnödem, vor allem allergisches Hirnödem – Multiple Sklerose – akute Encephalomyelitis – Meningitis, vor allem allergische – Guillain-Barre Syndrom – Morbus Alzheimer
(xii) Bluterkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen wie z. B.: M. Hodgkin oder Non-Hodgkin Lymphome, Thrombozytaemien, Erythrozytosen – Erworbene hämolytische Anämie – Idiopathische Thrombozytopenie – Idiopathische Granulozytopenie
(xiii) Tumorerkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen – Akute lymphatische Leukämie – Maligne Lymphome – Lymphogranulomatosen – Lymphosarkome
(xiv) Endokrine Erkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen wie z. B.: – Endokrine Orbitopathie – Thyreoiditis de Quervain – Hashimoto Thyreoiditis – Morbus Basedow – Granulomatous thyqroiditis – Struma lymphomatosa – Autoimmune adrenalitis – Diabetes mellitus, insbesondere Typ 1 Diabetes – Endometriose
(xv) Organ- und Gewebstransplantationen, Graft-versus-host-disease
(xvi) Schwere Schockzustände, z. B. anaphylaktischer Schock, systemic inflammatory response syndrome (SIRS)

Ein Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) zur Herstellung eines Arzneimittels.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von Erkrankungen, die mit entzündlichen, allergischen und/oder proliferativen Prozessen einhergehen.
Außerdem betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel 1, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine Verbindung der Formel II,
worin R², R³, R⁴, R⁵ und R⁶ die oben angegebenen Bedeutungen haben, in einem Eintopfverfahren zunächst mit Chlorameisensäure-para-nitrophenylester umsetzt und das gebildete Intermediat dann mit einem Amin der allgemeinen Formel III,
worin R^1a und R^1b die oben angegebenen Bedeutungen aufweisen, umsetzt und gegebenenfalls benötigte Schutzgruppen anschließend abspaltet.
Die als Ausgangsmaterialien dienenden Verbindungen der allgemeinen Formel II sind entweder bekannt oder können beispielsweise hergestellt werden, indem man in an sich bekannter Weise einen Aminoalkohol der allgemeinen Formel IV H₂N–R² (IV),dessen in R² vorhandene Hydroxygruppen mit der dem Fachmann bekannten und zu den nachfolgenden Reaktionsbedingungen kompatiblen Schutzgruppen gegebenenfalls geschützt werden können, mit dem Pyrimidinderivat der Formel V
zu den Verbindungen der allgemeinen Formel VI umsetzt,
wobei R² und R³ die oben angegebenen Bedeutungen haben.
Anschließend setzt man die Verbindungen der allgemeinen Formel VI mit den Verbindungen der allgemeinen Formel VII
zu den Verbindungen der allgemeinen Formel VIII um,
wobei R², R³, R⁴, R⁵ und R⁶ die oben angegebene Bedeutungen aufweisen.
In den Verbindungen der allgemeinen Formel (VIII) können gegebenenfalls die Hydroxyschutzgruppen in R² gespalten werden und gegebenenfalls durch eine Oxidation der Hydroxygruppe gefolgt von einer Alkyl-Grignard- bzw. Alkyllithium-Reaktion mit der entstandenen Carbonylgruppe weitere C-Atome eingeführt werden.
Die Nitro-Verbindungen der allgemeinen Formel VIII werden dann durch eine Reduktion in die Verbindungen der allgemeinen Formel II überführt.
Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I), ohne den Umfang der beanspruchten Verbindungen auf diese Beispiele zu beschränken.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) lassen sich wie nachstehend beschrieben herstellen.
Beispiel 1: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
Zu einer Lösung von 87.4 mg des in Beispiel 1c) hergestellten Amins in 5.2 ml Tetrahydrofuran wurden 49.6 μl Triethylamin, 3.67 mg N,N-Dimethylaminopyridin (DMAP) und 73.8 mg Chlorameisensäure 4-nitro-phenylester gegeben und eine Stunde bei 25°C gerührt. Anschließend wurden 37.9 μl Azetidin hinzugegeben und 16 Stunden bei 60°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde die Reaktionsmischung mit 5 ml Ethylacetat verdünnt und einmal mit 2 ml gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat und Filtration wurde im Vakuum eingeengt und das so erhaltene Rohprodukt mittels mehrfacher präparativer Dickschichtplatten (Laufmittel: Methylenchlorid/Methanol 8:2 bzw. Chloroform/Methanol 9:1) und Detektion per MS ESI (+) gereinigt.
Ausbeute: 21 mg der Titelverbindung.
MS: MW (gef; M+1): 375 g/mol, MW (theo.) 374
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 1a) (S)-2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-butan-1-ol
Zu einer Lösung von 25 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin in 480 ml Acetonitril wurden 25.1 ml Triethylamin gefolgt von 14.4 g (S)-2-Amino-butan-1-ol gelöst in 30 ml Acetonitril zugetropft und 16 Stunden bei 25°C gerührt. Nach dem Einengen im Vakuum wurden 300 ml Etylacetat hinzugegeben und anschließend wurde die organische Phase einmal mit 100 ml 10%iger wässriger Zitronensäure-Lösung, einmal mit 100 ml gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat und Filtration wurde im Vakuum eingeengt. Der so erhaltene Rückstand wurde mit wenig Hexan und Ethylacetat versetzt und gerührt. Der sich gebildetet Feststoff wurde abfiltriert. Die Mutterlauge wurde durch Chromatographie an Kieselgel mit Hexan/0–100% Ethylacetat gereinigt.
Ausbeute: 29 g der Titelverbindung
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.81 (3H), 1.35-1.70 (2H), 3.38 (2H), 3.93 (1H), 4.70 (1H), 7.77 (1H), 8.00 (1H).
1b) (S)-2-(5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
Zu einer Mischung von 7.0 g des in Beispiel 1a) hergestellten Alkohols und 4.4 g 3-Nitroanilin in 320 ml Acetonitril und 32 ml Wasser wurden 7.9 ml einer 4 M Lösung von HCl in Dioxan gegeben und 16 Stunden bei 95°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurden 4.9 ml Triethylamin hinzugegeben und diese Mischung im Vakuum eingeengt. Der so erhaltene Niederschlag wurde mit Wasser versetzt und abfiltriert. Der so erhaltene Feststoff wurde durch Chromatographie an Kieselgel mit Hexan/0–100% Ethylacetat gereinigt.
Ausbeute: 5.2 g der Titelverbindung
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (3H), 1.50 (1H), 1.65 (1H), 3.47 (2H), 4.11 (1H), 4.65 (1H), 7.13 (1H), 7.45 (1H), 7.67 (1H), 7.90 (1H), 7.91 (1H), 8.91 (1H), 9.58 (1H).
1c) (S)-2-(2-(3-Amino-phenylamino) 5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-o
Zu einer Lösung von 31.5 g Eisen(II)sulfat Heptahydrat in 96 ml Wasser wurde portionsweise 32.3 ml Ammoniak-Lösung gegeben. Anschließend wurden die in Beispiel 1b) hergestellten 5.2 g Nitroverbindung suspendiert in 177 ml Methanol hinzugegeben und 3 Stunden bei 95°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde über Celite abgesaugt und gut mit Methanol nachgewaschen. Dann wurde das organische Lösungsmittel im Vakuum eingeengt und die übrig bleibende wässrige Phase mit 50 ml Wasser und 10 ml Ammnoiak-Lösung verdünnt. Diese Mischung wurde viermal mit Ethylacetat extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat und Filtration wurde im Vakuum eingeengt. Der so erhaltene Rückstand wurde durch Chromatographie an Kieselgel mit Hexan/0–100% Ethylacetat gereinigt.
Ausbeute: 3.7 g der Titelverbindung
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 085 (3H), 1.35-1.75 (2H), 3.40 (1H), 3.49 (1H), 4.01 (1H), 4.70 (1H), 4.79 (2H), 6.07 (1H), 6.75-6.85 (2H), 6.87 (1H), 7.00 (1H), 7.77 (1H), 8.63 (1H).
Beispiel 2: 1-tert-Butyl-3-{3-(5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 1) wurde aus 100 mg des in Beispiel 2c) hergestellten Amins und 42.8 mg tert-Butylamin ein Rohprodukt erhalten, welches mittels HPLC (Säule: XBridge C18 5 μ 100 × 30 mm, Laufmittel: 99% eines Gemisches aus Wasser mit 0.1% Ameisensäure/1% Acetonitril bis zu 1% eines Gemisches aus Wasser mit 0.1% Ameisensäure/99% Acetonitril, Detektion per MS ESI (+)) gereinigt wurde. Ausbeute: 26 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.88 (9H), 1.24 (9H), 3.50 (1H), 3.66 (1H), 4.17 (1H), 4.41 (1H), 5.95 (1H), 6.75 (1H), 6.89 (1H), 6.98 (1H), 7.30 (1H), 7.54 (1H), 7.78 (1H), 8.04 (1H), 8.81 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 2a) (S)-2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-3,3-dimethyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 2.85 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 2.0 g (S)-2-Amino-3,3-dimethyl-butan-1-ol 4.1 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (9H), 3.46 (1H), 3.64 (1H), 4.02 (.1H), 4.49 (1H), 7.65 (1H), 8.00 (1H).
2b) (S)-2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-3,3-dimethyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 4.1 g des in Beispiel 2a) hergestellten Alkohols und 2.29 g 3-Nitroanilin 3.41 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.91 (3H), 3.67 (1H), 4.18 (1H), 4.46 (1H), 6.93 (1H), 7.46 (1H), 7.67 (1H), 7.89 (1H), 7.91 (1H), 8.92 (1H), 9.56 (1H).
2c) (S)-2-(2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-3,3-dimethyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 3.41 g der in Beispiel 2b) hergestellten Nitroverbindung 2.68 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.89 (9H), 3.49 (1H), 364 (1H), 4.13 (1H), 4.45 (1H), 4.77 (2H), 6.08 (1H), 6.71 (1H), 6.80 (1H), 6.90. (2H), 7.76 (1H), 8.59 (1H).
Beispiel 3: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-(5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 2c) hergestellten Amins und 60.4 mg Thiomorpholin 49 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.88 (9H), 2.55 (4H), 3.49 (1H), 3.60-3.71 (5H), 4.16 (1H), 4.41 (1H), 6.76 (1H), 6.84 (1H), 7.02 (1H), 7.25 (1H), 7.79 (1H), 7.82 (1H), 8.38 (1H), 8.85 (1H).
Beispiel 4: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-(5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 2c) hergestellten Amins und 51.0 mg 1,1-Dimethyl-propylamin 26 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.78 (3H), 0.88 (9H), 1.19 (6H), 1.59 (2H), 3.50 (1H), 3.65 (1H), 4.17 (1H), 4.41 (1H), 5,83 (1H), 6.76 (1H), 6.89 (1H), 6.98 (1H), 7.29 (1H), 7.54 (1H), 7.78 (1H), 8.09 (1H), 8.81 (1H).
Beispiel 5: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 2c) hergestellten Amins und 51.1 mg Morpholin 65 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.88 (9H), 3.37 (4H), 3.49 (1H), 3.56 (4H), 3.64 (1H), 4.16 (1H), 4.40 (1H), 6.75 (1H), 6.84 (1H), 7.02 (1H), 7.23 (1H), 7.79 (1H), 7.87 (1H), 8.38 (1H), 8.86 (1H).
Beispiel 6: Azetidin-1-carbonsäure {3-(5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 2c) hergestellten Amins und 33.4 mg Azetidin 55 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.88 (9H), 2.13 (2H), 3.49 (1H), 3.65 (1H), 3.89 (4H), 4.18 (1H), 4.43 (1H), 6.76 (1H), 6.89 (1H), 7.00 (1H), 7.20 (1H), 7.78 (1H), 7.90 (1H), 8.18 (1H), 8.84 (1H).
Beispiel 7: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 83 mg des in Beispiel 7c) hergestellten Amins und 48.8 mg Morpholin 30 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.16 (3H), 3.34-3.55 (6H), 3.61 (4H), 4.26 (1H), 4.77 (1H), 6.92 (1H), 6.99 (1H), 7.06 (1H), 7.21 (1H), 7.84 (1H), 7.91 (1H), 8.40 (1H), 8.94 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 7a) (S)-2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-propan-1-ol

15 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin wurden in 288 ml. Acetonitril mit 1 g Triethylamin versetzt. Nach Zugabe vom 7.28 g (S)-2-Amino-propan-1-ol wurde das Gemisch für 12 h bei Raumtemperatur gerührt. Anschliessend wurden 300 ml Essigsäureethylester zugegeben und die organischen Phasen mit 10%iger wässriger Zitronensäure, ges. wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Sole gewaschen. Das Lösungsmittel wird weitgehend verdampft und der erhaltenen Feststoff abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Es wurden 13.4 g der Titelverbindung erhalten. Diese wurde ohne weitere Aufreinigung in die nächste Stufe eingesetzt.
HPLC-MS: Retentionszeit 0.67 min, MW (gef; M+1): 206 g/mol, MW (theo.) 205. (Methode A) Methode A: HPLC-MS:

Säule:	Acquity UPLC BEH C18 1.7 μm 50 × 2.1 mm
Lösungsmittel A:	H2O/0.1% HCOOH
Lösungsmittel B:	Acetonitril
Gradient:	0 min 99%A	1%B
	1.6 min	1%A 99%B
	2.0 min	1%A 99%B
Fluss:	0.8 mL/min
Injektionsvolumen:	2.0 μl
Detektion:	DAD scan range 210–400 nm
	ELSD
	ESI+, ESI
Temperatur:	60°C

7b) (S)-2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyridin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 13.4 g des in Beispiel 7a) hergestellten Alkohols und 9.9 g 3-Nitroanilin 13 g der Titelverbindung erhalten.
Die Titelverbindung wurde ohne weitere Aufreinigung im nächsten Schritt eingesetzt.
HPLC-MS: Retentionszeit 0.94 min, MW (gef; M+1): 308 g/mol, MW (theo.) 307. (Methode A)
7c) (S)-2-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 19) wurden aus 13.3 g der Beispiel 7b) hergestellten Nitroverbindung 6.52 g der Titelverbindung erhalten.
NMR. (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.13 (3H), 3.36 (1H), 3.48 (1H), 4.14 (1H), 4.75 (1H), 4.79 (2H), 6.07 (1H), 6.76-6.84 (2H), 6.92 (1H), 7.04 (1H), 7.77 (1H), 8.65 (1H).
Beispiel 8: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 92 mg des in Beispiel 8c) hergestellten Amins und 32.0 mg Azetidin 13 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (3H), 0.88 (3H), 1.91 (1H), 2.13 (2H), 3.51 (2H), 3.89 (4H), 4.05 (1H), 4.54 (1H), 6.83 (1H), 6.91 (1H), 7.00 (1H), 7.17 (1H), 7.78 (1H), 7.86 (1H), 8.16 (1H), 8.84 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 8a) (S)-2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-3-methyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 20 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 13.3 g (S)-2-Amino-3-methyl-butan-1-ol 24 g der Titelverbindung erhalten.
Die Titelverbindung wurde ohne weitere Aufreinigung im nächsten Schritt umgesetzt.
HPLC-MS: Retentionszeit 0.98 min, MW (gef; M+1): 234 g/mol, MW (theo.) 233. (Methode A)
8b) (S)-2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-3-methyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 24 g des in Beispiel 8a) hergestellten Alkohols und 14.3 g 3-Nitroanilin 36 g der Titelverbindung erhalten.
Die Titelverbindung wurde ohne weitere Aufreinigung im nächsten Schritt umgesetzt.
HPLC-MS: Retentionszeit 0.92 min, MW (gef; M+1): 336 g/mol, MW (theo.) 335. (Methode A)
8c) (S)-2-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-3-methyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 36.1 g der in Beispiel 8b) hergestellten Nitroverbindung 10.9 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (3H), 0.88 (3H), 1.92 (1H), 3.51 (2H), 3.98 (1H), 4.55 (1H), 4.77 (2H), 6.07 (1H), 6.75-6.89 (2H), 6.91 (1H), 7.76 (1H), 8.60 (1H).
Beispiel 9: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 92 mg des in Beispiel 9c) hergestellten Amins und 48.8 mg. Morpholin 54 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (6H), 3.18 (2H), 3.35 (2H), 3.41 (4H), 3.61 (4H), 4.64 (1H), 6.93 (1H), 7.07 (1H), 7.16 (1H), 7.27 (1H), 7.84 (1H), 7.88 (1H), 8.42 (1H), 8.95 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 9a) 3-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-2,2-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 15.0 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 10.0 g 3-Amino-2,2-dimethyl-propan-1-ol 19.2 g der Titelverbindung erhalten.
MS: MW (gef; M+1): 234 g/mol, MW (theo.) 233
9b) 3-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2,2-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 19.2 g des in Beispiel 9a) hergestellten Alkohols und 11.4 g 3-Nitroanilin 35.4 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.83 (6H), 3.18 (2H), 3.36 (2H), 4.61 (1H), 7.28 (1H), 7.46 (1H), 7.68 (1H), 7.90 (1H), 7.91 (1H), 8.95 (1H), 9.61 (1H).
9c) 3-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-2,2-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 25.6 g der Beispiel 9b) hergestellten Nitroverbindung 14.4 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.81 (6H), 3.14 (2H), 3.30 (2H), 4.66 (1H), 4.81 (2H), 6.08 (1H), 6.77-6.82 (2H), 7.03 (1H), 7.12 (2H), 7.77 (1H), 8.59 (1H).
Beispiel 10: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 92 mg des in Beispiel 9c) hergestellten Amins und 32.0 mg Azetin 48 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (6H), 2.17 (2H), 3.19 (2H), 3.35 (2H), 3.93 (4H), 4.65 (1H), 6.99 (1H), 7.05 (1H), 7.16 (1H), 7.24 (1H), 7.84 (1H), 7.88 (1H), 8.22 (1H), 8.93 (1H).
Beispiel 11: Morpholin-4-carbonsäure (3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-1,1-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 70 mg des in Beispiel 11c) hergestellten Amins und 37.4 mg Morpholin 25 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.43 (6H), 1.87 (2H), 3.36 (4H), 3.41 (4H), 3.50-3.61 (6H), 4.77 (1H), 6.87 (1H), 6.90 (1H), 7.03 (1H), 7.26 (1H), 7.65 (1H), 7.77 (1H), 8.39 (1H), 8.82 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 11a) 3-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-1,1-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 1.50 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und. 927 mg 3-Amino-3-methyl-butan-1-ol 761 mg der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.40 (6H), 1.87 (2H), 3.51 (2H), 4.01 (1H), 7.63 (1H), 8.01 (1H).
11b) 3-(5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-1,1-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 754 mg des in Beispiel 11a) hergestellten Alkohols und 446 mg 3-Nitroanilin 676 mg der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.48 (6H), 1.90 (2H), 3.57 (2H), 4.81 (1H), 7.1 (1H), 7.47 (1H), 7.68 (1H), 7.89 (1H), 7.96 (1H), 8.79 (1H), 9.50 (1H).
11c) 3-(2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-1,1-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 670 mg der in Beispiel 11b) hergestellten Nitroverbindung 665 mg der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.43 (6H), 1.90 (2H), 3.55 (2H), 4.77 (1H), 4.80 (2H), 6.08 (1H), 6.72-6.78 (3H), 6.90 (1H), 7.75 (1H), 8.57 (1H).
Beispiel 12: 1-tert-Butyl-3-{3-(5-fluor-4-(3-hydroxy-1,1-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 70 mg des in Beispiel 11c) hergestellten Amins und 31.4 mg tert.-Butylamin 26 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.24 (9H), 1.44 (6H), 1.88 (2H), 3.55 (2H), 4.77 (1H), 5.93 (1H), 6.87 (1H), 6.93 (1H), 6.99 (1H), 7.28 (1H), 7.46 (1H), 7.76 (1H), 8.04 (1H), 8.80 (1H).
Beispiel 13: 1-tert-Butyl-3-{3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 13c) hergestellten Amins und 35.2 mg tert.-Butylamin 59 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.08 (6H), 1.24 (9H), 3.39 (2H), 4.51 (1H), 5.93 (1H), 6.90 (1H), 6.92 (1H), 6.99 (1H), 7.20 (1H), 7.61. (1H), 7.81 (1H), 8.05 (1H), 8.87 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 13a) 1-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-2-methyl-propan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 1.50 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 801 mg 1-Amino-2-methyl-propan-2-ol 1.92 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.06 (6H), 3.29 (2H), 4.57 (1H), 7.79 (1H), 8.03 (1H).
13b) 1-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 1.91 g des in Beispiel 13a) hergestellten Alkohols und 1.20 g 3-Nitroanilin 2.33 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.12 (6H), 3.43 (2H), 4.54 (1H), 7.01 (1H), 7.46 (1H), 7.68 (1H), 7.87 (1H), 7.93 (1H), 8.96 (1H), 9.62 (1H).
13c) 1-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 2.32 g der Beispiel 13b) hergestellten Nitroverbindung 1.28 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.09 (6H), 3.36 (2H), 4.54 (1H), 4.80 (2H), 6.07, (1H), 6.74-6.84 (2H), 6.89 (1H), 6.98 (1H), 7.79 (1H), 8.67 (1H).
Beispiel 14: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 13c) hergestellten Amins und 41.9 mg Morpholin 64 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.08 (6H), 3.33-3.43 (6H), 3.56 (4H), 4.54 (1H), 6.86 (1H), 6.90 (1H), 7.02 (1H), 7.16 (1H), 7.82 (1H), 7.91 (1H), 8.37 (1H), 8.91 (1H).
Beispiel 15: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 13c) hergestellten Amins und 27.5 mg Azetidin 60 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.09 (6H), 2.12 (2H), 3.41 (2H), 3.89 (4H), 4.58 (1H), 6.88 (1H), 6.91 (1H), 7.00 (1H), 7.10 (1H), 7.81 (1H), 7.99 (1H), 8.18 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 16: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 13c) hergestellten Amins und 49.7 mg Thiomorpholin 74 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.08 (6H), 2.54 (4H), 3.39 (2H), 3.67 (4H), 4.53 (1H), 6.86 (1H), 6.89 (1H), 7.02 (1H), 7.17 (1H), 7.82 (1H), 7.87 (1H), 8.37 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 17: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 13c) hergestellten Amins und 42.0 mg 2-Methyl-2-butylamin 64 mg der Titelverbindung:
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.78 (3H), 1.08 (6H), 1.18 (6H), 1.58 (2H), 3.38 (2H), 4.51 (1H), 5.81 (1H), 6.90 (1H), 6.92 (1H), 6.98 (1H), 7.20 (1H), 7.59 (1H), 7.81 (1H), 8.08 (1H), 8.87 (1H).
Beispiel 18: 1-tert-Butyl-3-{3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-1,1-dimethyl-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 44 mg des in Beispiel 18c) hergestellten Amins und 20.7 mg tert.-Butylamin 13 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.24 (9H), 1.35 (6H), 3.50 (2H), 4.90 (1H), 5.94 (1H), 6.08 (1H), 6.91 (1H), 7.00 (1H), 7.27 (1H), 7.48 (1H), 7.79 (1H), 8.04 (1H), 8.82 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 18a) 2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 2.0 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 1.07 g 2-Amino-2-methyl-propan-1-ol 1.12 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.30 (6H), 3.51 (2H), 4.88 (1H), 7.02 (1H), 8.02 (1H), 18b) 2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 1.12 g des in Beispiel 18a) hergestellten Alkohols und 704 mg 3-Nitroanilin 641 mg der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.38 (6H), 3.54 (2H), 4.92 (1H), 6.29 (1H), 7.47 (1H), 7.69 (1H), 7.91 (1H), 7.95 (1H), 8.78 (1H), 9.51 (1H).
18c) 2-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fuor-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 634 mg der in Beispiel 18b) hergestellten Nitroverbindung 533 mg der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.35 (6H), 3.51 (2H), 4.79 (2H), 4.91 (1H), 6.06 (1H), 6.09 (1H), 6.74-6.86 (2H), 6.90 (1H), 7.77 (1H), 8.60 (1H).
Beispiel 19: Morpholin-4-carbonsäure {3-(5-fluor-4-(2-hydroxy-1,1-dimethyl-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 44 mg des in Beispiel 18c) hergestellten Amins und 24.6 mg Morpholin 12 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.34 (6H), 3.36 (4H), 3.50 (2H), 3.56 (4H), 4.91 (1H), 6.08 (1H), 6.89 (1H), 7.03 (1H), 7.25 (1H), 7.67 (1H), 7.79 (1H), 8.38 (1H), 8.84 (1H).
Beispiel 20: Morpholin-4-carbonsäure {3-fluor-5-(5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel, 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 20b) hergestellten Amins und 39.2 mg Morpholin 45 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (3H), 1.48 (1H), 1.60 (1H), 3.37 (4H), 3.45 (2H), 3.56 (4H), 4.04 (1H), 4.68 (1H), 6.82 (1H), 7.00 (1H), 7.24, (1H), 7.51 (1H), 7.83 (1H), 8.56 (1H), 9.15 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 20a) (S)-2-(5-Fluor-2-(3-fluor-5-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 2.0 g des in Beispiel 1a) hergestellten Alkohols und 1.4 g 5-Fluor-3-nitroanilin 1.55 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (3H), 1.50 (1H), 1.65 (1H), 3.47 (2H), 4.07 (1H), 4.67 (1H), 7.24 (1H), 7.49 (1H), 7.93 (1H), 7.99 (1H), 8.60 (1H), 9.80 (1H).
20b) (S)-2-[2-(3-Amino-5-fluor-phenylamino)-5-fluoro-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 1.55 g der in Beispiel 20a) hergestellten Nitroverbindung 1.0 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (3H), 1.48 (1H), 1.63 (1H), 3.45 (2H), 3.99 (1H), 4.70 (1H), 5.14 (2H), 5.82 (1H), 6.66 (1H), 6.83 (1H), 6.95 (1H), 7.79 (1H), 8.88 (1H).
Beispiel 21 1-tert-Butyl-3-{3-fluor-5-[5-fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 20b) hergestellten Amins und 32.9 mg tert.-Butylamin 23 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (3H), 1.24 (9H), 1.48 (1H), 1.61 (1H), 3.45 (2H), 4.05 (1H), 4.66 (1H), 6.00 (1H), 6.97 (1H), 7.00 (1H), 7.07 (1H), 7.31 (1H), 7.82 (1H), 8.27 (1H), 9.11 (1H).
Beispiel 22: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2-(R/S)-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 22c) hergestellten Amins und 49.5 mg Thiomorpholin 4 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.83 (3H), 1.86 (1H), 2.55 (4H), 3.19-3.40 (4H), 3.67 (4H), 4.47 (1H), 6.87 (1H), 7.01 (1H), 7.25 (1H), 7.32 (1H), 7.77. (1H), 7.79 (1H), 8.37 (1H), 8.89 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 22a) (R/S)-3-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 1.7 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 1.25 g (R/S)-3-Amino-2-methyl-propan-1-ol 1.81 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.81 (3H), 1.86 (1H), 3.07-3.36 (4H), 4.51 (1H), 8.01 (1H), 8.08 (1H), 22b) (R/S) 3-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 1.8 g des in Beispiel 22a) hergestellten Alkohols und 1.1 g 3-Nitroanilin 2.0 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (3H), 1.90 (1H), 3.22-3.44 (4H), 448 (1H), 7.45 (1H), 7.52 (1H), 7.67 (1H), 7.89 (1H), 7.95 (1H), 8.91 (1H), 9.60 (1H).
22c) (R/S)-3-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-2-methyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 2.0 g der Beispiel 22b) hergestellten Nitroverbindung 1.5 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.91 (1H), 3.13-3.41 (4H), 4.53 (1H), 4.81 (2H), 6.07 (1H), 6.79 (1H), 6.81 (1H), 7.00 (1H), 7.30 (1H), 7.76 (1H), 8.66 (1H).
Beispiel 23: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2-(R/S)-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 22c) hergestellten Amins und 27.4 mg Azetin 40 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.88 (1H), 2.12 (2H), 3.18-3.40 (4H), 3.89 (4H), 4.49 (1H), 6.95 (1H), 7.00 (1H), 7.21 (1H), 7.32 (1H), 7.78 (1H), 7.80 (1H), 8.18 (1H), 8.88 (1H).
Beispiel 24: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2-(R/S)-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 22c) hergestellten Amins und 41.8 mg Morpholin 49 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.88 (1H), 3.18-3.42 (8H), 3.56 (4H), 4.47 (1H), 6.89 (1H), 7.01 (1H), 7.24 (1H), 7.32 (1H), 7.79 (1H), 7.80 (1H), 8.38 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 25: 1-tert-Butyl-3-{3-(5-fluor-4-(3-hydroxy-2-(R/S)-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 22c) hergestellten Amins und 35.1 mg tert.-Butylamin 4 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.24 (9H), 1.88 (1H), 3.18-3.42 (4H), 4.50 (1H), 5.92 (1H), 6.92-7.04 (2H), 7.26 (1H), 7.32 (1H), 7.54 (1H), 7.78 (1H), 8.04 (1H), 8.87 (1H).
Beispiel 26: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2-(R/S)-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 22c) hergestellten Arms und 41.8 mg 1,1-Dimethyl-propylamin 5 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.24 (9H), 1.88 (1H), 3.18-3.42 (4H), 4.50 (1H), 5.92 (1H), 6.92-7.04 (2H), 7.26 (1H), 7.32 (1H), 7.54 (1H), 7.78 (1H), 8.04 (1H), 8.87 (1H).
Beispiel 27: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 9c) hergestellten Amins und 40.4 mg 1,1-Dimethyl-propylamin 34 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.78 (3H), 0.80 (6H), 1.18 (6H), 1.58 (2H), 3.13 (2H), 3.31 (2H), 4.62 (1H), 5.81 (1H), 6.96 (1H), 6.99 (1H), 7.15 (1H), 7.24 (1H), 7.56 (1H), 7.79 (1H), 8.08 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 28: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 9c) hergestellten Amins und 47.4 mg Thiomorpholin 54 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.80 (6H), 2.54 (4H), 3.14 (2H), 3.29 (2H), 3.67 (2H), 4.59 (1H), 6.87 (1H), 7.02 (1H), 7.13 (1H), 7.23 (1H), 7.80 (1H), 7.82 (1H), 8.38 (1H), 8.91 (1H).
Beispiel 29: 1-tert-Butyl-3-{3-[5-fluor-4-(3-hydroxy-2,2-dimethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 9c) hergestellten Amins und 33.6 mg tert.-Butylamin 49 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.80 (6H), 1.24 (9H), 3.13 (2H), 3.29 (2H), 4.61 (1H), 5.92 (1H), 6.94 (1H), 6.99 (1H), 7.15 (1H), 7.25 (1H), 7.57 (1H), 7.79 (1H), 8.04 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 30: Azetidin-1-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((1S,2S)-2-hydroxy-1-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 30c) hergestellten Amins und 27.5 mg Azetidin 50 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.02 (3H), 1.10 (3H), 2.12 (2H), 3.72 (1H), 3.89 (4H), 4.19 (1H), 4.71 (1H), 6.73 (1H), 6.94 (1H), 7.00 (1H), 7.09 (1H), 7.80 (1H), 7.93 (1H), 8.14 (1H), 8.89 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 30a) (2S,3S)-3-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 3.2 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 2.37 g (2S,3S)-3-Amino-butan-2-ol 1.53 g der Titelverbindung. erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.00 (3H), 1.06 (3H), 3.65 (1H), 3.99 (1H), 4.67 (1H), 7.64 (1H), 8.00 (1H).
30b) (2S,3S)-3-(5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 1.5 g des in Beispiel 30a) hergestellten Alkohols und 0.96 g 3-Nitroanilin 1.4 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.07 (3H), 1.14 (3H), 3.70 (1H), 4.14 (1H), 4.64 (1H), 6.93 (1H), 7.46 (1H), 7.67 (1H), 7.88 (1H), 7.91 (1H), 8.97 (1H), 9.61 (1H).
30c) (2S,3S)-3-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 1.4 g der in Beispiel 30b) hergestellten Nitroverbindung 1.2 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.03 (3H), 1.11 (3H), 3.74 (1H), 4.09 (1H), 4.67 (1H, 4.80 (2H), 6.06 (1H), 6.70 (1H), 6.74 (1H), 6.79 (1H), 7.07 (1H), 7.78 (1H), 8.65 (1H).
Beispiel 31: 1-tert-Butyl-3-{3-[5-fluor-4-((1S,2S)-2-hydroxy-1-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 30c) hergestellten Amins und 35.2 mg tert.-Butylamin 57 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.03 (3H), 1.11 (3H), 1.24 (9H), 3.70 (1H), 4.21 (1H), 4.63 (1H), 5.92 (1H), 6.63 (1H), 6.86 (1H), 6.98 (1H), 7.16 (1H), 7.70 (1H), 7.79 (1H), 8.05 (1H), 8.86 (1H).
Beispiel 32: Morpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-((1S,2S)-2-hydroxy-1-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 30c) hergestellten Amins und 41.9 mg Morpholin 66 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.03 (3H), 1.10 (3H), 3.36 (4H), 3.56 (4H), 3.70 (1H), 4.17 (1H), 4.65 (1H), 6.70 (1H), 6.86 (1H), 7.01 (1H), 7.13 (1H), 7.80 (1H), 7.92 (1H), 8.36 (1H), 8.90 (1H).
Beispiel 33: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-(5-fluor-4-((1S,2S)-2-hydroxy-1-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 30c) hergestellten Amins und 42.0 mg 1,1-Dimethyl-propylamin 41 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.78 (3H), 1.03 (3H), 1.10 (3H), 1.19 (6H), 1.59 (2H), 3.70 (1H), 4.21 (1H), 4.63 (1H), 5.80 (1H), 6.63 (1H), 6.86 (1H), 6.98 (1H), 7.15 (1H), 7.71 (1H), 7.80 (1H), 8.09 (1H), 8.86 (1H).
Beispiel 34: 1-(1,1-Dimethyl-propyl)-3-{3-(5-fluor-4-(2-hydroxy-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl)-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 60 mg des in Beispiel 34c) hergestellten Amins und 37.2 mg 1,1-Dimethyl-propylamin 19 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.78 (3H), 1.18, (6H), 1.59 (2H), 3.45 (2H), 3.54 (2H), 4.69 (1H), 5.82 (1H), 6.92 (1H), 6.98 (1H), 7.18 (1H), 7.25 (1H), 7.63 (1H), 7.80 (1H), 8.09 (1H), 8.90 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 34a) 2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-ethanol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 3.0 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 1.01 g 2-Amino-ethanol 2.91 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 3.36 (2H), 3.49 (2H), 4.75 (1H), 8.02 (1H), 8.09 (1H).
34b) 2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-ethanol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 2.9 g des in Beispiel 34a) hergestellten Alkohols und 2.1 g 3-Nitroanilin 1.65 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 3.47 (2H), 3.58 (2H), 4.70 (1H), 7.46 (1H), 7.49 (1H), 7.67 (1H), 7.91 (1H), 7.93 (1H), 8.91 (1H), 9.61 (1H).
34c) 2-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-ethanol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 1.64 g der in Beispiel 34b) hergestellten Nitroverbindung 1.2 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 3.41 (2H), 3.54 (2H), 4.73 (1H), 4.80 (2H), 6.07 (1H), 6.76 (1H), 6.80 (1H), 7.05 (1H), 7.23 (1H), 7.77 (1H), 8.68 (1H).
Beispiel 35: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-[5-fluor-4-(2-hydroxy-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 60 mg des in Beispiel 34c) hergestellten Amins und 44.0 mg Thiomorpholin 40 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.55 (4H), 3.45 (2H), 3.53 (2H), 3.67 (4H), 4.73 (1H), 6.88 (1H), 7.01 (1H), 7.18 (1H), 7.27 (1H), 7.80 (1H), 7.85 (1H), 8.37 (1H), 8.93 (1H).
Beispiel 36: Thiomorpholin-4-carbonsäure {3-(5-fluor-4-(3-hydroxy-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl)-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 75 mg des in Beispiel 36c) hergestellten Amins und 52.2 mg Thiomorpholin 13 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.69 (2H), 2.55 (4H), 3.43 (4H), 3.67 (4H), 4.47 (1H), 6.88 (1H), 7.01 (1H), 7.24 (1H), 7.32 (1H), 7.76-7.83 (2H), 8.38 (1H), 8.90 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 36a) 2-(2-Chlor-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino)-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 3.0 g 2,4-Dichlor-5-fluor-pyrimidin und 1.35 g 3-Amino-propan-1-ol 3.08 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.66 (2H), 3.34 (2H), 3.42 (2H), 4.48 (1H), 8.01 (1H), 8.10 (1H).
36b) 2-[5-Fluor-2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 3.0 g des in Beispiel 36a) hergestellten Alkohols und 2.1 g 3-Nitroanilin 2.6 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.73 (2H), 3.45 (4H), 4.46 (1H), 7.45 (1H), 7.56 (1H), 7.67 (1H), 7.89 (1H), 7.93 (1H), 8.93 (1H), 9.62 (1H).
36c) 2-[2-(3-Amino-phenylamino)-5-fluor-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 2.6 g der in Beispiel 36b) hergestellten Nitroverbindung 1.4 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.70 (2H), 3.40 (2H), 3.45 (2H), 4.52 (1H), 4.81 (2H), 6.07 (1H), 6.79 (2H), 7.03 (1H), 7.30 (1H), 7.76 (1H), 8.66 (1H).
Beispiel 37: 1-(3-[5-Fluor-4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl)-3-(2,2,2-trifluor-1‚1-dimethyl-ethyl)-harnstoff
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 1c) hergestellten Amins und 81.6 mg 2,2,2-Trifluor-1,1-dimethyl-ethylamin 56 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.84 (3H), 1.38-1.70 (2H), 3.44 (2H), 4.08 (1H), 4.61 (1H), 6.43 (1H), 6.88 (1H), 6.91 (1H), 7.01 (1H), 7.29 (1H), 7.58 (1H), 7.79 (1H), 8.26 (1H), 8.88 (1H).
Beispiel 38: Morpholin-4-carbonsäure {3-(4-((S)-1-hydroxymethyl-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 38c) hergestellten Amins und 62.7 mg Morpholin 46 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.13 (3H), 3.30-3.53 (6H), 3.61 (4H), 4.12 (1H), 4.79 (1H), 5.94 (1H), 6.90-7.02 (2H), 7.06 (1H), 7.26 (1H), 7.76 (1H), 7.93 (1H), 8.42 (1H), 8.85 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 38a) (S)-2-(2-Chlor-pyrimidin-4-ylamino)-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 14.0 g 2,4-Dichlor-pyrimidin und 7.06 g (S)-2-Amino-propan-1-ol 11.2 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.09 (3H), 3.34 (2H), 3.41 (1H), 4.80 (1H), 6.43 (1H), 7.74 (1H), 7.85 (1H).
38b) (S)-2-[2-(3-Nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 13.1 g des in Beispiel 38a) hergestellten Alkohols und 8.18 g 3-Nitroanilin 16.7 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.13 (3H), 3.43 (2H), 4.13 (1H), 4.78 (1H), 6.09 (1H), 7.50 (1H), 7.68 (1H), 7.73 (1H), 7.80 (1H), 7.91 (1H), 8.92 (1H), 9.90 (1H).
38c) (S)-2-(2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 16.6 g der in Beispiel 38b) hergestellten Nitroverbindung 12.8 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.10 (3H), 3.34 (1H), 3.45 (1H), 4.74 (1H), 4.77 (2H), 5.85 (1H), 6.06 (1H), 6.74-6.87 (3H), 7.12 (1H), 7.70 (1H), 8.52 (1H).
Beispiel 39: Azetidin-1-carbonsäure {3-(4-((S)-1-hydroxymethyl-ethylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 38c) hergestellten Amins und 41.2 mg Azetidin 58 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.14 (3H), 2.17 (2H), 3.32 (1H), 3.50 (1H), 3.94 (4H), 4.11 (1H), 483 (1H), 5.92 (1H), 6.91 (1H), 7.03 (1H), 7.05 (1H), 7.22 (1H), 7.76 (1H), 7.94 (1H), 8.18 (1H), 8.80 (1H).
Beispiel 40: Morpholin-4-carbonsäure {3-(4-((S)-1-hydroxymethyl-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 40c) hergestellten Amins und 57.0 mg Morpholin 17.3 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.91 (3H), 0.92 (3H), 1.94 (1H), 3.41 (4H), 3.50 (2H), 3.61 (4H), 4.03 (1H), 4.62 (1H), 6.02 (1H), 6.94 (1H), 6.98-7.13 (2H), 7.27 (1H), 7.74 (1H), 7.90 (1H), 8.43 (1H), 8.88 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 40a) (S)-2-(2-Chlor-pyrimidin-4-ylamino)-3-methyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 14.0 g 2,4-Dichlor-pyrimidin und 9.69 g (S)-2-Amino-3-methyl-butan-1-ol 9.73 g der Titelverbindung erhalten.,
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.87 (3H), 0.89 (3H), 1.91 (1H), 3.46 (2H), 3.84 (1H), 4.53 (1H), 6.61 (1H), 7.31 (1H), 8.20 (1H).
40b) (S)-3-Methyl-2-(2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 9.7 g des in Beispiel 40a) hergestellten Alkohols und 6.23 g 3-Nitroanilin 10.9 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.87 (3H), 0.91 (3H), 1.91 (1H), 3.50 (2H), 3.99 (1H), 4.57 (1H), 6.07 (1H), 7.09 (1H), 7.44 (1H), 7.65 (1H), 7.77 (1H), 7.90 (1H), 9.02 (1H), 9.45 (1H).
40c) (S)-2-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-3-methyl-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 10.8 g der in Beispiel 40b) hergestellten Nitroverbindung 9.67 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.87 (6H), 1.92 (1H), 3.45 (2H), 3.94 (1H), 4.58 (1H), 4.76 (2H), 5.93 (1H), 6.06 (1H), 6.71-6.83 (2H), 6.87 (1H), 7.02 (1H), 7.68 (1H), 8.47 (1H).
Beispiel 41: Azetidin-1-carbonsäure 3-[4-((S)-1-hydroxymethyl-2-methyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 40c) hergestellten Amins und 37.4 mg Azetidin 16.6 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.91 (3H), 0.92 (3H), 1.95 (1H), 2.17 (2H), 3.50 (2H), 3.94 (4H), 4.11 (1H), 4.66 (1H), 6.02 (1H), 6.92-7.11 (3H), 7.24 (1H), 7.74 (1H), 7.93 (1H), 8.21 (1H), 8.85 (1H).
Beispiel 42: Morpholin-4-carbonsäure{3-[4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 42c) hergestellten Amins und 57.0 mg Morpholin 17.3 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.90 (3H), 1.45 (1H), 1.65 (1H), 3.26-3.55 (6H), 3.61 (4H), 4.11 (1H), 4.72 (1H), 5.98 (1H), 6.94 (1H), 7.00-7.15 (2H), 7.26 (1H), 7.75 (1H), 7.91 (1H), 8.41 (1H), 8.92 (1H).
Das Ausgangsmaterial für die obige Titelverbindung wurde wie folgt hergestellt: 42a) (S)-2-(2-Chlor-pyrimidin-4-ylamino)-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 14.0 g 2,4-Dichlor-pyrimidin und 8.38 g (S)-2-Amino-butan-1-ol 11.2 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.82 (3H), 1.37 (1H), 1.59 (1H), 3.34 (1H), 3.36 (1H), 3.84 (1H), 4.71 (1H), 6.43 (1H), 7.66 (1H), 7.81 (1H).
42b) (S)-2-[2-(3-Nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 11.1 g des in Beispiel 42a) hergestellten Alkohols und 7.64 g 3-Nitroanilin 13.0 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.86 (3H), 1.44 (1H), 1.63 (1H), 3.44 (2H), 4.04 (1H), 4.64 (1H), 6.03 (1H), 7.09 (1H), 7.44 (1H), 7.65 (1H), 7.78 (1H), 7.93 (1H), 8.98 (1H), 9.46 (1H).
42c) (S)-2-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 12.9 g der in Beispiel 42b) hergestellten Nitroverbindung 11.4 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.85 (3H), 1.40 (1H), 1.64 (1H), 3.43 (1H), 3.47 (1H), 3.91 (1H), 4.68 (1H), 4.76 (2H), 5.88 (1H), 6.06 (1H), 6.71-6.88 (2H), 7.08 (1H), 7.69 (1H), 8.50 (1H).
Beispiel 43: Azetidin-1-carbonsäure {3-[4-((S)-1-hydroxymethyl-propylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-phenyl}-amid
In Analogie zu Beispiel 2) erhielt man aus 100 mg des in Beispiel 42c) hergestellten Amins und 37.4 mg Azetidin 16.6 mg der Titelverbindung.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.90 (3H), 1.45 (1H), 1.67 (1H), 2.17 (2H), 3.40 (1H), 3.49 (1H), 3.94 (4H), 4.11 (1H), 4.79 (1H), 5.99 (1H), 6.99-7.17 (3H), 7.23 (1H), 7.75 (1H), 7.93 (1H), 8.21 (1H), 8.95 (1H).
Benötigte Startmaterialien zu Verbindungen in der folgenden Tabelle: A) 3-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2,2-dimethyl-propan-1-ol
A1) 3-(2-Chlor-pyrimidin-4-ylamino)-2,2-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 14.0 g 2,4-Dichlor-pyrimidin und 9.69 g 3-Amino-2,2-dimethyl-propan-1-ol 13.1 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.79 (6H), 3.10 (2H), 3.14 (2H), 4.56 (1H), 6.50 (1H), 7.68 (1H), 7.82 (1H).
A2) 2,2-Dimethyl-3-(2-(3-nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 13.1 g des in Beispiel A1) hergestellten Alkohols und 8.36 g 3-Nitroanilin 17.1 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.83 (6H), 3.15 (2H), 3.27 (2H), 4.50 (1H), 6.08 (1H), 7.12 (1H), 7.45 (1H), 7.67 (1H), 7.79 (1H), 7.94 (1H), 9.02 (1H), 9.48 (1H).
A3) 3-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-2,2-dimethyl-propan-1-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 17.0 g der in Beispiel A2) hergestellten Nitroverbindung 15.0 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0.80 (6H), 3.11 (2H), 3.22 (2H), 4.58 (1H), 4.76 (2H), 5.93 (1H), 6.07 (1H), 6.74-7.03 (3H), 7.09 (1H), 7.69 (1H), 8.52 (1H).
B) (2S,3S)-3-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-2-ol
B1) (2S,3S)-3-(2-Chlor-pyrimidin-4-ylamino)-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1a) wurden aus 4.15 g 2,4-Dichlor-pyrimidin und 3.5 g (2S,3S)-3-Amino-2-butan-1-ol Hydrochlorid 1.34 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.01 (3H), 1.07 (3H), 3.68 (1H), 3.99 (1H), 4.79 (1H), 6.51 (1H), 7.64 (1H), 7.84 (1H).
B2) (2S,3S)-3-[2-(3-Nitro-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1b) wurden aus 1.0 g des in Beispiel B1) hergestellten Alkohols und 685 mg 3-Nitroanilin 1.26 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.04 (3H), 1.10 (3H), 3.67 (1H), 4.12 (1H), 4.65 (1H), 6.07 (1H), 6.99 (1H), 7.44 (1H), 7.65 (1H), 7.78 (1H), 7.92 (1H), 9.03 (1H), 9.46 (1H).
B3) (2S,3S)-3-[2-(3-Amino-phenylamino)-pyrimidin-4-ylamino]-butan-2-ol
In Analogie zu Beispiel 1c) wurden aus 1.23 g der in Beispiel 62) hergestellten Nitroverbindung 1.1 g der Titelverbindung erhalten.
NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1.05 (3H), 1.10 (3H), 3.77 (1H), 4.09 (1H), 4.70 (1H), 4.82 (2H), 5.95 (1H), 6.10 (1H), 6.69-6.88 (3H), 7.18 (1H), 7.73 (1H), 8.55 (1H).
In Analogie der vorangehenden Beispiele wurden folgende Verbindungen hergestellt und gereinigt.
Analytische HPLC-MS (Methode B):

(Detektion: UV = 214 nM; Säule: XBrigde C18 3,5 μ 4,6 × 50 mm; Flussmittel: A: H₂O/0.1% TFA, B: CH₃CN/0.1% TFA, Gradient: 1 bis 99% B in 8 min; Flussrate: 2 ml/min):

Analytische UPLC-MS (Methode C)

(Detektion: UV = 254 nM; Säule: ACQUITY BEH C18, Flussmittel: A: H₂O/0.1% TFA, B: CH₃CN, Gradient: 1 bis 99% B in 2 min; Flussrate: 0.8 ml/min)

Vergleichsbeispiele
Die Beispiele 334, 422 und 549 aus WO2004/048343 wurden nach folgendem Schema hergestellt.
Biologische Beispiele
A. Tyk2-Kinaseassay
Die Tyk2-inhibitorische Aktivität der Substanzen dieser Erfindung wurde in dem in den folgenden Absätzen beschriebenen Tyk2-HTRF-Assay gemessen (HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence).
Ein rekombinantes Fusionsprotein aus Glutathion-S-Transferase und einem Fragment von humanem Tyk2 (Aminosäuren 568-Ende), in Bakulovirus-infizierten Insektenzellen (Hi5) exprimiert und über Affinitätschromatographie an Glutathion-Sepharose gereinigt, wurde als Enzym verwendet. Als Substrat für die Kinasereaktion wurde das biotinylierte Peptid Biotin-Ahx-VYSTDYYRLFNPS (C-Terminus in Amid-Form) verwendet, das z. B. bei der Firma Biosyntan (Berlin) gekauft werden kann. Für den Assay wurden 50 nl einer 100fach konzentrierten Lösung der Testsubstanz in DMSO in eine schwarze low-volume 384well-Mikrotiterplatte (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Deutschland) pipettiert, 2,5 μl einer Lösung von Tyk2 in Assaypuffer [50 mM Tris/HCl pH 7,4, 10 mM MgCl₂, 2 mM Dithiothreitol, 0,1 mM Natriumorthovanadat, 0.05% (v/v) Tween-20, 0,005% (v/v) Nonidet P-40, 0,01% (w/v) bovines Serumalbumin (BSA), 1 × Complete EDTA-frei Protease-Inhibitorengemisch (Roche)] hinzugegeben und die Mischung für 15 min inkubiert, um eine Vorbindung der Substanzen an das Enzym vor der Kinasereaktion zu ermöglichen. Dann wurde die Kinasereaktion gestartet durch Zugabe von 2,5 μl einer Lösung von Adenosine-triphosphat (ATP, 20 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 10 μM) und Substrat (0,4 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 0,2 μM) in Assaypuffer und die resultierende Mischung für die Reaktionszeit von 45 min bei 22°C inkubiert.
Die Konzentration des Tyk2 wurde an die jeweilige Aktivität des Enzyms angepasst und so eingestellt, dass der Assay im linearen Bereich arbeitete. Typische Konzentrationen lagen im Bereich von 60 ng/ml. Die Reaktion wurde gestoppt durch Zugabe von 5 μl einer Lösung von HTRF-Detektionsreagentien (50 nM Streptavidin-XLent und 1 ng PT66-Eu-Chelat, ein Europiumchelat-markierter anti-Phospho-Tyrosin Antikörper von Perkin Elmer) in wässriger EDTA-Lösung (40 mM EDTA, 0.4% (w/v) Bovines Serumalbumin (BSA), 0,005% (v/v) Nonidet P-40 in 50 mM HEPES/NaOH pH 7.0).
Die resultierende Mischung wurde 1 h bei 22°C inkubiert, um die Bildung eines Komplexes aus dem biotinylierten phosphorylierten Substrat und den Detektionsreagentien zu ermöglichen. Anschließend wurde die Menge des phosphorylierten Substrates ausgewertet durch eine Messung des Resonanz-Energietransfers vom PT66-Eu-Chelat zum Streptavidin-XLent. Hierzu wurden in einem HTRF-Meßgerät, z. B. einem Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Deutschland) oder einem Viewlux (Perkin-Elmer), die Fluoreszenz-Emissionen bei 620 nm and 665 nm nach Anregung bei 350 nm gemessen. Das Verhältnis der Emissionen bei 665 nm und at 622 nm wurde als Maß für die Menge des phosphorylierten Substrates genommen. Die Daten wurden normalisiert (Enzymreaktion ohne Inhibitor = 0% Inhibition, alle anderen Assaykomponenten aber kein Enzym = 100% Inhibition). Üblicherweise wurden die Testsubstanz auf derselben Mikrotiterplatten bei 10 verschiedenen Konzentrationen im Bereich von 20 μM bis 1 nM (20 μM, 6.7 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 82 nM, 27 nM, 9.2 nM, 3.1 nM and 1 nM, die Verdünnungsreihen wurden vor dem Assay hergestellt auf der Ebene der 100fach konzentrierten Lösung durch serielle 1:3 Verdünnungen) in Doppelwerten für jede Konzentration getestet und IC50-Werte wurden kalkuliert mit einem 4-Parameter-Fit, wofür eine inhouse-Software verwendet wurde.
B. Jak2-Kinaseassay
Die Jak2-inhibitorische Aktivität der Substanzen dieser Erfindung wurde in dem in den folgenden Absätzen beschriebenen Jak2-HTRF-Assay gemessen (HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence).
C-terminal His6-getagtes rekombinantes humanes Jak2 (Aminosäuren 808-Ende), in Bakulovirus-infizierten Insektenzellen (Sf21) exprimiert und über Ni-NTA-Affinitätschromatographie gereinigt, gekauft von Milllipore (Dundee, UK), wurde als Enzym verwendet. Als Substrat für die Kinasereaktion wurde das biotinylierte Peptid Biotin-Ahx-VYSTDYYRLFNPS (C-Terminus in Amid-Form) verwendet, das z. B. bei der Firma Biosyntan (Berlin) gekauft werden kann.
Für den Assay wurden 50 nl einer 100fach konzentrierten Lösung der Testsubstanz in DMSO in eine schwarze low-volume 384well-Mikrotiterplatte (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Deutschland) pipettiert, 2,5 μl einer Lösung von Jak2 in Assaypuffer [50 mM Tris/HCl pH 7,4, 10 mM MgCl₂, 2 mM Dithiothreitol, 0,1 mM Natriumorthovanadat, 0.05% (v/v) Tween-20, 0,005% (v/v) Nonidet P-40, 0,01% (w/v) bovines Serumalbumin (BSA), 1 × Complete EDTA-frei Protease-Inhibitorengemisch (Roche)] hinzugegeben und die Mischung für 15 min inkubiert, um eine Vorbindung der Substanzen an das Enzym vor der Kinasereaktion zu ermöglichen. Dann wurde die Kinasereaktion gestartet durch Zugabe von 2,5 μl einer Lösung von Adenosine-tri phosphat (ATP, 20 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 10 μM) und Substrat (1 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 0,5 μM) in Assaypuffer und die resultierende Mischung für die Reaktionszeit von 25 min bei 22°C inkubiert.
Die Konzentration des Jak2 wurde an die jeweilige Aktivität des Enzyms angepasst und so eingestellt, dass der Assay im linearen Bereich arbeitete. Typische Konzentrationen lagen im Bereich von 6 ng/ml. Die Reaktion wurde gestoppt durch Zugabe von 5 μl einer Lösung von HTRF-Detektionsreagentien (50 nM Streptavidin-XLent und 1,26 nM PT66-Eu-Chelat, ein Europiumchelat-markierter anti-Phospho-Tyrosin Antikörper von Perkin Elmer) in wässriger EDTA-Lösung (40 mM EDTA, 0.4% (w/v) Bovines Serumalbumin (BSA), 0,005% (v/v) Nonidet P-40 in 50 mM, HEPES/NaOH pH 7.0).
Die resultierende Mischung wurde 1 h bei 22°C inkubiert, um die Bildung eines Komplexes aus dem biotinylierten phosphorylierten Substrat und den Detektionsreagentien zu ermöglichen. Anschließend wurde die Menge des phosphorylierten Substrates ausgewertet durch eine Messung des Resonanz-Energietransfers vom PT66-Eu-Chelat zum Streptavidin-XLent. Hierzu wurden in einem HTRF-Meßgerät, z. B. einem Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Deutschland) oder einem Viewlux (Perkin-Elmer), die Fluoreszenz-Emissionen bei 620 nm and 665 nm nach Anregung bei 350 nm gemessen. Das Verhältnis der Emissionen bei 665 nm und at 622 nm wurde als Maß für die Menge des phosphorylierten Substrates genommen. Die Daten wurden normalisiert (Enzymreaktion ohne Inhibitor = 0% Inhibition, alle anderen Assaykomponenten aber kein Enzym 100% Inhibition). Üblicherweise wurden die Testsubstanz auf derselben Mikrotiterplatten bei 10 verschiedenen Konzentrationen im Bereich von 20 μM bis 1 nM (20 μM, 6.7 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 82 nM, 27 nM, 9.2 nM, 3.1 nM and 1 nM, die Verdünnungsreihen wurden vor dem Assay hergestellt auf der Ebene der 100fach konzentrierten Lösung durch serielle 1:3 Verdünnungen) in Doppelwerten für jede Konzentration getestet und IC50-Werte wurden kalkuliert mit einem 4-Parameter-Fit, wofür eine inhouse-Software verwendet wurde.
C. CDK2/CycE-Kinaseassay
Die CDK2/CycE-inhibitorische Aktivität der Substanzen dieser Erfindung wurde in dem in den folgenden Absätzen beschriebenen CDK2/CycE-HTRF-Assay gemessen (HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence).
Rekombinante CDK2-GST und CycE-GST-Fusionsproteine, gereinigt aus Bakulovirus-infizierten Insektenzellen (Sf9), wurde von ProQinase GmbH, Freiburg, gekauft. Als Substrat für die Kinasereaktion wurde das biotinylierte Peptid Biotin-Ttds-YISPLKSPYKISEG (C-Terminus in Amid-Form) verwendet, das z. B. bei der Firma JERINI Peptide Technologies (Berlin) gekauft werden kann.
Für den Assay wurden 50 nl einer 100fach konzentrierten Lösung der Testsubstanz in DMSO in eine schwarze low-volume 384well-Mikrotiterplatte (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Deutschland) pipettiert, 2,5 μl einer Lösung von CDK2/CycE2 in Assaypuffer [50 mM Tris/HCl pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 1.0 mM Dithiothreitol, 0.1 mM Natriumorthovanadate, 0.01% (v/v) Nonidet-P40 (Sigma)] hinzugegeben und die Mischung für 15 min inkubiert, um eine Vorbindung der Substanzen an das Enzym vor der Kinasereaktion zu ermöglichen. Dann wurde die Kinasereaktion gestartet durch Zugabe von 2,5 μl einer Lösung von Adenosine-tri-phosphat (ATP, 20 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 10 μM) und Substrat (1,5 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 0,75 μM) in Assaypuffer und die resultierende Mischung für die Reaktionszeit von 60 min bei 22°C inkubiert. Die Konzentration des CDK2/CycE wurde an die jeweilige Aktivität des Enzyms angepasst und so eingestellt, dass der Assay im linearen Bereich arbeitete. Typische Konzentrationen lagen im Bereich von 1 ng/ml. Die Reaktion wurde gestoppt durch Zugabe von 5 μl einer Lösung von TRF-Detektionsreagentien (0.2 μM Streptavidin XLent und 3.4 nM Anti-Phospho-(Ser) CDKs Substrate Antikörper, [Produkt #23248, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA] und 4 nM Prot-A-EuK [Protein A markiert mit Europium-Kryptat von Cis biointernational, Frankreich, Produkt-Nr. 61PRAKLB]; statt des Phospho-(Ser) CDKs Substrate Antikörper kann auch ein Anti-RB(pSer807/pSer811)-Antikörper from BD Pharmingen [# 558389] verwendet werden) in wässriger EDTA-Lösung (100 mM EDTA, 800 mM KF, 0.2% (w/v) Bovines Serumalbumin (BSA) in 100 mM HEPES/NaOH pH 7.0).
Die resultierende Mischung wurde 1 h bei 22°C inkubiert, um die Bildung eines Komplexes aus dem biotinylierten phosphorylierten Substrat und den Detektionsreagentien zu ermöglichen. Anschließend wurde die Menge des phosphorylierten Substrates ausgewertet durch eine Messung des Resonanz-Energietransfers vom Prot-A-EuK zum Streptavidin-XLent. Hierzu wurden in einem HTRF-Meßgerät, z. B. einem Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) oder einem Viewlux (Perkin-Elmer), die Fluoreszenz-Emissionen bei 620 nm and 665 nm nach Anregung bei 350 nm gemessen. Das Verhältnis der Emissionen bei 665 nm und at 622 nm wurde als Maß für die Menge des phosphorylierten Substrates genommen. Die Daten wurden normalisiert (Enzymreaktion ohne Inhibitor = 0% Inhibition, alle anderen Assaykomponente aber kein Enzym = 100% Inhibition). Üblicherweise wurden die Testsubstanzen auf derselben Mikrotiterplatten bei 10 verschiedenen Konzentrationen im Bereich von 20 μM bis 1 nM (20 μM, 6.7 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 82 nM, 27 nM, 9.2 nM, 3.1 nM and 1 nM, die Verdünnungsreihen wurden vor dem Assay hergestellt auf der Ebene der 100fach konzentrierten Lösung durch serielle 1:3 Verdünnungen) in Doppelwerten für jede Konzentration getestet und IC50-Werte wurden kalkuliert mit einem 4-Parameter-Fit, wofür eine inhouse-Software verwendet wurde.
D. KDR kinase assay
Die KDR-inhibitorische Aktivität der Substanzen dieser Erfindung wurde in dem in folgenden Absätzen beschriebenen KDR-HTRF-Assay gemessen (HTRF = Homogeneous Time Resolved Fluorescence).
Rekombinantes KDR-GST-Fusionsprotein, gereinigt aus Bakulovirus-infizierten Insektenzellen (Sf9), wurde von ProQinase GmbH, Freiburg, gekauft. Als Substrat für die Kinasereaktion wurde das biotinylierte Peptid Biotin-Ahx-DFGLARDMYDKEYYSVG (C-Terminus in Säureform) verwendet, das z. B. bei der Firma Biosynthan GmbH (Berlin-Buch, Germany) gekauft werden kann.
Für den Assay wurden 50 nl einer 100fach konzentrierten Lösung der Testsubstanz in DMSO in eine schwarze low-volume 384well-Mikrotiterplatte (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Deutschland) pipettiert, 2,5 μl einer Lösung von KDR in Assaypuffer [50 mM Hepes/NaOH pH 7.0, 25 mM, MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 1.0 mM Dithiothreitol, 0.1 mM Natriumorthovanadat, 0.001% (v/v) Nonidet-P40 (Sigma)] hinzugegeben und die Mischung für 15 min inkubiert, um eine Vorbindung der Substanzen an das Enzym vor der Kinasereaktion zu ermöglichen. Dann wurde die Kinasereaktion gestartet durch Zugabe von 2,5 μl einer Lösung von Adenosine-tri-phosphat (ATP, 20 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 10 μM) und Substrat (1 μM => Endkonzentration in 5 μl Assayvolumen ist 0,5 μM) in Assaypuffer und die resultierende Mischung für die Reaktionszeit von 45 min bei 22°C inkubiert. Die Konzentration des KDR wurde an die jeweilige Aktivität des Enzyms angepasst und so eingestellt, dass der Assay im linearen Bereich arbeitete. Die Reaktion wurde gestoppt durch Zugabe von 5 μl einer Lösung von HTRF-Detektionsreagentien (0.1 μM Streptavidin-XLent und 2 nM PT66-Eu-Chelat, ein Europiumchelat-markierter anti-Phospho-Tyrosin Antikörper von Perkin Elmer) in wässriger EDTA-Lösung (125 mM EDTA, 0.2% (w/v) Bovines Serumalbumin (BSA) in 50 mM HEPES/NaOH pH 7.0).
Die resultierende Mischung wurde 1 h bei 22°C inkubiert, um die Bildung eines Komplexes aus dem biotinylierten phosphorylierten Substrat und den Detektionsreagentien zu ermöglichen. Anschließend wurde die Menge des phosphorylierten Substrates ausgewertet durch eine Messung des Resonanz- Energietransfers vom PT66-Eu-Chelat zum Streptavidin-XLent. Hierzu wurden in einem HTRF-Meßgerät, z. B. einem Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Deutschland) oder einem Viewlux (Perkin-Elmer), die Fluoreszenz-Emissionen bei 620 nm and 665 nm nach Anregung bei 350 nm gemessen. Das Verhältnis der Emissionen bei 665 nm und at 622 nm wurde als Maß für die Menge des phosphorylierten Substrates genommen. Die Daten wurden normalisiert (Enzymreaktion ohne Inhibitor = 0% Inhibition, alle anderen Assaykomponenten aber kein Enzym = 100% Inhibition). Üblicherweise wurden die Testsubstanz auf derselben Mikrotiterplatten bei 10 verschiedenen Konzentrationen im Bereich von 20 μM bis 1 nM (20 μM, 6.7 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 82 nM, 27 nM, 9.2 nM, 3.1 nM and 1 nM, die Verdünnungsreihen wurden vor dem Assay hergestellt auf der Ebene der 100fach konzentrierten Lösung durch serielle 1:3 Verdünnungen) in Doppelwerten für jede Konzentration getestet und IC50-Werte wurden kalkuliert mit einem 4-Parameter-Fit, wofür eine inhouse-Software verwendet wurde.

Die folgende Tabelle zeigt die Ergebnisse aus den biologischen Assays.

Bsp.	Tyk2 HTRF\|HCSOER:10\|avg (IC50 [mol/l])	Jak2 hu\|HCSOHL:10\|avg (IC50 [mol/l])	Jak2 hu vs. Tyk2 HTRF	CDK2 (HTRF)\|HCSNRW:10\|avg (IC50 [mol/l])	CDK2 vs. Tyk2 HTRF	KDR new HTRF\|HCSNSD:10\|avg( IC50 [mol/l])	KDR vs. Tyk2 HTRF
1	1,21E-08	5,78E-07	48	1,01E-05	835	3,40E-06	280
2	1,21E-08	2,82E-06	233	1,98E-05	1639	1,88E-05	1552
3	1,55E-08	2,48E-06	159	2,00E-05	1288	2,00E-05	1288
4	1,55E-08	3,04E-06	197	1,76E-05	1139	2,00E-05	1293
5	6,02E-08	3,06E-06	51	2,00E-05	332	2,00E-05	332
6	4,99E-08	2,59E-06	52	2,00E-05	401	2,00E-05	401
7	4,07E-08	1,96E-06	48	2,00E-05	491	2,32E-06	57
8	7,01E-09	1,46E-06	209	1,95E-05	2779	2,00E-05	2855
9	2,90E-08	2,10E-06	72	1,35E-05	464	1,11E-06	38
10	2,21E-08	1,72E-06	78	8,33E-06	378	9,25E-07	42
11	4,63E-08	1,47E-06	32	1,54E-05	332	7,48E-07	16
12	2,57E-08	1,37E-06	53	6,55E-06	255	4,10E-07	16
13	9,47E-09	6,17E-07	65	2,74E-06	290	1,21E-06	128
14	4,29E-08	1,08E-06	25	6,00E-06	140	2,33E-06	54
15	3,72E-08	1,50E-06	40	4,57E-06	123	2,23E-06	60
16	1,28E-08	1,12E-06	88	4,38E-06	343	2,33E-06	182
17	8,49E-09	8,39E-07	99	2,48E-06	292	1,19E-06	140
18	1,87E-08	2,00E-05	1071	1,79E-05	957	3,52E-07	19
19	1,62E-07	2,00E-05	124	2,00E-05	124	1,08E-06	7
20	5,44E-09	2,69E-07	49	4,35E-06	800	1,97E-06	361
21	2,30E-09	1,69E-07	73	2,62E-06	1141	5,47E-07	238
22	6,96E-09	3,14E-07	45	5,79E-06	832	5,00E-07	72
23	1,30E-08	2,61E-07	20	2,93E-06	225	5,91E-07	45
24	1,26E-08	2,42E-07	19	5,77E-06	457	6,16E-07	49
25	5,67E-09	1,80E-07	32	3,20E-06	565	2,80E-07	49
26	3,35E-09	2,20E-07	66	2,54E-06	756	2,09E-07	62
27	4,49E-09	8,01E-07	178	5,55E-06	1235	3,96E-07	88
28	8,87E-09	1,03E-06	116	6,94E-06	782	7,99E-07	90
29	9,80E-09	1,11E-06	113	5,75E-06	586	5,27E-07	54
30	5,78E-08	3,03E-06	52	5,14E-06	89	4,50E-06	78
31	2,59E-08	1,78E-06	69	3,88E-06	150	2,09E-06	81
32	6,24E-08	2,87E-06	46	8,90E-06	143	5,52E-06	88
33	9,73E-09	1,87E-06	193	4,11E-06	422	1,60E-06	164
34	1,26E-08	7,55E-07	60	7,96E-06	632	3,55E-07	28
35	2,16E-08	9,29E-07	43	1,15E-05	530	9,29E-07	43
36	1,29E-08	2,89E-07	23	2,81E-06	219	3,36E-07	26
37	1,06E-09	2,30E-07	216			1,79E-06	1683
38	1,01E-07	2,68E-06	27	2,00E-05	199	2,00E-05	199
39	8,73E-08	3,67E-06	42	2,00E-05	229	2,00E-05	229
40	6,42E-08	4,68E-06	73	2,00E-05	311	2,00E-05	311
41	6,23E-08	3,54E-06	57	2,00E-05	321	2,00E-05	321
42	3,04E-08	1,16E-06	38	2,00E-05	659	2,00E-05	659
43	2,06E-08	9,76E-07	47	2,00E-05	969	2,00E-05	969
44	1,38E-08	3,98E-07	29	1,58E-05	1147	3,85E-06	280
45	4,14E-08	2,81E-06	68	2,00E-05	483	3,07E-06	74
46	1,44E-08	1,48E-06	103	2,00E-05	1391	2,00E-05	1391
47	9,87E-09	9,83E-07	100	2,00E-05	2026	2,00E-05	2026
48	9,49E-09	8,21E-07	86	2,00E-05	2107	2,00E-05	2107
49	1,10E-08	9,11E-07	83	2,00E-05	1817	2,00E-05	1817
50	2,18E-08	1,47E-06	67	2,00E-05	919	2,00E-05	919
51	2,86E-08	1,83E-06	64	2,00E-05	700	2,00E-05	700
52	2,83E-08	1,57E-06	56	2,00E-05	708	2,00E-05	708
53	2,43E-07	1,30E-05	54	2,00E-05	82	2,00E-05	82
54	1,37E-07	8,31E-06	61	2,00E-05	146	2,00E-05	146
55	1,23E-07	5,22E-06	42	2,00E-05	162	2,00E-05	162
56	6,11E-08	6,08E-06	100	2,00E-05	328	2,00E-05	328
Vergleichsbeispiele WO2004/048343
334	7,1E-08	2,6E-07	4	1,5E-05	214	1,6E-06	22
422	1,3E-06	8,1E-06	6	1,9E-05	15	4E-06	3
549	5,2E-07	1,9E-06	4	2,0E-05	39	3,6E-06	7

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

- DE 4029650 [0002]
- WO 99/19305 [0002]
- WO 01/14375 [0002]
- WO 99/02162 [0002]
- WO 02/04429 [0002]
- WO 00/12486 [0002]
- WO 00/39101 [0002]
- WO 02/096888 [0003]
- WO 03/076437 [0003]
- WO 2005/037800 [0004]
- WO 2004/048343 [0005, 0006, 0014, 0189, 0207]
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Zitierte Nicht-Patentliteratur

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- Trinchieri et al., 2003 [0008]
- Darnell et al., 1994 [0009]
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- Kissileva et al., 2002 [0010]
- Rawlings et al., 2004 [0011]

Claims

Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
in der R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder Phenylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen oder einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest, oder R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, der (i) gegebenenfalls zusätzlich ein oder zwei weitere Heteroatome enthält und/oder (ii) gegebenenfalls durch ein oder mehrere -(CO)- -Gruppen unterbrochen ist, und/oder (iii) gegebenenfalls Doppelbindungen beinhaltet und/oder (iv) gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₆-Alkylrest, -NR^1aR^1b oder der Gruppe -NH(CO)-R⁸, wobei R⁸ für einen C₁-C₆-Alkylrest, C₂-C₆-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, einen Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einen monocyclischen oder bicyclischen Heteroarylrest oder einen Phenylrest steht, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen, Hydroxy, einem C₁-C₆-Alkyl- oder C₁-C₆-Alkoxyrest, einem C₁-C₆-Alkylthiorest, einem C₃-C₆-Cycloalkylrest, einem Heterocycloalkylrest mit 3 bis 6 Ringatomen, einem monocyclischen oder bicylischen Heteroarylrest oder einem Phenylrest, R² für einen mit Hydroxy ein- oder mehrfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest steht, und R³ für Wasserstoff oder Fluor steht, und R⁴ und R⁵ unabhängig voneinander stehen für Wasserstoff, Halogen, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe, und R⁶ für Wasserstoff oder Halogen steht, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß Anspruch 1, in der R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₅-Alkylrest, C₂-C₅-Alkenylrest, C₃-C₆-Cycloalkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest, oder R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Heterocycloalkylrest mit 4 bis 6 Ringatomen, der gegebenenfalls ein Sauerstoff- oder Schwefelatom als zusätzliches weiteres Heteroatome enthält und/oder gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Hydroxy, Halogen, einem C₁-C₃-Alkylrest oder -NH₂, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß Anspruch 1 oder 2, in der R² für einen mit Hydroxy einfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest steht, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, in der R³ für Fluor steht, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, in der R⁴ für Fluor oder Wasserstoff steht, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, in der R⁵ und R⁶ für Wasserstoff stehen, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1 in der R^1a und R^1b unabhängig voneinander stehen für ein Wasserstoffatom oder einen C₁-C₄-Alkylrest, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach, gleich oder verschieden substituiert ist mit Halogen oder einem C₁-C₃-Alkylrest, oder R^1a und R^1b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an dem sie gebunden sind, einen Azetidinyl, Thiomorpholinyl, Morpholinyl oder Piperidinylrest, und R² für einen mit Hydroxy einfach substituierten C₂-C₆-Alkylrest steht, und R³ für Wasserstoff oder Fluor steht, und R⁴ für Wasserstoff oder Fluor steht, und R⁵ und R⁶ für Wasserstoff stehen, sowie deren Salze, Diastereomere und Enantiomere.
Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Verwendung als Arzneimittel.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Erkrankungen, die mit entzündlichen Prozessen einhergehen.
Pharmazeutische Formulierung enthaltend eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7.
Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (I), dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel II,
mit Chlorameisensäure-para-nitrophenylester umgesetzt wird und das gebildete Intermediat mit einem Amin der allgemeinen Formel III,
umgesetzt wird, wobei R^1a, R^1b, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁶ die Bedeutungen gemäß der Ansprüche 1 bis 7 haben und gegebenenfalls benötigte Schutzgruppen anschließend abgespalten werden.