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DE102006031475A1 - Method and device for investigating the adhesion behavior of platelets - Google Patents

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DE102006031475A1
DE102006031475A1 DE102006031475A DE102006031475A DE102006031475A1 DE 102006031475 A1 DE102006031475 A1 DE 102006031475A1 DE 102006031475 A DE102006031475 A DE 102006031475A DE 102006031475 A DE102006031475 A DE 102006031475A DE 102006031475 A1 DE102006031475 A1 DE 102006031475A1
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DE
Germany
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platelets
measuring chamber
sample carrier
wall
parts
Prior art date
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Withdrawn
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DE102006031475A
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German (de)
Inventor
Lutz Weber
Pedro Prof. Mestres-Ventura
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Thinxxs Microtechnology GmbH
Universitaet des Saarlandes
Original Assignee
Thinxxs Microtechnology GmbH
Universitaet des Saarlandes
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Publication date
Application filed by Thinxxs Microtechnology GmbH, Universitaet des Saarlandes filed Critical Thinxxs Microtechnology GmbH
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Priority to PCT/DE2007/001211 priority patent/WO2008003312A2/en
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten. Erfindungsgemäß wird eine Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten in eine Messkammer geleitet, und die nach einer Inkubationszeit an der Wand der Masskammer durch Adhäsion anhaftenden Thrombozyten werden mit Hilfe eines Mikroskops beobachtet. Entsprechend umfasst eine erfindungsgemäße Vorrichtung einen Probenträger (1), der eine Messkammer (5) für die Aufnahme einer Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten aufweist, wobei der Probenträger transparent ist, um an der Wand der Messkammer durch Adhäsion anhaftende Thrombozyten im Mikroskop beobachten zu können.The The invention relates to a method for investigating the adhesion behavior of platelets. According to the invention is a Suspension from a blood sample of separated platelets into a measuring chamber passed, and after an incubation period on the wall of the mass chamber through adhesion adherent platelets are observed by means of a microscope. Accordingly, a device according to the invention comprises a sample carrier (1), a measuring chamber (5) for the inclusion of a suspension of a blood sample separated platelets having, wherein the sample carrier is transparent to adhere to the wall of the measuring chamber by adhesion To be able to observe thrombocytes in the microscope.

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Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten gemäß Oberbegriff des Anspruchs 1 bzw. Anspruchs 4.The The invention relates to a method and a device for examination the adhesion behavior of platelets according to the preamble of claim 1 or claim 4.

Bekanntermaßen spielen Thrombozyten eine wesentliche Rolle bei der Blutgerinnung. Sie haften an den Wänden lädierter Gefäße an, wodurch weitere Thrombozyten aktiviert werden, so dass sie durch Aggregation einen die verletzte Stelle abschließenden Blutblättchenpfropf bilden. Das Ausmaß, in welchem die im Blut vorhandenen Thrombozyten in der Lage sind, durch Adhäsion an einem Substrat anzuhaften, stellt ein wichtiges Charakteristikum für den Zustand des Hämostasesystems dar.As you know, play Platelets play a vital role in blood clotting. They stick on the walls battered Vessels, causing more Platelets are activated so that they aggregate through aggregation the injured body concluding Blutblättchenpfropf form. The extent, in which the platelets present in the blood are able through adhesion adhering to a substrate is an important feature for the state of the hemostasis system represents.

Bei einem bekannten Verfahren zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten wird Blut durch zwei Röhrchen geleitet, von denen eines mit Glasperlen ausgefüllt ist, an denen Thrombozyten anhaften können. Zur Bestimmung des Haftvermögens werden die in den durch die verschiedenen Röhrchen geleiteten Blutfraktionen gemessenen Thrombozytenkonzentrationen ins Verhältnis gesetzt ( Hellem A.J. The adhesiveness of human blond platelets in vitro. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 12(Suppl.): 1–17, 1960 ).In a known method for investigating the adhesion behavior of platelets, blood is passed through two tubes, one of which is filled with glass beads to which platelets can adhere. To determine the adhesion, the platelet concentrations measured in the blood fractions passed through the different tubes are compared ( Hellem AJ The adhesiveness of human blond platelets in vitro. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 12 (Suppl.): 1-17, 1960 ).

Aus den Veröffentlichungen „ Nickels RM, Seyfert UT, Wenzel E, Menger MD, Vollmar B. A simple and reproducible method to reliably assess platelet activation. Thrombosis research 110: 53–56, 2003 " sowie " Krischek B, Morgenstern E, Mestres P. Klinhardt U, Brannath W, Wieding U, Nemeh A, Heinrich W, Schenk J, Wenzel T, Wenzel E. Adhesion, spreading, and aggregation of platelets in flowing blond and the reliability of the retention test Homburg. Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 31(4): 449–457 (2005) " gehen ähnliche Verfahren hervor.From the publications " Nickel's RM, Seyfert UT, Wenzel E, Menger MD, Vollmar B. A simple and reproducible method to confirm platelet activation. Thrombosis research 110: 53-56, 2003 " such as " Krischek B, Morgenstern E, Mestres P. Klinhardt U, Brannath W, Wieding U, Nemeh A, Heinrich W, Schenk J, Wenzel T, Wenzel E. Adhesion, spreading, and aggregation of platelets in flowing blond and the reliability of retention test Homburg. Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 31 (4): 449-457 (2005) "similar procedures emerge.

Eine andere, aus der Veröffentlichung „ Wasiluk, A. Markers of platelets activation, CD62P and soluble P-Selectin in healthy term neontotes. J. Perinatal med. 32(6): 514–515. 2004. " bekannte Richtung sieht die Detektion spezifischer Moleküle an der Oberfläche der Thrombozyten vor, die in verstärktem Maße erscheinen, wenn diese aktiviert sind. An der Zelloberfläche wird mit Hilfe eines spezifischen Antikörpers das mit einem Fluoromarker versehene Protein p-Selectin mit Hilfe der Flow-Cytometry detektiert.Another, from the publication " Wasiluk, A. Markers of platelet activation, CD62P and soluble P-selectin in healthy term neontotes. J. perinatal med. 32 (6): 514-515. Of 2004. "Known direction provides for the detection of specific molecules on the surface of the platelets, which appear to a greater extent when they are activated.At the cell surface is using a specific antibody, the protein provided with a fluoromarker p-selectin using the flow cytometry detected.

Diese bekannten Verfahren erfordern einen verhältnismäßig hohen gerätetechnischen Aufwand.These known methods require a relatively high technical equipment Effort.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, den zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten erforderlichen Aufwand zu verringern.Of the Invention is based on the object to investigate the adhesion behavior to reduce the expense required by platelets.

Diese Aufgabe wird durch ein Verfahren gelöst, bei dem eine Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten in eine Messkammer geleitet wird und die nach einer vorgegebenen Inkubationsdauer an der Wand der Messkammer durch Adhäsion anhaftenden Thrombozyten mit Hilfe eines Mikroskops beobachtet werden.These Task is solved by a method in which a suspension from a blood sample of separated platelets into a measuring chamber and after a given incubation period the wall of the measuring chamber by adherence adherent platelets be observed with the help of a microscope.

Zur Durchführung des Verfahrens lässt sich erfindungsgemäß eine Vorrichtung mit einem Probenträger benutzen, der eine Messkammer für die Aufnahme einer Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten aufweist, wobei der Probenträger im Bereich der Messkammern von wenigstens einer Seite her transparent ist, um an der Wand der Messkammer durch Adhäsion anhaftende Thrombozyten mit Hilfe eines Mikroskops beobachten zu können.to execution of the procedure according to the invention, a device with a sample carrier use a measuring chamber for the inclusion of a suspension of a blood sample separated platelets having, wherein the sample carrier transparent in the region of the measuring chambers from at least one side is to adhere to the wall of the measuring chamber by adhesion-adherent platelets to observe with the help of a microscope.

Gemäß der Erfindung werden also aus einer bestimmten Blutprobenmenge unter Vermeidung zusätzlicher Aktivierung Thrombozyten extrahiert, und die Thrombozytenfraktion wird unter Bildung einer Suspension verdünnt. Die in die Messkammer geleitete Suspension wird, z.B. bei 37°, über einen vorgegebenen Zeitraum inkubiert. Danach können die an der Kammerwand durch Adhäsion anhaftenden Thrombozyten mit Hilfe eines Mikroskops beobachtet werden. So lässt sich als charakteristische Größe die Zahl der anhaftenden Thrombozyten pro Flächeneinheit ermitteln. Unter dem Mikroskop beobachtbar sind ferner die verschiedenen Formen der Thrombozyten, welche sich je nach Aktivierungszustand einstellen. Zur Zählung der Thrombozy ten und Auswertung der Formen kommen auch automatische Bildauswertverfahren in Betracht.According to the invention So be from a certain amount of blood sample while avoiding additional Activation platelets extracted, and the platelet fraction is diluted to form a suspension. The in the measuring chamber guided suspension, e.g. at 37 °, over a given period of time incubated. After that you can the at the chamber wall by adhesion adherent platelets are observed using a microscope. So lets the characteristic number is the number determine the adherent platelets per unit area. Under observable in the microscope are also the various forms of the Platelets, which adjust depending on the activation state. To count the thrombocytes and evaluation of the forms are also automatic Picture evaluation in consideration.

Somit steht ein einfacher, mit geringem Aufwand an Geräten durchführbarer Test zur Verfügung, der sich als zuverlässig erwiesen hat und Eingang in die klinische Routine finden kann. Bei geringem Probendurchsatz kann die Analyse manuell durch einen Laboranten erfolgen, bei hohem Durchsatz sind insbesondere Bildverarbeitungssysteme anwendbar. Eine komplette Automatisierung ist möglich, wenn z.B. bekannte Methoden der Probendispensierung Anwendung finden. Der Test ist geeignet, die Diagnose erblicher oder erworbener Störungen der Thrombozytenfunktion zu unterstützen. Ebenso eignet sich der Test, um die Wirkung von Medikamenten auf die Hämostasie, insbesondere die Thrombozyten zu untersuchen. Weitere Anwendungsmöglichkeiten ergeben sich bei der Qualitätskontrolle in Blutbanken und bei der Transfusionsmedizin. Neben Anwendungsmöglichkeiten bei der Evaluierung neuer Stoffe kann der Test auch bei der Qualitätssicherung bereits etablierter Medikamente von Bedeutung sein.Consequently is a simple, with little effort on equipment feasible test available, the to be reliable proven and can be used in clinical routine. at low sample throughput, the analysis can be done manually by a lab technician high throughput are in particular image processing systems applicable. Complete automation is possible if e.g. known methods find the sample dispensing application. The test is suitable the diagnosis of hereditary or acquired disorders of platelet function to support. Likewise, the test is suited to the effect of drugs on hemostasis, especially to study the platelets. Other applications arise in quality control in blood banks and in transfusion medicine. In addition to possible applications When evaluating new substances, the test can also be used for quality assurance Of importance are already established drugs.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die Suspension in einen die Messkammer umfassenden, durch den Probenträger hindurchverlaufenden Mikrokanal injiziert. Durch vollständige Ausfüllung des Mikrokanals mit der Suspension ist gesichert, dass das Probenvolumen, aus dem sich Thrombozyten an der Messkammerwand absetzen können, stets gleich ist. Es bedarf keiner genauen Abmessung einer Probenmenge.In a preferred embodiment of the invention, the suspension is in a the chamber, injected through the sample carrier passing microchannel. Complete filling of the microchannel with the suspension ensures that the sample volume from which platelets can settle on the measuring chamber wall is always the same. It does not require an exact dimension of a sample amount.

Zur Beobachtung der Thrombozyten im Hellfeld eines gewöhnlichen Lichtmikroskops kann eine Einfärbung der Thrombozyten erfolgen, z.B. durch ein Substrat auf Tetrazoliumbasis. Alternativ können durch einen Fluoromarker, z.B. Rhodamin G6, markierte Thrombozyten im Fluoreszenzmikroskop beobachtet werden.to Observation of platelets in the bright field of an ordinary Light microscopes can be a coloring platelets, e.g. through a tetrazolium-based substrate. Alternatively, by a fluoromarker, e.g. Rhodamine G6, labeled platelets in the Be observed fluorescence microscope.

Vorzugsweise verläuft der die Messkammer enthaltende Mikrokanal zwischen zwei aneinander anliegenden, den Probenträger bildenden Teilen, welche zweckmäßig plattenförmig ausgebildet sind oder einen plattenförmigen Abschnitt umfassen.Preferably extends the microchannel containing the measuring chamber between two abutting, the sample carrier forming parts, which expediently plate-shaped are or a plate-shaped Section include.

In einem der Teile können zur Bildung des Mikrokanals Vertiefungen vorgesehen sein, während der andere Teil diese Vertiefungen fluiddicht abdeckt.In one of the parts can be provided for forming the micro-channel recesses, during the other part fluid-tightly covers these wells.

Ein Einlasskanalabschnitt und/oder ein Auslasskanalabschnitt können/kann in Fluidverbindung mit einem von einem der Teile vorstehenden Rohransatz stehen, an welchen sich z.B. eine Pipette ansetzen oder eine Pumpe anschließen lässt.One Inlet duct section and / or outlet duct section may / may in fluid communication with a tubular extension projecting from one of the parts where, e.g. attach a pipette or a pump connect leaves.

Alternativ kann der Einlasskanalabschnitt in Fluidverbindung mit einem an den Probenträger angeformten Gefäß für die Aufnahme der Suspension, insbesondere für die Aufnahme einer Probengesamtmenge, stehen. Die in dem Gefäß enthaltene Suspension lässt sich über eine an den Rohransatz am Ausgangkanalabschnitt anschließbare Saugeinrichtung in den Mikrokanal hineinziehen.alternative For example, the inlet passage portion may be in fluid communication with one of the sample carrier Molded vessel for recording the suspension, in particular for the inclusion of a sample total. The contained in the vessel Suspension leaves over a connectable to the pipe socket at the output channel section suction pull it into the microchannel.

Vorteilhaft weist der mit dem Auslasskanalabschnitt verbundene Rohransatz am freien Ende eine Überlaufrinne auf, welche zu einem an den Probenträger angeformten Auffanggefäß führt. Überschüssiges Probenmaterial verbleibt so auf dem Probenträger und gelangt nicht in die Umwelt.Advantageous has the pipe socket connected to the outlet channel section at free end an overflow trough on, which leads to a molded onto the sample holder receptacle. Excess sample material remains on the sample carrier and does not get into the environment.

Durch den Mikrokanal kann eine Reihenanordnung aus mehreren Messkammern und auf dem Probenträger können mehrere, jeweils wenigstens eine Messkammer umfassende Mikrokanäle in paralleler Anordnung gebildet sein.By the microchannel can be a series arrangement of several measuring chambers and on the sample carrier can a plurality of microchannels comprising at least one measuring chamber in parallel Arrangement be formed.

Zweckmäßig entspricht die Kontur des Probenträgers in der Draufsicht der Kontur eines gewöhnlichen Mikroskop-Objektträgers. Der Probenträger lässt sich dann wie ein solcher Objektträger problemlos im Mikroskop verwenden.Suitably corresponds the contour of the sample carrier in the plan view of the contour of an ordinary microscope slide. Of the sample carrier let yourself then like such a slide easy to use in a microscope.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung weist die Messkammerwand einen, vorzugsweise ebenen, Wandabschnitt auf, dessen Adhäsionsvermögen in bezug auf Thrombozyten gegenüber den an den Wandabschnitt angrenzenden Teilen der Messkammer, vorzugsweise gegenüber der gesamten übrigen Messkammerwand, erhöht ist. Auf diese Weise lässt sich sichern, dass Thrombozyten beispielsweise nur an einer von zwei zur Plattenebene parallelen Wandabschnitten der Messkammer anhaften. Die Thrombozyten lassen sich dann ungestört durch an dem anderen parallelen Wandabschnitt anhaftende Thrombozyten beobachten.In a particularly preferred embodiment the invention has the measuring chamber wall one, preferably flat, Wall section on whose adhesion in relation on platelets the parts of the measuring chamber adjoining the wall section, preferably across from the rest of the rest Measuring chamber wall, increased is. That way For example, platelets can only assure themselves of one in two Adhere to the plate plane parallel wall sections of the measuring chamber. The platelets can then be undisturbed by paralleling on the other Observe wall section adherent platelets.

Der Probenträger kann aus verschiedenen Materialien mit unterschiedlichem Adhäsionsvermögen in bezug auf Thrombozyten bestehen. Insbesondere können die beiden Teile des Probenträgers im Material verschieden sein, so dass nur an einem der Teile, welcher einen der beiden zur Plattenebene parallelen Wandabschnitte der Messkammer bildet, Thrombozyten anhaften.Of the sample carrier can be made of different materials with different adhesives in relation consist of platelets. In particular, the two parts of the sample carrier in the material be different, so only on one of the parts, which one the two parallel to the plate plane wall sections of the measuring chamber forms, platelets adhere.

Der genannte Wandabschnitt kann einer das Adhäsionsvermögen steigernden Oberflächenbehandlung unterzogen und umgekehrt könnte das Adhäsionsvermögen der an den genannten Wandabschnitt angrenzenden Wandteile der Messkammer durch eine entsprechende Oberflächenbehandlung herabgesetzt sein. Letztere Oberflächenbehandlung kommt vor allem für außerhalb der Messkammern liegende Abschnitte des Mikrokanals in Betracht, um dort das Anhaften von Thrombozyten zu vermeiden.Of the said wall portion may be an adhesion-enhancing surface treatment subjected and vice versa could the adhesiveness of the wall parts of the measuring chamber adjoining said wall section through an appropriate surface treatment be reduced. The latter surface treatment comes first and foremost for outside the measuring chambers lying portions of the micro channel into consideration, to prevent the adhesion of platelets there.

Für die Teile des Probenträgers kommt neben unterschiedlichen Kunststoffen auch eine Kombination Kunststoff/Glas in Betracht. Eines der beiden Teile könnte aus einer Kunststofffolie bestehen.For the parts of the sample carrier comes next to different plastics and a combination Plastic / glass into consideration. One of the two parts could be out consist of a plastic film.

Zur Steigerung der Adhäsionsfähigkeit durch Oberflächenaktivierung kommt z.B. eine Behandlung mit Sauerstoffplasma in Betracht. Die Oberflächenbehandlung kann auch in einer Beschichtung, z.B. basierend auf Siliziumoxidverbindungen, durch Plasmapolymerisation bestehen. Ferner besteht die Möglichkeit der Bildung einer Mikro- oder Nano-Strukturierung an der betreffenden Oberfläche, die hierdurch vergrößert wird.to Increase of adhesiveness through surface activation comes for example a treatment with oxygen plasma into consideration. The surface treatment can also be used in a coating, e.g. based on silica compounds, consist by plasma polymerization. There is also the possibility the formation of a micro or Nano-structuring on the relevant surface, which is thereby enlarged.

Zur Verringerung des Adhäsionsvermögen können z.B. auf Fluorpolymeren basierende Beschichtungen aufgebracht werden.to Reduction of the adhesiveness can e.g. fluoropolymer-based coatings are applied.

Ein wesentlicher Vorteil der Erfindung gegenüber dem Stand der Technik besteht auch darin, dass nach erfolgter Auszählung oder/und qualitativer Bewertung der anhaftenden Thrombozyten das sich im Kanalsystem befindende flüssige Medium gegen ein sich dort verfestigendes Fixiermedium ausgetauscht werden kann, ohne dabei die anhaftenden Thrombozyten auszulösen. Das Analyseergebnis wird somit „eingefroren", lässt sich archivieren und steht für spätere Kontrollen und Einsichtnahmen zur Verfügung.A significant advantage of the invention over the prior art is also that after counting and / or qualitative assessment of the adhering platelets located in the channel system liquid medium against a fixing medium solidifying there can be exchanged without triggering the adhering platelets. The analysis result is thus "frozen", can be archived and is available for later checks and inspections.

Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Ausführungsbeispielen und der beiliegenden, sich auf diese Ausführungsbeispiele beziehenden Zeichnungen näher erläutert. Es zeigen:The The invention will be described below with reference to exemplary embodiments and the enclosed, to these embodiments related drawings closer explained. Show it:

1 einen Probenträger nach der Erfindung in einer perspektivischen Darstellung, 1 a sample carrier according to the invention in a perspective view,

2 den Probenträger von 1 in einer Schnittansicht, 2 the sample carrier of 1 in a sectional view,

3 eine Schnittansicht eines Probenträgers gemäß einem zweiten Ausführungsbeispiel für die vorliegende Erfindung, und 3 a sectional view of a sample carrier according to a second embodiment of the present invention, and

4 eine Teilansicht eines Probenträgers nach der Erfindung, mit einer Messkammer und einem an der Messkammer vorgesehenen Gitternetz. 4 a partial view of a sample carrier according to the invention, with a measuring chamber and a grid provided on the measuring chamber.

Ein Probenträger 1 aus Kunststoff besteht aus einem ersten Teil 2 mit einem plattenförmigen Abschnitt 3 und einem zweiten, in der Form einer Platte ausgebildeten Teil 4, das mit dem Plattenabschnitt 3 des ersten Teils 2 verbunden ist. Die beiden Teile 2 und 4 sind jeweils einstückig im Spritzgießverfahren aus unterschiedlichen Kunststoffmaterialien hergestellt. Beide Materialien sind durchsichtig. Das Teil 4 ließe sich auch aus einer Folie herstellen.A sample carrier 1 made of plastic consists of a first part 2 with a plate-shaped section 3 and a second part formed in the form of a plate 4 that with the plate section 3 of the first part 2 connected is. The two parts 2 and 4 are each made in one piece by injection molding of different plastic materials. Both materials are transparent. The part 4 could also be made from a film.

Zur Bildung von Mikrokanälen 20 mit jeweils drei Messkammern 5, einem Einlasskanalabschnitt 6, einem Auslasskanalabschnitt 7 sowie die Messkammern 5 verbindenden Zwischenabschnitten 8 sind in dem Plattenabschnitt 3 des ersten Kunststoffteils 2 Vertiefungen gebildet, welche durch das plattenförmige Teil 4 fluiddicht abgedeckt werden.For the formation of microchannels 20 each with three measuring chambers 5 an inlet channel section 6 , an outlet channel section 7 as well as the measuring chambers 5 connecting intermediate sections 8th are in the plate section 3 of the first plastic part 2 Wells formed by the plate-shaped part 4 be covered fluid-tight.

Das den Messkammern 5 abgewandte Ende des Einlasskanalabschnitt 6 steht in Verbindung mit einem von dem Plattenabschnitt 3 vorstehenden Rohransatz 9. Das den Messkammern 5 abgewandte Ende des Auslasskanalabschnitt 8 ist mit einem solchen Rohransatz 10 verbunden. Am freien Ende des Rohransatzes 10 befindet sich eine Überlaufrinne 11, welche zu einem Auffanggefäß 12 führt. Das Kunststoffmaterial des plattenförmigen Teils 4 weist ein gegenüber Thrombozyten großes Adhäsionsvermögen auf. Das Teil 2 besteht hingegen aus einem Kunststoffmaterial mit geringem Adhäsionsvermögen.The measuring chambers 5 opposite end of the inlet channel section 6 communicates with one of the plate section 3 protruding pipe socket 9 , The measuring chambers 5 opposite end of the outlet channel section 8th is with such a pipe approach 10 connected. At the free end of the pipe socket 10 there is an overflow channel 11 leading to a collecting vessel 12 leads. The plastic material of the plate-shaped part 4 has a high adhesion to platelets. The part 2 On the other hand, it consists of a plastic material with low adhesiveness.

Bei der Untersuchung von Thrombozyten wird gemäß Pfeil 13 aber den Rohransatz 9 eine Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten eingefüllt. Der Innendurchmesser des Rohransatzes 9 ist so bemessen, dass zu diesem Zweck eine Pipette angesetzt werden kann. Die Suspension tritt durch den Einlasskanalabschnitt 6 in die erste Messkammer 5 und danach über die Kanalzwischenabschnitte 8 in die weiteren Messkammern und schließlich in den Auslasskanalabschnitt 7. Dann steigt sie in dem Rohransatz 10 hoch. Das Hochsteigen kann durch eine an den Rohransatz 10 anschließbare Saugeinrichtung, z.B. eine Pipette, unterstützt werden. Überschüssiges Probenmaterial läuft gemäß Pfeil 15 durch die Überiaufrinne 11 hindurch in das Auffanggefäß 12. Durch das Auffanggefäß 12 wird gesichert, dass die gesamte Probe auf dem Probenträger verbleibt und nicht in die Umwelt gelangt. Wegen des hohen Adhäsionsvermögens des Kunststoffmaterials des plattenförmigen Teils 4 und des geringen Adhäsionsvermögens des zur Herstellung des Teils 2 verwendeten Materials haften Thrombozyten lediglich an einem durch den plattenförmigen Teil 4 gebildeten, zur Plattenebene parallelen Wandabschnitt 16 der Messkammern 5 an.In the investigation of platelets is according to arrow 13 but the pipe approach 9 a suspension of a blood sample of separated platelets filled. The inner diameter of the pipe socket 9 is sized so that a pipette can be used for this purpose. The suspension passes through the inlet channel section 6 into the first measuring chamber 5 and then via the channel intersections 8th into the further measuring chambers and finally into the outlet channel section 7 , Then it rises in the pipe socket 10 high. The rising can be done by a to the pipe approach 10 connectable suction device, such as a pipette supported. Excess sample material runs as indicated by the arrow 15 through the overflow 11 through into the collecting vessel 12 , Through the collecting vessel 12 it is ensured that the entire sample remains on the sample carrier and does not leak into the environment. Because of the high adhesiveness of the plastic material of the plate-shaped part 4 and the low adhesiveness of that for making the part 2 used material adhere platelets only at one through the plate-shaped part 4 formed, parallel to the plate plane wall section 16 the measuring chambers 5 at.

Nach einer vorgegebenen Dauer einer z.B. bei 37°C durchgeführten Inkubation wird über den Rohransatz 9 ein Farbstoff eingefüllt, welcher die Probensuspension verdrängt und die am Wandabschnitt 16 der Messkammern 5 anhaftenden Thrombozyten einfärbt, so dass sie unter dem Mikroskop sichtbar sind.After a predetermined period of incubation, for example at 37 ° C, incubation takes place over the tube 9 a dye filled, which displaces the sample suspension and the wall section 16 the measuring chambers 5 staining adherent platelets so that they are visible under the microscope.

Der in 1 und 2 gezeigte Probenträger 1 weist in der Draufsicht die Abmessungen eines Mikroskop-Objektträgers auf und lässt sich daher wie ein solcher Träger in ein Mikroskop einlegen, unter dem dann die an dem Wandabschnitt 16 durch Adhäsion anhafteten Thrombozyten beobachtet werden können. So lässt sich bei bekannter Größe des Wandabschnitts 16 leicht die Zahl der anhaftenden Thrombozyten pro Flächeneinheit ermitteln. Ferner können die Thrombozyten klassifiziert und die Häufigkeiten bestimmte Formmerkmale aufweisender Thrombozyten ermittelt werden.The in 1 and 2 shown sample carrier 1 has in plan view the dimensions of a microscope slide and can therefore be inserted like such a carrier in a microscope, then the at the wall portion 16 Adhesion adhered platelets can be observed. This can be at a known size of the wall section 16 easily determine the number of adherent platelets per unit area. Furthermore, the platelets can be classified and the frequencies of certain shape characteristics exhibiting platelets can be determined.

Bei den nachfolgenden Ausführungsbeispielen sind gleiche oder gleichwirkende Teile mit derselben Bezugszahl wie bei dem vorangehenden Ausführungsbeispiel bezeichnet, wobei der betreffenden Bezugszahl der Buchstabe a bzw. b beigefügt ist.at the following embodiments are the same or equivalent parts with the same reference number as in the previous embodiment the relevant reference number is the letter a or b attached is.

Ein in 3 gezeigtes Ausführungsbeispiel für einen Probenträger 1a weist anstelle von Rohransätzen 9 Gefäße 17 zum Einfüllen einer Probengesamtmenge auf. An einen mit einem Auslasskanal 7a verbundenen Rohransatz 10a lässt sich bei 18 eine Saugpumpe anschließen, welche dafür sorgt, dass ein Messkammern 5a umfassender Mikrokanal 20a schnell vollständig mit Probenflüssigkeit ausgefüllt wird.An in 3 shown embodiment of a sample carrier 1a instead of pipe connections 9 vessels 17 for filling a sample total. To one with an exhaust duct 7a connected pipe socket 10a can be included 18 connect a suction pump, which ensures that a measuring chambers 5a comprehensive microchannel 20a quickly completely filled with sample liquid.

Bei dem Ausführungsbeispiel von 4 ist eine im Querschnitt quadratische Messkammer 5b gebildet. Auf ihrer der Messkammer abgewandten Seite weist ein plattenförmiges Teil 4b ein Gitternetz 19 auf, welches die Zählung an einem Wandabschnitt 16b der Messkammer 5b anhaftender Thrombozyten im Mikroskop erleichtert.In the embodiment of 4 is a measuring chamber with a square cross-section 5b educated. On its side facing away from the measuring chamber has a plate-shaped part 4b a grid 19 on which the count on a wall section 16b the measuring chamber 5b adherent platelets in the microscope.

Innerhalb der Kanalabschnitte 6 bis 8 kann die durch das Teil 4 gebildete Kanalwand derart behandelt sein, dass die Anhaftung von Thrombozyten vermieden ist. Fehler durch Mitzählen innerhalb der Kanalabschnitte anhaftender Thrombozyten sind so ausgeschlossen.Within the channel sections 6 to 8th can that through the part 4 formed channel wall be treated so that the adhesion of platelets is avoided. Errors by counting within the channel sections of adherent platelets are excluded.

Die vorangehend beschriebenen Ausführungsformen weisen zwei plattenförmige Bauteile auf, die fest miteinander verbunden sind. Es wäre ferner möglich, beide Komponenten fluiddicht aber dennoch lösbar miteinander zu verbinden, z.B. mit Hilfe einer Klemmvorrichtung.The previously described embodiments have two plate-shaped Components on which are firmly connected. It would be further possible, to connect both components in a fluid-tight but non-detachable manner, e.g. with the help of a clamping device.

Ein Glasobjektträger könnte ein stabiles Unterteil bilden und ein darauf festgeklemmtes Oberteil die Kanäle und Messkammern aufweisen. Zur Anpassung des Adhäsionsverhaltens ließe sich die Glasoberfläche modifizieren, wozu sich nass-chemische und physikalische Verfahren eignen. Vorteilhaft weist das Oberteil eine gewisse Duktilität auf und kann z.B. aus einem Elastomer oder Silikon bestehen. So lassen sich die Kanäle und Messkammern durch die Glasplatte leicht fluiddicht verschließen. Vorteilhaft bleibt im Fall einer gewünschten Archivierung ein ausgehärtetes Fixiermedium nach Lösen der Klemmverbindung auf dem Glasobjektträger, der dann wie andere Mikroskopierproben archiviert werden kann. Das Oberteil mit den Messkammern und Kanälen steht für weitere Analysen zur Verfügung.One Glass slides could form a stable base and an upper part clamped on the channels and measuring chambers. To adapt the adhesion behavior could be the glass surface modify what wet-chemical and physical processes suitable. Advantageously, the upper part has a certain ductility and can e.g. made of an elastomer or silicone. That's the way to go the channels and seal the measuring chambers slightly fluid-tight through the glass plate. Remains advantageous in the case of a desired Archiving a cured Fixing medium after loosening the clamp connection on the glass slide, which then like other microscopy samples can be archived. The upper part with the measuring chambers and channels is for further Analyzes available.

Claims (24)

Verfahren zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten, dadurch gekennzeichnet, dass eine Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten in eine Messkammer (5) geleitet wird und die nach einer vorgegebenen Inkubationsdauer an der Wand der Messkammer (5) durch Adhäsion anhaftenden Thrombozyten mit Hilfe eines Mikroskops beobachtet werden.Method for investigating the adhesion behavior of platelets, characterized in that a suspension of a blood sample of separated platelets into a measuring chamber ( 5 ) and after a predetermined incubation period on the wall of the measuring chamber ( 5 ) are adhered by adhesion adhering platelets using a microscope. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Suspension in einen die Messkammer (5) umfassenden Mikrokanal (5–8) injiziert wird.A method according to claim 1, characterized in that the suspension in a the measuring chamber ( 5 ) comprehensive microchannel ( 5 - 8th ) is injected. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass zur Beobachtung der Thrombozyten im Hellfeld eines Lichtmikroskops eine Färbung oder zur Beobachtung der Thrombozyten unter einem Fluoreszenzmikroskop eine Markierung der Thrombozyten mit einem Fluoromarker erfolgt.Method according to claim 1 or 2, characterized that for the observation of platelets in the bright field of a light microscope a coloring or for observation of platelets under a fluorescence microscope a marking of the platelets is carried out with a fluoromarker. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die an der Wand der Messkammer (5) anhaftenden Thrombozyten durch ein in der Messkammer aushärtendes Mittel fixiert werden.Method according to one of claims 1 to 3, characterized in that on the wall of the measuring chamber ( 5 ) adhering platelets are fixed by a hardening in the measuring chamber means. Vorrichtung zur Untersuchung des Adhäsionsverhaltens von Thrombozyten, gekennzeichnet durch einen Probenträger (1), der eine Messkammer (5) für die Aufnahme einer Suspension aus einer Blutprobe separierter Thrombozyten aufweist, wobei der Probenträger im Bereich der Messkammer von wenigstens einer Seite her transparent ist, um an der Wand der Messkammer (5) durch Adhäsion anhaftende Thrombozyten mit Hilfe eines Mikroskops beobachten zu können.Apparatus for investigating the adhesion behavior of platelets, characterized by a sample carrier ( 1 ), which has a measuring chamber ( 5 ) for receiving a suspension of a blood sample of separated platelets, wherein the sample carrier is transparent in the region of the measuring chamber from at least one side to the wall of the measuring chamber ( 5 ) to observe adherent platelets by means of a microscope. Vorrichtung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Messkammer (5) einen Teil eines durch den Probenträger (1) hindurch verlaufenden, einen Einlasskanalabschnitt (6) und einen Auslasskanalabschnitt (7) umfassenden Mikrokanals (5–8) bildet.Apparatus according to claim 5, characterized in that the measuring chamber ( 5 ) a part of a through the sample carrier ( 1 ), an inlet channel section (FIG. 6 ) and an outlet channel section ( 7 ) comprising a microchannel ( 5 - 8th ). Vorrichtung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikrokanal (5–8) zwischen zwei aneinander anliegenden, den Probenträger bildenden Teilen (2, 4) angeordnet ist.Device according to claim 6, characterized in that the microchannel ( 5 - 8th ) between two abutting, the sample carrier forming parts ( 2 . 4 ) is arranged. Vorrichtung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass wenigstens eines der Teile (2, 4) eine Platte umfasst.Apparatus according to claim 7, characterized in that at least one of the parts ( 2 . 4 ) comprises a plate. Vorrichtung nach Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass in einem der Teile (2, 4) zur Bildung des Mikrokanals (5–8) Vertiefungen vorgesehen und die Vertiefungen durch das andere Teil (4) fluiddicht verschlossen sind.Device according to claim 7 or 8, characterized in that in one of the parts ( 2 . 4 ) for the formation of the microchannel ( 5 - 8th ) Depressions provided and the depressions through the other part ( 4 ) are sealed fluid-tight. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Einlasskanalabschnitt (6) oder/und der Auslasskanalabschnitt (7) in Fluidverbindung mit einem von einem der Teile (2, 4) vorstehenden Rohransatz (9, 10) steht/stehen.Device according to one of claims 6 to 9, characterized in that the inlet channel section ( 6 ) and / or the outlet channel section ( 7 ) in fluid communication with one of one of the parts ( 2 . 4 ) projecting pipe socket ( 9 . 10 ) stands / stand. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Einlasskanalabschnitt (6) in Fluidverbindung mit einem an dem Probenträger (1a) gebildeten Gefäß (17) für die Aufnahme der Suspension steht.Device according to one of claims 6 to 9, characterized in that the inlet channel section ( 6 ) in fluid communication with one on the sample carrier ( 1a ) formed vessel ( 17 ) for receiving the suspension. Vorrichtung nach Anspruch 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass der mit dem Auslasskanalabschnitt (7) verbundene Rohransatz (10) über eine Überlaufrinne (11) in Fluidverbindung mit einem an dem Probenträger gebildeten Auffanggefäß (12) steht.Apparatus according to claim 10 or 11, characterized in that the with the outlet channel section ( 7 ) connected pipe socket ( 10 ) via an overflow channel ( 11 ) in fluid communication with a collecting vessel formed on the sample carrier ( 12 ) stands. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 6 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikrokanal (5–8) eine Reihenanordnung mehrerer Messkammern (5) umfasst.Device according to one of claims 6 to 12, characterized in that the microchannel ( 5 - 8th ) a series arrangement of a plurality of measuring chambers ( 5 ). Vorrichtung nach einem der Ansprüche 6 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass der Probenträger (1) mehrere, jeweils wenigstens eine Messkammern (5) umfassende Mikrokanäle (5–8) in paralleler Anordnung aufweist.Device according to one of claims 6 to 13, characterized in that the sample carrier ( 1 ) several, each at least one measuring chambers ( 5 ) comprehensive microchannels ( 5 - 8th ) in parallel arrangement. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 5 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Kontur des Probenträgers (1) in Draufsicht im wesentlichen der Kontur eines Mikroskop-Objektträgers entspricht.Device according to one of claims 5 to 14, characterized in that the contour of the sample carrier ( 1 ) in plan view corresponds substantially to the contour of a microscope slide. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 5 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass die Messkammer (5) einen, vorzugsweise ebenen, Wandabschnitt (16) aufweist, dessen Adhäsionsvermögen in bezug auf Thrombozyten gegenüber der übrigen Messkammerwand erhöht ist.Device according to one of claims 5 to 15, characterized in that the measuring chamber ( 5 ) a, preferably flat, wall portion ( 16 ), the adhesiveness of which with respect to platelets relative to the remaining measuring chamber wall is increased. Vorrichtung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass sich der Wandabschnitt (16) der Messkammerwand parallel zur Ebene der von wenigstens einem der Teile (2, 4) umfassten Platten erstreckt.Apparatus according to claim 16, characterized in that the wall section ( 16 ) of the measuring chamber wall parallel to the plane of at least one of the parts ( 2 . 4 ) comprises covered plates. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 5 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass der Probenträger (1) verschiedene Materialien mit unterschiedlichem Adhäsionsvermögen in bezug auf Thrombozyten aufweist.Device according to one of claims 5 to 17, characterized in that the sample carrier ( 1 ) has various materials with different adhesiveness to platelets. Vorrichtung nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass die beiden, den Probenträger (1) bildenden Teile (2, 4) im Material verschieden sind.Apparatus according to claim 18, characterized in that the two, the sample carrier ( 1 ) forming parts ( 2 . 4 ) are different in material. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 16 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass der Wandabschnitt (16) oder/und die daran angrenzenden Teile der Messkammerwand einer das Adhäsionsvermögen beeinflussenden Oberflächenbehandlung unterzogen sind.Device according to one of claims 16 to 19, characterized in that the wall section ( 16 ) and / or the adjoining parts of the measuring chamber wall are subjected to a surface treatment which influences the adhesiveness. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 6 bis 20, dadurch gekennzeichnet, dass das Adhäsionsvermögen der Wände des Mikrokanals (4–8) außerhalb der Messkammer bzw. Messkammern für eine Anhaftung von Thrombozyten zu gering ist.Device according to one of claims 6 to 20, characterized in that the adhesiveness of the walls of the microchannel ( 4 - 8th ) is too low outside the measuring chamber or measuring chambers for adhesion of platelets. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 7 bis 21, dadurch gekennzeichnet, dass die den Probenträger bildenden Teile lösbar, z.B. durch eine Klemmvorrichtung, miteinander verbindbar sind.Device according to one of claims 7 to 21, characterized that the the sample carrier detachable parts, e.g. by a clamping device, are connected to each other. Vorrichtung nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass eines der lösbar miteinander verbindbaren Teile durch eine ebene Glasplatte, z.B. einen Glasobjektträger gebildet ist und das andere Teil als Vertiefung die Messkammer aufweist.Device according to claim 22, characterized in that that one of the solvable interconnectable parts through a flat glass plate, e.g. a glass slide is formed and the other part has a recess as the measuring chamber. Vorrichtung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass das andere Teil aus einem duktilen Material, z.B. einem Elastormer oder Silikon, besteht.Device according to claim 23, characterized in that that the other part is made of a ductile material, e.g. an elastomer or silicone.
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