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DE10116197A1 - New lipid-soluble methylprednisolone 21-ester derivatives, useful as antiinflammatory, immunosuppressive or antiallergic agents, especially in liposome formulations or lipid coatings on implants - Google Patents

New lipid-soluble methylprednisolone 21-ester derivatives, useful as antiinflammatory, immunosuppressive or antiallergic agents, especially in liposome formulations or lipid coatings on implants

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Publication number
DE10116197A1
DE10116197A1 DE10116197A DE10116197A DE10116197A1 DE 10116197 A1 DE10116197 A1 DE 10116197A1 DE 10116197 A DE10116197 A DE 10116197A DE 10116197 A DE10116197 A DE 10116197A DE 10116197 A1 DE10116197 A1 DE 10116197A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
lipid
composition according
liposomes
mpl
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE10116197A
Other languages
German (de)
Inventor
Bernhard Tewes
Martin Hagen
Uwe Marx
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bernina Biosystems GmbH
Original Assignee
Bernina Biosystems GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bernina Biosystems GmbH filed Critical Bernina Biosystems GmbH
Priority to DE10116197A priority Critical patent/DE10116197A1/en
Priority to PCT/EP2002/003631 priority patent/WO2002094282A2/en
Publication of DE10116197A1 publication Critical patent/DE10116197A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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Abstract

Methylprednisolone 21-higher n-alkanoate esters (I) are new. Methylprednisolone derivatives of formula (I) are new. R = residue of a monocarboxylic acid having a 9-19C n-alkyl chain. An Independent claim is included for liposomal formulations (A) containing (I) and one or more lipids (II) selected from: (a) natural, semi-synthetic or completely synthetic amphiphiles; (b) cholesterol; (c) tetraether lipid derivatives,; (d) lipids with hydrophilic polymer head groups; and/or (e) lipids containing a liposome targeting lipid.

Description

Die Erfindung betrifft neue Methylprednisolonderivate mit therapeutischer Wirkung. Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie.The invention relates to new methylprednisolone derivatives with a therapeutic effect. Areas of application are medicine and the pharmaceutical industry.

Methylprednisolon (MPL) ist ein Glucocorticoid, das mit dem Dexamethason und dem Hydrocortison verwandt ist. Therapeutische Anwendungsgebiete für MPL sind die Hemmung von Entzündungsreaktionen und die Immunsuppression (z. B. nach Transplantationen). Die Verbindung ist Bestandteil von mehreren Präparaten, die bereits auf dem Markt sind. Darüber hinaus gibt es Derivate von MPL, die ebenfalls Teil von pharmazeutischen Präparaten sind. Im einzelnen sind dies MPL-21-acetat, MPL-21-phosphate und MPL-21-succinat. Diese Verbindungen konnten bisher noch nicht liposomal verkapselt werden. In US-PS 4,693,999 ist unter anderem die Palmitoylierung einer Reihe von Glucocorticoiden beschrieben, die dem Einbau in Liposomen dienen. Als Glucocorticoid ist Methylprednisolon nicht aufgeführt. Im US-PS 5,190,936 ist der Einbau von marktüblichen Derivaten von Glucocorticoiden in Liposomen beschrieben. Hier ist das Derivat MPL-21-acetat aufgeführt. Die Möglichkeit der Inkorporation in Beschichtungen ist in beiden Patenten nicht beschrieben.Methylprednisolone (MPL) is a glucocorticoid that works with the dexamethasone and the Hydrocortisone is related. Therapeutic areas of application for MPL are inhibition of inflammatory reactions and immunosuppression (e.g. after transplants). The Connection is part of several preparations that are already on the market. About that there are also derivatives of MPL, which are also part of pharmaceutical preparations. Specifically, these are MPL-21 acetate, MPL-21 phosphate and MPL-21 succinate. This Compounds have not yet been encapsulated liposomally. In U.S. Patent 4,693,999 describes, inter alia, the palmitoylation of a number of glucocorticoids which the Incorporation into liposomes. Methylprednisolone is not listed as a glucocorticoid. in the US Pat. No. 5,190,936 is the incorporation of commercially available derivatives of glucocorticoids in Liposomes described. The derivative MPL-21 acetate is listed here. The possibility of Incorporation in coatings is not described in either patent.

Die bisherigen MPL-Formulierungen haben den Nachteil, dass sie schnell aus der Zirkulation entfernt werden (Clearance), in hohen Dosen schädliche Nebenwirkungen haben und potentiell cardiotoxisch sind. Die Cardiotoxizität beruht darauf, dass die relativ kleinen Moleküle (im Gegensatz zu Liposomen) in den Herzmuskel eindiffundieren können.The previous MPL formulations have the disadvantage that they quickly get out of circulation are removed (clearance), have harmful side effects in high doses and are potentially cardiotoxic. The cardiotoxicity is due to the relatively small Molecules (unlike liposomes) can diffuse into the heart muscle.

Der Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, lipidlösliche MPL-Derivate für alternative Darreichungsformen zu finden.The invention was based on the object of lipid-soluble MPL derivatives for alternative Find dosage forms.

Die Erfindung wird gemäß den Patentansprüchen realisiert. Gemäß der Erfindung wurden lipidlösliche Methylprednisolon-Derivate der allgemeinen Formel I entwickelt,
The invention is implemented in accordance with the patent claims. According to the invention, lipid-soluble methylprednisolone derivatives of the general formula I were developed

wobei R eine Monocarbonsäure mit einer unverzweigten Alkylkette der Länge C9 bis C19 ist. Bevorzugt ist eine Verbindung mit R=Palmitoyl. where R is a monocarboxylic acid with an unbranched alkyl chain of length C9 to C19. A compound with R = palmitoyl is preferred.  

Diese Verbindungen lassen sich (im Gegensatz zu MPL und seinen bekannten Derivaten) in Lipidschichten integrieren. Sinn der Lipidintegration der Verbindungen I sind neue Darreichungsformen für den Wirkstoff.These compounds can (in contrast to MPL and its known derivatives) in Integrate lipid layers. The lipid integration of compounds I is new Dosage forms for the active ingredient.

Zum Umfang der Erfindung gehören auch pharmazeutische Mittel, die aus einer liposomalen Formulierung der Verbindungen I zusammen mit einer oder mehreren Komponenten aus einer oder mehreren der folgenden Gruppen bestehen:
The scope of the invention also includes pharmaceutical compositions which consist of a liposomal formulation of the compounds I together with one or more components from one or more of the following groups:

  • a) natürliche, halbsynthetische oder vollsynthetische Amphiphilea) natural, semi-synthetic or fully synthetic amphiphiles
  • b) Cholesterinb) cholesterol
  • c) Tetraetherlipid-Derivatec) tetraether derivatives
  • d) Lipide mit hydrophilen Polymeren als Kopfgrupped) lipids with hydrophilic polymers as head group
  • e) Lipide, die einen Liganden für die Zielsteuerung des Liposoms enthalten.e) Lipids containing a ligand for targeting the liposome.

Ein bevorzugtes Mittel enthält ein Mol-Verhältnis von I zu den Lipiden der Gruppen a)-e) von 1 : 100 bis 1 : 1.A preferred agent contains a molar ratio of I to the lipids of groups a) -e) of 1: 100 to 1: 1.

Das Amphiphil der Gruppe a) ist bevorzugt ein Phospholipid wie z. B. Phosphatidylcholin, Phosphatidylethanolamin, Phosphatidylglycerol, Phosphatidsäure oder Sphingomyelin. Das Tetraetherlipid aus der Gruppe c) entspricht einer der folgenden Formeln:
The amphiphile of group a) is preferably a phospholipid such as. As phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylglycerol, phosphatidic acid or sphingomyelin. The tetraether lipid from group c) corresponds to one of the following formulas:

mit S1 und S2 Kopfgruppen, die in der Deutschen Patentanmeldung 100 65 561.0 beschrieben sind.with S 1 and S 2 head groups, which are described in German patent application 100 65 561.0.

Das Lipid der Gruppe d) ist bevorzugt ein Polyethylenglycol-Lipid (PEG-Lipid).The group d) lipid is preferably a polyethylene glycol lipid (PEG lipid).

In einer besonderen Ausführungsform der Erfindung kann das Lipid der Gruppe e) mit einem Peptid gekoppelt sein. In a particular embodiment of the invention, the lipid of group e) can be treated with a Be coupled peptide.  

Die Liposomen für die erfindungsgemäßen Mittel werden üblicherweise durch Homogenisierung, Extrusion, Detergenz-Dialyse, Beschallung, Dehydratisierung/­ Rehydratisierung, oder Ethanol-Injektion hergestellt.The liposomes for the agents according to the invention are usually by Homogenization, extrusion, detergent dialysis, sonication, dehydration / Rehydration, or ethanol injection.

Sie weisen bevorzugt eine oder mehrere Lipiddoppelschichten auf und haben eine Partikel- Grösse zwischen 10 nm und 5 µm, bevorzugt zwischen 50 nm und 1 µm.They preferably have one or more lipid bilayers and have a particle Size between 10 nm and 5 µm, preferably between 50 nm and 1 µm.

Eine Dehydratisierung der Liposomen erfolgt durch Lyophilisation oder eine andere Trocknungsmethode.Liposomes are dehydrated by lyophilization or another Drying method.

Das Verabreichen des Mittels erfolgt üblicherweise nach Zusatz von geeigneten Hilfsstoffen auf folgenden Wegen: oral, enteral, parenteral, intravenös, intraarteriell, intramuskulär, topisch, subcutan, pulmonal oder intraperitoneal.The agent is usually administered after the addition of suitable auxiliaries in the following ways: oral, enteral, parenteral, intravenous, intraarterial, intramuscular, topically, subcutaneously, pulmonally or intraperitoneally.

Das pharmazeutische Mittel, kann auch aus einer Formulierung der Verbindungen I in einer Dispersion aus einer mit Wasser nicht mischbaren Flüssigkeit in einer kontinuierlichen Wasserphase bestehen. Die mit Wasser nicht mischbare Flüssigkeit ist bevorzugt ein natürliches oder synthetisches Öl. Zur Stabilisierung können ferner oberflächenaktive Substanzen zugesetzt werden.The pharmaceutical agent can also be obtained from a formulation of the compounds I in a Dispersion from a water-immiscible liquid in a continuous Water phase exist. The water-immiscible liquid is preferably a natural or synthetic oil. Surface stabilizers can also be used for stabilization Substances are added.

Auch dieses letztgenannte Mittel kann nach Zusatz von geeigneten Hilfsstoffen auf folgenden Wegen verabreicht werden: oral, enteral, parenteral, intravenös, intraarteriell, intramuskulär, topisch, subcutan, pulmonal oder intraperitoneal.This last-mentioned agent can also have the following after the addition of suitable auxiliary substances Because of being administered: orally, enterally, parenterally, intravenously, intraarterially, intramuscularly, topically, subcutaneously, pulmonally or intraperitoneally.

Das pharmazeutische Mittel, bestehend aus einer Lipidschicht, in die die Verbindung I eingelagert ist, läßt sich vorteilhaft auch als Beschichtung auf medizinischen Geräten oder Implantaten einsetzen.The pharmaceutical composition consisting of a lipid layer in which the compound I is stored, can also advantageously as a coating on medical devices or Insert implants.

Die Verwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Mittel erfolgt bevorzugt als antiinflammatorisches, als immunsupressives und/oder als antiallergisches Therapeutikum.The pharmaceutical compositions according to the invention are preferably used as anti-inflammatory, as an immunosuppressive and / or as an anti-allergic therapeutic.

Die liposomalen Formulierungen der Verbindungen I sind dadurch gekennzeichnet, daß sie in die Matrix des Liposoms eingebaut werden. Durch den Einbau in Liposomen läßt sich die Halbwertszeit der Verbindung im Körper deutlich erhöhen. Darüber hinaus bietet die liposomale Formulierung der Verbindungen I eine Möglichkeit, die Freisetzung der Verbindungen zeitlich zu kontrollieren ("controlled release"), was lokale Überdosierungen vermeidet. So kann die cardiotoxische Wirkung der Verbindungen gemäß der Erfindung durch eine liposomale Formulierung vermieden werden. Des weiteren bieten Liposomen eine Möglichkeit der Zielsteuerung von Wirkstoffen ("Targeting"). The liposomal formulations of the compounds I are characterized in that they are in the matrix of the liposome can be incorporated. By incorporation into liposomes, the Significantly increase the half-life of the compound in the body. In addition, the Liposomal formulation of the compounds I a way to release the Controlling connections in time ("controlled release"), which indicates local overdoses avoids. So the cardiotoxic effect of the compounds according to the invention can be avoided by a liposomal formulation. Furthermore, liposomes offer one Possibility of targeting active ingredients ("targeting").  

Insgesamt liegen die Vorteile einer liposomalen Formulierung der Verbindungen I in der Steigerung der Effektivität des Medikaments, der längeren Wirksamkeit und der geringeren Nebenwirkung.Overall, the advantages of a liposomal formulation of the compounds I are in the Increasing the effectiveness of the drug, the longer effectiveness and the lower Side effect.

Eine weitere Anwendungsmöglichkeit der neuen Derivate besteht in der Inkorporation in Beschichtungen.Another application of the new derivatives is incorporation in Coatings.

Implantate (Stents, Prothesen) bergen das Risiko von Entzündungs- und Abstoßungsreaktionen, zur Steigerung der Biokompatibilität können die Oberflächen mit Lipiden beschichtet werden. Gemäß der Erfindung wird das MPL-Palmitat in Beschichtungen, bestehend aus Lipiden, auf die Oberfläche von Implantaten integriert und kann vor Ort als entzündungshemmende Substanz wirken. Für Lipidschichten ist prinzipiell die gleiche Release-Charakteristik gegeben wie für Liposomen. Besonders vorteilhaft ist es, Tetraetherlipid-Derivate zu benutzen, da sie besonders stabile Schichten ausbilden und sich deshalb hervorragend für Beschichtungen eignen. Implants (stents, prostheses) carry the risk of inflammation and Rejection reactions, to increase the biocompatibility, the surfaces with Lipids are coated. According to the invention, the MPL palmitate in Coatings consisting of lipids, integrated on the surface of implants and can act as an anti-inflammatory substance on site. In principle for lipid layers the same release characteristics as for liposomes. It is particularly advantageous To use tetraether lipid derivatives because they form particularly stable layers and themselves therefore ideal for coatings.  

Die Erfindung soll nachfolgend durch Anwendungsbeispiele näher erläutert werden.The invention will be explained in more detail below by application examples.

1. Synthese von Methylprednisolon-21-palmitat (MPL-P)1. Synthesis of methylprednisolone-21-palmitate (MPL-P)

250 mg (668 µmol) MPL werden unter Stickstoff in 10 ml trockenem Pyridin gelöst und auf 0-4°C abgekühlt. Nach Zugabe von 182 µl (601 µmol) Palmitoylchlorid wird die Lösung 18 h bei 4°C gerührt. Das Lösungsmittel wird verdampft und der Rückstand mit 50 ml Ethanol/Wasser (4 : 1) aufgenommen und wieder einrotiert. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie mit CHCl3/EtOAc (1 : 1) gereinigt. Man erhält 262 mg MPL-P (71%). Analytik:
250 mg (668 µmol) MPL are dissolved in 10 ml dry pyridine under nitrogen and cooled to 0-4 ° C. After adding 182 μl (601 μmol) palmitoyl chloride, the solution is stirred at 4 ° C. for 18 h. The solvent is evaporated and the residue is taken up in 50 ml of ethanol / water (4: 1) and concentrated again. The crude product is purified by chromatography with CHCl 3 / EtOAc (1: 1). 262 mg of MPL-P (71%) are obtained. analytics:

  • - MS (DEI+); m/z (%) [Fragment]: 613 (45) [M+], 357 (13) [M+-C16H32O2 (Palmitinsäure)], 256 (51) [C16H32O2 + (Palmitinsäure)], 136 (100), 135 (100).- MS (DEI + ); m / z (%) [fragment]: 613 (45) [M + ], 357 (13) [M + -C 16 H 32 O 2 (palmitic acid)], 256 (51) [C 16 H 32 O 2 + (Palmitic acid)], 136 (100), 135 (100).
  • - IR (Film): = 3400 cm-1 (breit, OH, H2O), 2923, 2853 (aliph. C-H), 1722 (C=O, Ester und gesättigte Ketogruppe), 1657 (C=O, α,β,α'β'-ungesättigt), 1613 (C=C, α,β,α'β'-ungesättigt)- IR (film): = 3400 cm -1 (broad, OH, H 2 O), 2923, 2853 (aliph. CH), 1722 (C = O, ester and saturated keto group), 1657 (C = O, α, β, α'β'-unsaturated), 1613 (C = C, α, β, α'β'-unsaturated)
2. Herstellung von Phosphatidylcholin-Liposomen, die MPL-P enthalten2. Preparation of phosphatidylcholine liposomes containing MPL-P

MPLP wird mit Phosphatidylcholin (PC; aus Eiweiß) in wechselnden Verhältnissen gemischt und in 1 ml Chloroform : Methanol 1 : 1 (v/v) aufgenommen (CHCl3 : MeOH). Die Gesamtlipidmenge (PC + MPLP) beträgt 8 mg, der MPLP-Anteil beträgt maximal 0,8 mg (10 Massen-Prozent). Nach Hinzufügen von einigen Glasperlen wird die Mischung in einem Glaskolben am Rotationsverdampfer eingedampft, so dass ein transparenter Lipidfilm entsteht. Nach Zugabe von 1 ml Puffer (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7,4) wird der Lipidfilm unter Rotation des Glaskolbens über Nacht hydratisiert. Die Lipiddispersion wird kurz im Ultraschallbad beschallt und anschließend durch eine Polycarbonat-Membran extrudiert (Porengröße 200 nm). Dabei entstehen Liposomen mit einer mittleren Größe von ca. 200 nm (Messung durch quasi-elastische Lichtstreuung).MPLP is mixed with phosphatidylcholine (PC; from protein) in changing ratios and taken up in 1 ml chloroform: methanol 1: 1 (v / v) (CHCl 3 : MeOH). The total amount of lipid (PC + MPLP) is 8 mg, the maximum MPLP content is 0.8 mg (10% by mass). After adding a few glass beads, the mixture is evaporated in a glass flask on a rotary evaporator, so that a transparent lipid film is formed. After adding 1 ml of buffer (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.4), the lipid film is hydrated overnight while rotating the glass flask. The lipid dispersion is briefly sonicated in an ultrasonic bath and then extruded through a polycarbonate membrane (pore size 200 nm). This results in liposomes with an average size of approx. 200 nm (measurement by quasi-elastic light scattering).

3. Analyse der Inkorporationseffizienz von MPL-P in Phosphatidylcholin-Liposomen3. Analysis of the incorporation efficiency of MPL-P in phosphatidylcholine liposomes

Um die Liposomen von nicht eingebautem MPL-P zu trennen werden sie einer Größenausschlußchromatographie an Sephadex G75 unterzogen und in 1 ml-Fraktionen aufgefangen (Laufpuffer: Liposomenpuffer, s. o.; Gelbett 1 cm ∅, 25 cm Länge). Der Gehalt an PC in den Fraktionen wird durch einen enzymatischen Cholin-Test bestimmt (PAP 150, Biomerieux GmbH, Nürtingen). Als Liposomen-enthaltende Fraktionen werden die Fraktionen angenommen, die den größten PC-Anteil aufweisen. Zur Bestimmung des MPL-P- Gehaltes werden von den Liposomen-enthaltenden Fraktionen jeweils 100 µl entnommen und mit dem 4-fachen-Volumen an CHCl3 : MeOH 2 : 1 (w/v) extrahiert. Die Extrakte werden eingeengt und zusammen mit einer Eichreihe von MPL-P auf eine HPTLC-Platte (Merck, Darmstadt) aufgetragen. Die Entwicklung erfolgt im Laufmittel CHCl3 : Ethylactat 1 : 1. Anschließend wird die Platte in eine Färbelösung gedippt (3% (w/v) Kupferacetat; 8% (v/v) Phosphorsäure) und 15 min bei 180°C erhitzt. Die HPTLC-Platte wird mit einem Computer- Scanner (Epson Perfection 610, Düsseldorf) eingescannt und die Banden werden einer Graustufenanalyse unterzogen. Der MPL-P-Gehalt der Proben ergibt sich aus dem Vergleich des Graustufenwertes seiner Bande mit den Banden der Eichreihe.In order to separate the liposomes from non-incorporated MPL-P, they are subjected to size exclusion chromatography on Sephadex G75 and collected in 1 ml fractions (running buffer: liposome buffer, see above; gel bed 1 cm cm, 25 cm long). The PC content in the fractions is determined by an enzymatic choline test (PAP 150, Biomerieux GmbH, Nürtingen). The fractions which have the largest PC content are assumed to be fractions containing liposomes. To determine the MPL-P content, 100 μl are taken from the fractions containing liposomes and extracted with 4 times the volume of CHCl 3 : MeOH 2: 1 (w / v). The extracts are concentrated and applied together with a calibration series from MPL-P to an HPTLC plate (Merck, Darmstadt). Development takes place in the mobile phase CHCl 3 : ethyl acetate 1: 1. Then the plate is dipped in a coloring solution (3% (w / v) copper acetate; 8% (v / v) phosphoric acid) and heated at 180 ° C for 15 min. The HPTLC plate is scanned with a computer scanner (Epson Perfection 610, Düsseldorf) and the bands are subjected to a grayscale analysis. The MPL-P content of the samples is obtained by comparing the gray scale value of its band with the bands of the calibration series.

Aus der Zusammensetzung der Liposomen läßt sich der Gewichtsanteil des MPL-P im Liposom berechnen. Die Inkorporationseffizienz ergibt sich als Quotient des gefundenen durch den theoretischen MPL-P-Gehalt des Liposoms. In Abb. 1 ist der gefundene MPL-P- Gehalt in Abhängigkeit vom theoretischen MPL-P-Gehalt in verschiedenen nach 2.1. hergestellten Liposomen dargestellt. MPL-P läßt sich bei einem Massenverhältnis MPL-P : PC von 2 : 98 mit einer Inkorporationseffizienz von 100% in PC-Liposomen einbauen. Bei einem Massenverhältnis MPL-P : PC von 10 : 90 sinkt die Inkorporationseffizienz auf 55%. Es sind Liposomen aus PC darstellbar, die mindestens 5, 5 Massen-% MPL-P enthalten.The weight fraction of the MPL-P in the liposome can be calculated from the composition of the liposomes. The incorporation efficiency results as the quotient of the found by the theoretical MPL-P content of the liposome. Fig. 1 shows the MPL-P content found depending on the theoretical MPL-P content in different according to 2.1. prepared liposomes shown. MPL-P can be built into PC liposomes at a mass ratio of MPL-P: PC of 2: 98 with an incorporation efficiency of 100%. With an MPL-P: PC mass ratio of 10:90, the incorporation efficiency drops to 55%. Liposomes made of PC can be represented which contain at least 5.5% by mass of MPL-P.

Durch Zusatz von Tetraetherlipid-Derivaten (5 Massen%)läßt sich die Inkorporationseffizienz bei einem MPL-P : PC-Verhältnis von 8 : 92 von 60% auf 85% steigern (siehe Abb. 1).By adding tetraether lipid derivatives (5% by mass), the incorporation efficiency can be increased from 60% to 85% at an MPL-P: PC ratio of 8:92 (see Fig. 1).

4. Biologische Wirksamkeit von MPL-P4. Biological effectiveness of MPL-P

Die Wirkung von MPL-P als immunsupressive Substanz wurde in einem Tierversuch überprüft. T-Lymphocyten lassen sich durch Glucocortcoide wie z. B. Dexamethason in die Apoptose führen. Männlichen C3H-Mäusen (4 Monate alt, ca. 20 g Gewicht) wurden 200 µg MPLP intraperitoneal appliziert. Das MPL-P lag in einer liposomalen Formulierung aus PC mit einem Gehalt von 3 mol% MPL-P vor und das Injektionsvolumen betrug 200 µl. Nach 48 h wurden die Mäuse getötet, die Thymus-Drüse entfernt und die Thymocyten isoliert. T-Lymphocyten wurden durch CD4- und CD8-spezifische Antikörper markiert und in einer FACS-Analyse gezählt (vgl. Sentman et al., Cell, 67, 879-888). Der Anteil der lebenden CD4/CD-8-positiven Zellen an den insgesamt gezählten Zellen ergibt die Überlebensrate der T-Lymphocyten. In Abb. 2 ist die Überlebensrate der T-Lymphocyten einer mit MPL-P- behandelten Maus dem Normalwert einer unbehandelten Maus gegenübergestellt. Das deutliche Herabsenken der T-Lymphocyten-Rate in der MPL-Pbehandelten Maus spiegelt deutlich den immunsupressiven Effekt von MPL-P wider (siehe Abb. 2).The effect of MPL-P as an immunosuppressive substance was checked in an animal experiment. T lymphocytes can be glucocortcoids such as. B. lead dexamethasone into apoptosis. Male C3H mice (4 months old, approx. 20 g in weight) were administered 200 µg MPLP intraperitoneally. The MPL-P was in a liposomal formulation made of PC with a content of 3 mol% MPL-P and the injection volume was 200 µl. After 48 hours the mice were sacrificed, the thymus removed and the thymocytes isolated. T lymphocytes were labeled by CD4 and CD8 specific antibodies and counted in a FACS analysis (see Sentman et al., Cell, 67, 879-888). The proportion of living CD4 / CD-8 positive cells in the total number of cells counted gives the survival rate of the T lymphocytes. In Fig. 2, the survival rate of the T lymphocytes of a mouse treated with MPL-P is compared to the normal value of an untreated mouse. The significant lowering of the T-lymphocyte rate in the MPL-P-treated mouse clearly reflects the immunosuppressive effect of MPL-P (see Fig. 2).

Claims (23)

1. Methylprednisolon-Derivat der Formel I
wobei R eine Monocarbonsäure mit einer unverzweigten Alkylkette der Länge C9 bis C19 ist.
1. Methylprednisolone derivative of the formula I.
where R is a monocarboxylic acid with an unbranched alkyl chain of length C9 to C19.
2. Methylprednisolon-21-Palmitat der Formel Ia
2. Methylprednisolone-21-palmitate of the formula Ia
3. Pharmazeutisches Mittel, bestehend aus einer liposomalen Formulierung der Verbindungen I oder Ia zusammen mit einer oder mehreren Komponenten aus einer oder mehreren der folgenden Gruppen:
  • a) natürliche, halbsynthetische oder vollsynthetische Amphiphile
  • b) Cholesterin
  • c) Tetraetherlipid-Derivate
  • d) Lipide mit hydrophilen Polymeren als Kopfgruppe
  • e) Lipide, die einen Liganden für die Zielsteuerung des Liposoms enthalten.
3. Pharmaceutical composition consisting of a liposomal formulation of the compounds I or Ia together with one or more components from one or more of the following groups:
  • a) natural, semi-synthetic or fully synthetic amphiphiles
  • b) cholesterol
  • c) tetraether lipid derivatives
  • d) lipids with hydrophilic polymers as head group
  • e) Lipids containing a ligand for targeting the liposome.
4. Mittel nach Anspruch 3, bei dem das Mol-Verhältnis von I oder Ia zu den Lipiden der Gruppen a)-e) 1 : 100 bis 1 : 1 beträgt.4. Composition according to claim 3, wherein the molar ratio of I or Ia to the lipids of Groups a) -e) is 1: 100 to 1: 1. 5. Mittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Amphiphil der Guppe a) ein Phospholipid wie z. B. Phosphatidylcholin, Phosphatidylethanolamin, Phosphatidylglycerol, Phosphatidsäure oder Sphingomyelin ist.5. Composition according to claim 3, characterized in that the amphiphile of group a) Phospholipid such as e.g. B. phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylglycerol, Is phosphatidic acid or sphingomyelin. 6. Mittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Tetraetherlipid aus der Gruppe c) einer der folgenden allgemeinen Formeln entspricht:
mit S1 und S2 Kopfgruppen, die in der Deutschen Patentanmeldung 100 65 561.0 beschrieben sind.
6. Composition according to claim 3, characterized in that the tetraether lipid from group c) corresponds to one of the following general formulas:
with S 1 and S 2 head groups, which are described in German patent application 100 65 561.0.
7. Mittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Lipid der Gruppe d) ein Polyethylenglycol-Lipid (PEG-Lipid) ist.7. Composition according to claim 3, characterized in that the lipid of group d) Is polyethylene glycol lipid (PEG lipid). 8. Mittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Lipid der Gruppe e) mit einem Peptid gekoppelt ist.8. Composition according to claim 3, characterized in that the lipid of group e) with a Peptide is coupled. 9. Mittel nach Anspruch 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass die Liposomen durch Homogenisierung, Extrusion, Detergenz-Dialyse, Beschallung, Dehydratisierung/­ Rehydratisierung oder Ethanol-Injektion hergestellt sind.9. Composition according to claims 1-8, characterized in that the liposomes by Homogenization, extrusion, detergent dialysis, sonication, dehydration / Rehydration or ethanol injection are made. 10. Mittel nach Anspruch 1-9, bei dem die Liposomen eine oder mehrere Lipiddoppelschichten aufweisen.10. Composition according to claim 1-9, wherein the liposomes one or more Have lipid bilayers. 11. Mittel nach Anspruch 1-10, bei dem die Liposomen eine Partikel-Grösse zwischen 10 nm und 5 µm aufweisen.11. Composition according to claim 1-10, wherein the liposomes have a particle size between 10 nm and have 5 µm. 12. Mittel nach Anspruch 1-11, bei dem die Liposomen eine Partikel-Grösse zwischen 50 nm und 1 µm aufweisen.12. Composition according to claim 1-11, wherein the liposomes have a particle size between 50 nm and have 1 µm. 13. Mittel nach Anspruch 1-12, bei dem die Liposomen durch Lyophilisation oder eine andere Trocknungsmethode dehydratisiert werden.13. Composition according to claim 1-12, wherein the liposomes by lyophilization or another Drying method can be dehydrated. 14. Anwendung des Mittels nach Anspruch 1-12 nach Zusatz von geeigneten Hilfsstoffen durch orale, enterale, parenterale, intravenöse, intraarterielle, intramuskuläre, topische, subcutane, pulmonale oder intraperitoneale Verabreichung.14. Use of the agent according to claims 1-12 after the addition of suitable auxiliaries by oral, enteral, parenteral, intravenous, intraarterial, intramuscular, topical, subcutaneous, pulmonary or intraperitoneal administration. 15. Pharmazeutisches Mittel, bestehend aus einer Formulierung der Verbindungen aus Anspruch 1 und 2 in einer Dispersion aus einer mit Wasser nicht mischbaren Flüssigkeit in einer kontinuierlichen Wasserphase. 15. Pharmaceutical composition consisting of a formulation of the compounds Claims 1 and 2 in a dispersion of a water-immiscible liquid in a continuous water phase.   16. Mittel nach Anspruch 15, bei dem die mit Wasser nicht mischbare Flüssigkeit ein natürliches oder synthetisches Öl ist.16. A composition according to claim 15, wherein the water-immiscible liquid is natural or synthetic oil. 17. Mittel nach Anspruch 15 und 16, dem zur Stabilisierung oberflächenaktive Substanzen zugesetzt sind.17. Composition according to claim 15 and 16, the surface-active substances for stabilization are clogged. 18. Anwendung des Mittels nach Anspruch 15-17 nach Zusatz von geeigneten Hilfsstoffen durch orale, enterale, parenterale, intravenöse, intraarterielle, intramuskuläre, topische, subcutane, pulmonale oder intraperitoneale Verabreichung.18. Use of the agent according to claim 15-17 after the addition of suitable auxiliaries by oral, enteral, parenteral, intravenous, intraarterial, intramuscular, topical, subcutaneous, pulmonary or intraperitoneal administration. 19. Pharmazeutisches Mittel, bestehend aus einer Lipidschicht, in die Verbindungen aus Anspruch 1 und 2 eingelagert sind, wobei die Beschichtung auf medizinische Geräte oder Implantate aufgebracht wird.19. Pharmaceutical agent, consisting of a lipid layer, in the compounds Claims 1 and 2 are stored, the coating on medical devices or Implants is applied. 20. Mittel nach Anspruch 19, bei dem die Lipidschicht Tetraetherlipid-Derivate gemäß Anspruch 6 enthält.20. Composition according to claim 19, wherein the lipid layer according to tetraether lipid derivatives Claim 6 contains. 21. Verwendung der pharmazeutischen Mittel aus den Ansprüchen 1-20 als antiinflammatorisches Therapeutikum.21. Use of the pharmaceutical compositions from claims 1-20 as anti-inflammatory therapeutic. 22. Verwendung der pharmazeutischen Mittel aus den Ansprüchen 1-20 als immunsupressives Therapeutikum.22. Use of the pharmaceutical compositions from claims 1-20 as immunosuppressive therapeutic. 23. Verwendung der pharmazeutischen Mittel aus den Ansprüchen 1-20 als antiallergisches Therapeutikum.23. Use of the pharmaceutical agent from claims 1-20 as an anti-allergic Therapeutic.
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