DE10100807C2 - Verfahren zur Analyse von hartem Gewebe - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Analyse von hartem Gewebe.

Zur Analyse von hartem Gewebe, beispielsweise Hornhaut, Nägeln, Knochengewebe oder Zahngewebe, ist es bekannt, dies histologisch zu analysieren. Dabei wird das Gewebe eingefärbt, in dünne Gewebeschnitten unterteilt und anschließend mikroskopisch analysiert.

Aus der Veröffentlichung "Longitudinal melanonychia caused by Trichophyton rubrum" von C. Perrin und R. Baran, Journal of the American Academy of Dermatology, Volume 31, Number 2, Part 2, August 1994, Seite 312 bis 316 ist beispielsweise bekannt, eine Probe eines pilzbefallenen Nagels durch teilweisen Abriss des Nagels und anschließendes Einbetten in einen Kunststoff zu gewinnen. Daran schließt sich eine histologische Untersuchung an.

Aus der DE 195 23 581 A1 ist es bekannt, Proben von Zellen, beispielsweise von Körperoberflächen, insbesondere von Hautproben von der Hautoberfläche, auf einen gefärbten oder farbigen durchsichtigen oder durchscheinenden Klebefilm aufzunehmen und anschließend optisch oder elektronisch zu untersuchen.

Die DE 198 08 450 A1 beschreibt eine Vorrichtung zum Antreiben eines einen Schaft und einen beispielsweise schleifenden Werkzeugkopf aufweisenden Rotationswerkzeuges, die insbesondere für die Nagelpflege verwendet werden kann.

Nachteilig an der histologischen Untersuchung ist der große personelle Aufwand und Anzahl kostspieliger Geräte, die zur Aufbereitung mikroskopisch analysierbarer Gewebeschnitten notwendig ist. Zudem ist das histologische Verfahren zeitaufwendig. So muß das Gewebe einer Einfärbung so lange unterzogen werden, bis alle zu analysierenden Gewebeschichten eingefärbt sind. Besonders bei dickeren Gewebeproben ist hierfür meist eine beträchtlicher Zeitaufwand einzurechnen.

In seiner Anwendung zur diagnostischen Abklärung von Nagelpilz weist das histologische Verfahren ferner den Nachteil auf, daß zur Gewinnung der Gewebeprobe lediglich distale Nagelanteile abgetrennt werden können. Zur Untersuchung proximaler Nagelteile ist als Gewebeprobe der gesamte Nagel zu entfernen, was für den Patienten schmerzhaft ist.

Dieser Nachteil haftet auch anderen Untersuchungsmethoden zur diagnostischen Abklärung von Nagelpilz an, beispielsweise bei der Anlage von Pilzkulturen. Letztere Methode weist zusätzlich den Nachteil auf, daß bis zu 50% der Pilzkulturen nicht anwachsen. Zudem sind die letztgenannten Untersuchungsmethoden ebenfalls Zeit- und personalaufwendig.

Vor diesem Hintergrund liegt der Erfindung das technische Problem zugrunde, ein rascheres und einfacheres Verfahren zur Analyse eines harten Gewebes zu schaffen.

Dieses technische Problem wird gelöst, indem das Gewebe mittels eines Fräsers in Gewebeteilchen abgetragen wird und die Gewebeteilchen zytologisch analysiert werden.

In einer Ausgestaltung der zytologischen Analyse ist vorgesehen, dass die Gewebeteilchen mit einer Färbemethode angefärbt und mikroskopisch analysiert werden.

Es hat sich gezeigt, daß durch den Abtrag mittels des Fräsers Gewebeteilchen abgetragen werden, die rasch eingefärbt werden können und ohne eine Teilung in Gewebeschnitten mikroskopisch analysiert werden können.

Durch den Abtrag mittels des Fräsers wird das harte Gewebe in einzelne Zellen, Zellbruchstücke und kleinere Zellgruppen zerteilt, die einer zytologischen Untersuchung ohne weitere Unterteilungsschritte zugeführt werden können.

Damit ist es möglich, auch bei hartem Gewebe die bisher nur für zelluläres Material weicher Gewebeschichten oder einzelner in Flüssigkeiten vorhandener Zellen angewandten zytologischen Verfahren anzuwenden. Bisher war es lediglich möglich, zytologisch analysierbares Material mittels Abstrichen bei weichen Gewebeschichten (Gynäkologie, Gastroenterologie, Dermatologie) oder mittels Filtration bei in Flüssigkeiten befindlichen Zellen (Urologie, Innere Medizin bei Lavagen, Chirurgie) zu gewinnen.

Wie auch bei den bekannten zytologischen Methoden, werden auch bei dem erfindungsgemäßen Verfahren die Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen auf einen durchsichtigen Objektträger gelegt und eingefärbt. Durch ihre hohe Transparenz können die Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen mikroskopisch gut untersucht werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren läßt sich beispielsweise gut für die diagnostische Abklärung von Nagelpilz einsetzen. Mittels des Fräsers können gezielt und schmerzfrei einzelne Nagelbereiche abgetragen werden. Dabei können auch proximale Nagelbereiche abgetragen werden.

Durch die selektive Untersuchung einzelner Nagelbereiche wird die Diagnostik des Nagelpilzes, auch bei schwieriger poximaler und tiefer Lokalisierung, genauer.

Vor allen Dingen kann mit dem erfindungsgemäßen Verfahren die Analyse der entnommen Proben rasch und mit einfachen Mitteln erfolgen, so daß die Möglichkeit einer Vorort- Analyse besteht.

Auch lassen sich mit dem erfindungsgemäßen Verfahren gezielte Analysen von Lufteinschlüssen in Nägeln einfach durchführen. Hierzu wird der Nagel an diesen Stellen abgefräst und zytologisch untersucht. Damit kann festgestellt werden, ob in den Luftpolstern Sporen vorhanden sind, die dann mittels mechanischer Methoden, beispielsweise durch einen Läser oder einen Fräser entfernt werden müssen, da durch das Luftpolster keine Medikamente zu den Sporen vordringen.

Ebenso kann das erfindungsgemäße Verfahren zur Analyse von Zahnpartikeln verwendet werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann ferner in der Tiermedizien, beispielsweise zur Untersuchung von Klauenerkrankungen bakterieller oder mykotischer Art eingesetzt werden.

Neben der Möglichkeit, Gewebeproben mittels des erfindungsgemäßen Verfahren direkt zu entnehmen, kann das erfindungsgemäße Verfahren auch dazu eingesetzt werden, bereits abgelöste Gewebe, beispielsweise einen bereits gezogenen Nagel oder Nagelteile, zu untersuchen.

Besonders vorteilhaft für das erfindungsgemäße Verfahren hat sich eine Größe der Gewebeteilchen von 1 bis 50 µm, insbesondere von 10 bis 30 µm, in ihrer längsten Erstreckung gezeigt. Derartige Gewebeteilchen werden beispielsweise durch den Einsatz herkömmlicher Diamantfräser, wie sie aus der Fußpflege oder der Zahnmedizin bekannt sind, erreicht.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann besonders rasch durchgeführt werden, wenn die durch den Fräsvorgang abgelösten Gewebeteilchen auf einer Haftfläche eines Objektträgers aufgefangen werden. Es hat sich gezeigt, daß die Gewebeteilchen durch die Rotation des Fräskopfes beim Fräsvorgang in eine Hauptrichtung weggeschleudert werden. Bei einem in dieser Hauptrichtung angeordneten Objektträger, der eine dem Fräser zugewandte Haftfläche aufweist, bleibt eine Mehrzahl der weggeschleuderten Gewebeteilchen an dieser Haftfläche kleben. Dieser Objektträger kann dann direkt zur Durchführung der zytologischen Untersuchung eingesetzt werden. Hierzu werden die auf der Haftfläche befindlichen Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen eingefärbt und anschließend direkt auf dem Objektträger mikroskopisch untersucht.

Als Objektträger können herkömmliche, für mikroskopische Untersuchungen verwendete, durchsichtige Objektträger verwendet werden. Diese werden für den Einsatz in der oben beschriebenen bevorzugten Ausgestaltung mit einem glasklaren Klebelack bestrichen. Ebenso können bereits mit einer haftenden Oberfläche ausgerüstete Objektträger verwendet werden.

Schließlich kann als Objektträger auch ein Klebefilm verwendet werden. Dieser wird, nachdem durch ihn die abgelösten Gewebeteilchen aufgefangen wurden, zur zytologischen Untersuchung verwendet, indem er auf einen Objektträger gelegt wird, eingefärbt und mikroskopisch untersucht wird.

Alternativ können die durch den Fräsvorgang abgelösten Gewebeteilchen in einer Flüssigkeit aufgefangen werden. Hierzu kann der Fräsvorgang beispielsweise über einem Flüssigkeitsbecken durchgeführt werden. Die Verwendung einer Flüssigkeit zum Auffangen der Gewebeteilchen bietet den weiteren Vorteil, daß die Gewebeteilchen bis zur zytologischen Untersuchung in dieser Flüssigkeit gelagert werden können.

Bei in Flüssigkeit gelagerten Gewebeteilchen können diese durch Hitze oder Acteon auf dem Objektträger fixiert werden und anschließend zytologisch untersucht werden.

Nachfolgend wird das erfindungsgemäße Verfahren anhand einer lediglich ein Anwendungsbeispiel darstellenden Zeichnung näher erläutert. Die einzige Figur zeigt dabei einen menschlichen Zeh, bei dem das erfindungsgemäße Verfahren zur Diagnose eines Nagelpilz angewendet wird.

In der Figur ist der vordere Teil eines menschlichen Zehs 1 dargestellt. Dieser weist einen Nagel 2 auf. Ein ebenfalls dargestellter Fräser 3 weist einen Diamantfräskopf 4 auf. Neben den Zeh 1 wird ein durchsichtiger Objektträger 5 gehalten, dessen dem Zeh 1 zugewandte Oberfläche als Klebefläche ausgebildet ist.

Zur Abtragung des harten Nagelgewebes wird der in Richtung des Pfeils A drehende Diamantfräskopf 4 an der zu analysierenden Stelle an den Nagel 2 gehalten. Dabei werden durch den Fräsvorgang Gewebeteilchen 6 abgelöst. Diese werden durch die rotierende Fräsbewegung in Richtung des Pfeils B von der Frässtelle weggeschleudert. Der in Richtung des Pfeils B neben den Zeh 1 gehaltene Objektträger 5 fängt die Gewebeteilchen 6 mit seiner Klebefläche auf. Dadurch wird auf dem Objektträger eine dünne, aus einzelnen Zellen, Zellbruchstücken oder kleineren Zellgruppen gebildete Schicht gebildet.

Zur Analyse der abgetragenen Gewebeteilchen werden diese eingefärbt und mikroskopisch analysiert. Zwar werden durch die Fräsung die Zelllagen und Zellschichten sowie längliche Pilzhyphen und andere Gebilde teils zerstört, trotzdem können die anders wie die üblichen histologischen aussehenden Präparate zur eindeutigen Identifikation des Pilzbefalls verwendet werden.

Ein Vergleich der mit dem zuvor beschriebenen Verfahren ermittelten Befunde mit histologischen Befunden des gleichen Nagels hat eine fast 100% Übereinstimmung der Befunde ergeben. Jedoch konnten die Befunde, wie oben dargestellt, mit dem erfindungsgemäßen Verfahren mit weniger Verfahrensschritten und rascher durchzuführenden Schritten, insbesondere hinsichtlich der Färbung, Einbettung, mikrotomischen Aufbereitung, durchgeführt werden, als die bekannten histologischen Untersuchungsverfahren.

Claims (6)

1. Verfahren zur Analyse eines harten Gewebes, dadurch gekennzeichnet, daß das zu analysierende Gewebe mittels eines Fräsers (3) in Gewebeteilchen (6) abgetragen wird und daß die Gewebeteilchen (6) zytologisch analysiert werden.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Gewebeteilchen (6) mit einer Färbemethode angefärbt und mikroskopisch analysiert werden.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die längste Erstreckung der abgetragenen Gewebeteilchen (6) 1 bis 50 µm, insbesondere 10 bis 30 µm, beträgt.

4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die durch den Fräsvorgang abgelösten Gewebeteilchen (6) auf einer Haftfläche eines Objektträgers (5) aufgefangen werden.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Objektträger ein Klebefilm ist.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die abgetragenen Gewebeteilchen in einer Flüssigkeit aufgefangen werden.