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DE1051273B - Verfahren zur Trennung des in einem Proteinhydrolysat enthaltenen Aminosaeuregemisches - Google Patents

Verfahren zur Trennung des in einem Proteinhydrolysat enthaltenen Aminosaeuregemisches

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Publication number
DE1051273B
DE1051273B DEF22762A DEF0022762A DE1051273B DE 1051273 B DE1051273 B DE 1051273B DE F22762 A DEF22762 A DE F22762A DE F0022762 A DEF0022762 A DE F0022762A DE 1051273 B DE1051273 B DE 1051273B
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
amino acid
acid
protein hydrolyzate
amino acids
vacuo
Prior art date
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Pending
Application number
DEF22762A
Other languages
English (en)
Inventor
Dr Friedrich Weygand
Dr Rudolf Geiger
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
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Filing date
Publication date
Priority to NL102770D priority Critical patent/NL102770C/xx
Priority to NL226456D priority patent/NL226456A/xx
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Priority to DEF22762A priority patent/DE1051273B/de
Priority to US725492A priority patent/US3030380A/en
Priority to CH5793258A priority patent/CH368188A/de
Priority to GB11129/58A priority patent/GB886753A/en
Priority to FR1206667D priority patent/FR1206667A/fr
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Description

DEUTSCHES
Zur Isolierung von optisch aktiven Aminosäuren aus Proteinhydrolysaten sind verschiedene Methoden angegeben worden.
Ganz wenige Aminosäuren können als solche direkt aus Hydrolysaten isoliert werden, z. B. Glutaminsäure aus der konzentrierten salzsauren Lösung als Hydrochlorid. Cystin und Tyrosin fallen bei ihren isoelektrischen Punkten aus. Andere wieder sind fällbar mit mehr oder weniger spezifischen Fällungsreagentien (vgl. »Advances in Protein Chemistry«, Vol. III, S. 297, Academic Press, New York, 1947; »Amino Acids and Proteins«, S. 217, Ch. C. Thomas, Springfield, 1951).
Emil Fischer führte 1901 die fraktionierte Destillation der Aminosäureester ein, die jedoch recht unbefriedigend ist, da sich Aminosäureester schon in der Kälte zu Diketopiperazinen kondensieren und diese Reaktion, die unter Alkoholabspaltung verläuft, bei der Destillationstemperatur einen erheblichen Umfang annimmt. Sie hat sich daher in der Praxis nicht durchsetzen können. Später wurde die fraktionierte Destillation von N-Acylaminosäureestern im Vakuum beschrieben (E. Cherbuliez und Pl. Plattner, HeIv. Chim Acta, 12 [1929], S. 317; E. Cherbuliez, Pl. Plattner und S. Ariel, HeIv. Chim. Acta, 13 [1930], S. 1390).
Die Gewinnung reiner Aminosäuren oder Aminosäurederivate wurde jedoch nicht beschrieben. Das Verfahren ist auch infolge der nur schwierig erfolgenden Wiederabspaltung der N-Acylreste, die .z. B. durch energische Säurehydrolyse erfolgen muß, sehr nachteilig. Später hat S. Gurin (J. Amer. ehem. Soc, 58 [1936], S. 2104) gezeigt, daß sich N-Benzoylsulfonylaminosäureester ohne Racemisierung im Hochvakuum destillieren lassen; auch N-Sulfonyl-peptidester sind noch unter Drücken von 1O-6 bis 10~7 Torr destillierbar.
In neuerer Zeit wurde die Chromatographie von Aminosäuren an Ionenaustauschern entwickelt, die in den meisten Fällen aber nur analytische Bedeutung hat. Hingegen ist die Gruppentrennung eines Proteinhydrolysates in basische, neutrale und sauere Aminosäuren mit Hilfe von Ionenaustauschern auch in technischem Maßstabe möglich.
Bezüglich weiterer Methoden zur Trennung von Aminosäuren, die ohne besonderen Wert sind, sei auf den Aufsatz von M. S. Dunn und L. B. Rockland in dem schon zitierten Buche »Amino Acids and Proteins« hingewiesen.
Aus den voranstehenden Ausführungen ergibt sich, daß keine technisch befriedigende Methode bekannt ist, die es gestattet, möglichst zahlreiche der in einem Proteinhydrolysat vorliegenden wertvollen Aminosäuren in reiner Form zu isolieren.
Verfahren zur Trennung
des in einem Proteinhydrolysat
enthaltenen Aminosäuregemisches
Anmelder:
Farbwerke Hoechst Aktiengesellschaft
vormals Meister Lucius & Brüning,
Frankfurt/M., Brüningstr. 45
Dr. Friedrich Weygand, Berlin-Frohnau,
und Dr. Rudolf Geiger, Frankfurt/M.,
sind als Erfinder genannt worden
Es wurde nun gefunden, daß man zur Trennung des in einem Proteinhydrolysat enthaltenen Aminosäuregemisches in die Komponenten unter Erhaltung der optischen Aktivität so vorgehen kann, daß man ein Proteinhydrolysat mit einem Alkohol verestert, sodann N-trifluoracetyliert, vorzugsweise mit dem Methylester der Trifluoressigsäure, und die trifluoracetylierten Aminosäureester im Vakuum fraktioniert destilliert. Vorzugsweise werden N-Trifluoracetylaminosäuremethylester getrennt. Die N-Trifluoracetylaminosäureester sieden viel tiefer als andere N-Acylaminosäureester und sind bei den Destillationstemperaturen beständig.
Als Alkoholkomponente in den N-Trifluoracetylaminosäureestern können die verschiedensten Alkohole dienen, doch sind die Methylester wegen der tieferen Siedepunkte und der tieferen Schmelzpunkte vorzuziehen. Verwendet man an Stelle von Methylestern z. B. Äthylester, so darf bei der Destillation im Vakuum am Kolonnenkopf nicht zu stark gekühlt werden, damit die Verbindungen nicht auskristallisieren.
Zur Herstellung des Gemisches der Aminosäureester eines Proteinhydrolysates wird letzteres zunächst in bekannter Weise verestert, etwa mit einem Methanol-Salzsäure-Gemisch. Das durch Eindampfen erhaltene Gemisch der Aminosäureesterhydrochloride wird in Chloroform mit Triäthylamin und Trifluoressigsäuremethylester versetzt, wobei unter Selbsterwärmung die N-Trifluoracetylierung stattfindet. Ein zweckmäßigerweise angewandter Überschuß an Trifluoressigsäuremethylester und Triäthylamin wird ab-
809 767/495
destilliert, ebenso das Chloroform. Zweckmäßig wird der Rückstand zwischen Benzol und Wasser, am besten in mehreren Verteilungsschritten, verteilt, wobei in die wäßrige Phase neben Triäthylaminhydrochlorid die N-Trifluoracetylaminosäuremethylester des Arginins, Histidins sowie die der Hydroxyaminosäuren und Trifluoracetamid gehen. Durch Ätherextraktion entzieht man der wäßrigen Phase die N-trifluoracetylierten Methylester der Hydroxyaminosäuren, vertreibt den Äther und destilliert den Rückstand fraktioniert im Vakuum.
Auch die benzolische Lösung wird eingedampft, worauf der Rückstand im Vakuum fraktioniert destilliert wird. Übergangsfraktionen werden einem folgenden Ansatz bei der Destillation wieder zugegeben.
Aus den reinen Fraktionen gewinnt man durch Behandeln mit verdünnten Laugen bei Zimmertemperatur oder durch Erwärmen und nachfolgendes Einstellen auf den isoelektrischen Punkt mit Essigsäure, Eindampfen und eventuellen Fällen mit Alkohol reine Aminosäuren.
Besonders wertvoll ist, daß aus den N-Trifluoracetylaminosäureestern in einfachster Weise Derivate gewonnen werden können, die für Peptidsynthesen vielfach verwandt werden. So erhält man durch Behandeln mit verdünnten Laugen die freien Aminosäuren, die schon in wäßriger Lösung mit Carbobenzoxychlorid zu den N-Carbobenzoxyaminosäuren umgesetzt werden können. Ferner kann man durch Behandeln mit verdünnten Laugen und anschließende Umsetzung mit Trifluoressigsäurethioäthylester schon in wäßriger Lösung die N-Trifluoracetylaminosäuren erhalten, ohne daß zunächst die freien Aminosäuren isoliert werden müssen. Weiterhin können aus den N-Trifluoracetylaminosäureestern durch Behandeln mit einem Alkohol-Salzsäure-Gemisch in der Hitze leicht Aminosäureesterhydrochloride unter Abspaltung des Trifluoracetylrestes erhalten werden.
Je nach der Zusammensetzung des zur Hydrolyse verwandten Proteins kann es zweckmäßig sein, zunächst die leicht entfernbaren Aminosäuren, wie Glutaminsäure, Cystin und Tyrosin, abzutrennen. Auch kann es günstig sein, mit Hilfe von geeigneten Ionenaustauschern zunächst das Proteinhydrolysat in basische, sauere und neutrale Aminosäuren aufzuteilen und dann erst das beschriebene Verfahren z. B. nur auf die Trennung der neutralen Aminosäuren anzuwenden.
Beispiel 1
Das salzsaure, im Vakuum eingedampfte Hydrolysat von 1 kg Gelatine (Wassergehalt 14,2%) wird zweimal mit 6 1 Methanol unter Einleiten von trocknem Chlorwasserstoff 2 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abdestillieren des Methanols bis auf 2 1 wird etwa nach 15stündigem Stehen im Eisschrank vom ausgefallenen Glycinmethylesterhydrochlorid (280 g) abfiltriert. Der Rückstand wird in 5 1 wasserfreiem Chloroform und 2,3 1 wasserfreiem Triäthylamin gelöst und mit 1,5 1 Trifluoressigsäuremethylester versetzt, wobei Selbsterwärmung auf etwa 50° C auftritt. Durch einen Rückfluß kühler wird verhindert, daß Trifluoressigsäuremethylester verloren geht.
Nach 4 Stunden destilliert man das Lösungsmittel
ίο zusammen mit überschüssigem Trifluoressigsäuremethylester und Triäthylamin ab. Nach vollständiger Entfernung von Chloroform und Triäthylamin im Vakuum nimmt man mit dem Rückstand eine fünfstufige Verteilung mit je 2 1 Benzol und Wasser nach dem Craig-Prinzip vor. Hierbei gehen in die wäßrige Phase neben Triäthylaminhydrochlorid und Trifluoracetamid die N-Trifluoracetylaminosäuremethylester von Arginin und Hydroxyprolin. Die benzolische Phase enthält die N-Trifluoracetylaminosäuremethylester der übrigen Aminosäuren.
Nach dem Abdestillieren des Benzols unterwirft man den Rückstand einer fraktionierten Vakuumdestillation. Hierbei erscheinen die einzelnen Aminosäurederivate in der Reihenfolge: Alanin (8O0C)-Valin - Isoleucin - Glycin (94,5° C) - Leucin - Prolin (103° C) -Asparaginsäure (117° C) - Methionen - Phenylalanin (135° C)-Glutaminsäure. (Die angegebenen Temperaturen wurden an einer Drehbandkolonne von 100cm Länge bei 3 Torr gefunden). Der Rückstand besteht im wesentlichen aus Ν,Ν'-Bis-trifluoracetyllysinmethylester, der durch anschließende Destillation bei 10~2 Torr rein erhalten wird.
Durch 1 stündiges Verseifen mit 1,5 Mol 2 n-Natronlauge bei Zimmertemperatur und Einstellen des pH-Wertes auf den isoelektrischen Punkt mit Eisessig fallen die reinen, optisch voll aktiven Aminosäuren aus. Besonders leicht lösliche Aminosäuren werden durch Alkohol gefällt. Prolin gewinnt man aus dem N-Trifluoracetylprolinmethylester am zweckmäßigsten durch Verseifen mit 0,5 n-Bariumhydroxydlösung, Fällen des Bariums mit verdünnter Schwefelsäure, Abzentrifugieren des Bariumsulfates, Entsäuern der Lösung mit einem schwach basischen Ionenaustauscher, Eindampfen, Aufnehmen des Rückstandes in Alkohol und Fällen der Aminosäure mit Äther.
Aus der bei der Verteilung zwischen Benzol und Wasser erhaltenen wäßrigen Phase wird der N-Trifluoracetylhydroxyprolinmethylester mit Äther extrahiert. Nach dem Abdestillieren des Äthers wird alkalisch verseift und das Hydroxyprolin anschließend z. B. über das Reineckat isoliert (vgl. J. Kapfhammer und R. Eck, Hoppe-Seyler's Zeitschrift für physiol. Chemie, 170 [1927], S. 292). Aus der zurückbleibenden wäßrigen Phase fällt man nach 2stündigem Kochen mit 2 η-Salzsäure das Arginin als Flavianat.
Die Ausbeuten sind aus folgender Aufstellung zu ersehen:
Aminosäure
Aus 1 kg Gelatine: N-Trifluor-
acetyl-
aminosäure-
methylester
ing
entsprechend
Aminosäure
ing
Gelatine
der trocknen
in der Gelatine
enthalten
Ausbeute
(°/o der Theorie)
Alanin
Valin
Isoleucin
Leucin
Prolin
Asparaginsäure
146
16
32
154
64
65 8,2 4,8
17
77
34
7,6
0,95
0,56
2,0
9,0
3,9
9,5
3,4
1,5
3,5
15,1
6,3
80 24 37 57 60 62
Aminosäure
Aus 1 kg Gelatine: Vo in der Gelatine Ausbe
N-Trifluor- der trocknen enthalten (%> der T
acetyl- entsprechend Gelatine (Vo) 38
aminosäure- Aminosäure 4,3 11,3 83
methylester
ing		 ing 0,66 0,8 33
68 37 0,84 2,5 68
10 5,7 2,8 4,1 80
12 7,2 21,8 27,3 79
60 24 6,8 8,6 79
187 11,1 14,0
58
95
Glutaminsäure
Methionin
Phenylalanin
Lysin
Glycin, gesamt
Arginin (Flavianat)
Hydroxyprolin (Reineckat)
Beispiel 2
800 g Casein (Feuchtigkeitsgehalt 9%) werden mit 1600 ecm konzentrierter Salzsäure + 800 ecm Wasser 16 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wird filtriert, im Vakuum bis auf etwa 1500 g eingedampft und mit 350 g konzentrierter Salzsäure versetzt. Beim Stehen im Eisschrank kristallisiert Glutaminsäurehydrochlorid aus, von dem abgesaugt wird. Es wird dreimal mit je 100 ecm konzentrierter Salzsäure gewaschen (Ausbeute 174 g). Das Filtrat wird im Vakuum auf etwa 940 g eingedampft, mit 200 ecm Wasser verdünnt und mit 865 ecm 2O°/oiger Natronlauge auf pH = 5,4 gebracht. Dabei fällt ein Niederschlag aus, von dem nach ltägigem Stehen im Eisschrank abfiltriert wird (158 g). Er enthält im wesentlichen Tyrosin, Isoleucin, ferner etwa Methionin und Phenylalanin. Durch Schütteln mit 1 1 15°/oiger Essigsäure werden alle Aminosäuren bis auf Tyrosin gelöst, das als dunkelgefärbtes, aber papierchromatographisch einheitliches Produkt zurückbleibt (32,5 g). Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit der Hauptmenge vereinigt. Um Ammoniak zu entfernen, das bei der Hydrolyse entstanden ist, wird mit 190 ecm 2O°/oiger Natronlauge auf pH = 9 gebracht und im Vakuum unter Durchsaugen von Stickstoff etwas eingeengt.
Nun säuert man mit 500 ecm konzentrierter Salzsäure an, um die Aminosäuren in die Hydrochloride zu verwandeln, und bringt das Reaktionsgemisch im Vakuum zur Trockne. Dann versetzt man den Rückstand mit 2,5 1 Methanol, leitet in der Wärme so lange Chlorwasserstoff ein, bis sich der Sirup ganz gelöst hat und nur noch Natriumchlorid ungelöst ist, und kocht noch 2 Stunden unter Rückfluß. Nach Abdestil-Heren des Methanols wird dasselbe Verfahren mit 2,5 1 Methanol wiederholt. Nach dem Abkühlen filtriert man vom Natriumchlorid ab (253 g), destilliert das Methanol ab und bringt den Rest im Vakuum völlig zur Trockne. Das Trockenprodukt wiegt 625 g.
Zur Überführung der so erhaltenen Aminosäuremethylesterhydrochloride in die N-Trifluoracetylaminosäuremethylester versetzt man erstere mit 21 wasserfreiem Chloroform, 915 ecm wasserfreiem Triäthylamin und 645 ecm Trifluoressigsäuremethylester (Rückflußkühler), wobei unter Selbsterwärmung beim Rühren alles in Lösung geht. Nach 4 Stunden ist die Umsetzung beendet. Man destilliert die Lösungsmittel und den überschüssigen Trifluoressigsäuremethylester zuletzt im Vakuum ab.
Nun schließt sich eine fünfschrittige Verteilung zwischen je 1,8 1 Benzol und Wasser an. Die wäßrige Phase wird mit Äther extrahiert. In ihm befinden sich neben etwas N-Trifluoracetylglycinmethylester und etwas Trifluoracetamid vor allem die N-Trifluoracetylmethylester von Serin und Threonin, die durch Destillation im Hochvakuum getrennt werden können. Nach dem Abdestillieren des Äthers wird der Rückstand durch Stehenlassen mit 0,4 n-Bariumhydroxyd (1,5 Mol) etwa 15 Stunden verseift, und mit 1 η-Schwefelsäure wird Bariumsulfat ausgefällt. Nach dem Abzentrifugieren des Bariumsulfates wird mit einem schwach basischen Ionenaustauscher die freigesetzte Trifluoressigsäure entfernt, worauf die Lösung nach Konzentrieren im Vakuum mit Alkohol versetzt wird. Es fällt ein Gemisch von Serin und Threonin aus, das durch fraktionierte Kristallisation aus Wasser —Alkohol in die Komponenten zerlegt werden kann.
Arginin wird in der unter Beispiel 1 beschriebenen Weise gewonnen.
Die benzolischen Phasen werden vereinigt, das Benzol wird abdestilliert und der Rückstand im Vakuum fraktioniert destilliert.
Die Ausbeuten sind aus der folgenden Aufstellung zu ersehen:
Aminosäure
Aus 800 g Casein: N-Trifluor-
acetyl-
aminosäure-
methylester
ing
entsprechend
Aminosäure
Vo
des trocknen
Caseins
im Casein
enthalten
(Vo)
Ausbeute
(Vo der Theorie)
Glycin
Alanin
Valin
Isoleucin
Leucin
Prolin
Asparaginsäure
Glutaminsäure .
6,0
42,3
42,6
42,1
64,0
101,0
49,4
30,0
2,42
18,9
22,0
22,8
34,7
51,5
25,7
0,33
2,59
3,02
3,14
4,76
7,0
3,53
2,7
3,0
7,2
6,1
9,2
8,2
7,1
12
87
42
51
52
85
50
Aminosäure
Aus 800 g Casein: entsprechend °/o im Casein
N-Trifluor- Aminosäure des trocknen enthalten
acetyl- ing Caseins (%>)
aminosäure-
methylester 8,6 1,18 2,8
ing 18,5 2,54 5,0
14,0 38,0 5,2 8,2
30,9 19,4 2,66 4,1
92,0 125,0 17,2 22,4
65,5 25 3,44 6,3
14 1,92 11,1
Beispiel 5
Ausbeute
(%> der Theorie)
Methionin
Phenylalanin
Lysin
Arginin (Flavianat)
Glutaminsäure insgesamt
Tyrosin
Serin+Threonin
Beispiel 3
Das salzsaure Hydrolysat von 100 g Gelatine wird mit Wasser auf 2 1 verdünnt, mit 20%iger Kalilauge neutralisiert und zweimal mit je 150 ecm eines sulfogruppentragenden Ionenaustauschers in der K+-Form 3 Stunden gerührt. Hierbei werden die basischen Aminosäuren entfernt. Man nitriert vom Ionenaustauscher ab, bringt das Filtrat im Vakuum zur Trockne und führt die weitere Aufarbeitung durch Veresterung, Trifluoracetylierung, Verteilung zwischen Benzol und Wasser und Destillation der N-Trifluoracetylaminosäureester in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise durch. Die Ausbeuten entsprechen den dort angegebenen. Vom Ionenaustauscher werden Histidin und Lysin neben wenig ebenfalls festgehaltenen aromatischen Aminosäuren durch verdünnten Ammoniak, Arginin durch verdünnte Natronlauge eluiert. Die Adsorption der basischen Aminosäuren kann auch in einer Säulenanordnung erfolgen.
Beispiel 4
Aus einem mit Salzsäure gewonnenen Caseinhydrolysat werden zunächst, wie im Beispiel 2 angegeben, Glutaminsäure und Tyrosin entfernt, worauf, wie im Beispiel 3 beschrieben ist, die basischen Aminosäuren abgetrennt werden. Die Weiterverarbeitung erfolgt nach Beispiel 2.
42
51
63
65
77
55
17,4
Aus einem mit Salzsäure gewonnenen Hydrolysat von Haaren oder Wolle werden zunächst durch Kriao stallisation Glutaminsäure, Cystin und Tyrosin entfernt, worauf nach der im Beispiel 2 angegebenen Arbeitsweise weiter verfahren wird.

Claims (3)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Trennung des in einem Proteinhydrolysat enthaltenen Aminosäuregemisches über die N-Acylaminosäureester, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Proteinhydrolysat mit einem Alkohol verestert, sodann N-trifluoracetyliert, vorzugsweise mit dem Methylester der Trifluoressigsäure, und die trifiuoracetylierten Aminosäureester im Vakuum fraktioniert destilliert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man das Proteinhydrolysat mit
Methanol verestert und die erhaltenen N-Trifluoracetylaminosäuremethylester trennt.
3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man zwischen Herstellung der
N-Trifluoracetylaminosäureester und der fraktionierten Destillation eine Verteilung zwischen Wasser und organischen Lösungsmitteln, vorzugsweise zwischen Wasser und Benzol, vornimmt.
ι 809 767/495 2. 59
DEF22762A 1957-04-06 1957-04-06 Verfahren zur Trennung des in einem Proteinhydrolysat enthaltenen Aminosaeuregemisches Pending DE1051273B (de)

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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1080564B (de) * 1959-02-17 1960-04-28 Hoechst Ag Verfahren zur N-Trifluoracetylierung von Aminosaeuren und Peptiden
US3290212A (en) * 1960-10-28 1966-12-06 Lepetit Spa Antitussive composition
US3250784A (en) * 1963-12-23 1966-05-10 Gen Aniline & Film Corp Pyrrolidonyl-gamma-butyramide and process of preparing
JPS5679652A (en) * 1979-12-05 1981-06-30 Ajinomoto Co Inc Novel phenylalanine salt crystal
US4348317A (en) * 1980-12-29 1982-09-07 Monsanto Company Recovery of L-phenylalanine and L-aspartic acid during preparation of α-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester
JPS61151157A (ja) * 1984-12-25 1986-07-09 Seiko Instr & Electronics Ltd タンパク質を加水分解する方法
FR2763942B1 (fr) * 1997-06-02 2002-09-13 Asepta Sa Lab Nouveau procede de preparation de n-acylaminoacides

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2041265A (en) * 1936-05-19 Actlated polypepxides
US2460040A (en) * 1947-09-13 1949-01-25 Armour & Co Preparation of amino acids
US2681927A (en) * 1951-05-04 1954-06-22 Research Corp Separation of amino acids
US2831889A (en) * 1954-05-14 1958-04-22 Ogilive Flour Mills Co Ltd Process of preparing glutamic acid

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