CZ163993A3 - 3-substituted 1,2,3,4-oxatriazol-5-imine compounds, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which such compounds are comprised - Google Patents

Description

US patentová přihláška č. 4329355 popisuje aahydro5-imino-1 ,2,3,4-oxatriazolimhydnoxidy podobné struktury jako mají sloučeniny podle předloženého vynálezu, ávšak o sloučeninách známých z popisu tohoto patentu je pouze uváděno, že jsou vhodné pro léčení rakoviny.

Dále z J.O.S.Perkin Trans I, 747 až 751 (1979) jsou známy sloučeniny podobné struktury jako mají sloučeniny podle předloženého vynálezu. Nejsou však uváděny žádné bio logické účinky takových sloučenin*

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká dosud neznámých 3-substituovaných 1,2,3,4-oxatriazol-5-iniinových sloučenin obecného vzorce I a jejich edičních soli s kyselinami

kde R¹ představuje stejný nebo rozdílný alkyl nebo alkoxyl, mající 1 až 3 atomy uhlíku, halogen, trifluormethyl, nitro, kyano, fenyl nebo alkylsulfonylovou skupinu, n je 1 až 5 a o

R je vodík nebo skupina vzorce II

-X-Y-Q-(Z) (II) m

kde X je -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)NH-, -S(0)₂ nebo přímá vazba, Y je alkylenová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo přímá vazba a Q je alkylová, cykloalkylové,alkoxylové nebo fenylová, pyridylová, furanylová, thienylová nebo pyrazinylová skupina popřípadě substituovaná substituentem Z, kde Z je alkylová nebo alkoxylové skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, halogen, hydroxy-, acyloxy, trifluormethyl, nitro, kyano nebo alkylsulfonyl a a je 1 až 3, kde Z také, jestliž X je -C(0)- nebo -C(O)NH-, je Y přímá vazba a Q je substituovaný fenyl, může mít vzorec I, kde R má stejný význam, pokud ode o X,Y a Q s tou podmínkou, že R není vodík, alkyl, benzoyl, trifluoracetyl nebo popřípadě substituovaný fenyl,, je-li R methyl nebo chlor a n je 1 a R není vodík nebo popřípadě substituovaná fenylová skupina, jestliže R¹ je nitro, alkoxy, fluor nebo brom a n je 1.

Tyto sloučeniny se liší od výše uvedených známých slou čenin svou chemickou stavbou tím, že mají jinou substituci

-4v poloze 3 a/nebo v poloze 5 oxatriazolového kruhu a liší se od sloučenin z výše citovaných patentů svým biologickým účinkem, takže inhibují agregaci krevních destiček a mají relaxační vliv na traceu.

V souladu s tím se vynález také týká farmaceutického přípravku, charakterizovaného obsahem účinné složky- sloučeniny vzorce I - ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

V souladu s tím jsou výhodnými sloučeninami obecného vzorce I ty, kde n je 2 až 4.

V obecném vzorci II Q výhodně znamená alkylové a alkoxylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku.

Sloučeniny podle vynálezu mohou tvořit adiční sole s kyselinami jak organickými tak anorganickými. Vhodnými kyselinami jsou například chlorovoík, bromovodík, fosforečná kyselina, kyselina dusičná, sírová, štavelová, mléčná, vinná, octová, salicylová, benzoová, mravenčí, propionová, pivalová, malonová, jantarová, pimelová, fumarová, maleinová, jablečná, sulfamová, fenylpropionová, glukonová, askorbová, isonikotinová, methansulfonová, p-toluensulfonová, citrónová nebo adipová.

Navíc je předložený vynález týká způsobu přípravy 3substituovaných 1,2,3,4-oxatriazol-5-iminových sloučenin obecného vzorce I a jejich edičních solí s kyselinami, kte rý se vyznačuje tím, že sea) uzavře kruh 1-arylthiosemikarbazidového derivátu obecného vzorce III

(III) kde má stejný význam jako ve vzorci I a iP je buá H nebo skupina vzorcfe IV

-X-Y-Q-(Z)

OL (IV) kde X je přímá vazba a Y a Q-Cz)^- mají stejný význam jako ve vzorci I, zpracováním s alky lni t ritem·, majícím 1 až 6 atomů uhlíku, nebo dusitanem alkalického kovu za kyselých podmínek při asi 0 až 10 °G, počemž se výsledná sůl popřípadě převede na volnou sloučeninu a je-li to žádoucí, podrobí se acylaci.

Způsob, využívající alkylnitrit s 1 až 6 atomy uhlíku je nový a je výhodný pro přípravu sloučenin podle vynálezu, nebot jím lze získat kvantitativní výtěžek před čištěním.

Při způsobu podle vynálezu je preferováno použití ethyl nitritu jako alkylnitritu, majícího 1 až 6 atomů uhlíku a dusitanu sodného jako dusitanu alkalického kovu.

Je známá cyklizace 1,4-disubstituovaných thiosemikarbazidů kyselinou dusitou (dusitan sodný a kyselina) za vzniku

3-substituovaných 1,2,3,4-oxatriazol-5-iminů. Výsledky této reakce jsou uváděna mezi 18 a 57

-6Při reakci 1 ekvivalentu 1-aryl-thiosemikarbazidového derivátu s alkylnitritem, majícím 1 až 6 atomů uhlíku je výhodné použití 2 až 2,5 ekvivalentů alkylnitritu ve vhodném rozpouštědle jako je alkylalkohol, mající 1 až 6 atomů uhlíku, za vzniku 3-arylsubstituované 1,2,3,4-oxatriazol5 iminové soli v podstatě v kvantitativním výtěžku. Po filtraci vysrážené síry a odpaření rozpouštědla se produkt, je-li to nutné, rekrystaluje například z alkylalkoholu, majícího 1 až 6 atomů uhlíku, acetonitrilu nebo nitromethanu, čímž výtěžek čistého produktu je obvykle mezi 60 a 95 %.

Výhodně se používají methanol a ethanol jako alkylalkohol, mající 1 až 6 atomů uhlíku.

Příprava acylovaných sloučenin podle vynálezu se výhodně provádí rozpuštěním 3-aryl-1 ,2,3,4-oxatriazol-5-iminhydrochloridu ve dvoufázovém systému, obsahujícím vodu· a halogenovaný uhlovodík, výhodně methylenchloriál, ke kterému se přidají v množství ekvivalentních pro reakci báze, například hydrogenuhličitan sodný a acylační činidlo. Výsledný produkt může být získán odpařením organické fáze a popřípadě se rekrystaluje z alkylalkoholu, majícího 1 až 6 atomů uhlíku nebo acetonitrilu. Výtěžky těchto sloučenin jsou obvykle v rozmezí 50 až 95 %. Dále acylované sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny o sobě známou metodou reakcí 3-eryl-1,2,3,4-oxatriazol-5-imin-hydrochloridu s acylačním činidlem v pyridinu.

Vhodnými acylačními činidly jsou například: estery kyseliny halogenmravenčí, chloridy kyselin, anhydridy, O-alkyl a O-arylestery, alkyl a arylisokyanáty, alkyl a arylisothiokyanáty.

-75-Iminoalkylováné deriváty 3-aryl-1>2,3,4-oxathiazol5-iminů podle vynálezu se připraví výhodně z 1-aryl-4-substituovaných thiosemikarbazidů způsobem podle vynálezu za použití alkylalkoholu jako rozpouštědla, výhodně methanolu nebo ethanolu. Výtěžky těchto sloučenin jsou obvykle mezi 80 a 90 %.

Adiční soli s kyselinami obvykle vznikají ze syntézy sloučenin vzorce I, kde R je H, aryl, alkyl nebo cykloalkyl. Volné sloučeniny mohou být získány z edičních solí s kyselinami způsobem, který je sám o sobě známý, jako napři klad rozpuštěním nebo suspenzí ve vodě a následnou reakcí s bází až do alkalické reakce (výhodně na hodnotu pH 9,0 až 9,5), například s hydrogenuhličitanem sodným a potom být izolovány.

Nutné výchozí sloučeniny obecného vzorce III mohou být připraveny způsobem, který je sám o sobě známý. Výchozí sloučeniny vzorce III, kde je H mohou být například připraveny reakcí substituovaného arylhydrazia-hydrochloridu s thiokyanátem alkalického kovu nebo thiokyanátem amonným ve vhodném rozpouštědle-, jako je alkohol nebo voda, během 6 až 18 hodin refluxu, jak je například popsáno v Houben-Weyl:Methoden der Organischen Chemie E4, str.

513· Výchozí sloučeniny obecného vzorce III, kde R^ je alkyl nebo aryl, mohou být podobně připraveny o sobě známým způsobem, jako například reakcí arylhydrazinu s alkyl nebo arylthiokyanátem ve vhodném rozpouštědle jako je ether, methanol, ethanol, benzen nebo toluen, jak je popsáno v Houben-Weyl:Methoden der Organischen Chemie E4, str. 506.

Příklady provedení vynálezu

Příprava výchozích látek

-8Příprava 1-(3-chlor-2-methylfenyl)thiosemikarbazidu

19,3 g (0,1 mol) 3-chlor-2-methylfeaylhydrazin-hydrochlorídu se rozpustí ve 200 ml absolutního ethanolu. K roztoku se přidá 11,64 g (0,12 mol) thiokyanátu draselného a směs se zahřívá pod refluxem 16 hodin. Směs se pak ochladí, produkt se přitom částečně vysráží a směs se pak odpaří dosucha pomocí rotační odparky. Produkt se rekrystaluje ze 200 ml vody a 250 ml methanolu, oddělí se filtrací a pečlivě se promyje vodou.

Výtěžek: 17,8 <*.- 82,5 %

Teplota táni: 192 až 193 °C

Elementární analýza pro ΟθΗ^θΟΙΝ^β vypočteno 44,54 % C, 4,6?% H, 19,48 % Ν’, 14,86 % S nalezeno 44,22 % C, 4,58 % H, 19,60 % Ν’, 14,67 % S.

500 MHz ¹HNMR (dg-DMSO) ^9,33 (š s, 1H,NH), $ 7,80 (š s,1H, NH), ξ 7,72 (á s,1H,

NH), 5 7,52 (š s, 1H, NH), í 6,80 (a, 3H,-ArH), <^2,18 (s,

3H, CH₃).

Příprava 1-(3-ahlor-2-methylfenyl)-4-(1-methylpropyl)thiosemikarbazidu

1,44 g (10 mmol) sek.butylisothiokyanátu se přidá k

1,56 g (10 mmol) 3-chlor-2-methylfenylhydrazinu rozpuštěnému ve 120 ml toluenu a směs se refluxuje 2 hodiny a pak se odpaří. Zbytek se míchá s malým množstvím hexanu, oddělí se filtrací a suší.

Výtěžek 2,3 g - 96,6 %

Teplota tání 145 až 146 °C

Elementární analýza vypočteno 53,02 % C, 6,67 % H, 15,46 % N, 11,79 % S, 13,04 % Cl nalezeno 53,22 % C, 6,33 % ff, 15,52 % N, 11,84 % S, 13,02 % Cl

-9500 MHz ^]H NMR (CDClj):

£ 7,48(s,1H,NH),í 6,94 (m,3H,ArH), š 6,90 (š s, 1H,NH)_r £ 5,92 (s, 1H, NH), £ 4,40 (m, 1H, CH),/2,60 (s, 3H, Cff₃), 1> 1,54 (m, 2H, CHg), / 1,18 (ď, 3H, CH-j), í 0,88 (t, 3H, OBj).

Příklad 1

3- (3-Chlor-2-methylfenyl )-1 ,2,3,4-oxatriazol-5-imin-hydrochloriď

8,6 g (40 mmol) 1-(3-chlor-2-methylfenyl)thiosemikarbazidu se rozpustí ve 100 ml methanolu a 5 al 378 kyselině chlorovodíkové za míchání při teplotě místnosti.

Směs se ochladí na 0 až 5 °C na ledové lázni a pak se po malých částech během asi 5 minut přidá 6,3 g (7 ml) ethylnitritu. Směs se zbarví tmavě parami nitrozních plynů, ale během několika minut zesvětlá a současně se vysráží volná síra. Směs se 10 minut míchá a pak se přidá dalších 0,9 g (1 ml) ethylnitritu a reakční směs se nechá asi 20 minut za míchání. Síra se oddělí filtrací a směs se odpaří na rotační odparce při teplotě lázně 30 °C. Je-li to nutné zbaví se směs vody odpařením spolu s toluenem/ethanolem. Krystaly se míchají s diethyletherem, oddělí filtrací a promývají dále malými množstvími diethyletheru.

Výtěžek 9,2 g - 94 %

Teplota tání 194 až 195 °C (rozklad)

Elementární analýza pro CgHyClN^O . HCl. 1/4 H₂0 vypočteno 38,19 % 0, 3,41 % H, 22,28 % N, 28,18 % Cl nalezeno 38,07 % C, 3,19 % H, 22,30 % N, 28,58 % Cl

500 MHz ¹H NMR (DgO):

7,52 (m, 3H, árH), 2,38 (s,3H, CH^)

Příklady 2 až 28

Sloučeniny uvedené v tabulce 1 byly připraveny stej-10ným způsobem jak je popsán v příkladu 1 .

\ o — > c ε 3 _ (0 c •«x ~Ό 4J

O ►

CJ i

IZ

e;

u ca

<0 Ώ	<c X	(0	«3	(0	íO	(ϋ	fO	(Ú JO
CM tO	*τ 03	o	CO	CM	O	CO	O	to co
co to	σ» ρ*	o	co	03	03	p-	03	03 CO
04 CM	04 04	co	CM	04	04	CM	CM	CM CM

co n co co co

X X U. U. LU o a a o o «I o ť «—t M O. Cí, <UX0^!

4J 4J

Ϊ >« >Φ '>5 >

—* «.

o

o

LO o o

co co

*—«·

CM

to

to

CO

co

o o

LU LU

p-—

o

CO

co

X

CM

co co

cj o

cj

to

1-4

r-4

CJ

1-4

1—4 1-4

*-*- *—’

X

«

w

*-*

» »

o o

—*

»

o

o

o

o

O

O O co

o o

coi —*

to

to

to

to

1-4

CM CM X

CO CO

u.

X

i—4

•4T

co

CO

CO CO CJ

^4 H

a

z CJ

1-4

1-4

1-4

^4

f4

1-4 i-4 O

*—’

1 X

» »

o

w

·«

««

·«

o o

o

—·* *

O

<—*

—*.

o

—-

o

— o

04 CO

CO

1

03

r—

4—

to

ř—

co

F— f4

CO co

<n

O X

CM

CJ

CJ

CJ

co

CJ CJ O

CJ

1-4 w

1-4

o z P- 1

i-4

=

X

1-4

X

^4

X X --I

—

·· .»

·*

«-Μ CJ

·»

«.

«—s

*—·

1

3

O»»

1

1 1 —*

1

s

F—

P“

»

Γ“

i—

X

X

ř—

1—

Τ “Γ í—

r—

X

r—

CJ CJ

CJ

o o

o

CJ

CJ

z

z

CJ

z

CJ

Z Z CJ

CJ

z

CJ

X X

X

to o

X

X

X

I

1

X

1

X

ι i x

X

1

P- P~

CJ

CJ

CJ

CJ CJ

CJ

• *

i-* t-4

*

*

*

*

*

*

*

-

X X

X

X

o

o

o

X

σ o x

o

1

z z

z

S.

z

z

z

o

o

z

o

z

σ o z

z

o

z

1 1

t

Z z

I

i

1

P-

P-

1

P-

1

P- P* 1

I

P-

1

a o

cj

o υ

o

cj

υ

1-4

Γ-4

CJ

1^

CJ

1-4 1-4 CJ

CJ

1-4

CJ

* X—-

*-*

**—’

*—'

X—*

x—’

*—·

x^->

«*

·» w

o o

o

o o

o

o

to

to

o

o

o

o

o o o

o

O

o

CM t-4

o

CM 04

o

o

o

<r

4T

o

co

44

4J ’Τ H

o

44

P— Ρ»

e*

CM CM

o-

Ρ»

o*

¢-

P*

P-

P-

P-

e* c* e*

e*

C-

P*

w rn

1—(

CM CM

r-4

1-4

F4

i-4

Γ4

V4

1-4

1-4

1—4 ^4 T“4

1-4

•

σ ό

rs

Ό

CM

O w

to

03

to

CD

co

1—» e* CM

4T

o

to

tO P-

co

o σ>

03

CO

e*

o

03

p-

CO

co

O 03 00

to

co

CM

i-4 1—4

rH

CM i-·

i-4

1-4

i-4

CM

1—4

r-t

1“4

1-4

CM 1-4 44

^4

1-4

csi O

CM

03 O

CO

CO

CO

tO

co

*«r

P—

O tO Γ-4

CO

CO

CM

CO P-

CO

03 03

03

co

e*

o

03

c*

GO

GO

O 03 CO

to

P-

CM

«—4 rH

ťM

r4 f4

i-4

1-4

1-4

CM

Π

**

**

1-4

CM f4 i-4

^4

ae ae

ae

ae ae

ae

ae

ae

ae

ae

ae

ae

ae ae ae

ae

ae

ae

CD CO

to

CM

CM

03

CO

CM

lO

P-

CO

CM 03 tO

to

co

co

i-*i—'intoo»—‘OwoJcno^e-c^cMknr-Off-cQiDcnuj^LflifioooOLOcocoui^r-řco co co <—

X X r— 4- — LL I— I— Q ουουυχυυο i r-r- — ι ι ι i ι ! ι i i to o cj <j

CM CO <O tO CO CO to CM ! I

O - co *? to

ω.........c

CO CO CO H O n Í*j D D Cj Cj Ο <η (*5 '

LLll-'>LXXZ:XXX XXXU-ll.U.Xr-r-r— UUOUUCJCJUUUUOUOOUUJO

I 1 >( I I i l ! I i l i l I l i i i

CMCO^CO^^CMCMCMCMrpCMCOCOtOCMCMCMCM

Tabuitcs

O

CMCO*3^,P-COO’-4CMCO^^,tOtOp-C003©i-'CMfO \ O — ' C ^ε ςβ« c «O^ “ gs σ>

<0

CO co

O CJ X X co

r- ~ χ	1 X z 1 CJ	CJ X
O	a X	z 1 CJ
1	1 X	o	o	X
z	Z	σι	o	z
1	1	co	co	1
CJ	CJ		»4	CJ
				—
o	o	o	o	o
	o	»-4	KT
e*	co	e*	e*	e*
				*•4

Tabulka 1 (pokrač

>£« CU XJ

Kj	C5	CO	to	cn
co	O	P-	P-	tt
r-4	r4	^4

tlili o 04 ’σ oa

CO	σ>	p-	Ρ- KT
f-4		^4	»4

de	de	de	de	*»
Ρ»	tO	tO	tO	^4
<O	CO	r*	CO	O
P-	σ>	(O		KT

			X
			KT	X
F~				1
a	IX	X	«.	CO
1	1	1	X	*
KT	kt	CM	1	to
			cn	*
·»	*	*		KT
	fW·	r*
CJ	CJ	CJ	X	<*>
1	1	1	1	·*
fO	<*)	rr	04	04

KT	IO	tO	Ρ»	CO
CM	CM	CM	04	OJ

i

-13Příklad 29

3-(3-Chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatri azol-5-imin ,23 g (5 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 1 se rozpustí ve dvoufázovém systému, obsahujícím 30 ml vody a 10 ml dichlormethanu. Směs se ochladí na ledové lázni na 5 °C a potom se po malých dávkách opatrně přidá 0,84 g (10 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidů uhličitého se směs intenzivně míchá asi 10 minut, pak se organická fáze? oddělí a odpaří.

Výtěžek: 0,89 g -84,6%

Teplota tání 54 až 56 °C.

Elementární analýza pro CgHyClN^O:

vypočteno 45,62 % C, 3,35 % H, 26,60 % K, 16,83 % nalezena 45,95 % C, 3,35 % H, 26,30 % N, 17,27% Gl.

Příklad 30

3-(3-Trifluormethylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazol-5-(N-3-trifluormethylbenzylkarbonyl)inin

2,66 g (10 mmol) 3-(3-trifluormethylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu,připraveného v příkladu 3 se rozpustí ve 45 ml vody a pak se opatrně přidá 1,68 g (20 mmol) hydrogenuhličitanu sodného po malých dávkách.

ml dichlormethanu se přidá k vysrážené volné bázi, která se úplně rozpustí a směs se ochladí na 5 °C na ledové lázni. Potom se za Intenzivního míchání ke směsí při dá 2,23 g (10 mmol) chloridu kyseliny 3-trifluormethylbenzylkarboxylové. Směs se pak míchá 45 minut, potom se organická fáze oddělí a promyje se dvakrát 30 ml vody.

Na rotační odparce se odpaří methylenchlorid a výsledná

-14substanee se pečlivě promíchá s diethyletherem, oddělí se? filtrací a suší.

Výtěžek 2,98 g - 71,6 %.

Teplota tání 106 až 108 °G.

IR: 1655 cm^-1, 1620-1590 cm¹, 1350-1320 cm“¹.

Elementární analýza pro C₁ γΗή o^F6^4°2 vypočteno 49,04 % C, 2,42 % H, 13,46 % K nalezenu 48,8 % C, 2,30 % H, 13,59 % N.

500 MHz ¹H NMR (d_&-DMSO):

$ 8,02 (η, 8H, ArH), g 3,88 (s,2H,CH₂)

Příklady 31 až 45

Sloučeniny uvedené v tabulce 2 byly připraveny jak je popsáno v příkladu 30.

^at>ulka

I (O > -C — 3 -m O

4) C (N xw

I

IZ

L· ca az ® ο

4* «

Ó >

\ C-Ή \ φ C

O -fe?O3 /

Z ‘4 >φ >

CM (X c:

cr

I i * '1 * ί

A?

04 e- o04 04

				U_	χΧ—>		X—%	|
				o	co		c.	Z
				*—*	LL·		Φ	|
					CJ		4U	CJ
				o	«—»		tn	-—·
				CM			v	1
		o		CO	o		—»	o
	x—.	co		o“4	o	♦·»		o
	L·	tn			co		tn	m
u	Φ	0“4		·*	0-4	L·	p—	1-4
v	+J		X—»	x—»	1	v	0-4
U	tn	«.	co	CMO	-W	r4	*
tn	4)	O	LL·	o	tn	tn		o
o	«—*	P*	CJ	cn	co	v	·»	e*·
·—-		(O	*—·	l	o-4		o	to
	o	0—<		1			r4	1-4
·»	t4		o	z	·*	4	CM
X—*.	CM	·»	o	1	X—.	X—·	rH	·»
o	0“4	X—	co	CJ	o	o		x—*
CJ		•	F4	*—»	o	o	««	•
l	·«	M-	1		1	I	x—·»	*U
t	«Χ-Χ	•r-	o	o	1	1	CO	•f-
z	CO r—	co	to	z	z	u.	ř—
1	u.	flj	co	t-4	t	I	CJ	to
CJ	o	*—*	0-4	0-4	o	CJ	*-*	·**
*«x	«Μ»
		o	«»				*	o
O	O	to	X—*	o	o	o	o	tn
co	o	co	o	rM	co	CM	cn	«0
to	co	CM	CJ	to	tn	(O	CM	CM
o“4	t-4		l	W	r4	0-^	C4
o	o	o	z	o	o	o	O	o
o4	co		1	<33	tn	σ>	o~4
p*	co	o	CJ	to	to	to	CO	o
0-4		CM		^4		1-4	^4	CM
3				O	co	tn		o
		r4			σ>	to		co
o		o		^4		T-4		^4
to		t-4		1	t	1		I
I		1		co	c—	CM		<n
co		CO		rf	cn	to		CM
tn		O		o“4	T-4	o-4		0-4
						ae		ae
						CO		tn
a?		a?		ae	ae	•		•
o		o		o	o			*4
P-		co		•*T	*y	tn		cn

o <y tO

U

0) (Λ

Φ

O

CJ

I

I

CM

O

Z co

O co tn

O o

I i

Z i

O

O ry to

L· <U tn

QJ <Λ —* -

o	Φ	O	O	o	CJ		o	O	*	CJ	O
CJ		O	CJ	CJ	*—*		CJ	CJ	o	44	CJ
l		|	1	1			1	1	o	tn	1
i	O	1	J	1	o		1	1	ř—	Φ	»
z		|	z	z			Z	Z	r4	—«*	z
l	<4	Z	t	1	to		1	1			1
CJ	0-4	1	o	CJ	t-4		CJ	CJ	·«	o	CJ
«Μ.Χ»		CJ	»w>			X—*	.	—*	X·—»	^4	—*
						L·			•	CM
o	O		CJ	o	tn	0)	o	o	tu	T-4	o
CM	CM	o		o	o	44	tn	co			0*4
LO	CM	e*	tn	tn	to	tn	tn	tn		*	c*

r4 o-4 tn o-4 o-4 o-4 4) o-4 o-4

o	o	o	o	o	o	o	o	o
tn	P*	o	ry	to	0-4	0-4	to	to
to	P*	to	to	to	P*	CM	to	to
e-4	0-4	H	0^	1-4	0-4	^4	^4	T-4
to	CO		f4	o	co			Ci
tn	CM		n·	m	to		p-	m
0-4	0-4		0-4	^4	0-4		r4	0-4
1 tn	e*		O	CO	to		CM	CO
m	CM		co	ry	to		P—	tn
0-4	0-4		0-4	1-4	0-4		0-4	0-4
ae			ae	ae	ae		ae ae
4T			to	O	o-4		CM	to
•	ae		•	•	•		•	•
CO	o		tn	P-	tn		P-	co
P-	co		o	co	to		to	tn

l to rtj -— u

O -M co tn O <u to

T o

tO de

CO

CO cn

<*>

X

X

CJ

CJ

o

CM

I

p—

CJ

O

’Τ Z

CJ

o

o

ω

z z

i

I

I

cn

co

t

X

CM

CM

T~

T

CO X

tn

^4

x n

tn

l

I

M’

tn

i tn

n

tn

X

,_4

to CJ

•χ

0-4

4?

CJ

CJ

X

^CJ

X

X

CM

CJ I

CM

I

1

CM

x t

CM

CM

CJ

to

I O

CJ

tO

to

to

O

O

CJ

to o

CJ

CJ

CM

CJ

CM CJ

CM

CJ

CJ

CJ

CJ

<J

CM

CJ CJ

CM

CM

O

o

O l

O

o

o

o

I

1

O

O t

O

O

CJ

CJ

ω co

CJ

CJ

CJ

CJ

CM

CM

CJ

cj cn

CJ

o

LL· l

r-	r-~	r—	Ι-	r—	r—	ΤΓ
CJ	CJ	CJ	Ο	CJ	CJ	ί-	ř—
l	1	t	1	1	t	ο	CJ	LL·
CO	CO	cn	cn	cn	cn	í cn	l	I	LL· 1
		-		»	*				cn

co co (O

cn	cn	cn	cn	cn
LL·	LL·	LL·	LL·	LL·
CJ	CJ	CJ	CJ	CJ
<n	cn	cn	cn	<T

0-4	CM	cn	ry	tn
cn	cn	cn	cn	cn

CO π jn ω ω o i I

CM CM CM to e* co co co co

CJ u o i i I CM CM □> O i—· CO ry

O CJ O

I i I

CM CM CO

CM CO •<T ry rf

I

CM tn

6-1

-16Příklad 46

3-(3-Chlor-2-me thylfenyl)-1,2,3,4-ox atri szol-5-(N-2pyrazinoyl)-imin

2,47 g (10 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxa triazol-5-imin-hyďrochloridu připraveného v příkladu 1 se rozpustí ve 30 ml vody a za míchání se postupně přidává 2,1 g (25 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se přidá 30 ml dichlormethanu, sraženina se rozpustí. Potom se přidá 2,21 g (10 mmol) N-hydroxysukciaimidesteru kyseliny pyrazin-2-karboxylové.Směs se míchá 16 hodin, potom se oddělí meth.yleachloriďová fáze. Tato fáze se promyje dvakrát 30 ml vody a odpaří se. Substaace se míchá s malým množstvím diethyletheru; a oddělí se filtrací.

Výtěžek 2,03 g - 64,3 %.

Teplota tání 111 až 112 °C.

Elementární analýza pro C^H^ CIN^O vypočteno 49,30 % G, 2,86% H, 26,54 % Ν', 11,19 % Cl nalezeno 49,10 % C, 2,89 % H, 26,37 % N, 11,40% Cl.

500 MHz ¹H NMR (CDCI^):

9,26 (d, 1H, J=1,5 Hz, ArH), í 8,56 (d, 1H, J=2,5 Hz ArH), ř 8,39 (dd, 1H, J=1,5Hz a J= 2,5 Ha., ArH), £ 7,21 (a, 3H, ArH), í 2,58 (s, 3H, CH-^).

Příklad 47

3-(2-Chlor-3-chlorfenyl)-1,2,3,4-ox atri azol-5-(N-fenylkarbamoyDimin

2,31 g (10 mmol) 3-(2-chlor-3-chlorfenyl)1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 21 se rozpustí ve 30 ml vody, ke které bylo přidáno 0,9 g

-17(10,7 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se přidá 30 ml dichlormethanu a 1,20 g (10 mmol) fenylisokyanátu v 5 ml dichlormethanu. Směs se pak intenzívně míchá 30 minut při teplotě místnosti, přičemž se částečně vysráží produkt. Přidá se dalších 50 ml dichlormethanu a 30 ml vody, oddělí se fáze. Dichlormethanová fáze se promyje 50 ml vody a odpaří se. R_okrystalizace se provede z absolutního ethanolu.

Výtěžek 2,10 g = 60,9 %.

Teplota tání 149 až 1?1 °C.

Elementární analýza pro vypočteno 48,02 % C, 2,59 % H, 20,01 % N, 20,25 % Cl nalezena 48,06 % C, 2,67% H, 19,68 % K, 20,17 % Cl.

500 MHz ¹H NMS (CDCl-j):

á.6,69 (m, 3H, 4rH),^7,58 (Ss, IS, NH), ^7,19 («·,

5H, árH).

Příklad 47a

3-(3-Chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatri azol-5-(N-3,4dimethoxyfenylethyÍkarbamoyl)imin

2,47 g (10 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloriď připraveného v příkladu 1 se rozpustí v 30 ml vody, ke které bylo přidáno 0,9 g (10,7 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se přidá 30 ml dichlormethanu a 2,1 g (10 mmol) homoveratrylisokyanátu v 5 ml dichlormethanu. Směs se pak intenzivně míchá 30 minut při teplotě místnosti, přičemž se pak oddělí fáze. ^ethylenchloridová fáze se promyje vodou, odfiltruje a odpaří. Substance se· pak míchá s diethyletherem.

-18Výtěžek 3,60 g - 86,12 %

Teplota tání 148 až 151 °C

IR: 1660 cm¹(tf-C0-NH), 1260, 1030 cm¹ (OCH-j)

Elementární analýza pro ^ί^θΟΙΝ^Ο^:

vypočteno 54,61 % C, 4,82 % H, 16,76 % N nalezeno 54,22 % C, 4,6?% H, 16,72 % N.

Příklad. 48

3-(4-Chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazol-5-(N-4pyridiaoyl)imin

0,90 g (5 mmol) chloridu kyseliny isonikotinové se přidá k ledem chlazené suspenzi 1,24 g (5 mmol) 3-Uchlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 13 v 15 ml pyridinu.

Směs se míchá při teplotě místnosti hodinu a potom se přidá 20 ml vody (vývoj tepla). Směs se ochladí ledem a substance se oddělí filtrací. Substance se pak intenzivně promyje vodou a etherem.

Výtěžek 1,35 g = 85,52 %.

Teplota tání 180 až 184 ^QC.

Elementární analýza pro C₁θΟ1Ν^Ο₂:

vypočteno 53,36 % C, 3,20 % H, 22,13 % N, 11,23 % Cl nalezeno 53,26% C, 3,19% H, 22,18% N., % Cl

500 MHz ¹H NMR (dg-DMSO):

8,77 (dd, 2H, PyrH, J=6 Hz, J= 1,5 Hz), (f 7,99 (dd, 2H, PyrH, H= 6H₂, J= 1,5 Hz), Í7,77 (d, 1H, árH, J= 9Hz), $ 7,81 (d, 1H, ArH, J= 2Hz), ^7,71 (dd, 1H, A?H,

Hz, J= 2 Hz).

Příklady 49 až 59

Sloučeniny uvedené v tabulce 3 byly připraveny způsobem popsaným v příkladu 48.

-19I

CO > -c F- — X «Μ O s o c c

co	O	o
c*	c*	LO
CM	cu	CM

Tabulka

CO

			CJ
·»	CO		o
	LU
O	CJ		—		*—*
cj			02 0		co
1			o «-<		X
1	O		cn o		o
Z	o		1 —		o
1	co		1		*“*
α	1“4	<—>»	z '
*—*	I	CM	1 O	«—*	o
	O	O	O in	o	1-4
o	LO	ω	—' 02	o	o
co	CO	1	T—*	I	1-4
LO	1—4	1	O	1

(rt o

o

1“4 cm o

1-4 ř* co p4 i

LO co

O co

O

O

I

CO Z

U. I o o o o th CO co tn

1-4 rH

I I O O

CO LO

LO

1—4

I

LO

LO co ^T

LO

LO

CJ

CM cm

O

CJ rf

X

LO cj

I o

o i

4T co

LU cj

I co co

LU cj

I co σι •o· o

LO

CJ	<-i O	o —~~	o	o	o
		o	CJ	o	o	*—*	CJ	CJ
	<h	1	1	CJ	CJ		1	»
o	o	1	ί	1	1	LO	I	1
LO	cu	z	z	1	r	co	z	z
p4	co	1	1	z	z	to	1	1
1-4	p4	o	CJ	l	1	1-4	α	CJ
		*—*	*—*	CJ	CJ		*—*	*—*
	<»					*
o	o	o	o			o	o	o
	co	o	co	o	o	1-4	σι	co
CO	LO	LO	LO	co	O)	lů	LO	LO
		^4	P“4	to	LO	r4	1-4	1-4
					p4
			w	t	1	«	*	*
O	o	o	o	o	o	o	LO	LO
ΚΓ	P*	LO	LO	e*	LO	LO	LO	e—
LO	LO	LO	lO	LO	LO	to	LO	LO
1-4	1—4	1—4	1-4	1—4	1-4	1-4	1—4	1-4
								T3
e-	CO	CO		O	CO	*T	CO
LO	ř*	CM		LO	CM		LO	f—4
P-4	1—4	1—4	co	p4	T-4	1-4	1-4	cn
LO	CU	CM	CM	<31	CM	CM	e*	ó
LO	c-	CU	CO		CM		LO	CO
1-4	1—4	1—4		1-4	1—4	1—4	p4
	d€	<*>			d€	ae	d€
	1—4	co			f	co	ou	σι
ae	•	•	ae	ae	•	•	•	•
LO	LO	co	σ	CM	σι	LO	o	LO
CO	CO	σι	LO	σι	LO	CO	LO	4T
				u
				ta
		co		1				cn
				LO				CO
	CO O		1				χ
	Τ’	o	z	Z	z	Z	Z	4T
	o	1	*3	CO	4ř	4T	4?	CJ
	1	45·	X			ΞΖ	χ	CM
	TT	I	LO	LO	tO	LO	LO	Τ’
co	χ	CJ	α	CJ	α	α	o
7Σ	LO	*	1	I	t	1	1	1
cj	O	LO	c	α	o	o	o	o
cu	CU	α	o	O	CJ	CJ	CJ	CJ
o	o	o	1	l	l	I	1	1
tn	co	u	co	CO	4T	co		CM
1—	r—	r-	p—	P—	p—	1—	CJ	CJ
cj 5	o 1	O 1	o 1	CJ 1	CJ 1	CJ 1	1 LO	i LO
CO	CO	CO	CO	co	co	co	o	o
CO	<o	CO	co	CO	co	CO	CO	co
—	-r-
CJ	o	CJ	CJ	CJ	CJ	CJ	CJ	CJ
CM	CM	CM	CM	CM	CM		CM	CM
	CU	CO	4T	LO	LO	e-	co	σ
LO	LO	LO	LO	LO	LO	LO	tO	LO

-20Příklad 60

3- (3-Chlor-2-me thylf enyl )-1,2,3,4-rOxatri azol-5- (N-1 methylpropyl)imin-hydrochloriď

1,5 g (20 mmol) ethylnitritu se přikape do ledem chla zené směsi 2,16 g (8 mmol) 1-(3-chlor-2-methylfenyl)-4(1-methylpropyDthiosemikarbazidu a 2 ml 37% kyseliny chlorovodíkové v 80 ml ethanolu během 5 minut. Krátce potom se začne srážet síra. Směs se pak hodinu míchá, síra se odfiltruje a směs se odpaří. Přidá se ether (asi 50 ml) a substance začne pomalu krystalovat: krystaly se oddělí filtrací a suší.

Výtěžek 2,00 g = 93,73 %»

Teplota tání 151 až 153 °C.

Elementární analýza pro C^H^CU^O . HC1 . 1/4 H₂0 vypočteno 47,54 % C, 5,32 % B, 18,48 % B, 23,48 % Cl nalezeno 46,91 % C, 5,34% H, 18,17% B, 23,45 % Cl.

500 MHz ¹H NMR (dg-DMSO):

š 7,84 3H, ΑγΗ), ζ 3,77 (a, 1H, CH), í 1,69 (m, 2H,

Cff₂), ¹,33 (a, 3H, CH₃), í 0,96 (t, 3H, CH₃).

Příklady 62 a 63

Sloučeniny uvedené v tabulce 4 byly připraveny způsobem popsaným v příkladu 60.

-22Příklaď 64

3-(3-Chlor-2-methylfenyl)-1, 2,3,4-oxatriazol-5-(N-3methoxypropyl)imin-hydrochlorid

1,15 g (4 mmol) 1-(3-chlor-2-methylfenyl)-4-(3-methoxypropyl)thiosemikarbazidu se suspenduje ve 40 ml 96% ethanolu a 1 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se ochladí ledem a přikape se roztok 0,55 g (8 mmol) dusitanu sodného ve 2 ml vody s tím výsledkem, že suspenze se rozpustí a pak započne srážení síry. Směs se opět jedno hodinu míchá a pak se zfiltruje. i»měs se odpaří při maximálně 30 °C a přidá se 10 ml ethanolu a pak 50 ml etheru k substanci s tím účinkem, že se substance vysráží. Výsledný produkt se oddělí filtrací a suší.

Výtěžek 1,0 g - 78 %.

Teplota tání +33,1 až 133,3 ^σΟ

IR (KBr) (cm“¹): 3000-2700 (alifatický), 1710 (C-N“-C, HC1), 1085 (OCHj).

Příklad 65

3- (4-Methylsulfonylfenyl)-l,2,3,4-oxatriazol-5-imin-hydrochloriď

Roztok 4,66 g (25 mmol) 4-methylsulfonylfenylhydražinu ve 100 ml suchého tetrahydrofuranu se při 0 °G přidá k roztoku 1,32 g (12,5 mmol) bromkyanu v 10 ml etheru. Směs se za chladu míchá hodinu a pak se oddělí filtrací a promyje se suchým etherem. Filtrát se ochladí na teplotu mezi -20 a -40 °C a pak se přidává oxid dusnatý během asi 45 minut.

Ke směsi se pak přidá přebytek ethanolu/kyseliny chlorovodíkové a směs se dále míchá při 5 °G 4 hodiny. Výsledné krystaly se oddělí filtrací po rekrystalizaci z ethanolu. Výtěžek 1,20 g - 35

Teplota tání 193 a2 195 °C.

IR a UV poskytují výsledky stejné, jako byly získány? u pro-23duktu z příkladu 10.

Příklad 66 ,2-Bis-(3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazolyl5-karbamoyl) benzen.

4,94 g (20 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 1 se rozpustí v 60 ml vody, potom se za míchání přidá 3»78 g (45 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se přidá 60 ml dichlormethánu, výsledná substance se rozpustí. Potom se přidá 2,13 g (10 mmol) ftalylchloridu ke směsi.. Směs se 45 minut míchá při teplotě místnosti,pak se oddělí methylenchloridová fáze. Tato fáze se promyje dvakrát 60 ml vody a pak se odpaří. Substance se míchá s malým množstvím diethyletheru a oddělí se filtrací.

Výtěžek 3,53 g - 64,1 %

Teplota tání 176 až 178 °C.

IR: 1685 cm’¹ široký (G-N-GO).

Elementární analýza pro C^H-i vypočteno 52,28 % G, 2,93 % H, 20,32 % N, 12,86 % Cl nalezeno 51,87% C, 3,17 % H, 20,02 % N, 12,55 % Cl.

Příklad 67

1,4-Bis-(3-(3-chlor-2-méthylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazolyl5-karbamoylamino)benzen

3,40 g (13,4 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 1 se rozpustí v 50 ml vody a přidá se za míchání postupně 2,25 g (26,8 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se přidá 50 ml dichlormethánu, čímž se' vysrs žená substance rozpustí a potom se přidá 1,1 g (6,9 mmol) ,4-fenylendiisokyanátu ve 20 ml methylenchloridu. Směs se 60 minut míchá při teplotě místnosti a pak se oddělí methy lenchloridová fáze:. T_ato fáze se dbakrát promyje 50 ml vody

-24a odpá*í. Substance se míchá s malým množstvím diethyletheru a oddělí se filtrací.

Výtěžek 3,02 g - 78,5 %.

Teplota tání 200 až 201 °C (rozkl.)

IR 1660 cm¹ (H-CO-NH).

Elementární analýza pro ^Ο24^18θ^2^Ν1Οθ4^: vypočteno 49,53 % C, 3,12 % ff, 24,10 % H, 12,20 % Cl nalezeno 49,52 % C, 3,10 % H, 23,33 % Ν', 12,50 % Cl.

Příklad 68

3-(3-0hlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazol-5-(Π-1adamantyl)imin-hydrochloriď

5,1 g (14,6 mmol) 1-(3-chlor-2-methylfenyl)-4-(ladamantyl)thiosemikarbazidu se rozpustí v 1,5 1 methanolu a 1,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se ochladí ledem a přidá se 1,26 ml (30 mmol) ethy lni tritii a směs se opět míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Zakalený roztok se potom oddělí filtrací a odpaří. Substance krystaluje po několika hodinách za přítomnosti diethyletheru smíšeného s malým množstvím ethanolu. Substance se odfiltruje a promyje se etherem.

Výtěžek 2,9 g = 52,1 %

Teplota tání 204,3 až 204,8 °C.

Elementární analýza pro CjgHgjClN^O .HCl vypočteno 56,7 % C, 5,82 % H, 14,69 % N nalezeno 55,18 % C, 5,80 % H, 14,17% N

IR 2910 cm¹, 2860 cm“¹(alifatický), 1695 cm”¹ (C-N-C, HCl) Příklad 69

3-(3-Chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4-oxatriazol-5-(N-3hydroxyfenylkarbamoyl)imin

2,47 g (10 mmol) 3-(3-chlor-2-methylfenyl)-1,2,3,4oxatriazol-5-imin-hydrochloridu připraveného v příkladu 1

-25se rozpustí ve 30 ml vody, a pat se postupně za míchání přidá 0,9 g (10,7 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. Po ukončení vývoje oxidu uhličitého se za intenzivního míchání přidá 30 ml toluenu se 3-hydroxyfenylisokyanátem. Směs se pak míchá dále 30 minut, vysráží se žlutá substance. Tato substance se oddělí filtrací a promyje se dvakrát ethanolem a jednou diethyletherem.

Výtěžek 1,1 g - 31,8 %

Teplota tání 164 až 165 °C.

Elementární analýza pro Ο^ίΓ^ΟΙΝ^Ο^:

vypočteno 52,11 % C, 3,50 % H, 20,26 % N nalezeno 51,37% C, 3,42 % H, 19,36 % N.

IR: 1630 cm’¹ (N-CO-NE), 1320 cm’¹, 1210 cm¹ (ArQE) ^armekologické testy1. Inhibice agregace krevních destiček

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na jejich inhibici tvorby shluků (agregaci) krevních destiček (trombocytú), která je první fází tvorby krevních sraženin(tron bů). Taková inhibice může bránit tvorbě krevních sraženin a inhibovat vývoj nových trombů po diagnostice tromba.

Metoda demonstrace toho účinku je tak zvané agregometrické měření, které nejprve popsal Born (Nátuře(Lond.) 194, 927-929, 1962). ^použije se citrátem stabilizovaná (0,38 % citrátu sodného, finální koncentrace) žilní krve zdravých pokusných osob., které neužívaly léky nejméně 8 dnů. Slabé odstředění (160 x g po 10 minut) vede k PRP (krevní plasma bohatá na destičky), která se pipetuje. PPP (plasma chudá na destičky) se získá intenzivním odstředěním (3000 x g po 10 minut) zbylé krve. M$fí se propustnost světla agregometrem (CHRONOLOG). PRP nepropouští téměř žádné světlo, zatímco PPP propouští světlo úplně.

PRP se umístí do agregometru při 37 °G za míchání magne-26tem. Přídavek proagregační substance způsobuje postupnou agregaci PRP a současné zvýšení propustnosti světla. Při úplné agregaei se dosáhne propustnosti světla, odpovídající PPP. Jako proagregační substance se použije adenosin dif osf át (AiDP), tato substance představuje základní biochemický mechanismu agregace krevních destiček. Testované substance se inkubují 3 minuty v PRP umístěné v agregometru při 37 °G za magnetického míchání. Potom se přidá předemstanovená positivní agregační dávka adenosindifosfátu (ADP) (2 až 4 yuM). Zkoušejí se alespoň tři různé koncentrace testované substance pro demonstraci na dávce závislé inhibice agregace. Tak zvaná IC^Q-hodnota (to jest koncentrace inhibující agregaci z 50 % vztaženo na kontrolní agregaci) se vypočte-pro každou testovanou substanci lineární regresní analýzou (log koncentrace yuíí jako konstanta na souřadnici a % inhibice jako proměnné na pořadnici). Byly použity následující referenční substance: nitroglycesrin (GTN), nitroprusid sodný (NNP) a SIN-1 ( aktivní metabolit molsidominu).

Výsledky pro osut sloučenin podle vynálezu jsou uvedeny spolu s referenčními substancemi v tabulce 5.

Z tabulka 5 je zřejmé, že sloučeniny podle vynálezu jsou vynikající vzhledem k nejlepší referenční substanci. V tomto testu nebyl nitroglycerin aktivní.

-27Tabulka 5: Inhibice agregace krevních destiček

-282. Inhibice inhibitoru aktivátoru plasminogenu (PAI) z krevních destiček - (fibrinolytická aktivita)

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na svoji inhibici inhibitoru aktivátoru plasminogenu (PAI). Vzniklý trombus obsahuje agregované destičky spojené fibrinem. Organismus má fibrinolytický systém pro udržování normálních fyziologických podmínek. Endogenní plasminogen: je aktivován na plasmin (fibrinolysin, to jest proteolytický enzym rozkládající fibrin) pomocí aktivátoru tkáňového plasminogenu (t-PA)» Destičky zahrnují enzym PAI-1 inhibující aktivaci plasminogenu na plasmin a tak také rozklad fibrinu.

Obecná stimulace fibrinolytického systému může působit. řadu hemostetických vedlejších účinků (haemorrhages). Specifická Jiíbice? PAI-1 vyvolává zvýšenou fibrinolýzu v plochách s mnoha destičkami, eóž je exaktní případ v trombu. Výsledkem je: získaný trombolytický účinek.

Způsob demonstrace inhibice PAI-1 je popsán Lidburym a spol. (Brit.J.Pharmacol. 101, 527-530, 1990). Lidská PRP připravená slabým odstředěním jak bylo uvedeno výše, byla použita v tomto testu, ale pracuje se při nízké teplotě (4 °C). Při inkubaci PRP (1 ml ve zkumavce z plastické hmoty) se během slabého třepání při 37 °G uvolňuje PAI-1 aktivita a tato PAI-1 aktivita je měřena spktrofotometričky pomocí dvoustupňového postupu za použití komerčních kitů (Spéct roly se^/f i brin. kit od 3I0P0L, Švédsko).

PAI-1 aktivita kontrolní PRP a PRP inkubované s každou ze 6 sloučenin podle vynálezu a nitroprusidu sodného jako referenční substance (NNP)(50 /uM každé sloučeniny po 60 rnonifc) je zřejmá z tabulky 6. Tabulka 6 také ukazuje

-29procenta inhibice PAI-1 aktivity ve srovnání s kontrolními inkubacemi.

Z tabulky 6 je zřejmé, že sloučeniny podle vynálezu jsou všechny účinnými inhibitory uvolnění ΡΑΓ-1 z destiček. Jejich účinnost je srovnatelná s účinností nitroprusidu sodného (NNP)

Tabulka 6

Inhibice PAO-1 aktivity^

Substance (50 /um)	PAI-1 aktivita (U/108 destiček)	% inhibice
kontrola	3,24
nitroprusid
sodný	1,99	39
příklad č.
8	1,θ3	44
24	2,14	34
20	2,09	35
12	2,04	37
18	1,93	40
1/29(báze)	1,97 ·	39
3.Stimulace	guanylát cydclázy z	krevních destiček

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na jejich stimulaci guanylát cyklázy. Biologický účinek NO (oxiď

-30dusnatý) na mnoho buněk(například destičky a polymorfní nukleární leukoc.yt.y) je způsobován stmmulací enzymu, rozpust né guanylát cyklázy. Výsledkem je tvorba cyklického guanosin monofosfátu (c-GMP). Sloučeniny podle vynálezu- jsou všechny NO-donory. Zvýšení cyklického guanosin monofosfátu (c-GMP) v destičkách vede inter alia ke snížení možnosti agregace a ke snížené schopnosti adherovat na stěnách krevního řečiště.

Metoda doložení stimulace guanylát cyklázy je popsána Axelssonem a Aiderssonem (European J.Pharmacol. 88, 71?9, 1983). Lidské destičky jsou homogenizovány a odstředěny v ledově chladném mediu. -Aktivita guanylát cyklázy v supernatantu po inkubaci s a bez testované substance po 15 minutách při 37 °C se měří technikou radioimunozkoušky (RIA). Principem je, že se v konstantním množství řidá guanosin trifosfát (GTP) a působením guanylát cyklázy se převedena cyklický guanosin monofosfát (c-GMP), který se stanové radioimunozkouškou.

V koncentracích: 0,01 /uM, 0,1 ^uM, 1,0 /uM a 10 /um se testovalo jedenáet sloučenin podle vynálezu a referenční substance nitroprusid sodný (NNP) a SDÍ-1. Stimulace závislá na dávce aktivity guanylát cykláza je uvedena pro všechny sloučeniny.

Tabulka 7 ukazuje stimulaci po 0,01 ^u^ a 10 yu^. Sloučeniny podle vynálezu stimulují aktivitu guanylát cyklázy?· již v nejslabších koncentracích, což není případ nitroprusidu sodného (NNP) a SIN-1.

-31Tabulka 7

Stimulace guanylát cyklázy v destičkách

Substance aktivita guanylát cyklázy

	(pmol c-GMP/ag	prot. x 15 minut)
koncentrace	0,01	1 0 /um
nitroprusiď
sodný	0	3399
SIN-1	0	59733
přiklaď 2	411	37920
příklad 8	897	64192
příklad 24	2374	59716
příklad 20	2225	47298
příklad 3	2499	47529
příklad 23	383	76915
příklad 1/29	4407	61900
(báze)
příklad. 54	8139	18693
příklad 38	1024	82100
příklad 13	7642	481 26
příklad 63	1 761	72730
4. Relaxační	vliv na tracheu

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na svoji schopnost relaxovat pre-kontraktovanou tracheu. Kontrakce dýchacích cest v kombinaci se zbytněním mukozní membrány představuje vitální faktor astmatických Relaxace nebo dilatace stažených dýchacích cest bude zlepšovat astmatický stav.

Způsob demonstrace realaxace pre-kontraktované trachey je popsán Emmersonem a “^ac K^yem (J.Pharm. Pharmacol. 31 >

-32798, 1979) ^oužije se izolovaná tradea morčat. Po přípravě řezů z kruhového svalstva se orgán rozdělí na dva díly stejné velikosti. Dva traceální řezy se suspendují ve své resp. orgánové lázni a spojí se se zařízením, zaznamenávajícím kontrakci a relaxaci orgánu na rekordéru. Dva traceální řezy jsou kontinuálně máčeny v Krebsově pufru při 37 °C, konstantně probublávaném karbogenem (95% O2 a 5 % CO^) Po asi 3 hodinách ekvilibrac© se orgány testují na svoji citlivost (kontraktilitu) k karbamylchlinovéau bolusu přidanému přímo do lázně (0,3 yuM). Je-li kontrakce postačující, orgány se přenesou do Krebsova pufru, obsahujícího stejnou koncentraci karbamylcholinu. Orgány se nyní 'konstantně vystaví karbamylcholinu a pomalu se vyvíjí permanentní kontrakce (astma), ^římo do orgánové lázně se přidá bolus testované substance. Po maximu účinku (relaxaci) se substance odstraní promytím a tracheální řez se vrátí do stavu své permanentní kontrakce. Testují se alespoň 3 různé koncentrace testované substance se testují pro demonstraci na dávce závislé relaxace orgánu. Vypočte se EC^Q-hodnota (to jest koncentrace uvolňující orgán z 50 % vzhledem k maximální relaxaci) se vypočte pro každou testovanou substanci pomocí lineární regresní analýza (log: koncentrace (^uM) jako konstanta na souřadnici a % relaxace jako proměnná na pořadnici). Nitroprusid sodný (NNP) a SIN-1 byly použity jako referenční substance.

Výsledky pro osm sloučenin podle vynálezu a pro dvě referenční substance jsou uvedeny v tabulce 8.

Z tabulky 8 je zřejmé, že sloučeniny podle vynálezu jsou účinností rovnocenné NNP jiokud jde o uvolnění pre-kontraktovaných řezů a jsou účinnější než SIN-1. Je třeba uvést, že sloučeniny podle vynálezu mají dlouhodobější účinek ve srovnání s referenčními substancemi.

-33Tabulka 8 Relaxace trachey

Substance EC^q /^u^ nitroprusiá sodný (NNP) 2,5 SIN-1 18,3 příklad δ.

0,7

2,7

4,9

1/29(báze) 0,8

0,6

3,2

1,1

47a 5,2

5. Inhibice funkce leukocytů

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na svoji schopnost zvyšovat obsah cyklického guanosin-moaofosfátu (c-GMP), pro inhibici syntézy leukotrienu (LTB^) a pro inhibici chemotaktického pohybu polymorfních nukleárních leukocytů (PMN). Polymorfní nukleární leukocyty představují vitální část v buněčné části zánětlivého procesu. Při chorobách jako je astma, je mukozní membrána dýchacích cest zbytněna jako výsledek zánětu s významnou infiltrací zejména polymorfních nukleárních leukocytů (PMN). Zvláště účinné substance pro léčbu astma jsou ty, které navíc k relaxaci svalstva v respiračních cestách mají také protizánětlivý účinek na buněčnou fázi zánětlivého procesu, to znamená, že inhibují funkci leukocytů.

-34Způsob demonstrace inhibice funkce leukocytů je popsán Moilanenem a spol. (ábstracts, 2.International Symposium on Endothelium Derived Vasoactive Factors, Basilej 1992). Izolované lidské PMN se inkubuji při 37 °C 10 minut, pak se měří obsah cyklického guanosin monofosfátu (c-GMP). Dále se stanoví syntéza LTB^ po stimulaci s Ga-ionofořem (-A23187) a chemotaxe ( řízený pohyb) vůči FMLP (substance, přitahující polymorfní nukleární leukocyty, PMN).

Tři sloučeniny podle vynálezu a referenční substance SIN-1 se testují na svoji schopnost stimulovat obsah cyklického guanosin monofosfátu (c-GMP).

Tabulka 9 Představuje na dávce závislé zvýšení obsahu c-GMP v PMN. Sloučeniny podle vynálezu jsou účinnější než SIN-1.

Sloučeniny podle vynálezu inhibují navíc syntézu leukotrienu 3^ v PMN a PMN chemotaxi vůči FMLP. SIN--1 byl také schopen inhibovat tyto funkce leukocytů, ale Jen při použití ve vyšších koncentracích.

Popis připojených obrázků

Obr. 1 ilustruje inhibici chemotaxe pro 2 sloučeniny podle vanálezu, obr. 2 ilustruje inhibici ayntázjř leukotrienu B^ ve srovnání se zvýšením obsahu c-GMP v polymorfních nukleárních leukooytech (PMN) pro jednu sloučeninu podle vynálezu;.

Je zřejmé, že paralelně může být zobrazen vztah mezi zvýšením cyklického guanosin monofosfátu (c-GMP) a snížením syntézy LTB^ a chemotaktickým pohybem PMN.

-35Tabulka 9

Stimulace c-GMP v PMN

Substance koncentrace c-CMP _/UM (fmol^x/1O⁶ buněk)

3IN-1

O

100

220

473 příklad 24

O 13

391

965

100 1078 příklad 20

100

175

492

866 příklad 1/29(báze)

O 14

209

859

100 1044 ^xf =

10-¹⁵

-36Testy toxicity ^yly provedeny dva testy na samcích krys, jmenovitě stanovení maximální tolerované dávky (MTD) a test za použití násobných perorálních dávek. Dále byl proveden LD^q test intravenozně na myších.

1. Stanovení maximální tolerované dávky

V MTD-testu byla 10 zvířatům podána dávka substance jednou denně po týdek, během této doby byly? zaznamenávány klinické a hematologické parametry. Jestliže se neobjevily žádné výrazné vedlejší účinky byla dávka zvýšena následující týden až do objevení se vedlejších účinků. Hematologické parametry, které byly měřeny, byla následující: počet červených a bílých krvinek ., počet krevních destiček, procenta hemoglobinu, hematokrit a pro červené krvinky? také průměrný objem buňky, průměrný obsah buněčného hemoglobinu a průměrná koncentrace buněčného hemoglobinu. Dále byl provedeno diferenciální sečtení bílých krvinek.

Výsledky testu jsou uvedeny v tabulce 10.

-37Tabulka 10

Přiklaď dávka δ. mg/kg klinická pozorování* hematologické parametry* zvýšení hmotnosti

10 20

MTD studie i.p.

N.R. N.R. N.R.

CNS efekt zvýšení sníženo neutrofilních granulocytů s toxickou granul ací

MTD studie p.o.

N.R. N.R.

N.R. N.R.

N.R. sníženy RBC¹ snížena HGB² zvýšeny WBC^

N.R.

N.R.

N.R.

hodnoceno vzhledem ke kontrolní skupině N.R.: nic významného ¹: červené krvinky : procenta hemoglobinu 3: bílé krvinky

Sloučenina připravená podle způsobu v příkladu 1, podávaná intraperitoneálně krysám, byla tolerována s jen malými vedlejšími účinky až do 20 mg/kg ( MTD). Nejvýznam· nější vedlejší účinky při 20 mg/kg byly účinky na CNS, kde zvířata několik minut po podání se jevila nervózní a hyperaktivní a kde byla zaznamenána toxická reakce v obrazu bílých krvinek (zvýšený počet neutrofilních granulocytů a toxická granulace v některých buňkách).

-38Odpovídající hodnota (MTD) při použití téže sloučeniny při perorálním podání byla 40 mg/kg. Po podání této dávky byla zaznamenána anemie a zvýšený obsah bílých krvinek se projevil po jednom týdnu.

2. Perorální podání násobné dávkjr

V tomto testu byly substance podávány perorálně v dávce 20 mg/kg jako roztoky nebo suspenze jednou denně po 5 dnů skupinám 5 zvířat. Klinická pozorování byla prováděna každý den a byly měřeny výše uvedené parametry třetí den testu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 11.

Tabulka 11

Příklad dávka klinická hematologické zvýšení

č. mg/kg pozorování* parametry* hmotnosti*

5-d«aní perorální podání

21	20	N.R.	N.R.	N.R.
26	20	N.R.	N.R.	N.R.
43	20	N.R.	N.R.	N.R.
38	20	N.R.	N.R.	N.R.
50	20	N.R. .	N.R.	N.R.

*hodnoceno vzhledem· ke kontrolní skupině

N.R.: nic významného

V dávce 20 mg/kg sloučeniny připravené v příkladech , 26, 43, 38 a 50 nevyvolávají žádné vedlejší účinky· u krys po 5denním podávání.

-393, ^LD50 test (Podle Lichtfielda a Wilcoxona, J.Pharmacol.Exp.Therap.

96, 99-113, 1949).

Intravenozní LD^g-hodnota byla stanovena po jedné jednotlivé injekci různých dávek sloučeniny připravené v příkladu 4.

Výsledky jsou zřejmé z tabulky 12.

Tabulka 12

Příklad LD_5Q mg/kg s 95%

č. samci myší samice myší

89(82-97) 81 (75-88)

4. Farmakologické závěry

Sloučeniny podle vynálezu mají farmakologické vlastnosti, které je činí vhodnými pro léčhu trombosy a astma.

Trombóza

Inhibice agregace krevních destiček spolu s inhibicí PAI a stimulací c-GMP v destičkách Činí sloučeniny zajímavými pro prevenci trombózy i pro disoluci již ustaveného trombu.

Astma

Relaxace dýchacích cest spolu s inhibicí funkce leukocytů činí sloučeniny zajímavými pro léčbu astma, přičemž druhá z uvedených vlastností bude inhibovat zánětlivé zbyt nění mukozní membrány v dýchacích cestách.

-40Navíc k výše uvedeným farmakologickým vlastnostem sloučenin podle vynálezu, tyto mají také relaxační účinek na buňky jiných hladkých svalů například v arteriích, vénách a kavernozních tkáních. Dále snižují krevní tlak u krys.

Vynález byl popsán svými výhodnými provedeními. Je však možno provést mnoho modifikací, aniž by došlo k odchýlení se od rozsahu vynálezu.

Claims (2)

1/2

PMN chemotax<% kcgitrolý

SNAP “ S-nitřoso-N-acetyl-penicillainin

Ά ( '⁷ Q

1 a jejich edičních solí s kyselinami, vyznačující se t í m, že se

a) uzavře kruh 1-arylthiosemikarbazidového derivátu obecného vzorce III kde R¹ má význam uvedený pod vzorcem I a R^ je buá H nebo skupina obecného vzorce IV

-43-X-Y-Q-(Z)_m (IV) kde X je přímá vazba a Y a Q-(Z) mají stejný význam jako ve vzorci I, zpracováním s alkylnitritem, majícím 1 až 6 atomů uhlíku nebo dusitanem alkalického kovu za kyselých podmínek při přibližně 0 až 10 °C a pak se výsledná sůl popřípadě převede na volnou sloučeninu a je-li to žádoucí, pak se acyluje.

Anotace PV

Název vynálezu: 3-Substituované 1,2,3,4-oxatriazol-5-imino vé sloučeniny, způsob jejich přípravy a farmaceutický přÍDravek, obsahující takové sloučeniny

3-Substituované 1,2,J,4-oxatriazol-5-iminové sloučeniny obecného vzorce I, mající biologickou účinnost, která je činí vhodnými pro léčení kardiovaskulárních chorob (krevních sraženin), anginy pektoria a astma, způsob jejich přípravy a farmaceutický přípravek, obsahující tyto sloučeniny.

Obr. 1

1. kde R má stejné významy uvedené pro X,Y a Q, s tou podmínkou, že R není vodík, alkyl, benzoyl, trifluoracetyl nebo popřípadě substituovaný fenyl, jestliže R je methyl nebo chlor a n je 1 a & není vodík nebo popřípadě substituovaná fenylová skupina, je-li R¹ nitro, alkoxy, fluor nebo brom a n je 1.

2. 3-Substituovaná 1,2,3,4-oxatriazol-5-iminová sloučenina podle nároku 1, kde n v obecném vzorci I je 2 až 4.

3. Farmaceutický přípravek, vyznačující se t í m, že jako účinnou složku obsahuje sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

4. Způsob přípravy 3-substituovaných 1 ,2,3,4-oxatriazol-5-iminových sloučenin obecného vzorce I podle nároku

1,2,j,4-oxatriazol-5-iainové slouI a jejich adiční sole s kyselinami kde R¹ je stejné rozdílná alkylová nebo alkoxylová skupina mající 1 až 3 atomy uhlíku, halogen, trifluormethyl, nitro, kyano, fényl nebo alkylsulfonylové skupiny, n je 1 až 5 a R je vodík nebo skupina vzorce II —X—Y—Q—(Z) (II) m

kde X je -C(O)-, -0(0)0-, -C(O)NH-, -S(0)₂ nebo přímá vazba,

Y je alkylenová skupina, mající 1 až 4 atomy uhlíku nebo přímá vazba a

Q je alkylová, cykloalkylové, alkoxylová nebo fenylová, pyridylová, furanylová, thienylová nebo pyrezinylová skupina, která je popřípadě substituována skupinou Z, kde

Z je alkylová nebo alkoxylová skupina, mající 1 až 3 atomy uhlíku, halogen, avyloxy, trifluormethyl, nitro, kyano nebo alkylsulfonyl a m je 1 až 3,

-42kde Z také, jestliže X je -C(0)- nebo -C(O)NH-, je Y přímá vazba a Q je substituovaný fenyl, může znamenat strukturu p

1 . 3-Substituované čeniny obecného vzorce

2/2

Obr.2 Vztah mezí zvýšením intracelulárních cGMP hladin a inhibioí syntézy LTB^ pomocí GEA 3Γ84

LTB4 (ng/10^cbu£j cGMP (imol 10 _bu~.

O 0.1 1.0 10· 100 GEA 3184 C μΜ 1