CZ161898A3

CZ161898A3 - Hydrolýzně optimalizované lipidové emulze a jejich použití

Info

Publication number: CZ161898A3
Application number: CZ981618A
Authority: CZ
Inventors: German Pscherer; Marco Junginger; Jörg Nehne; Yvon A. Carpentier
Original assignee: B. Braun Melsungen Ag
Priority date: 1995-11-28
Filing date: 1996-11-23
Publication date: 1998-11-11
Also published as: ATE230262T1; CA2236422C; BR9611826A; CN1202823A; EP0863754B1; NZ322927A; DE69625616T3; ES2189891T3; MX9804127A; PL186618B1; JP2000500769A; CA2236422A1; DE69625616T2; AU701736B2; DE69625616D1; CN1259908C; ES2189891T5; EP0863754B2; WO1997019683A1; AU7697296A

Description

Hydrolýzně optimalizované lipidové emulze a jejich použití

Oblast techniky

Předložený vynález se týká hydrolýzně optimalizovaných isotonických lipidových emulzí (tukových emulzí) pro parenterální podávání, zejména pro parenterální výživu a jejich použití v situacích přílišné zánětlivé odezvy (například po chirurgickém zákroku, po traumatu, po sepsi, zánětlivém onemocnění nebo nemoci chřadnutí) nebo ze zvýšeného rizika vaskulární trombózy a závažné srdeční arytmie, kde je důležité vyvarovat se ovlivnění akumulace exogenních triglyceridů, zatímco se uvolňují mastné kyseliny dostupné z různých tkání těla tak rychle, jak je to jen možné.

Dosavadní stav techniky

Lipidové emulze pro parenterální výživu slouží k zásobování těla tuky v intravenózně přijatelné dávkovači formě, když je normální (orální) výživa nemožná, sporná nebo léčebně kontraindikována nebo když je nutné promptně modifikovat strukturu mastných kyselin z buněk. Lipidové emulze, které jsou běžně dostupné, se připravují z rostlinných olejů (například ze saflorového nebo sojového oleje), v některých případech mohou také obsahovat triglyceridy o středně dlouhém řetězci (MCT) a/nebo oleje mořského původu (rybí oleje).

Triglyceridy o dlouhém řetězci z rostlin nebo mořského původu slouží jako zdroj energie a když obsahují polynenasycené mastné kyseliny, jako dodavatelé esenciálních mastných kyselin.

·· ***·	··	• toto·	99	··
• to ·	9 9	•	9 to	• ·
• ·	9 ·	• · ·	• ·	99
• ·	• · ·	•	• ···	9 9
♦ ·	'· to	•	to	9 9
• toto· to	• to^:	99 9	« ·	99

Třídění takovýchto polynenasycených mastných kyselin na omega-6 nebo omega-3 řadové typy je založeno na chemických strukturních rysech, přesněji na vzdálenosti první nenasycené vazby od methylového konce (omega konec) molekuly mastné kyseliny.

Rostlinné oleje, například sojový nebo saflorový jsou vyznačenými vysokým obsahem polynenasycených mastných kyselin omega-6 řady (především kyseliny linolové, 18:2 n-6) zatímco obsah omega-3 mastných kyselin (téměř·.:·; výlučně ve formě alfalinolenové kyseliny, 18:3 n-3) je nízký.

Rybí oleje získané ze studenovodních ryb jsou vyznačeny vysokým obsahem polynenasycených mastných kyselin omega-3 řady (především eikosapentenové kyseliny, EPA, 2:5 n-3, a dokosahexanové kyseliny, DHA, 22:6 n-3), přičemž obsah omega-6 mastných kyselin je nízký. Triglyceridy se střední délkou řetězce podávané s lipidovými emulzemi slouží zejména jako zdroj energie. Středněřetězcové triglyceridy neobsahují žádné nenasycené mastné kyseliny a tudíž neobsahují ani omega-6 ani omega-3 esenciální mastné kyseliny.

Početná klinická zjištění podtrhují základné vhodnost lipidových emulzí pro parenterální výživu a pro substituci esenciálních mastných kyselin při závažných onemocněních a metabolických stavech.

Lidské tělo je samo o sobě neschopné produkce vitálních polynenasycených dlouhořetězcových mastných kyselin omega-6 nebo omega-3 řad, to jé tyto kyseliny musí být podávány orálně, enterálně nebo parenterálně. Tělo je jen schopné syntetizovat dlouhořetězcové nenasycené mastné kyseliny z kratších řetězců kyselin, tvorba omega-6 mastných kyselin z prekursorů omega-3 řady nebo naopak je však nemožná.

•t ··»· φ · • ··· φφ φφ φ φ · φ φ ΦΦΦ ♦. φ ♦ · · · * ··· · φ • Φ φ φ φ ΦΦΦ φφφ'φ φ φφ ΦΦΦ φφ φφ

Tudíž existuje potřeba lipidových emulzí pro parenterální podávání, které obsahují středněřetězcové triglyceridy stejně jako triglyceridy omega-6 a omega-3 mastných kyselin jako lipidové složky.

EP-A-0 311 091 popisuje isotonické lipidové emulze pro parenterální výživu, které obsahují navíc ke konvenčním aditivům a pomocným prostředkům omega-3 mastné kyseliny, omega-3 mastné kyseliny ve formě jejich esterů nebo jako složek rybích olejů, středněřetězcové triglyceridy, stejně jako případně alespoň jeden rostlinný olej zajištující omega-6 mastné kyseliny v podílu až do 30 %, vztaženo na obsah lipidů emulze.

DE-OS-37 21 137 popisuje lipidové emulze pro parenterální výživu, obsahující triglycerid eikosapentenové kyseliny a/nebo triglycedrid dokosahexenové kyseliny, nebo rybí oleje obsahující takovéto triglyceridy, stejně jako rostlinné oleje obsahující omega-6 mastné kyseliny a středněřetězcové triglyceridy .

DE-OS-34 09 793 popisuje lipidové emulze pro transfúzi obsahující mastnou kyselinu od 20 do 22 atomů uhlíku, její estery, nebo směs dvou nebo více takovýchto mastných kyselin nebo esterů, stejně jako rostlinný olej, emulgátor a vodu. Uvedené mastné kyseliny jsou mastné kyseliny z esterů mořského původu (rybí oleje) zejména omega-3 mastné kyseliny. Uvedené rostlinné oleje jsou čištěný sojový olej a/nebo saflorový olej.

Aby tyto exogenní volné mastné kyseliny byly učiněny dostupnými tělu, musí být bučí uvolněny hydrolyticky ze zavedených triglyceridů pomocí enzymu lipoproteinlipasy (LPL) nebo vyzvednuty společně s emulzními částicemi nebo jejich zbytků přímo do buněk.

·· «*·>· ·· *>·»· φφ φφ ♦ · Φ ΦΦΦ 9 9 9·

9 99 999 9 9 99

9: · Φ' ♦ · 9 · ··· 99 — · Φ ♦ 9 φ 9 9·

9999 9 99 999 9999

Tento počáteční stupeň lipidové hydrolýzy byl dlouho považován za stupeň omezující rychlost lipidového metabolismu. Toto omezení vzniká z relativně omezené aktivity lipoproteinlipasy při štěpení triglyceridů. Tak maximální metabolizační rychlost pro emulze rostlinných olejů je asi 3,8 g lipidu/kg tělesné hmotnosti za den (Hallberg a j., Actaphysiol. Scand., vol. 65, Suppl. 254 (1965), str. 2-23).

Během zavádění triglyceridů je žádoucí dosáhnout koncentrací triglyceridového séra, které jsou tak nízké, jak je to jen možné, například odpovídajících nízkému zatížení retikuloendotheliálního systému (RES) exogenním lipidem.

Typicky, pooperační a poúrazové stavy stejně jako těžké septické epizody jsou vyznačeny podstatnou stimulací imunitního systému. Imunitní odezva zahrnuje uvolnění cytokinů (například tumorového nekrózního faktoru a interleukinů), které při vysokých hladinách mohou vyvolat vážné poškození tkáně.

Navíc vysoké koncentrace cytokinů také zhoršují hydrolýzu cirkulují ch triglyceridů půsoabením LPL.

Při takovýchto klinických podmínkách je zvlášt důležité použít exogenních triglyceridů, které jsou rychle hydrolýzovány a eliminovány a které obsahují mastné kyseliny, například omega-3 mastné kyseliny) schopné redukovat produkci cytokinů stejně jako toxicity cytokinů na tkáně.

Mastné kyseliny jako energetický substrát (pro oxidační účely) a pro začlenění v membránách (pro strukturální účely) a jako prekursory eikosanoidů by měly být dostupné tělu tak rychle, jak je to jen možné.

Typické triglyceridy rybích olejů jsou hydrolýzovány

- 5 mnohem pomaleji, než triglyceridy z rostlinných olejů (například sojový olej), které jsou samy o sobě hydrolýzovány pomaleji než středněřetězcové triglyceridy. Přídavek emulze rybího oleje do emulze dlouhořetězcových triglyceridů může dokonce bránit hydrolýze dlouhořetězcových triglyceridů (například ze sojového oleje) působením LPL.

Tudíž je cílem vynálezu vytvořit lipidovou emulzi pro parenterální výživu schopnou být parenterálně podávanou, která je optimalizována s ohledem na hydrolýzu a eliminaci, což znamená, že triglyceridy dodávané touto lipidovou emulzí jsou hydrolýzovány v těle extracelulárně nebo intracelulárně, to je štěpeny na volné mastné kyseliny a glycerol tak rychle, jak je to jen možné bez průvodního přílišného vzrůstu sérové hladiny volných mastných kyselin. To znamená, že může být podáno více lipidů do těla parenterálně ve stejném časovém intervalu bez vzrůstu koncentrace lipidů nebo koncentrace hydrolýzních produktů.

Podstata vynálezu

Tohoto cíle je dosaženo hydrolýzně optimalizovaných isotonických volných lipidových emulzí pro parenterální podávání obsahující, vztaženo na celkový obsah lipidů lipidové emulze:

od 30 do 60 % hmotnostních středořetězcových triglyceridů, od 35 do 65 % hmotn. alespoň jednoho rostlinného oleje obsahujícího triglyceridy, které dovávají omega-6 mastné kyseliny, od 5 do 20 % hmotnostních alespoň jednoho rybího oleje obsahujícího triglyceridy, které dodávají omega-3 mastné kyseliny a konvenční pomocné prostředky a/nebo přísady.

- 6 *9*9

• · 9 ·»	• ·	99
•	• 9	9
···	9 ·		··
•	9 9 · 9	•
•	9	9
• · ·	99		9 9

Překvapivě bylo zjištěno, že cíle tohoto vynálezu může být dosaženo kombinací v týchž emulzních částicích středněřetězcových triglyceridů, rostlinných olejů bohatých na omega-6 mastné kyseliny a rybích olejů obsahujících omega-3 mastné kyseliny ve výše zmíněných kvantitativních podílech. Zejména bylo zjištěno, že MCT/rostlinný olej/rybí olej směsi tohoto vynálezu se rychleji hydrolýzují než známé MCT/rostlinný olej směsi a MCT/rostlinný olej/rybí olej směsi dosavadního stavu techniky.

Takto se lze vyvarovat triglyceridovému zatížení těla exogenními triglyceridy. Středněřetězcové mastné kyseliny a dlouhořetězcové esenciální mastné kyseliny se stávají rychle dostupnými pro tělo. To nezpůsobuje žádný významný vzrůst koncentrace séra volných mastných kyselin navzdory skutečnosti, že více lipidů se dodává do těla na jenotku času. Dálell rychlé začlenění omega-3 mastných kyselin do destičkové a leukocytové membrány fosfolipidů může být zjištěno.

Lipidové emulze podle tohoto vynálezu zahrnují emulgované směsi olejů (lipidů) spíše než směsi emulzí.

Podle tohoto vynálezu ty středněřetězcové triglyceridy se použijí, které mají délky řetězců mastných kysein v rozmezí od Cg do C^4 a které jsou obsaženy v alespoň 90 hmotnostních % triglyceridů kaprylové kyseliny (Cg) a kaprínové kyseliny (Cjqj. Frakce středněřetězcových triglyceridů, vztaženo na celkový obsah lipidů lipidové emulze je výhodně od 45 % do 55 %, výhodněji od 48 % do 52 % hmotnostních.

Lipidové emulze podle vynálezu dále obsahují alespoň jeden rostlinný olej obsahující triglyceridy sestavené převážně z omega-6 mastných kyselin.

·· ···♦ ·· ·· • · ♦ · · · · · · · ♦ · · · ··· · · *· • · · · · ♦ » ··· · · _ 7 — ····© ··· / · · t « « 99 9 99 ····

Výhodné rostlinné oleje jsou saflorový olej a/nebo sojový olej, přičemž obsah těchto rostlinných olejů v lipidové emulzi je výhodně od 35 % do 45 %, výhodněji od 38 % do 42 % hmotnostních, vztaženo na obsah lipidu v lipidové emulzi. Rostlinné oleje obsahují triglyceridy mastných kyselin majících délky řetězce C^g až C^q a především obsahují triglyceridy omega-6 mastných kyselin.

Rybí oleje jsou známy, že obsahují eikosapentenovou kyselinu (EPA, 20:5 n-3) a dokosahexenovou kyselinu (DHA, 22:6 n-3) začleněné v triglycedridech, které jsouce tzy. vysoce nenasycenými omega-3 mastnými kyselinami, jsou esenciálními stavebními bloky, které musí být dodávány do těla a které jsou biologicky důležité například jako prekursory eikosanoidů a jako strukturální elementy membránových lipidů.

Těmto kyselinám je dále přisuzováno antitrombotické a lipidy znižující působení. Protože jejich izolace z přírodních produktů a jejich chemická syntéza jsou drahé, rybí oleje jsouce relativně nenákladné, jsou dodavateli volby pro tyto esenciální mastné kyseliny.

Ϊ

Jak je použito v tomto vynálezu, výraz rybí oleje je určen, aby zahrnoval přírodní rybí oleje, zpracované rybí oleje nebo vysoce čištěné koncentráty rybích olejů. Podle tohoto vynálezu zpracované rybí oleje mohou být také použity jak je popsáno například v EP-A-0 298 293, který je zde začleněn formou odkazu.

Vhodnými příkladnými rybími oleji jsou olejell které se získají ze studenovodních ryb v technicky významném měřítku nebo oleje, které jsou synteticky získatelné esterifikací omega-3 mastných kyselin (získaných z rybího oleje studenovodních ryb, výhodně lososa, sardinky, makrely, sledě, saraele, ♦· ···· • · • ··· ·· *··» korušky a mečouna, hydrolýzou triglyceridů a následným čistěním a koncentrací výsledných omega-3 mastných kyselin) s glycerolem. Rybí oleje obecně obsahují triglyceridy mastných kyselin majících dlouhé řetězce od 12 do 22 atomů uhlíku. Zejména výhodné jsou vysoce vyčištěné koncentráty rybího olejeH které se získají například ze sardinkových, lososových, sledových a/nebo makrelových olejů. Mají obsah eikosapentenové kyseliny od 20 do 40 %, výhodně alespoň 25 % vztaženo na methylestery mastných kyselin koncentrátu rybího oleje jak je určeno plynovou chromatografií (plošná %).

Dále mají obsah dokosahexenové kyseliny od 10 do 20 %, výhodně alespoň 12 % vztaženo na methylestery mastných kyselin koncentrátu rybího oleje jak je určeno plynovou chromatografií (plošná %). V případě rybích olejů, které jsou synteticky získatelné reesterifikací omega-3 mastných kyselin, může být celková koncentrace eikosapentenové + dokosahexenové kyseliny alespoň 45 % vztaženo na základ triglyceridů. Je zvlášň výhodné použít rybí olej bohatý na EPA, když mají být ovlivněny zánětlivé procesy. Rybí olej bohatý na DHA je zvlášň výhodný u pediatrických pacientů v případě deficitu omega-3 mastných kyselin pro ovlivnění růstu a zrání centrálního nervového systému. Výhodně je obsah rybího oleje, vztaženo na celkový obsah lipidů lipidové emulze od 10 do 20 %, výhodně od 10 % do 14 % hmotnostních. Celkový obsah lipidů lipidové emulze je od 5 % do 30 %, výhodně od 10 % do 25 % hmotnostních vztaženo na vodnou lipidovou emulzi.

čké⁼ ripidové^můTze obsahují obvyklé pomocné přípravky a/nebo aditiva jako jsou emulgátory, emulgační pomocné prostředky (koemulgátory),stabilizátory, antioxidanty a isotonující přísady.

··	····	«·	····	··		··
• ·	*	• ·	•	• ·	•	•
•	•	• ·	···	• ·		··
•	•	• · ·	•	• <···	•	•
•	•	• ·	•	•	•	•
····	•	··	···	··		··

Jako emulgátory se použijí fyziologicky akceptovatelné emulgátory tak, jako fosfollipidy živočišného nebo rostlinného původu. Zvláš£ výhodné jsou čištěné lecithiny, zejména sojový lecithin, vaječný lecithin nebo jejich frakce nebo odpovídající fosfatidy. Obsah emulgátoru je od 0,6 % do 1, 5 %, výhodně 1,2 % hmotnostní, vztaženo na celkovou emulzi.

Dále mohou být použity soli dlouhořetězcových, ^Cjg^-C2o mastných kyselin a alkalických kovů jako emulgační pomocné prostředky (koemulgátory). Zejména jsou výhodné jejich sodné soli. Koemulgátory se používají v koncentracích od 0,005 % do 0,1 %, výhodně 0,02 % až 0,04 % hmotnostních vztaženo na celkovou hmotnost emulze. Dále může být využit cholesterol nebo samotný ester cholesterolu nebo v kombinaci s jinými koemulgátory v koncentraci od 0,005 % do 0,1 %, výhodně od 0,02 % do 0,04 % hmotnostního.

Lipidová emulze podle vynálezu může obsahovat vitamin E, zejména alfa-tokoferol a/nebo askorbylpalmitat jako antioxidanty a tak pro ochranu pro tvorbu peroxidu v množstvích od 10 do 1000 mg, výhodně 25 až 200 mg vztaženo na 100 g lipidů.

Pro stabilizaci a isotonizaci může emulze podle vynálezu obsahovat od 2 % dio 5 % hmotnostních stabilizačního neabo isotonizujícího aditiva, například polyhydroxyalkohol. V tomto spojení je výhodný glycerol, sorbitol, xylitol nebo glukosa, přičemž glycerol je zvlášř výhodný.

Lipidové emulze podle vynálezu jsou stálé olej ve vodě (o/v) emulze, ve kterých vnější, kontinuální fáze sestává z destilované vody vyčištěné pro parenterální účely. Takováto o/v emulze se získá smísením MCT, rostlinného oleje a rybího oleje a následnou emulgací. Po sterilizaci má lipidová emulze pH od 6,0 do 9,0, výhodně od 6,5 do 8,5.

• · • ·

Isotonické lipidové emulze podle vynálezu mohou být připraveny známými postupy s inertizací. První přiblížení je nejdříve smísit lipidy, emulgátor a jiné pomocné prostředky a aditiva a pak doplnit vodou s dispergací. Voda může případně obsahovat další ve vodě rozpustné složky (například glycerol). Emulze takto získaná ještě obsahuje lipidové částice o průměru asi 10 mikrometrů. Průměrný rozměr kapičky emulze pak musí být dále snížen další homogenizací, například za použití vysokotlakého homogenizátoru. Pro parenterální aplikaci jsou střední rozměry lipidových kapiček menší než 1,0 mikrometru, zejména menší než 0,5 mikrometru, čemuž se dává přednost.

Lipidové emulze podle vynálezu se používají pro parenterální podávání, zejména parenterální výživu pacientů se zvýšenými zánětlivými odezvami nebo zvýšeným rizikem vaskulární trombózy nebo závažnou srdeční arytmií. Zejména mohou být lipidové emulze podle vynálezu použity u pacientů v pooperačním a poúrazovém stavu nebo zánětlivých nemocech, dále například při vážném nebo přetrvávajícím poagresivním metabolismu po operacích jako jsou abadominální operace nebo transplantace orgánů a vícenásobné trauma, zánětlivé choroby, spáleniny, infekce, hrozící nebo projevující se sepse, narušená respirační funkce, stavy přílišné produkce cytokinů, choroby chřadnutíaa zvýšené riziko vážné srdeční arytmie, například ventrikulární fibrilace nebo vaskulární trombóza.

Lipidové emulze podle vynálezu mohou být také použity pro parenterální výživu po šokových podmínkách pro zlepšení mikroperfúze a metabolického výkonu orgánů špatně zásobovaných krví za podmínek metabolické reanimace.

Vynález bude znázorněn následujícími příklady provedení.

Příklady provedení vynálezu

Preparativní příklady

Tabulka 1 ukazuje složení mastných kyselin (přibližná %) z různých olejů používaných v lipidových emulzích z následujících příkladů provedení.

Poznámky k tabulce 1:

1) Středněřetězcové triglyceridy, například Captex 355, komerční produkt firmy Karlshamns.

2) Sojový olej, například Sojaol, komerční produkt firmy Croda.

3) Saflorový olej, například Saflorol, komerční produkt firmy Gustavheess.

4) Vysoce vyčištěný rybí olej, například Sanomega S28GA, komerční produkt firmy Nippon Oil and Fats.

• ·· · • 9 999 9 • ·

- 12 99 9 9

Tabulka 1

mastná kyselina	^M?^T.l) olej	soj°^vý₂) olej	saflorový olej 3)	^rí^bI 4) olej
6:0	<2	—	—	—
8:0	64	—	—	—
10:0	34	—	—	—
12:0	<3	—	—	< 1
14:0	<1	--	—	5
16:0	—	11	7	10
16:1	—	—	—	7
16:2	—	—	—	1
16:3	—	—	—	1
16:4		—	. —	3
18:0	—	4	3	1
18:1	—	22	14	10
18:2 n-6	0-t;	55	75	2
18:3 n-3	—	8	<1	1
18:4 n-3	—	—	—	4
20:0	--	4 1	< 1	—
20:1	—	< i	<1	2
20 : 4 n-6 ——.				. . .2 -..... - - · .·

20:5 n-3	—	--	—	28
22:1	—	—	—	1
22:4	—	—	—	< i
22:5	—	—	—	3
22:6 n-3	—	—	—	13
& n-6	—._	55	75	4
Σ n-3	—	8	< 1	46
n-6:n-3	—	7:1	^75:1	1:12

- 13 Směs I obsahující MCT, rostlinný olej, rybí olej, emulgátor (frakcionované fosfolipidy z kuřecího vaječného žloutku) se disperguje pomocí Ultra-Turrax a doplní vodnou složkou II za míchání. Hodnota pH se nastaví na pH 8,0 až 9,0 za použití vodného roztoku hydroxidu sodného a/nebo oleátu sodného. Následující homogenizace se provádí ve vysokotlakém homogenizátoru při 400 kg/cm . Po nadávkování do skleněných lahvi vhodné velikosti se provede sterilizace známými metodami.

• · · · · · • · • 9

- 14 Tabulka 2

	Preparativní příklad	1 (srovn. - ,x) pr. 1	2	3	4	5(srovn. v _xx) pr- 2
I	středněřetězcové triglýceridy z parciální syntézy	1 000 g	500 g	lOOOg	lOOOg	lOOOg
vyčištěný saflorový olej			800g
vyčištěný sojový olej	1000 g	400g	-	800g	600g
vysoce vyčištěný rybí olej	—	lOOg	200g	200g	400g
cholesterolacetat	-	-	2g	-	-
vyčištěné fosfolipidy z:	120g vejce	90g vejce	120g vejce	120g vejce	120g vejce
alfa-tokoferol	2000 mg	lOOOmg	2000mg	2000mg	2000mg
askorbylpalmitat	1500mg	-	lOOOmg:	1500mg	1500mg
	oleát sodný	3,0 g	2,5 g	-	3,0 g	3,0 g
II	glýcerol	250 g	250 g	250g	250 g	250 g
	NaOH	—	—	do pH 8,0 až 9,0	-	-
	voda pro injekce	do 10 1	do 10 litrů	do 10 litrů	do 10 litrů	do 10 1

- 15 Poznámky k tabulce 2:

x) MCT/rostlinný olej (50:50) xx) MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20) podle EP A-0 311 091

Vznikla sterilní a nepyrogenní stabilní emulze obsahující lipidové kapičky o průměrném rozměru menším než 0,5 mikrometru se skladovacím časem při teplotě místnosti alespoň 18 měsíců.

Příklad 1 (in vivo)

1. Určení hydrolýzy triglyceridů samčích subjektů (věk (průměr - st.d.) 23- 3 roky) bylo infúzováno lipidovou emulzí MCT/rostlinný olej (50:50) po dobu 5 hodin každého ze 4 následujících dnů (zpracování A, tabulka 3, preparativní příklad 1 v tabulce 2). Po intervalu 4 týdnů byla lipidová emulze MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:40:10) infúzována za stejných podmínek (zpracování B, tabulka 4, preparativní příklad 4 v tabulce 2). Po dalším intervalu alespoň 8 týdnů byla lipidová emulze MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20) infúzována za stejných podmínek (zpracování C, tabulka 5, preparativní příklad 5 v tabulce 2).

Hydrolýza triglyceridů v séru (měřeno jako průměr infuzní ryhlosti v mg lipidů/kgtělesné hmotnosti/h za triglyceridových stanovených podmínek při koncentraci v séru 3,0 mmol/1 od 3. do 5. hodiny od infúze, 9 měření na subjekt a den, byla provedena analýza rozptylu následovně:

- 16 Tabulka 3

Zpracování A (srovnávací příklad 1)

Průměrná rychlost infúze (3. až 5. hodina) u MCT/rostlinný olej (50:50) emulze /mg lipidů/kg tělesné hmotnosti/h/

Subjekt	Den	1	Den	2	Den
1.	171		155		180
2.	98		103		101
3.	142		161		122
4.	180		175		166
5.	182		223		243
6.	203		259		269
7.	129		129		143
8.	188		221		170
Průměr - st.d.	162	t 35	178	Ϊ 53	174

« · · · · ··« · · ·♦ • · ··· · · • · · · ft ·♦ ·♦ • · · · «· •· » · · Φ·

Tabulka 4

Zpracování B (podle vynálezu)

Průměrná infúzní rychlost (3. až olej/rybí olej (50:40:10) emulzí nosti/h)

5. hodina) s MCT/rostlinný (mg lipidů/kg tělesné hmotSubjekt

Den 1

Den 2

Den 3

1.	224	236	203
2.	201	134	163
3.	186	tt99	182
4.	190	201	179
5.	255	278	273
6.	259	272	271
7.	147	154	142
8.	176	tÚ82	181

st-d.

205-39

207-52

Průměr

199-48 ·« ···· • · ·· · · · · ···· • · · · · · · · ··· • · · · · ·· ···« · ·· · · · ···

,. ·· ... ·· ··

- 18 Tabulka 5

Zpracování C (srovnávací příklad 2) průměrná infúzní rychlost (3. až 5. hodina) u MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20) emulze (mg lipidů/kg tělesné hmotnsoti/h)

Subjekt	Den 1	Den 2	Den 3
1.	202	192	186
2.	133	122	120
3.	147	148	174
4.	228	211	204
5.	233	241	231
6.	168	250	259
7.	147	189	16111
8.	174	177	188
Průměr- st.d.	179-36	191-41	190-40

Hydrolýza triglyceridů za zpracování B podle vynálezu byla významně vyšší než hydrolýza za zpracování Ά (p je menší než 0,0001) a C (p je menší než 0,005) pro všechny dny zpracování. Tak průměrná infúzní rychlost po dobu 3 dnů byla 4,9 g triglyceridů/kg tělesné hmotnosti/den pro lipidovou emulzi MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:40:10), a 4,1 a 4,5 g tri.glyceridů/kg. „tělesné. hmotnosti/den pro lipidové emulze MCT/- .....

rostlinný olej (50:50) a MCT/rostlinný olej/rybí olej (50: 30:20) .

Lipidové emulze vytvořené podle preparativních příkladů 2 a 3 dávají podobné výsledky. Výsledky rychlejší hydrolýzy lipidových emulzí podle vynálezu k získání volných mastných kyselin ve srovnání s konvenčními lipidovými emulzemi dosavadního stavu techniky mohou být také potvrzeny studiemi in vitro (srovnej příklad 2).

2. Určení hladiny volných mastných kyselin v séru

Hladina volných mastných kyselin v séru subjektů byla určena ve dnech zpracování před (0 hodin) a bezprostředně po (5 h) podání lipidové emulze. Vhodný test pro tento účel je například NEFAC test (enzymatická kolorimetrická metoda in vitro) Wako Chemicals GmbH, Německo.

Bylo zjištěno, že po podání lipidové emulze MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:40:10) podle vynálezu sérové koncentrace volných mastných kyselin se nezvyšují na významně vyšší hodnoty ve srovnání s podáním komerční lipidové emulze MCT/rostlinný olej (50:50) a další lipidové emulze MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20), ačkoli bylo dodáno více lipidů do těla za jednotku času. Experimentální výsledky jsou uvedeny dále v tabulce 6 a 7.

Tabulka 6

Zpracování A (srovnávací příklad 1)

Volné mastné kyseliny v séru (mikromol/litr), MCT/rostlinný olej (50:50)

Subjekt	po	Den 1	Den 2	Den 3
1.	0 h	0	22	39
	5 h	921	921	1068
2.	0 h	399	202	143
	5 h	996	742	762
3.	0 h	57	48	48
	5 h	1554	144	1408
4.	0 h	52	71	44
	5 h	1212	1173	979
5.	0 h	20	23	10
	5 h	903	1272	1405
6.	0 h	28	41	82
	5 h	1082	1271	1449
7.	0 h	97	90	122
	5 h	1068	949	1169
8.	0 h	27	47	34
	5 h	1219	1236	1140
Průměr i st.d.	0 h	85-122	68-55	65-43
	5 h	1119-198	1126-218	1173-225

	• ·	·♦· *	99
♦ · ·	• ·	•	9 9	• ♦
• ·	• ·	99 9	9 ·	9 9'
• ·	• · 9	• 9	999	9 »
• 9	9 ·	9	•	• *
• · · 9 ♦	• 4	9 99	• 4

Tabulka 7

Zpracování B (podle vynálezu)

Volné mastné kyseliny v séru (mikromol/litr),

MCT/rostlinný olej /rybí olej (50:40:10)

Subjekt	po	Den 1	Den 2	Den 3
1.	0 h	18	0	28
	5 h	1321	1421	1102
2 .	0 h	298	254	431
	5uh	1252	1101	1038
3.	0 h	7	14	26
	5 h	1363	1286	.1239
4.	0 h	25	8	7
	5 h	1179	1197	1095
5.	0 h	0	11	30
	5 h	1165	1502	1381
6.	0 h	4	0	19
	5 h	1556	1295	1417
7.	0 h	70	88	75
	5 h	1053	983	963
8.	0 h	0	12 .	0
	5 h	1421	941	1012
Průměr - st.d.	0 h	53-95	48-82	77-135
	5 h	1289-150	1216-187	1156-160

- 22 Tabulka 8

Zpracování C Volné mastné MCT/rostlinný	(srovnávací kyseliny v olej/rybí	příklad 2) séru (mikromol/litr) olej (50:30:20)
Subjekt	PO	Den 1	Den 2	Den 3
1.	0 h	13	12	0
	5 h	1051	828	863
2.	0 h	271	67	82
	5 h	900	816	899
3.	0 h	0	20	1
	5 h	1010	941	1006
4.	0 h	32	136	428
	5 h	1175	1269	1229
5.	0 h	0	10	0
	5 h	1139	1159	1024
6.	0 h	15	34	21
	5 h	887	1252	1239
7.	0 h	180	283	177
	5 h	1340	1335	1135
8.	0 h	0	0	0
	5 h	873	811	852
Průměrí s -t. d. —	0 h	64-97 = —	70-90......—	51-65 -
	5 h	1047-Γ54	1051-211	1031-146

♦ · ·

• ··

- 23 <· 9 999 ·

• 99 9

999 9 9

3. Určení eikosapentenové kyseliny (EPA, 20:5 n-3)

Začlenění v membránových fosfolipidech destiček (trombocytů) a leukocytů

Určení podílu eikosapentenové kyseliny v membránových fosfolipidech trombocytů a leukocytů u 8 subjektů bylo provedeno plynovou chromatografií pomocí methylesterů mastných kyselin (procenta plošnou metodou).

Tabulka 9

Zpracování B (podle vynálezu)

Eikosapentenová kyselina v trombocytech 3. leukocytech

MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:40:10)

Den 1 (0 h) Den 2 (0 h) Den 3 (0 h)

EPA v trombocytech průměr - st.d. (procenta plošně)	0,2 ± 0,1	0,7 - 0,1	1,2 i 0,1
EPA v leukocytech	0,4 i 0,1	0,7 - 0,3	1,0 i 0,3
průměr - st.d.
(procenta plošně)

···» 44 4444 ·· 44 φ * 4 4 4 4 4 > 4 '4 ··· 4 4 ·4 •· 4 •· ·

Tabulka 10

Zpracování C (srovnávací příklad 2)

Eikosapentenová kyselina v trombocytech MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20) a leukocytech

Den 1 (0 h)

Den 2 (0 h) Den 3 (0 h)

EPA v trombocytech průměr - st.d. (procenta plošně)	0,4 - 0,1	1,0 i 0,1	1,7 ± 0,1
		+
EPA v leukocytech	0,4 - 0,1	0,9 - 0,1	1,4 - 0,1
průměr - st.d.
(procenta plošně)

Srovnání výsledků z tabulky 9 s výsledky z tabulky 10 ukazuje, že při zpracování C například obsah ně byl zjištěn u leukocytů v den 2. Z obsahu zpracování B podle vynálezu je zřejmé, že je tak vysoký, přičemž obsah EPA 0,45 plošně by Překvapivě však byla zjištěna významně vyšší 0,7 % plošně. Podobný výsledek je získán pro ko pro trombocyty ve dnech 2 a 3.

Příklad 2 (in vitro)

EPA 0,9 % plošrybího oleje při jen polovičně byl očekáván, hodnota, totiž den 3 stejně jaPřírůstek apoproteinu v emulzních částicích

Velmi zajímavé je významně nižší obohacení (t-test, dvoustranný) apoproteinu C-I (p je menší než 0,0001) a apoproteinu C-III (p je menší než 0,0001), což jsou oba apoproteiny, které inhibují jak hydrolýzu triglyceridů tak přímý přírůstek emulzních částic do cílové tkáně (jako jsou játra) v emulzních částicích majících složení podle vynálezu (preparativní příklad 4) bude pravděpodobně vést k důkladnějšímu intravaskulárnímu štěpení lipidů než u ostatních zkoušených lipidových emulzí (preparativní příklad 5).

Tabulka 11

Přírůstek apoproteinů C-I a C-III v emulzních částicích (inkubace 3 h), MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:40:10), versus MCT/rostlinný olej/rybí olej (50:30:20)

MCT/rostl. ole j/~ rybí olej (50:40:10) (srovn.př.4)

MCT/rostl. olej/· rybí olej (50:30:20) (srovn.př.5)

Apo C-I přírůstek	5,1 - 0,51	23,4 i 1,43
//igZ průměr - st.d.	(n = 4)	(n = 4)
Άρο C-III pří růsbek -™	= = 30,1 ±2,67	- . „ 54,7 - 4,0 0 „
průměr - st.d.	(n = 4)	(n = 4)

·· ··«·

Emulzní částice mající složení podle vynálezu vykazují Άρο B obohacení, které je více než 5násobně nižší než obohacení ostatních zkoušených lipidových emulzní, což odpovídá vyšší hydrolýzní rychlosti. Rozdíl je významný (t-test, dvoustranný, p je menší než 0,05).

Claims

1. Isotonická lipidová emulze pro parenterální podávání se středním rozměrem kapiček lipidů menším než 1,0 mikrometru, obsahující středněřetězcové triglyceridy, alespoň jeden rostlinný olej obsahující triglyceridy, které dodávají omega-6 mastné kyseliny, alespoň jeden rybí olej obsahující triglyceridy, které dodávají omega-3 mastné kyseliny,a konvenční pomocné prostředky a/nebo aditiva vyznačená tím, že lipidová emulze obsahuje!,I vztaženo na celkový obsah lipidů lipidové emulze od 30 % do 60 % hmotnostních středněřetězcových triglyceridů, od 35 % do 65 % hmotnostních alespoň jednoho rostlinného oleje, od 5 % do 20 % hmotnostních alespoň jednoho rybího oleje.

2. Lipidová emulze podle nároku 1 vyznačená tím, že středněřetězcové triglyceridy jsou obsaženy alespoň z 90 % triglyceridů kaprvlové kyseliny (Cg) a kaprínové kyseliny (C^g).

3. Lipidová emulze podle alespoň jednoho nároku 1 nebo 2 vyznačená tím, že rostlinný olej je vybrán ze saflorového oleje a/nebo sojového oleje.

4. Lipidová emulze podle kteréhokoli z nároků 1 až 3 vyznačená tím, že rybí olej je vybrán ze sardinkového, lososového, sledového, jnakreloyého a/nebo jiného rybího oleje studenovodních ryb nebo rybích olejů synteticky získatelných reesterifikací glycerolu omega-3 mastnými kyselinami získanými hydrolýzou oleje studenovodních ryb.

5. Lipidové emulze podle kteréhokoli z nároků 1 až 4 vyznačená tím, že rybí olej obsahuje alespoň 25 % eikosapentenové kyseliny v uvedených triglyceridech, vztaženo na • · ·♦ ··*'· ♦ · ·· · · · *· ·.· ·

9 ΦΦΦ · · ·<

• · · · ·· · · φ ♦ Φ Φ · _ 29 - ···’ ’ ’* “ methylestery mastných kyselin koncentrátu rybího oleje.

6. Lipidová emulze podle kteréhokoli z nároků 1 až 5 vyznačená tím, že rybí olej obsahuje alespoň 12 % dokosahexenové kyseliny v uvedených triglyceridech, vztaženo na methylestery mastných kyselin koncentrátu rybího oleje.

7. Lipidová emulze podle kteréhokoli z nároků 1 až 6 vyznačená tím, že celkový obsah lipidů je od 5 % do 30 % hmotnostních, vztaženo na emulzi.

8. Použití lipidové emulze podle kteréhokoli z nároků

1 až 7 pro přípravu emulze pro parenterální výživu.

9. Použití lipidové emulze podle kteréhokoli ^nároků 1 až 7 pro přípravu léčiva pro léčení nadměrných zánětlivých reakcí, zvýšeného rizika vaskulární trombózy nebo vážné srdeční arytmie parenterálním podáváním.

10. Použití lipidové emulze podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 pro přípravu léčiva pro léčení pooperačních nebo poúrazových stavů nebo zánětlivých nemocí parenterálním podáváním.