CZ130199A3 - Cirkulárně permutovaní agonisté receptoru erythropoietinu - Google Patents

Description

Vynález se týká agonistů receptoru lidského erythropoietinu (EPO). Tyto agonisté receptoru EPO si zachovávají jednu nebo více aktivit nativního EPO a také mohou vykazovat zlepšenou stimulující aktivitu na hematopoietické buňky a nebo zlepšený aktivitm profil, který může zahrnovat snížení nežádoucích biologických aktivit spojených s nativní EPO a nebo mít zlepšené fyzikální vlastnosti, které mohou zahrnovat zvýšenou rozpustnost, stabilitu a účinnost skládám.

Dosavadní stav techniky

Kolonie stimulujících faktorů, které stimulují diferenciaci nebo proliferaci buněk kostní dřeně, vyvolaly již dávno velký zájem, pro svůj terapeutický potenciál při obnovení snížených hladin krvetvorných kmenových buněk - odvozených buněk.

Erythropoietin je přirozeně se vyskytující glykoproteinový hormon s molekulovou hmotností, která se nejprve udávala jako asi 39000 daltonů (T. Miyaki aj„ J. Biol. Chem., 252: 5558-5564 (1997)). Zralý hormon má délku 166 aminokyselin a prepro forma hormonu se svým vedoucím peptidem má délku 193 aminokyselin (F. Lih, US patent 4,703,008). Zralý hormon má molekulovou hmotnost vypočtenou ze sekvence svých aminokyselin 18399 daltonů (J. K. Browne aj., Nátuře, 313: 806-810 (1985), K. Browne aj., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 5: 1693-1702 (1986).

Prvé mutantní erythropoietiny (například analogy erythropoietinu), připravené substitucemi a delecemi aminokyselin, vykázaly sníženou nebo nezlepšenou aktivitu. Jak se popisuje v US patentu 4,703,008, náhrada tyrosinových zbytků v polohách 15, 40 a 145 zbytky fenylalaninu, náhrada cysteinového zbytku v poloze 7 histidinem, substituce prohnu v poloze 2 asparaginem, delece zbytků 2-6 a delece zbytků 27-55 nevede k zřejmému zvýšení biologické aktivity. Mutace Cys-až-His eliminuje biologickou aktivitu. Série mutantních erythropoietinů s jedinou substitucí aminokyseliny na asparaginových zbytcích 24, 38 nebo 83 vykazují silně sníženou aktivitu (substituce v poloze 24), nebo vykazují rychlou mezibuněčnou degradaci a zřejmý nedostatek sekrece (substituce v poloze 38 nebo 183). Eliminace O-spojeného místa glykosylace na šeřinu 26 vede k rychlé degradaci nebo nedostatku sekrece analogu erythropoietinu (S. Dube aj., J. Biol. Chem., 33: 17516-17521 (1988)). Tito autoři vyvozují, že místa glykosylace na zbytcích 38, 83 a 126 jsou nutné pro správnou sekreci a že místa

... ... » t t t

... ···· ···· • ···· · · ····· · ··· ··· • . t t t t t ··· · · · · ·· ·· glykosylace lokalizovaná na zbytcích 24 a 38 se mohou účastnit na biologické aktivitě zralého erythropoietinu.

Deglykosylovaný erythropoietin je plně aktivní v biotestech in vitro (M. S. Dorsdal aj., Endocrinology, 116: 2293-2299 (1985), US patent 4,703,008, E. Tsuda aj., Eur. J. Biochem. 266: 20434-20439 (1991). Avšak všeobecně se uznává, že glykosylace erythropoietinu má klíčovou úlohu v aktivitě hormonu in vivo (Ρ. H Lowy aj., Nátuře 185: 102-105 (1960), E. Goldwasser a C. K. H. Kung, Ann. Ν. Y. Acad. Science 149: 49-53 (1968), W. A. Lukowsky a R. Painter, Can. J. Biochem. :909-917 (1972, D. W. Briggs aj., Amer. J. Phys., 201:1385-1388 (1974), J. C. Schooley, Exp. Hematol. 13:994-998, N. Imai aj., Eur. J. Biochem. 194: 457-462 (1990), M. S. Dorsdal aj., Endocrinology, 116: 2293-2299 (1985), E. Tsuda aj., Eur. J. Biochem. 188: 405-411 (1990), US patent 4,703,008, K. Browne aj., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51: 693702 (1986) a K. Yamaguchi aj., J. Biol. Chem., 266: 20434-20439 (1991). Pokud se nedostává deglykosylovaným analogům in vivo biologické aktivity, přičítá se rychlému mizení deglykosylovaného hormonu z oběhu ošetřovaných zvířat. Tento názor podporuje přímé srovnám poločasů glykosylováného a deglykosylovaného erythropoietinu v plazmě (J. C. Spivak a Β. B. Hoyans, Blood 73: 90-99 (1989) a Μ. N. Fukuda, aj., Blood 73: 84-89 (1989).

Mutagenese míst glykosylace erythropoietinu řízená oligonukleotidy účinně prověřila funkci glykosylace, avšak dosud selhala při porozumění efektivní strategii pro významné zlepšení charakteristik hormonu pro terapeutické aplikace.

Konstruovala se série mutantů s jedinou substitucí nebo deleci aminokyseliny zahrnující zbytky aminokyselin 15, 24, 49, 76, 78, 83, 143, 145, 160, 162, 163, 164, 165 a 166. V těchto mutantech se mění karboxy konec, místa glykosylace a tyrosinové zbytky erythropoietinu. Mutanty se podávaly zvířatům při sledování hladin hemoglobinu, hematokritu a retikulocytu (EP číslo 0 409 113). Zatím co mnohé z těchto mutantů in vivo žádné nevykazuje významné zvýšení jejich schopnosti zvyšovat hladiny hemoglobinu, hematokritu nebo retikulocytu (bezprostřední prekursor erytrocytu) ve srovnání s nativním erythropoietinu.

Konstruovala se jiná množina mutantů, aby se prověřila funkce zbytků 99-119 (doména 1) a zbytků 111-129 (doména 2) (Y. Chem aj., Eur. J. Biochem. 202: 225-230 (1991). Mutanty domény 1 se rychle degradují a jsou neaktivní v biotestech in vitro, zatím co mutanty domény 2 si při nejlepším udržují aktivitu in vitro. Tyto mutanty také nevykazují žádné zvýšení in vivo biologické aktivity ve srovnám s divokým typem lidského erythropoietinu. Tito autoři vyvozují, že zbytky 99-119 hrají klíčovou úlohu ve struktuře erythropoietinu.

Molekula lidského erythropoietinu má dva disulfidfcké můstky* jeden spojující cysteinové zbytky v polohách 7 a 161 a druhý spojující cysteiny v polohách 29 a 33 (Ρ. H. Lai aj., J. Biol: Chem., 261: 3116-3121 (1986). Mutagenese míst glykosylace erythropoietinu řízená oligonukleotidy se použila k prověření funkce disulfidického můstku spojujícího cysteiny v polohách 29 a 33 v lidském erythropoietinu. Cystein v poloze 33 se převedl na prolinový zbytek, který napodobuje strukturu myšího erythropoietinu na tomto zbytku. Vzniklý mutant má velmi sníženou aktivitu in vitro. Ztráta aktivity je tak silná, že autoři vyvozují, že disulfidický můstek mezi zbytky v polohách 29 a 33 je podstatný pro funkci erythropoietinu (F. K. Lin, Molecular and Cellular Aspects of Erythropoietin and Erythropoiesis, strany 23-36, ed. I. N. Rich, Springer Verlag, Berlin (1987)).

US patent 4,703,008 pro F. K. Lin (dále označovaný jako patent 008) spekuluje o široké řadě modifikací EPO, včetně adičních, delečních a substitučních analogů EPO. Patent 008 neukazuje, že by kterákoliv z navržených modifikací zvýšila biologickou aktivitu sama o sobě, ačkoliv se konstatuje, že delece míst glykosylace by mohla zvýšit aktivitu EPO produkovanou v kvasinkách (viz patent 008, sloupec 37, řádky 25-28). Patent 008 také spekuluje, že analogy EPO, které mají jeden nebo více tyrosinových zbytků nahrazených fenylalaninem, mohou vykazovat zvýšenou nebo sníženou vázebnou afinitu.

Australská patentová přihláška číslo AU-A-59145/90 pro FIbi, M. aj. také diskutuje řadu modifikovaných EPO proteinů (EPO muteiny). Obecně se spekuluje o změně aminokyselin 1055, 70-85 a 130-166. Zejména přidání positivně nabitých bazických aminokyselin v oblasti karboxylového konce se považuje za zvyšující biologickou aktivitu EPO.

US patent 4,835,260 pro Shoemaker, B. C. diskutuje modifikované EPO proteiny se substitucemi methioninu v poloze 54 a asparaginu v poloze 38. Považuje se, že takové EPO muteiny mají zlepšenou stabilitu, ale neuvádí se, že vykazují jakékoliv zvýšení biologické aktivity ve srovnání s divokým typem EPO.

WO 91/05867 popisuje analogy lidského erythropoietinu mající větší počet míst pro připojení karbohydrátů než lidský erythropoietin, jako EPO (Asn^⁹), EPO (Asn¹²⁵, Ser¹²^), EPO (Thr¹²⁵) a EPO (Pro¹²⁴, Thr¹²⁵).

WO 94/24160 popisuje muteiny erythropoietinu mající zvýšenou aktivitu, specificky se substitucemi aminokyselin v polohách 20,49, 73, 140, 143, 146, 147 a 154.

WO 94/25055 popisuje analogy erythropoietinu včetně EPO (X³³, Cys¹³⁹, des-Arg¹66) a EPO (Cys¹³⁹, des-Arg¹66).

Přeskupení proteinových sekvencí

Při evoluci mají přeskupení proteinových sekvencí důležitou úlohu při vytváření rozmanitosti proteinových struktur a funkcí. Genová duplikace a míchám exonu poskytují důležitý mechanismus pro rychlé vytváření rozmanitosti a tím zabezpečují organismům výhodu soutěžení, zejména protože základní rychlost mutace je nízká (Doolittle, Protein Science 1: 191200 (1992)).

Rozvoj metod rekombinantní DNA umožnil studium účinků transposice sekvencí na skládání, struktury a funkce proteinů. Přístup použitý k vytváření nových sekvencí se podobá přirozeně se vyskytujícím párům proteinů, které jsou příbuzné lineární reorganizací svých sekvencí aminokyselin (Cunningham aj., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 76: 3218-3222 (1979), Teather a Erfle, J. Bacteriol. 172: 3837-3841 (1990), Schimming aj., Eur. J. Biochem. 204: 1319 (1992), Yamiuchi a Minamikawa, FEBS Lett. 260: 127-130, 1991: MacGregor aj., FEBSLett 378.: 263-266 (1996)). Prvá aplikace in vitro tohoto typu přeskupení proteinů byl popsán Goldenbergem a Creightonem (J. Mol. Biol., 165: 407-413 (1983). Nový N-konec se vybere na vnitřním místě (místo zlomu) původní sekvence, nová sekvence má stejné pořadí aminokyselin jako originál od místa zlomu, dokud nedosáhne aminokyselinu, která je na místě původního Ckonce nebo blízko něj. V tomto místě se připojí nová sekvence, buď přímo nebo přes další část sekvence (spojovník) k aminokyselině, která je na místě původního N-konce nebo blízko něj a nová sekvence pokračuje se stejnou sekvencí jako původní, dokud nedosáhne bod, které je na místě aminokyseliny, která byla na místě N-konce k místu zlomu původní sekvence. Tento zbytek tvoří nový C-konec řetězce.

Tento přístup se použil na proteiny s rozsahem velikosti od 58 do 462 aminokyselin (Goldenberg a Creighton J. Mol. Biol., 165: 407-413 (1983), Li a Coffino, Mol. Cell. Biol. 13: 2377-2383 (1993)). Přezkoušené proteiny představovaly široký rozsah strukturních tříd, včetně proteinů, které obsahují převážně α-šroubovnici (interleukin-4, Kreitman aj., Cytokine 7: 311318 (1995), β-list (interleukin-1, Horlick aj. Protein Eng. 5: 427-431 (1992) nebo směsi těchto dvou (isomeráza fosforibosyl anthranilátu z kvasinek, Luger aj., Science 243: 206-210 (1989)). Široké kategorie funkce proteinů jsou představeny v těchto studiích reorganizací sekvencí:

• · · • ·

Enzymy

T4 lysozym: Zhang aj., Biochemistry 32: 12311-12318 (1993), Zhang aj., Nátuře Struct.

Biol 1: 434-438 (1995).

dihydrofolátreduktáza: Buchwalder aj., Biochemistry 31: 1621-1630 (1993), Protasova aj., Protein Eng. 7: 1373 - 1377(1995).

ribonukleáza TI: Mullins aj., J. Am. Chem. Soc. 116: 5529-5533 (1994), Garrett aj., Protein Science 5: 204-211 (1996).

Bacillus β-glucanse: Hahnaj., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91:10417-10421 (1994).

Aspartát-transkarbamoyláza: Yang a Schachman, Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90: 1198011984(1993).

fosforibosylanthranilát isomeráza: Luger aj., Science 243: 206-210 (1989), Luger aj., Protein Eng. 3: 249-258 (1990).

pepsin/pepsinogen Lin aj., Protein Science 4: 159-166 (1995).

glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenáza: Vignais aj., Protein Science 4: 994-1000 (1995).

omithindekarboxyláza: Li a Coffino, Mol. Cell. Biol. 13: 2377-2383 (t983).

fosfoglycerátdehydrogenáza z kvasinek: Ritco-Vonsovici aj., Biochemistry 34: 1654316551 (1995).

Inhibitory enzymů

Inhibitor bazického trypsinu z pankreatu: Goldenberg a Creighton J. Mol. Biol., 165: 407413 (1983).

Cytokiny interleukin-ΐβ: Horlick aj. Protein Eng. 5: 427-431 (1992). interleukin-4: Kreitmanaj., Cytokinel·. 311-318 (1995).

Doména rozpoznávání kinázy tyrosinu doména α-spektrinu SH3: Viguera aj. J. Mol. Biol., 247: 670-681 (1995).

Transmembránový protein omp A: Koebnik a Kramer J. Mol. Biol., 250: 617-626 (1995).

44 .4 4 4 • 44 « 444 «44 4 « 444444 444444 444444

4··· · ·

444 · ·· · ·* **

Chimérní protein interleukin-4-p5^,ewť/owo«a5· fuzní molekula exotoxinu: Kreitman aj., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91: 6889-6893 (1994).

Výsledky těchto studií byly velmi rozdílné. V mnoha případech se pozorovala významně nižší aktivita, rozpustnost nebo termodynamická stabilita (reduktáza dihydrofolátu E.coli, aspartát-transkarbamoyláza, fosforibosyl-anthranilátu isomeráza, glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenáza, omithin dekarboxyláza, omp A, fosfoglycerát dehydrogenáza z kvasinek).

V jiných případech se zdálo, že reorganizované sekvence proteinů mají mnohé téměř shodné vlastnosti než jejich přirozené protějšky (inhibitor basického trypsinu z pankreatu, T4 lysozym, ribonukleáza TI, Bacillus β-glucanse, interleukin-1β, doména a-spektrinu, pepsinogen, interleukin-4). Ve výjimečných případech se pozorovalo neočekávané zlepšení některých vlastností nad přirozenou sekvencí, například rozpustnost a rychlost skládám' u reorganizovaných sekvencí domény α-spektrinu SH3 a afinity receptoru a aktivity proti tumorům reorganizované spojené molekuly exotoxinu EAQňQok\n-4-Pseudomonas (Kreitman aj., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91: 6889-6893 (1994), Kreitman aj., CancerRes. 55: 3357-3363 (1995)).

Základní motivací těchto typů studií byla studie úlohy interakcí na krátkou a dlouhou vzdálenost při skládání a stabilitě proteinů. Přeskupení sekvencí tohoto typu mění podmnožinu interakcí, které jsou na dlouhou vzdálenost v původní sekvenci, na interakci na krátkou vzdálenost v nové sekvenci a obráceně. Skutečnost, že mnohé z těchto přeskupení sekvencí jsou schopné získat konformaci s alespoň nějakou aktivitou, je přesvědčujícím důkazem, že skládání proteinů probíhá mnoha cestami skládání (Viguera aj. J. Mol. Biol., 247: 670-681 (1995).

V případě domény α-spektrinu SH3 výběr nových konců v polohách, které odpovídají zlomům β-vlásenky vedlo k proteinům s mírně menší stabilitou, které jsou však přesto schopné se skládat.

Polohy vnitřních míst zlomu použité ve zde citovaných studiích se nalézají pouze na povrchu proteinů a jsou rozděleny podél lineární sekvence bez jakéhokoliv zřejmé chyby ke koncům nebo středu (variace relativní vzdálenosti od původního N-konce k místu zlomu je asi 10 až 80 % celkové délky sekvence). Spojovníky spojující původní N- a C-konce v těchto studiích se měnily od 0 do 9 zbytků. V jednom případě (Yang a Schachman, Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90: 11980-11984 (1993)) část sekvence se odstranila od původního C-koncového segmentu a spojení se dosáhlo od skráceného C-konce k původnímu N-konci. Ve spojovnících se často používají flexibilní hydrofilní zbytky jako Gly a Ser. Viguera aj. J. Mol. Biol., 247: 670681 (1995) porovnali spojem původních N- a C-konců se spojovníkem s 3- nebo 4- zbytky,

4 4 spojovník s 3-zbytky byl termodynamicky méně stabilní. Protasova aj. (Protein Eng. Ί: 427431(1995)) použili spojovníky s 3- nebo 5-zbytky ke spojení původních N-konců dihydrofolát reduktázy E. coli, pouze spojovník s 3- zbytky produkoval protein v dobrém výtěžku.

4 44

4 4 4 4 · · · 4 4

44444 · 444

4 4 4 4 4 «4 4 44 44

Podstata vynálezu

Modifikované agonisty receptoru EPO lidského se mohou představit obecným vzorcem

X!-(L)a-X² kde a je 0 nebo 1, χΐ je peptid, který obsahuje sekvenci aminokyselin odpovídající sekvenci zbytků n+1 až J,

X² je peptid, který obsahuje sekvenci aminokyselin odpovídající sekvenci zbytků 1 až n, n je celé číslo v rozmezí od 1 do J-l a L je spojovník.

V obecném vzorci výše jsou číslovány postupně 1 až J od amino do karboxylového konce. Pár sousedních aminokyselin v tomto proteinu se může číslovat n a n+1, kde n je celé číslo v rozmezí od 1 do J-l. Zbytek n+1 se stává novým N-koncem nového agonistu EPO receptoru a zbytek n se stává novým C-koncem nového agonistu EPO receptoru.

Vynález se týká nových polypeptidů, agonistů receptoru EPO, obsahujících modifikovanou sekvenci aminokyselin s následujícím vzorcem:

Ala Pro Pro Arg Leu lle Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg 10

Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn lle Thr Thr Gly ²⁰

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn lle Thr Val Pro 30 40

Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val 50

Gly Gin Gin Ala Val Glu Val Trp Gin Gly Leu Ala Leu Leu 60 70

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin Ala Leu Leu Val Asn Ser 80

Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys Ala ·» 9

9 • · · · to • to • to ·· to to· · • to· · to · · · · · ·

Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 100 110

Gly Ala Gin Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ser Ala 120

Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 130 140

Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu 150

Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 160 166 kde případně 1 až 6 aminokyselin od N-konce a 1 až 5 od C-konce může být odstraněno z tohoto polypeptidu agonistu EPO receptoru, kde N-konec je spojen s C-koncem přímo nebo spojovníkem schopným spojit N-konec s C-koncem a mající nové C- a N-konce u aminokyselin: 23-24, 24-25, 25-26, 27-28, 28-29, 2930, 30-31, 31-32, 32-33, 33-34, 34-35, 35-36, 36-37, 37-38, 38-39, 40-41, 41-42, 43-44, 44-45, 45-46, 45-56, 46-47, 47-48, 48-49, 50-51, 51-52, 52-53, 53-54, 54-55, 55-56, 56-57, 57-58, 7778, 78-79, 79-80, 80-81, 81-82, 82-83, 83-84, 84-85, 85-86, 86-87, 87-88, 88-89, 108-109, 109110, 110-111, 111-112, 112-113, 113-114, 114-115, 115-116, 116-117, 117-118, 118-119, 119120, 120-121, 121-122, 123-124, 124-125, 125-126, 126-127, 127-128, 128-129, 129-130, 131132, a tento polypeptid agonisty EPO receptoru může být případně bezprostředně předcházen (methionin'1), (alanin^-^) nebo (methionin’2, alanin 1).

Výhodější místa zlomu, u kterých lze připravit nový N-konec a N-konec, jsou: 23-24, 2425, 25-26, 27-28, 28-29, 29-30, 30-31, 31-32, 32-33, 33-34, 34-35, 35-36, 36-37, 37-38, 38-39, 40-41, 41-42, 42-43, 52-53, 53-54, 54-55, 55-56, 77-78, 78-79, 79-80, 80-81, 81-82, 82-83, 8384, 84-85, 85-86, 86-87, 87-88, 88-89, 109-110, 110-111, 111-112, 112-113, 113-114, 114-115, 115-116, 116-117, 117-118, 118-119, 119-120, 120-121, 121-122, 123-124, 124-125, 125-126, 126-127, 127-128,128-129, 129-130 a 131-132.

Nejlepší místa zlomu, u kterých lze připravit nový N-konec a N-konec, jsou: 23-24, 2425, 31-32, 32-33, 37-38, 38-39, 82-83, 83-84, 85-86, 86-87, 87-88,125-126, 126-127 a 131-132.

Nejlepší místa zlomu zahrnují místa glykosylace, ne-neutralizující protilátky, místa štěpení proteolytem. Agonisty EPO receptoru podle vynálezu mohou obsahovat substituce • · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ♦ ··· Φ · Φ ΦΦΦ· · ··· ··· ΦΦΦ·· · ·

ΦΦΦ Φ ·· 9 Φ· ·· aminokyselin, jak je popisuje WO 94/24160, nebo jedno či více míst glykosylace u Asn²⁴,

Asn83 a Asn¹²^ jsou zaměněna na jiné aminokyseliny, například nikoliv však omezeně, Asp nebo Glu, delece a inserce. Také se zamýšlí, aby agonisty EPO receptoru podle vynálezu mohly mít delece aminokyselin buď u jednoho, nebo obou N- a C-koncích původního proteinu a nebo delece od nových N- a C-konců sekvence přeskupených proteinů ve vzorcích ukázaných výše.

Ve výhodném provedení podle vynálezu spojovník (L) spojující N-konec k C-konci je polypeptid vybraný ze skupiny tvořené:

Gly Gly Gly Ser	SEQ ID NO: 123,
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser	SEQ ID NO: 124,
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser	SEQ ID NO: 125,
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser	SEQ ID NO: 126,
Glu Phe Gly Asn Met	SEQ ID NO: 127,
Glu Phe Gly Gly Asn Met	SEQ ID NO: 128,
Glu Phe Gly Asn Gly Gly Asn Met	SEQ ID NO: 129 a
Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly	SEQ ID NO: 130.

Vynález také zahrnuje rekombinantní agonisty receptoru lidského EPO podávané spolu s kolonie stimulujícími faktory (CSF) včetně cytokinů, lymfokinů, interleukinů, krvetvorných růstových faktorů, které zahrnují, nikoliv však omezeně, GM-CSF, G-CSF, c-mpl ligand (také známý jako TPO nebo MGDF), M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, lidský růstový hormon, růstový faktor B-buněk, faktor diferenciace B-buněk, faktor diferenciace eosinofilů, faktor kmenových buněk (SCF), také známý jako ocelový faktor nebo c-kit ligand (zde souhrnně uváděné jako faktory). Tyto spolu podávané směsi se mohou charakterizovat tím, že mají obvyklou aktivitu jak peptidů, tak směsi a ’ dále se mohou charakterizovat tím, že mají biologickou aktivitu větší, než je jednoduchá aditivní funkce přítomnosti agonistů EPO receptoru nebo samotné druhé kolonie stimulujícího faktoru. Společné podávání také může zabezpečit zvýrazněný účinek na aktivitu nebo aktivitu odlišnou od očekávané od přítomnosti EPO nebo druhé kolonie stimulujícího faktoru. Společné podávám také může mít zlepšený profil aktivity, který může zahrnovat zmenšení nežádoucích biologických aktivit spojených s nativním lidským EPO.

Mimo seznam výše se varianty IL-3, které se uvádějí vWO 94/12639 a WO 94/12638, fuzní proteiny, které se uvádějí v WO 95/21197 a 95/21254, G-CSF agonisty receptoru, které se i

• 4 ·♦ 4 ·· ·· · 4·· 4 4·· • 4 · 4 4 4 4 4 4·· • 44·· 44 · 4444 4 444 444 • 4 4 4 4 4 4 popisují vWO 97/12977, c-mpl agonisté receptoru, které se popisují vWO 97/12978, IL-3 agonisté receptoru, které se popisují v WO 97/12979 a multifunkční agonisté receptoru, které se popisují vWO 97/12985, mohou podávat spolu spolypeptidy tohoto vynálezu. Jak se zde používá, IL-3 varianty se týká variantů IL-3, které se uvádějí v WO 94/12639 a WO 94/12638. Jak se zde používá, fuzní proteiny se týká spojených proteinů, které se uvádějí v WO 95/21197 a 95/21254. Jak se zde používá, G-CSF agonisty receptoru se týká G-CSF agonistů receptoru, které se popisují v WO 97/12977. Jak se zde používá, c-mpl agonisty receptoru se týká c-mpl agonistů receptoru, které se popisují vWO 97/12978. Jak se zde používá, „IL-3 agonisty receptoru se týká IL-3 agonistů receptoru, které se popisují v WO 97/12979. Jak se zde používá, multifunkční agonisté receptoru se týká multifunkčmch agonistů receptoru, které se popisují v WO 97/12985.

Mimoto se předpokládá, že použití in vitro by zahrnovalo schopnost stimulovat kostní dřeň a aktivaci a růst buněk krve před infuzí expandovaných buněk pacientům.

Také se předpokládá, že použití agonistů EPO receptoru podle vynálezu zahrnovalo aplikace v krevních bankách, kde by se agonisté EPO receptoru podávaly pacientovi, aby se zvýšil počet červených krvinek a krevní produkty se pacientovi odejmou před některou lékařskou procedurou a krevní produkty se skladují a transfuzují se zpět pacientovi po lékařské proceduře. Mimoto se předpokládá, že použití agonistů EPQ receptoru podle vynálezu by zahrnovalo podávání agonistů EPO receptoru dárci krve před darováním krve, aby se zvýšil počet červených krvinek a tím se umožnilo dárci dát bezpečně více krve.

Agonisté EPO receptoru podle vynálezu mohou být užitečné při léčení nemocí charakterizovaných sníženými hladinami červených krvinek v krvetvorné soustavě.

Agonisté EPO receptoru mohou být užitečné při léčení nebo prevenci anemíe. Mnoho léků působí potlačení kostní dřeně nebo krvetvorné nedostatečnosti. Příklady takových léků jsou AZT, DDI, alkylační činidla a antimetabolity použité při chemoterapii, antibiotika, například chloramfenikol, penicilín, gancyklovir, daunomycin a sulfa léky, fenothiazony, trankvilizéry, například meprobamát, analgetika, například aminopyrin a dipyron, antikonvulzanty, například fenytoin nebo karbamazepin, antithyroidy, například propylthiouracil a methiazol, a diuretika. Agonisté EPO receptoru mohou být užitečné při prevenci nebo léčení potlačení kostní dřeně nebo krvetvorné nedostatečnosti, ke kterým často dochází u pacientů při léčení těmito léky.

Ke krvetvorné nedostatečnosti může také docházet jako důsledek virových, mikrobiálních nebo parazitických infekcí a jako důsledek léčení ledvinových nemocí nebo ledvinových selhání, • · ·* · *· ·· ^s

9 · · · · · * · « 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9

999 9 99 9 99 99 například při dialýze. Tento peptid může být užitečný při léčení takové krvetvorné nedostatečnosti.

Jiný aspekt vynálezu poskytuje DNA plazmidové vektory pro použití při expresi těchto nových agonistů receptoru EPO. Tyto vektory obsahují nové DNA řetězce popsané výše, které kódují nové polypeptidy podle vynálezu. Vhodné vektory, které mohou transformovat hostitelské buňky schopné exprese agonistů EPO receptoru zahrnují vektory exprese obsahující řetězce nukleotidů kódující agonisty EPO receptoru spojené k transkripčmm a translačním regulačním řetězcům, které jsou vybrány podle použité hostitelské buňky.

Vektory zahrnující modifikované řetězce, jak jsou popsané výše, se zahrnují do tohoto vynálezu a jsou užitečné pří výrobě modifikovaných agonistů receptoru EPO. Vektor použitý při tomto způsobu také obsahuje vybrané regulační řetězce v operativním spojení s kódujícími DNA řetězci podle vynálezu a je schopný usměrnit jejich replikaci a expresi ve vybraných hostitelských buňkách.

Jako jiný aspekt vynálezu je dán způsob výroby nové skupiny agonistů receptoru EPO. Způsob podle vynálezu vyžaduje kultivaci vhodných buněk nebo linií buněk, které se transformovaly vektorem obsahujícím DNA řetězec kódující expresi nového polypeptidů agonisty EPO receptoru. Vhodné buňky nebo linie buněk mohou být bakteriální buňky. Například různé kmeny E. coli, kvasinek, savčí buňky nebo hmyzí buňky se mohou použít jako hostitelské buňky při způsobu podle vynálezu.

Jinými aspekty vynálezu jsou způsoby a terapeutické kompozice k lečem stavů uvedených výše. Takové kompozice obsahují terapeuticky účinné množství jednoho či více agonistů EPO receptoru podle vynálezu ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem. Tato kompozice se může podávat parenterálně, intravenosně nebo podkožně. Když se podává, je terapeutická kompozice podle vynálezu s výhodou ve formě parenterálně přijatelného vodného roztoku bez pyrogenů. Příprava takového parenterálně přijatelného roztoku proteinů s patřičným ohledem na pH, isotonicitu, stabilitu a podobně, je v mezích schopností odborníků.

Podávám bude v souladu s dávkovým režimem, který snadno stanoví lékař s ohledem na specifickou aktivitu analogu in vivo se srovnání s lidským erythropoietinem a s ohledem na to, co je nyní v oboru známo o podávám lidského erythropoietinu pro indukci erythropoiesis a léčení různých stavů, například anemie, včetně anemie u lidí trpících selháním ledvin. Dávka analogu podle vynálezu se může od jednotlivce k jednotlivci poněkud měnit v závislosti na daném analogu a jeho specifické aktivitě in vivo, cestě podávám, medicínském stavu, citlivosti pacienta k analogu nebo složkám vehiklu a jiných faktorech, na které lékař bude schopný brát • · 99 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 ohled. S ohledem na terapeutické použití analogů podlé‘vynálezu šě odkazuje* *na *ŮS patenty čísla 4,703,008 a 4,835,260, viz také kapitolu o (rekombinantní) (des-Arg¹⁶⁶) lidském erythropoíetinu na stranách 591-595 vPhysicians' Desk. Komerčně dostupné preparáty rekombinantního (des-Arg) lidského erythropoíetinu mají 2000, 3000, 4000 nebo 10000 jednotek glykohormonu na ml vodného roztoku bez prezervativů s 2,5 mg/ml lidského sérového albuminu, 5,8 mg/ml citrátu sodného, 5,8 mg/ml NaCl a 0,06 mg/ml kyseliny citrónové, pH 6,9 (+/-0,3).

Rekombinantně připravený EPO se ukázal zvlášť užitečný pro léčení pacientů trpících zhoršenou tvorbou červených krvinek (Physicians' Desk Reference (PDR), vydání 1993, strany 602-605). Rekombinantně připravený EPO se ukázal účinný při léčení anemie spojené s chronickým selháním ledvin a jednotlivců nakažených HIV, trpících sníženými hladinami ondogenní EPO, spojené s terapií s zidovudinem (AZT) (viz PDR, vydání 1993, strana 602).

Modifikace EPO proteinu, která by zlepšila jeho užitečnost jako nástroje pro diagnosu nebo léčení krevních potíží, by jistě byla žádoucí. Zejména modifikované formy EPO vykazující silnější biologickou aktivitu by byly účinnější a efektivní než nativní EPO při terapeutickém uspořádám, kdy se musí EPO podávat pacientovi. To dává možnost EPO podávat méně často a nebo v menších dávkách. Podávání snížených množství EPO také může snížit nebezpečí nepříznivých účinků spojených s EPO ošetřením, například hypertenze, návaly, bolesti hlavy etc. (viz PDR, vydání 1993, strany 603-604). Agonisty EPO receptorů podle vynálezu také mohou mít zlepšenou stabilitu a tím prodloužený poločas, což by umožnilo produkci ne-glykosylované formy EPO v bakteriální expresní soustavě za mnohem nižší cenu. V důsledku prodlouženého poločasu by tato ne-glykosylovaná forma EPO měla silnější biologickou aktivitu in vivo ve srovnání s de-glykosylovanou formou EPO.

Terapeutický způsob a kompozice mohou také zahrnovat společné dávkování s jinými hematopoietickými faktory. Neúplný seznam jiných vhodných hematopoietinů, kolonií stimulujících faktorů (CSF) a interleukinů pro simultánní nebo následné společné dávkování s polypeptidy tohoto vynálezu zahrnuje GM-CSF, G-CSF, c-mpl ligand (také známý jako TPO nebo MGDF), M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, lidský růstový hormon, růstový faktor B-buněk, faktor diferenciace Bbuněk, faktor diferenciace eosinofilů, faktor kmenových buněk (SCF), také známý jako ocelový faktor nebo c-kit ligand (zde souhrnně uváděné jako faktory) nebo jejich kombinace. Mimo seznam výše se varianty IL-3, které se uvádějí v WO 94/12639 a WO 94/12638, fuzní proteiny, které se uvádějí v WO 95/21197 a 95/21254, G-CSF agonisty receptorů, které se popisují v WO ·

• •4 444 4444 • •4 4 4 « · · · · ·

4444 44 4 4444 · 444 444 444 4444 44

97/12977, c-mpl agonisty receptorů, které se popisují v WO 977l297*8, IL-*3 agomsty*receptoru, které se popisují vWO 97/12979 a multifunkční agonisty receptorů, které se popisují vWO

97/12985, mohou podávat spolu s polypeptidy tohoto vynálezu.

Agonisty EPO receptorů podle vynálezu mohou být užitečné při mobilizaci hematopoietických progenitorů a kmenových buněk v periferní krvi. Ukázalo se, že progenitory vzniklé v periferní krvi jsou účinné při rekonstituci pacientů v situaci autologní transplantace kostní dřeně.

Agonisty EPO receptorů podle vynálezu mohou být také užitečné při ex vivo expanzi hematopoietických progenitorů. Faktory stimulující kolonie (CSF), jako je G-CSF, se mohou podávat samotné nebo podávat společné s jinými CSF nebo v kombinaci stransplanty kostní dřeně po vysokých dávkách chemoterapie při léčení anemie, neutropenie a trombocytopenie, které často vznikají při takovém léčení.

Jiným aspektem vynálezu je zajištění způsobů udržovat nebo expandovat hematopoietické prekursomí buňky, což zahrnuje očkování buněk do kultivační nádoby, která obsahuje kultivační medium, které bylo upraveno expozicí s kmenovými buňkami, jako jsou HS-5 (WO 96/02662, Roecklein a Torok-Strob, Blood 85: 997-1105 (1995)), které byly doplněny agonisty receptorů EPO podle vynálezu.

Krátký popis obrázků

Obrázek 1 schématicky ukazuje přeskupení sekvence proteinu. N-konec (N) a C-konec (C) nativního proteinu jsou spojeny spojovníkem nebo jsou spojeny přímo. Protein je otevřen vmiste zlomu, což vytvoří nový N-konec (nový N) a nový C-konec (nový C), což vede k novému proteinu s novou sekvencí aminokyselin. Přeskupenou molekulu lze syntetizovat de novo jako lineární molekulu a nemusí se procházet kroky spojování původního N-konce a Ckonce a otvírání proteinu v místě zlomu.

Obrázek 2 ukazuje schematicky způsob I pro vytvoření nových proteinů, ve kterých původní N-konec a C-konec nativního proteinu jsou spojeny spojovníkem a vytvoří se odlišný N-konec a C-konec proteinu. V ukázaném příkladu přrskupení sekvence vede k novému kódování genu proteinu s novým N-koncem vytvořeným u aminokyseliny 97 původního proteinu. Původní C-konec (aminokyselina 174) je spojen k aminokyselině 11 (aminokyseliny 110 jsou odstraněny) spojovací oblastí a nový C-konec se vytvoří u aminokyseliny 96 původní sekvence.

• 44 4 44 44

4 444 4444

444 4 444 4 4 4 4

4444 44 4 444* · 444 444 4 4 4 4 4 4 4

4 4 44 4 44 44

Obrázek 3 ukazuje schematicky způsob II pro vytvoření nových proteinů, ve kterých původní N-konec a C-konec nativního proteinu jsou spojeny bez spojovníku, a vytvoří se odlišný N-konec a C-konec proteinu. V ukázaném příkladu reorganizace sekvence vede k novému kódování genu proteinu snovým N-koncem vytvořeným u aminokyseliny 97 původního proteinu. Původní C-konec (aminokyselina 174) je spojen k aminokyselině 96 původní sekvence.

Obrázek 4 ukazuje schematicky způsob III pro vytvoření nových proteinů, ve kterých původní N-konec a C-konec nativního proteinu jsou spojeny spojovníkem a vytvoří se odlišný N-konec a C-konec proteinu. V ukázaném příkladu reorganizace sekvence vede k novému kódování genu proteinu snovým N-koncem vytvořeným u aminokyseliny 97 původního proteinu. Původní C-konec (aminokyselina 174) je spojen k aminokyselině 1 spojovací oblastí a nový C-konec se vytvoří u aminokyseliny 96 původní sekvence.

Obrázek 5 ukazuje DNA sekvenci kódující lidský zralý EPO, založenou na sekvenci Lín aj. (PNAS 82: 7580-7584 (1985)).

Příklady provedení vynálezu

Stanovení spojovníku

Délka sekvence aminokyselin spojovníku se může vybrat empiricky nebo s ohledem na strukturní informaci nebo s použitím kombinace obou přístupů.

Když není dostupná žádná strukturní informace, může se připravit malá série spojovníků pro testování s použitím designu jehož délka se mění, aby přesáhl rozpětí od 0 do 50 cm'^ a jejichž sekvence se vybere, aby byla konzistentní s povrchovou expozicí (hydrofilnost, Hopp a Woods, Mol. Immunol. 20: 483-489 (1993), Kyte a Doolittle, J. Mol. Biol., 157: 105-132 (1982)), povrch exponovaný rozpouštědlu (Lee a Richards, J. Mol. Biol., 55: 379-400 (1971)) a schopnost zaujmout potřebnou konformaci bez rozbití konfigurace agonisty EPO receptoru (konformačně flexibilní, Karplus a Schulz, Naurwissenschaften 72: 212-213 (1985). Předpokládaje průměrnou translaci 2,0 až 3,8 108 na zbytek by to znamenalo, že délka ke zkoušení by byla mezi 0 až 30 zbytky s výhodným rozmezím mezi 0 až 15 zbytky. Příkladem pro takovou empirickou sérii by byla konstrukce spojovníků s pomocí kazetové sekvence GlyGly-Gly-Ser opakované n krát, kde n je 1, 2, 3 nebo 4. Odborníci poznají, že existuje mnoho takových sekvencí, které se liší délkou nebo složením, které mohou sloužit jako spojovníky s prvotním ohledem, aby nebyly příliš dlouhé nebo krátké (srovnej Sandhu, Critical Rev. Biotech. 12: 437-452 (1992)). Pokud jsou příliš dlouhé, entropické účinky by asi destabilizovaly aa aa » a a i troj-rozměrné složení a také by mohly učinit skládání kineticky nepraktické, a pokud jsou příliš krátké, budou asi destabilizovat molekulu z důvodu torsního a stérického pnutí.

• · a · • · · · • · · · · ···· · · · ·1 • » · • a r a aaa a a aa aa

Odborníci na analýzu strukturní informace proteinů poznají, že s využitím vzdálenosti mezi konci řetězce, definované jako vzdálenost mezi c-alfa uhlíky, se může definovat délka řetězce, který se má použít, nebo alespoň omezit počet možností, které se musí testovat při empirickém výběru spojovníků. Také poznají, že v některých případech jsou polohy konců polypeptidu špatně definované ve strukturních modelech odvozených z difrakce X-paprsků nebo ze spektroskopických údajů nukleární magnetické resonance. Pokud je to pravda, musí se brát zřetel na tuto situaci, aby se správně určila délka potřebného spojovníku. Z těch zbytků, jejichž polohy jsou dobře definované, se vyberou dva zbytky, které jsou v sekvenci blízko ke koncům řetězce a vzdálenost mezi jejich c-alfa uhlíky se využije k výpočtu přibližné délky spojovníku mezi nimi. S využitím vypočtené délky se pak vyberou spojovníky s rozmezím počtu zbytků -8 (vypočtené s využitím 2,0 až 3,8 10 cm na zbytek). Tyto spojovníky se mohou komponovat s původní sekvencí, podle potřeby zkrátit nebo prodloužit. Když se prodlužují, další zbytky se mohou vybrat, aby byly flexibilní nebo hydrofilní, jak se popisuje výše, nebo případně se původní sekvence může substituovat s použitím série spojovníků, jeden například je kazetový přístup Gly-Gly-Gly-Ser zmíněný výše nebo se případně může použít kombinace původní sekvence a nové sekvence mající přibližnou celkovou délku.

Stanovení aminových a karboxylových konců agonistů receptoru EPO

Sekvence agonistů receptoru EPO schopná se skládat do biologicky aktivních stavů se může připravit vhodným výběrem poloh počátku (aminový konec) a konce (karboxylový konec) z původního řetězce polypeptidu, jak se popisuje výše. Aminové a karboxylové konce se vyberou v rozmezí obecného rozpětí sekvence uváděného jako oblast místa zlomu s použitím směrnic, jak se popisují níže. Nová sekvence aminokyselin se tak vytvoří výběrem aminových a karboxylových konců v rozmezí stejné oblasti místa zlomu. V mnoha případech výběr nových konců bude takový, aby původní poloha karboxylového konce bezprostředně předcházela aminovému konci. Avšak odborníci poznají, že výběry konců kdekoliv uvnitř oblasti mohou fungovat a že povedou účinně buď k delecím, nebo adicím aminových nebo karboxylových částí nové sekvence.

Ústředním dogmatem molekulární biologie je to, že primární sekvence aminokyselin proteinu diktuje skládání do troj-rozměrné struktury potřebné pro expresi jeho biologické funkce. Odborníkům jsou známé způsoby, jak získat troj-rozměrnou strukturní informaci s využitím difrakce X-paprsků jednotlivých krystalů proteinu nebo nukleární magnetické resonančm

Φ φ ·» φ ·· *· ·· · ·♦· * · · · • · · · ·«· · · · · • ΦΦ·Φ φ · · ···· · »·· ♦ ·· • φ · « « · · • ΦΦ · φφ · ·· ·· spektroskopie roztoků proteinu. Příklady strukturní informace, která je relevantní k identifikaci oblastí míst zlomu zahrnují lokaci a typ sekundární struktury proteinu (alfa a 3-10 šroubovnice, paralelní a anti-paralelní beta vrstvy, zvraty a obraty a smyčky (Kabsch a Sander, Biopolymers 22: 2577-2637 (1983)), stupeň vystavení zbytků aminokyselin rozpouštědlu, rozsah a typ interakcí zbytků mezi sebou (Choyhia, Ann. Rev. Biochem. 53: 537-572 (1984)) a statické a dynamické rozdělení konformací podél řetězce polypeptidů (Alber a Mathews, Methods Enzymol. 154: 511-533 (1987)). V některých případech je známá další informace o vystavení zbytků aminokyselin rozpouštědlu, jedním případem je místo potranslačního spojem uhlovodíku, které je nutně na povrchu proteinu. Když není dostupná experimentální strukturní informace, nebo se nemůže získat, jsou též dostupné způsoby, jak analyzovat primární sekvenci aminokyselin, aby se mohly předpovědět terciární a sekundární struktury proteinu, přístupnost rozpouštědlu a výskyt obratů a smyček. Někdy lze aplikovat pro empirické stanovém' výstavem povrchu biochemické metody, když nejsou uskutečnitelné přímé strukturní metody, například s využitím identifikace míst štěpem řetězce po omezené proteolýze, aby se zjistilo vystavení povrchu (Gentile a Salvátore, Eur. J. Biochem. 218: 603-621 (1993)).

Tak s použitím buď experimentálně odvozené strukturní informace, nebo způsobů predikce (například Srisnivisan a Rose, Proteins: Struct. Funct. and Genetics, 22: 81-99 (1995)) se prohlédne původní sekvence aminokyselin, aby se klasifikovaly oblasti podle toho, jsou-li nebo nejsou-li integrální pro udržení sekundární a terciární struktury. Výskyt sekvencí s oblastmi, o nichž je známo, že se účastní periodické sekundární struktury (alfa a 3-10 šroubovnice, paralelní a anti-paralelní beta vrstvy, zvraty a obraty a smyčky jsou oblasti, kterým je nutné se vyhnout. Podobně oblasti sekvence aminokyselin, u nichž se pozorovalo nebo předpovědělo, že mají nízký stupeň vystavení rozpouštědlu, jsou pravděpodobněji částí tak zvaného hydrofobního jádra proteinu a mělo by se jim také vyhnout při výběru. Naproti tomu oblasti, o kterých je známo nebo předpovězeno, že jsou na povrchu obratů nebo smyček a zvláště ty oblasti, o kterých je známo, že nejsou potřebné pro biologickou aktivitu, jsou výhodná místa pro umístění extrémů řetězce polypeptidů. Kontinuální kusy sekvence aminokyselin, kterým se dává přednost na základě kriterií výše uvedených, se uvádějí jako oblasti míst zlomu.

to ·· · toto ·· ··· ··· «»··· ··· toto · » ·*·· to ···· ·· to ···· · »«· ♦·· to · μ · · ·· ··· · ·· · ·· ·· (100 gg/ml ampicillinu, 75 gg/ml spectinomycinu. Před sklizní se analyzuje 1 gg buněk pomocí PCR na přítomnost genu agonisty EPO receptorů. PCR se provádí s využitím kombinace primérů, které se spojují s genem agonisty EPO receptorů a nebo s vektorem. Když PCR skončí, přidá se k vzorku vedoucí barvivo a potom následuje elektroforéza, jak se popisovalo výše. Gen se spojil s vektorem, když se pozoruje produkt PCR očekávané velikosti.

Způsoby vytvoření genů s novým N-koncem/C-koncem

Způsob I. Vytvoření genů s novým N-koncem/C-koncem, které obsahují oblast spojovníku.

Geny s novým N-koncem/C-koncem, které obsahují oblast spojovníku oddělující původní C-konec a N-konec se mohou vytvořit podstatně podle způsobu popsaného v Mullins aj., J. Am. Chem. Soc. 116: 5529-5533 (1994). K přeskupení DNA sekvence kódující primární sekvenci aminokyselin proteinu se použije řada kroků amplifikace polymerázové řetězové reakce (PCR). Kroky jsou ukázány na obr. 2.

V prvém kroku se použije nastavení priméru (nový start a start spojovníku, aby se vytvořil a amplifikoval z původního řetězce genu fragment DNA start fragmentu kódující nový protein, následovaný spojovníkem, který spojuje C-terminální a N-terminální konce původního proteinu. V druhém kroku se použije nastavení priméru (nový stop a stop spojovníku, aby se vytvořil a amplifikoval z původního řetězce genu fragment DNA stop fragmentu kódující stejný spojovník, který se použil výše, následovaný novou C-terminální částí nového proteinu. Navrhnou se priméry označené nový start anový stop, aby zahrnovaly vhodná místa pro rozlišení restrikčními enzymy, což umožní klonování nového genu do plazmidu exprese.

o o

Typickými podmínkami PCR jsou jeden cykl 95 C po 2 minuty tání, 25 cyklů 94 C denaturace po 1 minutu, 50 °C po minutu žíhání a 72 °C po 1 minutu extenze, plus jeden cykl extenze při 72 °C po sedm minut. Použije se Perkin Elmer GeneAmp PCR Core souprava činidel. 100 gm reakční směsi obsahuje 100 pmol každého priméru a jeden gg vzorové DNA a 1 x ústoj PCR. 200 gmol dATP, 200 gmol dCTP, 2,5 jednotek AmpliTaq DNA polymerázy a 2 mmol MgCl2. Reakce PCR se provádějí v DNA tepelném cyklovači model 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT).

Start fragmentu a stop fragmentu, které mají komplementární sekvenci v oblasti spojovníku a kódující sekvenci pro dvě aminokyseliny na obou stranách spojovníku se spolu spojí v třetím kroku PCR, aby se vytvořila plná délka genu kódujícího nový protein. Fragmenty DNA start fragmentu a stop fragmentu se vyvolají na 1% TEA gelu barveného ethidium ·· ♦ • · · · · · ···· • · · ···· ···· • ···· · · · ·»·· · ··· ··· ·<··· · · e·· · ·· · ·· «·

Metody a materiály

Metody rekombinantní DNA

Pokud není uvedeno jinak, všechny speciální chemikálie byly získané od Sigma Co. (St. Louis, MO). Restrikční endonukleázy a T4 DNA ligáza byly získané od New England Biolabs (Beverly, MA) nebo od Boehringen Mannheim (Indianapolis, IN)

Transformace kmenů Escheria coli

Kmeny E. coli jako DH5a™ (Life Technologies, Gaithersburg, MD) a TG1 (Amersham Corp., Arlington Heights, IL) se užívají k transformaci ligačních reakcí a jsou zdrojem plazmidu «

DNA pro transfekci savčích buněk Kmeny E. coli jako MON105 a JM101 se mohou použít k expresi agonistů EPO receptoru podle vynálezu v cytoplazmě nebo periplazmickém místě.

MON105 ACTT #55204: F-, lamda-, IN(rmD, rrE)l, rpoD+, rpoH358.

DH5oc™: F-, phi80dlacZdeltaM15, delta(lacZYA-argF)U169, deoR, recAl, endAl, hsdR17(rk-,mk+), phoA, supE441amda-, thi-1, gyrA96, relAl.

JMI 01: delta (lac-pro), supE, thi-1, hsdD5/F’ (traD36, proA+B+, laclq, lacZdeltaM15).

DH5a™ subklonovací účinné buňky jsou získané jako kompetentní buňky a jsou připravené k transformaci podle protokolu výrobce, zatímco oba kmeny E. coli TG1 a MON105 se uschopní pro převzetí DNA pomocí CaCl2 metody. Typicky se pěstuje 20 až 50 ml buněk v LB mediu (1% Bacto-trypton, 0,5% Bacto-extrakt z kvasinek, 150 mmol NaCl) o hustotě asi 1,0 optických jednotek při 600 nanometrech (OD600) se měří na spektrofotometru Spectronics (Baush and Lomb, Rochester, NY). Buňky se odeberou odstředěním a znovu se suspendují v pětinovém objemu kultivačního roztoku CaCl2 (50 mmol CaCl2, 10 mmol Tris-Cl. pH 7,4) a «

udržují se při 30 minut 4 °C. Buňky se odeberou odstředěním a znovu se suspendují v desetině z objemu kultivačního roztoku CaCl2. Slitá DNA se přidá k 0,2 ml objemu těchto buněk a vzorky se drží při 4 °C jednu hodinu. Vzorky se uvedou na 42 °C po 2 minuty a přidá se 1 ml LB před třepáním vzorků při 37 °C po jednu hodinu. Buňky z těchto vzorků se rozestřou na misky (LB medium plus 1,5% Bacto-agar) obsahující buď ampicillin (100 mikrogramů/ml pg/ml), když se selektovalo na transformanty odolné proti ampicillinu, nebo spectinomycin (75 pg/ml), když se selektovalo na transformanty odolné proti spectinomycinu. Misky se inkubují přes noc při 37 °C.

o

Vyberou se osamělé kolonie, rostou za třepám při 37 C v LB s dodaným vhodným antibiotikem i

L • ·· · ·* ·· * ··· · · · · • · ···· ···· ···· · · · ···· · ··· ··· • · · · · · ··· * ·· · · · 9 9 bromidem a izolovaného s použitím extrakční soupravy Quiaex Gel (Quiagen). Tyto fragmenty se smísí v ekvimolekulárních množstvích, zahřejí se na 70 °C na 10 minut a pomalu ochladí, aby se umožnilo spojení přes jejich sdílenou sekvenci v oblasti start spojovníku a stop spojovníku. V třetím kroku PCR se přidají ke spojeným fragmentům priméry nový start a nový stop, aby se vytvořila a amplifíkovala plná délka genu N-konec/C-konec. Typickými podmínkami PCR jsou jeden cykl 95 °C po 2 minuty tání, 25 cyklů 94 °C denaturace po 1 minutu, 60 °C po minutu žíhání a 72 °C po minutu extenze, plus jeden cyklus extenze při 72 °C po sedm minut. Použije se Perkin Elmer GeneAmp PCR Core souprava činidel. 100 pm reakční směsi obsahuje 100 pmol každého priméru a asi 0,5 pg DNA a 1 x ústoj PCR. 200 pmol dATP, 200 pmol dCTP, 2,5 jednotek AmpliTaq DNA polymerázy a 2 mmol MgCl2. Reakce PCR se čistí pomocí soupravy Wizard PCR Preps (Promega).

Způsob II. Vytvoření genů s novým N-koncem/C-koncem bez oblasti spojovníku.

Geny s novým N-koncem/C-koncem bez spojovníku spojujícího původní C-konec a Nkonec se mohou vytvořit pomocí dvou kroků PCR amplifikace a spojení tupých konců. Kroky se ukazují na obrázku 3.

V prvém kroku se použije nastavení priméru (nový start a start P-bl), aby se vytvořil a amplifíkoval z původního řetězce genu fragment DNA start fragmentu, který obsahuje sekvenci kódující novou C-terminální část nového proteinu. V druhém kroku se použije nastavení priméru (nový stop a stop P-bl), aby se vytvořil a amplifíkoval z původního řetězce genu fragment DNA stop fragmentu, který obsahuje sekvenci kódující novou Cterminální část nového proteinu. Navrhnou se priméry označené nový start a nový stop, aby zahrnovaly vhodná restrikční místa, která umožňují klonování nového genu do vektorů exprese.

o o

Typickými podmínkami PCR jsou jeden cyklus 95 C po 2 minuty tání, 25 cyklů 94 C o o denaturace po 1 minutu, 50 C po 45 sekund žíhám a 72 C po 45 sekund extenze. Použije se polymeráza Deep Vent (New England Biolabs) za podmínek doporučených výrobcem, aby se snížil výskyt přesahů. Priméry start P-bl a stop P-bl se fosforylují na 5' konci, aby se usnadnilo následující spojení tupých konců start fragmentu a stop fragmentu k sobě. 100 pm reakční směsi obsahuje 100 pmol každého priméru a jeden pg vzorové DNA a 1 x ústoj Vent (New England Biolabs), 300 pmol dGTP, 300 pmol dATP, 300 pmol dTTP, 300 pmol dCTP a 1 jednotku polymerázy Deep Vent. Reakce PCR se provádějí v DNA tepelném cyklovači model 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT) a čistí se pomocí soupravy Wizard PCR Preps (Promega).

• * toto to ·· ·· ··· to to to to · · · • toto ···· ···· • to··· ·· to ···· · ··· ··· • toto·· ·« ··· « ·· · «· ·«

Primery se navrhnou, aby zahrnovaly vhodná místa rozpoznaná restrikčními enzymy, která umožňují klonování nového genu do vektorů exprese. Typicky se start fragmentu navrhne tak, aby vytvořil Ncol restrikční místo a stop fragmentu se navrhne tak, aby vytvořil HindlII restrikční místo. Restrikční stravovací reakce se čistí pomocí soupravy Magie DNA Clean-up System (Promega). Fragmenty Start a Stop se vyvolají na 1% TEA gelu barveného ethidium bromidem a izolovaného s použitím extrakční soupravy Qiaex Gel (Qiagen). Tyto fragmenty se smíchají a připojí se ke koncům fragmentu NcoI/HindlII s asi 3800 páry baží vektoru pMON3934 zahříváním na 50 °C na 10 minut a nechá se pomalu ochladit. Tři fragmenty se spolu spojí pomocí T4 DNA ligázy (Boehringen Mannheim). Výsledkem je plazmid obsahující plnou délku genu nový N-konec/C-konec. Část spojovací reakce se použije k transformaci DH5a buněk (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Plazmid DNA se čistí a sekvence se potvrdí jako níže.

Způsob III. Vytvoření genů s novým N-koncem/C-koncem metodou tandemové duplikace.

Tandemově duplikované geny s N-koncem/C-koncem lze připravit způsobem popsaným vHorlick aj., Protein Eng. 5: 427-431 (1992). Amplifikace polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) genů s novým N-koncem/C-koncem se provede pomocí tandemově duplikované vzorové DNA Kroky se ukazují na obrázku 4.

Tandemově duplikovaná vzorová DNA se vytvoří klonováním a obsahuje dvě kopie genu oddělené sekvencí DNA kódující spojovník původních C-terminálního a N-terminálního konce dvou kopií genu. Použijí se specifická nastavení priméru, aby se vytvořila a amplifikovala plná délka genu s novým N-koncem/C-koncem z tandemově duplikované vzorové DNA. Tyto priméry se navrhnou tak, aby zahrnovaly vhodná restrikční místa, což umožní klonování nového o

genu do vektorů exprese. Typickými podmínkami PCR jsou jeden cykl 95 C tání po 2 minuty, 25 cyklů 94 °C denaturace po 1 minutu, 50 °C žíhání po minutu a 72 C extenze po 1 minutu, plus jeden cykl extenze při 72 °C po sedm minut, Použije se Perkin Elmer GeneAmp PCR Core souprava reagentů (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). 100 pm reakční směsi obsahuje 100 pmol každého priméru a jeden pg vzorové DNA a 1 x ústoj PCR, 200 pmol dGTP, 200 pmol dATP, 200 pmol dTTP, 200 pmol dCTP, 2,5 jednotek AmpliTaq DNA polymerázy a 2 mmol MgCl2- Reakce PCR se provádějí v DNA tepelném cyklovači model 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). Reakce PCR se čistí pomocí soupravy Wizard PCR Preps (Promega).

• « • · · · to · to a· to to

Izolace a charakterizace DNA • · to ···· · • · · · to «· ·

Plazmidová DNA se může izolovat řadou různých způsobů a s použitím komerčně dostupných souprav známých odborníkům. Plazmidová DNA se izoluje pomocí soupravy Promega Wizard™ Miniprep (Madison, WI), souprav Qiagen QIAwell Plazmid izolation (Chastsworth, CA) nebo soupravy Qiagen Plazmid Midi. Tyto soupravy sledují stejný obecný postup pro izolaci plazmidové DNA. Stručně, buňky se peletují odstředěním (5000 x g), plazmidová DNA se uvolní postupným ošetřením NaOH/kyselina a buněčné zlomky se odstraní odstředěním (10000 x g). Kalová voda (obsahující plazmidovou DNA) se naloží na kolonu obsahující pryskyřici, která váže DNA a plazmidová DNA se eluuje pomocí TE. Po screeningu na kolonie shledaným plazmidem se očkují buňky E. coli do 50-100 ml LP plus vhodné antibiotikum pro růst přes noc při 37 °C ve vzdušném inkubátoru za třepání. Vyčištěná plazmidová DNA se použije pro sekvenování DNA, další trávení restrikčními enzymy, další podklonování fragmentů DNA a transfekci do savců, E. coli nebo do jiných buněk.

Potvrzení sekvencí

Vyčištěná plazmidová DNA se znovu suspendují vdí^O a kvantifikují se měřením absorbance při 260/280 nm v spektrofotometru Spectronics 601 UV (Baush and Lomb). Vzorky DNA se sekvenují pomocí soupravy terminátorové sekvencující chemie ABI PRISM™ DyeDeoxy™ (Applied Biosystems Division of Perkin Elmer Corporation, Lincoln City, CA) podle protokolu navrženého výrobci, obvykle modifikovaného přidáním 5% BMSO k sekvenující směsi. Sekvenování se provádí v DNA tepelném cyklovači model 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT) podle doporučených podmínek amplifikace. Vzorky se čistí, aby se odstranil přebytek terminátorových barviv, kolonami Centri-Sep™ (Princenton Separations, Adelphia, NJ) a lyofilizují se. Sekvenující reakce označené fluorescentním barvivém se znovu suspendují v deionizovaném formamidu a sekvenují se na denaturujícím 4,75% polyakrylamid-8M moěovinových gelech pomocí automatizovaného sekvenovaěe DNA ABI Model 373A. Překrývající se fragmenty DNA a sekvence se analyzují a sestavují do master DNA sborů pomocí analytického software Sequencer v2.1 DNA (Gene Codes Corporation, Ann Arbor, MI).

Exprese agonistů receptoru EPO v savčích buňkách

Transfekce savčích buněk/ produkce upraveného media.

• · » · · · · • *· * Μ · ·* ·«

Buněčnou linii BHK-21 lze získat od ACTT (Rockville, MD). Buňky se kultivují v modifikovaném Dulbeccově Eagle mediu (DMEM, vysoká glukóza) obohaceném 10% fetálním hovězím sérem (FBS). Tato formulace je označena BHK růstové medium. Selektivním mediem je BHK růstové medium obohacené 453 jednotek/ml hydromycinu B (Calbiochem, San Diego, CA). Buněčná linie BHK-21 se před tím transfektovala HSV transaktivačním proteinem VP16, který transaktivuje promotor IE110, který se nalézá na plazmidu pMON3359 (viz Hippenmeyer aj., Bio/Technology, strany 1037-1041 (1993)). Protein VP16 podněcuje expresi genů vložených za promotor LEI 10. Buňky BHK-21 s expresí transaktivujícího proteinu VP16 je označena BHK-VP16. Plazmidu pMON1118 (viz Highkin aj., Poultry Sci, 70: 970-981 (1991)) vyjadřuje gen odolnosti proti hydromycinu z promotoru SV40. Podobný plazmid lze získat od ACTT, pSV2-hph.

Buňky BHK-VP16 se vysejí na 60 mm kultivační misky pro tkáně při 3 x 10^ buněk na misku 24 hodiny před transfekcí. Buňky se transfektují po 16 hodin v 3 ml OPTIMEM™ (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) obsahujícím 10 pg plazmidové DNA obsahující příslušný gen, 3 μg plazmidu odolnosti proti hydromycinu pMONl 118 a 80 pg LIPOFECTAMINE™ (GibcoBRL) na misku. Medium se potom odsálo a nahradilo se 3 ml růstového media. 48 hodin po transfekcí se medium z každé misky sebralo a testovalo se na aktivitu (přechodně kondiciované medium). Buňky se odstraní z misky pomocí trypsin-EDTA, zředilo se 1:10 a přeneslo se na 100 mm kultivační misky pro tkáně obsahující 10 ml selektivního media. Přibližně po 7 dnech v selektivním mediu odolné buňky vyrostou do kolonií s průměrem několika milimetru. Kolonie se odstraní z misky filtračním papírem (nařezaného asi na stejnou velikost jako kolonie a namočené do trypsin-EDTA) a přenesou se do jednotlivých jamek desky s 24 jamkami obsahujících 1 ml selektivního media. Když klony dostatečně vyrostou, kondiciované medium se znovu testuje a positivní klony se expandují do růstového media.

Exprese agonistů receptoru EPO v E. coli

Buňky E. coli kmen ΜΘΝ105 nebo JM101, obsahující příslušný plazmid rostou při 37 °C v M9 mediu plus kasaminové kyseliny za třepání ve vzdušném inkubátoru model G25 od New Brunswick Scientific (Edison, New Jersey). Růst se sleduje při OD600, dokud nedosáhne hodnotu 1, kdy se přidá nalidixová kyselina (10 mg/ml) v 0,1 N NaOH na konečnou koncentraci 50 pg/ml. Kultury se pak třepou při 37 °C tři až čtyři další hodiny. Během kultivační fáze se udržuje vysoký stupeň aerace, aby se dosáhla maximální produkce žádaného genového produktu. Buňky se zkoumají pod světelným mikroskopem na přítomnost zachycených částic (IB). Jedno mililitrové podíly kultury se odeberou pro analýzu obsahu proteinů vařením peletovaných buněk, jejich ošetřením redukujícím ústojem a elektroforézou přes SDS-PAGE (viz Maniatis aj.,

Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 1982). Kultura se odstřeďuje (5000 x g), aby se buňky peletovaly.

Další strategie pro dosažení vysokého stupně exprese genů v E.coli lze nalézt v Sawas C. M., Microbiological Reviews, 60: 512-538 (1996).

Příprava zachycených částic: Extrakce, nové složení, dialýza, DEAE chromatografie a charakterizace agonistů receptoru EPO, které se hromadí v zachycených částicích v E. coli Izolace zachycených částic:

Peleto váné buňky z kultury 330 ml E. coli,$Q znovu suspendují v sonifikačním ústoji (10 mmol hydrochloridu 2-amino-2-(hydroxymethyl)-l,3-propandiolu (Tris-HCl), pH 8,0, plus 1 mmol ethylendiaminotetraoctové kyseliny (EDTA). Resuspendované buňky se sonifikují pomocí mikrokonce rozbíječe buněk Sonicator (Model W-375 Heat Systems-Ultrasonics Inc., Farmingdale, New York). Použijí se tři kola sonifikace v sonifikačním ústoji následovaná odstředěním, aby se rozbily buňky a promyly se nachycené částice (IB). Prvé kolo sonifikace je 3 minutový impuls, následovaný 1 minutovým impulsem a konečná dvě kola sonifikace jsou po 1 minutě.

Extrakce a nové složení proteinů z pelet zachycených částic:

Po kroku konečného odstředění se IB pelety znovu suspendují v 10 ml 50 mmol Tris-HCl, pH 9,5, 8mol močoviny a 5 mmol dithiothreitolu (DTT) a míchají se asi 45 minut, aby se umožnila denaturace vyjádřeného proteinu.

Extrakční roztok se přenese do kádinky obsahující 70 ml 5 mmol Tris-HCl, pH 9,5, 2,3 mol močoviny a mírně se míchá za výstavem vzduchu při 4 °C po 18 až 48 hodin, aby se umožnilo nové složení proteinů. Nové skládání se sleduje analýzou na Cl8 koloně pro chromatografií v reversní fázi za vysokého tlaku (RP-HPLC) (0,46 x 25 cm) (Vydac, Hesperia, CA). K sledování nového skládám se použije lineární gradient od 40 % do 65 % acetonitrilu obsahujícího 0,1% trifluoroctové kyseliny (TFA). Tento gradient se vyvolává během 30 minut při průtokové rychlosti 1,5 ml za minutu. Denaturované proteiny se obecně eluují později v gradientu než složené proteiny.

Čistění:

Po novém složení se znečisťující proteiny E. coli odstraňují srážením kyselinou. pH roztoku pro nové složení se titruje, aby bylo mezi pH 5,0 a pH 5,2, pomocí 15% (objemově) octové kyseliny (HOAc). Tento roztok se míchá při 4 2 hodiny a pak se odstřeďuje 20 minut při 12000 x g, aby se peleto vály všechny nerozpustné proteiny.

Kalová voda z kroku srážení kyselinou se dialýzuje na membráně Spectra/Por 3 s hranicí molekulové hmotnosti (MWCO) 3500 daltonů. Dialýzuje se proti 2 změnám 4 litrů (50 násobný přebytek) 10 mmol Tris-HCl, pH 8,0, celkem 18 hodin. Dialýza snižuje vodivost vzorku a odstraňuje močovinu před chromatografií DEAE. Vzorek se pak odstřeďuje (20 minut pří 12000 x g), aby se peletovaly všechny nerozpustné proteiny po dialýze.

Pro iontovou výměnnou chromatografií se použije kolona Bio-Rad Bio-Scale DEAE2 (7 x 52 mm). Kolona se vyrovná ústojem obsahujícím 10 mmol Tris-HCl, pH 8,0. Protein se eluuje pomocí gradientu 0 až 500 mmol chloridu sodného (NaCl) v vyrovnávacím ústoji přes 45 objemů kolony. Pro vymytí se použije průtoková rychlost 1 ml za minutu. Frakce z kolony (2 ml na frakci) se sbírají během gradientu a analyzují se RP-HPLC na Cl8 koloně (0,46 x 25 cm) (Vydac, Hesperia, CA). Použije se lineární gradient od 40 % do 65 % acetonitrilu obsahujícího 0,1% trifiuoroctové kyseliny (TFA). Tento gradient se vyvolává během 30 minut při průtokové rychlosti 1,5 ml za minutu. Spojené frakce se pak dialýzují proti 2 změnám 4 litrů (50 až 500 násobný přebytek) 10 mmol octanu amonného (NH4AC), pH 4,0, celkem 18 hodin. Dialýza se provádí s použitím membrány Spectra/Por 3 s MWCO 3500 daltonů. Konečně se vzorek sterilně filtruje s použitím 0,22 pm injekčního filtru (pStar LB injekční filtr, Costar, Cambridge, Ma.) a skladuje se při 4 ®C.

V některých případech složené proteiny lze čistit afinitně s použitím afinitních činidel, jako je mAbs nebo receptorové podjednotky připojené k vhodné matrici. Alternativně (nebo navíc) lze čistém dosáhnout různými chromatografickými metodami, jako iontovou výměnou, gelovou filtrací nebo hydrofobní chromatografií nebo HPLC v reversní fázi.

Tyto a jiné metody jsou popsány podrobně v Methods in Enzymology, Volume 182, Guide to Protein Purification, Murray Deutcher, Ed., Academie Press, San Diego (1990).

Charakterizace proteinu:

Vyčištěný protein se analyzuje pomocí RP-HPLC, elektrorozprašovací hmotnostní spektrometrie a SDS-PAGE. Kvantifikace proteinu se provede podle složení aminokyselin, RP25 • ·· · ·· «· • ··· · » · · • · » · · · · · fl · ···· · · · ···· · ··· ··· * · · · · · to «· · »to «*

HPLC a pomocí Bradfodova stanovení proteinů. V některých případech lze provést mapování tryptického peptidu spolu s elektrorozprašovací hmotnostní spektrometrií, aby se potvrdila identita proteinu.

Methylcelulozový test

Tento test odráží schopnost kolonie stimulujících faktorů stimulovat normální buňky kostní dřeně, aby produkovaly různé typy krvetvorných kolonií in vitro (Bradley aj., 1966, Aust. Exp. Biol. Sci. 44: 287-300 (1966), Pluznik aj., J. Cell Comp. Physio. 66: 319-324 (1965)).

Metody

Asi 30 ml odsáté čerstvé normální zdravé kostní dřeně se získalo od jednotlivců po informovaném souhlasu. Za sterilních podmínek se vzorky zředily 1:5 roztokem IX PBS (číslo 14040.059 Life Technologies, Gaithersburg, MD.) v 50 ml konické zkumavce (číslo 25339-50 Corning, Corning, MD). Pod zředěný vzorek se rozprostřel ficoll (Histopaque 1077 Sigma H8889) a odstřeďovalo se při 300 x g po 30 minut. Pás mononukleámích buněk se odstranil a promyl se dvakrát IX PBS a jednou 1% BSA PBS (CellPro CO, Bothell, WA). Mononukleární buňky se spočítaly a CD34a buňky se vybraly pomocí kolony soupravy Ceprate LC (DC34) (CellPro CO, Bothel, WA). Tato frakcionace se provádí, dokud všechny kmenové a rodičovské buňky kostní dřeně nevykazují CD34 povrchový antigen.

Kultury se nasadí v trojnásobném počtu s konečným objemem 1.0 ml v 35*10 mm Petriho miskách (Nunc číslo 174926). Medium kultury se získá od Terry Fox Labs. (HCC 4230 medium, Terry Fox Labs. Vancouver, B. C. Kanada) a k medium kultury se přidá erythropoietin (Amgden, Thousands Oaks, CA.). 3000-10000 CD34a buněk se přidá na misku. Přidají se proteiny agonistů receptoru EPO, buď v kondiciovaném mediu z transfektovaných savčích buněk nebo čištěné z kondiciováného media z transfektovaných savčích buněk nebo z E. coli, aby se dosáhla konečná koncentrace mezi 0,001 nmol do 10 nmol. Kultury se znovu suspendují pomocí 3 ml injekční stříkačky a 1,0 ml se dá na misku. Kontrolní kultury (základní odpověď) nedostanou žádné kolonie stimulující faktory. Positivní kontrolní kultury dostanou kondiciovaná o

media (PHA stimulované lidské buňky (Terry Fox Labs. H2400). Kultury se inkubují při 37 C ve zvlhčeném vzduchu s 5 % CO2.

Krvetvorné kolonie, které jsou definovány jako větší než 50 buněk, se spočítají v den vrcholné odpovědi (dny 10-11) pomocí mikroskopu Nikon s invertovanou fází a kombinací objektivu 40x. Skupiny buněk obsahující méně než 50 buněk, se označují jako shluky.

Alternativně lze kolonie identifikovat rozprostřením kolonií na sklíčku a barvením, nebo je lze sebrat, znovu suspendovat a rozprostřít na sklíčku s cytospinem pro barvení.

• * *· · φφ φ» φφφ φφφ φ φ · · • · · · ΦΦβ φ φφ 9

Φ ΦΦΦΦ 9 9 9 ΦΦΦΦ Φ ΦΦΦ ΦΦΦ «ΦΦΦΦ Φ Φ «·» 9 φφ φ φφ φφ

Testy s lidským krvetvorným růstovým faktorem z pupeční šňůry.

Buňky kostní dřeně se tradičně používají pro testy aktivity in vitro stimulujícího faktoru krvetvorných kolonií (CSF). Avšak lidská kostní dřeň není vždy dostupná a mezi dárci existuje značná variabilita. Krev z pupeční šňůry je srovnatelná s kostní dření jako zdroj krvetvorných kmenových buněk a rodičovských buněk (Broxmeyer aj., PNAS 89: 3252-3258 (1992), Mayani aj., Blood 81: 3252-3258 (1993)). Na rozdíl od kostní dřeně krev z pupeční šňůry je snáze dostupná na pravidelné základně. Existuje rovněž možnost snížit variabilitu testů spojením buněk čerstvě získaných od více dárců, aby se vytvořila banka buněk skladovaných pro tyto účely za mrazu. Modifikací podmínek kultivace a nebo analýzou specifických značkovačů linií, by mělo být možné testovat specificky aktivitu kolonií tvořit impulsy (CFU-E).

Metody

Z krve pupeční šňůry se izolují mononukleární buňky (MNC) během 24 hodin po odebrání pomocí gradientu se standardní hustotou (1.077 g/ml Histopaque). MNC z krve pupeční šňůry se dále obohatí kmenovými a rodičovskými buňkami řadou postupů, včetně imunomagnetieké selekce CD34- a CD34a buněk, rýžováním SBA- a CD34a frakcí pomocí pokrytých baněk od Applied Immune Science (Santa Clara, CA) a selekcí CD34a pomocí avidinové kolony CellPro (Bothell, WA). Jak čerstvě izolované, tak skladované za mrazu obohacené frakce CD34a buněk se použijí pro testy. Zdvojené kultury pro každé sériové zředění vzorku (koncentrace jsou v rozmezí od 1 pmol do 1204 pmol) se připraví s 1 χ 10⁴ buněk v 1 ml media obsahujícím 0.9% methylcelulozy bez dalších růstových faktorů (Methocult H4230 od Stem Cell Technologies, Vancouver, BC.). Po 7-9 denní kultivaci se spočítají kolonie obsahující víc než 30 buněk.

Transfektované buněčné linie

Buněčné linie, jako BHK nebo myší pro B buněčná linie Baf/3, se mohou transfektovat s receptorem stimulujícího faktoru kolonií, jako je receptor lidského EPO, který linie nemají. Tyto transfektované buněčné linie se mohou použít stanovení proliferační aktivity anebo vázání receptoru.

Příklad 1 • ·· · ♦* • · w « _a • * · · · · · «·«· • ·!»« » « · ···· « ·«· ··· • · · · β · » ··· « ·» · a· ««

Geny kódující sekvenci permutovaných EPO ligandů se mohou konstruovat kterýmkoliv zde popsaným způsobem nebo jinou rekombinantní metodou známou odborníkům. Pro účely tohoto příkladu je místo permutace mezi zbytky EPO 131(Arg) a 132(Thr). To je místo, které je nejnáchylnější proteolytickému štěpení, a tím ukazuje vystavený povrch s relativně vysokým stupněm ohebnosti.

V tomto příkladu se vytvoří nový N-konec a C-konec bez spojovníku spojujícího původní konce. To se udělá, jak se popisuje v metodě Π, ve 2 krocích PCR a spojením tupých konců.

V prvém kroku se s použitím vektoru, který obsahuje sekvenci DNA SEQ ID NO: 120 jako vzor a priméry nový start a tupý start), vytvoří fragment DNA, který kóduje nový Cterminál. Tento fragment je označen start fragmentu. Sekvence podtržená v novém startovacím priméru je restrikční místo Ncol.

Nový startovací primér = gcgcgcCCATGGACAATCACTGCTGAC SEQ ID NO: 131.

Tupý startovací primér = TCTGTCCCCTGTCCT SEQ ID NO: 132. V druhém kroku se s použitím vektoru, který obsahuje sekvenci DNA SEQ ID NO: 120 jako vzor a priméry nový stop a tupý stop), vytvoří fragment DNA, který kóduje nový C-terminál. Tento fragment je označen stop fragmentu. Sekvence podtržená v novém startovacím priméru je restrikční místo Hindlll.

Nový stop primér = gcgcgcAAGCTTATTATCGGAGTGGAGCAGAGGCCGCATC SEQ ID NO: 133.

Tupý koncový primér = GCCCCACCACGCCTCATCTGT SEQ ID NO: 134.

V spojovacím kroku se oba fragmenty vytvořené ve dvou PCR reakcích se spojí, stráví se s Ncol a Hindlll a klonují se do vektoru exprese. Klony se prohlédnou restrikční analýzou a DNA se sekvenuje, aby se potvrdila správnost sekvence. Mohou se navrhnout priméry, aby se vytvořila restrikční místa jiná než Ncol a Hindlll a aby se klonovala do jiných vektorů exprese.

Příklad 2

Sekvence permutovaných agonistů EPO receptoru podle vynálezu lze testovat na bioaktivitu zde popsanými způsoby nebo jinými metodami známými odborníkům.

Další techniky pro konstrukci variantních genů, expresi rekombinantního proteinu, čistém proteinu, charakterizaci proteinu, stanovení biologické aktivity lze nalézt v WO 94/12639 a WO 94/12638, fuzní proteiny, které se uvádějí vWO 95/21197 a 95/21254, G-CSF agonisty receptoru, které se popisují v WO 97/12977, c-mpl agonisty receptoru, které se popisují v WO 97/12978, IL-3 agonisty receptoru, které se popisují vWO 97/12979 a multifunkční agonisty receptoru, které se popisují vWO 97/12985, mohou podávat spolu spolypeptidy tohoto vynálezu. Jak se zde používá, IL-3 varianty se týká variantů IL-3, které se uvádějí vWO 94/12639, WO 94/12638, WO 95/21197, WO 95/20977 a 95/21254, které jsou zahrnuty do popisu tímto odkazem.

Všechny reference, patenty nebo přihlášky zde citované jsou sem zařazeny odkazem ve své úplnosti, jako by zde byly napsány.

Různé jiné příklady budou zřejmé odborníkovi po přečtení tohoto popisu bez toho, že by se odchýlil od ducha a rozsahu vynálezu. Zamýšlí se, aby všechny takové jiné příklady byly zahrnuty rozsahu připojených nároků.

Seznam sekvencí

Popis sekvence SEQ ID NO: 1

i) Charakteristika řetězce:

A) Délka: 133 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 1

Asn	lle	Thr	Thr	Gly	Cys	Ala	Glu
1				5
Thr	Val	Pro	Asp 20	Thr	Lys	Val	Asn
Val	Gly	Gin 35	Gin	Ala	Val	Glu	Val 40
Glu	Ala 50	Val	Leu	Arg	Gly	Gin 55	Ala
Trp 65	Glu	Pro	Leu	Gin	Leu 70	His	Val
Ser	Leu	Thr	Thr	Leu 85	Leu	Arg	Ala
Ser	Pro	Pro	Asp 100	Ala	Ala	Ser	Ala
Asp	Thr	Phe 115	Arg	Lys	Leu	Phe	Arg 120
Lys	Leu 130	Lys	Leu	Tyr	Thr	Gly 135	Glu
Gly 145	Gly	Ser	Ala	Pro	Pro 150	Arg	Leu
Arg	Tyr	Leu	LeU	Glu 165	Ala	Lys	Glu

His	Cys 10	Ser	Leu	Asn	Glu	Asn 15	lle
Phe 25	Tyr	Ala	Trp	Lys	Arg 30	Met	Glu
Trp	Gin	Gly	Leu	Ala 45	Leu	Leu	Ser
Leu	Leu	Val	Asn 60	Ser	Ser	Gin	Pro
Asp	Lys	Ala 75	Val	Ser	Gly	Leu	Arg 80
Leu	Gly 90	Ala	Gin	Lys	Glu	Ala 95	lle
Ala 105	Pro	Leu	Arg	Thr	lle 110	Thr	Ala
Val	Tyr	Ser	Asn	Phe 125	Leu	Arg	Gly
Ala	Cys	Arg	Thr 140	Gly	Asp	Arg	Gly
lle Ala	Cys Glu 170	Asp 155	Ser	Arg	Val	Leu	Glu 160

Popis sekvence SEQ ID NO : 2

i) Charakteristika řetězce:

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární

ii) Typ molekuly: žádný	• · 44 4 44 ·» **· »44 4 · 4 4 •»4 4444 4 44 4 • 4444 44 4 4444 4 444 444 4 4 4 4 4 44 ·*· · 44 4 44 4«
xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 2

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

1

5

10

15

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

20

25

30

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

35

40

45

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

50

55

60

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

65

70

75

80

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

85

90

95

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

100

105

110

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

115

120

125

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

145

150

155

160

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

165 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 3

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný

xi) Popis řetězce:

SEQ ID NO: 3

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

1

5

10

15

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

20

25

30

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

35

40

45

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

50

55

60

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

65

70

75

80

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

85

90

95

♦ ♦ · ·· ··

Pro	Asp	Ala	Ala 100	Ser	Ala	Ala	Pro
Phe	Arg	Lys 115	Leu	Phe	Arg	Val	Tyr 120
Lys	Leu 130	Tyr	Thr	Gly	Glu	Ala 135	Cys
Ser 145	Ala	Pro	Pro	Arg	Leu 150	Ile	Cys
Leu	Leu	Glu	Ala 165	Lys	Glu	Ala Glu 170

		• · · · · • ·	* 9 •	• ·	» 999	··«
Leu	Arg	Thr·Ile	Thr	Al*a	As*]3	Ttfr
105				110
Ser	Asn	Phe Leu	Arg	Gly	Lys	Leu
			125
Arg	Thr	Gly Asp	Arg	Gly	Gly	Gly
		140
Asp	Ser	Arg Val	Leu	Glu	Arg	Tyr
		155				160
Asn	Ile

Popis sekvence SEQ ID NO : 4

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 4

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro

1

5

10

15

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

20

25

30

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

35

40

45

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

50

55

60

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

65

70

75

80

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

♦Pro

Pro

85

90

95

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

100

105

110

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

115

120

125

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

130

135

140

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

145

150

155

160

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 5

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný ♦ 4 · 4 4 4 4 4 * 444 4444

4444 4 44 4

444· 4 4 4 4444 « ··· 444

4 4 4 4 4

4 44 4 444« xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 5

Gly Cys Ala 1

Glu

His 5

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu Asn 10

lle

Thr

Val

Pro 15

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

20

25

30

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

35

40

45

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

50

55

60

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

65

70

75

80

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

85

90

95

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

100

105

110

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

.Leu

Lys

Leu

115

120

125

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

130

135

140

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

145

150

155

160

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 6

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 6

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn lle Thr Val Pro Asp Thr 15 10 15 ♦ 00 0 00 00 « · 0 0 0000

0 0 0 0 0 00 0

0000 00 0 0000 0 000 000 0 0 0 0 0 0

Lys

Val

Asn

Phe 20

Tyr Ala

Trp

Lys

Arg 25

Met

000 Glu

Val

00 Gly

Gin 30

0 0 Gin

0 0 Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

35

40

45

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

50

55

60

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

65

70

75

80

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

85

90

95

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

100

105

110

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

115

120

125

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

130

135

140

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

145

150

155

160

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 7

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 7

Ala 1

Glu

His

Cys

Ser Leu Asn Glu Asn 5

Ile 10

Thr

Val

Pro

Asp

Thr 15

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

20

25

30

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

35

40

45

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

50

55

60

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

65

70

75

80

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

85

90

95

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

100

105

110

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

115

120

125

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

130

135

140

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

145 150

Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys

165 170

• · • · • · ·· • » ····

99

9 9 9

9 9 9

999 999 ***1*60

Popis sekvence SEQ ID NO : 8

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 8

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

1

5

10

15

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

20

25

30

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

35

40

45

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

50

55

60

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

65

70

75

80

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

85

90

95

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

100

105

110

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

115

120

125

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

130

135

140

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

145

150

155

160

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 9

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 9

His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn 15 10 15

Phe

Tyr Ala Trp 20

Lys

Arg

Met

Glu

Val 25

Gly

Gin

4444 *Gl’n

4 4 Al’á

• 444« • 4 Val 30

4 444 Gl’ú*

• 44 vái

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

35

40

45

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

50

55

60

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

65

vo

75

80

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

85

90

95

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

100

105

110

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

115

120

125

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

130

135

140

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

145

150

155

160

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 10

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 10

Cys 1

Ser

Leu

Asn

Glu 5

Asn

Ile

Thr

Val

Pro Asp 10

Thr

Lys

Val

Asn 15

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

20

25

30

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

35

40

45

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

50

55

60

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

65

70

75

80

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

85

90

95

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

100

105

110

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

115

120

125

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

130

135

140

• to to · to to · · · · *··· · · ····· · ··· ···

Cys	Asp	Ser	Arg	Val	Leu	Glu	Arg	Tyr	Leu	Leů* GÍu Ala Lýs Glu Ala
145					150					155 160
Glu	Asn	lle	Thr	Thr	Gly	Cys	Ala	Glu	His
				165					170

Popis sekvence SEQ ID NO : 11

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 11

Ser Leu Asn Glu Asn lle Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr

1

5

10

15

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

20

25

30

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

35

40

45

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

50

55

60

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

65

70

75

80

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

85

90

95

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

100

105

110

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

115

120

125

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

130

135

140

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

145

150

155

160

Asn

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 12

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 12

Leu Asn

Glu

Asn

lle Thr Val

Pro

Asp

Thr

• 4 Ly*s*

• • • 4 ···· *Va’l

44 • • • 4 AsTl

• • · • 4 · 'ptfe

44 • 4 • · 4 44 4 Týt

4 4 4 4 4 4 444 A’lá

1

5

10

15

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

20

25

30

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

35

40

45

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

50

55

60

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

65

70

75

80

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

85

90

95

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

100

105

110

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

115

120

125

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

130

135

140

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

145

150

155

160

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 13

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 13

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

1

5

10

15

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

20

25

30

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

35

40

45

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

50

55

60

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

65

70

75

80

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

85

90

95

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

100

105

110

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

115

120

125

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

♦ · ·· · φ» *· *·· · · * φ··· φ · ♦ φφφφ φφφφ • ···· φ φ φ ·Φ«Φ φ *φ· φφφ

130 Arg Val

Leu

Glu Arg Tyr

135 Leu

Leu

Glu Ala

ΦΦΦ Lys

1*40 ” Glu Ala

Φ φφφφ Glu Asn Ile

145

150

155

160

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

165 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 14

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 14

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

1

5

10

15

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

20

25

30

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

35

40

45

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

50

55

60

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

65

70

75

80

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

85

90

95

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

100

105

110

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

115

120

125

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

cys

Asp

Ser

Arg

130

135

140

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

145

150

155

160

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 15

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární

4 44 · 44 »4 • 4 4 4 4 4 · 4 ·

444 4 444 4 44 4 • >4·· 4 4 4 4444 4 444 444

4 4 4 4 4 4

4 44 4 44 4» ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 15

Asn

lle

Thr

Val

Pro Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

1

5

10

15

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

20

25

30

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

35

40

45

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

50

55

60

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

65

70

75

80

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

85

90

95

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

100

105

110

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

115

120

125

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

130

135

140

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

145

150

155

160

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 16

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 16 lle Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Třp Lys Arg Met

1

5

10

15

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

20

25

30

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

35

40

45

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

50

55

60

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

65

70

75

80

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

85

90

95

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

100

• 105*

• · 9 9 9 0 00 0 0 0 ©9 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 • 0 0 0

9 0 » 0 0 0

0 9 0 0 0 0 0 9 •iiv

9 • • •

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

130

135

140

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

145

150

155

160

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 17

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 17

Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val

1

5

10

15

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

20

25

30

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

35

40

45

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

50

55

60

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

65

70

75

80

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

85

90

95

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

100

105

110

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

130

135

140

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

145

150

155

160

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 18

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina e · *

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 18

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly

1

5

10

15

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

20

25

30

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

35

40

45

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

50

55

60

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

65

70

75

80

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

85

90

95

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

100

105

110

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

130

135

140

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

145

150

155

160

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 19

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 19

Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gin

1

5

10

15

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

20

25

30

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

35

40

45

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

50

55

60

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

65

70

75

80

to · ·· · toto ·· ··· to·· ···· • · · ···· · · a · • toto·· · · to toto·· to ··· ··· to · · »

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg*

Ťhř

né*

Thř

Alá*Aé£

Thr

Phe

85

90

95

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly Lys

Leu

Lys

100

105

110

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly Gly

Gly

Ser

115

120

125

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu Arg

Tyr

Leu

130

135

140

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys Ala

Glu

His

145

150

155

160

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 20

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 20

Arg 1

Met

Glu

Val

Gly 5

Gin

Gin Ala

Val

Glu 10

Val

Trp

Gin

Gly

Leu 15

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

20

25

30

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

35

40

45

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

50

55

60

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

65

70

75

80

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

85

90

95

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

100

105

110

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

115

120

125

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

130

135

140

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

145

150

155

160

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

165

170

* * ·* · ·· ·· • · · · · · «··· ··· ···· ·»··

Popis sekvence SEQ ID NO : 21

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 21

Met 1	Glu	Val	Gly	Gin 5	Gin	Ala	Val
Leu	Ser	Glu	Ala 20	Val	Leu	Arg	Gly
Gin	Pro	Trp 35	Glu	Pro	Leu	Gin	Leu 40
Leu	Arg 50	Ser	Leu	Thr	Thr	Leu 55	Leu
Ala 65	Ile	Ser	Pro	Pro	Asp 70	Ala	Ala
Thr	Ala	Asp	Thr	Phe 85	Arg	Lys	Leu
Arg	Gly	Lys	Leu 100	Lys	Leu	Tyr	Thr
Arg	Gly	Gly 115	Gly	Ser	Ala	Pro	Pro 120
Leu	Glu 130	Arg	Tyr	Leu	Leu	Glu 135	Ala
Gly 145	Cys	Ala	Glu	His	Cys 150	Ser	Leu
Thr	Lys	Val	Asn	Phe 165	Tyr	Ala	Trp

Glu	Val 10	Trp	Gin	Gly	Leu	Ala 15	Leu
Gin 25	Ala	Leu	Leu	Val	Asn 30	Ser	Ser
His	Val	Asp	Lys	Ala 45	Val	Ser	Gly
Arg	Ala	Leu	Gly 60	Ala	Gin	Lys	Glu
Ser	Ala	Ala 75	Pro	Leu	Arg	Thr	Ile 80
Phe	Arg 90	Val	Tyr	Ser	Asn	Phe 95	Leu
Gly 105	Glu	Ala	Cys	Arg	Thr 110	Gly	Asp
Arg	Leu	Ile	Cys	Asp 125	Ser	Arg	Val
Lys	Glu	Ala	Glu 140	Asn	Ile	Thr	Thr
Asn	Glu	Asn 155	Ile	Thr	Val	Pro	Asp 160

Lys Arg 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 22

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 22

Glu Val Gly Gin Gin Ala Val Glu Val Trp Gin Gly Leu Ala Leu Leu 15 10 15

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gin 20 25 30

Pro

Trp Glu 35

Pro

Leu

Gin

Leu

His 40

• Val’

• « · • · · · • • · Asp

• 9 9 9 9 9 9 9 9 Lys

• • · 9 · · 9 99 9 9 • · - Ala

·· ♦ • • · · • · Val 45

• · · • · · 9 9 9 9 9 9 9 9 Ser

Gly

Leu

Arg

Ser Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

50

55

60

Ile

Ser Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

65

70

75

80

Ala

Asp Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

85

90

95

Gly

Lys Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

100

105

110

Gly

Gly Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

115

120

125

Glu

Arg Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

130

135

140

Cys

Ala Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

145

150

155

160

Lys

Val Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 23

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 23

Val Gly Gin Gin Ala Val Glu Val Trp Gin Gly Leu Ala Leu Leu Ser

1

5

10

15

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

20

25

30

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

35

40

45

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

50

55

60

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

65

70

75

80

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

85

90

95

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

100

105

110

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

115

120

125

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

130

135

140

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

145

150

155

160

» · ·« · «β · ti ·« # · · · ···· ··· · · · · · · · · * ···· · · · ···· · ··· ··· • β · · · · ·

Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met**Glu

165 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 24

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 24

Gin Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu

1

5

10

15

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

20

25

30

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

35

40

45

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

50

55

60

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

65

70

75

80

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

85

90

95

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

100

105

110

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

115

120

125

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

130

135

140

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

145

150

155

160

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 25

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 25

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His 15 10 15

Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg ·· ft

20
Ala	Leu	Gly 35	Ala	Gin	Lys	Glu	Ala 40
Ala	Ala 50	Pro	Leu	Arg	Thr	Ile 55	Thr
Arg 65	Val	Tyr	Ser	Asn	Phe 70	Leu	Arg
Glu	Ala	Cys	Arg	Thr 85	Gly	Asp	Arg
Leu	Ile	Cys	Asp 100	Ser	Arg	Val	Leu
Glu	Ala	Glu 115	Asn	Ile	Thr	Thr	Gly 120
Glu	Asn 130	Ile	Thr	Val	Pro	Asp 135	Thr
Arg 145	Met	Glu	Val	Gly	Gin 150	Gin	Ala
Leu	Leu	Ser	Glu	Ala 165	Val	Leu	Arg

• 25 *	ft • ft • ftftft • • ·	ft ft • · • ft ·	ft · • ftft • · · · · • ft •	ft • • ftft • ·	• · · ftft · • ftftft • · • · 30
Ile	Ser	Pro	Pro	Asp 45	Ala	Ala	Ser
Ala	Asp	Thr	Phe 60	Arg	Lys	Leu	Phe
Gly	Lys	Leu 75	Lys	Leu	Tyr	Thr	Gly 80
Gly	Gly 90	Gly	Ser	Ala	Pro	Pro 95	Arg
Glu 105	Arg	Tyr	Leu	Leu	Glu 110	Ala	Lys
Cys	Ala	Glu	His	Cys 125	Ser	Leu	Asn
Lys	Val	Asn	Phe 140	Tyr	Ala	Trp	Lys
Val Gly	Glu Gin 170	Val 155	Trp	Gin	Gly	Leu	Ala 160

Popis sekvence SEQ ID NO : 26

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 26

Leu Leu Val Asn Ser Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val

1

5

10

15

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

20

25

30

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

35

40

45

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

50

55

60

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

65

70

75

80

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

85

90

95

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

100

105

110

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

115

120

125

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

130

135

140

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

145

150

155

160

• to to »· · · · 4

Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin Ala

165 170 • to to • to

Popis sekvence SEQ ID NO : 27

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 27

Leu Val Asn 1

Ser

Ser 5

Gin

Pro

Trp Glu

Pro 10

Leu Gin Leu His

Val 15

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

20

25

30

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

35

40

45

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

50

55

60

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

65

70

75

80

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

85

90

95

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

100

105

110

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

115

120

125

lle

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

130

135

140

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

145

150

155

160

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 28

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 28

Val Asn Ser Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys 1 5 .10 15 ♦ φφ · φφ φφ φ φφφ φφφφ • φ φφφφ ΦΦΦ·

Ala

Val

Ser

Gly 20

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr 25

Φ Φ Thr

Leu

Φ · Leu

Φ Φ φ Φ Arg Ala 30

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser Ala

Ala

Pro

35

40

45

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe Arg

Val

Tyr

50

55

60

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly Glu

Ala

Cys

65

70

75

80

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg Leu

Ile

Cys

85

90

95

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys Glu

Ala

Glu

100

105

110

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn Glu

Asn

Ile

115

120

125

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys Arg

Met

Glu

130

135

140

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala Leu

Leu

Ser

145

150

155

160

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

165 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 29

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 29

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

1

5

10

15

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

20

25

30

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

35

40

45

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

50

55

60

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

65

70

75

80

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

85

90

95

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

100

105

110

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

115

120

125

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

130

135

140

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

145 150 ”* ’ 155” * ” ” 160

Ala Val Leu Arg Gly Gin Ala Leu Leu Val

165 170

Popis sekvence SEQ ID NO : 30

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 30

Ser 1

Ser

Gin

Pro

Trp 5

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu 10

His

Val

Asp

Lys

Ala 15

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

20

25

30

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

35

40

45

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

50

55

60

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

65

70

75

80

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

85

90

95

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

100

105

110

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

115

120

125

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

•Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

130

135

140

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

145

150

155

160

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 31

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 31

Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser 15 10 15

0

Gly	Leu	Arg	Ser 20	Leu	Thr	Thr	Leu
Glu	Ala	Ile 35	Ser	Pro	Pro	Asp	Ala 40
Ile	Thr 50	Ala	Asp	Thr	Phe	Arg 55	Lys
Leu 65	Arg	Gly	Lys	Leu	Lys 70	Leu	Tyr
Asp	Arg	Gly	Gly	Gly 85	Ser	Ala	Pro
Val	Leu	Glu	Arg 100	Tyr	Leu	Leu	Glu
Thr	Gly	Cys 115	Ala	Glu	His	Cys	Ser 120
Asp	Thr 130	Lys	Val	Asn	Phe	Tyr 135	Ala
Gin 145	Ala	Val	Glu	Val	Trp 150	Gin	Gly
Leu	Arg	Gly	Gin	Ala 165	Leu	Leu	Val

• Leu	• 0 ·	0 •	0 · 0 · 0	• •	0 · 0 • 0 0	Gin	Lys
• • 0 Arg	0 4 · Ala	0 · 0 Leu	0 0 Gly	0 0 • 0 Ala
25 Ala	Ser	Ala	Ala	Pro	30 Leu	Arg	Thr
Leu	Phe	Arg	Val	45 Tyr	Ser	Asn	Phe
Thr	Gly	Glu	60 Ala	Cys	Arg	Thr	Gly
Pro	Arg	75 Leu	Ile	Cys	Asp	Ser	80 Arg
Ala	90 Lys	Glu	Ala	Glu	Asn	95 Ile	Thr
105 Leu	Asn	Glu	Asn	Ile	110 Thr	Val	Pro
Trp	Lys	Arg	Met	125 Glu	Val	Gly	Gin
Leu	Ala	Leu	140 Leu	Ser	Glu	Ala	Val
Asn	Ser 170	155					160

Popis sekvence SEQ ID NO : 32

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO : 32

Gin 1	Pro	Trp	Glu	Pro 5	Leu	Gin	Leu
Leu	Arg	Ser	Leu 20	Thr	Thr	Leu	Leu
Ala	Ile	Ser 35	Pro	Pro	Asp	Ala	Ala 40
Thr	Ala 50	Asp	Thr	Phe	Arg	Lys 55	Leu
Arg 65	Gly	Lys	Leu	Lys	Leu 70	Tyr	Thr
Arg	Gly	Gly	Gly	Ser 85	Ala	Pro	Pro
Leu	Glu	Arg	Tyr 100	Leu	Leu	Glu	Ala
Gly	Cys	Ala 115	Glu	His	Cys	Ser	Leu 120
Thr	Lys 130	Val	Asn	Phe	Tyr	Ala 135	Trp

His	Val 10	Asp	Lys	Ala	Val	Ser 15	Gly
Arg 25	Ala	Leu	Gly	Ala	Gin 30	Lys	Glu
Ser	Ala	Ala	Pro	Leu 45	Arg	Thr	Ile
Phe	Arg	Val	Tyr 60	Ser	Asn	Phe	Leu
Gly	Glu	Ala 75	Cys	Arg	Thr	Gly	Asp 80
Arg	Leu 90	Ile	Cys	Asp	Ser	Arg 95	Val
Lys 105	Glu	Ala	Glu	Asn	Ile 110	Thr	Thr
Asn	Glu	Asn	Ile	Thr 125	Val	Pro	Asp
Lys	Arg	Met	Glu 140	Val	Gly	Gin	Gin

Φ ♦ φ» φ «φ φφ φφφ φφφ φφφφ φφφ φφφφ φφφφ — — w w « v V W > » » W W W » φφφφ φ φ

Ala	Val	Glu	Val	Trp	Gin	Gly	Leu	Ala*	Φ Φ Leu	Leu Ser Glu Ala Val	Leu
145					150					155	160
Arg	Gly	Gin	Ala	Leu	Leu	Val	Asn	Ser	Ser
				165					170

Popis sekvence SEQ ID NO : 33

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 33

Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu

1

5

10

15

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

20

25

30

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

35

40

45

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

50

55

60

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

65

70

75

80

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

85

90

95

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

100

105

110

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

115

120

125

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

130

135

140

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

145

150

155

160

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 34

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 34

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

·· · · * 4444 4 444 444 • · · 4 4 4

20

. 25 ’

4 4

• 4 4

4 4 4 4 30

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

35

40

45

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

50

55

60

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

65

70

75

80

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

85

90

95

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

100

105

110

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

115

120

125

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

130

135

140

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

145

150

155

160

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 35

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 35

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

1

5

10

15

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

20

25

30

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

35

40

45

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

50

55

60

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

65

70

75

80

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

85

90

95

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

100

105

110

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

115

120

125

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

130

135

140

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Pro Trp

170

145 150

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gin

165 fl ·

155 ·· ·· • · · · • · · · »·· ··· « · « · · ·

160

Popis sekvence SEQ ID NO : 36

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 36

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

1

5

10

15

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

20

25

30

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

35

40

45

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

50

55

60

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

65

70

75

80

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

85

90

95

Leu

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

100

105

110

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

115

120

125

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

130

135

140

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

145

150

155

160

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 37

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 37 • · »· · *· ·· ·· · 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9

Arg Ala Leu Gly Ala Gin Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala

1

5

10

15

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

20

25

30

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

35

40

45

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

50

55

60

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

65

70

75

80

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

85

90

95

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

100

105

110

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

115

120

125

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

130

135

140

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

145

150

155

160

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 38

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 38

Ala 1

Leu

Gly

Ala

Gin 5

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser 10

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala 15

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

20

25

30

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

35

40

45

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

50

55

60

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

65

70

75

80

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

85

90

95

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

100

105

110

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

115

120

125

• · ·· · ·* ·· ··· ··« «·*

Leu

Leu 130

Ser

Glu

Ala

Val

Leu 135

Arg

Gly

• · Gin

• · Ala

• Leu 140

·· Leu

• · Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

145

150

155

160

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO: 39

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 39

Leu 1

Gly

Ala

Gin Lys 5

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro 10

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser 15

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr'

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

20

25

30

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

35

40

45

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

50

55

60

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

65

70

75

80

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

85

90

95

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

100

105

110

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

115

120

125

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

130

135

140

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

145

150

155

160

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 40

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární • · 99 9

999 999

9 9 9 9 9 9

9999 99 9 9999 9 ii) Typ molekuly: žádný .......

xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 40

44 * 4 4 ·

4 4 4

999 99 9

9

99

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

1

5

10

15

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

20

25

30

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

35

40

45

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

50

55

60

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

65

70

75

80

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

85

90

95

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

100

105

110

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

115

120

125

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

130

135

140

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

145

150

155

160

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 41

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 41

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

1

5

10

15

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

20

25

30

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

35

40

45

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

50

55

60

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

65

70

75

80

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

85

90

95

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

• ·· · ·· ·· • · · · · · · · • · ···· ···· ···· · · · ···· · ··· ···

100

105*

• ·

•

• ·

•

4 ·· 110

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

115

120

125

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

130

135

140

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

145

150

155

160

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 42

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 42

Gin Lys Glu Ala lle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu

1

5

10

15

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

35

40

45

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

50

55

60

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

65

70

75

80

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

85

90

95

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

100

105

110

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

115

120

125

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

130

135

140

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

145

150

155

160

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 43

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární • ·

0*9

O · · · 0 »0 • · · · · · 9

0 0 9 0·«· ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 43 • · · 0 * ·· 9 99 09

Lys	Glu	Ala	Ile	Ser	Pro	Pro	Asp
1				5
Thr	Ile	Thr	Ala 20	Asp	Thr	Phe	Arg
Phe	Leu	Arg 35	Gly	Lys	Leu	Lys	Leu 40
Gly	Asp 50	Arg	Gly	Gly	Gly	Ser 55	Ala
Arg 65	Val	Leu	Glu	Arg	Tyr 70	Leu	Leu
Thr	Thr	Gly	Cys	Ala 85	Glu	His	Cys
Pro	Asp	Thr	Lys 100	Val	Asn	Phe	Tyr
Gin	Gin	Ala 115	Val	Glu	Val	Trp	Gin 120
Val	Leu 130	Arg	Gly	Gin	Ala	Leu 135	Leu
Pro 145	Leu	Gin	Leu	His	Val 150	Asp	Lys
Thr	Thr	Leu	Leu	Arg 165	Ala	Leu	Gly

Ala	Ala 10	Ser	Ala	Ala	Pro	Leu 15	Arg
Lys 25	Leu	Phe	Arg	Val	Tyr 30	Ser	Asn
Tyr	Thr	Gly	Glu	Ala 45	Cys	Arg	Thr
Pro	Pro	Arg	Leu 60	Ile	Cys	Asp	Ser
Glu	Ala	Lys 75	Glu	Ala	Glu	Asn	Ile 80
Ser	Leu 90	Asn	Glu	Asn	Ile	Thr 95	Val
Ala 105	Trp	Lys	Arg	Met	Glu 110	Val	Gly
Gly	Leu	Ala	Leu	Leu 125	Ser	Glu	Ala
Val	Asn	Ser	Ser 140	Gin	Pro	Trp	Glu
Ala Ala	Val Gin 170	Ser 155	Gly	Leu	Arg	Ser	Leu 160

Popis sekvence SEQ ID NO : 44

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 44

Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr

1

5

10

15

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

20

25

30

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

35

40

45

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

50

55

60

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

65

70

75

80

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

85

90

95

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

100

• 105'

fl • • to • flflfl • ·

• • • to · to • to

to • · ··· • ···· • · to

• fl • • • flfl flfl

•fl flfl fl • to · • flflfl • · • fl 110

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

115

120

125

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

130

135

140

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

145

150

155

160

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 45

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 45

Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile

1

5

10

15

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

20

25

30

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

35

40

45

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

50

55

60

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

65

70

75

80

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

85

90

95

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

100

105

110

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

115

120

125

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

130

135

140

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

145

150

155

160

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 46

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina • · ·· · ·· ·· • · · ··· · · · · • · · ···· ····

C) Řetězec: jednoduchý D) Topologie: lineární

• • · ·

• · •

• • ·

• •

• « · · ·

•

ii) Typ molekuly: žádný

xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 46

lle

Ser Pro Pro Asp Ala Ala

Ser Ala Ala

Pro

Leu Arg

Thr

lle Thr

1

5

10

15

Ala

Asp Thr Phe Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

20

25

30

Gly

Lys Leu Lys Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

35

40

45

Gly

Gly Gly Ser Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

50

55

60

Glu

Arg Tyr Leu Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

Gly

65

70

75

80

Cys

Ala Glu His Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

85

90

95

Lys

Val Asn Phe Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

100

105

110

Val

Glu Val Trp Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

115

120

125

Gly

Gin Ala Leu Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

130

135

140

Leu

His Val Asp Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

145

150

155

160

Leu

Arg Ala Leu Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 47
A) Délka: 170 aminokyselin B) Typ: aminokyselina C) Řetězec: jednoduchý D) Topologie: lineární
ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO:	: 47
Ser Pro Pro Asp Ala Ala	Ser	Ala	Ala	Pro	Leu	Arg	Thr	lle	Thr	Ala
1 5				10					15
Asp Thr Phe Arg Lys Leu	Phe	Arg	Val	Tyr	Ser	Asn	Phe	Leu	Arg	Gly
20			25					30
Lys Leu Lys Leu Tyr Thr	Gly	Glu	Ala	Cys	Arg	Thr	Gly	Asp	Arg	Gly
35		40					45
Gly Gly Ser Ala Pro Pro	Arg	Leu	lle	Cys	Asp	Ser	Arg	Val	Leu	Glu
50	55					60
Arg Tyr Leu Leu Glu Ala	Lys	Glu	Ala	Glu	Asn	lle	Thr	Thr	Gly	Cys
65 70					75					80

• ·· · ·* ·· • ··· ···· • · · · · · ····

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

•Ť\r

*Val

• · · Pro

* * , ♦ · Asp Thr

Lys

85

90

95

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

100

105

110

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

115

120

125

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

130

135

140

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leů

Leu

145

150

155

160

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 48

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 48

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

1

5

10

15

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

20

25

30

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

35

40

45

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

50

55

60

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

65

70

75

80

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

85

90

95

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

100

105

110

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

115

120

125

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

130

135

140

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

145

150

155

160

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

165

170

I» to • · · • ··· • · · ··· ···· · to ····«

Popis sekvence SEQ ID NO : 49

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 49 ·· · toto

Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr lle Thr Ala Asp Thr

1

5

10

15

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

20

25

30

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

35

40

45

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

50

55

60

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

65

70

75

80

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

85

90

95

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

100

105

110

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

115

120

125

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

130

135

140

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

145

150

155

160

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 50

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 50

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

lle

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

1

5

10

15

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

20

25

30

63

•

• • • ·

• • •

• 9 • · • · ·

• 4 • •

ft ·· 9 9 · • · ·

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

• • · Asp

• Arg

• · • · Gly

• 4 Gly

• · » ·· Gly

Ser

35

40

45

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

50

55

60

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

65

70

75

80

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

85

90

95

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

100

105

110

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

115

120

125

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

130

135

140

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

145

150

155

160

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 51

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 51

Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg

1

5

10

15

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

20

25

30

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

35

40

45

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

50

55

60

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

65

70

75

80

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

85

90

95

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

100

105

110

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

115

120

125

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

130

135

140

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

145

150

155

160

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

··· · · · ···· • « · · · · · · · · # « ···« · · · ···· · ··· ··· • · · · · · ·

Popis sekvence SEQ ID NO : 52

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 52

Ala 1

Ser

Ala Ala

Pro 5

Leu Arg

Thr

Ile Thr Ala 10

Asp

Thr

Phe

Arg 15

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

20

25

30

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

35

40

45

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

50

55

60

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

65

70

75

80

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

85

90

95

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

100

105

110

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

115

120

125

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

130

135

140

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

145

150

155

160

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 53

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 53

Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 15 10 15 • to to toto to

·· · • · ·

• •

• to • · ·

• •

• · • ·

• to

• ·

to

• ·

•

«

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu Lys

Leu Tyr

Thr

20

25

30

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

35

40

45

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

50

55

60

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

65

70

75

80

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

85

90

95

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

100

105

110

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

115

120

125

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

130

135

140

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

145

150

155

160

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO :;	54
A) Délka: 170 aminokyselin
B) Typ: aminokyselina
C) Řetězec: jednoduchý
D) Topologie: lineární
ii) Typ molekuly: žádný
xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 54
Ala Ala Pro Leu Arg	Thr	Ile	Thr	Ala	Asp	Thr	Phe	Arg	Lys	Leu	Phe
1 5					10					15
Arg Val Tyr Ser Asn	Phe	Leu	Arg	Gly	Lys	Leu	Lys	Leu	Tyr	Thr	Gly
20				25					30
Glu Ala Cys Arg Thr	Gly	Asp	Arg	Gly	Gly	Gly	Ser	Ala	Pro	Pro	Arg
35			40					45
Leu Ile Cys Asp Ser	Arg	Val	Leu	Glu	Arg	Tyr	Leu	Leu	Glu	Ala	Lys
50		55					60
Glu Ala Glu Asn Ile	Thr	Thr	Gly	Cys	Ala	Glu	His	Cys	Ser	Leu	Asn
65	70					75					80
Glu Asn Ile Thr Val	Pro	Asp	Thr	Lys	Val	Asn	Phe	Tyr	Ala	Trp	Lys
85					90					95
Arg Met Glu Val Gly	Gin	Gin	Ala	Val	Glu	Val	Trp	Gin	Gly	Leu	Ala
100				105					110
Leu Leu Ser Glu Ala	Val	Leu	Arg	Gly	Gin	Ala	Leu	Leu	Val	Asn	Ser
115			120					125
Ser Gin Pro Trp Glu	Pro	Leu	Gin	Leu	His	Val	Asp	Lys	Ala	Val	Ser

130 135 140 • · ·» · ·· ·· ··· · · · » * * · • · · ♦ · · · 9 9 9 9

9999 99 9 9999 9 999 999

9 9 * «· · · · · ·

Gly	Leu	Arg	Ser	Leu	Thr	Thr	Leu	Leu	Arg	Ala Leu Gly Ala	Gin Lys
145					150					155	160
Glu	Ala	Ile	Ser	Pro	Pro	Asp	Ala	Ala	Ser
				165					170

Popis sekvence SEQ ID NO : 55

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 55

Ala 1

Pro

Leu

Arg

Thr 5

Ile

Thr Ala

Asp

Thr 10

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe 15

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

20

25

30

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

35

40

45

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

50

55

60

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

65

70

75

80

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

85

90

95

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

100

105

110

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

115

120

125

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

130

135

140

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

145

150

155

160

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 56

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 56 · 0· · 00 00 • 00 0 0 0 0 000

000 0 000 0 00 0 • ···· 00 0 0000 0 000 000 • · · 0 0 0 0

000 0 00 · 00 00

Pro 1

Leu

Arg

Thr

Ile 5

Thr

Ala Asp Thr

Phe Arg 10

Lys

Leu

Phe

Arg 15

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

20

25

30

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

35

40

45

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

50

55

60

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

65

70

75

80

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

85

90

95

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

100

105

110

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

115

120

125

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

130

135

140

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

145

150

155

160

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 57

A) Délka: 171 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 57

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

1

5

10

15

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

20

25

30

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

35

40

45

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

50

55

60

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

65

70

75

80

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

85

90

95

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

100

105

110

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

115

120

125

φφ φ φφ φφ φφφ φφφφ φ φφφ φ · φ φ φ φφφφφ φ φφφ φφφ φφφ φ φ φφ · φφ φφ

Trp	Glu 130	Pro	Leu	Gin	Leu	His 135	Val
Ser	Leu	Thr	Thr	Leu	Leu	Arg	Ala
145					150
Ile	Ser	Pro	Pro	Asp	Ala	Ala	Ser

165

Asp	Lys	Ala	Val 140	Ser Gly Leu	Arg
Leu	Gly	Ala	Gin	Ala	Lys	Glu	Ala
		155					160
Ala	Ala	Pro

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 58

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ; aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 58

Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser

1

5

10

15

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

20

25

30

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

35

40

45

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

50

55

60

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

65

70

75

80

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

85

90

95

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

100

105

110

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

115

120

125

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

130

135

140

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

145

150

155

160

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 59

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární

Thr lle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn • · • · ·« ··· ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 59

1

5

10

15

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

20

25

30

Gly

Asp

Arg

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

lle

Cys

Asp

Ser

35

40

45

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

lle

50

55

60

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

lle

Thr

Val

65

70

75

80

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

85

90

95

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

100

105

110

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

115

120

125

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

130

135

140

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

lle

Ser

Pro

145

150

155

160

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

165

170

Popis sekvence SEQ ID NO : 60

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 60

AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATATCAC TGTCCCAGAC 60

ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC 120

TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC 180

TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 240

AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT 300

GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 360

GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 420

GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG 480

AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG AG 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 61

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

9 99 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 v 999 9 99 9 99 99

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 61

ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATATCACTGT CCCAGACACC 60

AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG 120

CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT 180

TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC 240

CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG 300

GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 360

TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG 420

GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 480

GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA AT 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 62

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 62

ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA TCACTGTCCC AGACACCAAA 60

GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG 120

GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC 180

CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 240

ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC 300

TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 360

TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC 420

AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 480

ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TC 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 63

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 63

ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 60

AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 120

CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG 180

CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC 240

ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA 300

GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC 360

AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC ÁGGGGACAGA 420

TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC 480

TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CG 512 *· 9 91 11 · · · 1 9 1

9 9 9 9 9 9 9

9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9

99 9 99 99

Popis sekvence SEQ ID NO : 64

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 64

GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 60 TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG 120 GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG 180 TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT 240 CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT 300 GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT 360 TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA 420 GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 480 TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CG 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 65

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 65

TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 60 TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC 120 CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG 180 GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 240 CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 300 CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 360 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 420 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 480 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GC 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 66

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 66 • ·· to toto to· ·«· 999 · · · · ··· to · to · 9 9 9 9

9999 9 9 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 ·« •toto· ·· · *· toto

GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATATC ACTGTCGCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT 60

GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG 120

CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG 180

CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT 240

CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA 300

CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 360

CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC 420

GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 480

CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GT 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 67

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 67

GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC 60

TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG 120

TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC 180

CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG 240

GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC 300

CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG 360

GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC 420

TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 480

AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CT 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 68

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 68

CACTGCAGCT TGAATGAGAA TATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG 60 AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG 120 GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG 180 CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT 240 CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA 300 ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA 360 AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC 420 CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG 480 AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AA 512 • · ·· · Φ· ·· • · · · · · ···· • · · · · · · · · · · • ···· · · · ···« · ··· ···

Popis sekvence SEQ ID NO : 69

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 69

TGCAGCTTGA ATGAGAATAT CACTGTCCCA GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 60 AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 120 GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG 180 CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG 240 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA 300 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG 360 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC 420 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG 480 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC AC 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 70

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 70

AGCTTGAATG AGAATATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG 60 ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 120 GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG 180 CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA 240 GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 300 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 360 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 420 CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 480 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GC 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 71

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 71 ·· • · · ·· 4

9

TTGAATGAGA ATATCACTGT GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CAGAAGGAAG CCATCTCCCC GCTGACACTT TCCGCAAACT CTGTACACAG GGGAGGCCTG GCCTCATCTG TGACAGCCGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT

CCCAGACACC AAAGTTAATT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG GGTCAACTCT TCCCAGCCGT CCTTCGCAGC CTCACCACTC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTTCCGAGTC TACTCCAATT CAGGACAGGG GACAGATGAG GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GAACACTGCA GC • 9449 99 9 9999 9 949

4 4 4 4 4

944 9 94 9 44

TCTATGCCTG GAAGAGGATG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CTCCACTCCG AACAATCACT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA

120

180

240

300

360

420

480

512

Popis sekvence SEQ ID NO : 72

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 72

AATGAGAATA TCACTGTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG 60

GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 120

CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 180

GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 240

AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT 300

GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG 360

TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 420

TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA 480

TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TG 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 73

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 73

GAGAATATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC 60

GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG 120

GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT 180

AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG 240

GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC 300

ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC 360

ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA 420

TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA 480

CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA AT 512

• 4 4

4 4

Popis sekvence SEQ ID NO : 74

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 74

AATATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 60

CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 120

CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 180

GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 240

GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 300

TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA 360

GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 420

GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 480

CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AG 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 75

A) Délka: 512 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 75

ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 60

CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 120

GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 180

GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC 240

ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC 300

CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG 360

GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG 420

ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG 480

GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA AT 512

Popis sekvence SEQ ID NO : 76

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 76

ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA • · ·» · · • fl · flflfl · • flfl fl··· · fl ···· flfl · ···· « fl • · · > fl

GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT ATC • · · • flflfl • · • fl

120

180

240

300

360

420

480

513

Popis sekvence SEQ ID NO : 77

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 77

GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC

TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG ACT

120

180

240

300

360

420

480

513

Popis sekvence SEQ ID NO : 78

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 78

CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT

AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG GTC

120

180

240

300

360

420

480

513 ·· • ·

Popis sekvence SEQ ID NO : 79

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 79

GACACCAAAG

GTCTGGCAGG

AACTCTTCCC

CGCAGCCTCA

GATGCGGCCT

CGAGTCTACT

ACAGGGGACA

TGGAGAGGTA

ACTGCAGCTT

TTAATTTCTA

GCCTGGCCCT

AGCCGTGGGA

CCACTCTGCT

CAGCTGCTCC

CCAATTTCCT

GATGAGGCGG

CCTCTTGGAG

GAATGAGAAT

TGCCTGGAAG

GCTGTCGGAA

GCCCCTGCAG

TCGGGCTCTG

ACTCCGAACA

CCGGGGAAAG

CGGCTCCCCC

GCCAAGGAGG

AATCACTGTC

AGGATGGAGG

GCTGTCCTGC

CTGCATGTGG

GGAGCCCAGA

ATCACTGCTG

CTGAAGCTGT

CACCACGCCT

CCGAGAATAT

CCA

TCGGGCAGCA

GGGGCCAGGC

ATAAAGCCGT

AGGAAGCCAT

ACACTTTCCG

ACACAGGGGA

CATCTGTGAC

CACGACGGGC

GGCCGTAGAA

CCTGTTGGTC

CAGTGGCCTT

CTCCCCTCCA

CAAACTCTTC

GGCCTGCAGG

AGCCGAGTCC

TGTGCTGAAC

120

180

240

300

360

420

480

513

Popis sekvence SEQ ID NO : 80

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 80

AGGATGGAGG

GCTGTCCTGC

CTGCATGTGG

GGAGCCCAGA

ATCACTGCTG

CTGAAGCTGT

CACCACGCCT

CCGAGAATAT

CCAGACACCA

TCGGGCAGCA

GGGGCCAGGC

ATAAAGCCGT

AGGAAGCCAT

ACACTTTCCG

ACACAGGGGA

CATCTGTGAC

CACGACGGGC

AAGTTAATTT

GGCCGTAGAA

CCTGTTGGTC

CAGTGGCCTT

CTCCCCTCCA

CAAACTCTTC

GGCCTGCAGG

AGCCGAGTCC

TGTGCTGAAC

CTATGCCTGG

GTCTGGCAGG

AACTCTTCCC

CGCAGCCTCA

GATGCGGCCT

CGAGTCTACT

ACAGGGGACA

TGGAGAGGTA

ACTGCAGCTT

AAG

GCCTGGCCCT

AGCCGTGGGA

CCACTCTGCT

CAGCTGCTCC

CCAATTTCCT

GATGAGGCGG

CCTCTTGGAG

GAATGAGAAT

GCTGTCGGAA

GCCCCTGCAG

TCGGGCTCTG

ACTCCGAACA

CCGGGGAAAG

CGGCTCCCCC

GCCAAGGAGG

AATCACTGTC

120

180

240

300

360

420

480

513

Popis sekvence SEQ ID NO : 81

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 80

ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT • ·

GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG 120 CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA 180 GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 240 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 300 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 360 CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 420 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA 480 GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG AGG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 82

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 82

GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 60

CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT 120

GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC 180

CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT 240

GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG 300

CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 360

GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA 420

ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC 480

ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 83

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 83 Popis sekvence SEQ ID NO : 83

GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 60

CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 120

GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 180

AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT 240

GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG 300

TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 360

TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA 420

TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC 480

AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 84

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 84

CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 60 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 120 GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 180 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA 240 GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 300 GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 360 CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 420 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 480 CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 85

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 85

GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 60

GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC 120

ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC 180

CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG 240

GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG 300

ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG 360

GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 420

TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG 480

GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 86

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 86 ··

CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 60 AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC 120 TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC 180 AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG 240 GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA 300 GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT 360 GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 420 TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC 480 CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 87

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 87

TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 60

GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC 120

CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA 180

CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC 240

TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC 300

GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG 360

CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT 420

GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG 480

CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 88

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 88

GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC 60 CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT 120 CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC 180 TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC 240 AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG 300 TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG 360 AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC 420 TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG 480 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 89

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 89

AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG

CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT 60 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA 120 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC 180 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG 240 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC 300 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC 360 CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG 420 GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG 480 GTC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 90

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 90

TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC

CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 60 GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT 120 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 180 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 240 CACGCCTCAT CTGTGACAGC.CGAGTCCTGG 300 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT 360 GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 420 GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 480 AAC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 91

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární • · · · ·

xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 91

TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC 60 CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG 120 GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 180 TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG 240 GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 300 GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA 360 GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG 420 ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 480 GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 92

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 92

CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 60 ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC 120 TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 180 TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC 240 AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 300 ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT 360 TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG 420 GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 480 CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 93

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 93

CCGTGGGAGC

ACTCTGCTTC

GCTGCTCCAC

AATTTCCTCC

TGAGGCGGCG

CCCTGCAGCT

GGGCTCTGGG

TCCGAACAAT

GGGGAAAGCT

GCTCCCCCCA

GCATGTGGAT

AGCCCAGAAG

CACTGCTGAC

GAAGCTGTAC

CCACGCCTCA

AAAGCCGTCA

GAAGCCATCT

ACTTTCCGCA

ACAGGGGAGG

TCTGTGACAG

GTGGCCTTCG

CCCCTCCAGA

AACTCTTCCG

CCTGCAGGAC

CCGAGTCCTG

CAGCCTCACC

TGCGGCCTCA

AGTCTACTCC

AGGGGACAGA

GAGAGGTACC

120

180

240

300 • * ·· · ·· ·· ··· · · · · · · · • · · »··· ···· • ···· · · ♦ ···· · ··· ··· • · · · · · · ··· * ·· · ·· ··

TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA 360

ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG 420

GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 480

CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAG 513

Popis sekvence SEQ ID NO ; 94

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 94

TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT 60

CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT 120

GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT 180

TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA 240

GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 300

TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG 360

AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC 420

GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG 480

GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 95

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 95

GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 60 CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 120 CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 180 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 240 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 300 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA 360 ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 420 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 480 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 96

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina « ·

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 96

• · · · · ····· · ···

CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 60

CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 120

CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 180

GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 240

AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA 300

ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 360

CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 420

CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 480

GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 97

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 97

CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA 60

CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 120

CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC 180

GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 240

CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA 300

ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 360

CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 420

GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 480

GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 98

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 98

GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC 60 CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG 120 GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC 180 TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 240 AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC 300 ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG 360 . i ... · ·

... · ... ·· ··

GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC 420

CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 480

AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 99

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 99

CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA 60 ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA 120 AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC 180 CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG 240 AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT 300 GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC 360 GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG 420 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 480 GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GTC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 100

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 100

GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA 60 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG 120 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC 180 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG 240 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC 300 CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA 360 GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG 420 GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC 480 CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CTG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 101

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina ·· ·

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 101

GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 60 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 120 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 180 CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 240 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA 300 GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA 360 GTČTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC 420 AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT 480 CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GGA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 102

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 102

CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT 60

GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG 120

CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 180

GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA 240

ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC 300

ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC 360

TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC 420

TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 480

AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA GCC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 103

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 103

AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT 60

GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG 120

TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 180

TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA 240

TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC 300

AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG 360

CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT 420 ·· ·· > · · «

CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC «« · • *

TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAG

480

513

Popis sekvence SEQ ID NO : 104

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 104

GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC 60 ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC 120 ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA 180 TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA 240 CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA 300 GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG 360 GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC 420 CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 480 ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 105

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 105

GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 60 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA 120 GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 180 GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 240 CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 300 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 360 CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG 420 CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC 480 ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG GAA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 106

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina ⁸⁸ · · .··.:

• · · · · · ·· ·· • · · · • · · · • ··· ··· • ·

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 106

ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC 60

CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG 120

GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG 180

ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG 240

GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 300

TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG 360

GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG 420

TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT 480

CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 107

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 108

TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC 60

AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG 120

GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA 180

GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT 240

GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 300

TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC 360

CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG 420

GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 480

CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 108

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 108

CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA 60 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC 120 TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC 180 GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG 240 CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT 300 GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG 360 CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG 420 CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT 480

CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCC

513 ·· · • · • · ·· ·· • · · · • · · · ··· ··· • · ·· ··

Popis sekvence SEQ ID NO : 109

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 109

CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC 60 TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC 120 AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG 180 TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG 240 AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC 300 TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG 360 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC 420 CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG 480 GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 110

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 110

GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC 60

CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG 120

ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC 180

TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC 240

ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG 300

AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG 360

GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG 420

CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT 480

CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 111

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 111

• Φ

ΦΦ

GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 60 GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 120 GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG 180 AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT 240 GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 300 AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 360 GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG 420 CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG 480 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GAT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 112

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 112

GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 60

TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG 120

GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 180

GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA 240

GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG 300

ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 360

GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG 420

CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA 480

GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCG 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 113

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 113

TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 60 TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC 120 AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 180 ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT 240 TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG 300 GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 360 CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT 420 GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC 480 CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCC 513 • » · 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9999 99 9 9999 9 999 999 • 9 9 ♦ · · · ··· · ·· 9 99 99

Popis sekvence SEQ ID NO : 114

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 114

GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC 60 AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA 120 TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC 180 TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA 240 ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG 300 GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 360 CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 420 GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 480 AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 115

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 115

GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT 60

TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA 120

GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 180

TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG 240

AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC 300

GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG 360

GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT 420

AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG 480

GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 116

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 116

4 «· · • · 9

44444 « · • ®» 4 • * · • 4·

4 4 4

4 44 4

4 9

4 9

49

9 9 4

4 4 9 • 9·· 994

4

49

CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 60 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 120 GGGGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 180 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA 240 ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 300 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 360 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 420 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 480 GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCT 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 117

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 117

CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 60 CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC 120 GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 180 CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA 240 ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 300 CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 360 GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 420 GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC 480 ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 118

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 118

CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG 60

GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC 120

TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 180

AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC 240

ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG 300

GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC 360

CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 420

AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC 480

TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTC 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 119

A) Délka: 513 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 119

ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA 60 AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC 120 CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG 180 AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT 240 GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC 300 GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG 360 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 420 GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC 480 CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGA 513

Popis sekvence SEQ ID NO : 120

A) Délka: 501 párů bází

B) Typ: nukleová kyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 120

GCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG 60 GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATATCACT 120 GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC 180 GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG 240 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 300 GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC 360 CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA 420 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC 480 TGCAGGACAG GGGACAGATG A 501

Popis sekvence SEQ ID NO : 121

A) Délka: 166 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 121 • « Φ· I ΦΦ ΦΦ • · · · φ I φφφφ

Ϊ· 9 ΦΦΦ· · · 4» Φ φφφφ · · φ φφφ· · φφφ φφφ φ < · · φ φ φ *·· ♦ C* * 99 ΦΦ

Ala

Pro

Pro

Arg

Leu

Ile

Cys

Asp

Ser

Arg

Val

Leu

Glu

Arg

Tyr

Leu

1

5

10

15

Leu

Glu

Ala

Lys

Glu

Ala

Glu

Asn

Ile

Thr

Thr

Gly

Cys

Ala

Glu

His

20

25

30

Cys

Ser

Leu

Asn

Glu

Asn

Ile

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

35

40

45

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

50

55

60

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

65

70

75

80

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

85

90

95

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

100

105

110

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

115

120

125

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

130

135

140

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

145

150

155

160

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

•

165

Popis sekvence SEQ ID NO : 122

A) Délka: 170 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 122

Thr

Val

Pro

Asp

Thr

Lys

Val

Asn

Phe

Tyr

Ala

Trp

Lys

Arg

Met

Glu

1

5

10

15

Val

Gly

Gin

Gin

Ala

Val

Glu

Val

Trp

Gin

Gly

Leu

Ala

Leu

Leu

Ser

20

25

30

Glu

Ala

Val

Leu

Arg

Gly

Gin

Ala

Leu

Leu

Val

Asn

Ser

Ser

Gin

Pro

35

40

45

Trp

Glu

Pro

Leu

Gin

Leu

His

Val

Asp

Lys

Ala

Val

Ser

Gly

Leu

Arg

50

55

60

Ser

Leu

Thr

Thr

Leu

Leu

Arg

Ala

Leu

Gly

Ala

Gin

Lys

Glu

Ala

Ile

65

70

75

80

Ser

Pro

Pro

Asp

Ala

Ala

Ser

Ala

Ala

Pro

Leu

Arg

Thr

Ile

Thr

Ala

85

90

95

Asp

Thr

Phe

Arg

Lys

Leu

Phe

Arg

Val

Tyr

Ser

Asn

Phe

Leu

Arg

Gly

100

105

110

Lys

Leu

Lys

Leu

Tyr

Thr

Gly

Glu

Ala

Cys

Arg

Thr

Gly

Asp

Arg

Gly

115

120

125

Gly	Gly 130	Ser	Ala	Pro	Pro	Arg 135	Leu	lle
Arg 145	Tyr	Leu	Leu	Glu	Ala 150	Lys	Glu	Ala
Ala	Glu	His	Cys	Ser 165	Leu	Asn	Glu	Asn

'i · ·· · 9 · · • 4» * · · · · · · · · · · · · • ···♦·· ·····«> ··· ··· 9 9··· · 9 • 99 ·. 99; · 9 1' 99

Cys Asp	Ser Arg 140	Val Leu	Glu
Glu	Asn	lle	Thr	Thr	Gly	Cys
	155					160
lle
170

Popis sekvence SEQ ID NO : 123

A) Délka: 4 aminokyseliny

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 123

Gly Gly Gly Ser 1

Popis sekvence SEQ ID NO : 124

A) Délka: 8 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 124

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 125

A) Délka: 12 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný ·♦ » ftft • ♦ · ft • · · » « • ftft xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 15 10

Popis sekvence SEQ ID NO : 126

A) Délka: 7 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 126

Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 127

A) Délka: 5 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 127

Glu Phe Gly Asn Met 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 128

A) Délka: 6 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný • 4 4 4

4 4 4 4 xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 128

Glu Phe Gly Gly Asn Met 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 129

A) Délka: 9 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 129

Glu Phe Gly Gly Asn Gly Gly Asn Met 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 130

A) Délka: 7 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 130

Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly 1 5

Popis sekvence SEQ ID NO : 131

A) Délka: 27 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 131 • « * · 4

4 4 4

4 4 4 • 4 4 4 t 444 444

4

4 A 4 • · · • · · • a a * » «> a · t » · « • · · ·

GCGCGCCCAT GGACAATCAC TGCTGAC

Popis sekvence SEQ ID NO : 132

A) Délka: 15 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 132

TCTGTCCCCT GTCCT

Popis sekvence SEQ ID NO : 133

A) Délka: 43 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 133

GCGCGCAAGC TTATTATCGG AGTGGAGCAG CTGAGGCCGC ATC

Popis sekvence SEQ ID NO : 134

A) Délka: 21 aminokyselin

B) Typ: aminokyselina

C) Řetězec: jednoduchý

D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: žádný xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 134

Claims (22)

1. Polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu obsahující modifikovanou sekvenci aminokyselin s následujícím vzorcem:

AlaProProArgLeuIleCysAspSerArgValLeuGluArgTyrLeuLeuGluAlaLys 10 20

GluAlaGluAsnlleThrThrGlyCysAlaGluHisCysSerLeuAsnGluAsnlleThr 30 40

ValProAspThrLysVaLAsnPheTyrAlaTrpLysArgMetGluValGlyGlnGlnAla 50 60

ValGluValTrpGlnGlyLeuAlaLeuLeuSerGluAlaValLeuArgGlyGlnAlaLeu 70 80

LeuValAsnSerSerGlnProTrpGluProLeuGlnLeuHisValAspLysAlaValSer 90 100

GlyLeuArgSerLeuThrThrLeuLeuArgAlaLeuGlyAlaGlnLysGluAlalleSer 110 120

ProProAspAlaAlaSerAlaAlaProLeuArgThrlleThrAlaAspThrPheArgLys 130 140

LeuPhe ArgV alT yrSer AsnPheLeu ArgGlyLysLeuLysLeuT yrThrGlyGlu Ala 150 160

CysArgThrGlyAspArg SEQ ID NO: 121 166 kde případně 1 až 6 aminokyselin od N-konce a 1 až 5 od C-konce může být odstraněno z tohoto polypeptidů agonistů receptoru erythropoietinu, kde N-konec je spojen s C-koncem přímo nebo spojovníkem schopným spojit N-konec s C-koncem a majícím nové C- a N-konce u aminokyselin:

23-24,24-25,25-26,27-28,28-29,29-30, 30-31, 31-32,32-33, 33-34,34-35, 35-36, 36-37, 37-38, 38-39, 40-41, 41-42, 43-44, 44-45, 45-46, 45-56, 46-47, 47-48, 48-49, 50-51, 51-52, 5253, 53-54, 54-55, 55-56, 56-57, 57-58, 77-78, 78-79, 79-80, 80-81, 81-82, 82-83, 84-85, 85-86, 86-87, 87-88, 88-89, 108-109, 109-110,110-111,111-112,112-113, 113-114, 114-115, 115-116, 116-117, 117-118, 118-119, 119-120, 120-121, 121-122, 123-124, 124-125, 125-126, 126-127, 127-128,128-129,129-130,131-132, a tento polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu může být případně bezprostředně předcházen (methionin^-1), (alanin^-1) nebo (methionin², alanin^-1).

100 • 00 0 0« 00 0 ·00 0000

00 ·000 0000

0000 00 0 0000 0 000 000 • 0 0 0 0 0 0· »0 0 0 0 44

2. Polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároku 1 vyznačený tím, že tento spojovník je vybraný ze skupiny sestávající z:

Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 123,

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 124,

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 125,

Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Phe Gly Asn Met Glu Phe Gly Gly Asn Met Glu Phe Gly Asn Gly Gly Asn Met Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly

SEQ ID NO: 126,

SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 129 a SEQ ID NO: 130.

3. Polypeptid agonistů receptoru erythropoietinu podle nároku 1 vyznačený tím, že je vybraný ze skupiny sestávající z :

SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4,

SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8,

SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12,

SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16,

SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20,

SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24,

SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28,

SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32,

SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36,

SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40,

SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44,

101 • ·· · ·· • · · · · · « · » · * · · 9 · · · 9 9 9 9

9 9 9 9 · 99

SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48,

SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52,

SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56,

SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59 a SEQ ID NO: 122.

4. Polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároku 3 vyznačený tím, že sekvence spojovníku (Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 123) je nahrazená sekvencí spojovníku vybranou ze skupiny sestávající z:

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 124, Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser SEQ ID NO: 125, Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser SEQ ID NO: 126, Glu Phe Gly Asn Met SEQ ID NO: 127, Glu Phe Gly Gly Asn Met SEQ ID NO: 128, Glu Phe Gly Asn Gly Gly Asn Met SEQ ID NO: 129 a Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly SEQ ID NO: 130.

5. Molekula nukleové kyseliny obsahující sekvenci erythropoietinu kódující polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároku 1.

6. Molekula nukleové kyseliny obsahující sekvenci erythropoietinu kódující polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároku 2.

7. Molekula nukleové kyseliny obsahující sekvenci erythropoietinu kódující polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároku 3.

8. Molekula nukleové kyseliny obsahující sekvenci erythropoietinu kódující polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu vybraný ze skupinysestávající z:

SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63,

102 « 00 * *· 00 0 000 0000

00 0000 0 000

0000 0 0 0 0000 0 000 000

0 0 0 0 · *

000 0 0· 0 00 90

SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68,

SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72,

SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76,

SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80,

SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84,

SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88,

SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92,

SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96,

SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100,

SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104,

SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108,

SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112,

SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116,

SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118a SEQ ID NO: 119.

9. Molekula nukleové kyseliny obsahující sekvenci DNA kódující polypeptid agonisty receptorů erythropoietinu podle nároku 4.

10. Způsob výroby polypeptidů agonisty receptorů erythropoietinu zahrnující kultivaci za vhodných nutričních podmínek hostitelské buňky transformované nebo transfektované replikovatelným vektorem obsahujícím tuto molekulu nukleové kyseliny podle nároku 5, 6, 7, 8 nebo 9 způsobem dovolujícím expresi tohoto polypeptidů agonisty receptorů erythropoietinu a získáním tohoto polypeptidů agonisty receptorů erythropoietinu.

11. Kompozice obsahující polypeptid agonisty receptorů erythropoietinu podle nároků 1, 2, 3 nebo 4 a farmaceuticky přijatelný nosič.

103 • ·

0 9 9· 0

00 *

0 0 0 * 9 0*

9 9 9 0·

09 90

9 0 9 9

9 9 9 9

999 99 9

9 9

00 9 9

12. Kompozice obsahující polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároků 1, 2, 3 nebo 4 a faktor a farmaceuticky přijatelný nosič.

13. Kompozice podle nároku 12, kde faktor je vybraný ze skupiny sestávající z GM-CSF, G-CSF, c-mpl ligand, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, lidský růstový hormon, růstový faktor B-buněk, faktor diferenciace Bbuněk, faktor diferenciace eosinofilů a faktor kmenových buněk, IL-3 varianty, fuzní proteiny, agonisty receptoru G-CSF, agonisty receptoru c-mpl, agonisty receptoru IL-3, multifunkční agonisty receptoru.

14. Způsob zvýšení tvorby krvetvorných buněk u pacienta vyznačený tím, že zahrnuje krok podávám tomuto pacientovi polypeptid agonisty receptoru erythropoietinu podle nároků 1, 2, 3 nebo 4.

15. Způsob zvýšení tvorby krvetvorných buněk ex vivo vyznačený tím, že zahrnuje kroky:

(a) kultivaci buněk progenitorů červených krvinek v kultivačním mediu obsahujícím polypeptid podle nároků 1,2, 3 nebo 4 a (b) sklizeň těchto kultivovaných buněk.

16. Způsob selektivního zvýšení tvorby krvetvorných buněk ex vivo vyznačený tím, že zahrnuje kroky:

a) oddělení buněk progenitorů červených krvinek od ostatních buněk,

b) kultivaci těchto oddělených buněk progenitorů červených krvinek ve vybraném kultivačním mediu obsahujícím polypeptid podle nároků 1, 2, 3 nebo 4 a

c) sklizeň těchto kultivovaných buněk.

17. Způsob léčení pacienta majícího krvetvornou poruchu vyznačený tím, že zahrnuje kroky:

a) odstranění buněk progenitorů červených krvinek,

104 • « ·· · ·« ·· ··« ··· »··· • * , · · » « ···« « ··»· · · · ···» · ·*ζ ···

b) kultivaci těchto oddělených buněk progenitorů červených krvinek 'vkúltivačním mediu obsahujícím polypeptid podle nároků 1,2,3 nebo 4 a

c) sklizeň těchto kultivovaných buněk,

d) transplantaci těchto kultivovaných buněk tomuto pacientovi.

18. Způsob léčení pacienta majícího krvetvornou poruchu vyznačený tím, že zahrnuje kroky:

a) odstranění buněk progenitorů červených krvinek,

b) oddělení buněk progenitorů červených krvinek od ostatních buněk,

c) kultivaci těchto oddělených buněk progenitorů červených krvinek v kultivačním mediu obsahujícím polypeptid podle nároků 1,2, 3 nebo 4 a

d) sklizeň těchto kultivovaných buněk,

e) transplantaci těchto kultivovaných buněk tomuto pacientovi.

19. Způsob podle nároku 15 vyznačený tím, že tyto buňky progenitorů červených krvinek se izolují z periferní krve.

20. Způsob podle nároku 16 vyznačený tím, že tyto buňky progenitorů červených krvinek se izolují z periferní krve.

21. Způsob podle nároku 17 vyznačený tím, že tyto buňky progenitorů červených krvinek se izolují z periferní krve.

22. Způsob podle nároku 18 vyznačený tím, že tyto buňky progenitorů červených krvinek se izolují z periferní krve.