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CN201413328Y - 一种快速检测猪流感h1n1病毒的胶体金试纸条 - Google Patents

一种快速检测猪流感h1n1病毒的胶体金试纸条 Download PDF

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CN201413328Y
CN201413328Y CN 200920026848 CN200920026848U CN201413328Y CN 201413328 Y CN201413328 Y CN 201413328Y CN 200920026848 CN200920026848 CN 200920026848 CN 200920026848 U CN200920026848 U CN 200920026848U CN 201413328 Y CN201413328 Y CN 201413328Y
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CN
China
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virus
coated
swine flu
antibody
colloidal gold
Prior art date
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Expired - Lifetime
Application number
CN 200920026848
Other languages
English (en)
Inventor
蒋贻海
崔尚金
凌红丽
高亚东
贾德强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
QINGDAO VLAND BIOLOGICAL Co Ltd
QINGDAO VLAND BIOLOGICAL PRODUCTS Co Ltd
Original Assignee
QINGDAO BOITE BIOPHARMACEUTICAL CO Ltd
QINGDAO CONTINENT BIOTECH CO Ltd
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Publication date
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Abstract

一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，该包被膜中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线和一条包被抗鼠抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便，能广泛应用于现地农户、基层及个人对于猪流感H1N1病毒的检测。

Description

一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条
技术领域
本实用新型属于预防兽医学检验领域，具体地说是涉及一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条。
背景技术
猪流感病毒(swine influenza virus，SIV)属于正粘病毒科A型流感病毒属，能引起不同日龄、性别和品种的猪发生急性、热性和高度接触性呼吸道传染病，其临床上以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭和死亡为特征。1918年美国首次报道了猪流感的暴发，1930年shope从猪体中首次分离出H1N1亚型猪流感病毒。迄今为止，猪流感已遍布美、欧、亚、非等世界各地。目前，已经发现的SIV包括H1N1、H1N2、H1N7、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等亚型。但以经典H1N1，禽类H1N1和类人H3N2亚型毒株为主。我国猪流感于1969年由台湾首次报道，1991年首次从猪群中分离到H1N1亚型猪流感病毒。郭元吉(1985)、倪汉忠(2000)、张苏华(2002)、李海燕(2003)等对我国不同地区做了血清学调查，结果表明，随年份的递增，我国猪流感阳性率增加。
目前，对流感病毒的检测方法主要有病毒分离、血清学诊断以及分子生物学方法，但病毒分离时间长，要求条件高，分离率低，而采集患者急性期与恢复期双份血清进行抗体测定来确认，又不能及时进行诊断，因此，使这些方法在使用中受到很大的限制，也未见有可用的装置或者其它的检测工具。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，它能满足现有技术的上述需求。
一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，该包被膜中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线和一条包被抗鼠抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。
本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便，能广泛应用于现地农户、基层及个人对于猪流感H1N1病毒的检测。
附图说明
附图为本实用新型的纵剖结构示意图。
具体实施方式
本实用新型快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，如图所示，有一底衬1、该底衬1上面的中部粘帖一包被膜4，该包被膜4中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线6和一条包被抗鼠抗体的控制线7，包被膜4的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3和吸水纸5；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3上面粘贴一样品垫2。
本实用新型的制造方法如下：
用BALB/C小鼠免疫猪流感H1N1病毒，取其脾细胞与SP2/O细胞融合建立瘤细胞株，进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/C小鼠腹腔，使其产生腹水。提取小鼠腹水进行纯化筛选，获得能与猪流感H1N1病毒产生中和反应的单克隆抗体用于胶体金标记。
制备包被膜4时，将0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲液(PBS)用0.22u膜过滤，制成包被缓冲液。另将20g牛血清白蛋白(BSA)和20g脱脂奶溶于1000ml0.01M、pH7.0的PBS用0.22u膜过滤，制成封闭工作液。调试喷膜机，用上述包被缓冲液稀释抗猪流感H1N1病毒的单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体，分别在硝酸纤维膜中部上划线，两线间隔5mm，应细致均匀，室温晾干20分钟，该两线用的液体分别渗入硝酸纤维膜中，即分别为检测线6和控制线7。用上述封闭工作液将硝酸纤维膜于37℃封闭60分钟，取出后置于37℃烘干处理两小时，制成包被膜4。
制造涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3时，将10g氯金酸用1000ml双蒸水溶解，配成水溶液；将10g柠檬酸三钠用1000ml双蒸水溶解，配成水溶液；将13.8g碳酸钾溶于1000ml双蒸水，用0.22u膜过滤，配制成碳酸钾水溶液；将20g BSA溶于1000ml 0.01M、pH7.0的PBS中，用0.22u膜过滤配成标记洗涤液；将10g BSA、5g脱脂奶粉、0.5g NaN3和1ml Tween-20在1000ml 0.01M、pH 7.0 PBS中溶解，用0.22u膜滤过，配成金标抗体保存液。用双蒸水将1％氯金酸稀释成0.01％，置电炉煮沸，按每100毫升0.01％氯金酸加入4毫升1％柠檬酸三纳，继续煮沸，直到液体呈亮红色即停止加热，冷却至室温后补足失水。外观应纯净，透亮，无沉淀和漂浮物，即为烧制成的胶体金。用0.1M碳酸钾水溶液调胶体金的pH值至7.6，按10微克抗体/毫升胶体金加入抗猪流感H1N1病毒的单克隆抗体，混匀，静置30分钟，以12000rpm离心30分钟，弃去上清，将所得沉淀用标记洗涤液洗涤两次，最后一次弃去上清液，将所得沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，配制成金标抗体。将上述标记好的标抗体均匀地涂敷在玻璃纤维膜上，每毫升溶液涂敷铺10平方厘米，干燥，制得覆金标抗体的玻璃纤维膜3。
所述底衬1、样品垫2和吸水纸5是本领域通用的材料。将上述包被膜4、覆金标抗体的玻璃纤维膜3、底衬1、样品垫2和吸水纸5依次粘贴起来，得到试纸板，最后将该试纸板切割成不同宽度的试纸条即可。
本实用新型可用来检测血液样品或者棉拭子等处理样品，由于检测线6和控制线7能够产生特异功能，从而满足现地农户、基层检测的需求。在试纸条的检测线6和控制线7位置上各出现一条紫红色条带为阳性结果；仅试纸条的质控线7位置上出现一条紫红色条带为阴性结果；在试纸条的检测线6和控制线7位置上均未出现紫红色条带为无效结果。

Claims (3)

1.一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于有一底衬(1)、该底衬(1)上面的中部粘帖一包被膜(4)，该包被膜(4)中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线(6)和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线(7)，包被膜(4)的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)和吸水纸(5)；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)上面粘贴一样品垫(2)。
2.根据权利要求1所述的快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于所述的检测线(6)中包被的猪流感H1N1病毒的抗体为高纯度的抗单克隆抗体和/或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于所述的涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)中有由胶体金颗粒标记的抗猪流感H1N1病毒的单克隆抗体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN102241768A (zh) * 2010-05-14 2011-11-16 中国科学院上海生命科学研究院 一种抗甲型h1n1流感病毒血凝素蛋白的抗体
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CN112280901A (zh) * 2020-11-11 2021-01-29 北京欣颂生物科技有限公司 一种改进的核酸检测技术在制备病毒检测试剂盒中的用途

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Assignor: Qingdao continet Pharmaceutical Co. Ltd.|Qingdao boite biopharmaceutical Co. Ltd.

Contract record no.: 2011370000088

Denomination of utility model: Colloidal gold test paper strip for rapidly testing swine flu H1N1 virus

Granted publication date: 20100224

License type: Exclusive License

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