CN201408194Y - 人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 - Google Patents
人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN201408194Y CN201408194Y CN2009201520440U CN200920152044U CN201408194Y CN 201408194 Y CN201408194 Y CN 201408194Y CN 2009201520440 U CN2009201520440 U CN 2009201520440U CN 200920152044 U CN200920152044 U CN 200920152044U CN 201408194 Y CN201408194 Y CN 201408194Y
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- albumin
- phase carrier
- detection kit
- solid phase
- elisa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 9
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N bromocresol purple Chemical compound BrC1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(Br)C(O)=C(C)C=2)=C1 ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本实用新型提供了一种人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，包括盒盖、盒体和酶标板，其中酶标板又包括固相载体和包被层，固相载体为设置有多个微孔的微孔板，包被层附着在固相载体的微孔表面，包被层是由小鼠抗人白蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。使用本实用新型在检测人血清及尿液标本时能极大地提高灵敏度；同时其回收率高，因而重复性亦佳；且成本低。
Description
技术领域
本实用新型涉及诊断试剂应用设备领域，尤其涉及一种用于检测人白蛋白的试剂盒。
背景技术
人血清白蛋白是衡量肝脏功能和机体营养状况的重要指标。目前，用于检测白蛋白的方法主要有溴甲酚紫(BCP)法、蛋白电泳法和溴甲酚绿(BCG)法，其中BCP与BCG法需利用全自动生化分析仪，其操作简便、快速，但全自动生化分析仪价格昂贵，一次性投资大，且灵敏度不高，对于极微量白蛋白的检测准确度不高；蛋白电泳法操作繁琐，且因白蛋白与丽春红S染料结合力偏低，常导致结果偏低，目前已经不常被采用。因此，有必要选用一种经济、灵敏度和准确度高的方法来进行白蛋白，特别是极微量白蛋白的检测。
酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，可敏感地检测体液中微量的特异性蛋白。
实用新型内容
本实用新型要解决的技术问题是提供一种人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，适合于血液及尿液中白蛋白检测，特别是尿液中极微量白蛋白检测。
为解决上述技术问题，本实用新型的技术方案是：一种用于ELISA法检测人白蛋白的试剂盒，包括盒盖、盒体和酶标板，其中酶标板又包括固相载体和包被层，固相载体为设置有多个微孔的微孔板，包被层附着在固相载体的微孔表面，包被层是由小鼠抗人白蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。
优选的，所述固相载体为96孔聚苯乙烯试剂板(PS)。
优选的，所述固相载体为48孔聚苯乙烯试剂板(PS)。
经实验表明，使用本实用新型在检测人血清及尿液标本时其最低检测限为0.15ng/ml，而传统的全自动生化BCP或BCG法则为1ug/ml，极大地提高了灵敏度；同时其回收率为87±15％，重复性亦佳，因此特别适用于尿液微量白蛋白检测，对于肝、肾损伤及代谢性疾病的发生、发展的监控具有重要的临床价值；另外，本实用新型不需投资大型自动生化分析仪，操作方法简单，经济、快捷、成本低。
附图说明
图1为本实用新型试剂盒结构示意图；
图2为本实用新型酶标板结构示意图；
图3为本实用新型酶标板剖视图。
盒盖4，酶标板5，盒体6，固相载体1，固相载体1上的微孔2，包被层3。
具体实施方式
如图1所示，本实用新型试剂盒由盒盖4，酶标板5和盒体6组成。
如图2和图3所示，酶标板5由固相载体1和包被层3组成，固相载体1上有微孔2，包被层3附着在微孔2上。
本实用新型的制备方法可以是：采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)作为固相载体，先将其置于紫外光下辐照2小时，使PS板活化。在试剂板微孔条上先包被一定浓度的小鼠抗人白蛋白单克隆抗体，4℃过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的酶标板，以备标本检测。
本实用新型的使用方法是：依次以生物素化兔抗人白蛋白多克隆抗体，亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)作为检测试剂A及B，以3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液，完成用于ELISA法检测人白蛋白的试剂盒的使用。
实施例1：应用人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒以及大型自动生化分析仪分别定量检测人定值(35.5ng/ml)尿液标本。
1、人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒方法操作：①试剂盒平衡至室温。②加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品(Alb)或定值样品100ul，覆膜，37℃放置120分钟。标准品浓度分别为：40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml。③弃去液体，甩干，每孔加检测试剂A工作液100ul，覆膜，37℃放置60分钟。④弃去孔内液体，洗板3次，甩干，温育60分钟。⑤每孔加检测液试剂B工作液100ul，覆膜，37℃放置60分钟。⑥弃去孔内液体，洗板5次，甩干。⑦每孔加TMB溶液90ul，37℃避光显色30分钟。⑧依序每孔加终止溶液50ul，用酶联仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。
2、大型自动生化分析仪检测同一上述尿液标本
按照仪器要求，上样，运行仪器，仪器自动打出结果。
3、结果：见表1
表1.不同实验方法检测结果比较
实施例2：应用人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒以及大型自动生化分析仪分别定量检测人定值(4.86ug/ml)尿液标本。
方法及操作同实施例1，但用ELISA方法进行检测时需对标本进行200倍稀释。
结果：见表2
从表1及表2的数据可以看出应用本实用新型ELISA法检测尿中白蛋白含量，其准确性高。当标本中白蛋白含量较高时与大型自动生化分析仪比较没有显著性差异，但是当标本中白蛋白含量极微小时，生化仪法已经无法测出，但是本实用新型所用ELISA法却可以检测出极微量的白蛋白，极大地提高了白蛋白检测的灵敏度，对于提示相关疾病的发生、发展及用药监控有着重要的临床意义。
Claims (3)
1.一种人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，包括盒盖、盒体和酶标板，其中酶标板又包括固相载体和包被层，其特征在于：所述固相载体为设置有多个微孔的微孔板，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由小鼠抗人白蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。
2.如权利要求1所述的人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述固相载体为96孔聚苯乙烯试剂板。
3.如权利要求1所述的人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述固相载体为48孔聚苯乙烯试剂板。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009201520440U CN201408194Y (zh) | 2009-04-23 | 2009-04-23 | 人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009201520440U CN201408194Y (zh) | 2009-04-23 | 2009-04-23 | 人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN201408194Y true CN201408194Y (zh) | 2010-02-17 |
Family
ID=41679132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009201520440U Expired - Fee Related CN201408194Y (zh) | 2009-04-23 | 2009-04-23 | 人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN201408194Y (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102998464A (zh) * | 2011-09-16 | 2013-03-27 | 武汉优尔生科技股份有限公司 | 脱氢表雄酮酶联免疫吸附测定试剂盒的研制方法 |
| CN104407148A (zh) * | 2014-09-04 | 2015-03-11 | 齐智 | 一种人白蛋白超级灵敏elisa检测试剂盒 |
| CN108196043A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-06-22 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒及其制备方法 |
-
2009
- 2009-04-23 CN CN2009201520440U patent/CN201408194Y/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102998464A (zh) * | 2011-09-16 | 2013-03-27 | 武汉优尔生科技股份有限公司 | 脱氢表雄酮酶联免疫吸附测定试剂盒的研制方法 |
| CN104407148A (zh) * | 2014-09-04 | 2015-03-11 | 齐智 | 一种人白蛋白超级灵敏elisa检测试剂盒 |
| CN108196043A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-06-22 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种检测血清中尿微量白蛋白含量的试剂盒及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aydin | A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA | |
| EP0138826B1 (en) | Detection of human chorionic gonadotropin | |
| CN102147409B (zh) | 一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置 | |
| US8956823B2 (en) | Anti-antibody reagent | |
| CN104237513A (zh) | 一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒 | |
| CN106622416A (zh) | 一种检测人超敏c反应蛋白用微流控纸芯片及其制备方法和试剂盒 | |
| CN108593919A (zh) | 一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法和应用 | |
| CN103384826B (zh) | 一种测定抗RA33抗体IgG的方法及试剂装置 | |
| CN107044977A (zh) | 一种酪氨酸磷酸酶抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN201408194Y (zh) | 人极微量白蛋白elisa检测试剂盒 | |
| CN204287200U (zh) | 尿微量白蛋白免疫层析定量检测试纸条 | |
| CN106645689A (zh) | 一种促甲状腺激素受体抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN105954509A (zh) | 肾素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN106198959A (zh) | 血清透明质酸化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN106198958A (zh) | 抗精子抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN204287199U (zh) | 心脏型脂肪酸结合蛋白免疫层析定量检测试纸条 | |
| CN201477100U (zh) | 人α2巨球蛋白ELISA检测试剂盒 | |
| CN206208907U (zh) | 一种用于肌钙蛋白elisa检测的试剂盒 | |
| CN111610333A (zh) | 一种基于指尖血的酶联免疫分析方法 | |
| CN106596524A (zh) | 一种胰岛素抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN103185800B (zh) | 一种检测抗环瓜氨酸多肽抗体的试剂装置及其方法 | |
| CN207502542U (zh) | 一种用于胶体金法的检测试剂盒 | |
| CN103185788B (zh) | 一种检测类风湿因子的方法 | |
| CN201716317U (zh) | 猪的胰蛋白酶(try)elisa检测试剂盒 | |
| US20140011190A1 (en) | Method for performing a rapid test |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20100217 Termination date: 20140423 |