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CN1965849A - 从中药中提取用于治疗冠心病的组合物及组分制备方法 - Google Patents

从中药中提取用于治疗冠心病的组合物及组分制备方法 Download PDF

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CN1965849A
CN1965849A CN 200510110538 CN200510110538A CN1965849A CN 1965849 A CN1965849 A CN 1965849A CN 200510110538 CN200510110538 CN 200510110538 CN 200510110538 A CN200510110538 A CN 200510110538A CN 1965849 A CN1965849 A CN 1965849A
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张军东
吴晔旻
黄庆
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Xiamen Jinri Pharmaceutical Co., Ltd.
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SHANGHAI SHENJIU MEDICAL BIOTECHNOLOGY CO Ltd
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Abstract

本发明涉及一种从中药中提取用于治疗冠心病的组合物及组分制备方法，本发明的组合物由丹参酮、淫羊藿苷、人参茎叶总皂苷组成；其含量是：丹参酮4～20g，淫羊藿苷4～20g，人参茎叶总皂苷3～20g；本发明的有益效果是：经药理学研究表明，对于冠心病有非常好的效果，进一步制成各种制剂，可以应用于临床治疗冠心病。

Description

从中药中提取用于治疗冠心病的组合物及组分制备方法
技术领域
本发明涉及一种治疗冠心病的药品，尤其涉及一种从中药中提取用于治疗冠心病的药品。
背景技术
心血管疾病是威胁人类健康的第一杀手，调查表明，目前全世界因心血管疾病死亡的人数占到全部死亡人数的36％左右。其中，冠心病是动脉粥样硬化导致器官病变的最常见类型，也是危害中老年人健康的常见病，其发病率及死亡率均呈居高不下趋势，发病率为3～4％，其死亡率占心血管死亡的20％左右。40岁以上人群患病率为5％～10％，男女比率为2～3∶1，近年冠心病有增多趋势，2001～2004年冠心病事件标化发病率为男1/10万～183/10万，女0～113/10万人口。且发病有年轻化趋势，国内最小的心肌梗死病人为男性16岁，住院率在血管病中占第一位或第二位，占心脏疾病死亡病例的10％～20％。
冠心病分为无症状型(隐匿型)、心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病型、猝死型等五型，发病时间长、发病机制复杂，目前治疗方法主要有三种：1、外科搭桥手术2、介入治疗3、药物治疗。西医研究只能被动的控制冠心病的症状，对症治疗，虽然有独特专一的治疗药物针对单因性冠心病患者，但对多因性冠心病(心绞痛、高血压兼冠心病、糖尿病兼冠心病)缺乏整体调节手段。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供了一种从中药中提取用于治疗冠心病的组合物，旨在解决上述的缺陷；
本发明还提供了制造上述组分的方法。
为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的组合物由丹参酮、淫羊藿苷、人参茎叶总皂苷组成；其含量是：丹参酮4～20g，淫羊藿苷4～20g，人参茎叶总皂苷3～20g；
本发明的丹参酮制备方法是通过以下步骤实现的：
取丹参粗粉，粒径0.2～2.0mm；
加药材体积1～3倍量的30～95％乙醇，回流提取1～3次，每次30～120分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物；
粗提物过大孔树脂柱(Kromasil C18柱)，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20∶80)，检测波长280nm，柱温30℃，流速1.0mL/min，收集过柱液；
每40～100mL为一管，收集第3～10管，即为丹参酮，纯度＞90％；
本发明的淫羊藿苷制备方法是通过以下步骤实现的：
取淫羊藿粗粉，加药材体积5～20倍量的蒸馏水，煎煮1～3次，每次30～120分钟；
合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.00～1.05，得到淫羊藿粗提液；
粗提液过板框式超滤器，经大孔径超滤膜过滤，超滤液过大孔树脂柱(Kromasil C18柱)，流动相分别为蒸馏水、20％、45％、65％、90％乙醇，收集65％洗脱液，即为淫羊藿苷，纯度＞90％。
本发明的人参茎叶总皂苷制备方法是通过以下步骤实现的：
人参茎叶粉碎至粒径0.2～2.0mm，用30～95％的乙醇回流提取，用旋转蒸发器在减压下蒸发浓缩回流液，得到粗提物的浸膏；
粗提物溶于氯仿∶甲醇∶蒸馏水＝4∶3∶2的溶剂系统中，高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography，HSCCC)进样，流动相流速1.5～2.0mL/min，仪器转速800r/min，进行分离，分离时间为4h，每12min收集一个流分，收集并合并流分3～12，即为人参茎叶总皂苷，纯度＞95％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：经药理学研究表明，对于冠心病有非常好的效果，进一步制成各种制剂，可以应用于临床治疗冠心病。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述：
中医中药在冠心病治疗中发挥了西医西药无法比拟的优势，目前临床有近1500个古方、验方、现代方，涉及286种中药用于治疗冠心病，其中，丹参、淫羊藿、人参是临床使用比例和使用频率最高的几种中药，药理学研究和临床应用也表明，单独或复方使用对冠心病均有非常明显的疗效。
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，为常用中药，性微寒、味苦，具有活血通经、清心除烦之功能，常用于心绞痛等心血管疾病的治疗，主要活性成分为丹参酮。淫羊藿为小檗科淫羊藿属(Epimedium breviconum Maxim.)植物的地上部分，淫羊藿苷是淫羊藿的主要活性成分，现代医学研究表明，淫羊藿苷可显著增加冠脉流量，保护心肌缺血，降低血小板和红细胞聚集反应，延长凝血酶原的时间，降低全血粘度，从而抑制血栓的形成。人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，为名贵中药，性平，味甘，微苦，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心原性休克等，主要化学成分是人参皂苷，但生药学及植物化学研究表明，地上部分茎叶中人参皂苷含量较高，含量高达10％以上，是人参根中含量的2倍，近年开展的人参茎叶研究，说明对冠心病等心血管疾病有较好疗效。
                        实施例1
制备天然提取物：
(1)大孔树脂制备丹参酮
取丹参粗粉，粒径0.2mm，加药材体积1倍量的30％乙醇，回流提取1次，时间30分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物，粗提物过大孔树脂(HPD700型树脂由河北沧州宝恩化工有限公司提供)，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20∶80)，检测波长280nm；柱温30℃；流速1.0mL/min，收集过柱液，每40mL为一管，收集第3～10管，即为丹参酮，纯度92.8％。
(2)高速逆流色谱制备人参茎叶总皂苷
人参茎叶粉碎至粒径0.2mm，用30％的乙醇回流提取，用旋转蒸发器在减压下蒸发浓缩回流液，得到粗提物的浸膏，粗提物溶于溶剂系统(氯仿∶甲醇∶蒸馏水＝4∶3∶2)，高速逆流色谱(High-speed counter-currentchromatography，HSCCC)进样，流动相流速1.5mL/min，仪器转速800r/min，进行分离，分离时间为4h，每12min收集一个流分，收集并合并流分3～12，即为人参茎叶总皂苷，纯度96.5％。
(3)制备淫羊藿苷
取淫羊藿粗粉，加药材体积5倍量的蒸馏水，煎煮1次，时间30分钟，合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.00，得到淫羊藿粗提液，粗提液过板框式超滤器(无锡市超滤设备厂生产)，经孔径10万的大孔径超滤膜过滤，超滤液过大孔树脂(NKA-9型树脂购自天津南开大学化工厂)，流动相分别为蒸馏水、20％、45％、65％、90％乙醇，收集65％洗脱液，即为淫羊藿苷，纯度91.3％。
上述提取物为原料组成组合物，配比为：
丹参酮(上海深久医药生物技术有限公司，批号20041 125)         4g
淫羊藿苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20041015)        4g
人参茎叶总皂苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20030109)    3g
                            实施例2
制备天然提取物：
(1)大孔树脂制备丹参酮
取丹参粗粉，粒径2.0mm，加药材体积3倍量的95％乙醇，回流提取3次，每次120分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物，粗提物过大孔树脂(HPD100型树脂购自河北沧州宝恩化工有限公司)，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20∶80)，检测波长280nm；柱温30℃；流速1.0mL/min，收集过柱液，每60mL为一管，收集第3～10管，即为丹参酮，纯度91.2％。
(2)高速逆流色谱制备人参茎叶总皂苷
人参茎叶粉碎至粒径2.0mm，用95％的乙醇回流提取，用旋转蒸发器在减压下蒸发浓缩回流液，得到粗提物的浸膏，粗提物溶于溶剂系统(氯仿∶甲醇∶蒸馏水＝4∶3∶2)，高速逆流色谱(High-speed counter-currentchromatography，HSCCC)进样，流动相流速1.5mL/min，仪器转速800r/min，进行分离，分离时间为4h，每12min收集一个流分，收集并合并流分3～12，即为人参茎叶总皂苷，纯度95.6％。
(3)制备淫羊藿苷
取淫羊藿粗粉，加药材体积20倍量的蒸馏水，煎煮3次，每次120分钟，合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.05，得到淫羊藿粗提液，粗提液过板框式超滤器(无锡市超滤设备厂生产)，经孔径10万的大孔径超滤膜过滤，超滤液过大孔树脂(AB-8型树脂购自天津南开大学化工厂)，流动相分别为蒸馏水、20％、45％、65％、90％乙醇，收集65％洗脱液，即为淫羊藿苷，纯度92.0％。
上述提取物为原料组成组合物，配比为：
丹参酮(上海深久医药生物技术有限公司，批号20030818)            20g
淫羊藿苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20041019)          20g
人参茎叶总皂苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20040321)    20g
                            实施例3
制备天然提取物：
(1)大孔树脂制备丹参酮
取丹参粗粉，粒径1.2mm，加药材体积2倍量的65％乙醇，回流提取2次，每次90分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物，粗提物过大孔树脂(HPD700型树脂购自河北沧州宝恩化工有限公司)，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20∶80)，检测波长280nm；柱温30℃；流速1.0mL/min，收集过柱液，每40～100mL为一管，收集第3～10管，即为丹参酮，纯度＞90％。
(2)高速逆流色谱制备人参茎叶总皂苷
人参茎叶粉碎至粒径1.2mm，用65％的乙醇回流提取，用旋转蒸发器在减压下蒸发浓缩回流液，得到粗提物的浸膏，粗提物溶于溶剂系统(氯仿∶甲醇∶蒸馏水＝4∶3∶2)，高速逆流色谱(High-speed counter-currentchromatography，HSCCC)进样，流动相流速1.8mL/min，仪器转速800r/min，进行分离，分离时间为4h，每12min收集一个流分，收集并合并流分3～12，即为人参茎叶总皂苷，纯度97.1％。
(3)制备淫羊藿苷
取淫羊藿粗粉，加药材体积15倍量的蒸馏水，煎煮2次，每次90分钟，合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.03，得到淫羊藿粗提液，粗提液过板框式超滤器，经大孔径超滤膜过滤，超滤液过大孔树脂柱(KromasilC18柱)，流动相分别为蒸馏水、20％、45％、65％、90％乙醇，收集65％洗脱液，即为淫羊藿苷，纯度93.2％。
上述提取物为原料组成组合物，配比为：
丹参酮(上海深久医药生物技术有限公司，批号20041125)            10g
淫羊藿苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20050115)          12g
人参茎叶总皂苷(上海深久医药生物技术有限公司，批号20050129)    8g
                        实施例4
将实施例1所制备的组合物用蒸馏水配成浓度分别为1.0、0.5、0.25mg/ml的药液(临用配制)，作为高、中、低3个给药浓度，进行药效试验。
采用冠心病动物模型试验，研究受试物对冠心病的治疗作用(参见《中国中医基础医学杂志》2002年第8卷第4期第311页)。
(一)试验动物
动物：Wistar大鼠(中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司，
清洁级，动物合格证号：沪动合格证字153号)，60只；
性别：雄性；
体重：180～220g；
分组：均分为本发明制剂高、中、低3个剂量组、阳性药对照组、模
型动物对照组、正常动物对照组，每组10只。
(二)试验材料
1高脂饲料配制：2％胆固醇，10％猪油，0.2％甲基硫氧嘧啶，余为基础饲料；
2阳性药
温心胶囊(广西利民制药厂，批号20030128)，临用前用蒸馏水溶解；
3生化测定试剂盒：心肌酶、血脂、肾功、胆碱酯酶检测试剂盒采用北京中生生物工程高技术公司试剂盒，Lisa300法国产全自动生化仪进行检测。
4本发明制剂
高、中、低3个浓度的药液，浓度分别为1.0、0.5、0.25mg/ml。
(三)试验方法
正常组每天饲喂基础饲料加生理盐水10ml/kg体重，其余各组饲喂高脂饲料，模型组每日生理盐水灌胃10ml/kg体重，高、中、低剂量组分别灌胃受试高、中、低药液10ml/kg体重，连续灌服6周。除正常组大鼠外，各组大鼠每日冷藏于-2℃～-4℃冰柜中2h，持续6周。在第35天，除正常组以外的动物皮下多点注射脑垂体后叶素(10u/kg)，正常组给予等容量的生理盐水。24h后，以20％乌拉坦4ml/kg体重腹腔注射，待动物麻醉后，将连接PCLAB生物信号系统电极的6号针头，分别插入大鼠前肢和下肢皮下，采用PCLAB生物信号采集处理系统，记录标II导联心电图，描记系统由电脑操作，随后彩色多谱勒检测大鼠心功能。于第43天早晨各组大鼠经乌拉坦麻醉后，称体重，颈主动脉采血检测心肌酶。采血之后分别处死大鼠，摘取心、肝、肺脏，迅速用预冷的生理盐水冲洗，吸纸吸干，天平称重后，固定于4％多聚甲醛溶液中。
(四)统计学处理
试验数据以 x±SD表示，组间差异用方差分析法检验(SPSS统计软件，version 10.0)。
(五)试验结果(见表1)
5.1本发明制剂对冠心病模型动物心电图的影响
本发明制剂对冠心病模型动物心电图的影响与用药剂量相关，各剂量组阳性率与模型对照组相比有显著性差异，结果说明本发明中药制剂能明显减少冠心病模型动物心肌缺血的阳性率，结果见表1。
表1本发明制剂对冠心病大鼠模型心电图的影响
  分组   动物数(n)     阴性     阳性
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组   101010101010     1017689     09ΔΔ3*4*2**1***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
5.2本发明制剂对冠心病模型动物血清心肌酶水平的影响
结果见表2，本发明制剂对冠心病模型大鼠心肌酶水平的影响与用药剂量相关，各剂量组血清ASAT/GOT酶、CK/MB酶含量与模型对照组相比有显著性差异，结果说明本发明中药制剂能明显影响冠心病模型动物的血清心肌酶水平。
表2本发明制剂对冠心病大鼠模型血清心肌酶水平的影响
  分组  动物数(n)     ASAT/GOT酶     CK/MB酶
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组  101010101010     36.7±16.526.1±11.3Δ31.7±26.8*28.8±19.133.2±11.535.1±17.6*     3.3±2.573.7±22.7ΔΔΔ33.2±12.363.3±9.238.5±8.5**13.8±2.7***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
5.3本发明制剂对彩色多谱勒检测冠心病大鼠模型E/A峰值的影响
结果见表3，一般认为，心功正常时E/A峰值＞1，当左室舒张功能下降时，E/A峰值＜1。经脑垂体后叶素造模后，模型组大鼠全部表现出E/A峰值＜1，本发明制剂治疗后E/A峰值＞1。
表3本发明制剂对彩色多谱勒检测冠心病大鼠模型E/A峰值的影响
  分组   动物数(n)     E/A＞1     E/A＜1
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组   101010101010     1006467     010ΔΔΔ4**64**3***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
                        实施例5
将实施例1所制备的组合物用蒸馏水配成浓度分别为2.0、1.0、0.5mg/ml的药液(临用配制)，作为高、中、低3个给药浓度，进行药效试验。
采用冠心病动物模型试验研究受试物对冠心病的治疗作用(参见《中国中医基础医学杂志》2002年第8卷第4期第311页)。
(一)试验动物
动物：Wistar大鼠(中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司，
清洁级，动物合格证号：沪动合格证字153号)，60只；
性别：雄性；
体重：180～220g；
分组：均分为本发明制剂高、中、低3个剂量组、阳性药对照组、模
型动物对照组、正常动物对照组，每组10只。
(二)试验材料
1高脂饲料配制：2％胆固醇，10％猪油，0.2％甲基硫氧嘧啶，余为基础饲料；
2阳性药
温心胶囊(广西利民制药厂，批号20030818)，临用前用蒸馏水溶解；
3生化测定试剂盒：心肌酶、血脂、肾功、胆碱酯酶检测试剂盒采用北京中生生物工程高技术公司试剂盒，Lisa300法国产全自动生化仪进行检测。
4本发明制剂
高、中、低3个浓度的药液，浓度分别为2.0、1.0、0.5mg/ml。
(三)试验方法
正常组每天饲喂基础饲料加生理盐水10ml/kg体重，其余各组饲喂高脂饲料，模型组每日生理盐水灌胃10ml/kg体重，高、中、低剂量组分别灌胃受试高、中、低药液10ml/kg体重，连续灌服6周。除正常组大鼠外，各组大鼠每日冷藏于-2℃～-4℃冰柜中2h，持续6周。在第35天，除正常组以外的动物皮下多点注射脑垂体后叶素(10u/kg)，正常组给予等容量的生理盐水。24h后，以20％乌拉坦4ml/kg体重腹腔注射，待动物麻醉后，将连接PCLAB生物信号系统电极的6号针头，分别插入大鼠前肢和下肢皮下，采用PCLAB-3808生物信号采集处理系统(北京微信斯达科技发展有限责任公司生产)，记录标II导联心电图，描记系统由电脑操作，随后彩色多谱勒检测大鼠心功能。于第43天早晨各组大鼠经乌拉坦麻醉后，称体重，颈主动脉采血检测心肌酶。采血之后分别处死大鼠，摘取心、肝、肺脏，迅速用预冷的生理盐水冲洗，吸纸吸干，天平称重后，固定于4％多聚甲醛溶液中。
(四)统计学处理
试验数据以 x±SD表示，组间差异用方差分析法检验(SPSS统计软件，version 10.0)。
(五)试验结果(见表4)
5.1本发明制剂对冠心病模型动物心电图的影响
本发明制剂对冠心病模型动物心电图的影响与用药剂量相关，各剂量组阳性率与模型对照组相比有显著性差异，结果说明本发明中药制剂能明显减少冠心病模型动物心肌缺血的阳性率，结果见表1。
表4本发明制剂对冠心病大鼠模型心电图的影响
  分组   动物数(n)     阴性     阳性
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组   101010101010     10177910     09ΔΔ3*3*1**0***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
5.2本发明制剂对冠心病模型动物血清心肌酶水平的影响
结果见表5，本发明制剂对冠心病模型大鼠心肌酶水平的影响与用药剂量相关，各剂量组血清ASAT/GOT酶、CK/MB酶含量与模型对照组相比有显著性差异，结果说明本发明中药制剂能明显影响冠心病模型动物的血清心肌酶水平。
表5本发明制剂对冠心病大鼠模型血清心肌酶水平的影响
  分组   动物数(n)     ASAT/GOT酶     CK/MB酶
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组   101010101010     36.7±16.526.1±11.3Δ31.7±26.8*32.8±11.133.2±9.537.1±12.6*     3.3±2.573.7±22.7ΔΔΔ33.2±12.353.2±9.226.5±5.7**11.4±3.7***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
5.3本发明制剂对彩色多谱勒检测冠心病大鼠模型E/A峰值的影响
结果见表6，一般认为，心功正常时E/A峰值＞1，当左室舒张功能下降时，E/A峰值＜1。经脑垂体后叶素造模后，模型组大鼠全部表现出E/A峰值＜1，本发明制剂治疗后E/A峰值＞1。
表6本发明制剂对彩色多谱勒检测冠心病大鼠模型E/A峰值的影响
  分组  动物数(n)     E/A＞l     E/A＜l
  正常对照组模型对照组阳性药对照组低剂量组中剂量组高剂量组  101010101010     1006689     010ΔΔΔ4**42**1***
注：与正常组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
以上药效试验结果表明，本发明制剂对冠心病模型大鼠具有明显治疗作用，因而可用于制备治疗冠心病的药物。

Claims (8)

1.一种从中药中提取用于治疗冠心病的组合物，由丹参酮、淫羊藿苷、人参茎叶总皂苷组成；其含量是：丹参酮4～20g，淫羊藿苷4～20g，人参茎叶总皂苷3～20g。
2.根据权利要求1所述的从中药中提取用于治疗冠心病的组合物，其中：丹参酮10，淫羊藿苷12，人参茎叶总皂苷8。
3.一种如权利要求1的丹参酮制备方法，是通过以下步骤实现的：
取丹参粗粉，粒径0.2～2.0mm；
加药材体积1～3倍量的30～95％乙醇，回流提取1～3次，每次30～120分钟，滤过，得滤渣和滤液，合并滤液，减压回收乙醇，得到丹参粗提物；
粗提物过大孔树脂柱，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸水溶液(20∶80)，检测波长280nm，柱温30℃，流速1.0mL/min，收集过柱液；
每40～100mL为一管，收集第3～10管，即为丹参酮，纯度＞90％。
4.根据权利要求3所述的丹参酮制备方法，其中：粒径1.2mm；加药材体积2倍量的65％乙醇，回流提取2次，每次90分钟。
5.一种如权利要求1的淫羊藿苷制备方法，是通过以下步骤实现的：
取淫羊藿粗粉，加药材体积5～20倍量的蒸馏水，煎煮1～3次，每次30～120分钟；
合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.00～1.05，得到淫羊藿粗提液；
粗提液过板框式超滤器，经大孔径超滤膜过滤，超滤液过大孔树脂柱，流动相分别为蒸馏水、20％、45％、65％、90％乙醇，收集65％洗脱液，即为淫羊藿苷，纯度＞90％。
6.根据权利要求5所述的淫羊藿苷制备方法，其中：加药材体积15倍量的蒸馏水，煎煮2次，每次90分钟，合并滤液，浓缩至80℃时相对密度为1.03。
7.一种如权利要求1的人参茎叶总皂苷制备方法，是通过以下步骤实现的：
人参茎叶粉碎至粒径0.2～2.0mm，用30～95％的乙醇回流提取，用旋转蒸发器在减压下蒸发浓缩回流液，得到粗提物的浸膏；
粗提物溶于氯仿∶甲醇∶蒸馏水＝4∶3∶2的溶剂系统中，高速逆流色谱进样，流动相流速1.5～2.0mL/min，仪器转速800r/min，进行分离，分离时间为4h，每12min收集一个流分，收集并合并流分3～12，即为人参茎叶总皂苷，纯度＞95％。
8.根据权利要求7所述的人参茎叶总皂苷制备方法，其中：人参茎叶粉碎至粒径1.2mm，用65％的乙醇回流提取；流动相流速1.8mL/min。
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