CN1940060B

CN1940060B - 新颖嗜乳酸菌及其应用

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Publication number: CN1940060B
Application number: CN200510105459A
Authority: CN
Inventors: 曾浩洋; 余碧; 蔡政志; 蔡筱琪; 林文鑫
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-09-28
Filing date: 2005-09-28
Publication date: 2010-05-05
Anticipated expiration: 2025-09-28
Also published as: CN1940060A

Abstract

本发明涉及一种新颖的嗜酸乳杆菌LASW，其具有优良的耐动物消化液的特性，并对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌具抑制作用。此外，其对人类及动物的肠道上皮细胞均具有良好的吸附性，并可抑制细菌侵入动物肠道上皮细胞中，因而降低细菌移转至肝及脾脏造成的感染。本发明的嗜酸乳杆菌可适用于酸奶、生菌剂、饲料添加剂产品中，具有调整动物肠胃功能的优良效果。

Description

新颖嗜乳酸菌及其应用

技术领域

本发明主要涉及一种新颖的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)及其应用。特别是，本发明的嗜酸乳杆菌具有优良的耐动物消化液的特性，可在动物肠胃道中存活并抑制病原菌的生长。本发明的嗜酸乳杆菌可应用于酸奶、生菌剂、饲料添加剂产品中，具有调整动物肠胃功能的优良效果。

背景技术

乳酸菌为人类和动物肠道主要菌群，常用于人和动物益生菌产品。其增进健康的主要方式之一，为抑制肠内病原菌(如沙门氏菌或大肠杆菌等)的生长(Lehto et al.，1997)；也有研究显示乳酸菌可预防病原菌的入侵，如可防止沙门氏菌属的伤寒杆菌(Salmonella typhimurium)侵入上皮细胞(Jinet al.，1996)。但若乳酸菌要能在动物体内中发挥上述功能，必须考虑两个基本特性：第一是乳酸菌能否忍受动物肠胃道消化系统所分泌的胃酸和胆盐，而到达肠道存活；第二为乳酸菌对动物宿主的肠道上皮细胞的吸附能力。乳酸菌吸附黏膜表面的能力，是其能在人类肠胃道与病原菌竞争吸附的条件(Rammelsberg and Radler，1990)，因为病原菌造成感染的先决条件，亦是吸附于肠道细胞(Chou and Weimer，1999)。一般此吸附特性是应用体外模式研究菌体与肠道细胞株之间的吸附情形(Marteau et al.，1997)，如Int-407(Leung and Finlay，1991)及Caco-2(Conway et al.，1987；Marteau etal.，1997)细胞株，进行乳酸菌吸附及竞争排除病原菌的研究。

沙门氏菌属，如伤寒杆菌会造成食物中毒(Boonmar et al.，1998)，近年来，具多重抗药性的伤寒杆菌菌株已逐年增加(Boonmar et al.，1998；Gross et al.，1998)，并且也出现了对新一代氟喹诺酮类(fluoroquinolones)与第三代广效头芽孢素(cephalosporins)等第三代抗微生物剂具抗药性的菌株，成为沙门氏菌感染时，临床治疗上的一大问题(Herikstad et al.，1997；Amyes and Gemmell，1997；Piddock，1998)。因此，学者将治疗病原菌感染转为使用益生菌，强化肠黏膜防御机制，保护肠道免于沙门氏菌等病原菌的感染(Nird and Edlund.1990)。

目前已有许多乳酸菌可抑制病原菌的相关研究，披露于专利文献或学术期刊中。例如美国专利第5,603,930号中披露约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)菌株CNCM I-1225可吸附Caco-2细胞，并抑制肠毒素及肠侵入病原菌的吸附；美国专利第3,953,609号披露乳酸乳杆菌(Lactobacilluslactis)菌株NRRL B-5628可抑制其它消化系统(如嘴或胃)中细菌的生长，特别可用在小猪及其它新出生动物的腹泻或肠绞痛的治疗，减少大肠杆菌(Escherichia coli)或大肠杆菌群的生长；美国专利第6,491,956号披露嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株HY2177及干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)菌株HY2743可预防及治疗幽门杆菌感染所造成的胃炎与十二指肠及胃溃疡；美国专利第4,874,704号披露乳杆菌可产生一种抗菌物质，可抑制在冷藏温度下病原菌及食品中的腐败菌(如李氏特菌及沙门氏菌)的生长；美国专利第5,340,577及5,604,127号披露乳杆菌、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、佛氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、肠球菌(Enterococcus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)及丙酸菌(Propionibacterium)可以抑制沙门氏菌的生长；美国专利公开第20020018770号披露洛德乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌及枯草杆菌(Bacillus subtilis)可以应用于鸡饲料中抑制病原菌生长，并促进家禽的生长，进而减少抗生素或药剂的使用量；美国专利公开第20040028665号披露乳杆菌及费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)同时使用，可以抑制大肠杆菌O157:H7型及其它致病性细菌的生长；美国公开专利申请第20040029127号披露一种干酪乳杆菌可以增强免疫力，进而抑制病原菌的生长；美国公开专利申请第20040038379号披露一种唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)，其具有类似抑菌素的特性，可抑制李斯特菌及葡萄球菌，包括抗甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)及芽孢杆菌属，且不会抑制其它的乳杆菌；美国公开专利申请第20040151708号披露发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)菌株ME-3，为一种具抗菌性及抗氧化的益生菌，可抑制大肠杆菌、宋内志贺氏菌(Shigella sonnei)、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)。

学术期刊对于乳酸菌的相关研究及其功效亦见诸多，例如双叉乳杆菌在老鼠试验中可以防止产生志贺毒素(shiga toxin-producing)的大肠杆菌O157:H7型感染(Asahara et al.，Infect.Immun.72：2240-2247)；鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)可减少出血性大肠杆菌的感染(Hirano，et al.，Microbiol Immunol.47：405-409)；乳杆菌及乳糖可以抑制沙门氏菌增殖(Johannsen et al.，Avian Dis.48：279-286)；洛德乳杆菌可抑制单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)及沙门氏菌的生长(Kuleasan et al.，Nahrung.，46：408-410)；青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)菌株1027所产生的吸附素，可以竞争抑制肠毒性大肠杆菌、肠病原性大肠杆菌及梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)附着于肠道上皮细胞株Lovo(Zhonget al.，World J.Gastroenterol.，10：1630-1633)；德氏乳酸菌(Lactobacillusdelbrueckii subsp.lactis)在肉制品中可抑制致病菌和腐败菌的生长(Senne etal.，J.Food Prot.，66：418-425)；乳酸乳球菌(Lactococcus lactis subsp.lactis)ATCC 11454株具有抗菌能力(Millette et al.，J.Food Prot.，67：1184-1189)；乳杆菌LB的上清液明显降低了沙门氏菌对肠道细胞Caco-2/TC-7的侵入(Coconnier et al.，Appl.Environ.Microbiol.，66：1152-1157)；干酪乳杆菌的菌液及其废弃培养物上清液均可抑制沙门氏菌侵入肠道细胞Caco-2，但在pH 7时即失去其效用，而小鼠经连续喂食L.casei GG 7天，可在感染沙门氏菌后维持100％的存活率，并减少了肝脏和脾脏内的菌数(Hudault et al.，Appl.Enviro.Microbiol.，63：513-518)；喂食干酪乳杆菌可为小鼠对沙门氏菌的侵入及感染提供保护，并认为此保护作用和肠道分泌的IgA有关(Perdigon et al.，Journal of Dairy Research，57：255-264)；在次致死量的沙门氏菌感染小鼠试验中，整个感染过程可分为三个时期，第一个时期为沙门氏菌侵入后在肝和脾等脏器增殖时期，经过一周后，进入第二时期，沙门氏菌增殖停止，达到最高菌数的高峰期，此时期亦持续一周，在第三时期，沙门氏菌在肝和脾内的菌数逐渐下降(Nauciel et al.，Infection and Immunity，60：450-454)。

此外，亦已有许多报告研究乳酸菌抑制沙门氏菌的机制。Fuller(1986)曾提出利用不具吸附能力的菌种，如干链球菌(Streptococcus faecium)，由于其增殖的速率超过食糜的排出速率，而能生存于肠道内，因此具有此特性的菌种能停留于大肠粘膜层，而不必吸附在上皮细胞上.另外有学者(Hormaeche et al.，1980；Van Dissel et al.，1985)提出宿主体内感染的沙门氏菌的增殖，初期是通过巨噬细胞及其活化后的功能发挥抑制的效用。乳酸菌抑制肠道微生物感染的机制为竞争性排除，包括对养分和肠道细胞吸附位置的竞争、分泌抑菌物质(Hudault et al.，Applied and EnvironmentalMicrobiology，63：513-518；Chauviere et al.，FEMS Microbiology Letters，91：213-218)及活化肠道免疫系统，可提高宿主抑制病原菌的能力(Perdigonet al.，Journal of Dairy Research，57：255-264；Schiffrin et al.，AmericanJournal of Clinical Nutrition，66：515S-520S)。

发明内容

本发明自猪肠道筛选并分离一株嗜酸乳杆菌，其具有上述人类及动物益生菌的基本特性，并可对抗病原菌，如沙门氏菌侵入并感染肠黏膜及肝、脾器官的功效。本发明的嗜酸乳杆菌菌株可应用于酸奶及家畜家禽的饲料添加剂中，作为生菌剂使用，增进动物的肠胃道功能。

因此，本发明一方面是提供一种嗜酸乳杆菌LASW，保藏号为CCTCCNO：M204083，保藏于中国典型培养物保藏中心。

本发明再一方面是提供一种益生菌组合物，其包括上述的嗜酸乳杆菌LASW。

本发明又一方面是提供一种饲料组合物，其包括上述的嗜酸乳杆菌LASW。

本发明又一方面是提供一种用于预防或治疗病原菌感染的医药组合物，其包括上述的嗜酸乳杆菌LASW。

附图说明

图1显示大肠杆菌受本发明嗜酸乳杆菌上清液(SCS)的抑制生长试验结果。

图2显示猪霍乱沙门氏菌受本发明的嗜酸乳杆菌抑制侵入试验结果。

图3显示LASW和空白组的小鼠经喂食沙门氏菌后第三和第六天的全身性血清IL-6变化。

具体实施方式

本发明主要涉及一种新颖的嗜酸乳杆菌LASW，于2004年11月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M204083。该嗜酸乳杆菌具有下列特色：

1.从台湾本土猪肠道所筛选出；

2.具优良的耐酸及耐胆盐的能力，能在人类及动物体内通过胃肠消化液后而存活于肠道中；

3.具有优良的人类及动物肠道表皮细胞吸附能力；

4.可与肠致病菌竞争对肠道细胞的吸附，进而抑制肠致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌及其它葡萄球菌的吸附生长与侵入肠道细胞及侵入转移至肝与脾脏的功效。

基于上述特性，本发明的嗜酸乳杆菌菌株LASW可应用于酸奶及家畜家禽之的饲料添加物中，作为生菌剂使用，增进动物的肠胃道功能。此外，本发明的嗜酸乳杆菌亦可应用于医药组合物中，用以预防或治疗病原菌感染。

下列实施例是用以举例说明本发明的功效，而非用以限定本发明的范畴。

实施例

一、耐酸及耐胆盐试验

参照Conway et al.，Journal of Dairy Science，70：1-12所述的方法进行耐酸试验。将100μl经培养的LASW乳酸菌菌液(10⁸～10⁹CFU/毫升)，加入至经0.1N HCl调整至pH2.0、2.5及3.2的磷酸盐缓冲溶液，或猪胃液(pH3.2)，并于37℃下培养3小时。乳酸菌液加入相同条件的pH7.2磷酸盐缓冲溶液作为对照组。培养后经系列稀释后，分别培养于MRS琼脂，计算存活的乳酸菌菌数。

参照Gilliland et al.，Journal of Dairy Science，73：905-911中所述的方法进行耐胆盐试验。将上述经耐酸试验存活的乳酸菌，以5,000rpm离心5分钟后，以磷酸盐缓冲溶液(pH7.2)清洗，再将乳酸菌移至9毫升的MRS培养液中(分别含及不含0.3％w/v的胆盐(Sigma)，培养3、12及24小时，培养后经系列稀释，倾倒法培养于MRS琼脂计数存活的乳酸菌数。

试验结果显示，本发明的嗜酸乳杆菌LASW，其菌数于pH2.0环境下培养3小时后降低2个对数值(从10.5降为8.5)；在pH2.5和3.2环境下则稳定生长。在猪胃液(pH3.2)培养3小时后，仅降低0.6个对数值。在含有胆盐的环境中培养，仍能稳定成长。显示其具有良好的酸及胆盐耐受性。

二、肠道细胞株吸附试验

取一24孔多孔平板，每孔中放入一片盖玻片。将培养完全的Int-407和Caco-2的个别细胞角形培养皿，倒掉旧的培养液，以1×PBS缓冲液清洗角形培养皿两次后倒掉，加入1％胰蛋白酶/EDTA约1毫升进行消化，轻拍角形培养皿数下，使细胞悬浮。加入40毫升新鲜BME(Int-407)或MEM(Caco-2)(皆含FBS及青霉素-链霉素)培养液(即稀释4倍)，摇匀后，每孔加入0.5毫升细胞悬浮液，于37℃、CO₂气体中培养，使细胞能够分裂生长附着盖玻片。再将旧培养液吸出，每孔加入0.5毫升、1×PBS缓冲液清洗，洗除旧的培养液及去除未附着的细胞，重复清洗两次。加入0.5毫升新鲜适合个别不同细胞的培养液(不含青霉素-链霉素)，以及100μl乳酸菌菌液，于37℃、CO₂气体中培养2小时。

吸出旧培养液，每孔加入0.5毫升、1×PBS缓冲液清洗三次，每次以100rpm转速摇晃清洗5分钟，以滴管吸出。加入10％福尔马林200毫升后，以100rpm转速摇晃固定30分钟，使菌体和细胞固定于孔内盖玻片上，并以滴管吸出福尔马林。加入0.5毫升、1×PBS缓冲液清洗三次，每次以100rpm转速摇晃清洗5分钟。加入经滤纸粗过滤的结晶紫200μl染色，在24-孔多孔培养皿外包一层铝箔纸，以100rpm转速摇晃染色5分钟，加入0.5毫升、1×PBS缓冲液清洗去除多余染剂。滴一滴1×PBS缓冲液于载玻片上，以镊子取出盖玻片放置其上，避免干燥，以倒立式荧光显微镜(Olympus IMT-2)下观察，并且计数每一细胞上吸附的乳酸菌数(Gopalet al.，2001)。

试验结果显示，本发明的嗜酸乳杆菌对人类肠道表皮细胞Int-407及Caco-2细胞，及猪、鸡、兔的肠道表皮细胞，其吸附能力均至少为每个细胞大于15个乳酸菌数。

三、对不同病原菌的抑制生长作用试验

将本发明的嗜酸乳杆菌于MRS中培养24小时，菌液的pH值降至3.7，对金黄色葡萄球菌、其它葡萄球菌、大肠杆菌及志贺氏菌进行敏感性测试.结果显示，本发明的嗜酸乳杆菌，对这些病原性细菌均形成大小不等的抑制圈，确具有抑制病原菌生长的作用.另外，在本试验中以LASW乳酸菌株的SCS作用4小时；对大肠杆菌的抑制生长作用效果显著，可降低菌数10²-10⁴CFU/毫升(图1)。

四、抑制猪霍乱沙门氏菌侵入肠道细胞株Int 407的试验

猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)为侵入性很强的人畜共患病原菌，因此，选择其作为乳酸菌LASW的抑制细菌侵入作用的探讨。本试验方法主要是参考Hudault等(1997)所述的方法。

(1)乳酸菌的制备

将测试乳酸菌菌株自冷冻甘油瓶取出，以MRS培养基连续活化两次，于37℃下隔夜培养后，将部份菌液于4℃以6000rpm离心10分钟，取出上清液(spent culture supernatant，SCS)，利用过滤灭菌的1N NaOH中和乳酸菌菌液(bacterial culture)以及上清液，准备上述未调整与经调整至中性pH值的乳酸菌菌液及上清液以进行试验。

(2)猪霍乱沙门氏菌的制备

猪霍乱沙门氏菌(菌株SCV2a、SCV26a)培养于LB培养基中，经二次活化培养后离心10分钟收集菌体，并以无菌磷酸盐缓冲溶液清洗后，悬浮于同体积的磷酸盐缓冲溶液中。菌液经系列稀释，以平板计数法于营养培养基培养，进行活菌数的计数。

(3)乳酸菌于Int 407肠道细胞株抑制猪霍乱沙门氏菌侵入试验

将75T培养瓶中的肠道细胞Int 407以1毫升的胰蛋白酶-EDTA消化处理后，轻拍培养瓶将细胞拍下，分装于96-孔洞微量培养盘，每个孔洞中加入1×10⁵细胞/毫升，经培养隔夜，使形成单层细胞后，除去旧有的细胞培养基，加入90μl无抗生素的细胞培养基。取10μl上述(1)中制备的乳酸菌菌液及上清液(SCS)，加入细胞培养盘的各孔洞中，置于37℃，5％CO₂中培养1小时。以(2)所述的猪霍乱沙门氏菌悬浮液，经适当稀释后取出10μl，加入各孔洞内使终浓度约为10⁶CFU/孔，以1000rpm低速离心10分钟使细菌沉降，细胞培养盘移至细胞培养箱培养1小时及2小时后，以磷酸盐缓冲溶液清洗各孔洞五次，以洗去残存于细胞外的E.coli及猪霍乱沙门氏菌菌体后，每个孔洞加入100μl含头孢曲松(ceftriaxone)(100微克/毫升)的BME细胞培养基，置于细胞培养箱静置1小时，以杀灭Int 407细胞胞外的猪霍乱沙门氏菌细菌。再以0.01M PBS清洗各孔洞5次，加入100μl无菌triton X-100(1％)进行10分钟的细胞裂解作用后，以微量吸管剧烈混和各孔洞内的混和液，取出混和液以0.01M PBS进行系列稀释，以营养培养基平板计数法，经培养48小时，计数侵入Int 407细胞内的猪霍乱沙门氏菌菌数。

由结果可得知，本发明的嗜酸乳杆菌对于猪霍乱沙门氏菌的抑制侵入作用，于一小时作用后，可达10²～10³CFU/毫升；于2个小时的猪霍乱沙门氏菌侵入作用后，可抑制超过10³CFU/毫升(图2)。

五、以酶联免疫吸附实验(ELISA)测定TNF-α及IL-6浓度

小鼠受沙门氏菌侵入感染时，第一个反应的细胞为巨噬细胞，巨噬细胞除吞噬作用外，也会分泌一些细胞激素，主要有TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和IL-12，这些细胞激素可以在局部感染组织作用或全身性作用。巨噬细胞在未被激活时，TNF-α的产量极少(Beutler et al.，1986)，革兰氏阴性菌通常以脂多醣(LPS)刺激巨噬细胞(Balkwill et al.，2000)，因此，TNF-α能作为受到沙门氏菌初期感染的重要指标(Nauciel and Espinasse-Maes，1992)，产生的TNF-α在局部作用可以活化血管内皮细胞，增加血管通透性、IgG、补体和细胞的进入，若引起肝脏和脾脏巨噬细胞释放TNF-α至全身，则会造成败血症，这是一种全身性的血管扩张造成大量体液流至组织，造成正常血液无法供应，导致器官衰竭，称为败血性休克。IL-6在局部感染时，可活化淋巴细胞和增加抗体制造，若释放至全身则会发烧和诱导急性期蛋白质的制造，引起系统性的发炎(Hirano，1992)。在发炎反应中，TNF-α在受刺激后15-30分钟内便增加其mRNA的量，而IL-6产生的时间则较晚，因此，测定TNF-α及IL-6的产量可了解整个发炎反应的严重程度。

(一)以酶联免疫吸附实验测定TNF-α的浓度

1.根据Endogen(Woburn，MA.，USA)公司所提供的标准步骤进行：

取100μl的抗老鼠TNF-α单克隆抗体(1.03微克/毫升于吸附缓冲液中)加至ELISA平底盘孔洞内，在室温下静置隔夜(约14至16小时)使其附着(coating)至盘底。去除吸附缓冲液后，每个孔洞加入200μl的阻断缓冲液(以分析缓冲液填塞)，室温下静置1小时后，除去阻断缓冲液，再以清洗缓冲液轻轻冲洗三次。取抗老鼠TNF-α生物素-标记的单克隆抗体(0.25微克/毫升)50μl于孔洞内，再加入50μl的标准品或待测样品(小鼠肝脏磨碎后的血清)，于室温下静置2小时后，倒除孔洞内的混和液，以清洗缓冲液清洗三次后，每个孔洞加入100μl的HRP--共轭化链霉菌抗生物素蛋白(streptavidin)(0.125微克/毫升)，室温下作用30分钟后，以清洗缓冲液清洗五次，以上清洗步骤于完毕后皆必须将96孔洞微量平底盘倒扣于纸巾上，吸去残存液体。最后每个孔洞加入100μl的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)基质溶液，室温下避光作用30分钟使的进行显色反应，最后加入100μl的0.18M硫酸溶液，终止显色反应。以ELISA读计于波长450nm下读取吸光值，并依标准曲线换算TNF-α的浓度。

2.标准曲线的制作

依Endogen公司提供的说明书所建议，以400μl分析缓冲液溶解TNF-α标准品(老鼠TNF-αELISA标准品)(TNF-α标准品于复溶后1小时内使用)，使其浓度为2450pg/毫升，再以分析缓冲液进行2倍连续稀释，依上述分析方法测定各浓度TNF-α标准品波长450nm下的吸光值，将结果制作成标准曲线。

(二)以酶联免疫吸附实验测定IL-6浓度

1.根据Endogen(Woburn，MA.，USA)公司提供的标准步骤进行：

取100μl的抗老鼠IL-6单克隆抗体(2.5微克/毫升)加入ELISA平底盘孔洞内，在室温下静置隔夜(约14至16小时)，使初级抗体吸附至盘底。去除吸附缓冲液后，每个孔洞加入200μl的分析(阻断)缓冲液(4％BSA于PBS中)，室温下静置1小时后，除去阻断缓冲液，以200μl清洗缓冲液(50mM Tris，0.2％Tween-20，pH8.0)轻轻冲洗三次.取50μl的抗老鼠IL-6生物素标记的单克隆抗体(0.25微克/毫升于分析缓冲液中)于孔洞内，再加50μl的标准品或待测样品(小鼠心脏采血的血清)，于室温下静置2小时后，倒除孔洞内的混和液，以清洗缓冲液清洗三次后，每个孔洞加入100μl的HRP-共轭化链霉菌抗生物素蛋白(0.125微克/毫升于分析缓冲液中)，室温下作用30分钟后，以清洗缓冲液清洗五次，以上清洗步骤在完毕后皆必须将96孔洞微量平底盘倒扣于纸巾上，吸去残存液体.最后每个孔洞加入100μl的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)基质溶液，室温下避光作用30分钟使之进行显色反应，最后加入100μl的0.18M硫酸溶液，终止显色反应.以ELISA读计于波长490nm下读取吸光值，并依标准曲线换算IL-6的浓度.

2.标准曲线的制作

依Endogen公司提供的说明书所建议，以400μl分析缓冲液溶解IL-6标准品(老鼠IL-6ELISA标准品)，使其浓度为2450pg/毫升，再以分析缓冲液进行2.5倍连续稀释至38.4pg/毫升，依上述分析方法测定各浓度IL-6标准品于波长490nm下的吸光值，将结果制作成标准曲线。

本研究针对小鼠抑制沙门氏菌较佳的动物来源乳酸菌，将感染3和6天后的肝脏组织的血清检测TNF-α含量，结果显示只喂PBS的小鼠，无法抑制沙门氏菌侵入，所以其发炎指标的TNF-α产量在感染6天后明显增加。LASW抑制沙门氏菌侵入能力最佳，所以其感染6天后的TNF-α含量最低；IL-6的检测亦有相同的结果(图3)。

经上述实施例及参考附图后，应明了本发明并非限于上述这些实施例中。所属技术领域的技术人员在不悖离本发明说明书及权利要求所定义的范围及精神的情况下，当可进行不同变化及改进，亦属本发明的范畴中。

Claims

1.一种嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)LASW，其特征是保藏号为CCTCC NO：M204083，保藏于中国典型培养物保藏中心。

2.一种生菌剂组合物，其特征是包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌LASW。

3.一种饲料组合物，其特征是包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌LASW。

4.一种预防或治疗沙门氏菌、大肠杆菌、志贺氏菌、葡萄球菌感染的医药组合物，其特征是包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌LASW。