CN1791610A

CN1791610A - 类固醇硫酸酯酶抑制剂的雌激素衍生物

Info

Publication number: CN1791610A
Application number: CN 200480013919
Authority: CN
Inventors: M·利斯; A·普罗希特; M·J·里德; S·P·纽曼; S·K·钱德; F·茹尔当; B·V·L·波特
Original assignee: Strix Ltd
Current assignee: Strix Ltd
Priority date: 2003-03-24
Filing date: 2004-02-20
Publication date: 2006-06-21
Anticipated expiration: 2024-02-20
Also published as: CN101260136A; CN101260136B; GB0306717D0; CN100384868C

Abstract

本发明提供一种包含甾族环系统和选自－OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式－L－R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺和烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；且其中甾族环系统A环的2或4位被基团R⁴取代，其中R⁴为烃基。

Description

类固醇硫酸酯酶抑制剂的雌激素衍生物

发明领域

本发明涉及一种化合物。

特别是，本发明涉及一种化合物并涉及一种包含该化合物的药用组合物。本发明也涉及该化合物或组合物(composition)应用于治疗的用途。

发明背景

有证据表明雌激素是涉及促进内分泌-依赖性组织(例如乳腺和子宫内膜)中肿瘤生长的主要促分裂原。虽然患有乳腺癌或未患有乳腺癌的妇女血浆雌激素浓度是类似的，但是乳腺肿瘤中的雌酮和雌二醇水平明显高于正常乳腺组织或血液中的水平。雌激素原位合成被认为是肿瘤中高水平的雌激素的重要因素，因此，雌激素生物合成抑制剂，特别是特异性抑制剂对治疗内分泌-依赖性肿瘤具有潜在的价值。

在过去的二十年中，关注相当多地是在开发芳化酶路径抑制剂上，该路径将雄激素前体雄甾烯二酮转化成雌酮。然而，目前有证据表明雌酮硫酸酯酶(E1-STS)路径，即将雌酮硫酸酯水解成雌酮(E1S至E1)，及芳化酶(即雄甾烯二酮转化成雌酮)可解释乳腺肿瘤中雌激素的产生。

图1和2为显示涉及由雌酮硫酸酯、雌二醇及雄甾烯二酮原位合成雌酮的某些酶的简图。

在图2中，该图示意性地显示了绝经后妇女的雌激素类固醇的来源，″ER″表示雌激素受体，″DHA-S″表示脱氢表雄甾酮-硫酸酯，″Adiol″表示雄甾烯二醇，″E1-STS″表示雌酮硫酸酯酶，″DHA-STS″表示DHA-硫酸酯酶，″Adiol-STS″表示雄甾烯二醇硫酸酯酶，及″17B-HSD″表示雌二醇17B-羟基类固醇脱氢酶。

可以看出，涉及雌激素外围合成的两种主要的酶为芳化酶和雌酮硫酸酯酶。

简而言之，芳化酶将肾上腺皮质大量分泌的雄甾烯二酮转化为雌酮。最近的报导表明某些黄酮能抑制芳化酶的活性。

然而，大量如此形成的雌酮转化成了雌酮硫酸酯(E1S)，并且目前相当数量的证据表明血浆和组织中的E1S作为通过雌酮硫酸酯酶的作用而形成雌酮的储库而起作用。

在这方面，现在相信雌酮硫酸酯酶(E1-STS)路径-即雌酮硫酸酯水解成雌酮(E1S至E1)是乳腺肿瘤中雌激素的主要来源。这一理论得到患有乳腺癌并接受芳化酶抑制剂(例如氨鲁米特和4-羟雄甾烯二酮)治疗的绝经后妇女的血浆雌激素浓度适度降低的支持，并且也得到这些接受芳化酶抑制剂治疗患者的血浆E1S浓度保持相对高这一事实的支持。与未轭合的雌激素(20分钟)相比，血液中E1S的长半衰期(10-12小时)及肝脏、正常及恶性乳腺组织中高水平的类固醇硫酸酯酶活性也倾向于支持这一理论。

因此，通过硫酸酯酶路径在恶性乳腺和子宫内膜组织中形成的雌激素对这些肿瘤中存在的高雌激素浓度起主要作用。

PCT/GB92/01587描述了新类固醇硫酸酯酶抑制剂及含有它们的药用组合物用于治疗雌酮依赖性肿瘤尤其是乳腺癌。这些类固醇硫酸酯酶抑制剂为氨基磺酸酯，例如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，优选雌酮-3-氨基磺酸酯(另外也称为″EMATE″)。EMATE具有以下结构：

已知EMATE是有效的E1-STS抑制剂，它在完整的MCF-7细胞中、以0.1nM浓度显示大于99％的抑制E1-STS活性。EMATE也以时间和浓度依赖性方式抑制E1-STS酶，这表明其作为活性位点导向的灭活剂而起作用。虽然EMATE最初设计为E1-STS抑制，但它也抑制脱氢表雄甾酮硫酸酯酶(DHA-STS)，该酶被认为在调节雌激素甾族化合物雄甾烯二醇的生物合成中起关键作用。目前也有证据表明雄甾烯二醇可能作为乳腺肿瘤生长促进剂起甚至更重要的作用。EMATE在体内也有活性，当经口或皮下给药时，几乎完全抑制大鼠肝脏E1-STS(99％)及DHA-STS(99％)活性。另外，EMATE在大鼠中显示出具有记忆提高作用。对小鼠的研究显示了DHA-STS活性与调节部分免疫反应之间的联系。可认为这也可能在人类中发生。EMATE中的氨基磺酸酯部分的桥接O-原子对抑制活性是重要的。因此，当3-O-原子被其他杂原子替换时，如雌酮-3-N-氨基磺酸酯及雌酮-3-S-氨基磺酸酯，这些类似物为较弱的非时间依赖性灭活剂。

除雌酮外，其他具有雌激素特性的、由绝经后妇女产生的大多数甾族化合物为雄甾烯二醇(见图2)。

尽管是雄激素，雄甾烯二醇可结合至雌激素受体(ER)并可刺激ER阳性乳腺癌细胞的生长及致癌物质诱发的大鼠乳腺肿瘤的生长。重要的是，90％绝经后妇女所产生的雄甾烯二醇来源于由肾上腺皮质大量分泌的雄激素脱氢表雄甾酮硫酸酯(DHA-S)。DHA-S由DHA硫酸酯酶转化为DHA，该硫酸酯酶可与负责水解E1S的雌酮硫酸酯酶相同或不同。

在过去的10-15年中，已经进行了相当多的研究以开发有效的芳化酶抑制剂，其中的一些现在已上市。然而，在患乳腺癌并接受芳化酶抑制剂治疗的绝经后妇女的最近三个报告中，血浆E1S浓度保持在400-1000pg/ml之间。

因此雌激素原位合成被认为对肿瘤中高水平的雌激素起重要作用，因此特异性雌激素生物合成抑制剂对治疗内分泌-依赖性肿瘤具有潜在的价值。

此外，即使通过硫酸酯酶路径在恶性乳腺和子宫内膜组织中形成的雌激素对高雌激素浓度起主要作用，仍有其他对雌激素体内合成起作用的酶促路径。

发明概述方面

本发明基于以下的意外发现：D环具有选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一基团的甾族化合物可用作有效的类固醇硫酸酯酶(STS)抑制剂；细胞周期调节剂；细胞凋亡调节剂；细胞生长调节剂；葡萄糖摄取预防和/或抑制剂；肿瘤血管生成预防剂或抑制剂；微管破坏剂；和/或细胞凋亡诱导剂。

本发明化合物可包含其他取代基。这些其他取代基例如可进一步增强本发明化合物的活性和/或增加稳定性(在体外和/或在体内)。

发明详述方面

根据本发明的一个方面，提供了一种包含甾族环系统及任选基团R¹的化合物，任选基团R¹选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；其中甾族环系统A环在2或4位被基团R⁴取代，其中R⁴为烃基(hydrocarbyl)。

根据本发明的一个方面，提供了一种包含i)如本文所定义的化合物；及ii)生物反应调节剂的组合物。

根据本发明的一个方面，提供了一种药用组合物，该组合物包含(a)(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，及(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂。

根据本发明的一个方面，提供了用于药物的(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备预防和/或抑制肿瘤生长的药物中的用途。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备用于治疗病症或疾病的药物中的用途，所述病症或疾病与类固醇硫酸酯酶(STS)活性；细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡中一种或多种相关。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备用于治疗病症或疾病的药物中的用途，所述病症或疾病与反向的(adverse)类固醇硫酸酯酶(STS)活性；细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡中一种或多种相关。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备用于以下一种或多种情况的药物中的用途：抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；及诱导细胞凋亡。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性药物中的用途。

根据本发明的一个方面，提供了(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，在制备调节细胞生长药物中的用途。

根据本发明的一个方面，提供了一种治疗方法，该方法包括给予有治疗需要的患者(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物。

根据本发明的一个方面，提供了一种治疗方法用于抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和/或诱导细胞凋亡，该方法包括给予有治疗需要的患者(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物。

根据本发明的一个方面，提供了一种方法，该方法包括(a)用一种或多种本文所定义的侯选化合物进行测试以下情况中的一种或多种：类固醇硫酸酯酶(STS)抑制；细胞周期调节；细胞凋亡调节；细胞生长调节；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成预防和/或抑制；微管破坏；及细胞凋亡诱导；(b)确定是否所述侯选化合物中一种或多种能实现以下情况中的一种或多种：类固醇硫酸酯酶(STS)抑制；细胞周期调节；细胞凋亡调节；细胞生长调节；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成预防和/或抑制；微管破坏；及细胞凋亡诱导；及(c)选择一种或多种能实现以下情况中一种或多种的所述侯选化合物：类固醇硫酸酯酶(STS)抑制；细胞周期调节；细胞凋亡调节；细胞生长调节；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成预防和/或抑制；微管破坏；及细胞凋亡诱导。

在任一种本发明方法中，可存在一个或多个另外步骤。例如，方法也可包括修饰所确定的侯选化合物的步骤(例如通过化学和/或酶技术)及测试该修饰化合物的以下情况中一种或多种的任选另外步骤：类固醇硫酸酯酶(STS)抑制；细胞周期调节；细胞凋亡调节；细胞生长调节；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成预防和/或抑制；微管破坏；及细胞凋亡诱导。通过进一步的实例，该方法也可包括确定所鉴定侯选化合物结构的步骤(例如通过使用结晶技术)及然后进行计算机模拟研究-例如为进一步增加其活性。因此，本发明也包括对所述鉴定侯选化合物具有资料组的计算机(例如结晶学调节)。本发明也包括提供用于计算机筛选分析-例如酶和/或蛋白质结合研究所鉴定侯选化合物。

根据本发明的一个方面，提供了由本发明方法鉴定的化合物。

本发明也包括本发明的新化合物(例如本文中所提出的那些)，以及其制备方法(例如本文中所提出的方法)及用于那些方法中的新中间体(例如本文中所提出的那些)。

广义的方面

根据本发明一个广义方面，提供了化合物在制备用于治疗与以下情况中一种或多种相关的病症或疾病的药物中的用途：细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明一个广义方面，提供了组合物在制备用于治疗与以下情况中一种或多种相关的病症或疾病的药物中的用途：细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明另一个广义方面，提供了化合物在制备用于治疗病症或疾病的药物中的用途，所述病症或疾病与反向的以下情况中一种或多种相关：细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明另一个广义方面，提供了组合物在制备用于治疗病症或疾病的药物中的用途，所述病症或疾病与反向的以下情况中一种或多种相关：细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；及细胞凋亡；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明再一个广义方面，提供了化合物在制备用于以下情况中一种或多种的药物中的用途：调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和诱导细胞凋亡；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明再一个广义方面，提供了组合物在制备用于以下情况中一种或多种的药物中的用途：调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和诱导细胞凋亡；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明一个广义方面，提供了化合物在制备用于调节细胞生长药物中的用途；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明一个广义方面，提供了组合物在制备用于调节细胞生长药物中的用途；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明一个广义方面，提供了一种治疗方法用于调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和/或诱导细胞凋亡；该方法包括给予有治疗需要的患者化合物，该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明一个广义方面，提供了一种治疗方法用于调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和/或诱导细胞凋亡；该方法包括给予有治疗需要的患者组合物，该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明一个广义方面，提供了化合物在制备用于治疗与碳酸酐酶相关的病症或疾病的药物中的用途；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明一个广义方面，提供了组合物在制备用于治疗与碳酸酐酶相关的病症或疾病的药物中的用途；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明另一个广义方面，提供了化合物在制备用于治疗与反向的碳酸酐酶活性相关的病症或疾病的药物中的用途；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明另一个广义方面，提供了组合物在制备用于治疗与反向的碳酸酐酶活性相关的病症或疾病的药物中的用途；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明再一个广义方面，提供了化合物在制备用于调节碳酸酐酶活性药物中的用途；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明再一个广义方面，提供了组合物在制备用于调节碳酸酐酶活性药物中的用途；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

根据本发明一个广义方面，提供了一种用于调节碳酸酐酶活性的治疗方法，该方法包括给予有治疗需要的患者化合物；其中该化合物包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在。

根据本发明一个广义方面，提供了一种用于调节碳酸酐酶活性的治疗方法，该方法包括给予有治疗需要的患者组合物；其中该组合物包含i)包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；及ii)生物反应调节剂。

在这些广义方面中，优选R¹、R²、R³及L如本文所定义。

为了便于参考，现在将本发明的这些及更多方面按合适的小节标题讨论。然而，各小节中的内容不必限定于各特定的小节。

一些优势

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以调节细胞周期。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以调节细胞凋亡。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以调节细胞生长。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以预防和/或抑制肿瘤血管生成。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可以破坏微管。

在这方面，微管与微丝一起及中间丝体形成细胞的细胞骨架系统的一部分。微管负责细胞的许多运动-实例，包括纤毛及鞭毛的搏动和在细胞质中运输膜囊。所有这些运动由微管的聚合及解聚或微管动力蛋白动素和驱动蛋白的作用产生。一些其他细胞运动，例如在减数分裂和有丝分裂期间染色体的排列和分离，由两种机制产生。微管也指引细胞运动，但在一些情况下，微管纯粹具有结构功能。

微管由α-微管蛋白和β-微管蛋白单体的异源二聚体亚单位组成。有两种微管群体：稳定、寿命长的微管和动态、寿命短的微管。当微管结构需要迅速装配和拆卸时发现动态微管。例如，在有丝分裂期间，界面细胞的胞质微管网络特征消失而其中的微管蛋白往往形成相等地将染色体分配给子细胞的梭形装置。当有丝分裂完成，该梭状物分解并且重新形成界面微管网络。

抑制有丝分裂的药物提供在细胞中操纵微管的有用手段。三种药物：秋水仙碱、长春碱和泰素-均由植物纯化而来-已证实为微管功能的有力探针，部分因为它们仅结合于微管蛋白或微管而不结合于其他蛋白，且也因为可以容易地控制它们在细胞中的浓度。

由于它们对有丝分裂的作用，微管抑制剂已广泛地用于治疗疾病且最近用作抗癌药物，因为阻断梭状物的形成将优先抑制如癌细胞的迅速分裂的细胞。极有效的抗卵巢癌药物为泰素。在卵巢癌细胞中，进行迅速的细胞分裂，有丝分裂被泰素治疗阻断而由完整微管执行的其他功能不受影响。微管的全面综述可见″Molecular Cell Biology″(Ed：Lodish等1995 WH Freeman and Co.New York pp 1051-1122)。

本发明的一个关键优势为本发明化合物可诱导细胞凋亡。

细胞凋亡由MT-靶向药物诱导，该过程可涉及细胞凋亡调节剂bcl-2蛋白的磷酸化(及失活)(Halder，Cancer Res.57：229，1997)。

本发明基于化合物提供癌症的有效治疗这一意外的发现。

本发明化合物的另一个优势为它们在体内可能有效。

一些本发明化合物可为非雌激素化合物。此处，术语“非雌激素”指未显示或基本未显示雌激素活性。此处，术语“非雌激素”指未显示或基本未显示全身性雌激素活性，例如由方案4所确定的活性。

对一些应用来说，这类化合物具有雌激素作用。

另一个优势为一些化合物可能不能被代谢成显示或诱导激素活性的化合物。

对一些应用来说，优选这类化合物具有可逆作用。

对一些应用来说，优选这类化合物具有不可逆作用。

一些本发明化合物的优势也在于它们可能口服有效。

一些本发明化合物可用于预防和/或治疗癌症例如乳腺癌以及(或者)非恶性病症，例如预防和/或治疗炎性病症-例如与以下病症中任何一种或多种相关的病症：自身免疫性疾病，包括例如类风湿性关节炎、I型和II型糖尿病、全身性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、甲状腺炎、脉管炎、溃疡性结肠炎及节段性回肠炎、皮肤病例如痤疮、银屑病及接触性皮炎；移植物抗宿主病；湿疹；哮喘及移植后器官排斥。当药物可能需要从较小年龄开始服用时本发明化合物特别有用。

在一个实施方案中，本发明化合物用于乳腺癌的治疗。

因此，除了治疗内分泌依赖性癌症外，例如治疗自身免疫性疾病，一些本发明化合物也认为具有治疗用途。

为了便于参考，现将本发明的这些及更多方面按合适的小节标题讨论。然而，各小节下的内容不必限于各特定的小节。

优选的方面

化合物

如上所述，本发明提供一种包含甾族环系统及选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团R¹的化合物；其中甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；其中甾族环系统A环在2或4位被基团R⁴取代，其中R⁴为烃基。

在一个优选的方面中，化合物能实现以下情况中一种或多种：抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和诱导细胞凋亡。

甾族环系统

本发明化合物具有甾环组成部分-也就是说具有环戊二烯并(cyclopentano)菲骨架或其生物电子等排体。

正如在本领域众所周知的那样，典型的甾族环结构具有以下通式：

在上述结构式中，以常规方式将环标记并编号。

一方面，该甾族环结构可含有任何一个或多个C、H、O、N、P、卤素(包括Cl、Br及I)、S和P。

该甾族环结构中至少一种环状基团可为杂环基团(杂环)或非杂环基团。

该甾族环结构中至少一种环状基团可为饱和环结构或不饱和环结构(例如芳基)。

优选该甾族环结构中至少一种环状基团为芳环。

生物电子等排体的实例为当环A、B、C及D中任何一个或多个为杂环环和/或当环A、B、C及D中任何一个或多个被取代和/或当环A、B、C及D中任何一个或多个被修饰时；但其中生物电子等排体具有甾族化合物特性。

在这方面，优选的甾族环结构的结构可表示为：

其中环A′、B′、C′及D′各自独立代表杂环环或非杂环环，这类环可独立为取代或未取代的饱和或不饱和的。

作为实例，环A’、B’、C’及D’中任何一个或多个可独立被合适的基团取代，合适的基团有例如烷基、烯丙基、羟基、卤基、烃基、氧基烃基等。

本文中所使用的术语“烃基”指至少包含C和H的基团并且可任选包含一个或多个其他合适的取代基。这类取代基的实例可包括卤基-、烷氧基-、硝基-、碳氢化合物(hydrocarbon)基团、N-酰基、环状基团等。除取代基可能为环状基团外，取代基的组合可形成环状基团。如果烃基包含多于一个C，则那些碳不必相互连接。例如，至少两个碳可通过合适的元素或基团连接。因此，烃基可含有杂原子。合适的杂原子对本领域技术人员来讲是显而易见的，且包括例如硫、氮和氧。

在本发明的一个优选实施方案中，烃基为碳氢化合物基团。

此处术语“碳氢化合物”指任何一种烷基、烯基、炔基、酰基，这类基团可为直链、支链或环状，或指芳基。术语碳氢化合物也包括其中它们任选被取代的那些基团。如果碳氢化合物为其中具有取代基的支链结构，则该取代基可在碳氢化合物主链上或在支链上；或者这些取代基可在碳氢化合物的主链上及在支链上。

在本发明的一个优选实施方案中，烃基为氧基烃基。

本文中所使用的术语“氧基烃基”指至少包含C、H及O的基团并且可任选包含一个或多个其他合适的取代基。这类取代基的实例可包括卤基-、烷氧基-、硝基-、烷基、环状基团等。除取代基可能为环状基团外，取代基的组合可形成环状基团。如果氧基烃基包含多于一个C，则那些碳不必相互连接。例如，至少两个碳可通过合适的元素或基团连接。因此，氧基烃基可含有杂原子。合适的杂原子对本领域技术人员来讲是显而易见的，且包括例如硫和氮。

在本发明的一个优选实施方案中，氧基烃基为氧基碳氢化合物基团。

此处术语“氧基碳氢化合物”指任何一种烷氧基、氧基烯基、氧基炔基，这类基团可为直链、支链或环状，或指氧基芳基。术语氧基碳氢化合物也包括其中它们任选被取代的那些基团。如果氧基碳氢化合物为其中具有取代基的支链结构，则该取代基可在碳氢化合物主链上或在支链上；或者这些取代基可在碳氢化合物的主链上及在支链上。

优选的氧基烃基为烷氧基。优选氧基烃基具有式C_1-6O(例如C_1-3O)。

D′的实例为具有至少一个取代基的五元或六元非杂环环。

在一个优选的实施方案中，环D′被乙炔基取代。

如果环A′、B′、C′及D′中任何一个为杂环环，则优选该杂环环包含C原子与至少一个N原子和/或至少一个O原子的组合。其他杂环原子可在环中存在。

本发明化合物合适的、优选的甾体核环A′-D′的实例包括雌酮及脱氢表雄甾酮的环A-D。

本发明化合物优选的甾体核环A′-D′包括下列化合物的环A-D：

雌酮及取代雌酮，即：

雌酮

2-OH-雌酮

2-烷氧基-雌酮(例如C_1-6烷氧基-雌酮，例如2-甲氧基-雌酮)

4-OH-雌酮

6α-OH-雌酮

7α-OH-雌酮

16α-OH-雌酮

16β-OH-雌酮

雌二醇及取代雌二醇，即：

2-OH-17β-雌二醇

2-烷氧基-17β-雌二醇(例如C_1-6烷氧基-17β-雌二醇，例如2-甲氧基-17β-雌二醇)

4-OH-17β-雌二醇

6α-OH-17β-雌二醇

7α-OH-17β-雌二醇

2-OH-17α-雌二醇

2-烷氧基-17α-雌二醇(例如C_1-6烷氧基-17α-雌二醇，例如2-甲氧基-17α-雌二醇)

4-OH-17α-雌二醇

6α-OH-17α-雌二醇

7α-OH-17α-雌二醇

16α-OH-17α-雌二醇

16α-OH-17β-雌二醇

16β-OH-17α-雌二醇

16β-OH-17β-雌二醇

17α-雌二醇

17β-雌二醇

17α-乙炔基-17β-雌二醇

17β-乙炔基-17α-雌二醇

雌三醇及取代雌三醇，即：

雌三醇

2-OH-雌三醇

2-烷氧基-雌三醇(例如C_1-6烷氧基-雌三醇，例如2-甲氧基-雌三醇)

4-OH-雌三醇

6α-OH-雌三醇

7α-OH-雌三醇

脱氢表雄甾酮及取代脱氢表雄甾酮，即：

脱氢表雄甾酮

6α-OH-脱氢表雄甾酮

7α-OH-脱氢表雄甾酮

16α-OH-脱氢表雄甾酮

16β-OH-脱氢表雄甾酮

在通用术语中环系统A′B′C′D′可含有各种无干扰取代基。特别是，环系统A′B′C′D′可含有一个或多个羟基、烷基尤其是低级(C₁-C₆)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其他戊基异构体、及正己基和其他己基异构体，烷氧基尤其是低级(C₁-C₆)烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等，炔基例如乙炔基，或卤素例如氟取代基。

在一个替代用实施方案中，多环化合物可不含或基于甾体核。在这方面，多环化合物可含或基于非甾族环系统-例如二乙基己烯雌酚、己烯雌酚、香豆素及其他环系统。其他合适的用于或用作本发明组合物的非甾族化合物可见于US-A-5567831。

R¹和R²

在一个优选的方面中，化合物为式I化合物

式I

其中R¹为选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的任选基团。

在一个优选的方面中，化合物为式II化合物

式II

在一个优选的方面中，化合物为式III化合物

式III

在一个优选的方面中，化合物为式IV化合物

式IV

将容易地理解式I-IV中甾族环系统的A环另外被基团R⁴在2或4位取代。

R ¹

本领域技术人员将认识到：R¹为可存在或可不存在的任选基团。在一个优选的方面中，R¹存在。在该方面中，R¹为选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种的基团。

氨基磺酸酯基

一方面，R¹为任选的氨基磺酸酯基。

术语“氨基磺酸酯”包括氨基磺酸的酯、或氨基磺酸N-取代衍生物的酯或它们的盐。

一方面，R¹为氨基磺酸酯基。在这方面，本发明化合物可称为氨基磺酸酯化合物。

优选R¹的氨基磺酸酯基为下式的氨基磺酸酯基

其中R⁵和R⁶独立选自H或烃基。

优选R⁵和R⁶独立选自H、烷基、环烷基、烯基、酰基和芳基，或其组合，或一起代表亚烷基，其中该或各烷基、环烷基、烯基或芳基任选含一个或多个杂原子或基团。

当被取代时，本发明的N-取代化合物可含一个或两个N-烷基、N-烯基、N-环烷基、N-酰基或N-芳基取代基，优选含或各自含最多10个碳原子。当R⁵和/或R⁶为烷基时，优选的值为其中R⁵和R⁶各自独立选自含有1-5个碳原子的低级烷基的那些值，即甲基、乙基、丙基等。优选R⁵和R⁶均为甲基。当R⁵和/或R⁶为芳基时，典型值为苯基和甲苯基(-PhCH₃；邻-、间-或对-)。当R⁵和R⁶代表环烷基时，典型值为环丙基、环戊基、环己基等。当结合在一起时R⁵和R⁶典型地代表提供4-6个碳原子链的亚烷基，任选插入一个或多个杂原子或基团例如-O-或-NH-以提供5-、6-或7-元杂环，例如吗啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。

在烷基、环烷基、烯基、酰基和芳基值中，我们包括取代的基团，这类取代的基团含有如本文中不干扰被讨论化合物硫酸酯酶抑制活性的一个或多个基团的取代基。示例性的无干扰取代基包括羟基、氨基、卤基、烷氧基、烷基和芳基。烃基的非限定性实例为酰基。

在一些实施方案中，氨基磺酸酯基可通过与甾族环系统中或甾族环系统上的一个或多个原子稠合(或连接)而形成环结构。

在一些实施方案中，可有多于一个氨基磺酸酯基。作为实例，可有两个氨基磺酸酯基(即双-氨基磺酸酯化合物)。

在一些优选的实施方案中，R⁵和R⁶中至少一个为H。

在一些优选的实施方案中，R⁵和R⁶各自为H。

在一些优选的实施方案中，R¹为氨基磺酸酯基且该化合物适合用作雌酮硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)抑制剂。

在一些优选的实施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，则该硫酸酯化合物将被类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)水解。

在一些优选的实施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，并且与类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起于pH7.4及37℃温育，将提供小于50mM的K_m值。

在一些优选的实施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，并且与类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起于pH7.4及37℃温育，将提供小于50μM的K_m值。

膦酸酯基

如果本发明化合物包含膦酸酯基，则该本发明化合物称为膦酸酯化合物。

代表性地，膦酸酯基具有式：

(R¹⁸)-P(O)(OH)-O-

其中优选R¹⁸为H、烷基、环烷基、烯基、酰基或芳基或其组合，其中该或各烷基、环烷基、烯基或芳基任选含一个或多个杂原子或基团。

当R¹⁸为烷基时，R¹⁸可为含有1-6个碳原子的低级烷基，即甲基、乙基、丙基等。作为实例，R¹⁸可为甲基。当R¹⁸为芳基时，典型值为苯基和甲苯基(PhCH₃；邻-、间-、对-)。当R¹⁸代表环烷基时，典型值为环丙基、环戊基、环己基等。R¹⁸甚至可包含提供4-6个碳原子链的亚烷基，任选插入一个或多个杂原子或基团，例如以提供5元杂环，例如吗啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。

在烷基、环烷基、烯基、酰基和芳基值中包括取代的基团，这类取代的基团含有如本文中不干扰被讨论化合物硫酸酯酶抑制活性的一个或多个基团的取代基。示例性的无干扰取代基包括羟基、氨基、卤基、烷氧基、烷基和芳基。

在一些实施方案中，膦酸酯基可与甾族环系统中或甾族环系统上的一个或多个原子稠合(或连接)而形成环结构。

在一些实施方案中，可有多于一个膦酸酯基。作为实例，可有两个膦酸酯基(即双-膦酸酯化合物)。如果这些化合物基于甾体核，优选第二个(或另外的至少一个)膦酸酯基位于甾体核的17位。这些基团不必相同。

硫代膦酸酯基

如果本发明化合物包含硫代膦酸酯基，则该本发明化合物称为硫代膦酸酯化合物。

典型地，硫代膦酸酯基具有式：

(R¹⁹)-P(S)(OH)-O-

其中优选R¹⁹为H、烷基、环烷基、烯基、酰基或芳基或其组合，其中该或各烷基、环烷基、烯基或芳基任选含一个或多个杂原子或基团。

当R¹⁹为烷基时，R¹⁹可为含有1-6个碳原子的低级烷基，即甲基、乙基、丙基等。作为实例，R¹⁹可为甲基。当R¹⁹为芳基时，典型值为苯基和甲苯基(PhCH₃；邻-、间-、对-)。当R¹⁹代表环烷基时，典型值为环丙基、环戊基、环己基等。R¹⁹甚至可包含提供4-6个碳原子链的亚烷基，任选插入一个或多个杂原子或基团，例如以提供5元杂环，例如吗啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。

在一些实施方案中，硫代膦酸酯基可与甾族环系统中或甾族环系统上的一个或多个原子稠合(或连接)而形成环结构。

在一些实施方案中，可有多于一个硫代膦酸酯基。作为实例，可有两个硫代膦酸酯基(即双-硫代膦酸酯化合物)。如果这些化合物基于甾体核，优选第二个(或另外的至少一种)硫代膦酸酯基位于甾体核的17位。这些基团不必相同。

磺酸酯基

如果本发明化合物包含磺酸酯基，则该本发明化合物称为磺酸酯化合物。

典型地，磺酸酯基具有式：

(R²⁰)-S(O)(O)-O-

其中优选R²⁰为H、烷基、环烷基、烯基、酰基或芳基或其组合，其中该或各烷基、环烷基、烯基或芳基任选含一个或多个杂原子或基团。

当R²⁰为烷基时，R²⁰可为含有1-6个碳原子的低级烷基，即甲基、乙基、丙基等。作为实例，R²⁰可为甲基。当R²⁰为芳基时，典型值为苯基和甲苯基(PhCH₃；邻-、间-、对-)。当R²⁰代表环烷基时，典型值为环丙基、环戊基、环己基等。R²⁰甚至可包含提供4-6个碳原子链的亚烷基，任选插入一个或多个杂原子或基团，例如以提供5元杂环，例如吗啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。

在一些实施方案中，磺酸酯基可与甾族环系统中或甾族环系统上的一个或多个原子稠合(或连接)而形成环结构。

在一些实施方案中，可有多于一个磺酸酯基。作为实例，可有两个磺酸酯基(即双-磺酸酯化合物)。如果这些化合物基于甾体核，优选第二个(或另外的至少一个)磺酸酯基位于甾体核的17位。这些基团不必相同。

其他取代基

本发明化合物可含有除了式I的那些取代基之外的取代基。作为实例，这些其他取代基可为一种或多种以下取代基：一个或多个氨基磺酸酯基、一个或多个膦酸酯基、一个或多个硫代膦酸酯基、一个或多个磺酸酯基、一个或多个磺酰胺基、一个或多个卤基、一个或多个O基团、一个或多个羟基、一个或多个氨基、一个或多个含硫基团、一个或多个烃基-例如氧基烃基。

R ²

本发明化合物甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团。

在一些优选的实施方案中，R²为式-R³，换句话说，无基团L存在。

在一些优选的方面中，基团R²为α构象(conformation)。优选基团R²在D环的17位上为α构象。

在一些实施方案中L为烃基。在一些实施方案中L为碳氢化合物基团，例如亚烷基。

L可典型地为C_1-10亚烷基、C_1-5亚烷基、C₁或C₂亚烷基。

R ³

如上所讨论，R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基团。在一些优选的方面中，R³选自腈、醇、酯、醚、胺及烯基。优选R³为或包含腈基。更优选R³为腈基。

R³可为环状基团或非环状基团。

当R³为环状基团时，可形成与甾族化合物D环稠合或不与甾族化合物D环稠合的环。当R³形成与甾族化合物的D环稠合的环状基团时，优选R³形成连接D环邻近部分的环，更优选R³形成连接D环16和17位的环。

在一些优选的方面中，R³选自式＝CH₂、＝CH-CH₃、＝C(CN)₂、＝C(CH₃)(CN)及-(R⁷)_n(CR¹⁴R¹⁵)_pR⁸，其中n为0或1，p为整数，R⁷选自＝CH-、-O-及NR¹³；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂；R⁹选自H及烃基，R¹⁰选自H及烃基；R¹¹及R¹²各自独立选自H及烃基；R¹³选自H及烃基，R¹⁴及R¹⁵各自独立选自H及烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H及烃基，R¹⁷选自H及烃基。

在一些优选的方面中，R³为式-(R⁷)_n(CR¹⁴R¹⁵)_pR⁸基团，其中n为0或1，p为整数，R⁷选自＝CH-、-O-及NR¹³；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂；R⁹选自H及烃基，R¹⁰选自H及烃基；R¹¹及R¹²各自独立选自H及烃基；R¹³选自H及烃基，R¹⁴及R¹⁵各自独立选自H及烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H及烃基，R¹⁷选自H及烃基。

在一些优选的方面中，R³为式-(CR¹⁴R¹⁵)_pR⁸的基团，p为整数，R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂；R⁹选自H及烃基，R¹⁰选自H及烃基；R¹¹及R¹²各自独立选自H及烃基；R¹⁴及R¹⁵各自独立选自H及烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H及烃基，R¹⁷选自H及烃基。

在一些优选的方面中，R³为式-(CH₂)_pR⁸的基团，p为整数；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂；R⁹选自H及烃基，R¹⁰选自H及烃基；R¹¹及R¹²各自独立选自H及烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H及烃基，R¹⁷选自H及烃基。

在一些优选的方面中，R³为式-(R⁷)_nR⁸的基团，其中n为0或1，R⁷选自＝CH-、-O-及NR¹³；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂；R⁹选自H及烃基，R¹⁰选自H及烃基；R¹¹及R¹²各自独立选自H及烃基；R¹³选自H及烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H及烃基，R¹⁷选自H及烃基。

P可为任何整数。P可为0-20。P可为0-10。典型地p为0-5。一方面p为0、1或2。

q可为任何整数。q可为0-20。q可为0-10。典型地q为0-5。一方面q为0、1或2。

R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH及-CH＝CH₂。在一个优选的方面中，R⁸为-SO₂-R⁹。在一个优选的方面中，R⁸为-SO₂-R⁹，其中R⁹为烃基。优选在该方面中，R⁷为-O-，n为1，p为0，以使R³为-O-SO₂R⁹。

R⁹选自H及烃基。一方面R⁹为烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R⁹选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

一方面R⁹选自H及C_1-10烷基。一方面R⁹为C_1-10烷基。一方面R⁹选自H及C_1-5烷基。一方面R⁹为C_1-5烷基。一方面R⁹选自H及C_1-3烷基。一方面R⁹为C_1-3烷基。优选R⁹为-CH₂CH₃。

一方面R⁹为取代或未取代的胺。当被取代时，本发明N-取代化合物可含一个或两个N-烷基、N-烯基、N-环烷基、N-酰基或N-芳基取代基，优选含有或各自含有最多10个碳原子。在一个优选的方面中，R⁹为未取代的胺，即R⁹为NH₂。

R¹⁰选自H及烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R¹⁰选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

一方面R¹⁰选自H及C_1-10烷基。一方面R¹⁰选自H及C_1-5烷基。一方面R¹⁰选自H及C_1-3烷基。一方面R¹⁰为C_1-3烷基。优选R¹⁰为-H或-CH₃。

如前所提及，NR¹¹R¹²的R¹¹和R¹²各自独立选自H及烃基。当被取代时，本发明N-取代化合物可含一个或两个N-烷基、N-烯基、N-环烷基、N-酰基或N-芳基取代基，优选含有或各自含有最多10个碳原子。当R¹¹和/或R¹²为烷基时，优选的值为其中R¹¹和R¹²各自独立选自含有1-5个碳原子的低级烷基的那些值，即甲基、乙基、丙基等。优选R¹¹和R¹²两者为甲基。当R¹¹和/或R¹²为芳基时，典型值为苯基和甲苯基(-PhCH₃；邻-、间-或对-)。当R¹¹和R¹²代表环烷基时，典型值为环丙基、环戊基、环己基等。当结合在一起时R¹¹和R¹²典型地代表提供4-6个碳原子链的亚烷基，任选插入一个或多个杂原子或基团，例如-O-或-NH-，以提供5-、6-或7-元杂环，例如吗啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。

一方面R¹¹和R¹²各自独立为烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R¹¹和R¹²各自独立选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

一方面R¹¹和R¹²各自独立选自H及C_1-10烷基。一方面R¹¹和R¹²各自独立为C_1-10烷基。一方面R¹¹和R¹²各自独立选自H及C_1-5烷基。一方面R¹¹和R¹²各自独立为C_1-5烷基。一方面R¹¹和R¹²各自独立选自H及C_1-3烷基。一方面R¹¹和R¹²各自独立为C_1-3烷基。优选R¹¹和R¹²独立选自-H或-CH₃。

R¹³选自H及烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R¹³选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之

一方面R¹³选自H及C_1-10烷基。一方面R¹³选自H及C_1-5烷基。一方面R¹³选自H及C_1-3烷基。一方面R¹³为C_1-3烷基。优选R¹³为-H。

R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H及烃基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立为烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H及C₁-₁₀烷基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立为C_1-10烷基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H及C_1-5烷基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立为C_1-5烷基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H及C_1-3烷基。一方面R¹⁴和R¹⁵各自独立为C_1-3烷基。优选R¹⁴和R¹⁵独立选自-H和-CH₃。

X选自O或S。一方面X为S。一方面X为O。

R¹⁶选自H及烃基。在本发明的一个优选实施方案中，R¹⁶选自H、C₁-C₂₀烃基、C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₂₀碳氢化合物、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₂₀烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

一方面R¹⁶选自H及C_1-10烷基。一方面R¹⁶选自H及C_1-5烷基。一方面R¹⁶选自H及C_1-3烷基。一方面R¹⁶为C_1-3烷基。优选R¹⁶为-H。

在一个非常优选的方面中，R³为选自＝CHC(O)OEt、-CH₂C(O)OEt、＝CHCH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂C≡N、＝CHC≡N、-NHCH₂CH₂N(Me)₂、-OCH₂CH₂-OMe的基团。

特别优选的R³基团选自下面所给出的D环取代

一方面R³可选自下面所示的D取代，其中各Q独立选自O、S、NH及CH₂，并且y为3-8的整数，优选为5、6、7或8。

R ⁴

如前所提及，甾族环系统的A环由R⁴基团取代，其中R⁴为烃基。

在一个优选的方面中，R⁴为氧基烃基。

如上所讨论，本文中所使用的、关于R⁴的术语“氧基烃基”指至少包含C、H及O的基团，并且可任选包含一个或多个其他合适的取代基。这类取代基的实例可包括卤基-、烷氧基-、硝基-、烷基、环状基团等。除取代基可能为环状基团外，取代基的组合可形成环状基团。如果氧基烃基包含多于一个C，则那些碳不必相互连接。例如，至少两个碳可通过合适的元素或基团连接。因此，氧基烃基可含有杂原子。合适的杂原子对本领域技术人员来讲是显而易见的，且包括例如硫和氮。

在本发明的一个优选实施方案中，R⁴为氧基碳氢化合物基团。

此处术语“氧基碳氢化合物”指或R⁴为烷氧基、氧基烯基、氧基炔基中任何一种，这些基团可为直链、支链或环状，或为氧基芳基。术语氧基碳氢化合物也包括其中它们任选被取代的那些基团。如果氧基碳氢化合物为其中具有取代基的支链结构，则该取代基可在碳氢化合物主链上或在支链上；或者这些取代基可在碳氢化合物的主链上及在支链上。

优选氧基烃基R⁴为烷氧基。优选氧基烃基R⁴为式C_1-6O(例如C_1-3O)基团。优选氧基烃基R⁴为式-O(CH₂)_1-10CH₃、-O(CH₂)_1-5CH₃、-O(CH₂)_1-2CH₃基团。在一个非常优选的方面中，R⁴为甲氧基。

优选氧基烃基R⁴为醚基。优选氧基烃基R⁴为式C_1-6OC_1-6(例如C_1-3OC_1-3)基团。优选氧基烃基R⁴为式-(CH₂)_1-10O(CH₂)_1-10CH₃、-(CH₂)_1-5O(CH₂)_1-5CH₃、-(CH₂)_1-2O(CH₂)_1-2CH₃基团。在非常优选的方面中，R⁴为-CH₂OCH₃。

在本发明的一个优选实施方案中，R⁴为碳氢化合物基团。优选R⁴为烷基。优选该烷基为C_1-6烷基(例如C_1-3烷基)。优选烃基R⁴为式-(CH₂)_1-10CH₃、-(CH₂)_1-5CH₃、-(CH₂)_1-2CH₃基团。在非常优选的方面中，R⁴为乙基。

在本发明的一个优选实施方案中，R⁴选自C₁-C₁₀烃基、C₁-C₅烃基、C₁-C₃烃基、碳氢化合物基团、C₁-C₁₀碳氢化合物、C₁-C₅碳氢化合物、C₁-C₃碳氢化合物、烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₅烷基及C₁-C₃烷基之一。

在本发明的一个优选实施方案中，R⁴为烃基硫基。

术语“烃基硫基”指至少包含烃基(如本文中所定义)及硫的基团。该硫基可任选被氧化。优选烃基硫基为式-S-烃基，其中烃基如本文所描述。

本文中所使用的、关于R⁴的术语“烃基硫基”指至少包含C、H及S的基团，并且可任选包含一个或多个其他合适的取代基。这类取代基的实例可包括卤基-、烷氧基-、硝基-、烷基、环状基团等。除取代基可能为环状基团外，取代基的组合可形成环状基团。如果烃基硫基包含多于一个C，则那些碳不必相互连接。例如，至少两个碳可通过合适的元素或基团连接。因此，烃基硫基还可含有杂原子。合适的杂原子对本领域技术人员来讲是显而易见的，且包括例如氮。

在本发明的一个优选实施方案中，R⁴为碳氢化合物硫基。本文中所使用的、关于R⁴的术语“碳氢化合物硫基”指由C、H及S组成的基团。优选碳氢化合物硫基为式-S-碳氢化合物，其中碳氢化合物如本文所描述。

优选碳氢化合物硫基R⁴为式C_1-6S(例如C_1-3S)。优选氧基烃基R⁴为式-S(CH₂)_1-10CH₃、-S(CH₂)_1-5CH₃、-S(CH₂)_1-2CH₃。在一个非常优选的方面中R⁴为-S-Me。

如前所提及，R⁴位于A环的2或4位。因此化合物可具有式

或

优选R⁴位于A环的2位。

在一个进一步优选的方面中，当A环被R¹和R⁴取代时，R⁴相对于R¹为邻位。

在一个优选的实施方案中，本发明化合物具有下式：

其中R⁴为烃基，R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和烃基，且p为整数。

在一个优选的实施方案中，本发明化合物具有下式：

其中R⁴为氧基碳氢化合物基团或碳氢化合物基团，R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和C_1-10烷基，且p为0-5的整数。

在这方面，优选R⁴为烷氧基例如C_1-6O基团，或烷基例如C_1-6烷基。优选R⁴为甲氧基或乙基。

在这方面，优选R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和CH₃，更优选R¹⁴和R¹⁵均为H。

在这方面，优选p为0、1或2。更优选p为1。

在一个非常优选的实施方案中，本发明化合物具有下式：

在一个优选的实施方案中，本发明化合物具有下式：

其中R⁴为氧基碳氢化合物基因或碳氢化合物基团，R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和C_1-10烷基，且p为0-5的整数。

在这方面，优选p为0、1或2。更优选p为1。

在一个非常优选的实施方案中，本发明化合物具有下式：

本发明非常优选的化合物显示如下并可选自：

组合物

如上所述，根据本发明的一个方面，提供了一种药用组合物，该组合物包含(a)(i)如本文所定义的化合物，或(ii)如本文所定义的组合物，及(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂。

根据本发明，本发明组合物可包含多于一种生物反应调节剂。

术语生物反应调节剂(″BRM″)包括：细胞因子，免疫调节剂，生长因子，血细胞生成调节因子，集落刺激因子，趋化性、溶血及溶栓因子，细胞表面受体、配体，白细胞粘附分子，单克隆抗体，预防性及治疗性疫苗，激素，细胞外基质成分，纤连蛋白等。

BRMs在调节疾病中免疫和炎症反应中起作用。BRMs的实例包括：肿瘤坏死因子(TNF)、粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、干扰素(IFNs)、白介素、组织纤溶酶原激活剂、P-、E-或L-选择蛋白、ICAM-1、VCAM、选择蛋白、地址素等。

优选生物反应调节剂为细胞因子。

细胞因子(经常是可溶性蛋白质)是使免疫细胞相互间沟通的分子。这些分子通过在靶细胞表面表达的特定受体发挥其生物学功能。受体的结合引发生物化学信号级联释放，进而深深地影响着带有受体的细胞的行为(Poole，S 1995 TibTech 13：81-82)。已在分子水平鉴定了许多细胞因子及其受体(Paul和Sedar 1994，Cell 76：241-251)，并且凭其本身制备了合适的治疗价值分子以及治疗靶。

细胞因子更详细的资料可在Molecular Biology andBiotechnology(Pub.VCH，Ed.Meyers，1995，第202、203、394、390、475、790页)中找到。

细胞因子的实例包括：白介素(IL)-例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19；肿瘤坏死因子(TNF)-例如TNF-α；干扰素α、β及γ；TGF-β。

对本发明而言，优选细胞因子为肿瘤坏死因子(TNF)。

更优选细胞因子为TNF-α。

TNF是由介导炎症和免疫病理学反应的巨噬细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。TNF涉及到疾病的发展，这些疾病包括但不限于免疫调节失调、感染、细胞增殖、血管发生(新血管形成)、肿瘤转移、细胞凋亡、脓毒症及内毒素血症。

体内TNF的坏死作用主要涉及毛细血管损伤。TNF不仅在肿瘤组织中而且在肉芽组织中引起坏死。它在培养的血管内皮细胞生长抑制方面引起形态学的变化和细胞毒性(Haranka等1987 Ciba Found Symp131：140-153)。

对本发明优选的方面而言，TNF可为任何类型的TNF-例如TNF-α、TNF-β，包括其衍生物或混合物。

TNF方面的内容可在技术-例如WO-A-98/08870及WO-A-98/13348中找到。

TNF可用化学方法制备或可从源中提取。优选TNF通过使用重组DNA技术制备。

就本发明的这一方面而言，本发明组合物在体内比单独的化合物或单独的TNF更有效。而且，在一些方面，化合物和TNF的组合比预期的单独化合物的效能更强，即它们之间是协同关系。

此外，本发明预期本发明组合物还包含生物反应调节剂的诱导剂-例如生物反应调节剂的体内诱导剂。

根据本发明，组合物的成分可同时或顺序加入混合物。此外，根据本发明，可通过诱导或增加成分之一的表达原位形成至少部分组合物(例如在体内)。例如，可诱导或增加生物反应调节剂例如TNF的表达。作为实例，可通过加入细菌脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP)诱导或增加TNF的表达。在这方面，细菌LPS和MDP组合可在体外刺激鼠科动物脾细胞TNF的产生并在体内刺激肿瘤缩小(Fuks等Biull EkspBiol Med 1987 104：497-499)。

在治疗方法中，患者优选哺乳动物，更优选人类。对一些应用而言，优选人类为妇女。

本发明也包含用于制备本发明化合物的新中间体。例如，本发明包含化合物的新醇前体。作为进一步的实例，本发明包含化合物双保护的前体。本文中提供了这些前体中每一个的实例。本发明也包括一种包含合成本发明化合物的这些前体的每一种或两者的方法。

类固醇硫酸酯酶

类固醇硫酸酯酶-有时称为类固醇硫酸酯酶或steryl硫酸酯酶或简称“STS”-水解几种硫酸酯化类固醇，例如雌酮硫酸酯、脱氢表雄甾酮硫酸酯及胆固醇硫酸酯。STS的酶编号为EC 3.1.6.2。

STS已被克隆和表达。例如可参见Stein等(J.Biol.Chem.264：13865-13872(1989))和Yen等(Cell 49：443-454(1987))。

STS是涉及到许多疾病状况的酶。

作为实例，研究人员发现完全缺乏STS可产生鱼鳞癣。根据一些研究人员，STS不足在日本相当普遍。同样的研究人员(Sakura等，JInherit Metab Dis 1997Nov；20(6)：807-10)也报道了变应性疾病-例如支气管哮喘、过敏性鼻炎或特应性皮炎-可能与类固醇硫酸酯酶缺乏有关。

除了STS活性完全缺乏引起疾病外，STS活性增强水平也可能导致疾病状况。作为实例，并如上所指，有很强的证据支持STS在乳腺癌生长和转移中的作用。

STS也涉及到其他疾病状况。作为实例，Le Roy等(Behav Genet1999年3月；29(2)：131-6)确定了在类固醇硫酸酯酶浓度和小鼠攻击行为的引发之间可能存在遗传相关性。该作者得出结论：甾族化合物的硫酸酯化可能为复杂网络的主要原动力，包括显示涉及到通过突变引起攻击的基因。

STS抑制

认为与STS活性相关的一些疾病状况是由于无活性的硫酸酯化雌酮转化成有活性的非硫酸酯化的雌酮。在与STS活性相关的疾病状况中，理想地是抑制STS活性。

此处，术语“抑制”包括减少和/或消除和/或掩盖和/或预防STS的有害作用。

STS抑制剂

根据本发明，本发明化合物能作为STS抑制剂起作用。

此处，本文中所使用的、关于本发明化合物的术语“抑制剂”指可以抑制STS活性-例如减少和/或消除和/或掩盖和/或预防STS的有害作用的化合物。STS抑制剂可作为拮抗剂起作用。

化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力可用完整的JEG3绒膜癌细胞或胎盘微粒体评价。另外，可使用动物模型。在下列小节提供了合适测试方案的细节。应注意：其他实验也可用以确定STS活性及STS抑制。例如，也可参考WO-A-99/50453的内容。

一方面，对一些应用而言，化合物特征还在于特征即如果氨基磺酸酯基被硫酸酯基取代形成硫酸酯衍生物，则该硫酸酯衍生物可通过具有类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解-即当与类固醇硫酸酯酶EC 3.1.6.2于pH7.4及37℃温育时。

在一个优选的实施方案中，如果化合物的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替形成硫酸酯化合物，则当与类固醇硫酸酯酶EC 3.1.6.2于pH7.4及37℃温育时，该硫酸酯化合物可被具有类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解并可产生小于200毫摩尔的Km值，优选小于150毫摩尔，优选小于100毫摩尔，优选小于75毫摩尔，优选小于50毫摩尔。

在一个优选的实施方案中，本发明化合物不被具有类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。

对一些应用而言，优选本发明化合物对目标靶(例如STS和/或芳化酶)具有至少约100倍的选择性，优选对目标靶具有至少约150倍的选择性，优选对目标靶具有至少约200倍的选择性，优选对目标靶具有至少约250倍的选择性，优选对目标靶具有至少约300倍的选择性，优选对目标靶具有至少约350倍的选择性。

应注意：本发明化合物除了具有抑制STS和/或芳化酶活性的能力外，可能还具有其他有益的特性，或者具备两者之一。

用癌细胞确定STS活性的试验

(方案1)

JEG3细胞中硫酸酯酶活性的抑制

用完整的JEG3绒毛膜癌细胞体外测定类固醇硫酸酯酶活性。该细胞系可用于研究人类乳腺癌细胞生长的控制。它具有显著的类固醇硫酸酯酶活性(Boivin等，J.Med.Chem.，2000，43：4465-4478)并且由American Type Culture Collection(ATCC)出售。

细胞保存在基本培养基(Minimal Essential Medium)(MEM)(FlowLaboratories，Irvine，Scotland)中，该培养基含20mM HEPES、5％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、非必须氨基酸及0.075％碳酸氢钠。用上述培养基，以大约1×10⁵细胞/烧瓶接种最多可达30个平行测定的25cm2组织培养烧瓶。使细胞生长到80％融合度(confluency)并且每隔两天更换培养基。

用Earle氏平衡盐溶液(EBSS，来自ICN Flow，High Wycombe，U.K.)洗涤在一式三份的25cm²组织培养烧瓶中的完整的单层JEG3细胞，并于37℃、与在无血清MEM(2.5ml)中的5pmol(7×10⁵dpm)[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，来自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)及雌酮-3-氨基磺酸酯(5个浓度：1nM、10nM、100nM、1000nM和10μM)一起温育3-4小时。温育后，冷却各烧瓶并将培养基(1ml)用吸管分别移入含[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，来自Amersham International Radiochemical Centre，Amersham，U.K.)的试管中。该混合物与甲苯(5ml)一起充分振摇30秒。试验显示：经过该处理，＞90％[14C]雌酮及＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯从水相除去。分离部分(2ml)有机相，蒸发并用闪烁分光法测定残留物中的3H和14C含量。水解的雌酮-3-硫酸酯质量根据所得的3H计数(校正所用的培养基和有机相体积，并校正所加入[14C]雌酮的回收率)及底物的比活性计算。每批试验包括从硫酸酯酶阳性人胎盘(阳性对照)制备的微粒体及无细胞烧瓶(以评价明显的底物非酶促水解)的温育。用Zaponin处理细胞单层后，用Coulter计数器确定每烧瓶中的细胞核数量。每批用一个烧瓶来评价细胞膜状况并用锥虫蓝排除法评价生存力(Phillips，H.J.(1973)In：Tissue culture and applications，[eds：Kruse，D.F.& Patterson，M.K.]；406-408页；Academic出版社，New York)。

类固醇硫酸酯酶活性结果以在温育期间(3-4小时)形成的总产物(雌酮+雌二醇)的平均值±1S.D.表示，以106个细胞计算，相对于不含雌酮-3-氨基磺酸酯的温育其减少(抑制)百分比显示统计学意义。用未配对Student t-检验测试结果的统计学意义。

用胎盘微粒体测定STS活性的试验

(方案2)

胎盘微粒体中类固醇硫酸酯酶活性的抑制

用剪刀将正常时期怀孕的硫酸酯酶阳性人胎盘彻底剪碎并用冷的磷酸盐缓冲液(pH7.4，50mM)洗涤一次，然后再悬浮于冷的磷酸盐缓冲液(5ml/g组织)中。用Ultra-Turrax匀浆器完成匀化，每三次10秒的脉冲搅拌后在冰中冷却2分钟。以2000g将核及细胞碎片离心(4℃)30分钟除去，并将部分(2ml)上清液于20℃储存。用Bradford法测定上清液中的蛋白质浓度(Anal.Biochem.，72，248-254(1976))。

用蛋白质浓度为100mg/ml、底物浓度为20mM的[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，来自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)进行温育(1ml)并于37℃温育20分钟。如果必要，采用化合物的六种浓度：0.1nM、1.0nM、10nM、100nM、1000nM及10μM。温育后，将各样品冷却并将培养基(1ml)用吸管分别移入含[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，来自Amersham InternationalRadiochemical Centre，Amersham，U.K)的试管中。该混合物与甲苯(5ml)一起彻底振摇30秒。试验显示：经过该处理，＞90％[14C]雌酮及＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯从水相除去。分离部分(2ml)有机相，蒸发并用闪烁分光法测定残留物中的3H和14C含量。水解的雌酮-3-硫酸酯质量根据所得的3H计数(校正所用的培养基和有机相体积，并校正所加入的[14C]雌酮回收率)及该底物的比活性计算。

确定STS活性的动物试验模型

(方案3)

体内雌酮硫酸酯酶活性的抑制

可用动物模型研究本发明化合物，特别是用切除卵巢的大鼠。在该模型中，雌激素化合物刺激子宫生长。

经口给予大鼠化合物(0.1mg/Kg/天，共5天)，另一组动物仅接受溶媒(丙二醇)。研究结束时，获取肝组织样品并用3H雌酮硫酸酯作为底物测定雌酮硫酸酯酶活性，如前所述(见PCT/GB95/02638)。

确定雌激素活性的动物试验模型

(方案4)

经口给予大鼠化合物(0.1mg/Kg/天，共5天)，另一组动物仅接受溶媒(丙二醇)。研究结束时，获取子宫并称重，以子宫重量/全身重量×100表示结果。

对子宫生长不具有显著作用的化合物不是雌激素化合物。

确定STS活性的生物技术试验

(方案5)

化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力也可用氨基酸序列或编码STS的核苷酸序列、或其活性片段、衍生物、同系物或变体进行例如高通量筛选评价。

可使用任何一种或多种合适的靶-例如氨基酸序列和/或核苷酸序列、以任何药物筛选技术确定药物是否可以调节STS。在此类试验中采用的靶可游离在溶液中、固定于固体载体、连接于细胞表面或位于细胞内。可测定靶活性的去除或靶与受试药物之间结合复合物的形成。

本发明的试验可为测试许多药物的筛选方法。一方面，本发明的试验方法为高通量筛选方法。

药物筛选技术可基于Geysen于1984年9月13日公布的欧洲专利申请84/03564中描述的方法。总之，在固体底物例如塑料针或一些其他表面上合成了大量不同的小肽受试化合物。将肽受试化合物与合适的靶或其碎片反应并洗涤。然后例如通过本领域众所周知的合适方法检测结合的实体。也可直接将纯化过的靶涂于板上，该板用于药物筛选技术。或者，可用未中和抗体捕获该肽并将其固定在固体载体上。

本发明也预期使用竞争性药物筛选试验，其中能特异性结合靶的中和抗体与受试化合物竞争与靶结合。

另一筛选技术提供给对物质具有合适结合亲和力的药物高通量筛选(HTS)，且基于WO 84/03564中详细描述的方法。

预期本发明的试验方法将既适合于小规模又适合于大规模的受试化合物筛选，并适合于定量测试。

在一个优选方面中，本发明涉及一种鉴定选择性调节STS的药物的方法，这类化合物具有式(I)。

报道基因

大量的报道基因可用于本发明的试验方法(以及筛选)，优选的报道基因提供常规可检测的信号(例如通过光谱法)。作为实例，报道基因可将催化改变光吸收特性的反应的酶编码。

其他方案包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)及荧光活化细胞分类(FACS)。甚至可使用两点、基于单克隆的免疫测定，利用对两种无干扰抗原决定基有反应的单克隆抗体。其它位置中，在Hampton R等(1990，Serological Methods，A Laboratory Manual，APS出版社，St Paul MN)及Maddox DE等(1983，J Exp Med 158：1211)中描述了这些及其他测试。

报道分子的实例包括但不限于(β-半乳糖苷酶、转化酶、绿荧光蛋白质、荧光素酶、氯霉素、乙酰转移酶、(-葡糖醛酸酶、外-葡聚糖酶及葡糖淀粉酶。或者，可将放射标记或荧光标记物标记的核苷酸结合到初期转录中，随后当结合于低聚核苷酸探针时将其鉴定。

作为进一步的实例，许多公司例如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)、Promega(Madison，WI)及US Biochemical Corp(Cleveland，OH)提供商品试剂盒及测定程序方案。合适的报道分子或标记包括那些放射性核素、酶、荧光、化学发光或显色剂以及底物、辅因子、抑制剂、磁粒子等。教导使用此类标记的专利包括US-A-3817837、US-A-3850752、US-A-3939350、US-A-3996345、US-A-4277437、US-A-4275149及US-A-4366241。

宿主细胞

本发明涉及的术语“宿主细胞”包括任何包含本发明药物的靶的细胞。

因此，本发明再一个实施方案提供由本发明靶或表达本发明靶的聚核苷酸转化或转染的宿主细胞。优选将所述聚核苷酸装载到将要成为靶或将要表达靶的聚核苷酸的复制和表达的载体中。细胞将选择与所述载体相容的细胞，并且例如可为原核(如细菌)、真菌、酵母或植物细胞。

革兰氏阴性细菌大肠杆菌(E.coli)被广泛用作异种基因表达的宿主。然而，大量的异种蛋白质趋于在细胞内积聚。随后从大量大肠杆菌(E.coli)细胞内蛋白质中纯化所需蛋白质有时可能是困难的。

与大肠杆菌(E.coli)相比，因为它们将蛋白质分泌进培养基的能力，芽胞杆菌属(Bacillus)细菌很适合作为异种宿主。其他适合作为宿主的细菌为来自链霉菌属(Streptomyces)和假单胞菌属(Pseudomonas)的那些细菌。

依据编码本发明多肽的聚核苷酸的性质和/或对所要表达的蛋白质的进一步处理的需要，真核生物宿主例如酵母或其他真菌可为优选。一般而言，酵母细胞比真菌细胞更好，因为它们易于操作。然而，一些蛋白质既很少从酵母细胞中分泌，在一些情况下又不能被适当地处理(例如在酵母中高度糖基化)。在这些情况下，应选择不同的真菌宿主生物体。

在本发明范围内的合适的表达宿主的实例有真菌例如曲霉属(Aspergillus)(例如在EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)及木霉属(Trichoderma)；细菌例如芽胞杆菌属(Bacillus)(例如EP-A-0134048和EP-A-0253455中描述的那些)、链霉菌属(Streptomyces)和假单胞菌属(Pseudomonas)；及酵母例如克鲁维酵母属(Kluyveromyces)(例如EP-A-0096430和EP-A-0301670中描述的那些)和酵母属(Saccharomyces)。作为实例，典型的表达宿主可选自黑曲霉(Aspergillusniger)、Aspergillus niger var.tubigenis、Aspergillus niger var.awamori、Aspergillus aculeatis、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、Aspergillusorvzae、Trichoderma reesei、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

使用合适的宿主细胞-例如酵母、真菌和植物宿主细胞-可提供翻译后修饰(例如肉豆蔻酰基化、糖基化、切断、投石(lapidation)和酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酸化)，而这可能是将最佳的生物活性赋予本发明重组表达产物所需的。

生物体

本发明涉及的术语“生物体”包括任何可能包含本发明靶和/或从中获得的产物的生物体。生物体的实例可包括真菌、酵母或植物。

本发明涉及的术语“转基因生物体”包括任何包含本发明靶和/或所得产物的生物体。

宿主细胞/宿主生物体的转化

正如较早指出的那样，宿主生物体可为原核生物体或真核生物体。合适的原核宿主实例包括大肠杆菌(E.coli)和枯草杆菌(Bacillussubtilis)。原核宿主转化的资料在本领域是很多的，例如可参见Sambrook等(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版，1989，Cold Spring Harbor Laboratory出版社)和Ausubel等，Current Protocols inMolecular Biology(1995)，John Wiley & Sons，Inc。

如果使用原核宿主，则核苷酸序列在转化之前可能需要适当地修饰-例如除去内含子。

在另一个实施方案中转基因生物体可为酵母：在这方面，酵母也被广泛地用作异种基因表达的媒介物。酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)具有工业上使用的长久历史，包括其用于异种基因表达。Goodey等(1987，Yeast Biotechnology，D R Berry等编辑，pp 401-429，Allen和Unwin，London)及King等(1989，Molecular和Cell Biology ofYeasts，E F Walton和G T Yarronton编辑，pp 107-133，Blackie，Glasgow)对异种基因在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的表达进行了综述。

由于一些原因，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)对异种基因表达很适合。首先，它对人类是非致病的且它不能产生某些内毒素。其次，在长达几个世纪的各种目的商业开发之后，它具有长期安全使用的历史。这已导致广泛的公众接受度。第三，对该生物体广泛的商业使用和研究，导致产生很多有关酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)遗传学和生理学以及大规模发酵特性方面的知识。

E Hinchcliffe E Kenny对异种基因在酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中的表达及基因产物的分泌原理进行了综述(1993，″Yeast asa vehicle for the expression of heterologous genes(酵母作为媒介物用于异种基因的表达)″，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose和J Stuart Harrison编辑，第二版，Academic Press Ltd.)。

可得到几种类型的酵母载体，包括需要重组宿主基因组以维持的整合载体，及自主复制质粒载体。

为了制备转基因酵母，通过将核苷酸序列插入到为在酵母中表达所设计的结构中以制备表达构建物。已开发了几种用于异种表达的构建物。这些构建物在融合核苷酸序列的酵母中含有启动子活性，通常为酵母来源的启动子，例如使用GALl启动子。通常使用酵母来源的信号序列，例如编码SUC2信号肽的序列。酵母的终止子活性终止该表达系统。

对酵母转化而言，已开发了几种转化方案。例如，本发明的转基因酵母可通过Hinnen等(1978，Proceedings of the National Academy ofSciences of the USA 75，1929)；Beggs，J D(1978，Nature，London，275，104)及Ito，H等(1983，J Bacteriology 153，163-168)所描述的方法制备。

转化的酵母细胞用各种选择性标记来选择。在用于转化的标记中有许多营养缺陷型标记例如LEU2、HIS4及TRP1和显性耐抗生素标记例如氨基苷类抗生素标记如G418。

另一种宿主生物体为植物。构建遗传修饰植物的基本原理是将遗传信息插入到植物基因组中，以得到所插入遗传物质的稳定维持。存在几种插入遗传信息的技术，两种主要原理为直接导入遗传信息和通过使用载体系统导入遗传信息。可在Potrykus(Annu Rev Plant PhysiolPlant Mol Biol[1991]42：205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech，1994年3月/4月17-27)等的文章中找到通用技术的综述。植物转化的内容还可在EP-A-0449375中找到。

因此，本发明也提供一种用核苷酸序列转化宿主细胞的方法，该核苷酸序列为靶或表达靶。由核苷酸序列转化的宿主细胞可在适合于编码蛋白表达的条件下培养。重组细胞产生的蛋白质可显示在该细胞表面上。如果需要且被本领域技术人员所理解，含编码序列的表达载体可用信号序列设计，该信号序列通过特定的原核细胞膜或真核细胞膜直接分泌编码序列。其他重组构建物可将该编码序列结合到编码多肽域的核苷酸序列中，其将有利于可溶性蛋白质的纯化(Kroll DJ等(1993)DNA Cell Biol 12：441-53)。

变体/同系物/衍生物

除本文所述的具体氨基酸序列和核苷酸序列，本发明还包含它们的变体、同系物和衍生物的用途。此处，术语“同源性”可等同于“一致性”。

在本文中，同源序列包括至少75％、85％或90％一致的氨基酸序列，优选至少95％或98％一致。尽管同源性也可理解为相似性(即具有类似化学特性/功能的氨基酸残基)，但在本发明的上下文中优选用序列一致来表达同源性。

同源性比较可通过眼睛进行，或更常见借助于容易获得的序列比较程序进行。这些市售计算机程序可计算两个或多个序列之间的同源性百分数。

同源性百分数可在连续序列上计算，即一个序列与另一个序列比对，将一个序列中的每个氨基酸直接与另一个序列中的相应氨基酸进行比较，一次一个残基。这称作“无空位”比对。通常，这类无空位比对只在相对少的残基数目上进行。

尽管这是非常简单和一贯的方法，但它未考虑到例如在其它方式一致的序列对中插入或删除一个残基将导致后面的氨基酸残基偏离比对，因此在进行总体比对时可能导致同源性百分数大幅度降低。所以，绝大多数序列比较方法设计为生成最佳比对，该比对考虑到可能的插入和删除而未过度降低总同源性记分。这通过在序列比对中插入“空位”以最大化局部同源性而实现。

然而，这些更为复杂的方法将“空位罚分”赋予发生在比对中的每个空位，从而对相同数目的一致氨基酸，具有尽可能少空位的序列比对(反映两个进行比较的序列之间具有更高的相关性)将比具有许多空位的序列比对获得更高的记分。“亲合空位成本”通常用于对空位的存在要求相对高的成本并对空位中的每个后续残基施加较小的罚分。这是最常用的空位评分系统。高空位罚分将理所当然地生成具有较少空位的最佳比对。绝大多数比对程序允许修改空位罚分。然而，优选在使用这类软件进行序列比较时采用默认值。例如当使用GCGWisconsin Bestfit包(参见以下)时，氨基酸序列的默认空位罚分为：空位为-12，每个延长为-4。

因此最大同源性百分数的计算首先要求生成考虑到空位罚分的最佳比对。进行这类比对的合适计算机程序为GCG Wisconsin Bestfit包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等，1984，Nucleic AcidsResearch 12：387)。其他可进行序列比较的软件实例包括但不限于BLAST包(参见Ausubel等，1999 ibid-18章)、FASTA(Atschul等，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS比较工具组。BLAST和FASTA都可进行脱机和在线查询(参见Ausubel等，1999 ibid，7-58至7-60页)。然而优选使用GCG Bestfit程序。

其它有用的参考发现于FEMS Microbiol Lett 1999年5月15日；174(2)：247-50(出版的勘误表见FEMS Microbiol Lett 1999年8月1日；177(1)：187-8)。

尽管最终同源性百分数可用一致性进行测定，比对方法本身通常不基于全或无配对比较。相反通常使用分级相似性记分矩阵，基于化学相似性或进化距离而将记分赋予每个成对比较。通常使用的这类矩阵实例为BLOSUM62矩阵，即BLAST程序组的默认矩阵。GCGWisconsin程序通常使用公共默认值或自定义符号比较表(如果提供，有关进一步的详情参见用户手册)。GCG包优选使用公共默认值，或在其他软件情况中使用默认矩阵(例如BLOSUM62)。

一旦软件生成最佳比对，就有可能计算同源性百分数，优选序列一致性百分数。软件通常将此作为序列比较的一部分而执行，并生成数字结果。

序列还可具有氨基酸残基的缺失、插入或置换，这产生沉默突变并产生功能等效物。可基于极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或残基两性的相似性而进行有意的氨基酸置换，只要保留物质的二级结合活性。例如带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；不带电荷极性头基团、具有类似亲水性值的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯基丙氨酸和酪氨酸。

例如可根据下表进行保守置换。第二栏相同区段内的氨基酸、优选第三栏相同行内的氨基酸可互相置换：

脂族	非极性	GAP
脂族		GAP		ILV
		极性-未带电荷		ILV	CSTM
			NQ		CSTM
			NQ	极性-带电荷	DE
		KR			DE
芳族		KR			HFWY

表达载体

用作靶或用于表达靶的核苷酸序列可整合入重组可复制载体中。载体可用于在和/或从相容宿主细胞复制和表达核苷酸序列。表达可通过使用调控序列进行控制，所述调控序列包含启动子/增强子和其他表达调节信号。可以使用原核启动子和在真核细胞中有功能的启动子。可以使用组织特异性或刺激特异性启动子。还可使用包含得自两种或更多种上述不同启动子的序列元件的嵌合启动子。

由宿主重组细胞通过表达核苷酸序列而生成的蛋白质可被分泌或包含在细胞内，这取决于所使用的序列和/或载体。编码序列可设计带有信号序列，该信号序列指导物质编码序列分泌通过具体的原核或真核细胞膜。

融合蛋白质

靶氨基酸序列可作为融合蛋白质而生成，例如帮助提取和纯化。融合蛋白质附加物的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA结合和/或转录活化域)和□-半乳糖苷酶。还可方便地在融合蛋白质附加物和目标蛋白质序列之间包括蛋白水解部位以除去融合蛋白质序列。优选融合蛋白质不妨碍靶的活性。

融合蛋白质可包含融合到本发明物质的抗原或抗原决定簇。在该实施方案中，融合蛋白质可为非天然存在的融合蛋白质，该蛋白质包含可用作佐剂的物质以提供免疫系统普遍刺激。抗原或抗原决定簇可附着于物质的氨基或羧基端。

在本发明的另一个实施方案中，氨基酸序列可连接到异源序列来编码融合蛋白质。例如为从肽库筛选能够影响物质活性的药物，编码表达异源表位的嵌合物质是有用的，该表位由市售抗体识别。

治疗

本发明的化合物可用作治疗药物，即用于治疗应用中。

术语“治疗”包含治愈效果、改善效果和预防效果。

治疗可用于人或动物，优选雌性动物。

药用组合物

在一个方面中，本发明提供了一种药用组合物，该药用组合物包含本发明的化合物和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂(包括它们的组合)。

药用组合物可在人和兽医学中用于人或动物用途，并通常包含任何一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂为药学领域所熟知，并见述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)，Mack PublishingCo.(A.R.Gennaro edit.1985)。可根据预定的给药途径和标准制药实践而选择药用载体、赋形剂或稀释剂。药用组合物可包含如(或除载体、赋形剂或稀释剂之外的)任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂。

药用组合物中可提供有防腐剂、稳定剂、染料和甚至调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。还可以使用抗氧化剂和悬浮剂。

根据不同的传递系统而具有不同的组合物/制剂要求。作为实例，本发明的药用组合物可配制为使用小型泵传递或通过粘膜途径传递(例如配制为鼻喷雾剂或吸入气雾剂或可服用溶液)或肠胃外传递(其中组合物配制为可注射形式，通过例如静脉内、肌内或皮下途径传递)。或者，制剂可设计为通过两种途径传递。

当药物要通过胃肠粘膜进行粘膜传递时，它应能够在通过胃肠道时保持稳定；例如它应耐受蛋白水解降解，在酸性pH下稳定并耐受胆汁的去污作用。

如果合适，药用组合物可通过吸入给药，以栓剂或阴道栓的形式给药，以洗剂、溶液剂、乳膏剂、软膏剂或撒布粉的形式局部给药，通过使用皮肤贴剂给药，以包含赋形剂(例如淀粉或乳糖)的片剂形式或以胶囊剂或丸剂(单独或与赋形剂混合)形式或以包含调味剂或着色剂的酏剂、溶液剂或悬浮剂的形式口服给药，或它们可进行肠胃外注射，例如静脉内、肌内或皮下注射。对肠胃外给药，组合物可最好以无菌水溶液形式使用，该水溶液可包含其他物质，例如足够的盐或单糖以使溶液与血液等渗。对经颊或舌下给药，组合物可以用常规方法配制的片剂或锭剂的形式给药。

联合药物

本发明的化合物可与一种或多种其他活性药物(例如一种或多种其他药用活性药物)联合使用。

作为实例，本发明的化合物可与其他STS抑制剂和/或其他抑制剂例如芳化酶抑制剂(例如4-羟基雄甾烯二酮(4-OHA))和/或类固醇(例如天然存在的神经类固醇脱氢表雄甾酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PS)和/或其他结构相似的有机化合物)联合使用。其他STS抑制剂的实例可发现于上述参考文献中。作为实例，本发明所使用的STS抑制剂包括与本文所提供化合物5类似的2-乙基和2-甲氧基17-脱氧化合物之一或两者。

此外或者，本发明的化合物可与生物应答调节剂联合使用。

术语生物应答调节剂(″BRM″)包括细胞因子、免疫调节剂、生长因子、造血调节因子、集落刺激因子、趋化因子、溶血因子和血栓溶解因子、细胞表面受体、配体、白细胞粘合分子、单克隆抗体、预防性和治疗性疫苗、激素、细胞外基质成分、粘连蛋白等。对某些应用，优选生物应答调节剂为细胞因子。细胞因子的实例包括：白介素(IL)(例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19)；肿瘤坏死因子(TNF)(例如TNF-α)；干扰素α、β和γ；TGF-β。对某些应用，优选细胞因子为肿瘤坏死因子(TNF)。对某些应用，TNF可为任何类型的TNF(例如TNF-α、TNF-β，包括它们的衍生物或混合物)。更优选细胞因子为TNF-α。有关TNF的教导可发现于技术，例如WO-A-98/08870和WO-A-98/13348中。

给药

一般来说，主治医师决定对个体患者最合适的实际剂量，且此剂量根据年龄、体重和具体患者的反应而不同。以下剂量为平均情形的示例。采用更高或更低的剂量范围当然是个别情况。

本发明的组合物可通过直接注射给药。组合物可配制为肠胃外、粘膜、肌内、静脉内、皮下、眼内或透皮给药。根据需要，药物可按0.01-30毫克/千克体重的剂量给药，例如0.1-10毫克/千克体重，更优选0.1-1毫克/千克体重。

作为进一步的实例，本发明的药物可根据每天1-4次的方案给药，优选每天1次或2次。具体的剂量水平和剂量频率对任何具体的患者可以不同，且取决于各种因素，包括所采用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄率、药物联合、具体病症的严重程度和经受治疗的主体。

除上述的典型传递方式之外，术语“给药”还包括通过例如脂质介导转染、脂质体、免疫脂质体、脂质转染(lipofectin)、阳离子表面两亲物(CFA)和它们的组合等技术给药。这类传递机理的途径包括但不限于粘膜、鼻、口、肠胃外、胃肠、局部或舌下途径。

术语“给药”包括但不限于通过粘膜途径传递(例如作为鼻喷雾剂或吸入气雾剂或作为可服用溶液)；通过肠胃外途径传递(通过可注射形式传递，例如静脉内、肌内或皮下途径)。

因此对药物给药，本发明的STS抑制剂可以任何合适的方式、采用常规药物配制技术和药用载体、助剂、赋形剂、稀释剂等进行配制，且通常用于肠胃外给药。近似有效剂量率可为1-1000毫克/天，例如10-900毫克/天或甚至100-800毫克/天，取决于所讨论化合物的单独活性和患者的平均体重(70千克)。优选和更有效的化合物的更常用剂量率为200-800毫克/天，更优选200-500毫克/天，最优选200-250毫克/天。它们可按单剂量方案、分剂量方案和/或多剂量方案持续给药数天。对口服给药，它们可配制为每单位剂量包含100-500毫克化合物的片剂、胶囊剂、溶液剂或悬浮剂。或者优选化合物配制在合适的肠胃外给药载体中经肠胃外给药，并提供200-800毫克的单日剂量率，优选200-500毫克，更优选200-250毫克。然而这类有效日剂量根据有效成分的固有活性和患者体重而变化，这类变化属于主治医师的技术和判断范畴内。

细胞周期

本发明的化合物可用于细胞周期疾病的治疗方法中。

如″Molecular Cell Biology(分子细胞生物学)″第3版，Lodish等，177-181页所述，不同的真核细胞可以相当不同的速率生长和分裂。例如酵母细胞可每120分钟分裂一次，海胆和昆虫的胚胎细胞中受精卵的首次分裂仅需1530分钟，因为一个大的预先存在的细胞发生再分裂。然而，绝大多数生长中的植物和动物细胞需要10-20小时使数量增倍，有些以更慢的速率复制。成人的许多细胞(例如神经细胞和纹状肌肉细胞)根本不发生分裂；其他如帮助愈合伤口的成纤维细胞按需要生长，但在其他情况下为静息。

然而，每个分裂的真核细胞必须将相同的遗传物质赋予两个子细胞。真核细胞中的DNA合成不在细胞分裂周期中发生，而是限制于细胞分裂前的一部分。

真核DNA合成和细胞分裂的关系已经在能够生长和分裂的哺乳动物细胞的培养物中得到深入分析。与细菌相比，发现真核细胞仅花费一部分时间用于DNA合成，且在细胞分裂(有丝分裂)前数小时就已完成。因此在DNA合成之后和细胞分裂之前出现时间间隙；在分裂之后和下一轮DNA合成之前出现另一个时间间隙。这个分析得出结论为，真核细胞周期由M(有丝分裂)相、G1相(第一个间隙)、S(DNA合成)相、G2相(第二个间隙)组成，并返回M。有丝分裂之间的各相(G1、S和G2)共同称作分裂间期。

组织中的许多非分裂细胞(例如所有的静息成纤维细胞)将周期中止于有丝分裂之后和DNA合成之前；这类“休眠”细胞被认为脱离细胞周期并处于G0态。

当细胞处于细胞周期的三个分裂间期阶段之一时，可以通过用荧光激活细胞分选器(FACS)测量它们的相对DNA含量来识别细胞：处于G₁(DNA合成以前)的细胞具有确定数量为x的DNA；S相期间(DNA复制)为x至2x；当处于G₂(或M)时，它具有2x的DNA。

动物细胞中的有丝分裂和胞质分裂的阶段如下

(a)分裂间期。分裂间期的G₂阶段先于有丝分裂开始。在S相期间染色体DNA已经复制并结合到蛋白质上，但是染色体仍未被看作明显结构。细胞核是在光学显微镜下可见的唯一核结构。在DNA复制前的二倍体细胞中具有每种类型的两种形态染色体，细胞被称为2n。在G₂中DNA复制后，细胞为4n。每个染色体DNA具有4个拷贝。因为姐妹染色体还未彼此分离，它们被称为姐妹染色单体。

(b)早前期。每个中心粒与新形成的子中心粒一起开始向细胞的相反极移动；染色体可见为长线。核膜开始解聚为小囊。

(c)中和晚前期。染色体缩聚已完成；每个可见的染色体结构由两个染色单体在它们的着丝点相结合而组成。每个染色单体包含两个新复制的子DNA分子之一。微管纺锤体开始从邻近中心粒的区域进行辐射，中心粒移动靠近它们的极。某些纺锤体纤维从一个极达到另一个极；绝大多数达到染色单体并附着于着丝点上。

(d)中期。染色体向细胞的赤道移动，在本文它们在赤道平面内排列成线。姐妹染色单体还未分离。

(e)后期。两个姐妹染色单体分离为独立的染色体。每个包含通过纺锤体纤维连接到一个极的着丝点，染色体向极移动。因此每个染色体的一个拷贝被赋予每个子细胞。同时细胞伸延，如极对极纺锤体所做。在分裂沟开始形成时开始胞质分裂。

(f)末期。在子核周围形成新的膜；染色体展开并变得不太明显，细胞核重新变为可见，在每个子核周围形成核膜。胞质分裂几乎完成，纺锤体随微管和其他纤维的解聚而消失。在有丝分裂整个过程中，每个极的“子”中心粒生长至达到全长。在末期，每个原始中心粒的复制已经完成，新的子中心粒在下一个分裂间期期间生成。

(g)分裂间期。胞质分裂一经完成，细胞进入细胞周期的G₁相并沿周期重新进行。

可以理解的是细胞周期是极为重要的细胞过程。偏离正常细胞周期可导致许多医学疾病。增强和/或无限制的细胞周期可导致癌症。减少的细胞周期可导致变性病症。使用本发明的化合物可提供治疗这类疾病和病症的方法。

因此，本发明的化合物可适用于治疗细胞周期疾病(例如癌症，包括激素依赖性和激素非依赖性癌症)。

此外，本发明的化合物可适用于治疗癌症，例如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肉瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胰腺癌等和其他实体瘤。

对某些应用，细胞周期被抑制和/或预防和/或停滞，优选其中细胞周期被预防和/或停滞。在一个方面中，细胞周期可被抑制和/或预防和/或停滞于G₂/M相。在一个方面中，细胞周期可被不可逆转地预防和/或抑制和/或停滞，优选其中细胞周期被不可逆转地预防和/或停滞。

术语“不可逆转地预防和/或抑制和/或停滞”是指在应用本发明的化合物后，除去化合物仍可观察到化合物的效果，即预防和/或抑制和/或停滞细胞周期。更具体地讲，术语“不可逆转地预防和/或抑制和/或停滞”是指当根据本文所提供的细胞周期测定方案测定时，用目标化合物处理的细胞相对对照细胞显示出在方案I阶段2后更弱的生长。这个方案的细节如下所示。

因此，本发明提供了这样的化合物：通过预防和/或抑制和/或停滞细胞周期而对雌激素受体阳性(ER+)和ER阴性(ER-)乳腺癌细胞的体外生长产生抑制；和/或导致完整动物(即未切除卵巢)中亚硝基-甲基脲(NMU)诱导的乳房肿瘤缩小，和/或预防和/或抑制和/或停滞癌细胞的细胞周期；和/或通过预防和/或抑制和/或停滞细胞周期而体内作用和/或用作细胞周期激动剂。

细胞周期测定

(方案7)

方法

阶段1

将MCF-7乳腺癌细胞以105细胞/孔的密度接种于多孔培养板中。允许细胞粘连和生长直至约30％融合，此时对它们作如下处理：

对照组-无任何处理

目标化合物(COI)20μM

细胞在包含COI的生长培养基中生长6天，每3天更换培养基/COI。在这个时期结束时，使用Coulter细胞计数器计数细胞数量。

阶段2

在用COI处理细胞6天后，将细胞以104细胞/孔的密度再次接种。不加入任何进一步的处理。允许细胞在生长培养基的存在下再继续生长6天。在这个时期结束时，再次计数细胞数量。

癌症

如所述，本发明的化合物可用于治疗细胞周期疾病。具体的细胞周期疾病为癌症。

癌症仍然是大多数西方国家中死亡率的主要原因。迄今为止癌症治疗的发展已经包括阻断激素的作用或合成来抑制激素依赖性肿瘤的生长。然而，目前应用更具有攻击性的化学治疗来治疗激素非依赖性肿瘤。

因此，激素依赖性和/或激素非依赖性肿瘤的抗癌治疗药物的发展，并缺乏某些或全部化学治疗相关性副作用，将代表主要的治疗进步。

已经知道雌激素在其合成后经历许多羟基化和缀合反应。直至最近人们认为这类反应是代谢过程的一部分而最终赋予雌激素以水溶性并促进它们从身体中消除。现在已经证明某些羟基代谢物(例如2-羟基和16α-羟基)和缀合物(例如雌酮硫酸酯，E1S)对确定雌激素在体内的某些复杂反应具有重要意义。

研究人员们已经研究了2-和16-羟基化雌激素的形成与改变乳腺癌风险的关系。现在已经证明提高2-羟基化酶活性的因素涉及降低的癌症风险，而提高16α-羟基化的因素可增加乳腺癌的风险。对雌激素代谢物生物学作用的进一步兴趣已经被不断增加的证据所激发，即2-甲氧基雌二醇为具有抗有丝分裂性质的内源性代谢物。2-MeOE2是由2-羟基雌二醇(2-OHE2)通过儿茶酚雌激素甲基转移酶(一种在体内广泛分布的酶)而形成。

研究人员们已经显示在体内2-MeOE2抑制肿瘤的生长，所述肿瘤通过皮下注射Meth A肉瘤、B16黑色素瘤或MDA-MB-435雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞而生成。它还抑制内皮细胞增殖和迁移以及体外血管生成。人们提出2-MeOE2抑制体内肿瘤生长的能力可能归因于它抑制肿瘤诱导血管生成的能力，而不是直接抑制肿瘤细胞的增殖。

2-MeOE2发挥其有效的抗有丝分裂和抗血管生成效果的机理还有待阐明。有证据表明在高浓度时，它可抑制微管聚合并用作秋水仙碱结合到微管蛋白的弱抑制剂。然而最近在阻断有丝分裂的浓度下，细胞内的微管蛋白丝未发现解聚而是具有与经泰素处理后所见相同形态。因此，有可能如同泰素(用于治疗乳腺和卵巢乳腺癌的药物)一样，2-MeOE2通过稳定微管动力学而起作用。

虽然确认2-MeOE2为新的癌症治疗药代表重要的进步，经口给药的雌激素的生物利用度很差。此外，它们在首次通过肝脏期间经历广泛的代谢。作为治疗乳腺癌的类固醇硫酸酯酶抑制剂的开发研究计划的一部分，雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被确认为有效的活性定点抑制剂。出乎意料的是，EMATE证明具有有效的雌激素特性，它在大鼠中的口服子宫营养活性比雌二醇的高100倍。其提高的雌激素性被认为来源于它被红细胞(rbcs)吸收，这保护它在通过肝脏时免于失活并用作存储器，用于它在长时间周期内缓慢释放。已合成和试验了许多A环修饰类似物，包括2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯。虽然此化合物用作类固醇硫酸酯酶抑制剂时与EMATE等效，但它没有雌激素性。

我们相信本发明的化合物提供了癌症特别是乳腺癌的治疗方法。

此外或或者，本发明的化合物可用于阻断癌症的生长，所述癌症包括白血病和实体瘤，例如乳腺、子宫内膜、前列腺、卵巢和胰腺肿瘤。

关于雌激素的治疗

我们相信某些本发明的化合物可用于控制体内、特别是女性体内的雌激素水平。因此，某些化合物可用于提供控制生育的方法，例如口服避孕片剂、丸剂、溶液或锭剂。或者本发明化合物可以为植入物或贴剂的形式。

因此，本发明的化合物可用于治疗雌激素相关性激素病症。

此外或或者，本发明的化合物可用于治疗除那些雌激素相关性病症之外的激素病症。因此，本发明的化合物还能够影响激素活性并且还能够影响免疫应答。

神经变性疾病

我们相信一些本发明化合物可用于治疗神经变性疾病及类似病症。

作为实例，认为STS抑制剂可用于提高患者或者寻求记忆力提高的个体的记忆功能，所述患者患有疾病例如健忘症、头部损伤、阿尔茨海默病、癫痫性痴呆、早老性痴呆、创伤后痴呆、老年性痴呆、血管性痴呆及中风后痴呆等。

TH1

我们相信一些本发明化合物可用于TH1用途。

作为实例，认为在巨噬细胞或其他提供抗原的细胞中STS抑制剂的存在可导致降低敏感T细胞提高TH1(高IL-2、IFNγ低IL-4)反应的能力。因此其他甾族化合物例如糖皮质激素的正常调节影响将占优势。

炎性病症

我们相信一些本发明化合物可用于治疗炎性病症-例如与以下任何一种或多种疾病相关的病症：自身免疫性疾病包括例如类风湿性关节炎、I型和II型糖尿病、全身性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、甲状腺炎、血管炎、溃疡性结肠炎及节段性回肠炎、皮肤病例如银屑病和接触性皮炎；移植物抗宿主病；湿疹；哮喘和移植后的器官排斥反应。

作为实例，认为STS抑制剂可预防DHEA或相关甾族化合物对免疫和/或炎症反应的正常生理效应。

本发明化合物可用于制备显示内源性糖皮质激素样作用的药物。

其他治疗

也可理解本发明化合物/组合物可具有其他重要的医学用途。

例如，本发明化合物或组合物可用于治疗WO-A-99/52890中所列疾病，即：

另外，或者本发明化合物或组合物可用于治疗WO-A-98/05635中所列疾病。为了便于参考，现提供所列疾病的一部分：癌症、炎症或炎性疾病、皮肤病、发热、心血管作用、出血、凝结及急性相反应、恶病质、厌食症、急性感染、HIV感染、休克状态、移植物抗宿主反应、自身免疫性疾病、再灌注损伤、脑膜炎、偏头痛及阿司匹林依赖性抗血栓症；肿瘤生长、侵袭和扩散、血管生成、转移、恶性肿瘤、腹水及恶性胸膜腔积液；脑缺血、缺血性心脏病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨质疏松症、哮喘、多发性硬化、神经变性、阿尔茨海默病、动脉硬化症、休克、血管炎、节段性回肠炎及溃疡性结肠炎；牙周炎、齿龈炎；银屑病、特应性皮炎、慢性溃疡、大疱性表皮松解；角膜溃疡、视网膜病及手术伤口愈合；鼻炎、过敏性结膜炎、湿疹、过敏反应；再狭窄、充血性心力衰竭、子宫内膜异位、动脉硬化症或内因硬化症(endosclerosis)。

另外，或者本发明化合物或组合物可用于治疗WO-A-98/07859中所列疾病。为了便于参考，现提供所列疾病的一部分：细胞因子及细胞增殖/分化活性；免疫抑制剂或免疫刺激剂活性(例如用于治疗免疫缺陷，包括感染人免疫缺陷病毒；调节淋巴细胞生长；治疗癌症和许多自身免疫性疾病，及预防移植排斥或诱导肿瘤免疫性)；调节造血作用，例如治疗骨髓性或淋巴性疾病；促进骨、软骨、腱、韧带及神经组织的生长，例如愈合伤口、灼伤、溃疡及牙周疾病和神经变性的治疗；促卵泡成熟激素(调节生育力)的抑制或活化；趋化性/化学动力学活性(例如动员特殊细胞类型到损伤或感染部位)；止血和溶解血栓活性(例如治疗血友病及中风)；抗炎活性(用于治疗例如脓毒性休克或节段性回肠炎)；作为抗微生物剂；例如代谢或行为调节剂；作为止痛剂；治疗具体缺陷性疾病；用人用或兽用药物治疗例如银屑病。

另外，或者本发明组合物可用于治疗WO-A-98/09985中所列疾病。为了便于参考，现提供所列疾病的一部分：巨噬细胞抑制和/或T细胞抑制活性及抗炎活性；抗免疫活性，即对细胞和/或体液免疫反应的抑制作用，包括不与炎症相关的反应；抑制巨噬细胞和T细胞附着于细胞外基质成分和纤连蛋白的能力，以及上调的fas受体在T细胞中的表达；抑制不必要的免疫反应及包括关节炎在内的炎症，包括类风湿性关节炎、与过敏相关的炎症、变应性反应、哮喘、全身性红斑狼疮、胶原病及其他自身免疫性疾病、与动脉粥样硬化症相关的炎症、动脉硬化、动脉粥样硬化性心脏病、再灌注损伤、心搏停止、心肌梗塞、血管炎性疾病、呼吸窘迫综合征或其他心肺疾病、与消化性溃疡相关的炎症、溃疡性结肠炎及其他胃肠道疾病、肝纤维化、肝硬化或其他肝病、甲状腺炎或其他腺性疾病、肾小球性肾炎或其他肾脏和泌尿道疾病、耳炎或其他耳鼻喉科疾病、皮炎或其他皮肤病、牙周疾病或其他牙齿疾病、睾丸炎或附睾炎、不育症、睾丸创伤或其他免疫相关性睾丸疾病、胎盘机能障碍、胎盘机能不全、习惯性流产、惊厥、子痫前期及其他免疫和/或炎症相关性妇科疾病、后眼色素层炎、中眼色素层炎、前眼色素层炎、结膜炎、脉络膜视网膜炎、眼色素层视网膜炎(uveoretinitis)、视神经炎、眼内炎症例如视网膜炎或囊样黄斑水肿、交感神经眼炎、巩膜炎、色素性视网膜炎、变性溶化(fondus)疾病的免疫及炎性成分、眼创伤的炎性成分、感染引起的眼部炎症、增殖性玻璃体视网膜病、急性缺血性眼神经病、过度瘢痕形成例如在青光眼滤过手术之后形成瘢痕、眼植入物免疫和/或炎症反应及其他免疫和炎症相关性眼科疾病、与自身免疫性疾病或炎症或障碍相关的炎症，其中在中枢神经系统(CNS)或在任何其他器官中，免疫和/或炎症抑制将是有益的，帕金森病、帕金森病治疗引发的并发症和/或副作用、AIDS相关的痴呆合并HIV相关的脑病、Devic氏病、Sydenham舞蹈病、阿尔茨海默病及其他变性疾病、CNS病症或障碍、stokes炎性成分、脊髓灰质炎后综合征、精神病障碍的免疫和炎性成分、脊髓炎、脑炎、亚急性硬化性全脑炎、脑脊髓炎、急性神经病、亚急性神经病、慢性神经病、Guillaim-Barre综合征、Sydenham chora、重症肌无力、假脑瘤、Down氏综合征、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化症、CNS压迫或CNS创伤或CNS感染的炎性成分、肌肉萎缩和营养不良的炎性成分以及免疫和炎症相关性疾病、中枢及外周神经系统病症或障碍、创伤后炎症、脓毒性休克、传染病、手术引发的炎性并发症或副作用、骨髓移植或其他移植并发症和/或副作用、基因疗法引发的炎性和/或免疫并发症和副作用，例如由病毒携带者引起的感染，或与AIDS相关的炎症、抑制体液和/或细胞免疫反应、通过减少单核细胞或淋巴细胞的量来治疗或改善单核细胞或白细胞增殖性疾病例如白血病，在移植天然或人造细胞、组织和器官例如角膜、骨髓、器官、晶状体、起搏器、天然或人造皮肤组织的情况下预防和/或治疗移植排斥。

化合物制备

本发明化合物可通过将合适的醇与合适的氯化物反应制备。作为实例，本发明氨基磺酸酯化合物可通过将合适的醇与合适的式R⁵R⁶NSO₂Cl的氨磺酰氯反应制备。

进行该反应的典型条件如下。

于0℃将氢化钠和氨磺酰氯加入到搅拌的醇的无水二甲基甲酰胺溶液中。随后，使该反应升温至室温，并且再继续搅拌24小时。将该反应混合物倾入到冷的饱和碳酸氢钠溶液中，并用二氯甲烷萃取所得水相。将合并的有机萃取物用无水MgSO₄干燥。过滤，然后真空蒸发溶剂，并用甲苯共蒸发，得到粗残留物，其进一步通过快速层析纯化。

优选在反应之前用氨磺酰氯适当地将醇衍生化。必要时，醇的官能团可用已知方法保护并在反应结束时除去该保护基团或那些保护基团。

优选按照Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)的方法制备氨基磺酸酯化合物。

可适当地结合Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB92/01586的方法制备膦酸酯化合物。

可适当地采用Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB92/01586的方法制备磺酸酯化合物。

可适当地采用Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB91/00270的方法制备硫代膦酸酯化合物。

优选的制备方法也在下文中提供。

实施例

本发明现在将通过实施例并参照附图进一步详细地描述，其中：

图1显示简要流程；

图2显示简要流程；

图3显示图；和

图4显示图；

图5显示板；

图6显示板；

图7显示图；

图8显示图；

图9显示图；

图10显示板；

图11显示图；

图12显示图；

图13显示图；

图14显示荧光照片；

图15显示图；

图16显示图；

图17显示图；

本发明现在将仅通过实施例描述。然而，应理解：这些实施例也代表本发明优选的化合物，以及制备这些化合物的优选路线及用于制备这些化合物的有用中间体。

合成

按照下列流程

合成2-取代的17-烯基氨基磺酸酯

17-烯基酯官能的转化

腈官能化的EMATES的合成

17-烷基-EMATEs

17-氨基雌激素

其中P为保护基团。

方法A

将氨磺酰氯(680μl，0.507mmol)的0.745M甲苯溶液真空浓缩(水浴温度在30℃以下)，并在加入DMA(1.5ml)之前于冰浴中冷却。然后加入合适的苯酚(0.253mmol)并使该反应达到室温过夜。加入水并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取该混合物。合并有机组分，用水(5×10ml)及盐水(10ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。

雌酮3-O-叔丁基二甲基甲硅烷基醚1

方法B

将雌酮(10g，37mmol)、咪唑(6.4g，94mmol)及叔丁基二甲基氯化硅(6.7g，44.4mmol)溶于二甲基甲酰胺(130ml)中，并在氮气下室温搅拌过夜。加入水并用二氯甲烷(3×100ml)萃取混合物。合并的有机组分用水(2×100ml)及盐水(10ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。

乙醇重结晶，得到保护的雌酮白色针状结晶(11.34g，29.6mmol，80％)。m.p.172-173℃(文献值m.p.170-172℃).

δ_H(CDCl₃)0.19[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.91(3H，s CH₃)，0.98[9H，s，C(CH₃)₃]，1.36-1.68(5H，m，烷基H)，1.90-2.55(7H，m，烷基H)，2.82-2.88(2H，m，烷基H)，6.57(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.62(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.12(1H，d，J＝8.6，ArH-1).

m.p.：Fevig等J.Org.Chem.52：1987，247-251。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙酸乙酯2

方法C

于室温、氮气下，无水THF(15ml)中搅拌氢化钠(520mg，17.4mmol)直到所有固体溶解。加入膦酸乙酸三乙酯(3.20g，2.84ml，7.14mmol)并在加入TBS雌酮1(2g，5.2mmol)之前搅拌10分钟。将所得混合物回流加热过夜。加入水并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取混合物。合并的有机组分用水(2×50ml)及盐水(10ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。

快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到两种异构体的混合物，为白色结晶固体(1.73g，3.77mmol，73％)。由NMR确定异构体的比率为5∶1。m/z(EI⁺)454(M⁺，50％)，397(90％)，82.9(100％)。HRMS(FAB⁺)计算值C₂₈H₄₂O₃Si 454.2903，实测值454.2910。

方法：Ewers等Tetrahedron，54：1998，4277-4282。

(3-羟基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙酸乙酯3

方法D

于室温、氮气下，搅拌TBS醚2(100mg，0.220mmol)、1M叔丁基氟化铵的THF溶液(300μl，0.300mmol)及THF(5ml)2小时。加入水并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取混合物。合并有机组分，用水(2×5ml)及盐水(5ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。

快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到两种异构体的混合物，为白色结晶固体(74mg，0.218mmol，99％)。m.p.118-120℃。由NMR确定异构体的比率为5∶1。

δ_H(CDCl₃)0.86(3H，s，CH₃)，1.30(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.41-2.91(15H，m，烷基H)，4.17(2H，q，J＝7.0)，5.20(1H，s，OH)，5.59(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.58(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.64(1H，dd，J＝8.2，2.7，ArH-2)，7.15(1H，d，J＝8.2，ArH-1)；

m/z(FAB⁺)341.1[(MH)⁺，100％]；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₂₈O₃+H341.2116，实测值341.2111。

2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙醇4

方法E

于-78℃、氮气下，向TBS醚2(300mg，0.66mmol)的THF(5ml)溶液中加入1.5M二异丁基氢化铵的甲苯溶液(1ml，1.5mmol)。将该溶液升温至0℃并搅拌1.5小时。于0℃加入甲醇和水并使该溶液升温至室温，搅拌30分钟。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取该浑浊溶液，并用水(2×10ml)及盐水(10ml)洗涤合并的有机组分，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。

所得白色固体(179mg，0.434mmol，66％)无需进一步纯化即可使用。m.p.128-130℃(文献值m.p.128-130℃).δ_H(CDCl₃)0.18[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.81(3H，s CH₃)，0.98[9H，s，C(CH₃)₃]，1.03-1.61(7H，m，烷基H)，1.74-1.97(3H，m，烷基H)，2.16-2.42(3H，m，烷基H)，2.75-2.86(2H，m，烷基H)，4.07-4.23(2H，m，CH₂OH)，5.26-5.31(1H，m，烯H)，6.55(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.61(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.13(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。由NMR确定异构体的比率为8∶1。

m/z(FAB⁺)412.1(M⁺，7％)，73.0(100％)，147(35％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₆H₄₀O₂Si 412.2798，实测值412.2778。

方法：Tanabe等专利号：US 6,281,205 B1.2001。抗雌激素甾体化合物及相关药用组合物及使用方法。

m.p.：Ewers等Tetrahedron，54：1998，4277-4282。

17-(2-羟基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇，5

用烯丙基醇4(179mg，434mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到两种异构体的混合物，为白色粉末(74mg，0.218mmol，99％)。m.p.200-202℃。δ_H(CDCl₃)0.81(3H，s，CH₃)，1.13-1.56(7H，m，烷基H)，1.82-1.98(3H，m，烷基H)，2.16-2.43(3H，m，烷基H)，2.82-2.87(2H，m，烷基H)，5.27-5.32(2H，m，CH₂OH)，4.53(1H，s，OH)，5.27-5.32(1H，m，烯H)，6.56(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.63(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.17(1H，d，J＝8.6，ArH-1)；m/z(FAB⁺)298.1(M⁺，75％)，281.1(100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₀H₂₆O₂ 298.1933，实测值298.1935。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基]-乙酸乙酯6

方法F

在氢气气氛下，搅拌酯2(300mg，0.66mmol)和5％钯/碳酸钙(17mg)的乙醇(5ml)溶液过夜。将该反应混合物通过硅藻土(Celite)床过滤并用乙醇洗涤。滤液真空浓缩。

快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到还原产物6的白色结晶固体(233mg，0.51mmol，77％)。m.p.64-66℃.

δ_H(CDCl₃)0.18[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.64(3H，s CH₃)，0.97[9H，s，C(CH₃)₃]，1.27(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.30-1.56(5H，m，烷基H)，1.73-2.42(9H，m，烷基H)，2.79-2.82(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.4，CH₂)，6.54(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.60(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.11(1H，d，J＝8.6，ArH-1)；

m/z(FAB⁺)456.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₈H₄₄O₃Si456.3060，实测值456.3041。

(3-羟基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯7

用酯6(100mg，0.211mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到苯酚7的灰色针状物(56mg，0.164mmol，78％)。m.p.126-128℃。

δ_H(CDCl₃)0.63(3H，s CH₃)，1.27(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.30-2.43(14H，m，烷基H)，2.78-2.84(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.0，CH₂)，4.60(1H，s，OH)，6.56(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.62(1H，dd，J＝8.2，2.7，ArH-2)，7.14(1H，d，J＝8.2，ArH-1).

m/z(FAB⁺)342.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₀O₃342.2195，实测值342.2201。

2-(3-羟基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-丙酸乙酯8

用TBS雌酮1(1g，2.6mmol)及2-膦酰基丙酸三乙基酯(1.7g，1.53ml，7.14mmol)按方法C的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到去保护产物8的单一异构体，为白色粉末(170mg，0.48mmol，18％)。m.p.113-115℃。δ_H(CDCl₃)0.91(3H，s CH₃)，1.40(3H，t，J＝6.6，CH₃)，1.43-1.68(7H，m，烷基H)，1.91-2.28(6H，m，烷基H)，2.37-2.42(2H，m，烷基H)，2.87-2.91(2H，m，CH₂)，4.00(2H，q，J＝7.0，CH₂)，6.64(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.71(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.19(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙腈9

用TBS雌酮1(5g，13.0mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(4.02g，4.4ml，22.7mmol)按方法C的描述进行该反应。随后后处理粗反应混合物，其TLC及¹H NMR表明起始原料不再存在，且该产物为比率为6∶1的两种异构体9的混合物。该混合物无需进一步纯化即可使用。

(3-羟基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙腈10

用甲硅烷基醚9(100g，0.246mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到苯酚10单一异构体的白色粉末(53mg，0.18mmol，73％)。m.p.264-266℃。δ_H(DMSO)0.84(3H，s CH₃)，1.24-1.50(8H，m，烷基H)，1.82-1.87(2H，m，烷基H)，1.93-1.97(1H，m，烷基H)，2.09-2.16(1H，m，烷基H)，2.18-2.34(1H，m，烷基H)，2.66-2.77(2H，m，烷基H)，5.37(1H，m，烯H)，6.44(1H，d，J＝2.64，ArH-4)，6.51(1H，dd，J＝8.2，2.6，ArH-2)，7.06(1H，d，J＝8.2，ArH-1)，9.02(1H，s，OH)；m/z(FAB⁺)293.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₀H₂₃ON 293.1780，实测值293.1783。

13-甲基-17-亚甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇11

将叔丁醇钾(220mg，1.96mmol)加入到无水THF(5ml)中并搅拌10分钟，使该盐完全溶解。将甲基三苯基溴化鏻(700mg，1.96mmol)分次加入到该盐溶液中。将雌酮(500mg，1.85mmol)溶于THF(5ml)并用注射器滴加到该浅黄色溶液中。室温搅拌2小时后，将该反应回流加热过夜。将该反应冷却，加入水(10ml)并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取该混合物。合并有机组分，用水(2×10ml)和盐水(10ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)并用甲苯/己烷重结晶，得到烯11的白色结晶固体(53mg，0.198mmol，11％)。m.p.130-132℃(文献值m.p.134-137℃)。δ_H(CDCl₃)0.82(3H，s CH₃)，1.20-1.62(6H，m，烷基H)，1.78-1.85(1H，m，烷基H)，1.90-1.99(2H，m，烷基H)，2.16-2.38(3H，m，烷基H)，2.50-2.59(1H，m，烷基H)，2.78-2.92(2H，m，烷基H)，4.50(1H，s，OH)，4.67(2H，t，J＝2.0，烯H)，6.57(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.63(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.17(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。

方法：Williams，Preparation of Alkenes(烯的制备)，OxfordUniversity出版社，1996，32页。

m.p.：Forcellese等J.Org.Chem.46：1981，3326-3328。

3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-酮12

用2-乙基雌酮(4g，13.4mmol)按方法B的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到甲硅烷基醚12的白色结晶固体(5.02g，12.2mmol，91％)。δ_H(CDCl₃)0.24[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.98(3H，s，CH₃)，1.01[9H，s，C(CH₃)₃]，1.17(3H，t，J＝7.8，CH₃)，1.40-1.66(6H，m，烷基H)，1.94-2.52(7H，m，烷基H)，2.57(2H，q，J＝7.8，CH₂)，2.82-2.86(2H，m，烷基H)，6.50(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙酸乙酯13

用甲硅烷基醚12(412mg，1mmol)及膦酸乙酸三乙酯(271mg，240μl，1.2mmol)按方法C的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到两种异构体13的无色油状物(290mg，0.602mmol，60％)。由¹H NMR确定异构体的比率为6∶1。δ_H(CDCl₃)0.22[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.97(3H，s CH₃)，1.00[9H，s，C(CH₃)₃]，1.17(3H，t，J＝7.8，CH₃)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.59-2.44(11H，m，烷基H)，2.56(2H，q，J＝7.8，CH₂)，2.76-2.92(4H，m，烷基H)，4.15(2H，q，J＝7.0，CH₂)，5.62(1H，t，J＝2.0，烯H)，6.48(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)482.1(M⁺，90％)，73.0(100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₃₀H₄₆O₃Si482.3216，实测值？？。

Z-和E-(2-乙基-3-羟基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙酸乙酯14a和14b

用酯13(290mg，0.639mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到Z-异构体14a的白色粉末(28mg，0.0757mmol，12％).m.p.157-159℃。δ_H(CDCl₃)1.04(3H，s CH₃)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.35-2.48(13H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.78-2.84(2H，m，烷基H)，4.09-4.12(2H，m，CH₂)，4.46(1H，s，OH)，5.68(1H，t，J＝2.0，烯H)，6.50(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)368.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₄H₃₂O₃ 368.2351，实测值368.2364。

进一步洗脱得到E异构体14b的浅黄色油状物(184mg，0.497mmol，78％)。δ_H(CDCl₃)0.86(3H，s CH₃)，1.23(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.33-2.45(11H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.74-2.91(4H，m，烷基H)，4.15(2H，q，J＝7.0，CH₂)，4.52(1H，s，OH)，5.59(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.51(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)。

(2-乙基-13-甲基-3-氨磺酰氧基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙酸乙酯15

用酯14b(132mg，0.357mmol)按方法A的描述进行该反应。使用制备HPLC纯化氨基磺酸酯15，得到白色固体(28mg，0.0757mmol，21％)。σ_H(d₆-丙酮)0.91(3H，s CH₃)，1.18(3H，t，J＝7.7，CH₃)，1.23(3H，t，J＝7.2，CH₃)，1.28-1.65(6H，m，烷基H)，1.86-2.08(5H，m，烷基H)，2.24-2.34(1H，m，烷基H)，2.47-2.54(1H，m，烷基H)，(2H，q，J＝7.7，CH₂)，2.81-2.89(2H，m，烷基H)，4.10(2H，q，J＝7.2，CH₂)，5.56(1H，t，J＝2.5，烯H)，7.09(1H，s，ArH)，7.26(1H，s，ArH)。

2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙醇16

用酯14b(412mg，1mmol)按方法E的描述进行该反应。TLC及¹HNMR均表明起始原料不再存在，且产物乙烯醇16无需进一步纯化即可使用。

Z-和E-2-乙基-17-(2-羟基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇17a和17b

用乙烯醇16(520mg，1.18mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到Z-苯酚17a的白色粉末(27mg，0.0831mmol，7％)。m.p.205-207℃。δ_H(CDCl₃)0.93(3H，s CH₃)，1.23(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.26-1.61(5H，m，烷基H)，1.72-1.79(2H，m，烷基H)，1.89-1.92(1H，m，烷基H)，2.18-2.39(4H，m，烷基H)，2.47-2.53(1H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.74-2.87(2H，m，烷基H)，4.21(1H，dd，J＝7.0，12.1，CHOH)，4.35(1H，dd，J＝12.1，7.0，CHOH)，4.62(1H，s，OH)，5.33-5.37(1H，m，烯H)，6.50(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)326.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₀O₂326.2246，实测值326.2259。

进一步洗脱得到E-苯酚17b的白色粉末(245mg，0.754mmol，64％)。m.p.169-171℃。δ_H(CDCl₃)0.79(3H，s CH₃)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.27-1.61(5H，m，烷基H)，1.74-1.97(3H，m，烷基H)，2.20-2.48(5H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.77-2.83(2H，m，烷基H)，4.11-4.60(2H，m，CH₂OH)，4.50(1H，s，OH)，5.26-5.37(1H，m，烯H)，6.48(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)326.1(M⁺，50％)，73.0(100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₀O₂ 326.2246，实测值326.2256。

氨基磺酸2-乙基-13-甲基-17-乙烯基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯18

用17b(65mg，0.200mmol)按方法A的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂CHCl₃)得到氨基磺酸酯18的无色油状物(36mg，0.093mmol，47％)。δ_H(CDCl₃)0.91(3H，s CH₃)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.27-1.55(2H，m，烷基H)，1.61-1.73(4H，m，烷基H)，1.85-2.07(2H，m，烷基H)，2.18-2.39(4H，m，烷基H)，2.69(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.83-2.92(2H，m，烷基H)，4.88-4.97(1H，m，烯H-16)，4.99(2H，s NH₂)，5.35(1H，d，J＝18.0，烯H-22)，5.73(1H，br s，烯H-22)，6.32(1H，dd，J＝18.0，11.4，烯H-21)，7.10(1H，s，ArH)，7.18(1H，s，ArH)。

2-乙基-17-(2-羟基-乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇19

用乙烯醇16(76mg，0.233mmol)按方法F的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯5∶1)得到白色粉末二醇19(51mg，0.155mmol，67％)。m.p.162-164℃。δ_H(CDCl₃)0.63(3H，s CH₃)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.24-1.50(10H，m，烷基H)，1.72-1.88(4H，m，烷基H)，2.15-2.32(2H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.76-2.81(2H，m，烷基H)，3.61-3.75(2H，m，CH₂OH)，5.0(1H，s，OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.05(1H，s，ArH)；δ_C(CDCl₃)12.6(CH₃)，14.4(CH₃)，23.0(CH₂)，24.4(CH₂)，26.5(CH₂)，27.9(CH₂)，28.4(CH₂)，29.3(CH₂)，33.7(CH₂)，37.8(CH₂)，38.9(CH)，42.5(C)，44.2(CH)，47.2(CH)，54.7(CH)，62.7(CH₂)，115.2(CH)，126.3(CH)，127.1(C)，132.8(C)，135.5(C)，151.1(C).m/z(FAB⁺)328.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₂O₂ 328.2402，实测值328.2407。

氨基磺酸2-乙基-13-甲基-17-(2-氨磺酰氧基-乙基)-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯20

用二醇19(35mg，0.107mmol)按方法A的描述进行该反应。用制备HPLC纯化氨基磺酸酯20，得到白色固体(28mg，0.0576mmol，54％)。δ_H(d₆-丙酮)0.69(3H，s CH₃)，1.18(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.29-1.62(10H，m，烷基H)，1.76-1.42(6H，m，烷基H)，1.70(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.80-2.84(2H，m，烷基H)，4.16-4.18(2H，m，CH₂)，6.63(2H，s，NH₂)，7.09(1H，s，ArH)，7.13(2H，s，NH₂)，7.24(1H，s，ArH)；m/z(FAB-)485.1[(M-H)⁺，100％]；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₄O₆N₂S₂486.1858，实测值486.1854。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基]-乙酸乙酯21

用酯13(100mg，0.220mmol)按方法F的描述进行该反应。¹H NMR表明起始原料不再存在，且产物酯21无需进一步纯化即可使用。

(2-乙基-3-羟基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯22

用酯21(66mg，0.145mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到无色油状饱和酯22(38mg，0.103mmol，71％)。δ_H(CDCl₃)0.63(3H，s CH₃)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.27(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.24-2.00(11H，m，烷基H)，2.12-2.22(3H，m，烷基H)，2.27-2.33(1H，m，烷基H)，2.41(1H，dd，J＝14.5，5.1，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.73-2.81(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.4，CH₂)，4.62(1H，s，OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB)370.2(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₄H₃₄O₃ 370.2508，实测值370.2537。

(2-乙基-13-甲基-3-氨磺酰氧基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯23

用酯22(100mg，0.270mmol)按方法A的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到白色粉末氨基磺酸酯23(83mg，0.185mmol，68％)。m.p.120-122℃。δ_H(CDCl₃)0.63(3H，s CH₃)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.27(3H，t，J＝7.0，CH₃)，1.24-1.50(7H，m，烷基H)，1.74-1.98(5H，m，烷基H)，2.11-2.42(4H，m，烷基H)，2.68(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.82-2.84(2H，m，烷基H)，4.12(2H，q，J＝7.0，CH₂)，5.08(2H，s，NH₂)，7.05(1H，s，ArH)，7.16(1H，s，ArH)。δ_C(CDCl₃)12.5，14.2，14.6，23.0，24.2，26.2，27.5，28.2，29.2，35.4，37.3，38.4，42.3，44.2，46.9，54.3，60.2，121.4，126.9，133.6，136.0，139.6，146.1，174.0；m/z(FAB)449.1(M⁺，10％)，135.0(100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₄H₃₅O₅NS 449.2236，实测值449.2237。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基]-乙腈24

用甲硅烷基醚12(1g，2.6mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(691mg，631μl，3.9mmol)按方法C的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯20∶1)得到无色油状两种异构体24(641mg，1.47mmol，57％)。m/z(FAB)435.3(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₈H₄₁ONSi435.2957，实测值435.2961。

(2-乙基-3-羟基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙腈25

用甲硅烷基醚24(540mg，1.24mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到浅黄色油状苯酚25(284mg，0.88mmol，71％)。δ_H(CDCl₃)0.88(3H，s CH₃)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.25-1.62(6H，m，烷基H)，1.90-1.97(3H，m，烷基H)，2.18-2.24(1H，m，烷基H)，2.40-2.45(1H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.63-2.84(4H，m，烷基H)，4.53(1H，s，OH)，5.04(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.49(1H，s，ArH)，7.02(1H，s，ArH)；δ_H(CDCl₃)14.4(CH₃)，18.0(CH₃)，23.0(CH₃)，23.5(CH₂)，26.3(CH₂)，27.4(CH₂)，29.1(CH₂)，30.3(CH₂)，34.7(CH₂)，38.5(CH)，43.7(CH)，46.4(C)，52.8(CH)，87.7(CH)，115.2(CH)，117.5(C)，126.2(CH)，127.4(C)，131.7(C)，135.2(C)，151.4(C)，181.1(C)；m/z(FAB)321.3(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₂₇ON 321.2093，实测值321.2088。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基]-乙腈26

用甲硅烷基醚24(100mg，0.230mmol)按方法F的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到无色油状饱和腈26(81mg，0.185mmol，81％)。δ_H(CDCl₃)0.22[6H，s，Si(CH₃)₂)]，0.67(3H，sCH₃)，1.00[9H，s，C(CH₃)₃]，1.16(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.26-1.53(7H，m，烷基H)，1.78-2.17(5H，m，烷基H)，2.20-2.29(2H，m，烷基H)，2.31-2.40(2H，m，CH₂CN)，2.56(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.74-2.81(2H，m，烷基H)，6.47(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB)437.4(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₈H₄₃OSiN 437.3114，实测值437.3121。

(2-乙基-3-羟基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙腈27

用腈26(73mg，0.167mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到白色固体苯酚27(38mg，0.118mmol，70％).m.p.195-197℃。δ_H(CDCl₃)0.67(3H，s CH₃)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.27-1.53(7H，m，烷基H)，1.74-1.89(3H，m，烷基H)，1.99(1H，dt，J＝12.1，3.1，烷基H)，2.03-2.12(1H，m，烷基H)，2.14-2.42(4H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.75-2.86(2H，m，烷基H)，4.67(1H，s OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB)323.2(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₂₉ON 323.2249，实测值323.2252。

氨基磺酸17-氰基甲基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯28(STX 564)

用苯酚27(182mg，0.591mmol)按方法A的描述进行该反应。快速柱层析(CHCl₃)得到白色针状氨基磺酸酯28(120mg，0.299mmol，51％)。m.p.175-177℃。δ_H(d₆-丙酮)0.73(3H，s CH₃)，1.17(3H，t，J＝7.4，CH₃)，1.26-1.56(7H，m，烷基H)，1.77-2.13(5H，m，烷基H)，2.26-2.58(3H，m，烷基H)，2.69(2H，q，J＝7.4，CH₂)，2.80-2.83(2H，m，烷基H)，7.08(1H，s，ArH)，7.12(2H，s，NH₂)，7.23(1H，s，ArH)；m/z(FAB)402.0(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₂H₃₀O₃N₂S 402.1977，实测值402.1975。

[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-甲氧基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基甲基]-亚甲基-胺29

用2-甲氧基-3-叔丁基二甲硅烷基氧基雌酮(1g，2.42mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(712g，650μl，4.02mmol)按方法C的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到无色油状烯29的两种异构体(481mg，1.14mmol，27％)。由NMR确定两种异构体的比率为1∶1。m/z(FAB⁺)438.1[(MH)⁺，50％]，380.1(100％)，73.0(80％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₇H₃₉O₂NSi 437.2750，实测值437.2731。

Z-和E-(3-羟基-2-甲氧基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙腈30

用甲硅烷基醚29(400mg，0.95mmol)按方法D的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到两种异构体的混合物，为白色粉末(91mg，0.281mmol，30％)。

进一步洗脱得到白色固体E异构体30(115mg，0.356mmol，37％)。δ_H(CDCl₃)0.89(3H，s CH₃)，1.25-1.64(6H，m，烷基H)，1.90-1.99(3H，m，烷基H)，2.22-2.27(1H，m，烷基H)，2.35-2.40(1H，m，烷基H)，2.60-2.69(1H，m，烷基H)，2.74-2.82(3H，m烷基H)，3.86(3H，sOCH₃)，5.05(1H，t，J＝2.7，烯H)，5.43(1H，s，OH)，6.65(1H，s，ArH)，6.77(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)323.1(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₁H₂₅O₂N 323.1885，实测值323.1885。

氨基磺酸2-甲氧基-13-甲基-17-亚甲基氨基亚甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯31(STX639)

用苯酚30(40mg，0.124mmol)按方法A的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到白色针状氨基磺酸酯31(36mg，0.0896mmol，72％)。m.p.202-204℃。δ_H(d₆-丙酮)0.95(3H，s CH₃)，1.25-1.65(7H，m，烷基H)，1.94-2.08(2H，m，烷基H)，2.26-2.35(1H，m，烷基H)，2.46-2.66(2H，m，烷基H)，2.74-2.84(3H，m，烷基H)，3.84(3H，s OCH₃)，5.27(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.90(2H，s，NH₂)，7.02(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB⁺)402.0(M⁺，100％)；HRMS(FAB⁺)计算值C₂₁H₂₆O₄N₂S 402.1613，实测值402.1611。

(3-羟基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙腈32

用烯30(100mg，0.310mmol)按方法F的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到白色固体饱和腈32(81mg，0.249mmol，80％)。m.p.172-174℃。δ_H(d₆-丙酮)0.71(3H，s CH₃)，1.22-1.52(7H，m，烷基H)，1.73-1.90(3H，m，烷基H)，1.98-2.08(2H，m，烷基H)，2.14-2.22(1H，m，烷基H)，2.30-2.39(2H，m，烷基H)，2.45-2.54(1H，m，烷基H)，2.65-2.80(2H，m，烷基H)，3.80(3H，s OCH₃)，6.52(1H，s，ArH)，6.84(1H，s，ArH)，8.00(1H，s，OH).m/z[FAB+]325(100％，M⁺)；HRMS[FAB+]实测值325.20418，C₂₁H₂₇NO₂理论值325.20418；计算值C，77.5％；H，8.36％；N，4.30％；实测值C，77.2％；H，8.41％；N，4.01％。

氨基磺酸17-氰基甲基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯33(STX641)

用腈32(60mg，0.185mmol)按方法A的描述进行该反应。快速柱层析(SiO₂己烷∶乙酸乙酯4∶1)并用丙酮/己烷重结晶，得到白色结晶固体氨基磺酸酯33(20.3mg，0.0547mmol，30％)。m.p.183-185℃。

δ_H(CDCl₃)0.69(3H，s CH₃)，1.20-1.55(7H，m，烷基H)，1.70-1.94(3H，m，烷基H)，1.98-2.50(6H，m，烷基H)，2.74-2.84(2H，m，烷基H)，3.87(3H，s OCH₃)，5.06(2H，s，NH₂)，6.92(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；δ_c(CDCl₃)12.2(CH₃)，17.6(CH₂)，23.9(CH₂)，26.3(CH₂)，27.4(CH₂)，28.3(CH₂)，28.6(CH₂)，37.3(CH₂)，38.3(CH)，42.5(C)，44.3(CH)，46.7(CH)，54.4(CH)，56.4(CH₃)，110.4(CH)，119.5(C)，124.2(CH)，130.2(C)，138.2(C)，140.4(C)，149.0(C)；m/z(FAB⁺).404.1(M⁺，100％)；

HRMS(FAB⁺)计算值C₂₁H₂₈O₄N₂S 404.1770，实测值404.1767；C₂₁H₂₈O₄N₂S理论值C，62.35％；H，6.98％；N，6.93％，实测值C，62.50％；H，6.96％；N，6.85％。

3-O-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基)-17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-雌酮34

向3-OTBS雌酮(200mg，0.52mmol)的THF(20mL)溶液中加入2-甲氧基乙胺(226μL，4eq)，然后，10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(449mg，4.5eq)及乙酸(150μL)。于室温搅拌4天后用氢氧化钠(4mL，1M水溶液)猝灭该反应，并用乙酸乙酯(50mL)稀释。标准水后处理得到所需胺34，为白色固体，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.09(1H，d，J 8.4，ArH)，6.58(1H，dd，J 8.4和2.5，ArH)，6.52(1H，d，J 2.5，ArH)，3.34-3.51(2H，m，OCH₂)，3.34(3H，s，OMe)，2.57-2.92(5H，m，6-CH₂，CH₂N和CHN)，1.20-2.30(14H，m)，0.96(9H，s，¹Bu)，0.74(3H，s，18-CH₃)和0.17(6H，s，SiMe₂)；δ_c 153.6，137.8，133.2，126.1，119.9，117.1，72.4，69.3，58.7，52.4，48.5，44.0，43.2，38.7，38.3，29.7，29.6，27.5，26.4.25.7.23.5，1801，11.8和-4.4.FAB+444.3.

17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-雌酮35

用TBAF(0.4mL，1M THF溶液)处理TBS保护的雌三烯34(160mg)的THF(10mL)溶液。搅拌过夜后进行标准水后处理，得到所需产物35，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.10(1H，d，J 8.6，ArH)，6.58(1H，dd，J 8.6和2.7，ArH)，6.52(1H，d，J 2.7，ArH)，3.48-3.52(2H，m，OCH₂)，3.34(3H，s，OMe)，2.62-2.94(5H，m，6-CH₂，CH₂N和CHN)，1.24-2.52(15H，m)和0.75(3H，s，18-CH₃)

17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇36

向2-MeO-3-OTBS雌酮(415mg)的THF(10mL)溶液中加入N，N-二甲基乙二胺(439μL，4mmol)，然后，10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(954mg，4.5mmol)及乙酸(300μL)。于室温搅拌3天后用氢氧化钠(4mL，1M水溶液)猝灭该反应，并用乙酸乙酯(50mL)稀释。标准水后处理得到浅黄色油状所需胺，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.76(1H，s，ArH)，6.53(1H，s，ArH)，3.76(3H，s，OMe)，2.65-2.82(4H，m，6-CH₂和CH₂N)，2.62(1H，dd，J 8.6和8.6，CHN)，2.36-2.48(2H，m，CH₂N)，1.20-2.30(20H，m 包括2.23(6H，s，NMe₂))，0.99(9H，s，¹Bu)，0.76(3H，s，18-CH₃)和0.15(6H，s，SiMe₂).

然后将TBS保护的氨基甾族化合物溶于THF(20mL)并用TBAF(1.5mL，1M THF溶液)及KF(10mg)处理，然后搅拌8小时。然后加入乙酸乙酯(50mL)，所得溶液用碳酸氢钠溶液(50mL，饱和)、水(50mL)及盐水(2×50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。所得浅黄色油状物用柱层析纯化(CHCl₃/MeOH 99∶1-1∶1)，得到所需胺36的透明无色油状物，然后用乙醚/己烷研磨得到白色粉末，m.p.108℃，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.77(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，3.85(3H，s，OMe)，2.68-2.84(4H，m，6-CH₂和CH₂N)，2.63(1H，dd，J 8.6和8.6，CHN)，2.38-2.46(2H，m，CH₂N)，1.20-2.30(21H，m包括2.24(6H，s，NMe₂))和0.76(3H，s，18-CH₃).δ_c 144.6，143.4，131.5，129.3，114.7，108.1，69.4，59.3，56.0，52.4，46.3，45.5，44.3，43.2，38.8，38.3，29.7，29.1，27.6，26.9，23.5和11.9.

2-甲氧基-17-(2-吗啉-4-基-乙基氨基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇37

向2-MeO-3-OTBS雌酮(315mg，0.76mmol)的THF(10mL)溶液中加入4-(2-氨基乙基)吗啉(395mg，4eq)，然后，10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(723mg，4.5eq)及乙酸(240μL)。于室温搅拌4天后用氢氧化钠(4mL，1M水溶液)猝灭该反应，并用乙酸乙酯(50mL)稀释。标准水后处理得到所需胺，为白色粉末，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.78(1H，s，ArH)，6.54(1H，s，ArH)，3.78(3H，s，OMe)，3.66-3.76(4H，m，2×OCH₂)，1.20-2.88(25H，m).0.99(9H，s，¹Bu)，0.76(3H，s，18-CH₃)和0.16(6H，s，SiMe₂).

然后将TBS保护的氨基甾族化合物溶于THF(20mL)，并用TBAF(1.5mL，1M THF溶液)及KF(10mg)处理，然后搅拌8小时。然后加入乙酸乙酯(50mL)，所得溶液用碳酸氢钠溶液(50mL，饱和)、水(50mL)及盐水(2×50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。所得浅黄色油状物用柱层析纯化(CHCl₃/MeOH 99∶1-1∶1)，得到所需胺37的透明无色油状物，然后用乙醚/己烷研磨得到白色粉末，m.p.144-146℃，其显示δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.75(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，3.84(3H，s，OMe)，3.67-3.71(4H，m，2×OCH₂)2.72-2.86(4H，m，6-CH₂和CH₂N)，2.65(1H，dd，J 9.0和8.2，CHN)，2.52(2H，dd，J 6.3和6.3，CH₂N)2.46-2.50(4H，m，2×CH₂N)，1.20-2.26(15H，m)和0.76(3H，s，18-CH₃)。δ_c 144.5，143.4，131.3，129.3(所有C)，114.6，108.0(两个CH)，69.2(CH)，67.0，57.9(两个CH₂)，56.0(CH₃)，53.7(CH₂)，52.3(CH)，45.0(CH₂)，44.3(CH)，43.2(C)，38.8(CH)，38.2，29.4，29.1，27.6，26.9，23.5(所有CH₂)及12.0CH₃)。

2-乙基-17-[(呋喃-2-基甲基)-氨基]-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇38

向2-Et-3-O-TBS雌酮(414mg，1mmol)的THF(10mL)溶液中加入糠胺(354μL，4mmol)，然后，10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(954mg，4.5mmol)及乙酸(300μL)。于室温搅拌3天后用氢氧化钠(4mL，1M水溶液)猝灭该反应并用乙酸乙酯(50mL)稀释。标准水后处理得到所需胺，为浅黄色油状物。向保护的甾族化合物的THF溶液中加入TBAF(1.5mL)及氟化钾(10mg)。于室温搅拌14小时后加入乙醚(50mL)和水(50mL)。然后分离有机层，用碳酸氢钠溶液(25mL)、水(25mL)及盐水(25mL)洗涤，然后干燥并蒸发，得到浅黄色油状物(270mg)。然后，所需产物38用柱层析分离(0-3％甲醇/氯仿)，得到透明无色油状物，其显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.37(1H，dd，J 1.8 & 0.8)，7.03(1H，s，ArH)，6.49(1H，s，ArH)，6.32(1H，dd，J 3.2 & 1.8)，6.24(1H，dd，J 3.2 & 0.8)，3.85-3.95(2H，m，CH2N)，2.76-2.84(2H，m，6-CH₂)，2.67(1H，dd，8.8 & 8.5，CHN)，2.60(2H，q，J 7.6，CH₂Me)，2.27-2.35(1H，m)，2.14-2.22(1H，m)，1.26-2.07(13H，m)，1.23(3H，t，J 7.6，CH₂Me)和0.81(3H，s，18-CH₃).

(2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-吡啶-2-基甲基-胺二盐酸盐39

搅拌2-Et-3-O-MOM雌酮(342mg，1mmol)及2-(氨基甲基)吡啶(515μl，5mmol)的THF(10mL)溶液1小时，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(848mg，4mmol)处理。搅拌3天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。将所得黄色油状物溶于THF中并用HCl的乙醚溶液(1mL，2M)处理，然后真空除去溶剂，用乙醚研磨所得胶状物，得到产物39二盐酸盐的灰色粉末，其显示

δ_H(CD₃OD，TMS＝0)8.86(1H，app d，J 5.1)，8.38(1H，app t，J 7.8)，8.06(1H，app d，J 7.8)，7.87(1H，dd，J 7.8 &5.1)，7.02(1H，s，ArCH)，6.73(1H，s ArH)，5.14(2H，s，OCH₂)，4.59(2H，br，CH₂N)，3.43(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH₂)，2.59(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，1.30-2.41(12H，m)，1.17(3H，t，J7.4，CH₂Me)和1.01(3H，s，18-CH₃).

2-乙基-13-甲基-17-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇40

由乙酰氯(957μL)与甲醇(2.5mL)于0℃反应制备HCl甲醇溶液(Methanolic HCl)，然后加入到MOM保护的雌酮MPL03139中，超声2分钟后将该反应物蒸发至干。该HCl盐自甲醇乙醚中析出但太易吸湿而无法收集，取而代之的是将该化合物溶于乙醇，用NaHCO₃(饱和)碱化，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用水、然后用盐水洗涤，干燥并蒸发，得到无色油状的产物40，其显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)8.54-8.57(1H，m)，7.65(1H，ddd，J 7.87.8 & 1.9)，7.39(1H，app d，J 7.8)，7.16(1H，m)，7.03(1H，s，ArH)，6.45(1H，s，ArH)，3.97(2H，s，NCH₂)，2.73-2.78(2H，m，6-CH₂)，2.67(1H，dd，9.0& 8.6，CHN)，2.60(2H，q，J 7.4 CH₂Me)，1.25-2.32(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.77(3H，s，18-CH₃).

(3-苄氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-(2-吗啉-4-基-乙基)-胺41

搅拌2-MeO-3-O-苄基雌酮(390mg，1mmol)及4-(2-乙基氨基)吗啉(651mg，5mmol)的THF(15mL)溶液1小时，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(954mg，4.5mmol)处理。搅拌5天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。黄色油状所需产物41显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.25-7.46(5H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH₂O)，3.86(3H，s，OMe)，3.68-3.74(4H，m，2×CH₂O)，1.20-2.80(25H，m)和0.75(3H，s，18-CH₃).

(3-苄氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-吡啶-2-基甲基-胺42

搅拌2-MeO-3-O-苄基雌酮(390mg，1mmol)及2-(氨基甲基)吡啶(515μL，5mmol)的THF(20mL)溶液1小时，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(954mg，4.5mmol)处理。搅拌6天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。黄色所需胺42显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)8.52(1H，m)，7.62(1H，ddd，J 7.8，7.8 & 1,9)7.24-7.46(7H，m)，7.12-7.17(1H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH₂O)，3.96(2H，s，CH₂Ar)3.86(3H，s，OMe)，2.63-2.82(3H，m，6-CH₂和CHN)1.20-2.32(13H，m)和0.75(3H，s，18-CH₃).

(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-(2-甲氧基-乙基)-胺43

搅拌2-Et-3-O-苄基雌酮(220mg，0.57mmol)及2-甲氧基乙胺(197μL，2.26mmol)的THF(10mL)溶液1小时，然后用乙酸(150mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(540mg，2.55mmol)处理。搅拌3天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。黄色所需胺43显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.27-7.44(5H，m)，7.08(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.02(2H，s，PhCH₂O)，3.47-3.51(2H，m，OCH₂)，2.74-2.92(4H，m，6-CH₂ & CH₂N)，2.58-2.70(3H，m，CHN & ArCH₂Me)，1.24-2.34(14H，m)，1.21(3H，t，J 7.6，CH₂Me)和0.75(3H，s，18-CH₃).

N′-(2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)N，N-二甲基-乙-1，2-二胺44

搅拌2-Et-3-O-MOM雌酮(342mg，1mmol)及N，N-二甲基乙二胺(549μL，5mmol)的THF(10mL)溶液1小时，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(848mg，4mmol)处理。搅拌3天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。所得黄色油状物用柱层析纯化(10％MeOH/CHCl₃)得到所需产物44，其显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.08(1H，s，ArCH)，6.78(1H，sArH)，5.17(2H，s，OCH₂)，3.48(3H，s，OMe)，2.24-2.86(9H，m，6-CH₂，ArCH₂和2×NCH₂和NCH)，2.23(6H，s，NMe₂)，1.20(3H，t，J 7.6，CH₂Me)和0.75(3H，s，18-CH₃).

N′-(3-苄氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-N，N-二甲基-乙-1，2-二胺45

搅拌2-MeO-3-O-苄基雌酮(390mg，1mmol)及N，N-二甲基乙二胺(439μL，4mmol)的THF(10mL)溶液1小时，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氢化钠(954mg，4.5mmol)处理。搅拌3天后加入氢氧化钠(5mL，2M水溶液)，随后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分离有机层，用水及盐水洗涤，干燥并蒸发。黄色油状产物45显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.28-7.46(5H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH₂O)，3.86(3H，s，OMe)，2.37-2.83(7H，m；6-CH₂，2×NCH₂和NCH)，2.22(6H，s，NMe₂)，1.24-2.14(14H，m)和0.75(3H，s，18-CH₃).

[2-(3-苄氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基氧基)-乙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷46

用氢化钠(2eq.)处理3-O-Bn-2-MeO-雌二醇(340mg，0.86mmol)的甲苯(8mL)溶液，然后在密封管中加热至130℃保持0.25小时，冷却至室温，然后用2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基溴(429μL，2mmol)处理，然后于130℃在密封管中加热16小时。标准水后处理后，粗物质经柱层析纯化，得到所需醚46的白色固体(208mg)，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.26-7.46(5H，m，ArH)，6.85(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.11(2H，s，OCH₂Ph)，3.87(3H，s，OMe)，3.71-3.77(2H，m，OCH2)，3.39-3.69(3H，m，OCH₂ and HCO)，2.72-2.82(2H，m，6-CH2)，1.10-2.40(13H，m)，0.91(9H，s，tBu)，0.80(3H，s，18-CH₃)和0.10(6H，s，SiMe₂).

17-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙氧基]-2-甲氧基-13-甲基7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇47

用10％Pd/C(20mg)处理搅拌下的、脱气的醚46(200mg，0.36mmol)的THF(10mL)溶液并于氢气气氛下放置过夜。然后将反应物经硅藻土过滤并蒸发，得到透明无色油状所需苯酚47，

δ_H 6.80(1H，s，ArH)，6.65(1H，s，ArH)，5.55(1H，s，OH)，3.87(3H，s，OMe)，3.52-3.82(4H，m，2×OCH₂)，3.42-3.48(1H，m，17-CH)，2.72-2.84(2H，m，6-CH₂)，1.20-2.36(13H，m)，0.94(9H，s，¹Bu)，0.89(3H，s，18-Me)和0.12(6H，s，SiMe₂).

17-[2-(羟基)-乙氧基]-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇48

用TBAF(250mL，0.25mmol)处理TBS保护的醇47(110mg，0.24mmol)的THF(5mL)溶液。搅拌过夜后用乙酸乙酯(25mL)萃取反应物，有机层用水和盐水洗涤，干燥并蒸发。所得浅黄色油经柱层析纯化(2％甲醇/氯仿)，得到透明无色油状所需二醇48(65mg)，其显示

δ_H6.78(1H，s，ArH)，6.64(1H，s，ArH)，5.51(1H，s，OH)，3.86(3H，s，OMe)，3.40-3.68(5H，m，2×OCH₂和CHOR)，2.72-2.82(2H，m，6-CH₂)，1.20-2.30(14H，m)和0.81(3H，s，18-Me)；δ_c 144.6，143.5，131.7，129.5，114.6，109.1，89.4，70.9，62.1，56.1，50.2，44.2，38.6，38.0，28.9，28.1，27.2，26.6，23.0和11.7.

氨基磺酸2-甲氧基-13-甲基-17-(2-氨磺酰氧基-乙氧基)-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯49

将氨磺酰氯(1ml，0.69mmol)的甲苯溶液蒸发至干，冷却至0℃，然后依次用二甲基乙酰胺(1.5mL)和二醇48(45mg)处理。于室温搅拌3小时后，反应物用乙酸乙酯(20mL)稀释，然后用水(10ml)处理，分离有机层并用盐水(5×10mL)萃取，干燥并蒸发得到黄色油状物。用柱层析(梯度5-10％甲醇/氯仿)纯化所需双-氨基磺酸酯49，得到透明无色油状物(21mg)，其显示

δ_H(CDCl₃，TMS＝0)7.03(1H，s，ArH)，6.90(1H，s，ArH)，5.02(4H，br，2×NH₂)，4.37-4.42(2H，m，CH₂OS)，3.87(3H，s，OMe)，3.75-3.82(2H，m，OCH₂)，3.48(1H，dd，J 8.6 & 7.9，OCH)，2.74-2.85(2H，m，6-CH₂)，1.25-2.50(H，m)和0.79(3H，s，18-CH₃)；m/z 504.6.

叔丁基-[2-甲氧基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基氧基]-二甲基-硅烷50

用氢化钠(98mg，2.45mmol)处理2-MeO-3-O-TBS雌二醇(340mg，0.81mmol)的甲苯(20mL)溶液，然后使其回流1小时，然后加入2-(甲氧基)乙基溴(153μL，1.62mmol)。反应回流14小时，然后，再用等分量的氢化钠(80mg，2mmol)和2-(甲氧基)乙基溴(141μl，1.5mmol)处理，再回流8小时，然后再加入等分量的碱和烷基溴。再回流14小时后，将该反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后用饱和氯化铵(20mL)处理。分离有机层，用水(2×20mL)、盐水洗涤，干燥并蒸发。然后所需醚50经柱层析分离(洗脱剂己烷/乙酸乙酯11∶1)，得到白色针状物，mp 98-100℃(276mg，％)，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.76(1H，s，ArH)，6.54(1H，s，Ar，H)，3.77(3H，s，OMe)，3.41-3.73(7H，m)，3.40(3H，s，OMe)，2.68-2.80(2H，m，6-CH₂)，1.16-2.27(11H，m)，0.99(9H，s，¹Bu)，0.82(3H，s，18-CH₃)和0.15(6H，s，SiMe₂)δ_c 148.6，142.9，133.2，129.0，121.0，110.0，89.6，72.3，69.5，59.2，50.4，43.4，38.5，38.2，29.7，28.8，28.2，27.4，26.6，25.8，23.0，18.5，11.7和4.6.m/z FAB+473.2.

2-甲氧基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇51

用TBAF(0.5mL，1M THF溶液)处理TBS保护的醚50(232mg)的THF(10mL)溶液。搅拌过夜后进行标准水后处理，所需苯酚51经柱层析(4∶1Hex/EA)纯化得到白色固体，其显示δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)6.77(1H，s，ArH)，6.63(1H，s，ArH)，5.50(1H，s，OH)，3.85(3H，s，ArOMe)，3.41-3.72(5H，m，2×OCH₂和CHOR)，3.40(3H，s，OMe)，2.69-2.83(6-CH₂)，1.16-2.26(13H，m)和0.81(3H，s，18-Me)；δ_c144.5，143.4，131.7，129.5(所有C)，114.6，108.1，89.6(所有CH)，72.3，69.5(两个CH₂)，59.1(CH)，56.0(CH₃)，50.3，44.2(两个CH)，43.3(C)，38.6(CH)，38.1，28.9，28.1，27.2，26.7，23.0(所有CH₂)和11.6(CH₃)。

2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-酮52

用对甲苯磺酸吡啶鎓(333mg)处理2-Et-3-O-MOM-17-(亚乙基二氧基缩酮)雌酮(15g)的丙酮(200mL)和水(10mL)的溶液，然后使其回流14小时。然后旋转蒸发除去溶剂，得到白色固体，该白色固体然后用乙醇水重结晶，得到所需产物52的白色固体(5.6g)，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.09(1H，s，ArH)，6.81(1H，s，ArH)，5.18(2H，s，OCH₂)，3.49(3H，s，OMe)，2.84-2.92(2H，m，6-CH₂)，2.61(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，1.38-2.56(13H，m)，1.19(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.91(3H，s，18-CH₃)；δC 220.1，152.8，134.8，132.6，130.6，126.2，114.0，94.3，56.0，50.4，48.1，44.1，38.4，36.0，31.7，29.6，26.7，26.0，23.6，21.7，14.9和14.0.

2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-醇53

向搅拌、室温下的2-Et-3-O-MOM雌酮52(743mg，2.18mmol)的THF(10mL)/甲醇(40mL)溶液中加入硼氢化钠(76mg，2mmol)。一小时后加入氯化铵(2mL饱和溶液)猝灭该反应，用乙酸乙酯(50mL)和水(25mL)稀释，分离有机层并用水、盐水洗涤，干燥并蒸发。柱层析(己烷/乙酸乙酯梯度)得到透明无色油状所需醇53(650mg)，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.09(1H，s，ArH)，6.78(1H，s，ArH)，5.17(2H，s，OCH₂)，3.69-3.78(1H，m，CHOH)3.48(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH₂)，2.61(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，1.24-2.38(13H，m)，1.19(3H，t，J7.4，CH₂Me)和0.77(3H，s，18-CH₃).

2-乙基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲54

用氢化钠(80mg，2mmol)处理2-Et-3-O-MOM雌二醇53(170mg，0.5mmol)的甲苯(10mL)溶液，然后使其回流0.5小时，然后加入2-(甲氧基)乙基溴(141μL，1.5mmol)。该反应回流14小时，然后再用等分量的氢化钠(80mg，2mmol)和2-(甲氧基)乙基溴(141μl，1.5mmol)处理，然后再回流8小时，其后无剩余的起始原料存在。将该反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后用饱和氯化铵(20mL)处理。分离有机层，用水(2×20mL)、盐水洗涤，干燥并蒸发。所需醚54经柱层析分离(梯度0-20％乙酸乙酯/己烷)，得到透明无色油状物(128mg，％)，其显示

δ_H(400MHz，CDCl₃，参照TMS＝0)7.08(1H，s，ArH)，6.78(1H，s，Ar，H)，5.17(2H，s，OCH₂)，3.67-3.74(1H，m)，3.52-3.56(2H，m)，3.48(3H，s，OMe)，3.43(1H，dd，J 8.6和8.2，CHO)，3.40(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH₂)，2.63(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，2.37-2.44(1H，m)，2.14-2.22(1H，m)，2.01-2.11(2H，m)，1.83-1.90(1H，m)，1.23-1.72(8H，m)，1.19(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.81(3H，s，18-CH₃)δ_c152.6，135.0，133.2，130.3，126.1，114.0，94.3，89.6，72.3，69.6，59.2，56.0，50.4，44.1，43.5，38.7，38.3，29.7，28.3，27.4，26.6，23.6，23.2，15.0和11.7.

按照以下流程反应。

(E-和Z-)-2-乙基-3-O-叔丁基-二甲基-甲硅烷基-17-甲基硫基亚甲基雌酮A和

(E-和Z-)-2-乙基-17-甲基硫基亚甲基雌酮B

用三等份的己烷(各1mL)洗涤氢化钠(120mg，3mmol)，氮气下干燥，然后用THF(5mL)处理。然后将二乙基(甲硫基甲基)膦酸酯(526μL，3mmol)引入到悬浮液中，形成澄清无色溶液前剧烈放出气体。然后用2-Et-3-OTBS雌酮(412mg，1mmol)的THF(5mL)溶液处理该反应混合物，然后回流48小时。用乙酸乙酯(30mL)稀释冷却的反应物，倾入水(20mL)中并分离水层。然后有机层用水(3×35mL)、盐水(50mL)洗涤，然后干燥并蒸发。所得油经柱层析(5％乙酸乙酯/己烷)纯化，第一组分得到所需TBS保护的烯A产物的异构体混合物，为无色油状物(196mg，43％)，第二组分为无色油状物，经确证为脱甲硅烷基化的烯B(150mg，44％)。

F1δ_H(CDCl₃)7.05(1H，s，ArH)，6.54，6.47(1H，s，ArH，两种异构体)，5.48-5.55(1H，m，：CHSMe，两种异构体)，2.75(2H，m，6-CH₂)，2.56(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，2.26，2.21(3H，s，两种异构体的SMe)，1.19(3H，t，J 7.4，CH₂Me)，1.00(9H，s，tBu)，0.92，0.81(3H，s，18-CH₃)，及0.21(6H，s，SiMe₂)。m/z[FAB+]实测值456.28822，C₂₈H₄₄SOSi理论值456.28821。

F2δ_H(CDCl₃)7.04(1H，s，ArH)，6.48(1H，s，ArH)，5.51(t，1.9，：CHSMe)，5.49(t，2.3，：CHSMe)，4.43-4.46(1H，m，OH)，2.72-2.88(2H，m，6-CH₂)，2.59(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，2.27及2.22(3H，2×s，两种异构体的SMe)，1.22(3H，t，J 7.4，CH₂Me)，0.93及0.81(3H，s，两种异构体的18-CH₃)；m/z[FAB+]实测值342.20174，C₂₂H₃₀SO理论值342.20173。2-乙基-17-甲基硫基甲基雌酮C

将(E-及Z-)-2-乙基-17-甲基硫基亚甲基雌酮B(150mg)溶于THF(1mL)及乙醇(10mL)中，然后用Pd/C(25mg，5％)处理，脱气并在氢气气氛下搅拌16h。然后反应物通过硅藻土垫过滤并蒸发。所需还原产物C经柱层析分离得到，为无色油状物(85mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.04(1H，s，ArH)，6.48(1H，s，ArH)，4.48(1H，s，OH)，2.74-2.84(2H，m，6-CH₂)，2.58(2H，q，J 7.4，CH₂Me)；2.11(3H，s，SMe)，1.21(3H，t，J7.4，CH₂Me)和0.65(3H，s，18-CH₃).

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-甲基硫基甲基雌酮E

将氨磺酰氯(1.5mL，0.56M溶液)蒸发至干，于0℃溶于DMA(1.5mL)，然后加入到2-乙基-13-甲基-17-甲基硫基甲基雌酮C(80mg)中。搅拌下反应在14小时内达到室温。然后加入乙酸乙酯(10mL)并用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤该溶液，干燥(Na₂SO₄)，然后蒸发至干。粗产物经柱层析(0-7.5％乙酸乙酯/氯仿)纯化，得到白色泡沫状所需氨基磺酸酯E(65mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.18(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)，4.90(2H，br，NH₂)，2.78-2.88(2H，m，6-CH₂)，2.68(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，2.11(3H，s，SMe)，1.21(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.66(3H，s，18-CH₃).

2-羟基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮

用硼氢化钠(189mg，5mmol)处理2-甲酰基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮(2.00g，5.18mmol)的THF(10mL)和甲醇(20mL)溶液。10分钟后无剩余起始原料，加入氯化铵破坏过量的硼氢化物。将反应物萃取至乙酸乙酯(50mL)，用水(2×25mL)、盐水(25mL)洗涤，干燥并蒸发，得到白色泡沫状2-羟基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮(1.98g)，

δ_H(CDCl₃)7.23(1H，s，ArH)，6.82(1H，s，ArH)，5.20(2H，s，OCH₂)，4.64-4.70(2H，m，ArCH₂O)，3.88-4.00(4H，m，OCH₂CH₂O)，3.49(3H，s，OCH₃)，2.82-2.88(2H，m，6-CH₂)，1.30-2.40(14H，m)和0.88(3H，s，18-CH₃)；δ_c 152.9，137.7，133.9，127.2，126.2，119.3，114.5，94.6，65.2，64.5，61.9，56.1，49.3，46.1，43.6，38.9，34.2，30.6，29.7，26.9，26.0，22.3和14.3；m/z[ES+]411.2(100％，M⁺+Na).

2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮

向室温、搅拌下的2-羟基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮(1.98g，5.10mmol)的THF(25mL)溶液中加入氢化钠(306mg)，0.5小时后加入甲基碘。搅拌反应物过夜，然后进行标准水后处理。层析(己烷/乙酸乙酯)得到无色油状所需产物(1g)及回收的起始原料(600mg)。产物2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮显示

δ_H(CDCl₃)7.26(1H，s，ArH)，6.80(1H，s，ArH)，5.16(2H，s，OCH₂)，4.43-4.50(2H，m，ArCH₂O)，3.86-3.98(4H，m，OCH₂CH₂O)，3.46(3H，s，OCH₃)，3.39(3H，s，OMe)，2.80-2.86(2H，m，6-CH₂)，1.26-2.40(13H，m)和0.86(3H，s，18-CH₃)；δ_c 152.6，137.4，133.6，126.4，124.4，119.3，114.3，94.4，69.5，65.2，64.5，58.1，55.9，49.3，46.1，43.6，38.9，34.2，30.6，29.6，26.9，26.1，22.3和14.3；m/z[ES+]425.3(100％，M⁺+Na).HRMS[FAB+]402.24063.

2-甲氧基甲基3-O-TBS雌酮

用HCl甲醇溶液(10mL，4M)处理2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亚乙基二氧基雌酮(1g)的THF(10mL)溶液0.25小时，标准水后处理后将产物溶于DMF(10mL)，并用咪唑(425mg)和TBSCl(453mg)处理。14小时后将该反应物萃取至乙酸乙酯(25mL)，然后用水(5×20mL)及盐水(20mL)洗涤，干燥并蒸发。柱层析(0-15％乙酸乙酯/己烷)得到所需产物的白色固体(360mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.25(1H，s，ArH)，6.51(1H，s，ArH)，4.43(1H，d，J 11.7，ArCH_a)，4.40(1H，d，J 11.7，ArCH_b)，3.39(3H，s，OCH₃)，2.82-2.88(2H，m，6-CH₂)，2.42-2.54(2H，m)，1.92-2.29(5H，m)，1.36-1.68(6H，m)，1.01(9H，s，t-Bu)，0.91(3H，s，18-CH₃)和0.22(6H，s，SiMe₂)；δ_c221.1，151.3，136.7，132.3，126.4，126.1，118.6，69.8，58.2，50.4，48.0，44.0，38.3，35.9，31.5，29.4，26.6，25.9，25.7，21.6，18.2，13.8和-4.3.

2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-氰基亚甲基雌酮

用氢化钠(124mg)处理二乙基(氰基甲基)膦酸酯(506μL，3mmol)的THF(10mL)溶液，气体放出停止后，用2-甲氧基甲基3-O-TBS雌酮(320mg)的THF(5mL)溶液处理。将反应加热至70℃保持1.5小时，然后进行后处理。产物经层析纯化(7∶1己烷/乙酸乙酯)得到1∶1的异构体混合物(240mg)，该透明无色油状物显示δ_H(CDCl₃)7.24 & 7.25(1H，2×s，ArH)，6.51 & 6.50(1H，2×s，ArH)，5.13(dd，J 2.3及2.0：CHCN) &5.05(dd，J 2.5及2.3)(1H，2×dd，：CHCN两种异构体)，4.43(1H，d，J12.8，OCH_a)，4.40(1H，d，J 12.8，OCH_b)，3.39 & 3.39(3H，2×s，OCH₃)，0.99及0.88(3H，2×s，18-CH₃，两种异构体)。

2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮

将2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-氰基亚甲基雌酮(220mg)的THF(1mL)及乙醇(5mL)溶液在Pd/C(200mg，5％)的存在下氢化14小时。然后反应物通过硅藻土过滤，蒸发得到透明无色油状所需产物2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮(200mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.23(1H，s，ArH)，6.50(1H，s，ArH)，4.42(1H，d，J 11.8，ArCH_a)，4.41(1H，d，J11.8，ArCH_b)，3.39(3H，s，OCH₃)，2.72-2.86(2H，m，6-CH₂)，1.15-2.46(16H，m)，1.01(9H，s，t-Bu)，0.67(3H，s，18-CH₃)和0.21(6H，s，SiMe₂)；δ_c 151.20，136.9，132.7，126.4，125.9，119.8，118.6，69.8，58.2，54.4，46.8，44.0，42.7，38.8，37.3，28.6，28.4，27.8，26.3，25.7，24.0，18.2，17.6，12.3和-4.1.

2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮

用TBAF(1mL，1M THF溶液)处理2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮(200mg)的THF(5mL)溶液。0.5小时后将反应物后处理。层析(己烷/乙醚)得到所需产物2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮的结晶固体(120mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.22(1H，s，ArH)，6.91(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，OH)，4.64(1H，d，J 12.5，ArCH_a)，4.59(1H，d，J12.5，ArCH_b)，3.43(3H，s，OCH₃)，2.78-2.86(2H，m，6-CH₂)，1.24-2.42(15H，m)和0.67(3H，s，18-CH₃)；δ_c 153.8，138.0，131.5，125.0，119.8，119.4，116.3，74.1，58.1，54.3，46.7，43.6，42.5，38.7，37.3，29.3，28.2，27.6，26.2，25.6，23.9，17.6和12.2.m/z[APCI-]338.3(100％，M⁺-H).

2-甲氧基甲基-3-O-氨磺酰基-17-β-氰基甲基雌酮

将氨磺酰氯(1.7mmol)冷却至0℃，溶于二甲基乙酰胺(1.5mL)，5分钟后用2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮(60mg)处理。15分钟后移去外部冷却并使该反应于环境温度搅拌3小时。然后将反应物用乙酸乙酯(15mL)稀释，倾入盐水(15mL)并分离有机层。有机提取物用水(3×15mL)及盐水(15mL)洗涤，干燥并蒸发。层析(0-5％MeOH/DCM)得到无色油状产物2-甲氧基甲基-3-O-氨磺酰基-17-β-氰基甲基雌酮(65mg)。氯仿/己烷结晶得到白色结晶固体，其显示

δ_H(CDCl₃)7.29(1H，s，ArH)，7.17(1H，s，ArH)，5.55(2H，s，NH₂)，4.48(2H，s，OCH₂)，3.44(3H，s，OCH₃)，2.86-2.92(2H，m，6-CH₂)，1.26-2.42(15H，m)和0.69(3H，s，18-CH₃)；δ_c 147.3，139.4，139.3，128.5，126.8，122.7，119.6，70.6，58.3，54.3，46.6，43.9，42.6，38.2，37.3，29.2，28.2，27.2，26.1，23.9，17.6和12.2.m/z[APCl-]417.3(100％，M⁺-H).

2-乙基-17-亚甲基雌酮

用氢化钠(400mg)处理甲基三苯基碘化鏻(10mmol)的DMSO(15mL)溶液。0.5小时后向所得黄色内鎓盐中加入2-乙基雌酮(600mg)的DMSO(15mL)溶液，使反应在60℃保持16小时。将反应冷却至室温，倾入冰水(50mL)，用乙醚(3×50mL)萃取，合并的有机提取物用水(3×50mL)洗涤，干燥并蒸发。层析(10％乙醚/己烷)得到白色泡沫状所需产物2-乙基-17-亚甲基雌酮(390mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.05(1H，s，ArH)，6.47(1H；s，ArH)，4.65-4.68(2H，m，：CH₂)，4.53(1H，s，OH)，2.72-2.87(2H，m，6-CH₂)，2.59(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，1.25-2.56(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.81(3H，s，18-CH₃)；δ_c 161.6，150.9，135.4，132.6，127.0，126.2，115.1，100.7，53.5，44.4，44.1，38.9，35.8，29.5，29.4，27.7，26.8，24.0，23.1，18.7和14.6；HRMS[FAB+]296.21402.

2-乙基-17-亚乙基雌酮

用氢化钠(400mg)处理乙基三苯基碘化鏻(10mmol)的DMSO(15mL)溶液。0.5小时后向所得黄色内鎓盐中加入2-乙基雌酮(600mg)的DMSO(15mL)溶液，并使反应于60℃保持16小时。将反应冷却至室温，倾入冰水(50mL)，用乙醚(3×50mL)萃取，合并的有机提取物用水(3×50mL)洗涤，干燥并蒸发。层析(10％乙醚/己烷)得到白色泡沫状所需产物顺-2-乙基-17-亚乙基雌酮(460mg)，其显示

δ_H(CDCl₃)7.03(1H，s，ArH)，6.47(1H，s，ArH)，5.14(1H，qdd，J 7.0，2.0，2.0，：CHMe)，4.45(1H，s，OH)，2.72-2.88(2H，m，6-CH₂)，2.59(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，2.14-2.46(5H，m)，1.87-1.95(1H，m)，1.70-1.78(1H，m)，1.69(3H，ddd，J 7.0，2.0，2.0，MeHC：)，1.25-1.62(6H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH₂Me)和0.91(3H，s，18-CH₃)；δ_c 150.8，150.1，135.4，132.7，126.9，126.1，115.1，113.3，55.2，44.6，43.9，38.5，37.3，31.5，29.4，27.7，27.1，24.3，23.1，17.1，14.7和13.3；HRMS[FAB+]310.22967.

2-乙基-3-O-氨磺酰基17-亚甲基雌酮

向2-乙基-17-亚甲基雌酮(231mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(320mg)及氨磺酰氯(1.56mmol)。于室温搅拌14后将反应物用乙酸乙酯(20mL)稀释，然后用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥并蒸发。柱层析得到透明无色油状所需产物2-乙基-3-O-氨磺酰基17-亚甲基雌酮(200mg)，其放置后固化并显示δ_H(CDCl₃)7.19(1H，s，ArH)，7.09(1H，s，ArH)，5.06-5.14(2H，br，NH₂)，4.56-4.60(2H，m，：CH₂)，2.82-2.87(2H，m，6-CH₂)，2.69(2H，q，J 7.4，CH₂Me)，1.32-2.60(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH₂Me)及0.82(3H，s，18-CH₃)；δ_C 161.3，145.9，139.5，135.8，126.8(所有C)，126.8，121.3(两个CH)，100.9(：CH₂)，53.5(CH)，44.3(C)，44.3，38.4(两个CH)，35.7，29.5，29.3，27.5，26.5，24.0，23.1(所有CH₂)，18.6及14.7(两个CH₃)；HRMS[FAB+]375.18681。

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-亚乙基雌酮

向2-乙基-17-亚乙基雌酮(329mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(435mg)及氨基磺酰氯(2.12mmol)。于室温搅拌14后将反应物用乙酸乙酯(20mL)稀释，然后用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥并蒸发。柱层析得到透明无色油状所需产物顺-2-乙基-3-O-氨磺酰基17-亚乙基雌酮，其放置后固化并显示δ_H(CDCl₃)7.17(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)，5.15(1H，qdd，J 7.0，2.0，2.0，：CHMe)，5.09(2H，s，NH₂)，2.80-2.86(2H，m，6-CH₂)，2.69(2H，q，J7.4，CH₂Me)，2.18-2.46(5H，m)，1.89-1.96(1H，m)，1.70-1.78(1H，m)，1.69(3H，ddd，J 7.0，2.0，2.0，MeHC：)，1.23-1.63(6H，m)，1.21(3H，t，J7.4，CH₂Me)及0.90(3H，s，18-CH₃)；δ_C 149.8，145.9，139.5，135.8，133.4(所有C)，126.8，121.2，113.4，55.4(所有CH)，44.5(C)，44.1，38.0(两个CH)，37.2，31.5，29.3，27.4，26.9，24.2，23.1(所有CH₂)，17.0，14.7及13.3；HRMS[FAB+]389.20246。

2-甲氧基-3-苄氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇

用氢化钠(120mg)处理2-甲氧基-3-苄氧基雌二醇(800mg)的DMF(10mL)溶液，0.25小时后加入氯甲基甲基醚(266μL)。于室温搅拌反应14小时，然后进行标准水后处理。层析(6∶1己烷/乙酸乙酯)得到透明无色油状所需产物(590mg)，其放置后固化，m.p.87-88℃并显示

δ_H(CDCl₃)7.24-7.45(5H，m)，6.85(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，OCH₂)，4.66(2H，s，OCH₂)，3.86(3H，s，OMe)，3.62(1H，dd，J 8.4，8.2，17-αH)，3.37(3H，s，OCH₃)2.70-2.80(2H，m，6-CH₂)，1.20-2.32(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH₃).m/z[FAB+]436.1(100％，M⁺+H).HRMS[FAB+]436.26136.

2-甲氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇

将2-甲氧基-3-苄氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇(500mg)的THF(2mL)及乙醇(10mL)溶液在Pd/C(50mg，5％)的存在下氢化(1atm)16小时。将反应物通过硅藻土过滤进行后处理，并蒸发得到所需产物的白色固体(500mg)。乙醚/己烷重结晶得到白色结晶，

δ_H(CDCl₃)6.78(1H，s，ArH)，6.63(1H，s，ArH)，4.65(2H，s，OCH₂)，3.86(3H，s，OMe)，3.56-64(1H，m，17-αH)，3.37(3H，s，OCH₃)2.72-2.80(2H，m，6-CH₂)，1.15-2.30(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH₃).

2-甲氧基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲氧基甲基雌二醇

用2-甲氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇(170mg)处理0℃的氨磺酰氯(1.7mmol)的DMA(2mL)溶液。3小时后将反应物通过用乙酸乙酯(15mL)稀释进行后处理，然后用水(4×15mL)和盐水(15mL)洗涤，干燥并蒸发。层析(丙酮/氯仿梯度)得到所需产物2-甲氧基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲氧基甲基雌二醇的白色固体(160mg)，然后用乙醚/己烷结晶，

δ_H(CDCl₃)7.02(1H，s，ArH)，6.91(1H，s，ArH)，4.99(2H，s，NH₂)，4.65(1H，d，9.0，CH_aH_bO)，4.64(1H，d，9.0，CH_aH_bO)，3.86(3H，s，OMe)，3.60(1H，dd，J 8.6，8.2，17-αH)，3.37(3H，s，OCH₃)2.76-2.82(2H，m，6-CH₂)，1.15-2.30(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH₃)；δ_c 148.7，140.4，136.6，130.1，124.0，110.4，96.0，86.5，56.4，55.2，50.0，44.5，43.0，38.2，37.3，28.7，27.1，26.5，23.2和11.9.

2-乙基-3-苄氧基-17-O-甲磺酰基雌二醇58

向氮气下搅拌并冷却至0℃的2-乙基-3-O-苄基雌二醇(1mmol)的5ml无水吡啶溶液中加入甲基磺酰氯(0.09ml，1.2mmol)。于0℃搅拌该溶液2小时，然后加入水(20ml)。有机物用乙酸乙酯(2×60ml)萃取并依次用水和盐水洗涤有机层，然后用MgSO₄干燥。真空除去溶剂及柱层析(己烷/乙酸乙酯5∶1)后得到2-乙基-3-苄氧基-17-O-甲磺酰基雌二醇的白色固体0.36g(77％)，mp＝133℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.87(s，3H，CH₃)，1.22(t，JH-H＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.25-1.60(m，6H)，1.70-1.95(m，3H)，2.05(m，1H)，2.15-2.45(m，3H)，2.68(q，J_H-H＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.85(m，2H，H6)，3.02(s，3H，CH₃SO₂)，4.57(m，1H，H17)，5.05(s，2H，CH₂Ph)，6.64(s，1H，ArH，7.10(s，1H，ArH)，7.36-7.44(m，5H，Ph).¹³C NMR(CDCl3)：11.7(CH₃)，14.6(CH₃)，23.0，23.4，26.0，27.1，27.9，29.536.4，38.2，38.6，43.3，43.7，49.0，69.8(CH₂Ph)，89.5(C17)，111.8，126.2，127，0，127.6，128.4130.3，131.7，134.7，137.6和154.5

2-乙基-17-O-甲磺酰基雌二醇59

向2-乙基-3-苄氧基-17-O-甲磺酰基雌二醇(0.5mmol)的10ml THF及40ml乙醇溶液中加入30mg 10％Pd/C。于室温、氢气下搅拌该混合物14小时。将悬浮液用硅藻土过滤，用THF洗涤并真空浓缩有机层。柱层析后(己烷/乙酸乙酯1∶0-2∶1)，分离得到2-乙基-17-O-甲磺酰基雌二醇的白色固体145mg(77％)，mp＝195℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.86(s，3H，CH₃)，1.21(t，JH-H＝7.7Hz，3H，CH₃)，1.25-1.60(m，6H)，1.71-1.91(m，3H)，2.03(m，1H)，2.13-2.38(m，3H)，2.58(q，J_H-H＝7.7Hz，2H，CH₂)，2.79(m，2H，H6)，3.01(s，3H，CH₃SO₂)，4.53(s，1H，OH)，4.56(dd，1 JH-H＝9.1和7.9Hz，1H，H17)，6.49(s，1H，ArH，7.03(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：11.7(CH₃)，14.6(CH₃)，23.0，23.4，26.0，27.1，27.9，29.536.4，38.2，38.6，43.3，43.7，49.0，89.5(C17)，115.2，126.3，127.3，132.1，135.2和151.2MS m/z：350.16(M⁺)HPLC100％.

微量分析：C：66.30(理论值66.63)；H：7.80(理论值7.99)

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲磺酰基雌二醇60

将1ml 0.559M氨磺酰氯的甲苯溶液真空浓缩并将氨磺酰氯溶于1ml DMA。将该溶液冷却至0℃，并在氮气下加到2-乙基-17-O-甲磺酰基雌二醇(0.2mmol)中。于室温搅拌该溶液15小时。加入5ml水后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空浓缩。柱层析后(己烷/乙酸乙酯5∶2)得到白色固体2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲磺酰基雌二醇60mg(66％)，mp＝179℃。

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.85(s，3H，CH₃)，1.20(t，J_H-H＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.30-1.55(m，6H)，1.73-187(m，3H)，2.04(m，1H)，2.16-2.36(m，3H)，2.68(q，J_H-H＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.82(m，2H，H6)，3.01(s，3H，CH₃SO₂)，4.57(dd，1 J_H-H＝8.7和8.1Hz，1H，H17)，5.08(s，2H，NH₂)，6.49(s，1H，ArH，7.03(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：14.1(CH₃)，17.0(CH₃)，25.4，23.4，28.2，29.2，30.3，31.438.6，40.5，40.6，45.6，46.3，51.4，91.5(C17)，123.6，129.2，135.9，137.9，141.1和148.3.LRMSm/z：457.32(M⁺)；HPLC 100％；

微量分析：C：53.40(理论值55.12)；H：6.38(理论值6.34)；N：3.09(理论值3.06)。

2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亚甲基雌酮

使2-乙基-3-O-TBS雌酮(2mmol)、丙二腈(6mmol)及β-丙氨酸的150ml甲苯和30ml乙酸溶液回流3天。而且，24小时和48小时后加入2mmol等分量的丙二腈。将该溶液冷却至室温后，将溶剂蒸发并将残留固体与50ml水一起搅拌，用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有机层用水、盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空除去溶剂。柱层析后得到白色粉末状2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亚甲基雌酮840mg(91％)，mp＝168℃1H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.21(s，6H，CH₃Si).1.00(s，9H，(CH₃)₃Si)，1.06(s，3H，CH₃)，1.15(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.40-1.80(m，6H)，1.85-2.05(m，2H)，2.26(m，1H)，2.45-3.05(m，7H)，6.4(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：-4.2和-4.1(CH₃Si)，14.6(CH₃)，16.6，18.2，23.2，23.6，25.7((CH₃)₃CSi)，26.3，27.5，29.1，34.0，34.7，38.3，43.4，49.5，54.2，79.6(C17)，111.1，112.4，118.3，126.1，131.2，132.2，134.3，151.5和196.2.

2-乙基-17-二氰基亚甲基雌酮

将2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亚甲基雌酮(.5mmol)的THF(50ml)溶液冷却至0℃并滴加入TBAF/THF 1M(0.6mmol，0.6ml)。于0℃搅拌该溶液2小时，然后升温至室温。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)纯化后得到白色固体2-乙基-17-二氰基亚甲基雌酮。125mg(72％)；mp＝270℃；

1H NMR(CDCl₃，270MHz)：1.06(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.5Hz，3H，CH₃)，1.39-1.79(m，6H)，1.89-2.05(m，2H)，2.25(m，1H)，2.45-2.52(m，1H)，2.61(q，J＝7.5Hz，2H，CH₂)，2.63-3.02(m，5H)，4.52(s，1H，OH)，6.50(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH)，¹³C NMR(CDCl₃)：14.3，16.6(CH₃)，23.0，23.2，26.4，27.4，28.9，33.9，34.7，38.3，43.3，49.4，54.1，79.6(C17)，111.2，112.5，115.2，126.2，127.5，131.3，135.0，151.4和196.1.HPLC：100％

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-二氰基亚甲基雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-二氰基亚甲基雌酮(0.2mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物14小时。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，然后真空除去溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5/1-3/1)纯化，得到2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-二氰基亚甲基雌酮62mg(73％)，mp＝228℃；

1HNMR(CDCl₃，270MHz)：1.06(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.44-1.75(m，6H)，1.92-2.03(m，2H)，2.29(m，1H)，2.44-2.55(m，1H)，2.69(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.75-3.04(m，5H)，5.03(s，2H，NH₂)，7.09(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：14.6，16.6(CH₃)，23.0，23.2，26.2，27.2，28.9，33.8，34.7，37.8，43.4，49.3，54.1，79.7(C17)，111.0，112.3，121.5，126.9，134.0，135.4，138.0，146.4和195.8.HPLC 100％；

微量分析：C：64.90(理论值64.92)；H：6.45(理论值6.40)；N：9.68(理论值9.87)。

2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮

将2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亚甲基雌酮(1mmol)的甲醇(50ml)和THF(5ml)溶液冷却至-10℃，并分次加入NaBH₄(76mg，2mmol)。于-10℃搅拌该混合物4小时。加入水(50ml)并用NH₄Cl酸化该溶液。有机物用乙酸乙酯(2×60ml)萃取，并依次用水和盐水洗涤有机层，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。残留固体经柱层析纯化，得到2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮380mg(83％)，mp＝162℃

1H NMR(CDCl₃，)：0.22(s，6H，CH₃Si).0.80(s，3H，CH₃)，1.00(s，9H，(CH₃)₃CSl)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H，CH₃)，1.33-1.66(m，6H)，1.85(m，2H)，2.10-2.40(m，6H)，2.55(q，J＝7.5Hz，2H，CH₂)，2.78(m，2H，H6)，3.56(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)₂)，6.47(s，1H，ArH)，7.03(s，1H，ArH)，¹³C NMR(CDCl₃)：-4.2和-4.1(CH₃Si)，12.4(CH₃)，14.7，18.2，23.4，25.7((CH₃)₃CSi)，26.2，27.6，27.7，29.2，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.6，112.7，118.2，128.1，131.9，132.1，134.5，和151.3.

2-乙基-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮

将2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮(5mmol)的THF(50ml)溶液冷却至0℃，滴加入TBAF/THF 1M(0.6mmol，0.6ml)。于0℃搅拌该溶液2小时，然后升温至室温。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)纯化，得到白色固体2-乙基-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮。124mg(71％)mp＝248℃；

1H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.80(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.30-1.61(m，7H)，1.85(m，2H)，2.10-2.41(m，5H)，2.59(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.81(m，2H，H6)，3.56(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)₂)，4.51(br，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：12.4(CH₃)，14.4(CH₃)，22.9，23.4，26.3，27.6，27.7，29.0，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.5，112.7，115.2，126.3，127.3，131.9，135.2，和151.3.HPLC：100％；

微量分析：C：78.96(理论值79.27)；H：8.03(理论值8.10)；N：7.79(理论值8.04)。

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮(0.2mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物14小时。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，然后真空除去溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5/1-3/1)纯化，得到2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-二氰基甲基17-脱氧雌酮白色粉末170mg(80％)，mp＝169℃；

1H NMR(CDCl3，270MHz)：0.80(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.32-1.55(m，7H)，1.87(m，2H)，2.10-2.38(m，5H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.83(m，2H，H6)，3.57(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)₂)，4.91(br，2H，NH₂)，7.08(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl3，270MHz)：12.4(CH₃)，14.4(CH₃)，22.9，23.4，26.3，27.6，27.7，29.0，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.5，112.7，115.2，126.3，127.3，131.9，135.2，和151.3.HPLC：100％；

微量分析：C：64.64(理论值64.61)；H：7.80(理论值6.84)；N：9.62(理论值9.83)。

2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脱氧雌酮

于-78℃、氮气下搅拌2-乙基-3-O-TBS-17β-氰基甲基17-脱氧雌酮(0.5mmol)的THF(50ml)溶液，然后以滴加方式、用1M LDA(1.2mmol，1.2ml)处理。30分钟后加入CH₃I(1.5mmol，212mg)，于-78℃搅拌该混合物4小时，然后于室温搅拌12小时。然后加入乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)，有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。所得黄色油状物经柱层析(己烷/乙酸乙酯20∶1)纯化，得到无色油状2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脱氧雌酮176mg(78％)，为(1∶1)非对映异构体混合物，

¹H NMR(CDCl3，270MHz)：0.23(s，6H，CH₃Si)，0.76和0.78(s，3H，CH₃)，1.01(s，9H，(CH₃)₃CSi)，1.17(t，J＝7.4Hz，2H，CH₃)，1.25-1.96(m，13H)，2.05-2.50(m，3H)，2.57(q t，J＝7.3Hz，2H，CH₂)，2.66-2.88(m，4H，CH₂)，6.48和6.50(m，1H，ArH)，7.03-7.06(m，1H，ArH).

2-乙基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮

将2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脱氧雌酮(1mmol)的THF(50ml)溶液冷却至0℃，并滴加入1M TBAF/THF(1.2mmol，1.2ml)。于0℃搅拌该溶液2小时，然后升温至室温。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。残留黄色固体(400mg)经柱层析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)纯化，然后己烷/乙酸乙酯6∶1重结晶，得到220mg(71％)白色粉末状2-乙基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮。mp：226-228℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.75(s，3H，CH₃)，1.20-1.65(m，9H)，1.85-1.92(m，5H)，2.10-2.58(m，4H)，2.5(m，2H，H6)，6.55-6.62(m，2H，ArH)，7.07(m，1H，ArH).HPLC：100％

微量分析：C：81.60(理论值81.51)；H：8.79(理论值8.79)；N：4.40(理论值4.53)。

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮(0.2mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物14小时。然后加入10mL水并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，然后真空除去溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5/1-2/1)纯化，然后重结晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到42mg(54％)2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮，mp：157-159℃；

¹H NMR(CDCl3，270MHz)：0.79(s，3H，CH₃)，1.25-1.64(m，11H)，1.73-1.81(m，1H)，1.85-2.03(m，2H)，2.23-2.37(m，2H)，2.40-2.53(m，2H)，2.89(m，2H，H6)，7.03(d，J＝2.7Hz，1H，ArH)，7.07(dd，J＝9.0和2.7Hz，1H，ArH)，7.31(d，J＝9.0Hz，1H，ArH).HPLC：100％

微量分析：C：64.90(理论值64.92)；H：7.52(理论值7.26)；N：7.23(理论值7.21)。

2-乙基-3-O-苄基-17α-(甲基)氰基甲基雌二醇

于-78℃、氮气下搅拌丙腈(0.05mol)的无水THF(50ml)溶液，然后以滴加方式、用LDA(0.05mol)处理。搅拌该混合物1小时，然后加入2-乙基-3-O-苄基雌酮(8mmol)的20ml THF溶液(在3小时内滴加)。再搅拌该混合物3小时，然后用NH₄Cl水溶液猝灭并用乙酸乙酯萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。粗油状物经柱层析(己烷/乙酸乙酯10/1-4/1)纯化，得到白色粉末状2-乙基-3-O-苄基-17α-(甲基)氰基甲基雌二醇2.70g(76％)，mp＝75-77℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.97(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.6Hz，3H，CH₃)，1.25-1.90(m，12H)，1.97-2.07(m，2H)2.15-2.23(m，1H)，2.41-2.49(m，1H)，2.66(q，J＝7.6Hz，2H，CH₂)，2.77-2.91(m，3H)，5.04(s，2H，CH₂Ph)，)，6.62(s，1H，ArH)，7.09(s，1H，ArH)，7.28-7.46(m，5H，Ph).

2-乙基-3-O-苄基17-(1-氰基)亚乙基雌酮

将2-乙基-3-O-苄基雌二醇-17α-丙腈(0.05mol)加入到冷却至0℃的TEA(2ml)及DCM(25ml)溶液中，并在加入CH₃SO₂Cl(0.055mol，0.44ml)后，于0℃搅拌该溶液8小时。用水猝灭该溶液并用DCM萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空除去溶剂。粗油状物经柱层析(己烷/乙酸乙酯10/1)纯化，得到2-乙基-3-O-苄基17-氰基亚乙基雌酮。产率85％，mp＝63-64℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.95(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.3Hz，3H，CH₃)，1.30-1.71(m，6H)，1.84(s，3H，CH₃)，1.85-1.96(m，2H)，2.21-2.51(m，4H)，2.64(q，J＝7.3Hz，2H，CH₂)，2.75-2.90(m，3H)，5.04(s，2H，CH₂Ph)，6.63(s，1H，ArH)，7.10(s，1H，ArH)，7.28-7.48(m，5H，Ph).

2-乙基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮

向2-乙基-3-O-苄基17-(1-氰基)亚乙基雌酮(1mmol)的5mLTHF/45mL甲醇溶液中加入50mg 5％Pd/C，并在氢气下搅拌该混合物16小时。将该悬浮液经硅藻土/沙过滤，用THF洗涤并真空浓缩有机层。柱层析(己烷/乙酸乙酯10∶1-1∶1)及重结晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)后，分离得到白色固体2-乙基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮，白色粉末225mg(67％)，mp＝235-236℃；

¹H NMR.(CDCl₃，270MHz)：0.76(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.24-1.69(m，13H)，1.71-2.00(m，2H)，2.10-2.48(m，2H)，2.57(q，J＝7.3Hz，2H，CH₂)，2.71(m，1H，CH(CH₃)CN)，2.78(m，2H，H6)，4.47(br，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.03(s，1H，ArH).

微量分析：C：81.50(理论值81.85)；H：9.18(理论值9.26)；N：3.99(理论值4.15)。

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(1mmol)的DMA(2ml)溶液加入到21a(0.3mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物14小时。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，然后真空除去溶剂。残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5/1-2/1)纯化，然后重结晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到白色粉末状2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脱氧17β-(1-氰基)乙基雌酮86mg(69％)，mp＝171-172℃

¹H NMR(CDCl3，270MHz)：0.76(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.22-1.64(m，11H)，1.75-2.35(m，6H)，2.66(q，J＝7.3Hz，2H，CH₂)，2.68(m，1H，CH(CH₃)CN)，2.84(m，2H，H6)，4.92(br，2H，NH₂)，7.07(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl3，270MHz)：12.4(CH₃)，14.6(CH₃)，18.6(CH₃)，23.0，23.8，26.2，26.8，27.0，27.4，29.1，38.2，38.6，42.9，44.0，53.3，54.8，121.4，123.0(CN)，126.9，133.6，135.9，139.3，146.2.

微量分析：C：66.40(理论值66.31)；H：7.73(理论值7.74)；N：6.52(理论值6.72)。

2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮

氮气下将(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯(1.84g，4mmol)的30ml无水THF溶液冷却至0℃，然后分次加入LiAlH₄(0.30g，8mmol)。于0℃3小时后，该混合物用NH₄Cl水溶液猝灭并用乙酸乙酯萃取有机物。有机层用水、盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。粗油状物经层析(己烷/乙酸乙酯15/1-8∶1)纯化，得到1.47g(88％)白色粉末状2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮，mp＝98-99℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.63(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.22-1.58(m，9H)，1.70-1.92(m，5H)，2.16-2.34(m，2H)，2.66(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.82(m，2H，H6)，3.68(m，2H，CH₂OH)，5.03(s，2H，CH₂Ph)，6.62(s，1H，ArH)，7.10(s，1H，ArH)，7.28-7.45(m，5H，Ph).

2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮

氮气下将2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮(1.26g，3mmol)的30ml无水THF溶液冷却至0℃。分次加入NaH(0.16g，4mmolNaH 60％矿物油的分散液)，搅拌该溶液30分钟，然后滴加入CH₃I(0.37ml，6mmol)。使该溶液升温至室温并搅拌18小时。加入水(20ml)后，有机物用乙酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。粗油状物经层析(己烷/乙酸乙酯20/1)纯化，得到1.25g(96％)白色粉末状2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮，mp＝70-71℃

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.66(s，3H，CH₃)，1.25(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.26-1.60(m，9H)，1.76-1.96(m，5H)，2.20-2.42(m，2H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.86(m，2H，H6)，3.38(s，3H，CH₃O)，3.44(m，2H，CH₂O)，5.07(s，2H，CH₂Ph)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.31-7.50(m，5H，Ph).

2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮

将35的2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮0.87g(2mmol)溶于THF(5mL)及甲醇(50mL)中，加入50mg 5％Pd/C并在氢气下搅拌该混合物16小时。将该悬浮液经硅藻土/沙过滤，用THF洗涤并真空蒸发溶剂。稠状微黄色油经柱层析(己烷/乙酸乙酯15/1-10/1)纯化，得到白色粉末状2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮0.66g(97％)，mp＝58-59℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.62(s，3H，CH₃)，1.19-1.56(m，12H)，1.72-1.91(m，5H)，2.13-2.34(m，2H)，2.60(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.77(m，2H，H6)，3.37(s，3H，CH₃O)，3.45(m，2H，CH₂O)，5.26(s，1H，OH)，6.48(s，1H，ArH)，7.06(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃)：12.4(CH₃)，12.5(CH₃)，23.0，24.4，26.5，27.9，28.3，29.3，30.2，37.7，38.9，42.4，44.2，47.3，54.6，58.4，72.4，115.1，126.2，127.2，132.6，.135.4，和151.3.HPLC：100％：

HRMS(FAB+)：实测值342.255493；计算值C₂₃H₃₄O₂ 342.255881

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(3mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮(342mg，1mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物24小时。加入水(10mL)后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯10/1-4/1)纯化，然后重结晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到白色粉末状2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脱氧雌酮0.35g(84％)，mp＝168-169℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.61(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.22-1.54(m，9H)，1.70-1.95(m，5H)，2.15.2.33(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.82(m，2H，H6)，3.33(s，3H，CH₃O)，3.35(m，2H，CH₂O)，4.95(s，2H，NH₂)，7.06(s，1H，ArH)，7.18(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃，270MHz)：12.4(CH₃)，14.6(CH₃)，23.0，24.4，26.3，27.7，28.3，29.3，30.4，37.6，38.5，42.4，44.4，47.4，54.9，58.7，72.6，121.4，127.0，133.5，136.1，139.9，和148.1.；HPLC：100％；

微量分析：C：65.40(理论值65.52)；H：8.29(理论值8.37)；N：3.14(理论值3.32)。

2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮

在氮气、室温下搅拌2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮(0.419g，1mmol)、咪唑(0.136g，2mmol)及TPDPSCl(1.1mmol)的10ml无水DMF溶液24小时。加入水(10mL)后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留油状物经柱层析(己烷/乙酸乙酯25/1)纯化，得到白色粉末状[2-(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-17-基)-乙氧基]-叔丁基-二苯基-硅烷590mg(90％)，mp＝48-50℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.63(s，3H，CH₃)，1.12(s，9H，(CH₃)₃C)1.15-1.60(m，11H)，1.71-2.01(m，5H)2.20-2.44(m，2H)，2.69(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.88(m，2H，H6)，3.65-3.81(m，2H，CH₂O)，5.09(s，2H，CH₂Ph)，6.68(s，1H，ArH)，7.20(s，1H，ArH)，7.32-7.51(m，11H，Ph)，7.72-7.77(m，4H，Ph).

2-乙基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮

向2-乙基-3-O-苄基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮(1mmol)的THF(2mL)及乙醇(20mL)溶液中加入50mg 5％Pd/C，并在氢气下搅拌该混合物。反应用TLC监控。反应完成后，将悬浮液经硅藻土/沙过滤并真空蒸发溶剂。残留油状物经柱层析(己烷/乙酸乙酯20/1至3∶1)纯化，得到白色固体17-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-乙基]-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇，mp＝134-135℃，0.49g(87％)；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.59(s，3H，CH₃)，1.08(s，9H，(CH₃)₃C)，1.18-1.56(m，12H)，1.68-1.89(m，5H)，2.10-2.33(m，2H)，.2.61(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.78(m，2H，H6)，3.61-3.78(m，2H，CH₂O)，4.71(s，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.07(s，1H，ArH)，7.38(m，6H，Ph)，7.70(m，4H，Ph).

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(3mmol)的DMA(2ml)溶液加入到39c(566mg，1mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物24小时。加入水(10mL)后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯15/1-8/1纯化，得到白色固体2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮470mg(72％)，mp＝185-186℃；

¹HNMR(CDCl₃，270MHz)：0.57(s，3H，CH₃)，1.05(s，9H，(CH₃)₃C)，1.18-1.55(m，13H)，1.68-1.89(m，4H)，2.15-2.31(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.82(m，2H，H6)，3.57-3.75(m，2H，CH₂O)，4.91(br，2H，NH₂)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH)，7.34-7.45(m，6H，Ph)，7.67(m，4H，Ph).¹³C NMR(CDCl₃)：12.9(CH₃)，15.1(CH₃)，20.0，23.5，24.9，26.8，27.3，28.1，28.8，29.7，33.9，38.1，38.8，42.7，44.8，47.6，55.0，63.9，121.5，127.2，127.7，129.7，133.7，134.3，135.7，136.3，140.1，和146.2.

HRMS(FAB+)：实测值645.326294，计算值C₂₃H₃₄O₂ 645.330810

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮

将2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脱氧雌酮(323mg，0.5mmol)的20ml THF溶液冷却至0℃，然后滴加入0.6ml 1MTBAF/THF。于0℃搅拌该溶液6小时，然后加入水(10ml)，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯10/1-2/1)纯化，然后己烷/乙酸乙酯4∶1重结晶，得到白色粉末状2-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-羟基乙基)17-脱氧雌酮145mg(72％)，mp＝157-158℃；

¹H NMR((CD₃)₂CO)0.62(s，3H，CH₃)，1.17-1.55(m，12H)，1.70-1.94(m，5H)，2.16-2.33(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.83(m，2H，H6)，3.60-3.76(m，2H，CH₂O)，4.87(br，2H，NH₂)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH)；¹³C NMR(CD₃COCD₃，400MHz)：11.8(CH₃)，13.9(CH₃)，22.3，23.7，25.7，27.1，27.7，28.5，33.0，37.1，38.0，41.7，43.8，46.7，54.1，61.2，121.1，126.0，133.1，134.9，138.4和145.8；

微量分析：C：64.78(理论值64.83)；H：8.12(理论值8.16)；N：3.41(理论值3.44)。

2-(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙醇

氮气下将(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙酸乙酯(0.92g，2mmol)的20ml无水THF溶液冷却至0℃，然后以分次加入方式加入LiAlH₄(0.15g，4mmol)。于0℃6小时后，用NH₄Cl水溶液猝灭该混合物，有机物用乙酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。粗油状物经层析(己烷/乙酸乙酯15/1-6∶1)纯化，得到2-(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙醇0.75g(89％)，为白色粉末，mp＝61-62℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.84(s，3H，CH₃)，1.20-1.66(m，9H)，1.82-2.02(m，3H)，2.21-2.51(m，3H)，2.71(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.87(m，2H，H6)，4.16(m，2H，CH₂OH)，5.07(s，2H，CH₂Ph)，5.31(m，1H，CHCH₂OH)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.30-7.48(m，5H，Ph).

3-苄氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲

氮气下将2-(3-苄氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氢-环戊二烯并[a]菲-17-亚基)-乙醇(0.62g，1.5mmol)的10ml无水THF溶液冷却至0℃。分次加入NaH(0.08g，2mmol NaH 60％的矿物油分散液)，搅拌该溶液30分钟，然后滴加入CH₃I(0.19ml，3mmol)。使该溶液升温至室温并搅拌18小时。加入水(20ml)后，有机物用乙酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并真空蒸发溶剂。粗油状物经层析(己烷/乙酸乙酯20/1)纯化，得到3-苄氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲0.59g(91％)，为无色油状物；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.84(s，3H，CH₃)，1.24(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.26-1.66(m，6H)，1.82-2.02(m，3H)，2.20-2.51(m，3H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.87(m，2H，H6)，3.36(s，3H，CH₃O)，3.94(m，2H，CH₂OMe)，5.06(s，2H，CH₂Ph)，5.27(m，1H，CHCH₂OH)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.31-7.48(m，5H，Ph).

2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇

将3-苄氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲(0.43g，1mmol)的50ml叔丁醇溶液回流，并在6小时内以小份加入Na(0.46g，20mmol)。该混合物回流18小时，冷却至室温并加入2-丙醇以破坏过量的钠。将溶剂蒸发并将残留固体倾入水(20ml)中。有机物用乙酸乙酯萃取，有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂。粗油状物经层析(己烷/乙酸乙酯15/1-8∶1)纯化，得到白色粉末状2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇，230mg(68％)，mp＝133-134℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.79(s，3H，CH₃)，1.22(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.28-1.60(m，6H)，1.75-1.96(m，3H)，2.18(m，1H)，2.39(m，3H)，2.59(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.79(m，2H，H6)，3.35(s，3H，CH₃O)，3.94(m，2H，CH₂OMe)，5.11(s，1H，OH)，5.24(m，1H，CHCH₂OH)，6.48(s，1H，ArH)，7.05(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃，400MHz)：14.9(CH₃)，19.2，23.5，24.4，26.7，27.1，28.1，29.7，36.4，39.1，44.4，44.8，53.5，58.2，70.2，112.8，115.7，126.4，127.5，132.6，135.5，151.5，和157.1.HPLC：98％；

HRMS(FAB⁺)：实测值340.24023，计算值C₂₃H₃₂O₂ 340.24023。

2-乙基-3-O-氨磺酰基17-(2-甲氧基-亚乙基)雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(2mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-(2-甲氧基-亚乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-醇(170mg，0.5mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物24小时。加入水(10mL)后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯10/1-5/1)纯化，得到白色固体2-乙基-3-O-氨磺酰基17-(2-甲氧基-亚乙基)雌酮，142mg(68％)，

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.79(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.22-1.67(m，6H)，1.78-1.98(m，3H)，2.17-2.47(m，4H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.85(m，2H，H6)，3.32(s，3H，CH₃O)，3.90(m，2H，CH₂OMe)，5.14(s，2H，NH₂)，5.22(m，1H，CHCH₂OH)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH).¹³C NMR(CDCl₃，400MHz)：14.6(CH₃)，18.8，23.1，24.0，26.4，26.5，27.4，29.2，35.8，38.2，44.3，44.4，53.2，57.8，69.8，112.9，121.4，127.0，133.7，136.0，139.6，146.2和156.4.HPLC：99.7％；

HRMS(FAB+)：实测值419.21303，计算值C₂₃H₃₃O₄NS 419.21303

2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-羟基-雌酮

于室温搅拌2-乙基雌酮乙酸酯(5mmol)及KCN(3.26g，50mmol)的20ml甲醇及5ml乙酸溶液3-5天。将冰及水加入到该混合物中，将所得固体过滤并用大量水洗涤。将白色固体溶于乙酸乙酯(100ml)中，有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥，真空除去溶剂，得到白色固体2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-羟基-雌酮，1.6g(87％)，其显示

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.85(s，3H，CH₃)，1.16(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.33-1.70(m，6H)，1.80-2.06(m，5H)，2.30(s，3H，CH₃CO)，2.25-2.35(m，1H)，2.38-2.58(m，3H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.82(m，2H，H6)，6.71(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH).

乙酸17-氰基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯

将2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-羟基-雌酮(4mmol)溶于10无水吡啶中，并滴加入SOCl₂(1.46，20mmol)。氮气下该溶液回流1小时，冷却至0℃并用5M盐酸水解至pH1。有机物用乙酸乙酯萃取，且有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂，所得黑色油状物经层析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)纯化，得到白色粉末状乙酸17-氰基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯，0.50g(36％)，mp176-177℃；

¹HNMR(CDCl₃，270MHz)：0.94(s，3H，CH₃)，1，16(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.36-1.52(m，1H)，1.60-1.73(m，4H)，1.84-1.94(m，1H)，2.05-2.26(m，3H，2.30(s，3H，CH₃CO)，2.39-2.52(m，4H)，2.86(m，2H，H6)，6.65(dd，J＝3.5和2.0Hz，1H，H16)，6.72(s，1H，ArH)，7.14(s，1H，ArH).

2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-脱氧雌酮

向乙酸17-氰基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氢-6H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯(1mmol)的THF(5mL)及甲醇(30mL)溶液中加入5％Pd/C(30mg)，并于室温、氢气下搅拌该悬浮液24小时。将悬浮液经硅藻土/沙过滤并真空蒸发溶剂。残留固体经层析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)纯化，得到白色粉末状2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-脱氧雌酮，330mg(94％)，mp＝195-196℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.99(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.22-1.32(m，1H)，1.37-1.53(m，4H)，1.56-1.67(m，1H)，1.86-1.95(m，2H)，1.99-2.08(m，1H)，2.12-2.17(m，1H)，2.19-2.32(m，2H)，2.35(s，3H，CH₃CO)，2.38-2.47(m，2H)，2.53(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.88(m，2H，H6)，6.76(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH).

2-乙基-17-氰基-17-脱氧雌酮

将2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-脱氧雌酮(0.8mmol)溶于丙酮(10ml)及甲醇(10ml)中，并向该溶液中加入K₂CO₃(0.55g，4mmol)。于室温搅拌该混合物24小时。将盐滤去并将溶剂蒸发。所得固体用NH₄Cl水溶液处理(至pH1)，并用乙酸乙酯萃取有机物。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空蒸发溶剂，所得固体经层析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)纯化，和己烷/乙酸乙酯(4∶1)重结晶，得到白色粉末状2-乙基-17-氰基-17-脱氧雌酮，210mg(85％)，mp＝284-285℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.95(s，3H，CH₃)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.30-1.60(m，6H)，1.79-1.91(m，2H)，1.94-2.07(m，2H)，2.09-2.24(m，2H)，2.33-2.42(m，2H)，2.58(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.78(m，2H，H6)，4.50(s，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH).7.03(s，1H，ArH)；¹³C NMR(CDCl₃，400MHz)：14.4(CH₃)，14.5，23.1，24.3，26.4，26.7，27.8，29.1，37.1，39.2，40.4，43.7，44.7，53.5，115.2，121.3，126.4，127.4，131.9，135.2，和151.3；

微量分析：C：81.15(理论值81.51)；H：8.72(理论值8.79)；N：4.33(理论值4.53)。

2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-氰基-17-脱氧雌酮

将冷却至0℃的NH₂SO₂Cl(0.8mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-氰基-17-脱氧雌酮(0.3mmol)中，并于室温、氮气下搅拌该混合物24小时。加入水(10mL)后，有机物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机层依次用水和盐水洗涤，并用MgSO₄干燥。真空除去溶剂，残留固体经柱层析(己烷/乙酸乙酯5/1)纯化并己烷/乙酸乙酯(5/1)重结晶，得到白色粉末状2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-氰基-17-脱氧雌酮，100mg(86％)，mp＝193-194℃；

¹H NMR(CDCl₃，270MHz)：0.95(s，3H，CH₃)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)，1.28-1.62(m，6H)，1.86(m，2H)，1.96-2.28(m，4H)，2.37(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH₂)，2.83(m，2H，H6)，4.94(s，2H，NH₂)，7.08(s，1H，ArH)，7.18(s，1H，ArH)；¹³C NMR(CDCl₃，400MHz)：14.4(CH₃)，14.7，23.1，24.3，26.1，26.6，27.5，29.1，37.0，38.8，40.3，43.8，44.6，53.5，121.2，121.5，127.0，133.8，135.7，138.8和146.3.

微量分析：C：64.95(理论值64.92)；H：7.29(理论值7.26)；N：7.11(理论值7.21)。

生物学数据

本文中所提及的化合物可由上述合成部分中所使用的化合物编号确定或由STX代号确定。化合物编号与其相应的STX代号如下所列。

化合物编号	STX代号
化合物编号	STX代号	14a	441
14b	442	14a	441
14b	442	15	563
17a	590	15	563
17a	590	17b	504
19	535	17b	504
19	535	20	537
22	506	20	537
22	506	23	589
27	505	23	589
27	505	28	564
30	626	28	564
30	626	31	639
32	640	31	639
32	640	33	641
36	621	33	641
36	621	51	591
59	941	51	591
59	941	60	940

另外，下列化合物指：

类固醇硫酸酯酶的抑制

化合物编号	抑制胎盘微粒体类固醇硫酸酯酶的IC₅₀值(nM)
化合物编号	抑制胎盘微粒体类固醇硫酸酯酶的IC₅₀值(nM)	28	945
31	9000	28	945
31	9000	33	109
60	＞10,000	33	109

细胞增殖

用微量滴定板试验(Cell Titer 96 proliferation assay，Promega，Hampshire，UK)测定药物对细胞增殖的作用。

化合物编号	MCF-7细胞生长抑制的IC₅₀(μM)
化合物编号	MCF-7细胞生长抑制的IC₅₀(μM)	14a	30.6
14b	31.1	14a	30.6
14b	31.1	15	1.85
17a	0.67	15	1.85
17a	0.67	17b	0.77
19	2.52	17b	0.77
19	2.52	20	5.64
22	26.4	20	5.64
22	26.4	23	4.19
27	3.24	23	4.19
27	3.24	28	0.06
30	3.22	28	0.06
30	3.22	31	0.03
32	0.30	31	0.03
32	0.30	33	0.15
36	3.25	33	0.15
36	3.25	51	6.02
59	5.58	51	6.02
59	5.58	60	0.09

化合物STX 140在下列测试中用作对照。

化合物	IC₅₀(μM)
	IC₅₀(μM)			MCF-7乳腺癌细胞	A2780卵巢癌细胞	PC3前列腺癌细胞
	STX 140	0.25	0.28	MCF-7乳腺癌细胞	A2780卵巢癌细胞	PC3前列腺癌细胞	0.27
STX 641	STX 140	0.25	0.28	0.15	0.09	0.05	0.27

人脐静脉细胞；96孔板MTS增殖试验，平均抑制三个孔+/-Sds

浓度	STX 140	化合物33	化合物28
浓度	STX 140	化合物33	化合物28	0.05μM	7％+/-4	53％+/-13	0％+/-6
0.10μM	18％+/-1^*	60％+/-8	5％+/-5	0.05μM	7％+/-4	53％+/-13	0％+/-6
0.10μM	18％+/-1^*	60％+/-8	5％+/-5	1.00μM	59％+/-3	48％+/-6	54％+/-10
5.00μM	49％+/-5	42％+/-3	49％+/-7	1.00μM	59％+/-3	48％+/-6	54％+/-10

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人皮肤成纤维细胞；96孔板MTS增殖试验，平均抑制三个孔+/-Sds

浓度	STX140	化合物33	化合物28
浓度	STX140	化合物33	化合物28	0.05μM	0％+/-6	2％+/-2^*	2％+/-1
0.10μM	2％+/-6	10％+/-4	0％+/-2	0.05μM	0％+/-6	2％+/-2^*	2％+/-1
0.10μM	2％+/-6	10％+/-4	0％+/-2	1.00μM	9％+/-9	8％+/-4	1％+/-4
5.00μM	18％+/-12	0％+/-7	6％+/-5	1.00μM	9％+/-9	8％+/-4	1％+/-4

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A2780卵巢癌细胞；三天的研究，细胞数目

处理	细胞数目
	细胞数目						第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.
	未处理	1326000	221873.8	7620500	149315.9	7709500	第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.	272843.8
STX 641，0.5μM	未处理	1326000	221873.8	7620500	149315.9	7709500	1326000	221873.8	345084	44136.09	78734.83	12213.5	272843.8

处理	细胞数目
	细胞数目						第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.
	STX 641，0.5uM	1326000	221873.8	345084	44136.09	88680	第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.	5448.237
STX 140，0.5uM	STX 641，0.5uM	1326000	221873.8	345084	44136.09	88680	113326000	221873.8	679663.3	25472.96	204255.5	24555.12	5448.237
STX 140，0.5uM	STX 140，0.5uM	1326000	221873.8	679663.3	25472.96	462869.8	113326000	221873.8	679663.3	25472.96	204255.5	24555.12	21542.44

STX 641及STX 140表示分别研究了STX 641和STX 140药物诱导作用的可逆性。对这些研究而言，在第3天移去药物，用PBS洗涤细胞，然后加入培养基。这些研究表明：在大多数情况下药物的作用是不可逆的。

这些数据在图8中显示。

PC3前列腺癌细胞；三天的研究，细胞数目

处理	细胞数目
	细胞数目						第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.
	未处理	168552.3	24330.94	1402666.7	192756.5	3142111	第0天	s.d.	第3天	s.d.	第6天	s.d.	422890.6
STX 641，0.5uM	未处理	168552.3	24330.94	1402666.7	192756.5	3142111	168552.3	24330.94	117351	9470.006	84191.33	15036.01	422890.6
STX 641，0.5uM	STX 641，0.5uM	168552.3	24330.94	117351	9470.006	95845.33	168552.3	24330.94	117351	9470.006	84191.33	15036.01	11029.65
STX 140，0.5uM	STX 641，0.5uM	168552.3	24330.94	117351	9470.006	95845.33	168552.3	24330.94	125218.67	16505.52	100059	10827.65	11029.65
STX 140，0.5uM	STX 140.0.5uM	168552.3	24330.94	125218.67	16505.52	197780	168552.3	24330.94	125218.67	16505.52	100059	10827.65	3212.232

这些数据在图9中显示。

A2780卵巢癌细胞中的克隆发生

处理		％克隆发生(相对于未处理细胞)	s.d.
处理		％克隆发生(相对于未处理细胞)	s.d.	STX 140	0.25μM	64.42	1.71
STX 140	1μM	0.04	0.06	STX 140	0.25μM	64.42	1.71
STX 140	1μM	0.04	0.06	STX 641	0.25μM	0.24	0.33
STX 641	1μM	0.00	0.00	STX 641	0.25μM	0.24	0.33

这些数据在图10中显示。

抑制泰素诱导的微管聚合

药物抑制泰素诱导的微管蛋白聚合的能力通过350nm处浊度测定。最终浓度为1mg/ml的微管蛋白(Cryoskeleton Inc.，Denver，CO)于32℃、在G-PEM缓冲液[80mM哌嗪-N，N′-双(2-乙磺酸)倍半钠(sequisodium)盐，1mM MgCl₂，1mM EGTA及1mM GTP(pH6.8)]中，在泰素的存在下、在有或无雌酮衍生物[20μM]的情况下温育。

图3显示STX641及相关化合物对泰素诱导的微管蛋白聚合的抑制。STX641被认为起抗微管药物作用，即破坏微管功能。为了显示该作用，微管蛋白在泰素(称为促进微管蛋白聚合的化合物)的存在下温育。泰素体外诱导有效的微管装配，以350nm处测定的浊度增大来反映。除了STX641之外，STX 505、STX564或STX640对微管蛋白及泰素反应混合物可有效地阻断微管蛋白装配，且检测的浊度很少增大。这些结果显示STX641及相关化合物在体外可抑制微管蛋白聚合且此类化合物可能干扰微管在体内的动力学(并且因此中断肿瘤生长)。

抑制葡萄糖摄取

为了测定对葡萄糖摄入细胞的抑制，将细胞置于12孔多孔板中并生长至融合。将细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤并在每孔含1μCi 2-脱氧-D-[1-³H]葡萄糖(NEN-Dupont，UK)的温育缓冲液中、在潜在的抑制剂(0.1-10μM)缺乏或存在下温育15分钟。通过用冷(4℃)PBS洗涤细胞来终止摄取。将细胞溶于在0.01M氢氧化钠中的Triton-X中并进行液体闪烁计数(Singh等，Molecular and Cellular Endocrinology，160：61-66，2000)。

化合物	％葡萄糖摄取抑制
	％葡萄糖摄取抑制		MCF-7细胞	MDA MB 231细胞
	STX 66	37％	MCF-7细胞	MDA MB 231细胞	32％
STX 68	STX 66	37％	66％	70％	32％
STX 68	STX 140	68％	66％	70％	77％
STX 641	STX 140	68％	28％	60％	77％

图4显示葡萄糖摄取的抑制。葡萄糖(作为能量来源)摄取的增加是大多数癌细胞的典型特征。葡萄糖由许多葡萄糖转运蛋白传送入细胞并且在恶性乳腺组织中一种该转运蛋白(GLUT 1)被过度表达。图4显示STX641(及相关化合物)抑制MCF-7(雌激素受体阳性，ER+)及MDA-MB-231(ER-)乳腺癌细胞的葡萄糖摄取。体内葡萄糖摄取的抑制应抑制肿瘤生长，且这可为STX641及相关化合物用于抑制患者肿瘤生长的重要机理。

对小管形成的作用

用血管生成试剂盒(TCS-Cellworks Ltd(Bucks，UK)评价药物对小管形成(以其抗血管生成潜力标记测定)的作用。为此，将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在人皮肤二倍体成纤维细胞基质中用24孔板培养。在整个试验过程中，共培养的细胞在37℃、5％CO₂湿润培养箱中温育。在第1天，移去培养基并用含研究中药物的培养基代替。在第4、7及9天，用含研究中药物的新鲜培养基代替培养基。在第11天，细胞用加入到各孔中的PBS及70％乙醇(1ml)洗涤30分钟以固定细胞。固定后，细胞用阻断缓冲液(1ml PBS+1％牛血清白蛋白，Sigma，UK)洗涤并用von Willebrand氏因子或CD31染色。小管形成的程度由手工计数或由计算机分析定量。用Kodak DC120数码照相机捕获图像。另外，药物诱导小管形成的改变细节也通过具有某些Photoshop处理图像表示扫描的高清晰度板扫描来记录。

如果生长出血管网络，大多数实体瘤的大小仅能增长1-2mm，所以它们能获得支持其生长的基本营养(称为血管生成的过程)。阻断该血管生成过程的药物因此应能抑制广泛的实体瘤的生长。

在该试验中，STX641(及相关化合物)作为血管生成抑制剂作用的能力用HUVECs及皮肤成纤维细胞的共培养检测。在该系统中，内皮细胞最初在成纤维细胞基质中形成小岛。它们随后增殖并进入迁移阶段，在该阶段中它们通过基质移动形成线状小管结构。这些并生形成闭合小管的网络。图5和6为显示STX641对小管形成作用的代表性图。在图5中，对未处理的(对照)HUVECs及皮肤成纤维细胞的共培养而言，广泛的小管网络的线状性质是明显可见的。相反，对用STX641(0.1μM)处理的共培养细胞而言，小管已完全被破坏，表明该药物具有有效的抗血管生成特性。在图6中，板通过高清晰度扫描记录并也处理给出像素化(pixalated)图像。此外，对未处理(对照)的共培养物而言，线状小管明显可见，但0.05μM的STX641(及STX140)完全消除了小管形成。

小管形成的抑制程度可通过计算机分析定量(图7)。正如所示，0.05μM和0.1μM的STX641、STX564及STX639完全抑制小管形成，确定了这些化合物的抗血管生成潜力。

抑制微血管形成

受试化合物	浓度		区域面积	接合数量	小管数量	总小管长度	平均小管长度
受试化合物	浓度		区域面积	接合数量	小管数量	总小管长度	平均小管长度	对照			701290	29	150	20601.79	137.35
695889	28	118	18467.03	156.5							701290	29	150	20601.79	137.35
695889	28	118	18467.03	156.5	694610	20	138				21041.03	152.47
对照		2ng/mlVEGF	785729	120	694610	20	138				21041.03	152.47	312	37507.58	120.22
			785729	120	762576	68	230	34816.21	151.37				312	37507.58	120.22
			763322	93	762576	68	230	34816.21	151.37	246	35338.12	143.65
			763322	93	STX 140	40nM	2ng/mlVEGF	627527	8	246	35338.12	143.65	37	3064.85	82.83
619251	5	40	3851.64	96.29				627527	8				37	3064.85	82.83
619251	5	40	3851.64	96.29				638786	14	45	3619.74	80.44
20nM	2ng/mlVEGF	749415	25	115				638786	14	45	3619.74	80.44	13509.76	117.48
		749415	25	115		687717	22	94	10489.22	111.59			13509.76	117.48
		674918	26	92		687717	22	94	10489.22	111.59	8191.48	89.04
		674918	26	92		STX 641	20nM	2ng/mlVEGF	593238	1	8191.48	89.04	5	248.31	49.66

受试化合物	浓度		区域面积	接合数量	小管数量	总小管长度	平均小管长度
受试化合物	浓度		区域面积	接合数量	小管数量	总小管长度	平均小管长度				605489	4	14	505.5	36.11
582954	3	13	474.05	36.47							605489	4	14	505.5	36.11
582954	3	13	474.05	36.47	40nM	2ng/mlVEGF	588528				3	6	99.77	16.63
597370	4	7	244.17	34.88			588528				3	6	99.77	16.63
597370	4	7	244.17	34.88			591356		3	5	83.7	16.74
STX 564	20nM	2ng/mlVEGF	661539	3			591356		3	5	83.7	16.74	24	2152.74	89.7
			661539	3	647067	2	14	1047.45	74.82				24	2152.74	89.7
			686243	2	647067	2	14	1047.45	74.82	15	1182.8	78.85
			686243	2	40nM	2ng/mlVEGF	625377	0	7	15	1182.8	78.85	497.27	71.04
	620605	4	7	431.5			625377	0	7	61.64			497.27	71.04
	620605	4	7	431.5			628052	2	9	61.64	565.8	62.87

在各情况中，校准为1.0像素且图像面积为3211216。VEGF为血管内皮生长因子。

图11中显示这些数据。

细胞周期停滞和细胞凋亡

MCF-7乳腺癌细胞

对40％MCF-7与500nM化合物融合群体进行流式细胞计量细胞周期分析。

与对照(16％-27％)相比，在8小时STX 140、STX 640及STX 641显著诱导G2/M停滞。

与对照(28％)、STX 140(28％)及STX 640(18％)相比，暴露于STX64124小时后，68％的细胞被停滞在G2/M。这种G2/M细胞群体的增加伴随着G1-及S-阶段群体的减少(分别为37％-15％，及30％-9％)。在STX 140处理的细胞中，观察到亚-G1群体的显著增加，这正常地指示细胞凋亡(36％，与对照细胞中的2％相比)。

48小时后，STX 641-处理的细胞仍被停滞在G2/M，且细胞凋亡的亚-G1群体无显著增加。用STX 140处理的细胞继续显示亚-G1细胞群体的增加。

A2780卵巢癌细胞

图12显示浓度为1μM的STX 641对A2780卵巢癌细胞的作用，表明24小时后STX 641诱导G2/M停滞(左手边图)。右手边图显示对用膜联蛋白V抗体染色细胞的FACs分析结果。对于对照而言，无如在M2区域缺少峰所指示的细胞表面表达。相反，STX 641处理的细胞显示该细胞凋亡标记的染色显著增加，如在M2区域的增加所示，表明该化合物诱导细胞凋亡。

异种移植裸小鼠模型

MCF-7乳腺癌裸小鼠模型

给成年雌性ICRF裸(nu/nu)小鼠注射10×10⁶MCF-7细胞/0.1mlMatrigel s.c，并且每周监测肿瘤生长。当肿瘤体积达到100-150mm³，将小鼠分成下列组：

A：对照溶媒0.1ml p.o一周5次，共3周

B：STX 14020mg/kg p.o一周5次，共3周

C：STX 64120mg/kg p.o一周5次，共3周

在处死之前20分钟，给小鼠静脉注射0.1ml的25mg/ml FITC-右旋糖酐溶液以便肿瘤血管生成显形和量化。

该研究的结果在下列图中显示。

图13显示STX 140和STX 641(20mg/kg p.o)对ICRF裸小鼠中MCF-7乳腺癌细胞瘤生长的作用。

STX 140导致59％肿瘤缩小，而STX 641在3周给药期间产生25％的肿瘤缩小。

图14表示荧光照片，显示STX 140和STX 641(20mg/kg p.o)对肿瘤脉管系统治疗的作用。

肿瘤FITC成像显示控制以具有充分明确结构的脉管系统，但在STX 140和STX 641处理的动物中，肿瘤脉管系统被破坏并几乎不明确。

图15显示STX-140和STX641(20mg/kg)对MCF-7乳腺肿瘤血管生成的作用。

肿瘤血管生成的FITC定量显示STX 140和STX 641均产生显著的抑制，对肿瘤血管生成的抑制分别为40％和60％。

图16显示STX 140及641(20mg/kg op)对裸小鼠中肝脏及肿瘤硫酸酯酶活性的作用。

肝脏硫酸酯酶活性几乎完全被STX 140和STX 641抑制。

图17显示STX 140及641(20mg/kg op)治疗3周对裸小鼠体重的影响。

在给药期间，在任何一组动物中均未观察到体重减轻。

碳酸酐酶

化合物	CA2IC₅₀s
化合物	CA2IC₅₀s	乙酰唑胺	25nM
STX 140	400nM	乙酰唑胺	25nM
STX 140	400nM	STX 641	1μM
2-甲氧基雌二醇	未检出抑制	STX 641	1μM

CA2和CA9的抑制活性是相关联的(Vullo 2003，BioOrg.Med.Chem.)。

上述说明书中提及的所有出版物和专利通过引用结合到本文中。

本发明的各种修改和变化对本领域技术人员而言将是显而易见的，并未背离本发明的宗旨和范围。虽然本发明结合具体的优选实施方案进行了描述，但应理解要求保护的本发明不应不适当地限定于这些具体的实施方案。甚至，对所描述的实现本发明方式的各种修改对化学、生物学或相关领域技术人员而言是显而易见的，并将落入权利要求书的范围内。

Claims

1.一种化合物，所述化合物包含甾族环系统和任选基团R¹，R¹选自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一种；

其中所述甾族环系统的D环被式-L-R³的基团R²取代，其中L为任选连接基团且R³选自为或包含腈基、醇、酯、醚、胺和烯之一的基团，条件是当R³为或包含醇时，L存在；且

其中所述甾族环系统A环的2或4位被基团R⁴取代，其中R⁴为烃基。

2.权利要求1的化合物，其中所述化合物能实现抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和诱导细胞凋亡中的一种或多种。

3.权利要求1或2的化合物，所述化合物为式I化合物：

式I

4.权利要求1或2的化合物，所述化合物为式II化合物：

式II

5.权利要求1或2的化合物，所述化合物为式III化合物：

式III

6.权利要求1或2的化合物，所述化合物为式IV化合物：

式IV

7.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁴为氧基烃基。

8.权利要求7的化合物，其中R⁴为烷氧基。

9.权利要求8的化合物，其中R⁴为甲氧基。

10.权利要求1-6中任一项的化合物，其中R⁴为碳氢化合物基团。

11.权利要求10的化合物，其中R⁴为烷基。

12.权利要求11的化合物，其中R⁴为乙基。

13.前述权利要求中任一项的化合物，其中R⁴位于A环的2位。

14.前述权利要求中任一项的化合物，其中当A环被R¹和R⁴取代时，R⁴相对于R¹为邻位取代。

15.前述权利要求中任一项的化合物，其中R¹存在。

16.前述权利要求中任一项的化合物，其中R¹为-OH或氨基磺酸酯基。

17.前述权利要求中任一项的化合物，其中R¹为-OH。

18.权利要求1-16中任一项的化合物，其中R¹为氨基磺酸酯基。

19.权利要求18的化合物，其中R¹为下式氨基磺酸酯基：

其中R⁵和R⁶独立选自H、烷基、环烷基、烯基和芳基或其组合，或一起代表亚烷基，其中该或各烷基、环烷基、烯基或芳基任选含一个或多个杂原子或基团。

20.权利要求19的化合物，其中R⁵和R⁶中至少一个为H。

21.权利要求20的化合物，其中R⁵和R⁶中每一个为H。

22.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³为或包含腈基。

23.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³为式-(R⁷)_n(CR¹⁴R¹⁵)_pR⁸基团：

其中n为0或1，p为整数；

R⁷选自＝CH-、-O-和NR¹³；

R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH和-CH＝CH₂；

R⁹选自H和烃基，R¹⁰选自H和烃基；R¹¹和R¹²各自独立选自H和烃基；

R¹³选自H和烃基；

R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和烃基；

q为整数；

X为O或S；

R¹⁶选自H和烃基；且

R¹⁷选自H和烃基。

24.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³为式-(CR¹⁴R¹⁵)_pR⁸基团，p为整数；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH和-CH＝CH₂；R⁹选自H和烃基，R¹⁰选自H和烃基；R¹¹和R¹²各自独立选自H和烃基；R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H和烃基且R¹⁷选自H和烃基。

25.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³为式-(CH₂)_pR⁸基团，p为整数；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C＝N、-NR¹¹R¹²-C≡CH和-CH＝CH₂；R⁹选自H和烃基，R¹⁰选自H和烃基；R¹¹和R¹²各自独立选自H和烃基；q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H和烃基且R¹⁷选自H和烃基。

26.权利要求1-23中任一项的化合物，其中R³为式-(R⁷)_nR⁸基团，其中n为0或1，R⁷选自＝CH-、-O-和NR¹³；R⁸选自-SO₂-R⁹、-C(O)OR¹⁷、-OR¹⁰、(CH₂)_q-X-R¹⁶、-C≡N、-NR¹¹R¹²-C≡CH和-CH＝CH₂；R⁹选自H和烃基，R¹⁰选自H和烃基；R¹¹和R¹²各自独立选自H和烃基；R¹³选自H和烃基，q为整数，X为O或S，R¹⁶选自H和烃基且R¹⁷选自H和烃基。

27.权利要求23-26中任一项的化合物，其中p为0-5。

28.权利要求23-27中任一项的化合物，其中p为0、1或2。

29.权利要求23-28中任一项的化合物，其中R⁸为-SO₂-R⁹。

30.权利要求23-29中任一项的化合物，其中R⁸为-SO₂-R⁹，其中R⁹为烃基。

31.权利要求23-30中任一项的化合物，其中R⁹选自H和C_1-10烷基。

32.权利要求23-31中任一项的化合物，其中R⁹为-CH₂CH₃。

33.权利要求23-32中任一项的化合物，其中R¹⁰选自H和C_1-10烷基。

34.权利要求23-33中任一项的化合物，其中R¹⁰为-H或-CH₃。

35.权利要求23-34中任一项的化合物，其中R¹¹和R¹²独立选自H和C_1-10烷基。

36.权利要求23-35中任一项的化合物，其中R¹¹和R¹²独立选自-H和-CH₃。

37.权利要求23-36中任一项的化合物，其中R¹³选自H和C_1-10烷基。

38.权利要求23-37中任一项的化合物，其中R¹³为-H。

39.权利要求23-38中任一项的化合物，其中R¹⁴和R¹⁵各自独立选自H和烃基。

40.前述权利要求中任一项的化合物，其中R³为选自＝CHC(O)OEt、-CH₂C(O)OEt、＝CHCH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂C≡N、＝CHC≡N、-NHCH₂CH₂N(Me)₂、-OCH₂CH₂-OMe的基团。

41.前述权利要求中任一项的化合物，其中L为烃基。

42.前述权利要求中任一项的化合物，其中L为碳氢化合物基团。

43.前述权利要求中任一项的化合物，其中L为亚烷基。

44.前述权利要求中任一项的化合物，其中L为C_1-10亚烷基，优选C_1-5亚烷基，优选C₁或C₂亚烷基。

45.权利要求1-40中任一项的化合物，其中R²为式-R³。

46.前述权利要求中任一项的化合物，其中基团R²为α构象。

47.前述权利要求中任一项的化合物，其中在D环17位上的基团R²为α构象。

48.前述权利要求中任一项的化合物，其中R¹为氨基磺酸酯基，且所述化合物适用于作为雌酮硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)抑制剂使用。

49.权利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，则所述硫酸酯化合物可被类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)水解。

50.权利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，并于pH7.4和37℃与类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起温育，它将提供小于50mM的K_m值。

51.权利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，并于pH7.4和37℃与类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起温育，它将提供小于50μM的K_m值。

52.一种组合物，所述组合物包含

i)前述权利要求中任一项所定义的化合物；和

ii)生物反应调节剂。

53.权利要求52的组合物，其中所述生物反应调节剂为细胞因子。

54.权利要求53的组合物，其中所述细胞因子为肿瘤坏死因子(TNF)。

55.权利要求54的组合物，其中所述TNF为TNFα。

56.一种药用组合物，所述组合物包含

(a)(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或

(ii)权利要求52-55中任一项所定义的组合物，

和

(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂。

57.用于药物的(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物。

58.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备预防和/或抑制肿瘤生长药物中的用途。

59.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备用于治疗与一种或多种以下情况相关的病症或疾病的药物中的用途：类固醇硫酸酯酶(STS)活性；细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；和细胞凋亡。

60.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备用于治疗病症或疾病的药物中的用途，所述病症或疾病与反向的以下情况中一种或多种相关：类固醇硫酸酯酶(STS)活性；细胞周期；细胞凋亡；细胞生长；肿瘤对葡萄糖的摄取；肿瘤血管生成；微管形成；和细胞凋亡。

61.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备用于一种或多种以下情况的药物中的用途：抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和诱导细胞凋亡。

62.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备用于抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性的药物中的用途。

63.(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物在制备用于调节细胞生长的药物中的用途。

64.一种治疗方法，所述方法包括给予有治疗需要的患者(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物。

65.一种治疗方法，所述方法包括给予有治疗需要的患者(i)权利要求1-51中任一项所定义的化合物，或(ii)权利要求52-56中任一项所定义的组合物，以便抑制类固醇硫酸酯酶(STS)活性；调节细胞周期；调节细胞凋亡；调节细胞生长；预防和/或抑制肿瘤对葡萄糖的摄取；预防和/或抑制肿瘤血管生成；破坏微管；和/或诱导细胞凋亡。

66.一种化合物，所述化合物如说明书中结合实施例所充分描述。

67.一种组合物，所述组合物如说明书中结合实施例所充分描述。

68.说明书中结合实施例所充分描述的用途。

69.一种方法，所述方法如说明书中结合实施例所充分描述。