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CN1778943A - 无机磷的测定方法及其诊断试剂盒 - Google Patents

无机磷的测定方法及其诊断试剂盒 Download PDF

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CN1778943A
CN1778943A CN 200410065574 CN200410065574A CN1778943A CN 1778943 A CN1778943 A CN 1778943A CN 200410065574 CN200410065574 CN 200410065574 CN 200410065574 A CN200410065574 A CN 200410065574A CN 1778943 A CN1778943 A CN 1778943A
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CN
China
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acid
reagent
inorganic phosphorus
ethyl
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CN 200410065574
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王尔中
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Suzhou ANJ Biotech Co Ltd
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Suzhou ANJ Biotech Co Ltd
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Abstract

本发明涉及测定无机磷的方法及其诊断试剂盒。利用核苷磷酸酶在血浆、血清等样品中无机磷的存在下与肌苷作用产生次黄嘌呤，次黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶作用产生尿酸盐和过氧化氢，尿酸盐再与尿酶反应又生成一分子的过氧化氢，这样便有两分子的过氧化氢与过氧化物酶发生反应，将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原或者吲嗒胺色原染料，检测反应期间主波长400～600nm吸光度的变化，从而测算出无机磷的含量。该方法特异性高，不受内、外源物质的污染，测试结果精确、准确性好。该方法在普通紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪上便可快速检测，不需要特殊或额外仪器，测试成本低廉，便于行业内推广应用。

Description

无机磷的测定方法及其诊断试剂盒
技术领域
本发明涉及测定无机磷的方法，以及应用该方法配制而成的诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。
背景技术
人体内部的磷元素约有87％存在于骨骼中，血液中的磷与骨骼中的磷保持动态平衡关系。另一方面，血液中钙和磷的浓度之间有一定关系，两者的乘积保持在一定范围之内，以毫克为单位，大约每100毫升血浆中钙和磷的含量之积为35～40。正常人血钙升高则血磷降低，反之亦然。当上述乘积大于40时，钙和磷以骨盐形式沉积在骨组织；大于70时，可发生转移性钙化；小于35时，则将妨碍骨组织的钙化，甚至使骨盐再溶解，影响成骨作用，引起佝偻病或软骨病。一般地，可以通过维生素D、甲状旁腺激素、降钙素等来调节血浆中钙和磷的浓度。
目前，人体的含磷总量还不能直接测定，大多是检测血浆或血清中磷酸根离子浓度来反映。由于H2PO4 -在血液等自然条件下最能稳定存在，是无机磷的主要存在形式，因而测定H2PO4 -的浓度便能间接代表或推知无机磷的总量。常用的检测方法有：磷钼酸还原法/非还原法、染料结合法、酶法、同位素稀释质谱法、原子吸收分光光度法、流动注射分析法等等。其中，决定性的方法是同位素稀释质谱法，中等实验室推荐使用的常规方法是磷钼酸比色法。
磷钼酸还原法又分“无蛋白血滤液法”和“不去蛋白法”，前者需将血液先去蛋白，后者需在试剂中加入非离子型表面活性剂以避免混浊。所用还原剂和表面活性剂的种类很多，性能比较稳定的还原剂有硫酸亚铁、硫酸亚铁铵、硫酸肼、米吐尔等，表面活性剂则以聚乙二醇基苯基醚(TritonX-100)最理想。
磷钼酸非还原法又称“直接紫外法”，是在340nm或325nm波长直接测定磷钼酸杂聚化合物，方法简便，便于自动化。但黄疸、溶血、脂浊血清在340nm有吸收，必须做标本空白，否则结果偏高。
相比于其它检测方法，酶法以其选择性好、灵敏度高、可实现自动化分析等优点而备受人们青睐，用酶法测定无机磷含量既是目前人们的研究热点，也是将来的发展趋势。但是，采用不同的试剂和测试路线，检测的灵敏度、检测结果的准确性会有很大的差别，直接影响到该方法的使用与推广。
发明内容
本发明的目的是：提供一种酶法测定无机磷含量的方法，以及应用该方法配制而成的无机磷诊断试剂盒。采用该试剂盒中的试剂，能够利用紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪对血浆、血清等样品中无机磷的含量进行快速、准确测定，以便推广使用该检测方法和诊断试剂，使本领域内医学检验测试手段得到丰富和发展。
为实现本发明的目的，一种测定无机磷的方法，通过以下步骤进行：
首先，将血浆、血清等需要测定的样品与含有肌苷、核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、脲酶、过氧化物酶以及还原型色原体组合的试剂混匀，使之发生以下反应，
然后，将反应混合物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪下，检测主波长为400～600nm的吸光度的上升速度，进而测算出样品中无机磷的含量。
上述“还原型色原体组合”是由还原型色原体A与另外一种组分B构成。还原型色原体A为：“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”(英文简称MBTH，全称是3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone)或者“4-氨基抗砒呍”(英文全称是4-aminoantipyrine)；另外一种组分B为以下15种物质之一：
①石碳酸(phenol)，
②N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine，简称ESPAS)，
③N，N-双乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)，
④2，4-双氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)，
⑤2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid，简称TBHB)，
⑥3，5-双氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)，
⑦3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid，简称DHBS)，
⑧N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium，简称TOOS)，
⑨仨溴羟基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)，
⑩双甲基苯胺(Dimethylaniline，简称DMA)，
(11)N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(简称EHSPT，全称为N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine)，
(12)2，2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2，2′-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)，简称ABTS)，
(13)2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，英文名称为2，2′-azino-bis-(3-ethylbenztbiozoline-6-sulfonic acid)，
(14)4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoicacid)，简称HMB)，
(15)3-甲基-乙基-羟基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline，简称MEHA)。
测定过程中，被测样品与试剂的使用比例按体积控制在1∶10～1∶500，反应温度控制在20℃～50℃，反应时间控制在2～30分钟，检测时设定副波长在500～700nm以上。
实现本发明方法测定无机磷含量的诊断试剂盒可以是单剂，由以下成分组成：
缓冲液                   40～200mmol/l，
肌苷                     0.1～10mmol/l，
核苷磷酸酶               500～50000U/l，
黄嘌呤氧化酶             500～50000U/l，
脲酶                     500～50000U/l，
过氧化物酶               500～50000U/l，
还原型色原体组合         0.1～20mmol/l，
稳定剂/试剂总体积        10～80％。
其中“还原型色原体组合”的含义如前所述，两种组分A和B的浓度均为0.1～20mmol/l。
也可以将以上单剂中的各种成分进行组合，配制成双剂，以利于消除内、外源尿酸盐、次黄嘌呤的污染，比如：
  成分   含量范围
  试剂I   缓冲液   40～200mmol/l
  核苷磷酸酶   500～50000U/l
  黄嘌呤氧化酶   500～50000U/l
  脲酶   500～50000U/l
  过氧化物酶   500～50000U/l
  还原型色原体组合(一)   0.1～20mmol/l
  稳定剂/试剂I总体积   10～80％
试剂II   缓冲液   40～200mmol/l
  肌苷   0.2～10mmol/l
  还原型色原体组合(二)   0.1～20mmol/l
  稳定剂/试剂II总体积   10～80％
其中，还原型色原体组合(一)可以是：3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍；还原型色原体组合(二)可以是前述15种物质之一。
双剂的配方不仅仅限于上述配方，还原型色原体组合(一)和(二)可以互换位置，而且，试剂I中的成分——核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、脲酶、过氧化物酶等，可以放在试剂II，试剂II中的肌苷也可以放到试剂I，如此可以形成多种配方，不一一列举。
为使试剂更稳定，还可以配制成三剂，比如：
  成分   含量范围
试剂I   缓冲液   40～200mmol/l
  黄嘌呤氧化酶   500～50000U/l
  脲酶   500～50000U/l
  过氧化物酶   500～50000U/l
  还原型色原体组合(一)   0.1～20mmol/l
  稳定剂/试剂I总体积   10～80％
试剂II   缓冲液   40～200mmol/l
  核苷磷酸酶   500～50000U/l
  还原型色原体组合(二)   0.1～20mmol/l
  稳定剂/试剂II总体积   10～80％
  试剂III   缓冲液   40～200mmol/l
  肌苷   0.2～10mmol/l
  稳定剂/试剂III总体积   10～80％
与双剂类似，三剂中还原型色原体组合(一)可以是3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍，组合(二)可以是前述15种物质之一。
三剂的配方也不仅仅限于上述配方，还原型色原体组合(一)和(二)可以分开来放在试剂I、II或III的任何位置，试剂I的成分——黄嘌呤氧化酶、脲酶、过氧化物酶等可以放在试剂II或试剂III中，试剂II中的成分——核苷磷酸酶可以放在试剂I或试剂III中，试剂III中的成分——肌苷也可以放到试剂I或者试剂II当中，如此可以形成多种配方，不再一一列举。
上述诊断试剂盒的成分当中，选择缓冲液的基本要求是PH值在6.0～11.0范围之内，可以是：“三羟甲基氨基甲烷～盐酸(Tris-HCl)缓冲液”、“三乙醇胺(Triethanolamine)缓冲液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)缓冲液”、“咪唑～盐酸(Imidazole-HCl)缓冲液”、“双甘氨肽(Glycylglycine)缓冲液”、“柠檬酸～柠檬酸钠缓冲液”、“巴比妥钠～盐酸缓冲液”、“硼酸～硼砂缓冲液”、“甘氨酸～氢氧化钠缓冲液”、“硼砂～氢氧化钠缓冲液”或者“碳酸钠～碳酸氢钠缓冲液”中的至少一种，但选择范围并不受这些列举所限制。
此外，为减少各试剂成分之间的交叉影响、保持试剂的稳定性，以便长期储存，以上单剂、双剂的试剂I/试剂II、三剂的试剂I/试剂II/试剂III当中通常加入稳定剂，其用量约占所在试剂总体积的10～80％(或者浓度在10～50mmol/l范围之内)。
用作稳定剂的物质可以是：乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸铵、硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、葡萄糖、谷氨酸盐、还原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸盐或者氯化钠中的至少一种。
研究表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下配方成分关系的无机磷诊断试剂盒较为理想，也是本发明的优选方案：
缓冲液                    80～120mmol/l，
肌苷                      0.2～10mmol/l，
核苷磷酸酶                5000～12000U/l，
黄嘌呤氧化酶              5000～12000U/l，
脲酶                      5000～12000U/l，
过氧化物酶                5000～12000U/l，
还原型色原体组合          0.1～10mmol/l，
稳定剂/试剂总体积         20～50％。
本发明应用核苷磷酸酶，在血浆、血清等样品中无机磷的存在下，与肌苷作用产生次黄嘌呤，次黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶作用产生尿酸盐和过氧化氢，尿酸盐再与尿酶反应又生成一分子的过氧化氢，这样便有两分子的过氧化氢与过氧化物酶发生反应，将无色的还原型色原体(Chromogen)组合系统氧化成有颜色的醌亚胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料。由于不同染料在400～600nm范围内的吸收波长不同，染料含量与吸光度之间有很好的定量对应关系，因此，测量反应期间的吸光度变化，便能很好地反映出被测样品中无机磷的含量。
本发明技术方案的突出的实质性特点和显著的进步主要表现在：
(1)本发明完全利用酶学方法，酶解反应具有特异性高的特点，通过将无色的还原型色原体组合氧化成有颜色的醌亚胺色原或者吲嗒胺色原染料，定量反映出被测样品中无机磷的含量，测试结果准确；
(2)引入脲酶将次黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶作用产生的尿酸盐又反应生成过氧化氢，使得与过氧化物酶发生反应的过氧化氢的量增加了一倍，从而大大提高了检测灵敏度；
(3)参与酶偶联反应系统的反应成分都是外加的，不受内、外源物质的污染，测试过程精确度高；
(4)该方法简便、易操作，可快速得到检测结果，而且反应是在缓冲液条件下进行，不会污染环境；
(5)该方法在普通紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪上便可检测，不需要特殊或额外仪器，测试成本低廉，便于行业内推广应用；
(6)应用本发明提供的测定方法可以制成液态试剂、干粉试剂、干试剂等多种形式的试剂，主要用于测定人体和其它动物体内血磷的含量，也可以结合稀释、浓缩等辅助手段来测定其它样品中无机磷的含量；
(7)本发明提供的液态无机磷诊断试剂盒，稳定性好，存在于其中的各种酶的三维空间结构保持完整，很好地保证了应用测试效果。做成双剂或者三剂以后，能够进一步减少各种成分之间的交叉影响，提高试剂的稳定性，便于长期储存。
 具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明技术方案作进一步说明。这些例子仅是一些应用范例，不能理解为对本发明权利要求保护范围的一种限制。
实施例一(单剂)
按以下成分和用量配制血清中无机磷诊断试剂盒：
双甘氨肽缓冲液                80mmol/l，
肌苷                          0.2mmol/l，
核苷磷酸酶                    5000U/l，
黄嘌呤氧化酶                  5000U/l，
脲酶                          5000U/l，
过氧化物酶                    5000U/l，
4-氨基抗砒呍                  2mmol/l，
石碳酸              10mmol/l，
乙二醇              50％(占试剂总体积)。
在全自动生化分析仪(日立-7080)上设定：温度37℃、反应时间10分钟、测试主波长495～505nm、测试副波长600nm以上，被测样品与试剂的体积比例为1∶25，反应方向为正反应(吸光度上升，下同)。
加入血清样品和配成的单剂，两者在分析仪内部自动混匀，检测、记录495～505nm吸光度的上升情况。一共检测读点31次，大约每隔20秒记录一次数据，根据速率法、终点法等方法，对照相应的标准曲线测算出血清样品中无机磷的含量。对同一批样品多次重复以上过程，测试结果重复性好、精确度高。
实施例二(双剂)
按以下成分和用量配制血清中无机磷诊断试剂盒：
试剂I——
咪唑～盐酸缓冲液                100mmol/l，
核苷磷酸酶                      9000U/l，
黄嘌呤氧化酶                    9000U/l，
脲酶                            9000U/l，
过氧化物酶                      9000U/l，
4-氨基抗砒呍                    1mmol/l，
甘油                            50％(占试剂I总体积)；
试剂II——
咪唑～盐酸缓冲液                100mmol/l，
肌苷                            5mmol/l，
2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸      1mmol/l，
葡聚糖                          50％(占试剂II总体积)。
在全自动生化分析仪(日立-7080)上设定：温度30℃、反应时间15分钟、测试主波长546nm、测试副波长630nm以上，被测样品与试剂I和试剂II的总体积之比为1∶25，试剂I与试剂II的用量之比为4∶1，反应方向为正反应。
先加入血清样品和试剂I，5分钟之后加入试剂II，三者在分析仪内部自动混匀，检测、记录546nm吸光度的上升情况。根据速率法、终点法等方法，对照相应的标准曲线测算出血清样品中无机磷的含量。对同一批样品多次重复以上过程，测试结果重复性好、精确度高。
实施例三(三剂)
按以下成分和用量配制血清中无机磷诊断试剂盒：
试剂I——
三乙醇胺缓冲液                    120mmol/l，
黄嘌呤氧化酶                      12000U/l，
脲酶                              12000U/l，
过氧化物酶                        12000U/l，
3-甲基-2-苯噻唑酮腙               2mmol/l，
丙二醇                            50％(占试剂I总体积)；
试剂II——
三乙醇胺缓冲液                    120mmol/l，
核苷磷酸酶                        12000U/l，
双甲基苯胺                        2mmol/l，
丙二醇                            50％(占试剂II总体积)；
试剂III——
三乙醇胺缓冲液                    120mmol/l，
肌苷                              10mmol/l，
甘露醇                            20mmol/l。
在全自动生化分析仪(日立-7080)上设定：温度25℃、反应时间20分钟、测试主波长578nm、测试副波长700nm以上，被测样品与试剂I、试剂II和试剂III的总体积之比为1∶25，试剂I、试剂II和试剂III的用量为8∶1∶1，反应方向为正反应。
先加入血清样品和试剂I、试剂II，5分钟之后加入试剂III，它们在分析仪内部自动混匀，检测、记录578nm吸光度的上升情况。根据速率法、终点法等方法，对照相应的标准曲线测算出血清样品中无机磷的含量。对同一批样品多次重复以上过程，测试结果重复性好、精确度高。
实施例四(双剂优选例)
按以下成分和用量配制血磷诊断试剂盒：
试剂I——
Tris-HCl缓冲液           100mmol/l，
黄嘌呤氧化酶               7000U/l，
脲酶                       12000U/l，
过氧化物酶                 12000U/l，
4-氨基抗砒呍               1mmol/l，
甘油                       50％(占试剂I总体积)；
试剂II——
Tris-HCl缓冲液           100mmol/l，
肌苷                       2mmol/l，
核苷磷酸酶                 6000U/l，
双甲基苯胺                 2mmol/l，
甘油                       50％(占试剂II总体积)。
在全自动生化分析仪(日立-7080)上设定：温度30℃、反应时间10分钟、测试主波长578nm、测试副波长700nm以上，被测样品与试剂I和试剂II的总体积之比为1∶25，试剂I与试剂II的用量之比为4∶1，反应方向为正反应。
先加入血清样品和试剂I，5分钟之后加入试剂II，三者在分析仪内部自动混匀，发生以下原理性反应：
检测、记录578nm吸光度的上升情况。根据速率法、终点法等方法，对照相应的标准曲线测算出血清样品中无机磷的含量。对同一批样品多次重复以上过程，测试结果重复性好、精确度高。
本发明的显著特色之一是可以消除内、外源尿酸盐、次黄嘌呤的污染。消除内、外源尿酸盐、次黄嘌呤的作用发生在整个反应时间段的前半部分，在后半段时间，受污染的内、外源尿酸盐、次黄嘌呤已经被消耗殆尽，而后半段时间测试血浆、血清等样品中无机磷含量所需要的尿酸盐、次黄嘌呤都是产生于样品中无机磷的作用。
总之，实验证明采用本发明的测定方法，完全可以通过紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪器，测定出血浆、血清等样品中无机磷的含量，测试灵敏度高、精确度好，不受内、外源物质的污染。而且，本发明提供的无机磷诊断试剂盒，稳定性好，长时间存放之后仍然能够准确检测各种类型样品中的无机磷含量。

Claims (9)

1.一种测定无机磷的方法，包括以下步骤：
①将待测样品与含有肌苷、核苷磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、脲酶、过氧化物酶以及还原型色原体组合的试剂混匀，使之发生以下反应，
②将反应混合物置于紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪下，检测主波长为400～600nm的吸光度的上升幅度，测算出样品中无机磷的含量。
2.根据权利要求1所述的测定无机磷的方法，其特征在于：所述“还原型色原体组合”是由还原型色原体A与另外一种组分B构成，还原型色原体A为“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”，另外一种组分B为以下15种物质之一：石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-双乙基-m-甲苯胺，2，4-双氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸，3，5-双氯石碳酸磺酸，3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐，仨溴羟基苯甲酸，双甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐，2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羟基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羟基苯胺。
3.根据权利要求1或2所述的测定无机磷的方法，其特征在于：待测样品与试剂的使用比例控制在1∶10～1∶500，反应温度控制在20℃～50℃，反应时间控制在2～30分钟，检测时设定副波长在500～700nm以上。
4.一种无机磷诊断试剂盒，盒中试剂由以下成分组成：
缓冲液                   40～200mmol/l，
肌苷                     0.2～10mmol/l，
核苷磷酸酶               500～50000U/l，
黄嘌呤氧化酶             500～50000U/l，
脲酶                     500～50000U/l，
过氧化物酶               500～50000U/l，
还原型色原体组合         0.1～20mmol/l，
稳定剂/试剂总体积        10～80％。
5.根据权利要求4所述的无机磷诊断试剂盒，其特征在于：
所述“还原型色原体组合”是由还原型色原体A与另外一种组分B构成，A和B的浓度均为0.1～20mmol/l；
还原型色原体A为“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”；
另外一种组分B为以下15种物质之一：石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-双乙基-m-甲苯胺，2，4-双氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸，3，5-双氯石碳酸磺酸，3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐，仨溴羟基苯甲酸，双甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐，2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羟基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羟基苯胺。
6.根据权利要求4或5所述的无机磷诊断试剂盒，其特征在于：所述缓冲液的PH范围是6.0～11.0。
7.根据权利要求6所述的无机磷诊断试剂盒，其特征在于：所述缓冲液是“三羟甲基氨基甲烷～盐酸缓冲液”、“三乙醇胺缓冲液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液”、“咪唑～盐酸缓冲液”、“双甘氨肽缓冲液”、“柠檬酸～柠檬酸钠缓冲液”、“巴比妥钠～盐酸缓冲液”、“硼酸～硼砂缓冲液”、“甘氨酸～氢氧化钠缓冲液”、“硼砂～氢氧化钠缓冲液”或者“碳酸钠～碳酸氢钠缓冲液”中的至少一种。
8.根据权利要求4或5所述的无机磷诊断试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸铵、硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、葡萄糖、谷氨酸盐、还原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸盐或者氯化钠中的至少一种。
9.根据权利要求4或5所述的无机磷诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂配成单剂、双剂或者三剂。
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