CN1749756A - 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 - Google Patents
血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1749756A CN1749756A CN 200410041963 CN200410041963A CN1749756A CN 1749756 A CN1749756 A CN 1749756A CN 200410041963 CN200410041963 CN 200410041963 CN 200410041963 A CN200410041963 A CN 200410041963A CN 1749756 A CN1749756 A CN 1749756A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blood ammonia
- reagent
- content
- damping fluid
- coenzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 119
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 59
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 55
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims abstract description 39
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 21
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 20
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010042687 Pyruvate Oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 25
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 25
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 21
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 21
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 20
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 claims description 18
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 12
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 9
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 8
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N acetyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(=O)OP(O)(O)=O LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 6
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 claims description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N (2r,3r,4s,5r)-5-[[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-2-(3-carbamothioylpyridin-1-ium-1-yl)-4-hydroxyoxolan-3-olate Chemical compound NC(=S)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)[O-])=C1 CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical group NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 claims description 2
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims 3
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229940058020 2-amino-2-methyl-1-propanol Drugs 0.000 claims 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 claims 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JRIZSBGDMDSKRF-DEGSGYPDSA-N [(2s,3s,4s,5s)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-diphosphonooxyoxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1O[C@@H](COP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O JRIZSBGDMDSKRF-DEGSGYPDSA-N 0.000 claims 1
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 claims 1
- CBTVGIZVANVGBH-UHFFFAOYSA-N aminomethyl propanol Chemical compound CC(C)(N)CO CBTVGIZVANVGBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 claims 1
- NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N methylamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]C NQMRYBIKMRVZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 abstract 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 abstract 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 abstract 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract 1
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 abstract 1
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 abstract 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- -1 mercury amine Chemical class 0.000 description 2
- BBFCZCZRPXGONA-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanol Chemical compound OCCN(CCO)CCO.OCCN(CCO)CCO BBFCZCZRPXGONA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXEQGQXRKQSAMW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropan-1-ol Chemical compound CC(C)(N)CO.CC(C)(N)CO VXEQGQXRKQSAMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDONOVUTWDJOQT-UHFFFAOYSA-N Cl.Cl.Cl.Cl.CN Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.CN FDONOVUTWDJOQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQYUHRVUJCLGRX-UHFFFAOYSA-N NCC(=O)NCC(O)=O.NCC(=O)NCC(O)=O Chemical compound NCC(=O)NCC(O)=O.NCC(=O)NCC(O)=O ZQYUHRVUJCLGRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- ICIWUVCWSCSTAQ-UHFFFAOYSA-M iodate Chemical compound [O-]I(=O)=O ICIWUVCWSCSTAQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000011430 maximum method Methods 0.000 description 1
- 238000010339 medical test Methods 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种测定血氨含量的方法，同时本发明还涉及血氨诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该试剂盒包括缓冲液、腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、乙醇、氧化型辅酶、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶、稳定剂，通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生酶偶联反应，再将最终反应物置于生化分析仪下，检测主波长吸光度变化的情况(速度)，从而测算出血氨的含量。采用本发明完全可以通过生化分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血氨含量的方法，同时本发明还涉及血氨诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。
背景技术
氨测定的方法有微量扩散法、离子交换法、酶法和氨电极法等。目前应用最多的方法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。
扩散法是标本碱化后，释放出NH3，用酸滴定释放出的氨，或用Nessler反应形成棕黄色碘化双汞胺进行比色。这些方法需要碱化，内源性的氨形成造成影响，使其准确性和精密度受到影响，目前已很少应用；离子交换法比扩散法更准确，CV为8％--13％；离子选择电极法是利用NH3扩散到电极表面，引起电极的PH发生变化进行测定，该方法的CV为3.5％--4.8％，回收率高。结合我国的具体实际，应以酶法测定为实用。
检索中国专利，仅查出87105593.7号专利申请公开了一种血氨测定速冻杯，却未发现比较理想的血氨测定方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提出一种可以克服以上现有技术缺点的血氨含量的测定方法，同时给出用以实现本发明方法的血氨诊断试剂盒。采用该试剂盒中的试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪上进行血氨含量测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。
本发明测定血氨含量的步骤如下：
1)、将样品与主要由腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、乙醇、氧化型辅酶、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶组成的试剂混合，使之发生如下原理的反应：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
2)、检测最终反应物在主波长340nm吸光度下降的速度，测算出血氨的含量。
通常步骤2)将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪器下，检测主波长340nm吸光度下降的程度，测算出血氨的含量。
以上样品与试剂的混合比例为按体积1/10到1/250，以上过程的测定温度控制在常规的20℃到50℃范围，反应时间控制在常规的2-30分钟。
本发明应用谷氨酰胺合成酶偶联丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶等酶偶联反应系统，最终将氧化型辅酶还原成还原性辅酶，因为还原性辅酶在波长340nm有吸收峰，因此测试波长340nm吸收峰的增加程度可以直接反映氨含量的大小。这个酶偶联反应系统的优点有：一、它利用测量氧化型辅酶被还原成还原性辅酶的生成量来反映氨含量的大小，氧化型辅酶在溶液中的稳定性比还原性辅酶高很多，因此这个系统的稳定性很好。二、这个酶偶联反应系统的需要先将体(血)液中原来含有的磷酸根消灭掉，否则结果会受体(血)液中不等含量的磷酸根的影响。这种消灭内源磷酸根的步骤可以通过调配双试剂，让血样先和试剂中第二、第三及第四反应先作用后，再加入谷氨酰胺合成酶启动氨的作用。
用于实现本发明方法的血氨诊断试剂盒可以是单剂，包括：
缓冲液 40--200mmol/l
腺苷三磷酸 1--20mmol/l
谷氨酸 l--30mmol/l
丙酮酸 1--30mmol/l
乙醇 l--20mmol/l
氧化型辅酶 0.5--5mmol/l
谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l
丙酮酸氧化酶 1000--50000U/l
过氧化氢酶 1000--50000U/l
醛脱氢酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80％(总体积)
也可以将以上单剂配成如下双剂，更有利于消除内、外源磷酸根污染：
试剂I
缓冲液 40--200mmol/l
谷氨酸 1--30mmol/l
丙酮酸 1--30mmol/l
乙醇 1--20mmol/l
氧化型辅酶 0.5--5mmol/l
谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l
丙酮酸氧化酶 1000--50000U/l
过氧化氢酶 1000--50000U/l
醛脱氢酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80％(总体积)
试剂II
缓冲液 40--200mmol/l
腺苷三磷酸 1--20mmol/l
稳定剂 10--50mmol/l
双剂的配方不仅限于上述配方，其中的试剂I的成分，谷氨酸、可以放在试剂II，试剂II其中的成分，腺苷三磷酸也可以放在试剂I，如此可以形成多种配方，不在此一一详述。
还可以将试剂配成如下三试剂，不但更有利于消除内、外源磷酸根污染，还更有利于试剂的稳定：
试剂I
缓冲液 40--200mmol/l
谷氨酸 1--30mmol/l
丙酮酸 1--30mmol/l
乙醇 1--20mmol/l
氧化型辅酶 0.5--5mmol/l
稳定剂 10--8050mmol/l
试剂II
缓冲液 40--200mmol/l
谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l
丙酮酸氧化酶 1000--50000U/l
过氧化氢酶 1000--50000U/l
醛脱氢酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80％(总体积)
试剂III
缓冲液 40--200mmol/l
腺苷三磷酸 1--20mmol/l
稳定剂 10--50mmol/l
三剂的配方不仅限于上述配方，其中的试剂I的成分，谷氨酸可以放在试剂II或试剂III中，试剂I的其他成分，丙酮酸、乙醇、氧化型辅酶可以放在试剂II中，试剂II其中的成分，谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶等也可以放在试剂I中，试剂III的成分，腺苷三磷酸可以放在试剂I或试剂II中，如此可以形成多种配方，不在此一一详述。
缓冲剂的pH范围可以是7.0-11.0。缓冲剂可以是三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液、三乙醇胺(Triethanolamine)缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)缓冲液、咪唑(Imidazole)缓冲液或双甘氨肽(Glycylglycine)缓冲液等，但不仅限于这些缓冲液。
以上氧化型辅酶可以是NADP+、NAD+或thio-NAD+等氧化型烟酰胺辅酶或其衍生物。
此外，为了减少各试剂成分之间的交叉影响、保持试剂的稳定性，以便长期储存，以上单剂、双剂的试剂I、试剂II或三剂的试剂I、试剂II、试剂III中通常加入稳定剂10-80％或者10-50mmol/l，稳定剂可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺、盐或腺苷二磷酸等中的一种或一种以上。
实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下配方成分关系的本发明血氨诊断试剂盒较为理想：
缓冲液 80--120mmol/l
腺苷三磷酸 1--5mmol/l
谷氨酸 4--10mmol/l
丙酮酸 4--10mmol/l
乙醇 2--8mmol/l
氧化型辅酶 1--3mmol/l
谷氨酰胺合成酶 10000--20000U/l
丙酮酸氧化酶 10000--20000U/l
过氧化氢酶 10000--20000U/l
醛脱氢酶 10000--20000U/l
稳定剂 10--50％(总体积)
由于本发明是完全利用酶学方法，酶解反应具有特异性高的特点，不易受到内、外源其他物质的干扰。酶法方法简便、易于操作。酶解反应的特异性促使测试结果精确。酶解反应都是在缓冲液条件下进行，没有污染环境问题。酶法方法不需要特殊、额外的仪器，测试成本低廉。因此可以保证具有较高的测试准确性，更便于推广应用。
此外，本发明的显著特色之一是可以消除内、外源磷酸根的污染，消除内、外源磷酸根的作用发生在整个反应时间段的前半部分，在后半段时间受污染的内、外源磷酸根已经被消耗殆尽，而在后半段时间测试血氨含量所需要的磷酸根都是产生于血氨的作用。
具体实施方式
下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。
实施例一(单剂)
本实施例的血氨诊断试剂盒包括：
缓冲液 80mmol/l
腺苷三磷酸 1mmol/l
谷氨酸 4mmo/l
丙酮酸 4mmol/l
乙醇 2mmol/l
氧化型辅酶 1mmol/l
谷氨酰胺合成酶 10000U/l
丙酮酸氧化酶 10000U/l
过氧化氢酶 10000U/l
醛脱氢酶 10000U/l
稳定剂 50％(总体积)
在全自动化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm以上，被测血氨样品与试剂的体积比例为2/25，反应方向为正反应。
加入样品和试剂后，使之混合，发生以下反应：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
将最终反应物置于生化分析仪器下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出血氨的含量。
本实施例应用谷氨酰胺合成酶偶联丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶等酶偶联反应系统，最终将氧化型辅酶还原成还原性辅酶，因为还原性辅酶在波长340nm有吸收峰，因此测试波长340nm吸收峰的增加程度可以直接反映氨含量的大小。
实施例二(双剂)
本实施例的血氨诊断试剂有：
试剂I
缓冲液 100mmol/l
谷氨酸 7mmol/l
丙酮酸 7mmol/l
乙醇 5mmol/l
氧化型辅酶 2mmol/l
谷氨酰胺合成酶 15000U/l
丙酮酸氧化酶 15000U/l
过氧化氢酶 15000U/l
醛脱氢酶 15000U/l
稳定剂 50％(总体积)
试剂II
缓冲液 100mmol/l
腺苷三磷酸 3mmol/l
稳定剂 10mmol/l
测定血氨含量时，温度控制在30℃，反应时间15分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm以上，被测血氨样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应。
具体测定步骤为：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
将最终反应物置于生化分析仪器下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出血氨的含量。
各反应步骤的反应时间控制在15分钟。
实施例三(三剂)
本实施例的血氨诊断试剂为三剂，有：
试剂I
缓冲液 120mmol/l
谷氨酸 10mmol/l
丙酮酸 10mmol/l
乙醇 8mmo l/l
氧化型辅酶 3mmol/l
稳定剂 50mmol/l
试剂II
缓冲液 120mmol/l
谷氨酰胺合成酶 20000U/l
丙酮酸氧化酶 20000U/l
过氧化氢酶 20000U/l
醛脱氢酶 20000U/l
稳定剂 50％(总体积)
试剂III
缓冲液 120mmol/l
腺苷三磷酸 5mmol/l
稳定剂 50mmol/l
在全自动生化分析仪上设定：温度25℃，反应时间20分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm以上，被测血氨样品与试剂的体积比例为1/50，反应方向为正反应。
具体测定步骤为：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
将最终反应物置于生化分析仪器下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出血氨的含量。
各反应步骤的反应时间控制在20分钟。
实施例四
本实施例的血氨诊断试剂有：
试剂I
缓冲液 100mmol/l
丙酮酸 5mmol/l
乙醇 2mmol/l
氧化型辅酶 3mmol/l
谷氨酰胺合成酶 20000U/l
丙酮酸氧化酶 15000U/l
过氧化氢酶 20000U/l
醛脱氢酶 10000U/l
稳定剂 50％(总体积)
试剂II
缓冲液 100mmol/l
腺苷三磷酸 5mmol/l
谷氨酸 8mmol/l
稳定剂 20mmol/l
在生化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm以上，被测血氨样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应。
加入样品和试剂后，使之混合，发生以下反应：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
将最终反应物置于生化分析仪器下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出血氨的含量。
总之，实验证明，采用本发明的测定方法完全可以通过紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内、外源物质的污染。
Claims (9)
1.一种测定血氨含量的方法，步骤如下：
1)、将样品与主要由腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、乙醇、氧化型辅酶、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、醛脱氢酶组成的试剂混合，使之发生如下原理的反应：
氨+谷氨酸+腺苷三磷酸
谷氨酰胺合成酶 谷氨酰胺+
腺苷二磷酸+磷酸根
磷酸根+丙酮酸+氧+水
丙酮酸氧化酶 乙酰磷酸+
二氧化碳+过氧化氢
过氧化氢+乙醇
过氧化氢酶 乙醛+水
乙醛+氧化型辅酶+水
醛脱氢酶 乙酸+还原性辅酶+氢离子
2)、检测最终反应物在主波长340nm吸光度下降的速度，测算出血氨的含量。
2.根据权利要求1所述测定血氨含量的方法，其特征在于：所述步骤2)为：将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，测算出血氨的含量。
3、根据权利要求1或2所述测定血氨含量的方法，其特征在于：温度控制在20℃到50℃范围，反应时间控制在2-30分钟。
4、根据权利要求1或2所述测定血氨含量的方法，其特征在于：被测血氨样品与试剂的比例控制在1/10到1/100。
5.一种血氨诊断试剂盒，由以下成分组成：
缓冲液 40--200mmol/l
腺苷三磷酸 1--20mmol/l
谷氨酸 1--30mmol/l
丙酮酸 1--30mmol/l
乙醇 1--20mmol/l
氧化型辅酶 0.5--5mmol/l
谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l
丙酮酸氧化酶 1000--50000U/l
过氧化氢酶 1000--50000U/l
醛脱氢酶 1000--50000U/l
稳定剂 10--80％(总体积)
6.根据权利要求5所述血氨诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂配成单剂、双剂或三剂。
7.根据权利要求5或6所述血氨诊断试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸铵、盐或腺苷二磷酸中的至少一种。
8.根据权利要求5和6所述血氨诊断试剂盒，其特征在于：所述缓冲剂的pH范围可以是7.0-11.0，所述缓冲剂为三(羧甲基)氨基甲烷—盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、咪唑缓冲液或双甘氨肽缓冲液中的一种。
9、根据权利要求5或6所述血氨诊断试剂盒，其特征在于：所述氧化型辅酶为NADP+、NAD+、thio-NAD+氧化型烟酰胺辅酶或其衍生物中的一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410041963 CN1749756A (zh) | 2004-09-14 | 2004-09-14 | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410041963 CN1749756A (zh) | 2004-09-14 | 2004-09-14 | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1749756A true CN1749756A (zh) | 2006-03-22 |
Family
ID=36605317
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410041963 Pending CN1749756A (zh) | 2004-09-14 | 2004-09-14 | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1749756A (zh) |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101324630A (zh) * | 2007-06-13 | 2008-12-17 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 乙醇诊断/测定试剂盒及乙醇的浓度测定方法 |
| CN102539728A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539729A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539717A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539685A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565365A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565339A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565349A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565351A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565330A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565356A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565331A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565347A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565335A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565352A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| EP3279658A1 (en) * | 2016-08-05 | 2018-02-07 | ARKRAY, Inc. | Quantification method for ammonia, quantification reagent, quantification reagent kit, and ammonia quantification device |
| JP2018068278A (ja) * | 2016-10-25 | 2018-05-10 | アークレイ株式会社 | アンモニアの定量方法、定量試薬キット、試験片及びアンモニアの定量装置 |
-
2004
- 2004-09-14 CN CN 200410041963 patent/CN1749756A/zh active Pending
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101324630A (zh) * | 2007-06-13 | 2008-12-17 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 乙醇诊断/测定试剂盒及乙醇的浓度测定方法 |
| CN102539728A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539729A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539717A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102539685A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-04 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565365A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565339A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565349A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565351A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565330A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565356A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565331A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565347A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565335A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| CN102565352A (zh) * | 2010-12-13 | 2012-07-11 | 苏州艾杰生物科技有限公司 | 氨(氨离子)的测定方法与氨(氨离子)诊断/测定试剂盒 |
| EP3279658A1 (en) * | 2016-08-05 | 2018-02-07 | ARKRAY, Inc. | Quantification method for ammonia, quantification reagent, quantification reagent kit, and ammonia quantification device |
| JP2018068278A (ja) * | 2016-10-25 | 2018-05-10 | アークレイ株式会社 | アンモニアの定量方法、定量試薬キット、試験片及びアンモニアの定量装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1749756A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1778963A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1778944A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1778947A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1746316A (zh) | 腺苷脱氨酶活性测定方法及腺苷脱氨酶诊断试剂盒 | |
| CN1757748A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1749754A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1749411A (zh) | 5ˊ－核苷酸酶活性测定方法及5ˊ－核苷酸酶诊断试剂盒 | |
| CN1757754A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1766640A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1778946A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1766638A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1757750A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1749755A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1757751A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1758050A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1766641A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1746678A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 | |
| CN1749405A (zh) | 5ˊ－核苷酸酶活性测定方法及5ˊ－核苷酸酶诊断试剂盒 | |
| CN1757753A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1769476A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1769480A (zh) | 肌酐含量测定方法及肌酐诊断试剂盒 | |
| CN1760374A (zh) | 5＇－核苷酸酶活性测定方法及5＇－核苷酸酶诊断试剂盒 | |
| CN1763539A (zh) | 二氧化碳含量测定方法及二氧化碳诊断试剂盒 | |
| CN1778945A (zh) | 血氨含量测定方法及血氨诊断试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20060322 |