CN1692123A - 用于治疗炎性疾病和病症的新化合物、组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及(a)由通式(I)表示的新化合物：其中M表示来源于具有在炎性细胞中累积特性的大环内酯的大环内酯亚单位(大环内酯部分)，S表示来源于具有抗炎活性的甾类药物的甾类亚单位(甾类部分)，且L表示连接M和S的连接分子；(b)其药学上可接受的盐、前体药物和溶剂化物；(c)其制备方法和中间体；和(d)它们在治疗人和动物炎性疾病和病症中的应用。这类化合物抑制导致炎症、变态反应或同种异体免疫的免疫反应中涉及的许多细胞因子和免疫介体，包括但不限于IL－1、2、4、5、6、10、12、GMCSF、ICAM和TNF－α。重要的是抗炎的甾类通过结合糖皮质类固醇受体发挥直接的抗炎作用。

Description

用于治疗炎性疾病和 病症的新化合物、组合物和方法

本申请要求2002年7月8日提交的美国临时申请的60/394,670的优先权。

技术问题

本发明涉及：

(a)由结构(I)表示的新化合物：

其中M表示具有在炎性细胞中累积特性的大环内酯亚单位，S表示抗炎甾类亚单位，且L表示连接M和S的连接分子；

(b)其药学上可接受的盐、前体药物和溶剂化物；

(c)其制备方法和中间体；和

(d)它们在治疗人和动物炎性疾病和病症中的应用。

这类化合物抑制导致炎症、变态反应或同种异体免疫的免疫反应中涉及的许多细胞因子和免疫介体，包括、但不限于IL-1、2、4、5、6、10、12、GMCSF、ICAM和TNF-α。重要的是抗炎的甾类通过结合糖皮质类固醇受体发挥直接的抗炎作用。

现有技术

传统上可以将抗炎药分类成甾类和非甾类。甾类抗炎化合物仍然是最有效治疗炎性疾病和病症的药物，所述的疾病和病症诸如：哮喘、慢性阻塞性肺病；炎性鼻病，诸如过敏性鼻炎、鼻息肉；肠病，诸如克罗恩病、结肠炎、溃疡性结肠炎；皮肤炎症，诸如湿疹、牛皮癣、过敏性皮炎、神经性皮炎、瘙痒症、结膜炎；自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎；和移植免疫抑制。此外，甾类用作治疗各种恶性肿瘤的辅助化疗剂，所述的恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和其它造血系统的恶性肿瘤。除极佳的功效和有效性外，这类药物还存在大量例如对碳水化合物代谢、钙吸收、内源性皮质类固醇的分泌以及对垂体、肾上腺皮质和胸腺生理功能的不利副作用。近来研发的甾类对炎性疾病和过程高度有效，因为它们抑制许多炎症介体，而其全身副作用得到减少。专利申请WO 94/13690、WO 94/14834、WO 92/13873和WO 92/13872中描述了用于局部施用在炎症部位的所谓″软″甾类或可水解皮质类固醇，而其全身副作用因″软″甾类在血清中的不稳定性而得到减少，其中活性甾类快速水解成失活形式。然而，尚未发现作为用于控制诸如哮喘或克罗恩病这类疾病所需的在长期和持续治疗中没有不利作用的理想甾类。因此，对具有改善的治疗物性和/或较少或较轻度副作用的甾类存在迫切需求。

大环内酯类、诸如大环内酯类抗生素优选累积在给予这类分子的受试者的不同细胞中，尤其是在吞噬细胞中，诸如单核外周血细胞、腹膜和肺泡巨噬细胞；以及支气管肺泡上皮周围的液体中(Glaude R.P.等《抗菌剂与化疗》(Antimicrob.Agents Chemother.)，1989，33，277-282；Olsen K.M.等《抗菌剂与化疗》(Antimicrob.AgentsChemother.)1996，40，2582-2585)。此外，描述了某些大环内酯类相对弱的炎性作用。例如，近来描述了红霉素衍生物(Labro M.T.《抗菌药与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)，1998，41，37-46；WO 00/42055)和阿奇霉素衍生物(EP 0283055)的抗炎作用。还从实验性动物模型的体外和体内研究中得知了某些大环内酯类的抗炎作用，诸如zimosane-诱导的小鼠腹膜炎(Mikasa等《抗菌药与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)1992，30，339-348)和内毒素-诱导的大鼠气管中性白细胞累积(《免疫学杂志》(J.Immunol.)1997，159，3395-4005)。大环内酯类对细胞因子、诸如白细胞介素8(IL-8)(《美国呼吸疾病保健药物标准杂志》(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)1997，156，266-271)或白细胞介素5(IL-5)(EP 0775489和EP 0771564)的调节作用也是已知的。

已经发现大环内酯用于治疗哮喘，这是由于它们的抗菌活性或通过甾类储备(sparing)作用所致。然而，已经提示诸如嗜酸性细胞或中性白细胞活化抑制的其它特性解释了气道高反应性降低的原因。呼吸和其它炎性疾病(例如皮肤病或窦炎)也可以得益于大环内酯疗法(Labro M.T.《抗菌药与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)1998，41，37；Cazzolam等，Mondaldi Arch Chest Dis 200，55，231；Avila P.C.等，《过敏性哮喘免疫学年鉴》(Ann Allergy AsthmaImmunol)200，84 565；Amayasu H.等，《过敏性哮喘免疫学年鉴》(Ann Allergy Asthma Immunol)2000，84，594；和Shoji T.等，《变态反应临床实验》(Clin Exp Allergy)1999，29，950；将这些文献的全部内容引入作为参考)。

附图简述

附图1表示与标准物地塞米松相比，化合物38和40诱导杂交瘤13编程性细胞死亡的功效。

附图2和3表示与标准物地塞米松相比，化合物31分别对白细胞介素4和5的抑制。

附图4表示与标准物丙酸氟替卡松相比，化合物31减少嗜酸性细胞在BALF中的百分比。i.n.给予剂量为2mg/kg的化合物31，同时给予1mg/kg的丙酸氟替卡松、

技术方案

通式I表示的化合物不同于未与其它类型分子轭合或与之轭合的甾类的方面在于它们结合了甾类的抗炎和免疫抑制剂特性与已知在影响需要抑制的炎性免疫反应的细胞中累积的大环内酯类的累积特性。通式I化合物的这类作用上由具有累积在免疫系统细胞、特别是吞噬细胞中的药动学特性的大环内酯部分M产生的。它使得式I化合物能够主要通过″控制″补充至炎症部位的炎性极强的细胞内的大环内酯且通过抑制炎性介体的产生起作用，而并非仅在炎症部位起作用。按照这类方式，皮质类固醇不利的全身副作用会得到避免或减轻而使本发明化合物的活性集中在患病器官或组织。在局部或全身施用后，本发明的杂化分子快速累积在炎性细胞中，其中它们通过抑制细胞因子和趋化因子和其它炎性介体产生起作用，从而阻止或抑制炎症。

迄今为止尚未描述属于本发明主题的通式I的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物和前体药物以及包括它们的药物组合物，但不包括含有大环内酯FK-506和甾类地塞米松或大环内酯环孢菌素和甾类地塞米松或大环内酯pateamine A以及甾类地塞米松的某些特定构建体。参见WO 97/41255；Romo，D.等《美国化学协会杂志》(J.Am.Chem.Soc.)，1998，120：12237-12254；Griffith，E.C.等《酶学方法》(Methods in Enzymology)，2000，328：89-110。然而，这些对比文件没有公开这类化合物作为抗炎物质或作为不需要的免疫反应的免疫抑制剂或作为嗜酸性细胞在炎症组织中累积的抑制剂的应用，这些对比文件中也没有描述含有这类化合物的对哺乳动物、包括人给药的组合物。

近来我们已经发现了通式I中的某些在治疗炎性疾病、失调和病症中发挥改善的治疗作用的化合物：

上述结构中的符号M表示具有在炎性细胞中累积特性的大环内酯亚单位，S表示抗炎甾类亚单位，并且L表示共价连接M和S的连接基。我们的拥有的普通未审国际专利申请PCT/HR02/00001(将该文献的全部内容引入本文作为参考，其复制件作为附录A)中描述了带有通过链L与9-二氢-9-脱氧-9a-氮杂-9a-高红霉素的N/9a位或与脱-克拉定糖基阿奇霉素衍生物的C/3位或与去-氧糖胺糖基(desozaminosyl)的C/2′位连接的甾类亚单位S的化合物。然而，迄今为止尚未描述带有与德糖胺(desozamine)上含有修饰或消去的二甲氨基的C/11或N/9a位连接的甾类亚单位的杂交化合物，它们也具有上述治疗作用。也没有描述带有通过大环内酯的内酯环的C/6位或通过克拉定糖基的C/4″位或通过德糖胺(desozamine)基的C/3′位或通过甾类亚单位的17α-OH连接甾类的N/9a位与甾类连接的杂交化合物。此外，在上述PCT/HR02/00001中，没有特别描述其它类型的甾类-都大环内酯杂交化合物。所有这类化合物均属于本申请的主题。

本发明涉及：

(a)通式I表示的新″杂化(hybrid)″化合物：

其中M表示具有在炎性细胞中累积特性的大环内酯亚单位，S表示如下定义的甾类，且L表示连接M和S的连接基；

(b)含有上述化合物中的一种或多种的组合物，所述化合物的用量可有效抗炎且由此治疗涉及包括人在内的哺乳动物炎症失调和病症；和

(c)使用这些化合物治疗这类失调和病症的方法。

本发明的化合物有利地提供了改善的治疗作用和/或改善的副作用分布。

用于本发明杂化化合物的合适的大环内酯亚单位可以选自、但不限于多元内酯环分子，其中″元″指的是环上的碳原子或杂原子，并且″多″是大于约10的原子数、优选10-约50、更优选12-、14-、15-、16-、17-和18-元内酯环的大环内酯类。特别优选14-和15-元环的大环内酯亚单位，最优选阿奇霉素及其衍生物和红霉素及其衍生物。

大环内酯亚单位可以选自的分子的更具体的非限制性实例如下：

(i)大环内酯抗菌素，包括：氮杂内酯类(azalides)，例如红霉素、地红霉素、阿奇霉素、9-二氢-9-脱氧-9a-氮杂-9a-高红霉素、HMR 3004、HMR 3647、HMR 3787、交沙霉素、红霉胺(erythromycylamine)、ABT 773、氟红霉素、克拉霉素、泰洛星、替米考星、竹桃霉素、脱碳糖泰乐菌素(desmycosin)、CP-163505、罗红霉素、美奥卡霉素和洛他霉素及其衍生物，诸如酮内酯类(例如3-酮)；内酰胺类(例如8a-或9a-内酰胺类)和缺乏一个或多个糖部分的衍生物。

(ii)大环内酯免疫抑制剂，诸如FK 506、环孢菌素、两性霉素和雷帕霉素；

(iii)具有宿主细胞抑制特性的大环内酯抗真菌药，诸如巴弗洛霉素、刀球肮霉素(concanamycin)、制霉菌素、那他霉素、克念菌素、非律平(filipin)、鲁斯霉素(etruscomycin)、曲古霉素(trichomycin)。

用于合成上述并非商购的大环内酯类的方法和大环内酯的合成操作一般是本领域技术人员所公知的或可以在下列文献中找到：DenisA等《生物有机和药物化学通讯》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1999，9，3075-3080；Agouridas C.等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1998，41，4080-4100；和EP-00680967(1998)；Sun Or Y.等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)2000，43，1045-1049；US-05747467(1998)；

McFarland J.W.等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1997，40，1041-1045；Denis A.等《生物有机和药物化学通讯》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1998，8，2427-2432；WO-09951616(1999)；Lartey等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1995，38，1793-1798；EP 0984019；WO 98/56801，将这些文献的全部内容引入本文作为参考。

其它合适的大环内酯类是已知的，某些公开在下列文献中：Bryskier，A.J.等的《大环内酯类、化学、药理学和临床应用》(Macrolides，Chemistry，Pharmacology and Clinical Use)；Bryskier，Arnette Blackwell：Paris，1993，pp 485-491；Ma，Z.等《最新药物化学-抗感染药》(CurrentMedicinAlChemisty-Anti-Infective Agents)，2002，1，15-34，也将该文献的全部内容引入参考。Romo，D.等《美国化学协会杂志》(J.Am.Chem.Soc.)1998，120；12237-12254，也将该文献的全部内容引入作为参考。特别参见：Bryskier等在487-491页上描述的14-和16-元环的大环内酯类的结构和衍生物；和Ma等描述的各种酮内酯衍生物和合成，注意所有的结构表和所有的反应方案。与甾类轭合后的所有这些大环内酯类属于本发明的范围。上述特别具体命名或参照的大环内酯类以及上述涉及的化合物是商购的或其结构及其合成方法是已知的。

上文特别描述的化合物及其几种衍生物的结构和合成方法是已知的或是本领域技术人员中充分了解的。

在本发明化合物的一种亚类中，如果本发明化合物的一种组成部分为FK-506或环孢菌素，那么另一种组成部分不能为地塞米松。在本发明化合物的另一种亚类中，从大环内酯亚单位中一起排除FK-506、环孢菌素和pateamine A。然而，这些条件不必扩展至使用上述化合物(包括含有FK-506、环孢菌素或pateamine A作为组成部分的那些)的新方法或含有有效量对哺乳动物或人给予、特别是针对炎症的本发明化合物的药物组合物和剂型。

重要的是大环内酯亚单位来源于具有累积在补充至炎症部位的免疫系统细胞、尤其是吞噬细胞内特性的大环内酯。累积在特定类细胞中的大环内酯类的其它实例可以在下列文献中找到：PascuAlA.等《临床微生物感染》(Clin.Microbiol.Infect.)2001，7，65-69.(“酮内酯HMR 3647在人吞噬和非吞噬细胞中的吸收和胞内活性”(Uptakeand intracellular activity of ketolide HMR 3647 in humanphagocytic and non-phagocytic cells))；Hand W.L.等《国际抗菌药杂志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，419-425.(“阿奇霉素在人多形核白细胞中累积和流出的特性和机制”(Characteristics and mechanisms of azithromycin accumulationand efflux in human polymorphonuclear leukocytes))；Amsden G.W.《国际抗菌药杂志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，11-15.(“新一代大环内酯类：定向于组织的抗生素”(Advanced-generation macrolides：tissue-directedantibiotics))；Johnson J.D.等《实验室临床药物杂志》(J.Lab.Clin.Med.)1980，95，429-439.(“肺泡巨噬细胞的抗生素吸收”(Antibiotic uptake by alveolar macrophages))；Wildfeuer A.等《抗菌药与化疗》(Antimicrob.Agents Chemother.)1996，40，75-79.(“体内条件下各种细胞对阿奇霉素的吸收及其胞内活性”(Uptake ofazithromycin by various cells和its intracellular activityunder in vivo conditions))；Scorneaux B.等《家禽科学》(Poult.Sci.)1998，77，1510-1521.(“替米考星在鸡吞噬细胞中的胞内累积、亚细胞分布和流出”(Intracellular accumulation，subcellulardistribution，and efflux of in chicken phagocytes))；MtairagE.M.等《抗菌剂与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)1994，33，523-536。(“人中性白细胞体外地红霉素和红霉胺吸收的研究”(Investigation of dirithromycin and erythromycylamineuptake by human neutrophils in vitro))；Anderson R.等《抗菌剂与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，923-933.(“新大环内酯抗菌药克拉霉素(A-56268，TE-031)的细胞吸收和吞噬细胞内生物活性的体外评价”(An in-vitro evaluation of thecellular uptake and intraphagocytic bioactivity ofclarithromycin (A-56268，TE-031)，a new macrolideantimicrobial agent))；Tasaka Y.等《日本抗生素杂志》(Jpn.J.Antibiot.)1988，41，836-840.(“肺泡巨噬细胞的洛他霉素吸收”(Rokitamycin uptake by alveolar macrophages))；Harf R.等《抗菌剂与化疗杂志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，135-140.(“肺泡巨噬细胞的螺旋霉素吸收”(Spiramycin uptake byalveolar macrophages))，将这些文献的全部内容引入本文作为参考。已知上述定义的大部分内酯类化合物具有这种特性。即使并非如此，本发明领域的普通技术人员也可以使用用于该目的的众所周知的试验之一测定这种特性。例如，可以使用Olsen，K.M.等在《抗菌剂与化疗》(Anitmicrob.Agents & Chemother.)1996，40，2582-2585中所述的具体步骤，将该文献引入本文作为参考。简单的说，可以通过Ficoll-Hypaque离心从健康志愿者的静脉血中获得受测试的细胞、例如多形核白细胞，随后进行2％葡聚糖沉降。通过渗透溶解除去红细胞并通过锥虫蓝排除法评价PMN。另一方面，可以分离其它细胞级分并按照类似方式测试。

将氚代的大环内酯化合物(例如10μM)与2.5×10⁶个细胞一起保温120分钟(37℃，5％CO₂，90％相对湿度)且随后通过离心、例如通过硅油-石蜡层(86vol％：14vol％)从含有化合物的上清液中除去细胞。例如，通过闪烁计数测定化合物的量，并且显著高于背景的得分表明大环内酯累积在测试细胞中。另一方面，不对该化合物进行放射性标记，而可以通过HPLC测定化合物的量。

可以使用的其它试验方法公开在Bryskier，A.J.等的《大环内酯、化学、药理学和临床应用》(Mcrolides，Chemistry，Pharmacologyand ClinicAlUse)；Arnette Blackwell：Paris，1993pp 375-386中，将该文献引入作为参考。特别参见380-381页上的吞噬细胞吸收测定和381、383和385页以及382页上的表对大环内酯类吸收和定位的具体描述。

本发明在某些优选的实施方案中涉及通式I表示的化合物、其盐和溶剂化物，其中M特别表示14-或15-元内酯环的大环内酯亚单位，更优选通式II表示的化合物：

其中：

(i)Z和W独立为：

或键，其中：

R_t和R_s独立为氢或烷基(优选甲基或H)；

R_M为OH、OR^P、烷氧基或取代的烷氧基(Syn或Anti构型或其混合物形式)；

R_N为H、R^P、烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(＝X)-NR_tR_s；且

X为O或S；

条件是Z和W不能同时为

或键；

(ii)U和Y独立为H、卤素、烷基或羟基烷基(优选H、甲基或羟甲基)；

(iii)R¹为羟基、OR^P、-O-S²或＝O；

(iv)S¹为如下通式C/5位上的糖部分(例如去氧糖胺(desozamine)基)：

其中：

R⁸和R⁹均为氢或一起形成键，或R⁹为氢且R⁸为-N(CH₃)R^y，其中：

R^y为R^P、R^Z或-C(O)R^Z，其中R^Z为氢或环烷基(优选环己基)或烷基(优选C₁-C₇烷基)或链烯基(优选C₂-C₇-链烯基)或炔基(优选C₂-C₇-炔基)芳基或杂芳基或被C₂-C₇-烷基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-炔基、芳基或杂芳基取代的烷基(R^y优选为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、-C(O)CH₃、-CH₂-苯基或环己基)；

R¹⁰为氢或R^P；

(v)S²为如下通式的糖部分(例如为克拉定糖基)：

其中：

R^3’为氢或甲基；且R¹¹为氢或R^P或O-R¹¹为与R¹²和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

R¹²为氢或与O-R¹¹和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

(vi)R²为H、羟基、OR^P、烷氧基(优选C₁-C₄烷氧基，最优选甲氧基)或取代的烷氧基；

(vii)A为H或甲基；

(viii)B为甲基或环氧基；

(ix)E为H或卤素(优选氟)；

(x)R³为羟基、OR^P或烷氧基(优选C₁-C₄烷氧基，最优选甲氧基)、取代的烷氧基或R³为可以与R⁵合并形成″桥″(例如环碳酸酯或环氨基甲酸酯)的基团；或如果W或Z为 那么R³为与W或Z合并形成″桥″(例如环氨基甲酸酯)的基团；

(xi)R⁴为C₁-C₄烷基(优选甲基)；

(xii)R⁵为氢、羟基、OR^P、C₁-C₄-烷氧基、取代的烷氧基或与R³合并形成桥(例如环碳酸酯或环氨基甲酸酯)的基团；

(xiii)R⁶为H或C₁-C₄烷基(优选甲基或乙基)；

其中亚单位M含有连接位置，它通过该位置经连接基L与亚单位S连接；所述的连接位置位于下列基团中的一个或多个上：

a位于S¹、S²或糖苷配基氧上的任意活性羟基、氮或环氧基，条件是S¹或/和S²被裂解；

b位于Z或W上的活性＞N-R_N或-NR_tR_s或＝O基团；

c位于R¹、R²、R³和R⁵中任意一个上的活性羟基；

d可以首先被衍生成羟基或-NR_tR_s基团，然后与K连接的任意其它基团(例如，OH→＝O→环氧→

其中K为连接分子L的部分。

一个或多个R^P基团可以独立地存在于通式II的大环内酯亚单位上，其中R^P表示保护基，其可以选自烷基(优选甲基)、烷酰基(优选乙酰基)、烷氧羰基(优选甲氧羰基或叔丁氧羰基)、芳基甲氧羰基(优选苄氧羰基)、芳酰基(优选苯甲酰基)、芳烷基(优选苄基)、烷基甲硅烷基(优选三甲基甲硅烷基)或烷基甲硅烷基烷氧基烷基(优选三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)。可以通过常规技术除去氨基保护基。因此，可以通过溶剂解、例如通过在酸性或碱性条件下水解除去例如酰基，如烷酰基、烷氧羰基或芳酰基。可以在有催化剂、诸如钯/活性炭存在的情况下通过氢解裂解芳基甲氧羰基(苄氧羰基)。

L表示结构VA或VB：

              VA  X¹-(CH₂)_m-X²       或

              VB  X¹-(CH₂)_m-Q-(CH₂)_n-X²

其中：

X¹选自-CH₂-、-CH₂NH-、-C(O)-、-OC(O)-、＝N-O-、-OC(O)NH-或-C(O)NH-；

X²选自-NH-、-CH₂-、-NHC(O)-、-C(＝O)或-OC(O)-；

Q为-NH-或-CH₂-，

其中：

-CH₂-或-NH-基团各自可以任选被C₁-C₇-烷基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-炔基、C(O)R^X、C(O)OR^X、C(O)NHR^X取代，其中R^X可以为C₁-C₇-烷基、芳基或杂芳基；

符号m和n独立为0-8的整数，

条件是如果Q为NH，那么n不能为0。

不仅对通式II的甾类和大环内酯类的杂化物、而且对通式I中的任意轭合物优选这种连接基的定义。正如本领域中众所周知的，可以使用其它连接基，条件是它们提供必要的间隔基且可以用于连接通式I的一个亚单位与另一个亚单位。例如，参见美国专利US 6,297,260，将该文献的全部内容引入本文作为参考，尤其是其权利要求1和甾类的具体目录。

S为甾类亚单位，优选具有通式X：

其中：

R^a和R^b彼此独立为氢或卤素；

R^c为羟基、烷氧基(优选甲氧基)、取代的烷氧基、烷基、硫代氨基甲酰基、氨基甲酰基或价键；

R^d和R^e彼此独立为氢、OH、CH₃或C₁-C₄-烷氧基(优选甲氧基或正丙氧基)或各自为与其它基团(任选被单取代或二取代的烷基或链烯基)(优选2，2-二甲基或2-一丙基或反式-丙烯基环)或价键形成1，3-二氧戊环的基团；

R^f为氢、羟基、氯或与它所连接的碳原子一起形成＝O；

R^j为氢或氯；

及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

另一方面，本发明的甾类亚单位公开在WO 94/14834中，其中它们含有＞CH-S(O)_n-R^c而不是＞CH-C(O)-R^c，其中n为0-2的整数。参见WO 94/14834，将其全部内容引入作为参考，尤其是pp 2-3。

更一般而言，用作甾类亚单位源的甾类包括、但不限于皮质类固醇(诸如糖皮质激素和盐皮质激素)和雄激素。皮质类固醇的非限制性实例包括皮质醇、可的松、氯倍他索、氢化可的松、氟氢可的松、氟氢缩松、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟可龙、氟米龙、泼尼松、泼尼松龙、6-α-甲泼尼龙、曲安西龙、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、地塞米松、安西奈德、可的伐唑、地奈德、去羟米松、二氟可龙、二氟泼尼酯、fluclorolone和二氯松、fluperinidene、氟替卡松、哈西奈德、甲泼尼松、甲泼尼龙、帕拉米松、泼那唑啉、泼尼立定、替可的松、曲安西龙及它们的酸性衍生物，例如醋酸、丙酸、二丙酸、戊酸、磷酸、异烟酸、间磺基苯甲酸、tebutate和半琥珀酸衍生物)。

符号M、L和S表示结构I表示的化合物的三个不同亚单位。符号M表示大环内酯亚单位，符号S表示通过连接分子L与亚单位M的连接位置连接的甾类亚单位。如上所述，当M为阿奇霉素内酯环时，则连接键优选通过糖苷配基部分的C/3位或位于通式II化合物的C/6、C/11位或N/9a位上或通过S²基团的C/4″位或通过S¹基团的3′或2′上的胺。

本文提供的通式中的黑体键表示纸平面上的键(β-位)。绘制的虚线键(dash-drawn bonds)表示位于纸平面下的键(α-位)。实线和虚线(broken line)表示可以为单键或双键的键。单虚线(broken line)表示纸平面上或下的键。

除非本文另有说明，下列术语具有下文对其所解释的含义。

″卤素″指的是卤原子，其可以优选为：氟、氯或溴(最优选氟或氯)。

″烷基″指的是1-10个碳原子、更优选1-6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。优选的直链或支链烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基和叔丁基。最优选甲基。烷基可以被至多5个取代基取代，包括卤素(优选氟或氯)、羟基、烷氧基(优选甲氧基或乙氧基)、酰基、酰氨基、氰基、氨基、N-(C₁-C₄)烷氨基(优选N-甲氨基或N-乙氨基)、N，N-二(C₁-C₄-烷基)氨基(优选二甲氨基或二乙氨基)、芳基(优选苯基)或杂芳基、硫代羰基氨基、酰氧基、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基酰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、杂芳基、芳氧基、芳氧基芳基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基取代的烷基、羧基-环烷基、羧基取代的环烷基、羧基芳基、羧基取代的芳基、羧基杂芳基、羧基取代的杂芳基、羧基杂环基、羧基取代的杂环基、环烷基、环烷氧基、杂芳氧基、杂环基氧基和氧基羰基氨基。这类取代的烷基属于本发明″烷基″的定义范围。本发明烷基的定义可以扩展至其它带有烷基部分的基团，诸如烷氧基。

″链烯基″指的是2-10且优选2-6个碳原子的含有至少一个碳-碳双键的直链或支链一价烃基。链烯基可以被与烷基相同的基团取代且这类任选取代的链烯基包括在术语″链烯基″中。优选乙烯基、丙烯基、丁烯基和环己烯基。

″炔基″指的是带有2-10且优选2-6个碳原子的直链或支链且含有至少一个且优选不超过三个碳-碳三键的直链或支链一价烃基。炔基可以被与烷基相同的基团取代且这些取代的基团属于该炔基的定义中。优选乙炔基、丙炔基和丁炔基。

″环烷基″指的是带有3-8个碳原子的含有任选与芳基或杂芳基稠合的单环的环状基团。环烷基可以被如下对″芳基″所述的取代基取代且取代的环烷基属于该″环烷基″的定义范围。优选的环烷基为环戊基和环己基。

″芳基″指的是带有6-14个碳原子的含有单环、诸如苯基或多稠合环、诸如萘基的不饱和芳族碳环基。芳基可以任选进一步与脂族基团或芳基稠合或可以被一个或多个取代基取代，诸如卤素(氟、氯和/或溴)、羟基、C₁-C₇烷基、C₁-C₇烷氧基或芳氧基、C₁-C₇烷硫基或芳硫基、烷基磺酰基、氰基或伯氨基或非伯氨基。

″杂芳基″指的是含有2-10个碳原子和1-4个杂原子、诸如O、S或N的单环或二环芳烃环。杂芳环可以任选与另一个杂芳基、芳基或脂族环状基团稠合。该类的实例为呋喃、噻吩、咪唑、吲哚、吡啶、噁唑、噻唑、吡咯、吡唑、四唑、嘧啶、吡嗪和三嗪，优选呋喃、吡咯、吡啶和吲哚。该术语包括被如对上述芳基所述相同的取代基取代的基团。

″杂环基″指的是含有单环或多环以及1-10个碳原子和1-4个选自氮、硫或氧的杂原子的饱和或不饱和基团，其中在稠合环系中，另一个环或其它环可以为芳基或杂芳基。杂环基可以被如对烷基所述的取代基取代且由此取代的杂环基属于本定义的范围。

当R^c表示价键时，甾类亚单位S通过R^c和链L与大环内酯亚单位M连接。符号K有时根据上下文的需要用以指与M或S连接的L基团的部分。

在制备结构I表示的具有特定药理活性的化合物中，制备某些新化合物作为制备具有药理活性的化合物的中间体。本发明还涉及这类中间体。

本发明还包括本发明化合物的药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上合适的盐包括与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸或硫酸)或有机酸(例如酒石酸、乙酸、甲磺酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、琥珀酸、甲磺酸、草酸和对甲苯磺酸)形成的盐。

本发明的另一个方面为结构I表示的化合物或其盐形成的溶剂化物(优选水合物)。

本发明还包括本发明化合物的药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上合适的盐包括与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸或硫酸)或有机酸(例如酒石酸、乙酸、甲磺酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、琥珀酸、甲磺酸、草酸和对甲苯磺酸)形成的盐。

本发明还包括通式I化合物的前体药物，即在对哺乳动物受试者给药时在体内释放通式(I)的母体药物的化合物。通过修饰存在于通式I化合物上的官能基制备通式I化合物的前体药物，按照这类方式使所述的修饰物可以在体内被裂解以释放母体化合物。前体药物包括通式I的化合物，其中通式I化合物的羟基、氨基或羧基与任意可以在体内被裂解而分别重新生成游离羟基、氨基或羧基的基团结合。前体药物的实例包括但不限于通式I化合物的酯类(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)。

通式I的化合物带有一个或多个手性中心且随各取代基性质的不同，它们还可以具有几何异构体。在原子空间排列上不同的异构体称作″立体异构体″。彼此不为镜像的立体异构体称作″非对映体″且那些彼此为不能重叠的镜像的称作″对映体″。当化合物带有一个手性中心时，出现一对对映体是可能的。对映体的特征可以在于其不对称中心的绝对构型且由Cahn和Prelog的R-和S-顺序法则描述或通过分子绕偏振光面旋转的方式描述并命名为右旋或左旋(即分别称作(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单个对映体或作为对映体混合物存在。含有等比例的对映体的混合物称作″外消旋混合物″。本发明包括通式I化合物的所有各异构体。在本说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名用以包括各对映体及其混合物，否则就是其外消旋物。用于测定立体异构体的立体化学及其拆分的方法是本领域众所周知的。

本发明还包括遇到的syn-anti型立体异构体及其混合物，此时存在肟或类似基团。将与肟的末端双键原子连接的最高Cahn IngoldPrelog优先顺序法则的基团与肟的羟基比较。将该立体异构体命名为Z(zusammen＝共同)或Syn，条件是肟羟基位于通过C＝N双键的参考面的同侧上作为最优先基团；将另一种立体异构体命名为E(entgegen＝相反)或Anti。

″药学上可接受的赋形剂″指的是用于制备一般安全、无毒性且既无生物上又无其它不需要的作用的药物组合物的赋形剂且包括对兽药应用和人药应用而言可接受的赋形剂。本申请中所用的″药学上可接受的赋形剂″包括一种和一种以上这类赋形剂。

″治疗(Treating)″或″治疗(treatment)″状态、失调或病症包括：

(1)预防或延缓在哺乳动物中发生的状态、失调或病症的临床症状的表现，所述的哺乳动物可以患有或倾向于所述的状态、失调或病症，但尚未发生或出现所述状态、失调或病症的临床或亚临床症状；

(2)抑制状态、失调或病症，即阻止或减缓疾病或其至少一种临床或亚临床症状的发生；或

(3)减轻疾病，即使状态、失调或病症或其至少一种临床或亚临床症状退化。

对治疗的受试者的有益性具有统计学意义或至少对患者或临床医师而言是可感受到的。

″治疗有效量″指的是当对哺乳动物给药治疗状态、失调或病症时足以进行这类治疗的用量。″治疗有效量″随化合物、疾病及其严重程度和所治疗哺乳动物的身体情况和反应性的不同而改变。

急性炎症的四种传统症状为患病区域发红、升温、肿胀和疼痛且患病器官功能丧失。

与具体病症相关的炎症症状和征候包括：

·类风湿性关节炎-涉及的关节疼痛、肿胀、温热和触痛；全身性强直和晨僵；

·胰岛素依赖性糖尿病-胰岛炎；该病可以导致各种与炎性成分相关的并发症，包括视网膜病、神经病、肾病；冠状动脉疾病、外周血管疾病和脑血管疾病；

·自身免疫性甲状腺炎-虚弱、便秘、气短、面部、手和足浮肿外周性水肿、心律过缓；

·多发性硬化-痉挛状态、视力模糊、眩晕、肢体虚弱、感觉异常；

·眼色素层视网膜炎-夜视力下降、周边视力降低；

·红斑狼疮-关节痛、疹、光敏感性、发热、肌痛、手和足浮肿(puffiness)、尿液分析异常(血尿、管型尿(cylinduria)、蛋白尿)、肾小球肾炎、认知功能障碍、血管血栓形成、心包炎；

·硬皮病-雷诺氏病；手、臂、腿和面部肿胀；皮肤增厚；手指和膝疼痛、肿胀强直、胃肠功能障碍、限制性肺病；心包炎；肾衰竭；

·具有炎性成分的其它关节炎性疾病，诸如类风湿性脊椎炎、骨关节炎、脓毒性关节炎和多关节炎-发热、疼痛、肿胀、触痛；

·其它炎性脑病，诸如脑膜炎、阿尔茨海默病、AIDS痴呆性脑炎-畏光、认知功能障碍、记忆损失；

·其它炎性的眼部炎症，诸如视网膜炎-视力下降；

·炎性皮肤病，诸如湿疹、其它皮炎(例如特应性皮炎、接触性皮炎)、牛皮癣、UV照射诱发的灼伤(日光射线和类似的UV源)-红斑、疼痛、脱屑、肿胀、触痛；

·炎症性肠病，诸如克罗恩病、溃疡性结肠炎-疼痛、腹泻、便秘、直肠出血、发热、关节炎；

·哮喘-气短、喘鸣；

·其它过敏性疾病，诸如过敏性鼻炎-喷嚏、痒、鼻漏；

·与急性哮喘相关的疾病，诸如中风后的损伤-感觉缺失、运动丧失、认知丧失；

·因心肌缺血导致的心脏组织损伤-疼痛、气短；

·肺损伤，诸如发生成人呼吸窘迫综合征的肺损伤-气短、换气过度、氧合作用下降、肺浸润；

·伴有感染的炎症，诸如脓毒症、脓毒性休克、中毒性休克综合征-发热、呼吸衰竭、心动过速、低血压、白细胞增多；

·其它与特定器官或组织相关的炎性疾病，诸如肾炎(例如肾小球肾炎)-少尿、尿液分析异常；

附件炎-发热、疼痛、触痛、白细胞增多；痛风-涉及的关节疼痛、触痛、肿胀和红斑、血清和/或尿的尿酸升高；胆囊炎-腹痛和触痛、发热、恶心、白细胞增多；

慢性阻塞性肺病-气短、喘鸣；

充血性心力衰竭-气短、啰音、外周性水肿；

II型糖尿病-晚期器官并发症，包括心血管、眼、肾和周围血管疾病；

肺纤维化-换气过度、气短、氧合作用下降；

血管疾病，诸如动脉粥样硬化和再狭窄-疼痛、感觉丧失、脉搏下降、功能丧失；和导致移植物排斥的同种异体免疫-疼痛、触痛、发热。

亚临床症状包括、但不限于用于炎症的诊断标记，其表现可以先于临床表现。一类亚临床症状为免疫学症状，诸如促炎淋巴样细胞在器官或组织中的侵入或累积或识别对器官或组织特异性的病原体或抗原的活化促炎淋巴样细胞局部或周围的存在。可以通过本领域中公知的技术测定淋巴样细胞的活化。

″转运″至宿主内特定部位的活性组分的治疗有效量指的是在特定部位产生治疗上有效的活性组分的血药浓度。例如，可以通过对宿主局部或全身给予活性组分达到上述目的。

本发明还涉及可以由通式I的各化合物形成的可能的互变形式。

另外优选通式I的化合物，其中M表示通式II的基团，其中Z为＞N-R_N，其中R_N为氢或甲基；W为＞CH₂；B为甲基；E为氢；R²为羟基；A为甲基；S¹中C/3′位上的R⁸选自氢、氨基、N-甲氨基、N，N-二甲氨基、N-甲基-N-(C₂-C₄)-烷氨基、N-甲基-N-甲基羰基氨基、N-甲基-N-苄氨基或N-甲基-N-环己基-氨基；U＝H，Y＝CH₃，R¹为O-S²基团，其中S²为克拉定糖基，其中3″位为被取代的甲基甲氧基；R⁶为乙基，R⁵为甲基；R¹¹和R¹²为氢且R¹³为甲基；R⁴为OH或与R³形成环碳酸酯桥，R³为OH或与R⁴形成环碳酸酯桥，且去氧糖胺(desozamine)基的3′位为H或如上所述的-N(CH₃)R^y。连接键通过Z的N或通过R³的O。在后一种情况中，Z为NH。

另外还优选通式I的化合物，其中M表示通式II的基团，其中：Z为＞NH或＞NCH₃或＞NC(O)NHR^x，其中R^x为异丙基；W为＞C＝O或＞CH₂(条件是当Z为＞NCH₃时，W不能为＞C＝O)；R²为羟基或甲氧基；A为甲基；E为氢；B为甲基；R³为羟基；R⁵为甲基；R⁴为羟基或甲氧基；R⁶为乙基；R¹为O-S²基团，其中S²为克拉定糖基，其中R¹³为甲基；R¹¹为氢或O-R¹¹为与R¹²和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团，R¹²为氢或与O-R¹¹和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；S¹的C/3′位为氢、氨基或N-(C₁-C₆)-烷氨基或N，N-(C₁-C₆)-二烷氨基。连接键通过C/3′位上R⁸的氨基或通过C/6位上R²的氧或通过均在C/4″位上的R¹²的碳或R¹¹的氧。

制备方法A

本发明在另一个方面中涉及通式I中具体化合物的制备方法，包括：

a)通过使通式Xa的甾类亚单位的羧酸与通式VIa的大环内酯亚单位的游离氨基反应得到通式I的化合物，其中L具有的X¹为-CH₂-、X²为-NH-且Q不存在(通式VA)，

其中通式Xa的结构式如下：

其中-C(O)R^c为活化的羧酸且R^a、R^b、R^d和R^e如通式X中所定义，

其中通式VIa的结构式如下：

其中R³、R⁵和R⁸如上述通式II中所定义；

b)通过使结构X的甾类亚单位的羧酸与结构VIb的大环内酯亚单位的游离氨基反应得到通式I的化合物，其中L上的X¹为-C(O)NH-且X²为-NH-(也为通式VA)，

其中结构VIb的结构式如下：

其中R_N、R⁵和R⁸如通式II中所定义且m如通式VA中所定义。

c)通过除去或改变含有通式VIc的大环内酯亚单位的通式I化合物去氧糖胺糖(desozamino)糖上的-N(CH₃)₂基得到通式I的化合物，其中R⁸为H、-NH-CH₃或-N(CH₃)R^y：

其中R_N、R³和R⁸如通式II中所定义。

制备方法：

a)通过使结构X的甾类亚单位的羧酸与结构VIb的大环内酯亚单位的氨基按照国际申请PCT/HR02/00001中所述的方法反应制备通式I的化合物，其中使用对羧酸具有活化作用的酸性衍生物、诸如混合酸酐、尤其是碳化二亚胺类或苯并三唑(例如羟基苯并三唑)的无水卤化物进行酰胺键合。该反应在室温下和惰性气体、例如氩气层中以及有碱(优选有机碱)、例如三乙胺存在的情况下进行几小时至几天。(D.Romo等《美国化学协会杂志》(J.Am.Chem.Soc.)，1998，120，12237)。

结构X的甾类亚单位为商购产品或通过已知方法得到(Suzuki，T.等Chem.Soc.，Perkin Trans.1 1998，3831-3836.)、(McLean，H.M.等，《药物科学杂志》(J.Pharm.Sci.)1994，83，476-480.)、(Little，R.J.等，《药物研究》(Pharm.Res.)1999，16，961-967.)、(Kertesz D.J.等，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1986，51，2315-2328.)、(Bodor，N.S.，美国专利US 4,710,495 1987)、(Phillipps，G.等，《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1994，37，3717-3729)，将所有文献的全部内容引入作为参考。

可以按照1984年10月2日的Bright的美国专利US 4,474,768和Bright，G.M.等，1998，《抗菌素杂志》(J.Antibiot.)41：1029-1047中所述，通过相应大环内酯亚单位上的相应氰基链烯基(优选丙烯腈类)的作用且然后通过对形成的腈进行氢化得到结构VIa的原料大环内酯亚单位。

b)通过使结构X表示的甾类亚单位的羧酸与结构VIb的大环内酯亚单位的氨基反应制备通式I的化合物，其中制备胺键且该反应如上述a)中所述方法中的方式和条件进行。

可以通过大环内酯亚单位VII上相应的二氨基烷(优选二氨基丁烷)的作用得到结构VIb的原料大环内酯亚单位：

如文献中报导的，可以通过大环内酯亚单位上乙基碳酸酯的作用得到通式VII的大环内酯亚单位(EP 0984019 A1，将该文献引入本文作为参考)。

c)通过修饰或消去含有由通式VIc表示的大环内酯亚单位的化合物去氧糖胺(desozamine)糖的-N(CH₃)₂基团R⁸制备通式I中的化合物。可以通过对两个甲基之一脱甲基化、例如通过UV照射进行修饰。通过烷基化或酰化得到的通式I的化合物，其中R⁸为NH(CH₃)基团，得到一类新的通式I的化合物，其中R⁸为-N(CH₃)₂。能够通过氧化-N(CH₃)₂并通过形成相应的N-氧化物消去-N(CH₃)₂，在加热时产生通式I的化合物，其中R⁸为氢。

一般得到通式I的化合物，使得：首先修饰大环内酯亚单位的-N(CH₃)₂基团且然后使修饰的大环内酯亚单位通过链与甾类亚单位连接；或首先使含有-N(CH₃)₂基团的甾类和大环内酯亚单位通过经过大环内酯分子另一个位置的连接基连接，然后在存在的-N(CH₃)₂基团上进行化学改变。例如，连接基L可以结合在通式VIc的大环内酯亚单位的9a或11位上。

为了防止不需要的副反应，通常必须保护某些基团，诸如，例如羟基或氨基。为了这一目的，可以使用大量保护基[Green TW，Wuts PGH，《有机合成中的保护基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，John Wiley和Sons，1999]且其选择、应用和消去提供了化学合成中的常用方法，正如本领域技术人员充分了解的。

本发明的另一个方面涉及制备通式I表示的化合物的方法，包括：

d)为了得到通式I的化合物，其中X¹为-CH₂-且Q为-NH-(L为VB)，使(i)结构IVa的甾类亚单位的羧酸与(ii)结构Va的大环内酯亚单位的游离氨基反应，

其中结构IVa的结构式如下：

其中-C(O)R^C为活化的羧酸，

其中结构Va的结构式如下

其中W为＞C＝O或-CH₂-；R_N、R²、R¹⁰、R¹¹和R⁸如通式II中所定义且n如通式VA中所定义。

e)为了得到通式I的化合物，其中Q和X¹为-CH₂-(L为VB)，使结构IVa的甾类亚单位的羧酸与结构Vb的大环内酯亚单位的游离氨基反应，其中-C(O)R^C具有活化的羧酸的含义，

其中结构Vb的结构式如下：

其中W为＞C＝O或-CH₂-；R_N、R²、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R^y如通式II中所定义且n如通式VA中所定义。

f)通过使结构IVc的甾类亚单位的游离氨基

其中R^a，R^b，R^d和R^e如通式X所定义与结构Vc或Vd的大环内酯亚单位的-C＝C-键反应得到通式I的化合物，其中和X¹为-C(O)-且Q为-NH-(L为VB)，

其中结构Vc或Vd的结构式如下：

其中W为＞C＝O或-CH₂-；R_N、R²、R¹⁰、R¹¹、R¹²和R^y如通式II中所定义且n如通式VA中所定义。

制备方法：

d)通过使结构IVa的甾类亚单位的羧酸与结构Va的大环内酯亚单位的氨基反应制备通式I的化合物，其中制备酰胺键合，该步骤使用对羧酸具有活化作用的常用酸性衍生物、诸如卤化物、混合的酸酐类、尤其是碳化二亚胺类或苯并三唑进行。该反应在室温下和惰性气体、例如氮气或氩气中以及有碱(优选有机碱)、例如三乙胺存在的情况下进行几小时-几天。(Romo D.等《美国化学协会杂志》(J.Am.Chem.Soc.)，1998，120，12237)。结构IVa的甾类亚单位是商购产品或通过所述方法得到(Suzuki T等，Chem.Soc.，Perkin Trans.11998，3831-3836；McLean HM等，《药物科学杂志》(J.Pharm.Sci.)1994，83：476-480；Little RJ等，《药物研究》(Pharm.Res.)1999，16：961-967；Kertesz DJ等，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1986，51：2315-2328和专利申请US 471049)。

可以通过结构VI的大环内酯亚单位上相应的亚烷基-二胺类的作用得到结构Va的原料大环内酯亚单位：

其中R¹¹和R¹²与来自克拉定糖基环的相邻C原子一起形成3-元氧丙环(oxyrane)。通过专利申请WO 98/56801中制备类似化合物所述的步骤制备这类化合物。因此，例如，通过氧化结构VI的大环内酯亚单位的游离羟基OR¹¹，其中R¹¹为H，得到相应的酮，其中R¹¹和R¹²与C/4″碳原子形成＞C＝O基团，通过用金属氢化物(优选NaH)在三甲基氧化锍-碘化物中还原得到上述氧丙环(oxyrane)。

e)通过使结构IVa的甾类亚单位的羧酸与结构Vb的大环内酯亚单位的氨基反应制备通式I中的化合物，其中制备酰胺键合且该反应按照如上述方法d)中所述方式和条件进行。通过R^y为H的结构VI的大环内酯亚单位上的相应氰基烷基卤或氰基链烯基(优选丙烯腈类)的作用且通过对R^y为CH₃的结构VI的大环内酯亚单位在UV照射下脱甲基化得到结构VIa的原料大环内酯亚单位(Bright M等《抗生素杂志》(J.Antibiot.)1988，41：1029)。

f)通过使通式IVb的甾类亚单位的氨基与结构Vc或Vd的大环内酯亚单位的-C＝C-键反应制备通式I中的化合物，其中制备氨基键。结构IVb的甾类亚单位是已知化合物或可以通过亚烷基-二胺的作用由甾类亚单位IVa得到，其中R^c为OH。可以通过通式VI的大环内酯亚单位的游离OH上相应的卤代烷酰氯(优选3-氯丙酰氯)的作用得到结构Vc和Vd的原料大环内酯亚单位。

g)通过使结构IVd的甾类亚单位的-C＝C-键与上述结构Va、VIa、VIb或Vb的大环内酯亚单位的游离氨基反应得到通式I的化合物，其中X¹为-C(O)-且Q为-NH-(L为VB)：

其中R^a、R^b、R^c和R^e如通式X中所定义。

制备方法：

g)通过使通式IVd的甾类亚单位与结构Va、VIa、VIb或Vb的大环内酯亚单位的氨基反应制备通式I的化合物，其中制备氨基键。可以通过通式IVa的甾类亚单位上相应的卤代烷酰氯(优选3-氯丙酰氯)的作用得到结构IVd的原料甾类亚单位，其中R^d为OH(Phillipps，G.等《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1994，37，3717-3729)。

一般可以按照下列方式获得通式I的化合物：首先使连接基链L的一端首先与大环内酯亚单位M连接且然后使链的另一端与甾类亚单位连接；或使链L的一端首先与甾类亚单位S连接且然后使链的另一端与大环内酯亚单位M连接；或最后，使链的一部分与大环内酯亚单位M连接，而使链的另一部分与甾类亚单位S连接，然后使链部分的端以化学方式连接成链L。

制备本发明化合物的更一般的方案是本发明领域的技术人员根据上述描述显而易见的。可以通过下列方法制备通式I中的化合物。

a)可以通过使(i)通式V表示的甾类抗炎亚单位与(ii)通式VId表示的大环内酯亚单位的游离氨基反应生成通式I的化合物，其中X²为-NH-，

其中通式V的结构式如下：

其中L₁表示离去基团(诸如羟基)，

其中通式VId的结构式如下：

一般使用具有活化甾类抗炎亚单位的羧酸基能力的酸性衍生物、诸如卤化物、混合的酸酐类且尤其是碳化二亚胺类(诸如-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺(EDC))和苯并三唑类进行该反应。该反应在室温下和惰性气体、例如氮气或氩气中以及有碱、诸如有机碱(优选三乙胺)存在的情况下进行几小时至几天才能完成。

例如，当L为-K-NH-(其中K为与大环内酯连接的L分子的部分)时，可以通过将大环内酯环上的NH基团衍生成-N-K-(NH₂)-基团并使衍生的大环内酯与通式V表示的甾类抗炎亚单位反应生成通式I的化合物：

当大环内酯上的NH基团连接在大环内酯的糖环S¹(即去氧糖胺(desozamine)糖)的3′位上时：

或连接在糖环S²的4位上时：

也可以实施该方法。

b)可以通过使(i)通式V的化合物与(ii)通式VIe表示的大环内酯亚单位的游离羟基反应生成通式I的化合物，其中X²为-OC(O)-，

一般使用具有活化羧酸基能力的酸性衍生物、诸如卤化物、混合的酸酐类且尤其是碳化二亚胺类和苯并三唑类进行该反应。该反应一般在室温下和惰性气体、例如氮气或氩气中进行。该反应可能需要几小时至几天才能完成。

结构VIb的原料大环内酯亚单位为已知化合物或可以按照对类似化合物所述的步骤获得，诸如Costa AM等在《四面体通讯》(Tetrahedron Letters)2000，41：3371-3375中所述的那些步骤，将该文献的全部内容引入本文作为参考。另外参见Bright的美国专利US4,474,768和Bright，G.M.等《抗菌素杂志》(J.Antibiot.)，1988，41：1029-1047，将这两篇文献的全部内容引入作为参考。

例如，当L为-K-O-时，可以通过(1)将大环内酯环上的NH基团衍生成-N-K-OH基团并(2)使衍生的大环内酯与甾类S的游离羧酸基反应生成通式I的化合物：

连接基-K-OH可以如下与大环内酯亚单位的仲氮原子连接。使大环内酯亚单位与链烯酰基衍生物反应，诸如CH₂＝CH(CH₂)_m、C(O)O-烷基(例如甲基丙烯酸酯)。然后诸如使用金属氢化物(例如LiAlH₄)在无水有机溶剂中还原酯基(即-C(O)O-烷基)而得到带有连接基-K-OH的大环内酯亚单位(即M-K-OH)。该还原反应一般在低温且优选在0℃或0℃以下进行。

当NH基团连接在大环内酯的糖环的3′位上时(诸如大环内酯3位上的糖)，也可以实施该方法。

c)可以通过使如下通式表示的大环内酯亚单位参与反应制备通式I的化合物，其中X¹为-OC(O)-，Q为-NH-且X²为-NH-：

例如，当OH连接在如下通式表示的大环内酯亚单位的C/6或C/4″位上时，可以在溶剂、诸如乙腈中进行该反应：

从而得到：

可以通过使合适的胺(含有连接基-K-NH₂)与通式V的甾类的羧酸基或酯基反应生成衍生的甾类(即S-C(O)-NH-K-NH₂)。

d)可以通过如下所示使大环内酯亚单位与含有游离氨基的衍生的甾类亚单位反应制备通式I表示的化合物，其中X²为-NH-。

e)可以通过如下所示使大环内酯亚单位与含有游离羧酸基的甾类亚单位反应制备通式I表示的化合物，其中X²为-NH-。

可以通过下列步骤生成反应物大环内酯亚单位：氧化克拉定糖上4″位上含有羟基取代基的相应大环内酯而得到4″上的＝O取代基，将4″位上的 转化成环氧基 并用合适的反应物裂解环氧基而得到大环内酯亚单位(M-O-C(O)-NH-K-NH₂)。

f)可以通过如下所示使含有离去基团L²(诸如Br)的大环内酯亚单位与下式所示的甾类反应制备通式I的化合物。

可以通过连接大环内酯环3-位上连接的糖基且然后使大环内酯与通式L²-L-L¹的试剂反应制备原料大环内酯亚单位，其中L²位离去基团。

g)可以通过如下所示使含有离去基团L²(诸如Br)的大环内酯亚单位与下式所示的甾类反应制备通式I的化合物。

可以通过使用一般公知的步骤制备通式I表示的化合物的盐，诸如：例如使结构I的化合物与相应的碱或酸在适宜溶剂或溶剂混合物、例如醚类(乙醚)或醇类(乙醇、丙醇或异丙醇)中反应。

传统上基于糖苷配基的取代模式将16-元环大环内酯类分成亚族。该族的主要原型以白霉素、螺旋霉素和泰洛星为代表。

泰洛星是有代表性的16-元大环内酯类，其含有带有两个双键(tylonolide)和第三个糖取代基(β-D-mycinose)以及与5-羟基连接的二糖的高度取代的糖苷配基。从二糖中水解mycarose得到desmycarosyl-泰洛星(脱碳糖泰乐菌素)。

脱碳糖泰乐菌素上可能的修饰位置：

例如，可以通过对C-20位醛基进行还原氨基化制备16-元环的大环内酯杂化物。

该反应还可以用于17-元氮杂内酯类，如8a-氮杂-高脱碳糖泰乐菌素和及其衍生物(诸如二-和四氢衍生物)。

                   

表示单键或双键R¹³为氢或羟基

另一方面，16-元环大环内酯衍生可以通过转化双键(例如通过环氧化)和使用合适的反应物(诸如二胺类)裂解环氧基而得到反应剂大环内酯亚单位(M-O-C(O)-NH-K-NH₂)来进行。

还可以用羟基胺盐酸盐修饰9位上的酮而得到肟且然后还原成胺。

如果甾类为17位上的-S(O)_n-R_C，那么可以使用相同的连接方案。

可以使甾类亚单位通过含有这类基团的甾类上21位羟基与大环内酯连接。在降温(-5℃-30℃)下以21-羟基甾类环酮缩醇位原料与合适的羧酸卤化物或酸酐优选在诸如有叔胺碱或吡啶存在的二氯甲烷这类溶剂中反应。使如此产生的中间体与H₂N-L-M反应而生成通式I的化合物：

还可以使甾类亚单位通过该甾类亚单位上的17位与大环内酯连接。制备这类化合物的一种方法如下：

例如，当L为-K-NH-(其中K为与大环内酯连接的L分子的部分)时，可以通过将大环内酯环上的NH基团衍生成-N-K-(NH₂)-基团并使衍生的大环内酯与含有通式Sa表示的甾类抗炎亚单位的衍生的大环内酯反应生成通式I的化合物：

当大环内酯上的NH基团连接在大环内酯的糖环S¹(即去氧糖胺(desozamine)糖)的3′位上时：

或连接在糖环S²的4″位上时：

也可以实施该方法。

可以通过使大环内酯亚单位与含有-C＝C-键的甾类亚单位如下所示反应制备通式I表示的化合物，其中X²为-NH-。

可以在与NH₂-L-M反应前修饰原料甾类亚单位17位上的羧酸基。

可以在与NH₂-L-M反应前保护原料甾类亚单位17位上的羧酸基并在与NH₂-L-M反应或酯化步骤后脱保护。

本发明的另一个方面涉及可以以不同方式给药的作为抗炎、抗过敏和免疫调节剂的通式I化合物的使用方法，这取决于炎症部位。此外，本发明涉及含有有效量本发明化合物与药学上可接受的赋形剂、诸如载体或稀释剂的药物组合物。

本发明药物组合物的制备包括混合、成粒、压片和溶解组分的步骤。化学载体可以是固体或液体形式。固体载体可以为乳糖、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、硬脂酸镁、脂肪酸，并不限于此。液体载体可以为：糖浆；油，诸如橄榄油、向日葵籽油或大豆油；水；或生理盐水，并不限于此。类似地，载体还可以含有使活性成分缓释的成分，诸如硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯。可以制备几种剂型的药物组合物。如果使用固体载体，那么这些剂型可以包括可以口服给药的片剂、胶囊形片剂、硬胶囊、粉剂或颗粒，并不限于此。固体载体的量可以改变，但主要在25mg-1g的范围。如果使用液体载体，那么制剂可以为糖浆剂、乳剂、软胶囊或无菌可注射液体或非水液体混悬剂形式。可以通过局部或全身给予本发明的化合物，例如口服、非肠道、皮下粘膜，例如口服、鼻内、直肠内和阴道内。″非肠道″指的是通过静脉内、肌内或皮下途经。本发明化合物的相应制剂可以用于预防和治疗(预防、延缓、抑制或减轻)因异常或不需要(过度、未调节或调节不良)的炎性免疫反应导致或与之相关的几种失调(疾病和其它病理性炎症情况)，所述的异常或不需要炎性免疫反应包括炎症细胞因子或其它炎症介体产生，包括但不限于TNF-α和IL-1β。这些疾病包括：自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎、胰岛素依赖性糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化、眼色素层视网膜炎、红斑狼疮、硬皮病；其它具有炎性成分的关节炎病，诸如类风湿性脊椎炎、骨关节炎、脓毒性关节炎和多关节炎；其它炎性脑病，诸如脑膜炎、阿尔茨海默病、AIDS痴呆性脑炎；其它炎性眼部炎症，诸如视网膜炎；炎性皮肤病，诸如湿疹、其它皮炎(例如特异性皮炎、接触性皮炎)、牛皮癣、UV照射诱发的灼伤(日光射线和类似的UV源)；炎症性肠病，诸如克罗恩病、溃疡性结肠炎；哮喘；其它过敏性疾病，诸如过敏性鼻炎；与急性哮喘相关的疾病，诸如中风后的大脑损伤；因心肌缺血导致的心脏组织损伤；肺损伤，诸如发生成人呼吸窘迫综合征的肺损伤；伴有感染的炎症，诸如脓毒症、脓毒性休克、中毒性休克综合征；其它与特定器官或组织相关的炎性疾病，诸如肾炎(例如肾小球肾炎)；附件炎；痛风；胆囊炎；慢性阻塞性肺病；充血性心力衰竭；II型糖尿病；肺纤维化；血管疾病，诸如动脉粥样硬化和再狭窄；和导致移植物排斥的同种异体免疫。当用于呼吸道内部时，还可以通过吸入给予所述化合物。本发明的另一个目的涉及获得通式I活性化合物的最佳生物利用度的各种化合物的药物剂型的制备方法。

为了经皮或粘膜外给药，可以将通式I的化合物制成软膏或霜剂、凝胶或洗剂形式。可以使用水或油基质并添加合适的乳化剂或胶凝剂配制软膏、霜剂和凝胶。本发明化合物的制剂对呼吸道吸入尤为重要，其中将通式I的化合物在压力下以气溶胶形式转运。优选在将通式I的化合物在例如乳糖、葡萄糖、高级脂肪酸、二辛基琥珀酸或最优选在羧甲基纤维素中匀化后使其微粉化以便获得5μm或5μm以下颗粒大小占大部分的颗粒。就吸入剂而言，可以将气溶胶与气体或液体抛射剂混合用于调配活性物质。可以使用吸入器、雾化器或雾化吸入器。这类装置是已知的。例如，参见Newman等《胸腔》(Thorax)，1985，40：61-676 Berenberg，M.《美国哮喘杂志》J.Asthma USA，1985，22：87-92。还可以使用Bird雾化吸入器。另外参见美国专利US 6,402,733、US6,273,086和US6,228,346。

优选将用于吸入的结构I的化合物配制成如上所述的含有微粉化颗粒的干粉形式。

还可以将所述化合物混入治疗局限在器官或组织的炎症、例如克罗恩病的制剂，其中通过口服或直肠给予该制剂。口服给药用制剂可以混有能够促进化合物在炎症部位的生物利用度的赋形剂。可以使用肠释放和延缓释放制剂达到这一目的。还可以将通式I的化合物用于治疗克罗恩病和肠炎病，条件是以灌肠剂的形式施用该化合物，对可以使用的合适的制剂而言，它们是本领域众所周知的。

本发明的另一个方面涉及通式I的化合物在治疗炎性疾病、失调和病症的药物中的应用，所述的炎性疾病、失调和病症的特征在于不需要的炎性免疫反应或与之相关，尤其是TNF-α和IL-1过度分泌诱导或与之相关的所有疾病和病症。

可以通过本领域中公知的方法测定本发明化合物的治疗有效量。由于可以将本发明的化合物比相应单独的甾类抗炎药更有效地转运至所需部位，所以可以给予比甾类抗炎药摩尔量更少量的化合物而仍然可以获得相同的治疗作用。此外，由于给予该化合物可以产生比使用相应甾类抗炎药更少的副作用，所以可以增加甾类的量。因此，下表仅用作指导。以摩尔为基准，化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂化物或其前体药物的治疗有效量阈值一般等于或小于非甾类抗炎药的治疗有效量。化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂化物或其前体药物的宽和优选有效量如下表中所示。

	化合物、其药学上可接受的盐、其溶剂化物或其前体药物的用量
				mg/kg体重/天的甾类(单独给药)	μmol/kg体重/天的杂化物或甾类
宽	约0.001-约1000	约0.004-约4000
			优选	约0.01-约100	约0.04-约400
更优选	约1-约100	约4-约400
			最优选	约3-约30	约12-约120

例如，如果泼尼松的优选用量范围为1-50mg/天，那么它相当于2.79μmol-139.5μmol/天。本发明杂化甾类-大环内酯轭合物的起始量也为2.79μmol-139.5μmol轭合物/天。可以根据本说明书、使用本领域技术人员的常用技术微调这一剂量。

可以通过用于评价炎症或抗炎作用的任意方法评价本发明化合物的功效。存在许多已知用于该目的的方法，包括但不限于使用超声造影并结合注射微气泡、测定炎症细胞因子(诸如TNF-α、IL-1、IFN-γ)、测定活化的免疫系统细胞(活化的T细胞、特异性识别发炎或移植组织的细胞毒性T细胞)以及观察(水肿减少、红斑减少、痒或烧灼感减轻、患病器官功能改善)以及下面提供的任意方法。

在体外和体内实验、诸如下列实验中测定本发明化合物的治疗作用。

在下面的体外和体内实验中测定本发明化合物的有益抗炎作用：

结合人糖皮质激素受体的试验

通过反向聚合酶链反应克隆用于人糖皮质激素受体α同种型的基因(EMBL Acc.No.M10901)。按照制造商(Qiagen)的说明从人外周血淋巴细胞中获得总RNA、用AMV逆转录酶(Roche)转录成cDNA并使用特异性引物扩增基因：

1)5′ATATGGATCCCTGATGGACTCCAAAGAATCATTAACTCC 3′；和

2)5′ATATCTCGAGGGCAGTCACTTTTGATGAAACAGAAG 3′。

将获得的反应产物克隆入Bluescript KS质粒(Stratagene)的XhoI/BamH I位点、通过双脱氧荧光法与M13和M13rev引物(Microsynth)进行测序，然后将其克隆入pcDNA3.1 hygro(+)质粒(Invitrogen Life Technologies)的XhoI/BamHI位点。将1×10⁵个COS-1细胞接种在12-孔平板(Falcon)内含有10％FBS(Biowhitaker)的DMEM培养基(Invitrogen Life Technologies)中，并在37℃下和含有5％CO₂的气体环境中培养至70％融合。除去培养基且每孔加入在500μl DMEM中的1μg的DNA、7μl的PLUS试剂和2μl的Lipofectamine(Life Technologies)。在37℃下和含有5％CO₂的气体环境中保温细胞并在5小时后加入相同体积的20％FBS/DMEM。24小时后，完全改变培养基。转染后48小时，加入不同浓度的测试化合物和在DMEM培养基中的24nM[³H]地塞米松(Pharmacia)。将细胞在37℃下和含有5％CO₂的气体环境中保温90分钟、用PBS缓冲液(Sigma)洗涤3次、冷却至4℃(pH＝7.4)且然后在Tris缓冲液(pH＝8.0)(Sigma)中用0.2％SDS(Sigma)裂解。在加入UltimaGold XR(Packard)闪烁液后，用Tricarb(Packard)β-闪烁计数器读取残余的放射性。

作为编程性细胞死亡诱导结果的小鼠T-细胞杂交瘤13增殖抑制的试验

在96-孔平板中，使用10％FBS制备一式三份的测试甾类在RPMI培养基(Instituted of Immunology，Zagreb)中的稀释液。向该化合物溶液中加入20000个细胞/孔并在37℃下和含有5％CO₂的气体环境中保温过夜，然后加入1μCi[³H]胸苷(Pharmacia)并将该混合物再保温3小时。通过施加真空用GF/C滤器(Packard)收集细胞。在每孔上加入30μl Microscynt 0闪烁液(Packard)并用β-闪烁计数器(Packard)测定引入的放射性。通过使用米非司酮(Sigma)拮抗增殖抑制作用证实糖皮质激素诱导编程性细胞死亡的特异性。

通过硫喷妥注射(Pliva Inc.)处死Balb/c小鼠。将脾谨慎切成薄片并在细胞滤过器上切碎。通过使用Histopaque 1083(Sigmadiagnostics，Cat No 1083-1)以400g离心分离单核细胞。用RPMI培养基(Institute of immunology，Zagreb，Croatia)洗涤细胞并在补充了10％FBS(Invitrogen)的RPMI培养基中调节至4×10⁶个细胞/ml。用10％FBS将化合物稀释至在RPMI中10^-5M-10^-10M的适宜浓度范围并将每份稀释液(100μl)放入96孔平板，一式三份。阳性对照和阴性对照含有100μl RPMI与10％FBS。

在每孔中加入50μl鼠脾细胞和50μl伴刀豆凝集素A(Sigma，cat No C5275)，在所有孔中使用10％FBS使在RPMI中为20μg/ml，除了在阴性对照中加入了50μl RPMI与10％FBS。

将平板放入培养箱(37℃，90％相对湿度，5％CO₂)中72小时并在-70℃下冷冻至测定白细胞介素为止。

通过使用夹心式ELISA、采用俘获和检测抗体(R&D)、按照制造商的建议测定白细胞介素。

小鼠肺嗜酸粒细胞增多模型

将体重为20-25g的雄性Balb/C小鼠随机分组并在第0天和第14天通过腹膜内注射卵清蛋白(OVA，Sigma)致敏。在第20天时，通过i.n.(鼻内)施用OVA(阳性对照或试验组)或PBS(阴性对照)对小鼠进行攻击测试。鼻内施用OVA后48小时，麻醉动物并用1mL的PBS冲洗肺。将细胞在Cytospin 3细胞离心机(Shandon)中分离。用Diff-Quick(Dade)给细胞染色并通过对至少100个细胞进行微分计数测定嗜酸粒细胞的百分比。

将氟替卡松和倍氯米松用作标准抗炎物质。

每天通过鼻内或腹膜内给予不同剂量的化合物，2天后进行激发性试验并直到该试验完成。将化合物作为在羧甲基纤维素或在乳糖溶液中的混悬液形式给药。

大鼠皮质酮抑制和胸腺体积减小的模型

将体重为200-250g的雄性Wistar大鼠随机分组。通过皮下途经施用测试化合物和标准糖皮质激素，每天一次，持续3天。在第3天时，对大鼠施加寒冷压力(4℃，1小时)、用硫喷妥(Thiopenetal)(Pliva Inc.)麻醉并用肝素取血。从每只动物体内摘除完整的胸腺并立即称重。将血浆储存在-70℃下至检测为止。用氯仿(5mL)从1mL血浆或从在PBS中的皮质酮标准稀释液中提取皮质酮，用0.1M NaOH洗涤干扰化合物并加入硫酸：H₂O∶C₂H₅OH＝8∶2∶1。60分钟后测定荧光，激发/发射波长为470/530。

如果化合物在上述试验中的至少两种中表现出具有统计学显著性(通过student氏t-检验，p＜0.05)，那么认为这些化合物具有活性。所用化合物的摩尔量低于发挥如文献中报导的轻度抗炎作用的大环内酯的阈值量(30μm以上)。

对RAW 264.7、Caco-2和RBL-2H3细胞系进行的吸收/释放试验

将细胞接种在6孔平板上并达到5×10⁵个细胞/板的完全融合。将放射性标记的化合物(各约50mCi/mmol)以10μM浓度加载在细胞上。将细胞保温2小时并用冷PBS洗涤。立即通过闪烁计数测定细胞浓度或将细胞与新制的不含化合物的培养基一起再保持1小时以用于测定化合物的释放。

合成方法和实施例

中间体的制备

方法A

a)将中间体P1(1.684g；2.435mmole)溶于50mL丙烯腈并将该溶液在100℃下回流9小时。然后在减压条件下蒸发并得到1.54g粗产物A1。

按照相同步骤并以大环内酯P2(表1)为原料得到腈A2。腈A1和A2的特征如表1中所示。

b)以大环内酯A1(表1)为原料通过用H₂与PtO₂氢化得到A3。

将大环内酯A1(1.54g；2mmole)溶于50mL无水乙醇并在反应器中用催化剂PtO₂(263mg)在40atm压力下水化24小时。过滤该反应混合物并在减压条件下蒸发溶剂。得到1.34g混合物，用硅胶柱纯化该混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1，得到508mg胺A3。

按照相同步骤，以腈A2为原料得到胺A4。

大环内酯类A3和A4的特征如表1中所示。

方法B

a)将化合物P3(1.95g；2.52mmole)溶于90mL甲醇。加入1.71g(12.61mmole)的NaOAc×3H₂O和0.68g(2.64mmole)的I₂。用500W卤素等将该反应混合物照射2小时。随后加入2-3滴0.1M Na₂S₂O₃。在减压条件下蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯且用水和饱和NaHCO₃溶液洗涤。用无水Na₂SO₄干燥有机层并在旋转蒸发器上蒸发。分离到3.2g的大环内酯B1。

b)将化合物B1 1.98g(2.52mmole)溶于90mL甲醇。随后向该溶液中加入3.67mL(21.09mmole)二异丙基乙胺和4.95mL乙基碘。将该反应混合物在50℃下搅拌过夜。然后在减压条件下蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHCO₃溶液和水洗涤。用无水Na₂SO₄干燥有机层并蒸发。用硅胶柱纯化该混合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1，分离到559mg化合物B2。

c)在5mL 1，4-二氨基丁烷中溶解650mg(0.82mmole)的化合物B2。然后向该溶液中加入95mg(0.82mmole)盐酸吡啶。将该反应混合物在室温下搅拌3天。用二氯甲烷提取产物并用水洗涤且随后用无水Na₂SO₄干燥有机层并在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化该混合物后，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1，得到300mg胺B3。

按照相同步骤，以大环内酯P3和二氨基丁烷为原料得到大环内酯B4。

化合物B1-B4的特征如表1中所示。

方法C

a)将在氩气环境中冷却至0℃的甾类S1(110mg；0.29mmole)在干燥CH₂Cl₂(5mL)中的混悬液加入到0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羟基苯并三唑、230mg(0.29mmole)胺A4和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐中。将该反应混合物在室温下和氩气流中搅拌24小时且然后蒸发至小体积并用硅胶柱纯化(洗脱剂：CHCl₃∶CH₃OH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1)。得到224mg化合物C1。

按照类似步骤，由大环内酯A4和甾类S2得到化合物C2、由化合物B4和甾类S2得到化合物C3且由大环内酯A4和甾类S4得到化合物C4。

化合物C1-C4的特征如表1中所示。

表1

化合物	M	R1	R2	R3	R4	S	分子式	MH+
									P1	M1	H	H	H	H	-	C35H65NO12	692.9
P2	M2	H	H	H	N(CH3)2	-	C37H70N2O12	735.4
									P3	M3	CH3	III		N(CH3)2	-	C39H70N2O13	775.5
A1	M1	(CH2)CHCN	H	H	H	-	C38H68N2O12	745.8
									A2	M2	(CH2)CHCN	H	H	N(CH3)2	-	C40H73O12N3	789.0
A3	M1	L1	H	H	H	-	C38H72N2O12	749.6
									A4	M2	L1	H	H	N(CH3)2	-	C40H77O12N3	793.0
B1	M3	CH3	III		NHCH3	-	C39H69N2O13	761.5
									B2	M3	CH3	III		N(CH3)C2H5	-	C40H72N2O13	789.5
B3	M3	CH3	L2	H	N(CH3)C2H5	--	C44H94N4O13	877.6
									B4	M3	CH3	L2	H	N(CH3)2	-	C43H92N4O13	863.8
C1	M2	L1	H	H	N(CH3)2	S1	C61H102FN3O16	1152.6
									C2	M2	L1	H	H	N(CH3)2	S2	C61H101F2N3O16	1170.6
C3	M3	CH3	L2	H	N(CH3)2	S2	C64H106F2N4O17	1241.7
									C4	M2	L1	H	H	N(CH3)2	S4	C61H102FN3O15	1136.7

L1＝-(CH₂)₃-NH₂

L2＝-C(O)NH-(CH₂)₄-NH₂

M1-M3相当于紧随在上表的通式的大环内酯亚单位，其中变量R1-R4如表1中指定。

表2

S	Ra	Rb	Rd	分子式	MH+	MH-
							S1	F	H	OH	C21H27FO5	378.9	-
S2	F	F	OH	C21H26O5F2	397.4	395.3
							S3	Cl	F	OH	C21H26O5ClF	-	411.3
S4	F	H	H	C21H27FO4	-	361.2

实施例1

化合物1：I；M＝M1，L＝L1，S＝S1；(R²＝R³＝R⁴＝H，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在惰性气体环境下和5mL干燥二氯甲烷中溶解76mg甾类S1(0.2mmole)。随后将0.25mL三乙胺、53mg羟基苯并三唑、150mg大环内酯A3(0.2mmole)和157mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐加入到该溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化得到的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到167mg化合物1；

MS(m/z)：1109.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3425，2974，2939，2875，1721，1665，1627，1525，1459，1379，1296，1262，1168，1125，1064，1035，1013，959，927，894，804.

实施例2

化合物2：I；M＝M1，L＝L1，S＝S2；(R²＝R³＝R⁴＝H，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

在惰性气体环境下和5mL干燥二氯甲烷中溶解80mg甾类S2(0.2mmole)。随后将0.25mL三乙胺、53mg羟基苯并三唑、150mg大环内酯A3(0.2mmole)和157mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐加入到该溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化得到的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到129mg化合物2；

MS(m/z)：1127.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3424，2972，2939，2876，1719，1670，1631，1560，1523，1458，1379，1317，1264，1167，1127，1064，1033，997，960，900，820，735，709.

实施例3

化合物3：I；M＝M1，L＝L1，S＝S3；(R²＝R³＝R⁴＝H，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝Cl，R^b＝F，R^d＝OH)

在惰性气体中将80mg甾类S3(0.19mmole)溶于5mL干燥二氯甲烷。向该溶液中加入0.25mL三乙胺，该体系变澄清。随后加入53.5mg羟基苯并三唑、145mg大环内酯A3(0.19mmole)和157mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化得到的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到200mg化合物3；MS(m/z)：1143.6[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2971，2937，2876，1719，1668，1630，1561，1523，1459，1379，1319，1262，1168，1125，1064，998，959，901，819，756.

实施例4

化合物4：I：M＝M3，L＝L2，S＝S1；(R¹＝CH₃，R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-C(O)NH-，m＝4，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH).

在15mL干燥二氯甲烷中溶解126mg(0.33mmole)化合物S1。

向该反应混合物中加入0.363mL三乙胺、90mg羟基苯并三唑、292mg(0.33mmole)化合物B 3和229mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。将该反应混合物在室温下和惰性气体环境中搅拌24小时。然后蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。分离到58mg化合物4；

MS(m/z)：1237.8[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3437，2973，2938，1723，1658，1545，1526，1462，1379，1271，1172，1111，1053，996，895，807.

实施例5

化合物5：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝NHCH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

方法1：

在3mL甲醇中溶解100mg化合物C1(0.086mmole)。向该溶液中加入59mg乙酸钠三水合物和23mg碘。用500W卤素灯将该反应混合物照射2小时。随后加入2滴1M硫代硫酸钠。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，使用的洗脱剂为CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到21mg化合物5；

MS(m/z)：1138,5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2972，2938，2875，1719，1664，1625，1560，1541，1523，1459，1379，1243，1169，1125，1072，1012，959，894，807，755.

方法2：

将化合物C1(500mg；0.43mmole)溶于30mL乙腈。随后将在0℃下和氩气流中的146mg N-碘琥珀酰亚胺(0.65mmole)加入到该溶液中。将该反应混合物加热至室温并搅拌5小时。随后用100mL二氯甲烷稀释该反应混合物并用100mL 1∶1 5％NaHSO₃∶Na₂CO₃和饱和NaCl溶液提取。用无水硫酸钠干燥有机层。用旋转蒸发器蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到155mg化合物5；MS(m/z)：1139.3[MH]⁺

实施例6

化合物6：I；M＝M2，L＝LI，S＝S2；(R²＝R³=H，R⁴＝NHCH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物C2(250mg；0.21mmole)溶于10mL甲醇。向该溶液中加入145mg乙酸钠三水合物(1mmole)和57.4mg碘(0.22mmole)。用500W卤素灯将该反应混合物照射2小时。加入几滴1M硫代硫酸钠以破坏剩余的碘。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到83mg化合物6；

                                                  MS(m/z)：

1156.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3432，2972，2938，2876，1774，1719，1670，1655，1578，1560，1523，1459，1378，1317，1263，1168，1127，1070，1034，998，959，899，820，755，710，669.

实施例7

化合物7：I；M＝M3，L＝L2，S＝S2；(R¹＝CH₃，R³＝H，R⁴＝NHCH₃，X¹＝-C(O)NH-，m＝4，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物C3(74mg；0.06mmole)溶于10mL甲醇。加入38mg(0.28mmole)NaOAC×3H₂O和15mg(0.06mmole)I₂。用500W卤素灯将该反应混合物照射2小时。然后加入2-3滴0.1MNa₂S₂O₃。随后在减压条件下蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯且用水和饱和NaHCO₃溶液洗涤。用无水Na₂SO₄干燥有机层并蒸发。用硅胶柱纯化产物，使用溶剂系统为CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。分离到60mg化合物7；

MS(m/z)：1226.5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3424，2972，2939，2876，1719，1670，1631，1560，1523，1459，1379，1314，1259，1167，1127，1068，1002，947，899，821，710.

实施例8

化合物8：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物5(100mg；0.09mmole)溶于3mL甲醇。向该溶液中加入127μl N，N-二异丙基乙胺和45μl乙基碘。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时。随后用30mL乙酸乙酯稀释该混合物并用30mL饱和碳酸氢钠水溶液和30mL水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层。通过减压蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到45mg化合物8；

MS(m/z)：1166.5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3411，3238，2969，2936，2873，1723，1664，1625，1565，1528，1462，1379，1327，1259，1169，1063，1012，959，929，894，820，749，663，617.

实施例9

化合物9：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物5(90mg；0.08mmole)溶于2mL甲醇。向该溶液中加入115μl N，N-二异丙基乙胺(0.67mmole)和45.7μl丙基溴(0.50mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时。随后用20mL乙酸乙酯稀释该混合物并用20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到20mg量的化合物9；MS(m/z)：1180.6[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3432，2964，2927，2881，1736，1666，1639，1627，1562，1545，1525，1460，1379，1262，1168，1099，1054，1017，893，802，701.

实施例10

化合物10：I；M＝M2，L＝L1，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在3mL甲醇中溶解100mg化合物5(0.09mmole)。向该溶液中加入128μl N，N-二异丙基乙胺(0.75mmole)和63.5μl丁基碘(0.56mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时。随后用25mL乙酸乙酯稀释该混合物并用25mL饱和碳酸氢钠水溶液和25mL水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到50mg的化合物10；MS(m/z)：1195.1[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2937，2874，1774，1735，1719，1664，1638，1578，1560，1523，1491，1459，1378，1263，1244，1169，1106，1055，1013，959，894，805，754.

实施例11

化合物11：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH(CH₃)₂，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物5(81mg；0.07mmole)溶于3mL甲醇。向该溶液中加入26μl丙酮、6.8mg氰基硼氢化钠和1滴乙酸。将该反应混合物在室温下搅拌2天。2天后，再加入26μl丙酮。将该反应混合物再搅拌3天。用20mL乙酸乙酯和20mL 50％碳酸氢钠水溶液提取反应混合物。用水和饱和NaCl水溶液洗涤有机层并用无水硫酸钠干燥。用旋转蒸发器蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到11mg化合物11；MS(m/z)：1180.9[MH]⁺

实施例12

化合物12：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝环己基，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物5(83mg；0.07mmole)溶于2mL甲醇。向该溶液中加入38μl环己酮(0.36mmole)、7mg氰基硼氢化钠(0.11mmole)和1滴乙酸。将该反应混合物在室温下搅拌2天。用40mL乙酸乙酯和40mL 50％碳酸氢钠水溶液提取反应混合物。用水和饱和NaCl溶液洗涤有机层并用无水硫酸钠干燥。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到11mg化合物12；MS(m/z)：1220.6[MH]⁺。

实施例13

化合物13：I；M＝M2，L＝LI，S＝S2；(R²＝R³＝H，R⁴＝苄基，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物6(85mg；0.07mmole)溶于2mL甲醇。向该溶液中加入107μl N，N-二异丙基乙胺(0.62mmole)和55.5μl苄基溴(0.47mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时并用20mL乙酸乙酯稀释且用20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL水洗涤。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到18mg化合物13；

MS(m/z)：1246.6[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3433，2963，2934，2875，1729，1668，1640，1564，1528，1496，1456，1378，1318，1261，1167，1126，1108，1053，1034，999，960，901，802，750，700.

实施例14

化合物14：I；M＝M2，L＝LI，S＝S1；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)COCH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在5mL甲醇中溶解87mg化合物5并冷却至2℃。在该温度下，向该反应混合物中滴加20μl乙酸酐。在该温度下搅拌3小时后，蒸发溶剂并得到白色油状产物，随后将其用硅胶柱纯化，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到69mg化合物14；

MS(m/z)：1180.5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3422，2970，2938，2875，1794，1774，1710，1686，1664，1625，1560，1523，1458，1364，1223，1168，1124，1061，1012，959，895，669.

实施例15

化合物15：I；M＝M3，L＝L2，S＝S2；(R¹＝CH₃，R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-C(O)NH-，m＝4，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物7(60mg；0.05mmole)溶于3mL甲醇。随后向该溶液中加入0.100mL(0.57mmole)二异丙基乙胺和0.233mL乙基-碘。将该反应混合物在50℃下搅拌过夜。然后在减压条件下蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯并用饱和NaHCO₃溶液和水洗涤。用无水Na₂SO₄干燥有机层并蒸发。用硅胶柱纯化该混合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。分离到15mg化合物15；MS(m/z)：1255.8[MH]⁺

实施例16

化合物16：I；M＝M2，L＝L1，S＝S4；(R²＝R³＝H，R⁴＝NHCH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物C4(590mg；0.519mmole)溶于50mL乙腈。在0℃温度下和氩气流中向该溶液中加入175mg N-碘琥珀酰亚胺(0.78mmole)。将该反应混合物加热至室温并搅拌5小时。随后用100mL二氯甲烷稀释该混合物并用100mL 1∶1 5％NaHSO₃∶Na₂CO₃和饱和NaCl溶液提取。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到100mg化合物16；

MS(m/z)：1123.2[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3448，2969，2939，2876，1719，1664，1638，1629，1560，1542，1509，1500，1459，1379，1294，1247，1168，1124，1065，1011，959，891，829，808，755，670.

实施例17

化合物17：I；M＝M2，L＝LI，S＝S4；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物16(70mg；0.06mmole)溶于2mL甲醇。向该溶液中加入90.8μL N，N-二异丙基乙胺(0.53mmole)和119.4μL 乙基-碘(0.39mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下和磁力混合器中搅拌20小时。随后用30mL乙酸乙酯稀释该混合物并用30mL饱和碳酸氢钠水溶液和30mL水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到32mg化合物17；

                                                 MS(m/z)：1150.8[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3434，2969，2939，2870，1719，1664，1630，1561，1535，1458，1383，1327，1293，1236，1168，1109，1058，1012，959，890，812，731，704.

实施例18

化合物18：I；M＝M2，L＝L1，S＝S4；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)COCH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物16(120mg)溶于5mL甲醇并冷却至2℃。在该温度下向该反应混合物中滴加28μl乙酸酐(0.2mmole)。在该温度下3小时后，蒸发溶剂并使残余物重结晶(氯仿/己烷)。得到148mg化合物18；

MS(m/z)：1180.5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2979，2938，2870，1735，1719，1664，1625，1560，1542，1509，1459，1381，1293，1248，1168，1122，1060，1012，891，830，647.

实施例19

化合物19：I；M＝M2，L＝L1，S＝S2；(R²＝R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物6(68mg；0.06mmole)溶于2mL甲醇。向该溶液中加入85μL N，N-二异丙基乙胺(0.53mmole)和112μL 乙基碘(0.4mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时。然后将该体系用20mL乙酸乙酯稀释该混合物并用20mL饱和碳酸氢钠水溶液和20mL水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到38mg化合物19；

                                                                             MS(m/z)：1185.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3425，2964，2870，1721，1671，1638，1562，1544，1525，1460，1379，1262，1168，1092，1055，1032，958，899，864，803，707.

实施例20

化合物20：I；M＝M2，L＝L1，S＝S1；(R²和R³＝III，R⁴＝N(CH₃)₂，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物C1(300mg；0.26mmole)与139mg碳酸亚乙酯(1.58mmole)和42.7mg碳酸钾(0.31mmole)混合。向该反应混合物中加入5mL乙酸乙酯。将该溶液在搅拌下加热至75℃2天。过滤碳酸钾粗品，用乙酸乙酯稀释滤液并用水提取。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物(使用溶剂系统：CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1)并得到72mg化合物20；

                                            MS(m/z)：

1178.3[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2973，2939，2874，1806，1736，1685，1665，1625，1560，1523，1458，1380，1240，1168，1110，1075，1052，1014，893，834，755，687.

实施例21

化合物21：I；M＝M2，L＝L1，S＝S1；(R²和R³＝III，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物8(65mg；0.06mmole)与30mg碳酸亚乙酯(0.34mmole)和9.2mg碳酸钾(0.06mmole)混合。向该反应混合物中加入3mL乙酸乙酯。将该溶液在搅拌下加热至75℃3天。过滤碳酸钾粗品，用乙酸乙酯稀释滤液并用水提取。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到10mg化合物21；MS(m/z)：1192.9[MH]⁺

实施例22

化合物22：I；M＝M3，L＝L2，S＝S4；(R¹＝CH₃，R³＝H，R⁴＝N(CH₃)CH₂CH₃，X¹＝-C(O)NH-，m＝4，X²＝-NH-，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

在10mL二氯甲烷中溶解0.07g(0.21mmole)化合物S4。随后将0.226mL(1.62mmole)三乙胺、56mg(0.42mmole)羟基苯并三唑、182mg(0.21mmole)化合物B3和143mg(0.83mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐加入到该反应混合物中。将该反应混合物在室温下和惰性气体环境中搅拌24小时。然后蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到52mg化合物22；

                                    MS(m/z)：1221.8[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3450，2971，2938，2875，1775，1721，1705，1628，1562，1544，1526，1460，1378，1294，1254，1167，1110，1054，1013，889，815，755.

制备方法与实施例

中间体的制备

方法AA

将化合物P1A(2g；2.46mmole)溶于100mL甲醇。向该溶液中加入2.2g乙酸钠三水合物和900mg碘。用500W卤素灯将该反应混合物照射2小时。然后加入2滴0.1M硫代硫酸钠。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物(洗脱剂：CHCl₃∶CH₃OH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1)。得到870mg量的化合物A1A。

按照上述步骤，以大环内酯P2A(表3)为原料得到化合物A2A。

化合物A1和A2的特征如表3中所示。

方法BB

将化合物A1(4.9g；6.68mmole)溶于100mL甲醇。向该溶液中加入36mL N，N-二异丙基乙胺和13mL乙基碘。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌20小时。然后用乙酸乙酯稀释该反应混合物并用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机提取物。在减压条件下蒸发溶剂。用硅胶柱纯化所得的混合物(洗脱剂：CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1)。得到1.63g量的化合物B1A。

按照上述步骤，以化合物A2A为原料得到化合物B2A。

将化合物A1A(770mg；1.048mmole)溶于30mL丙烯腈并将该反应混合物回流10小时。随后在减压条件下蒸发丙烯腈。得到827mg化合物B3A。

按照上述步骤并以化合物A2为原料得到化合物B4A。

化合物B1A-B4A的特征如表1中所示。

方法CC

在100mL烧瓶中将大环内酯P1A(6.4g；8.6mmole)溶于50mL乙酸乙酯。然后向该反应混合物中加入乙酸酐(1.22mL；13.0mmole)。将该混合物在室温下搅拌18小时。用50mL水稀释该反应混合物并再搅拌30分钟。将水层的pH调节至2.5。分离有机层和水层且然后将水相的pH调节至9.5并用乙酸乙酯提取水层。用无水Na₂SO₄干燥提取物。在减压条件下蒸发溶剂并得到3.33g化合物C1A。

按照上述步骤且各自以化合物P2A、P3A、B1A或B2A为原料得到化合物C2A、C3A、C4A或C5A。

化合物C1A-C5A的特征如表1中所示。

方法DD

将化合物C1A(6.8g；8.6mmole)溶于70mL二氯甲烷。在惰性气体环境中向该混合物中加入6.8mL DMSO和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(5g；29mmole)。然后逐步滴加溶于3mL二氯甲烷的吡啶三氟乙酸酯。将该反应混合物在室温下搅拌2小时且随后将水加入到该反应混合物中。分离各层并将水层的pH调节至4.0。在用乙酸乙酯提取后，将pH调节至6.5。重复提取并将水层的pH调节至9.5。在用乙酸乙酯提取后，用无水Na₂SO₄干燥有机层。在减压条件下蒸发溶剂并分离到2g化合物D1A。

按照上述步骤且各自以化合物C2A、C3A、C4A或C5A为原料得到化合物D2A、D3A、D4A或D5A。

化合物D1A-D5A的特征如表1中所示。

方法EE

将化合物D1A(1.5g；1.9mmole)在82mL甲醇中的溶液在室温下搅拌20小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并得到1.2g化合物E1A。

按照上述步骤且各自以化合物D2A、D3A、D4A或D5A为原料得到化合物E2A、E3A、E4A或E5A。

化合物E1A-E5A的特征如表1中所示。

方法FF

向NaH(30.9mg)溶于3.7mL DMF得到的溶液中加入297mg三甲基氧化锍碘化物(TMSI)。15分钟后，缓慢滴加化合物E1A(700mg；0.94mmole)溶于2.3mL DMSO得到的溶液。将该混合物在室温下搅拌15分钟且然后在55℃下搅拌45分钟。然后在室温下持续搅拌过夜。将该反应混合物倾入水和乙酸乙酯的混合物。分离有机层、用水和饱和NaCl溶液洗涤、用无水Na₂SO₄干燥且然后在减压条件下蒸发溶剂。得到0.53g量的化合物F1A。

按照上述步骤且各自以化合物E2A、E3A、E4A或E5A为原料得到化合物F2A、F3A、F4A或F5A。

化合物F1A-F5A的特征如表1中所示。

表3

化合物	R1	R2	R3	R4	R5	R6	R8	R9	分子式	MH+
											P1A	CH3	H	H	H	H	H	CH3	H	C39H72N2O12	749.5
P2A	H	C＝O		CH3	H	H	CH3	H	C38H70N2O13	763.5
											P3A	IPAa	H	H	H	H	H	CH3	H	C41H77N3O13	820.5
A1A	CH3	H	H	H	H	H	H	H	C37H70N2O12	735.5

A2A	H	C＝O		CH3	H	H	H	H	C37H69N2O13	749.4
											B1A	CH3	H	H	H	H	H	C2H5	H	C39H74N2O12	763.6
B2A	H	C＝O		CH3	H	H	C2H5	H	C39H72N2O13	777.7
											B3A	CH3	H	H	H	H	H	(CH2)2-CN	H	C40H73N3O12	788.5
B4A	H	C＝O		CH3	H	H	(CH2)2-CN	H	C40H71N3O13	822.8
											C1A	CH3	H	H	H	H	H	CH3	Ac	C40H74N2O13	792.1
C2A	H	C＝O		CH3	H	H	CH3	Ac	C40H72N2O14	805.5
											C3A	IPA	H	H	H	H	H	CH3	Ac	C43H79N3O14	862.6
C4A	CH3	H	H	H	H	H	C2H5	Ac	C41H76N2O13	805.6
											C5A	H	C＝O		CH3	H	H	C2H5	Ac	C41H74N2O14	819.6
D1A	CH3	H	H	H	C＝O		CH3	Ac	C40H72N2O13	789.6
											D2A	H	C＝O		CH3	C＝O		CH3	Ac	C40H70N2O14	803.8
D3A	IPA	H	H	H	C＝O		CH3	Ac	C43H77N3O14	860.8
											D4A	CH3	H	H	H	C＝O		C2H5	Ac	C41H74N2O13	803.6
D5A	H	C＝O		CH3	C＝O		C2H5	Ac	C41H72N2O14	817.6
											E1A	CH3	H	H	H	C＝O		CH3	H	C39H70N2O12	747.6

E2A	H	C＝O		CH3	C＝O	CH3	H	C39H69N2O13	761.5
										E3A	IPA	H	H	H	C＝O	CH3	H	C41H75N3O13	818.5
E4A	CH3	H	H	H	C＝O	C2H5	H	C39H72N2O12	761.6
										E5A	H	C＝O		CH3	C＝O	C2H5	H	C39H70N2O13	775.5
F1A	CH3	H	H	H	EPOb	CH3	H	C39H72N2O12	761.8
										F2A	H	C＝O		CH3	EPO	CH3	H	C39H70N2O13	775.5
F3A	IPA	H	H	H	EPO	CH3	H	C42H77N3O13	832.5
										F4A	CH3	H	H	H	EPO	C2H5	H	C40H74N2O12	775.6
F5A	H	C＝O		CH3	EPO	C2H5	H	C40H72N2O13	789.5

a)IPA＝C(O)NHCH(CH₃)₂

b)EPO＝Oksiran-2-il

方法M

a)通过使用PtO₂作为催化剂(130mg)在40atm压力下和无水乙醇中水合腈B3A(770mg；1mmole)2天，过滤并蒸发后得到750mg粗产物，将其用硅胶柱纯化(洗脱剂：氯仿∶甲醇∶氨＝6∶1∶0.1)。得到350mg量的胺M_L1。

按照上述步骤，以腈B4A为原料得到胺M_L2。

b)将化合物F1A(282mg；0.33mmole)溶于3mL甲醇。向该溶液中加入乙二胺(0.235mL；3.33mmole)和碘化钾(581.4mg；3.28mmole)。将该反应混合物在50℃的温度下搅拌过夜。然后在减压条件下蒸发甲醇并将残余物溶于二氯甲烷且用水和饱和NaCl溶液洗涤。提取后，用无水Na₂SO₄干燥有机层并蒸发溶剂。得到240mg量的胺M_L3。

按照上述步骤，各自以化合物F2A、F3A、F4A或F5A为原料得到胺M_L4、M_L5、M_L6或M_L7。

按照上述步骤，向化合物F2A和F5A中加入不同的二胺类，得到胺类M_L11和M_L12。

按照上述步骤，通过使丙二胺与化合物F4A反应得到胺M_L8。

c)在氩气流中将化合物C1A(1.27g；1.6mmole)溶于60mL甲苯。10分钟后，加入0.672mL三乙胺和0.155mL 3-氯丙酰基氯。15分钟后，再加入等份的试剂。将该反应混合物在室温下搅拌3小时且然后向该反应混合物中加入水。分离有机层、用饱和NaHCO₃溶液洗涤并干燥。蒸发溶剂后，用硅胶柱纯化产物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到0.946g量的化合物M_L9。

使用类似的反应条件产生化合物M_L10。

化合物M_L1-M_L10的特征如表4中所示。

表4

化合物	M	R1	R2	R3	R4	R5	R6	R8	分子式	MH+
											ML1	M1	CH3	H	H	H	H	H	L1	C40H77N3O12	792.6
ML2	M2	H	C＝O		CH3	H	H	L1	C40H75N3O13	806.7
											ML3	M1	CH3	H	H	H	L2	H	CH3	C41H80N4O12	821.7
ML4	M2	H	C＝O		CH3	L2	H	CH3	C41H79N4O13	835.7
											ML5	M3	IPAa	H	H	H	L2	H	CH3	C44H85N5O13	892.7
ML6	M4	CH3	H	H	H	L2	H	C2H5	C42H82N4O12	835.6
											ML7	M5	H	C＝O		CH3	L2	H	C2H5	C42H90N4O13	849.9
ML8	M4	CH3	H	H	H	L3	H	C2H5	C44H86N4O12	863.8
											ML9	M1	CH3	H	H	L4	H	H	CH3	C41H74N2O13	803.6
ML10	M1	CH3	H	H	H	H	L4	CH3	C41H74N2O13	803.9
											ML11	M5	H	C＝O		CH3	L5	H	C2H5	C45H86N4O13	891.6
ML12	M5	H	C＝O		CH3	L6	H	C2H5	C48H92N4O13	933.6

^aIPA＝-C(O)-NH-CH(CH₃)₂

L1＝-CH₂(CH₂)₂-NH₂

L2＝-CH₂-NH-(CH₂)₂-NH₂

L3＝-CH₂-NH-(CH₂)₄-NH₂                L4＝-CO-(CH₂)₂-NH-(CH₂)₂-NH₂

L5＝-CH₂-NH-(CH₂)₅-NH₂

L6＝-CH₂-NH-(CH₂)₈-NH₂

L7＝-OC(O)(CH₂)₂NH(CH₂)₃

L1-L8相当于连接基L。

方法S

向化合物S1(1.18g；3.12mmole)在5mL DMF中的溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(723mg；6.24mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(0.598g；3.12mmole)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后向该溶液中加入NH₂CH₂CH₂NH-Boc(0.492mL；3.12mmole)和三乙胺(0.426mL；3.062mmole)。将该反应混合物在室温下再搅拌24小时。随后将该混合物转入20mL二氯甲烷并用饱和NaHCO₃溶液和水洗涤。在用无水Na₂SO₄干燥后，蒸发溶剂。得到2.2g量的油状产物，将其溶于30mL TFA：CH₂Cl₂并在室温下搅拌1小时。随后在减压条件下蒸发溶剂。得到1.24g量的酰胺S3。

方法Sa

0℃下用丙烯酰氯(0,429ml，5,29mmol)处理甾类S1(1,0g，2,64mmol)和三乙胺(0,74ml，5,29mmol)在CH₂Cl₂(60ml)中的溶液。30分钟后，用CH₂Cl₂稀释该反应混合物、用饱和NaHCO₃且然后用H₂O洗涤、干燥并蒸发至得到固体中间体。将其在丙酮(50ml)中与三乙胺(1,38ml，13,215mmmol)一起搅拌2小时。浓缩溶液、用水稀释并用EtOAc洗涤。用2N HCl将水相酸化至pH2并过滤而得到固体。得到915mg化合物S5。

方法Sb

将1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1当量，0,23mmol，0,035ml)加入到10％酸S5(0,23mmol，100mg)在二甲基碳酸酯中的溶液中并将所得混合物在加热至回流(90℃)。反应完全后，将该反应混合物冷却至室温并用EtOAc和水稀释。用Na₂SO₄干燥有机层、蒸发并用硅胶柱纯化，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到80mg化合物S6。

方法Sc

用三乙胺(0,075ml，0,54mmol)、碘化钠(37mg，0,24mmol)和水(0,018ml)依次处理化合物S5(184mg，0,24mmol)和N，N-二甲基硫代氨基甲酰氯(60,5mg，0,49mmol)在2-丁酮(8ml)中的溶液并搅拌3天。

然后用二甲基乙酰胺(0,88ml)和水(5,54ml)依次处理反应混合物、搅拌2小时并用EtOAc提取。用Na₂SO₄干燥有机层并在减压条件下蒸发。用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到20mg化合物S7。

方法Sd

a)向化合物S5(250mg，0,58mmol)在甲醇(20ml)中的溶液中加入915mg(1,16mmol)大环内酯A4。将反应混合物在55℃下搅拌24小时。蒸发溶剂后，用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝30∶50∶2。得到540mg化合物S8。

MS(m/z)：1224,32[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2972，2939，2876，1726，1686，1664，1618，1605，1561，1509，1459，1380，1247，1168，1116，1074，1056，1013，894，818，802.

b)向化合物S5(250mg，0,58mmol)在甲醇(20ml)中的溶液中加入755mg(1,16mmol)大环内酯M_L3。将反应混合物在55℃下搅拌24小时。蒸发溶剂后，用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝30∶50∶2。得到412mg化合物S9。MS(m/z)：1253.58[MH]⁺。

表5

S	Ra	Rb	Rc	Rd	分子式	MH+
							S1	F	H	OH	OH	C21H27FO5	378.9
S2	F	F	OH	OH	C21H26F2O5	397.4
							S3	F	H	NH-(CH2)2-NH2	OH	C23H33FN2O4	421.3
S4	F	H	OH	H	C21H27FO4	363.2
							S5	F	H	OH	OC(O)CH2＝CH2	C24H29FO6	433.2
S6	F	H	CH3	OC(O)CH2＝CH2	C25H31FO6	446.9
							S7	F	H	SC(O)N(CH3)2	OC(O)CH2＝CH2	C27H34FNO6S	520.2

实施例23

化合物23：I；M＝M1，L＝L1，S＝S1；(R¹＝R⁷＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝R⁶＝H，X¹＝CH₂，m＝2，Q＝NH，n＝0，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物S1(84mg；0.22mmole)溶于5mL干燥二氯甲烷。向该溶液中加入0.29mL三乙胺和61mg羟基苯并三唑且随后加入大环内酯M_L1(175mg；0.22mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(179mg)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到16mg化合物23；MS(m/z)：1152.5[MH]⁺。

实施例24

化合物24：I；M＝M2，L＝L1，S＝S1；(R¹＝R⁵＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，X¹＝CH²，m＝2，Q＝NH，n＝0，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物S1(117.5mg；0.31mmole)溶于5mL干燥DMF。向该溶液中加入58.6μl二异丙基乙胺和42mg 1-羟基苯并三唑且然后加入大环内酯M_L2(250mg；0.31mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(60mg)。将该反应混合物在100℃的温度下搅拌5小时。用40mL乙酸乙酯和40mL水将该混合物各提取两次并用无水硫酸钠干燥。在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化所得的混合物，洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到65mg化合物24；

                                                                                 MS

(m/z)：1166.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2972，2938，2881，1774，1736，1702，1664，1560，1528，1459，1379，1298，1244，1170，1126，1108，1075，1055，1011，959，894.

实施例25

化合物25：I；M＝M1，L＝L2，S＝S2；(R¹＝R⁷＝R⁸＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝H，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物S2(116mg；0.29mmole)溶于10mL二氯甲烷。向该溶液中加入0.320mL三乙胺和78mg 1-羟基苯并三唑且然后加入化合物M_L3(240mg；0.29mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(200mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体环境中搅拌24小时。然后蒸发溶剂并用硅胶柱纯化所得的混合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到214mg化合物25；

                                               MS(m/z)：1200.0[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2973，2939，2876，1711，1670，1632，1561，1523，1458，1380，1317，1259，1177，1130，1110，1073，1034，995，939，898，795，757，710，642.

实施例26

化合物26：I；M＝M1，L＝L2，S＝S1；(R¹＝R⁷＝R⁸＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝7H，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

向在氩气环境中冷却至0℃的化合物S1(111mg；0.29mmole)在干燥CH₂Cl₂(5mL)中的混悬液中加入0.380mL三乙胺和80mg 1-羟基苯并三唑且然后加入化合物M_L3(240mg；0.29mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(235mg)。将该反应混合物在室温下和氩气流中搅拌24小时，然后在减压条件下蒸发至小体积并用硅胶柱纯化(洗脱剂：CHCl₃∶CH₃OH∶NH₄OH＝6∶1∶0,1)。得到88mg化合物26；MS(m/z)：1182[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2971，2939，2874，1719，1665，1625，1560，1518，1458，1378，1275，1175，1110，1036，1013，996，894，796，757，670.

实施例27

化合物27：I；M＝M2，L＝L2，S＝S2；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝R⁸＝CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

在惰性气体中将化合物S2(47mg；0.12mmole)溶于干燥CH₂Cl₂(5mL)并加入0.128mL三乙胺和31mg 1-羟基苯并三唑，随后加入化合物M_L4(141mg；0.12mmole)和 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(169mg)。将该反应混合物在室温下和氩气流中搅拌24小时，然后在减压条件下蒸发至小体积并用硅胶柱纯化(洗脱剂：CHCl₃∶CH₃OH∶NH₄OH＝6∶1∶0,1)。得到82mg化合物27；MS(m/z)：1213[MH]⁺。

实施例28

化合物28：I；M＝M3，L＝L2，S＝S2；R¹＝CONHCH(CH₃)₂，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝H，R⁷＝R⁸＝CH₃，X¹＝CH²，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝R^b＝F，R^d＝OH)

将化合物S2(95mg；0.24mmole)溶于10mL二氯甲烷，加入0.262mL三乙胺和65mg 1-羟基苯并三唑且然后加入化合物M_L5(257mg；0.24mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(165mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体环境中搅拌24小时。然后蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0,1)。分离到144mg化合物28；

MS(m/z)：1270[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2974，2940，2877，1774，1735，1719，1670，1630，1561，1523，1459，1381，1317，1264，1168，1110，1072，1032，994，899，820，757，709.

实施例29

化合物29：I；M＝M4，L＝L2，S＝S1；(R¹＝R⁷＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝H，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在惰性气体环境中将化合物S1(282mg；0.71mmole)溶于干燥CH₂Cl₂(15mL)，加入0.776mL三乙胺和192mg 1-羟基苯并三唑，然后加入化合物M_L6(593mg；2.85mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(489mg)。将该反应混合物在室温下和氩气流中搅拌24小时，然后在减压条件下蒸发至小体积并用硅胶柱纯化(洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0,1)。分离到84mg化合物29；

MS(m/z)：1195.9[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3424，2972，2939，2874，1725，1665，1625，1560，1522，1459，1379，1259，1176，1109，1054，1036，1012，996，894，796，757.

实施例30：

化合物30：I；M＝M5，L＝L2，S＝S1；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在15mL干燥二氯甲烷中溶解化合物S1(89mg；0.23mmole)。加入0.257mL三乙胺和64mg 1-羟基苯并三唑且然后加入化合物M_L7(200mg；0.23mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(162mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体中搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到153mg化合物30；

MS(m/z)：1209.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3423，2974，2939，2881，1774，1708，1664，1560，1523，1459，1379，1299，1275，1221，1175，1109，1053，1010，893，813，757.

实施例31

化合物31：I；M＝M5，L＝L2，S＝S4；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物S4(85mg；0.24mmole)溶于10mL干燥二氯甲烷。加入0.257mL三乙胺和64mg 1-羟基苯并三唑且然后加入化合物M_L7(200mg；0.24mmole)和 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(162mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体中搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到106mg化合物31；

MS(m/z)：1193.6[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3448，2973，2940，2876，1708，1664，1560，1528，1459，1379，1297，1272，1225，1176，1110，1053，1010，929，889，810，756.

实施例32

化合物32：I；M＝M4，L＝L3，S＝S1；(R¹＝R⁷＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝H，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

在惰性气体环境中将化合物S1(74mg；0.19mmole)溶于干燥CH₂Cl₂(10mL)并加入0.176mL三乙胺和53mg 1-羟基苯并三唑，随后添加化合物M_L8(169mg；0.19mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(135mg)。将该反应混合物在室温下和氩气流中搅拌24小时且然后在减压条件下蒸发至小体积并用硅胶柱纯化(洗脱剂CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0,1)。得到67mg化合物32；

                                    MS(m/z)：1223.6[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3425，2979，2937，2873，2370，1734，1665，1627，1562，1525，1459，1379，1259，1175，1109，1054，1036，1012，995，893，796，756.

实施例33

化合物33：I；M＝M1，L＝L5，S＝S1；(R¹＝R⁷＝R⁸＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝H，X¹＝CO，m＝2，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物S3(109mg；0.26mmole)溶于20mL甲醇且然后加入化合物M_L10(250mg；0.31mmole)。将该反应混合物在75℃下搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到40mg化合物33；

MS(m/z)：1223.9[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3424，2972，2939，2873，01734，1665，2639，1562，1525，1459，1379，1260，1173，1108，1074，1036，1015，960，894，835，797，755，642.

实施例34

化合物34：I；M＝M1，L＝L5，S＝S1；(R¹＝R⁷＝R⁸＝CH₃，R²＝R³＝R⁵＝R⁶＝H，X¹＝CO，m＝2，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝OH)

将化合物M_L9(267mg；0.32mmole)溶于30mL甲醇。向该溶液中加入化合物S3(399mg；0.95mmole)。将该反应混合物在75℃下搅拌过夜。然后蒸发溶剂并用硅胶柱纯化所得混合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到30mg化合物34；

                                       MS(m/z)：1223.7[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：345，2972，2941，2873，1722，1665，1627，1525，1459，1379，1296，1243，1184，1110，1053，1012，894，831，756.

实施例35

化合物35：I；M＝M5，L＝L6，S＝S4；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝5，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物S4(63mg；0.17mmole)溶于10mL干燥二氯甲烷。加入188mL三乙胺和47mg 1-羟基苯并三唑，然后加入化合物M_L11(154mmg；0.17mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(119mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体中搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到250mg化合物35；

MS(m/z)：1236,5[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3448，2972，2938，2870，1736，1708，1664，1560，1535，1459，1379，1329，1297，1272，1229，1176，1110，1053，1010，931，889，809.

实施例36

化合物36：I；M＝M5，L＝L7，S＝S4；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝8，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物S4(73mg；0.20mmole)溶于10mL干燥二氯甲烷。加入0.219mL三乙胺和54mg 1-羟基苯并三唑，然后加入化合物M_L12(188mg；0.20mmole)和 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(139mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体中搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到54mg化合物36；MS(m/z)：1277.6[MH]⁺。

实施例37

化合物37：I：M＝M2，L＝L6，S＝S4；(R¹＝R⁶＝H，R²与R³一起＝CO，R⁴＝R⁷＝CH₃，R⁸＝CH₂CH₃，X¹＝CH₂，m＝0，Q＝NH，n＝2，X²＝NH，R^a＝F，R^b＝H，R^d＝H)

将化合物S4(34mg；0.093mmole)溶于10mL干燥二氯甲烷。加入0.100mL三乙胺和25mg 1-羟基苯并三唑，然后加入化合物M_L4(29mg；0.093mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺盐酸盐(64mg)。将该反应混合物在室温下和惰性气体中搅拌24小时。然后在减压条件下蒸发溶剂并用硅胶柱纯化化合物，使用溶剂系统CHCl₃∶MeOH∶NH₄OH＝6∶1∶0.1。得到10mg化合物37；MS(m/z)：1179,7[MH]⁺。

实施例38

化合物38：I；M＝M1，L＝L7，S＝S6；(R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝R⁶＝H，R⁸＝CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，＝2，n＝2，Q＝-NH-，X²＝OC(O)，R^a＝F，R^b＝H，R^c＝OCH₃)

a)将1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1当量，0,082mmol，0,012ml)加入到10％酸S8(100mg，0,082mmol)在二甲基碳酸酯(1ml)中的溶液中并将所得混合物加热至回流(90℃)。反应完全后，将该反应混合物冷却至室温并用EtOAc和水稀释。用Na₂SO₄干燥有机层并用硅胶柱纯化，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到32mg化合物38。

MS(m/z)：1238,55[MH]⁺.IR(cm^-1)/KBr：3449，2972，2939，2877，1736，1666，1625，1561，1542，1509，1459，1377，1291，1266，1241，1176，1115，1052，1014，978，957，893，833，812，755，705，639.

b)向化合物S6(17,3mg，0,039mmol)在甲醇(3ml)中的溶液中加入62mg(0,094mmol)大环内酯A4。将该反应混合物在55℃下搅拌24小时。在蒸发溶剂后，用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到35mg化合物38。MS(m/z)：1238,55[MH]⁺

实施例39

化合物39：I；M＝M1，L＝L8，S＝S6；(R¹＝R⁷＝R⁸＝CH₃，R²＝R³＝R⁴＝R⁶＝H，X¹＝CH₂NH，m＝2，Q＝NH，n＝2，X²＝OC(O)，R^a＝F，R^b＝H，R^c＝OCH₃)

向化合物S6(100mg，0,22mmol)在甲醇(10ml)中的溶液中加入212mg(0,26mmol)大环内酯M_L3。将该反应混合物在55℃下搅拌24小时。在蒸发溶剂后，用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到20mg化合物39。MS(m/z)：1267,55[MH]⁺

实施例40

化合物40：I；M＝M1，L＝L7，S＝S7；(R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝R⁶＝H，R⁸＝CH₃，X¹＝-CH₂-，m＝2，n＝2，Q＝-NH-，X²＝OC(O)，R^a＝F，R^b＝H，R^c＝SC(O)N(CH₃)₂)

用三乙胺(37,5ml，0,27mmol)、碘化钠(18,4m，0,12mmol)和水(0,015ml)依次处理在室温下的化合物S8(150mg，0,12mmol)在2-丁酮(4ml)中的溶液并搅拌3天。然后用二甲基乙酰胺(0,44ml)和水(2,77ml)依次处理反应混合物、冷却至0℃、搅拌2小时并用EtOAc提取。用Na₂SO₄干燥有机层并在减压条件下蒸发。用硅胶柱纯化混合物，使用溶剂系统CH₂Cl₂∶MeOH∶NH₄OH＝90∶8∶1。得到56,3mg化合物40。MS(m/z)：1311,49[MH]⁺

Claims (54)

1.如下通式的化合物：

其中：

(i)M为选自多元内酯环分子组成的组的大环内酯亚单位，其中″元″指的是内酯环上的碳原子或杂原子数且″多″表示全部原子数超过约10且至多约为18，所述的分子具有在介导炎性免疫反应的哺乳动物、包括人免疫系统细胞中累积的特性；

(ii)S为甾类抗炎亚单位；和

(iii)L为与M和S各自共价连接的连接分子。

2.如权利要求1中所述的化合物，其中M表示通式II的基团：

其中：

(i)Z和W独立为：＞C＝O、＞CH₂、＞CH-NR_tR_s、＞N-R_N或＞C＝N-R_M，其中：

R_t和R_s独立为氢或烷基；

R_M为羟基、烷氧基、取代的烷氧基或OR^P；

R_N为氢、R^P、烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(X)-NR_tR_s；其中X为＝O或＝S；

条件是Z和W不能同时为＞C＝O、＞CH₂、＞CH-NR_tR_s、＞N-R_N、＞C＝N-R_M或一条键；

(ii)U和Y独立为氢、卤素、烷基或羟基烷基；

(iii)R¹为羟基、OR^P、-O-S²基团或＝O；

(iv)S¹为通式III的糖部分：

其中：

R⁸和R⁹均为氢或彼此形成键，或R⁹为氢且R⁸为-N(CH₃)R^y，其中：

R^y为R^P、R^Z或-C(O)R^Z，其中R^Z为氢或烷基或链烯基或炔基或环烷基或芳基或杂芳基或被C₂-C₇-烷基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-炔基、芳基或杂芳基取代的烷基；

R¹⁰为氢或R^P；

(v)S²为通式IV的糖部分：

其中：

R^3’为氢或甲基；

R¹¹为氢、R^P或O-R¹¹为与R¹²和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

R¹²为氢或与O-R¹¹和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

(vi)R²为氢、羟基、OR^P或烷氧基；

(vii)A为氢或甲基；

(viii)B为甲基或环氧基；

(ix)E为氢或卤素；

(x)R³为羟基、OR^P、烷氧基或R³为与R⁵和与C/11和C/12碳原子形成环碳酸酯或环氨基甲酸酯的基团；或如果W或Z为＞N-R_N，则R³为与W或Z形成环氨基甲酸酯的基团；

(xi)R⁴为C₁-C₄烷基；

(xii)R⁵为氢、羟基、OR^P、C₁-C₄-烷氧基或与R³和与C/11和C/12碳原子形成环碳酸酯或环氨基甲酸酯的基团；

(xiii)R⁶为氢或C₁-C₄-烷基；

其中M含有连接位置，它通过该位置经连接基L与S连接；条件是该连接位置位于下列基团中的一个或多个上：

a)位于S¹、S²或糖苷配基氧上的任意活性羟基、氮或环氧基，条件是S¹或/和S²被裂解；

b)位于Z或W上的活性＞N-R_N或-NR_tR_s或氧代基团；

c)位于R¹、R²、R³和R⁵中任意一个上的活性羟基；

d)可以首先被衍生成羟基或-NR_tR_s基团的任意其它基团；且

R^P为羟基或氨基保护基。

3.如权利要求1中所述的化合物，其中L表示通式VA或通式VB的基团：

               VA X¹-(CH₂)_m-X²

               VB X¹-(CH₂)_m-Q-(CH₂)_n-X²

其中：

X¹选自-CH₂-、-CH₂NH-、-C(O)-、-OC(O)-、＝N-O-、-OC(O)NH-或-C(O)NH-；

X²为-NH-、-NHC(O)-或-CH₂-；

Q为-NH-或-CH₂-，其中：

-CH₂-或-NH-基团各自可以任选被C₁-C₇-烷基、C₂-C₇-链烯基、C₂-C₇-炔基、C(O)R^X、C(O)OR^X、C(O)NHR^X取代，其中R^X可以为C₁-C₇-烷基、芳基或杂芳基；

符号m和n独立为0-8的整数，条件是如果Q为NH，那么n不能为0。

4.如权利要求1中所述的化合物，其中S表示通式X的基团：

其中：

R^a和R^b独立地表示氢或卤素；

R^c为羟基、烷氧基(优选甲氧基)、烷基、硫代氨基甲酰基、氨基甲酰基或价键；

R^d和R^e独立地表示氢、羟基、甲基或C₁-C₄-烷氧基或各自为与其它基团或价键形成1，3-二氧戊环的基团；

R^f为氢、羟基、氯或与它所连接的碳原子一起形成酮基；

R^j为氢或卤素。

5.如权利要求2所述的化合物，其中：

Z为＞NR_N，其中R_N为氢或甲基；

W为＞CH₂；

B为甲基；

E为氢；

R²为羟基；

A为甲基；

S¹表示通式III的基团，其中：

R⁸选自氢、氨基、N-甲氨基、N，N-二甲氨基、N-甲基-N-(C₂-C₄)-烷氨基、N-甲基-N-甲基羰基氨基、N-甲基-N-苄氨基、N-甲基-N-环己氨基；

R⁹和R¹⁰为氢；

R¹为O-S²，其中S²表示通式IV的基团，其中R¹¹和R¹²为氢且R¹³为甲基；

U为氢；

Y为甲基；

R⁴为甲基；

R⁶为乙基；

R⁵为羟基或与R³和与C/11和C/12碳原子形成环碳酸酯桥的基团；

R³为羟基或与R⁵和与C/11和C/12碳原子形成环碳酸酯桥的基团；

条件是连接键通过N/9a位上Z的氮或通过C/11位上R³的氧。

6.如权利要求2所述的化合物，其中：

Z选自＞N-H、＞N-CH₃、＞N-C(O)NHR^X，其中R^X为异丙基；

W为＞C＝O或＞CH₂，条件是当Z为＞N-CH₃时，W不能为＞C＝O；

B为甲基；

E为氢；

A为甲基；

R²为羟基或甲氧基；

S¹表示通式III的基团，其中：

R⁸选自氨基、C₁-C₆-烷氨基、C₁-C₆-二烷氨基；

R⁹和R¹⁰为氢；

R¹为O-S²，其中S²表示通式IV的基团，其中R¹¹为氢或O-R¹¹为与R¹²和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

R¹²为氢或与O-R¹¹基团和与C/4″碳原子形成＞C＝O或环氧基的基团；

R¹³为甲基；

U为氢；

Y为甲基；

R³为羟基；

R⁴为甲基；

R⁵为羟基或甲氧基；

R⁶为乙基；

条件是连接键通过C/3′上R⁸的氮、通过C/6上R²的氧或通过均在C/4″上的R¹²的碳或R¹¹的氧。

7.如权利要求4所述的化合物，其中：

R^a和R^b独立地表示氢或卤素；

R^d为氢或羟基；

R^e为甲基；

R^f为羟基；

R^j为氢；

条件是连接键通过价键R^k。

8.特征在于如下式的化合物1：

9.特征在于如下式的化合物2：

10.特征在于如下式的化合物3：

11.特征在于如下式的化合物4：

12.特征在于如下式的化合物5：

13.特征在于如下式的化合物6：

14.特征在于如下式的化合物7：

15.特征在于如下式的化合物8：

16.特征在于如下式的化合物9：

17.特征在于如下式的化合物10：

18.特征在于如下式的化合物11：

19.特征在于如下式的化合物12：

20.特征在于如下式的化合物13：

21.特征在于如下式的化合物14：

22.特征在于如下式的化合物15：

23.特征在于如下式的化合物16：

24.特征在于如下式的化合物17：

25.特征在于如下式的化合物18：

26.特征在于如下式的化合物19：

27.特征在于如下式的化合物20：

28.特征在于如下式的化合物21：

29.特征在于如下式的化合物22：

30.特征在于如下式的化合物23：

31.特征在于如下式的化合物24：

32.特征在于如下式的化合物25：

33.特征在于如下式的化合物26：

34.特征在于如下式的化合物27：

35.特征在于如下式的化合物28：

36.特征在于如下式的化合物29：

37.特征在于如下式的化合物30：

38.特征在于如下式的化合物31：

39.特征在于如下式的化合物32：

40.特征在于如下式的化合物33：

41.特征在于如下式的化合物34：

42.特征在于如下式的化合物35：

43.特征在于如下式的化合物36：

44.特征在于如下式的化合物37：

45.特征在于如下式的化合物38：

46.特征在于如下式的化合物39：

47.特征在于如下式的化合物40：

48.通式I化合物的制备方法，包括：

a)通过使通式V的化合物与通式VId表示的大环内酯的游离氨基反应得到其中X²为-NHC(O)-的通式I的化合物，

其中通式V的结构式如下：

其中L¹表示离去基团，

且通式VId的结构式如下：

b)通过使通式V的化合物与通式VIe表示的大环内酯的羟基反应得到其中X²为-OC(O)-的通式I的化合物；

c)通过使如下通式表示的大环内酯：

与如下通式IVc表示的化合物的游离氨基反应，

得到其中X¹为-OC(O)-，Q为NH且X²为-NHC(O)-的通式I的化合物；

d)通过使通式VII表示的大环内酯与通式IVc表示的游离氨基反应得到其中X¹为-OC(O)NH-且X²为-NHC(O)-的通式I的化合物；

e)通过使通式Va表示的大环内酯与通式V的化合物反应得到其中X¹为-CH₂-，Q为-NH-且X²为-NHC(O)-的通式I表示的化合物；

f)通过使含有离去基团L²的通式VIf或通式VIg或通式VIh表示的大环内酯与通式IVb表示的甾类的游离羧酸反应得到通式I的化合物，其中通式VIf、通式VIg、通式VIh的结构式如下：

其中通式IVb的结构式如下：

g)通过使如下通式表示的大环内酯：

与通式Sb表示的含有-C＝C-键的甾类亚单位反应：

得到X¹为-OC(O)-，Q为NH且X²为-NH-的通式I表示的化合物；随后修饰R^c基团。

49.药物组合物，包括如权利要求1-46中所述的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂化物以及药学上可接受的稀释剂或载体。

50.如权利要求1-46中所述的化合物用于制备治疗炎性疾病、失调和病症的药物的用途，所述的炎性疾病、失调和病症的特征在于不需要的炎性免疫反应或与之相关，尤其是TNF-α和IL-1过度分泌诱导或与之相关的所有疾病和病症。

51.通式I表示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制备对需要的对象治疗与白细胞浸润入发炎组织相关的炎性病症和免疫或过敏性失调的药物的用途，包括给予所述的对象治疗有效量的通式I表示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

52.权利要求50所述的用途，其中炎性病症和免疫失调选自哮喘、成人呼吸窘迫综合征、支气管炎和囊性纤维化。

53.权利要求50所述的用途，其中所述的炎性病症和免疫失调选自肺、关节、眼、肠、皮肤和心脏的炎性病症或免疫失调。

54.权利要求50所述的用途，其中所述的炎性病症和免疫失调选自哮喘、成人呼吸窘迫综合征、支气管炎、囊性纤维化、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎、眼色素层炎、结膜炎、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、远端直肠炎、牛皮癣、湿疹、皮炎、冠状动脉梗死性损害、慢性炎症、内毒素休克和平滑肌增生性失调。

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