CN1688327A - 治疗药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及需要促进成骨或增强成骨蛋白质生成的疾病的治疗药或预防药、成骨促进剂或成骨蛋白质生成增强剂和用于促进成骨或增强成骨蛋白质生成的食品、饮料或饲料，其特征在于含有来自植物的处理物作为有效成分。另外，本发明涉及使用特定细胞的成骨蛋白质生成增强作用的测定方法、具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的筛选方法和具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的制备方法。

Description

治疗药

技术领域

本发明涉及需要促进成骨或增强成骨蛋白质生成的疾病，例如骨质疏松症、骨折等的治疗或预防中有用的药物、食品、饮料或饲料。

背景技术

骨组织中，通常成骨和骨吸收是在保持一定平衡的同时重复地进行，这种作用调节着骨强度和血中钙浓度。人们认为成骨细胞、和破骨细胞分别在成骨和骨吸收过程中起主要的作用，成骨作用和破骨作用的平衡因某种原因被破坏时，引起骨质疏松症。骨质疏松症大致分为：以雌激素分泌减少为主要原因的绝经后骨质疏松症和以年龄增长为主要原因的老年性骨质疏松症，此外已知的还有糖尿病、甲状腺机能亢进症等内分泌·代谢疾病和以类固醇等药物的用药、消化器官·肝部的疾病、维生素C缺乏、不动性、卵巢切除、关节风湿病等为主要原因的继发性骨质疏松症。

现在，作为骨质疏松症的治疗药，使用雌激素药物、降钙素、二磷酸盐化合物等主要通过抑制破骨作用来抑制骨量减少的药物。但是，在使用雌激素药物的治疗中，乳腺癌、子宫癌、心脏病的危险上升等，副作用增强，使用降钙素时，易产生抗药性，不能口服，二磷酸盐化合物有吸收率差、残留性高、导致骨代谢过度钝化的缺点。另外，为使骨代谢活化使用维生素D₃制剂，与其他药物相比治疗效果较低，高钙血症等的副作用大。这些以往的骨质疏松症的治疗药不能使已经进行的骨流失恢复到原状，作为真正的骨质疏松症的治疗药很难说是充分的。

与成骨作用密切相关的细胞是成骨细胞。成骨细胞与软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞、腱细胞等起源于共同的间充质干细胞，在分化过程中经由前成骨细胞株成为成熟的成骨细胞。成骨细胞在成熟过程中产生以作为骨构成成分的胶原蛋白为首的大量细胞外基质，另外，表达碱性磷酸酶引起磷酸钙沉积到基质中。一部分成骨细胞就这样埋入钙化的基质中，进而分化为骨细胞。

人类的骨量在20～30岁时是最大量，之后渐渐减少。随着年龄增长骨组织中的成骨细胞减少，另外由间充质干细胞分化为成骨细胞的能力也降低。与之相反，据称来自相同的间充质干细胞的脂肪细胞数量随着年龄增长而增多。因此在骨成长期，提高成骨细胞、骨细胞量，在老年期、绝经后进一步选择性地促进由间充质干细胞分化为成骨细胞，提高成骨作用，被认为对骨质疏松症的预防、治疗是有效的。

进来一直进行着促进成骨的药物的开发，公开了苯并吡喃衍生物(例如参照特开平7-291983号公报)、苯基取代羟基环戊烯酮类似物(例如参照特开平11-43460号公报)、前列腺素A1类似物(例如参照特开平11-43461号公报)、苯并虑平(ベンゾチエピン)衍生物(例如参照特开2000-109480号公报)、色酮衍生物(例如参照特开2001-139571号公报)的成骨促进作用。但是，有效性、安全性评价尚不足，还没有到达实用阶段。

发现了骨基质中含有诱导成骨作用的蛋白性因子，命名为成骨蛋白质(bone morphogenetic protein，以下称为BMP)。在很长时间内对其本质并不清楚，以克隆4种BMP基因为契机，现在逐步已知十几种分子种类超越种类广泛存在于动物中。BMP作用于前成骨细胞株，提高碱性磷酸酶活性、对甲状旁腺激素的应答性、骨钙生成素、胶原蛋白的合成等，诱导向成骨细胞的分化。BMP根据具有多种分化能力的未分化间充质细胞的分化阶段，分别分化成软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞。BMP抑制成肌细胞分化成肌肉，使之变成分化成骨细胞。另外，已知BMP具有来自成骨细胞的胰岛素样增殖因子等二次性增殖因子的诱导活性。通过将BMP与载体同时皮下或肌肉给药，诱导成骨作用。在重组人BMP之中确认了BMP-2、-4、-5、-6、-7具有可以单独诱导成骨作用的活性。其中已知重组人BMP-2具有强的成骨活性，在大鼠、羊、狗、猴等的骨缺损模型中，恢复缺损组织。另外，有BMP-4、-5与骨折治愈过程相关，BMP-6与软骨内骨化相关的报道，已知BMP-12具有成韧带、成腱活性，BMP-13具有成软骨活性。通过在高龄动物和老年人中确认了骨基质中的BMP量降低、成骨细胞对BMP的敏感性降低，指出了BMP与老年性骨质疏松症相关。

BMP不仅具有成骨作用，即使在发育过程中也起着重要的作用，BMP-2、-4、-7、-8、-11等与形成背腹轴、中胚层、心脏、肾脏、眼睛、精子等相关。剔除BMP的动物会致死或有严重的障碍。因此已知BMP对机体来说是必需的并具有很多生理活性。

由于BMP显示上述各种作用，也尝试了将BMP自身直接作为蛋白制剂用于骨质疏松症和骨折的治疗中。但是由于BMP是蛋白质，因此会有给药方法的制约和出现抗药性等问题。另外，BMP的受体广泛表达于很多组织中，因此全身给药时担心会对骨以外的组织产生影响。由于这些缺点，将BMP自身作为治疗药实际使用时会伴有种种制约。但是可以考虑不将BMP从外部给药，如果可以在所需的组织部位能任意地使BMP的生成增强，就可以在骨质疏松症、骨折等需要增强BMP生成的疾病的治疗、预防中有效。近年，公开了含有两个芳香族系的特定化合物(例如参照WO 97/15308号公开小册子)，美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀等他汀类化合物(例如参照WO 98/25460号公开小册子)具有增强BMP-2生成的活性。另外，在天芥菜黄质(helioxanthin)(例如参照特开平8-245386号公报)，缩合噻吩衍生物(例如参照特开平9-151132号公报)中公开了具有增强BMP作用的活性。但是关于它们的安全性、有效性的评价尚不足，还没有到达实用阶段。

近年，进行了将BMP用于骨再生医疗的开发，进行了以下尝试：将BMP和载体的复合体与植入材料组合，通过将其植入骨折部位，来得到治疗效果。但是，因为将大量的BMP带入机体内，在安全性、经济性方面也产生了问题。可以考虑通过使用增强BMP生成、促进成骨的物质以取代BMP，可以避免该缺点，但是在实际使用中并没有足够的方法。

像这样，可以考虑通过促进成骨、增强BMP生成，使治疗或预防与之相关的各种疾病成为可能，且未见毒性和副作用，根据需要能适当地促进成骨、增强BMP生成的物质、方法等尚不为人所知。

明日叶是伞形科的大型多年生草本植物，已知具有各种促进健康的效果。例如已知明日叶所具有的生理活性有：预防高血压的效果、抗菌作用、抗肿瘤作用、抑制胃酸分泌作用、抗癌效果、神经生长因子生成增强效果、肝细胞增殖因子生成增强作用(例如参照WO01/76614号公开小册子)，但是，对于促进成骨、BMP生成增强作用则至今不为人所知。

芹菜是属于伞型科、已知具有各种生理作用的植物。芹菜的生理作用已知有抗凝血作用、抑癌作用等。但是，对于促进成骨、BMP生成增强作用则至今不为人所知。

百合是属于百合科、已知具有各种生理作用的植物。百合的生理作用已知有消炎、利尿作用、镇咳作用、镇静作用等。但是，对于促进成骨、BMP生成增强作用则至今不为人所知。

芦荟是属于百合科、已知具有各种生理作用的植物。芦荟的生理作用已知有抗肿瘤作用、促有丝分裂活性、增强免疫活性、治愈冻伤作用、抗菌作用、抗过敏作用、抗炎症作用、治愈烧伤的作用、降低血糖作用、保湿作用等。但是，对于促进成骨、BMP生成增强作用则至今不为人所知。

艾草是属于菊科、已知具有各种生理作用的植物。艾草的生理作用已知有抗菌作用、镇静作用、消化活性氧作用、止血作用、抗组胺作用等。但是，对于促进成骨、BMP生成增强作用则至今不为人所知。

发明内容

本发明的目的在于开发来自天然物、可安全简便地摄取、适合作为食品材料、药物原料、具有促进成骨、成骨蛋白质生成增强作用的组合物，并提供使用该组合物的药物、食品、饮料或饲料。

以下对本发明进行概述。本发明的第1～3发明涉及需要促进成骨、增强成骨蛋白质生成的疾病的治疗药或预防药、成骨作用促进药物或BMP生成增强药物、用于促进成骨或增强BMP生成的食品、饮料或饲料，其特征在于含有选自下述(a)～(c)的来自植物的处理物作为有效成分。

(a)来自伞型科植物的处理物

(b)来自百合科植物的处理物

(c)来自菊科植物的处理物

在本发明的第1～3发明中，作为植物优选使用明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草。

本发明的第4～6发明涉及需要促进成骨、增强BMP生成的疾病的治疗药或预防药、成骨作用促进药物或BMP生成增强药物、用于促进成骨或增强BMP生成的食品、饮料或饲料，其特征在于含有下式(A)所示的化合物、其衍生物或它们的盐作为有效成分。

本发明的第7发明涉及增强BMP生成作用的测定方法，其特征在于包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量作为供试品的BMP生成增强作用指标的步骤。

本发明的第8发明涉及具有BMP生成增强作用的物质的筛选方法，其特征在于包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)测定步骤(a)得到的培养液中BMP量的步骤，在此，与在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞时相比，BMP量多时，判断为供试品具有BMP生成增强作用。

本发明的第9发明涉及具有BMP生成增强作用的物质的制备方法，其特征在于包含下述步骤：

(a)得到具有BMP生成增强作用的物质的步骤，和

(b)使用本发明的第7发明的测定方法，测定在步骤(a)中所得物质的BMP生成增强作用的步骤。

另外，本发明涉及具有BMP生成增强作用的物质的制备方法，其特征在于包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量的步骤，在此，与在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞时相比，BMP量多时，判断为供试品具有BMP生成增强作用，作为具有BMP生成增强作用的物质而取得该供试品。

附图简述

图1表示化合物a的质谱。

图2表示化合物a的¹H-NMR谱。

图3表示化合物a的¹³C-NMR谱。

具体实施方式

本说明书中，“BMP生成增强作用”和“BMP生成增强活性”分别指导致BMP生成的增强和增强BMP生成的功能，但它们在该意义上并没有特别严格的区别。“增强”包括与本发明的有效成分作用前相比，作用后目标物质的量增加的情况；同时还包括通过使本发明涉及的有效成分作用，生成了目标物质的情况(诱导)。另外在本说明书中，作为有效成分列举的任何物质都可以单独或者将2种或2种以上混合应用于本发明中。

作为本发明的有效成分，使用来自植物的处理物，其选自来自伞型科植物的处理物、来自百合科植物的处理物和来自菊科植物的处理物。

本发明中，所谓伞型科植物是属于被子植物伞型科的植物，例如明日叶、芹菜、水芹、鸭儿芹、独活、人参等。本发明中，特别优选使用伞型科的大型多年生草本植物明日叶、芹菜。

本发明中，作为百合科植物可以例举芦荟、百合、杜鹃、白丝草、尾濑草、ショウジョウバカマ(Heloniopsis orientalis)、黄菅(キスゲ)、车前草(ギボシ)、葱、蒜、韭菜、黑百合(クロユリ)、郁金香、山芋头(カタクリ)、山慈姑(アマナ)、玉竹(アマドコロ)、タケシマラン、七筋姑(ツバメオモト)、鹿药(ユキザサ)、舞鹤草(マイズルソウ)、チゴユリ、延龄草(エンレイソウ)、重楼(ツクバネソウ)、万年青(オモト)、麦冬(ジャノヒゲ)、阔叶山麦冬(ヤブラン)、粉条儿菜(ソクシンラン)、秋藏红花(イヌサフラン)、绵枣儿(ツルボ)、水仙(スイセン)、君子兰(クンシラン)、石蒜(ヒガンバナ)、文殊兰(ハマオモト)等。本发明中特别优选使用芦荟和百合。

另外，所谓芦荟可以使用分类属于芦荟属的任何植物，例如好望角芦荟(ケ-プアロエ)、大芦荟(キダチアロエ)、吉拉索芦荟(アロエベラ)等。大芦荟在植物分类学上可被称为木立芦荟(ギタチロカイ)、这也包含于本说明书中所述的芦荟之中。另外，所谓百合可以使用分类属于百合属的任何植物，例如麝香百合(テッポウユリ)、鹿子百合(カノコユリ)、斑点百合(スカシユリ)、天香百合(ヤマユリ)、卷丹(オニユリ)等。

本发明中，作为菊科植物可以例举艾草、狮子足艾草(サザバルヨモギ)、蓟(アザミ)、牛蒡(ゴボウ)、茼蒿(シュンギク)、春飞蓬(ハルジオル)、紫菀(シオン)、马兰(ヨメナ)、泽兰(フジバカマ)、豚草(ブタクサ)、苍耳(オナモミ)、大丽花(ダリア)、波斯菊(コスモス)、向日葵(ヒマワリ)、鼠曲草(ハハコグサ)、火绒草(ウスユキソウ)、非洲菊(ガ-ベラ)、蜂斗菜(フキ)、ウサギギク、黄苑(キオン)、野生菊(ショウジョウハグマ)、苦荬菜(ニガナ)、山莴苣(アキノノゲシ)、蒲公英(タンポポ)、芙蓉菊(フタマタタン)等。本发明中特别优选使用艾草和狮子足艾草。

本发明中使用的植物，没有特别限定，但可以使用其果实、种子、种皮、花、叶、茎、根、根茎和/或直接使用植物整体。

本发明中作为来自植物的处理物，只要具有促进成骨或BMP生成增强作用，并没有特别限定，例如可以是提取物、粉碎物、榨汁液、破碎物、化学处理物、酶处理物，特别优选提取物、粉碎物和榨汁液。只要是作为本发明的有效成分使用的，对来自植物的处理物的形态没有特别限定。

本发明中所谓提取物是使用提取溶剂经过进行提取操作的步骤而得到的物质。提取可以通过公知的提取方法如下进行。原料、提取溶剂、提取温度如下适宜设定：例如可以将原料粉碎或切细后，使用溶剂以间歇法或连续方式进行提取。作为得到提取物时的提取溶剂，没有特别限定，可以举出水、己烷、氯仿、乙醇、甲醇、异丙醇等醇类，丙酮、丁酮等酮类，乙酸甲酯、乙酸乙酯等亲水性或亲油性的溶剂，根据需要可以单独使用或使用适当的混合液。提取溶剂的量可以适当决定，通常，相对于提取操作时的原料重量，可以优选使用0.1～100倍量的提取溶剂。提取温度可以根据目的适宜决定，水提取时通常优选4～130℃，更优选25～100℃。另外，溶剂中含有乙醇时，优选4～60℃的范围。提取时间也可考虑提取效率来决定，通常优选几秒～几日、更优选5分钟～24小时的范围。提取时的压力没有特别限定，可以根据需要适宜决定。提取操作可以根据需要选择条件例如可以在常压下、加压下、抽滤过滤等的减压下进行。提取操作例如可以在搅拌下或静置下进行，可以根据需要反复数次提取。通过以上的操作，得到本发明中使用的植物提取物(以下有时称为本发明的提取物)。提取物可以根据需要进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、分子筛等的处理，可制备具有促进成骨或BMP生成增强作用的目的成分(以下，分别称为成骨作用促进成分或BMP生成增强成分)的浓缩提取物。提取物和浓缩提取物的成骨促进作用或BMP生成增强作用可以按照下述实施例2或4所述的方法简便地测定。另外，将本发明使用的植物用公知的方法制成茶叶状，使用该茶叶状物质得到的提取物只要具有成骨促进作用或BMP生成增强作用，也可以作为本发明的提取物使用。另外，本发明中可以将2种或多种通过不同的提取方法得到的提取物合并使用。

本发明中，用公知的方法分离植物提取物而得到的组分、或通过多次重复分离操作而得到的组分也包括在本发明的提取物中。上述分离方法有提取、分级沉淀、柱层析、薄层色谱等。以促进成骨或BMP生成增强作用为指标，通过对所得组分进一步精制，可以分离出成骨作用促进成分或BMP生成增强成分。

另外，作为植物提取物之外的来自植物的处理物，可以举出植物粉碎物。作为粉碎物的制备方法，例如可以通过将植物干燥、粉碎来得到粉末状的植物粉碎物。

作为植物榨汁液的制备方法可以举出公知的植物榨汁方法，并没有特别限定，例如可以使用螺杆式、齿轮式、转刀式等压榨机或果汁机来榨汁。作为前处理，可以将原料切细或研碎后，用上述果汁机或布等压榨，获得榨汁液。

破碎物是指将作为有效成分原料的植物破碎得到的物质，通常比粉碎物的组织片要大，例如可使用破碎机来制备。另外，对化学处理物没有特别限定，例如可以将该植物进行酸处理、碱处理、氧化处理、还原处理等而得到的物质，例如可将该植物浸泡于含有盐酸、硫酸、硝酸、柠檬酸、乙酸等无机酸或有机酸，或者氢氧化钠、氢氧化钾、氨等无机碱或有机碱的水溶液中来制备。化学处理物包括来自经过了上述化学处理的植物体的全部物质。酶处理物是指例如经果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶、甘露聚糖酶、葡糖苷酶等处理的酶处理物，微生物处理的酶促反应产物(例如发酵产物)，例如可通过使上述酶在适当的缓冲液中与该植物作用来制备。酶处理物包括来自经上述酶处理的植物体的全部物质。并且，作为本发明的来自植物的处理物，例如还包括将上述植物的茎切断，由其断面得到的汁液。

本发明中，对于来自植物的处理物的形状没有特别限定，只要具有促进成骨或BMP生成增强作用即可，可以是粉末状、固体状、液体状中的任意形状。另外也可以将该处理物用公知的方法造粒，以得到的粒状固态物质作为本发明的来自植物的处理物使用。造粒方法并没有特别限定，例如有转动造粒、搅拌造粒、流化床造粒、气流造粒、挤压造粒、压制造粒、碎解造粒、喷射造粒或喷雾造粒等。将粉末状的该来自植物的处理物溶解于液体例如水、醇等制成液体状，这也可作为本发明的来自植物的处理物使用。

本发明的来自植物的处理物与作为原料的植物体自身相比，特别优选高浓度和/或高纯度含有成骨促进成分或BMP生成增强成分。这里所谓高浓度是指，单位重量的来自植物的处理物成骨促进成分或BMP生成增强成分的重量比单位重量的原料植物体中成骨促进成分或BMP生成增强成分的重量多。另外，所谓高纯度是指，来自植物的处理物比作为原料的植物体的成骨促进成分或BMP生成增强成分的含有率高。

本发明中还提供高浓度和/或高纯度地含有来自植物的处理物的食品、饮料或饲料，这是指与以往的食品、饮料或饲料相比，本发明的食品、饮料或饲料中高浓度和/或高纯度地含有成骨促进成分或BMP生成增强成分。

本发明中，可以将由伞型科来自植物的处理物得到的上述式(A)所表示的化合物、其衍生物或它们的盐(以下称为本发明的化合物)作为本发明的治疗药、预防药、成骨作用促进剂、BMP生成增强剂、食品、饮料或饲料的有效成分使用。本发明的化合物可以分别单独使用或将两种或两种以上混合使用。该化合物可以是通过上述公知的分离方法由伞型科植物精制得到的物质，或可以是化学半合成或合成的物质。

作为式(A)所示的化合物的具体制备方法，例如有下述实施例1中所述的方法。另外，例如以来自天然物的查耳酮类化合物作为原料通过有机合成得到半合成品，完全经过有机合成得到合成品。有机合成的方法例如可以参照Alessandra Lattanzi等，Synlett.2002，No.6，p942-946；L.Claisen A.等，Ber.1881，No.14，p2460等。

本说明书中上述式(A)所示化合物的衍生物是指，将该化合物作为起始化合物合成的、具有与(A)所示的化合物同等的作用，即，成骨促进作用或BMP生成增强作用的化合物。作为该衍生物，例如可以举出上述式(A)所示化合物的酯化物、醚化物、糖苷等，在体内容易水解，能发挥所需效果的化合物(前体药物)。该前体药物可以按照公知的方法制备。另外，该衍生物可以是其盐。

本发明的化合物中，盐优选可药用盐。本发明中使用的盐例如有碱金属盐、碱土类金属盐、与有机碱形成的盐等。该盐优选可药用盐。另外，所谓本发明中使用的可药用盐是指对生物基本无毒的盐。作为该盐例如有与钠、钾、钙、镁、铵或质子化的苄星(benzathine)(N，N’-二-苄基乙二胺)、胆碱、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(メグラミン)(N-甲基葡糖胺)、苯乙苄胺(N-苄基苯乙胺)、哌嗪或三羟甲基氨基丙烷(トロメタミン)(2-氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇)形成的盐。

另外，在本发明中，将本发明所使用的来自植物的处理物和/或本发明的化合物称为本发明的有效成分，将含有本发明有效成分的需要促进成骨或增强BMP生成的疾病的治疗药或预防药称为本发明的治疗药或预防药。

本发明所述有效成分中，如后所述未见毒性。另外，不用担心产生副作用。那是因为，只要使用该有效成分，就可以安全且有效地进行疾病的治疗或预防。因此，含有该有效成分的本发明的治疗药、预防药、成骨作用促进剂、BMP生成增强剂、食品、饮料或饲料，对需要促进成骨或增强BMP生成的疾病的治疗或预防有效。

本发明中所谓促进成骨，只要是促进骨、软骨的成骨作用即可，没有特别限定，例如可以例举促进间充质干细胞分化成成骨细胞的作用、促进未分化的间充质细胞分化成成骨细胞的作用、促进前成骨细胞株分化成成骨细胞的作用、骨基质形成促进作用、骨基质的钙化作用、促进成骨细胞分化成骨细胞的作用、软骨内骨化诱导作用等。另外，关于促进成骨的有无，没有特别限定，可以根据下述实施例2所述的方法，例如，可以简便地测定促进间充质细胞分化成成骨细胞的作用。这里，“促进”中包含“诱导”。

本发明中，作为BMP可以例举BMP-1、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9、BMP-10、BMP-11、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15等，特别优选BMP-2、BMP-4或BMP-7。另外关于BMP生成增强作用的有无，没有特别限定，可以根据下述实施例4所述的方法简便地测定。

BMP是强烈促进骨、软骨、韧带、腱等形成的因子，作用于前成骨细胞株促进其分化成成骨细胞，被认为是与骨的产生、生长、骨质重建(リモデリング)、骨折的治愈过程相关。另外，BMP作用于未分化的间充质细胞，通过根据分化阶段分别分化成成软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞，与来自间充质的细胞的成熟和增殖广泛相关。进而，BMP即使在个体的发生过程中，也对背腹轴形成、中胚层形成等起着重要的作用。在BMP中，BMP-2、-4、-7成骨活性特别强，把重组人BMP-2作用于骨缺损动物，可以治疗骨缺损。关于重组人BMP-2的详细说明可以参照例如J.M.Wozney等.，Science Vol.242 p1528-1534(1988)。另外，在牙科领域中，可以确认BMP-2可以使牙槽骨骨质、牙周膜组织等牙周组织再生。

本发明中，作为需要促进成骨或增强BMP生成的疾病，可以例举骨质疏松症(例如，慢性骨质疏松症、由绝经后激素平衡异常引起的骨质疏松症、随糖尿病、类固醇药物等的副作用并发的继发性骨质疏松症等)、骨折、再骨折、骨缺损、成骨不全症、骨软化症、骨白塞病(Bechet’s disease)、强直性脊髓炎、类风湿性关节炎、变形性关节炎、与软骨相关的变形性关节炎、牙周病、牙周病中的牙周组织缺损、牙根·牙槽缺损、形成牙槽脊、腭裂。另外，本发明的治疗药或预防药可以作为多发性骨髓瘤、肺癌、乳腺癌等的外科手术后的骨组织修复剂使用。进而，本发明的治疗药或预防药可以用于再生医疗领域的骨再生。具体地，本发明的治疗药或预防药可以用于人造骨、人造牙根的活性化·稳定化，或可以从得病前或得病的患者体内采集细胞，在体外使本发明的治疗药或预防药作用，形成再生骨组织后，再植入患者的体内。

作为本发明的治疗药或预防药，可以举出将与本发明涉及的上述有效成分与公知的药物组合制成的制剂。本发明的有效成分可以与例如抑制骨吸收的药物，例如雌激素药物、降钙素、活性维生素D₃、二磷酸盐等共同使用。另外，本发明的有效成分可以与BMP共同使用。由此如实施例13所述，可以期待得到与促进成骨相关的协同效果。在此，作为BMP优选使用上述重组人BMP-2。因此，作为本发明的治疗药或预防药优选的形态，可以举出含有上述来自植物的处理物和/或本发明的化合物与重组人BMP-2的形态。该组成也是本发明的成骨促进剂、BMP生成增强剂、食品、饮料、饲料的优选形态。

本发明的治疗药或预防药的制备，通常将上述有效成分与可药用液态或固态的载体配合来进行的，根据需要添加溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等，可以制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等固体制剂、普通溶液剂、混悬剂、乳剂等液体制剂。也可以制成在使用前通过添加适当的载体能形成液态的干燥品、另外，也可以制成外用制剂

药物用载体可以根据治疗药或预防药的给药方式和剂型来选择。制成含有固体组合物的口服制剂时，例如可以利用淀粉、乳糖、白糖、甘露糖醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等，可以制成片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、细粒剂、颗粒剂等。另外制成口服制剂时，可以配合粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂、香料等。例如制成片剂或丸剂时，根据需要也可以涂布蔗糖、明胶、羟丙基纤维素等的糖衣或胃溶性或肠溶性物质的薄膜。制成含有液体组合物时的口服制剂，例如可以利用蒸馏水、乙醇等作为载体，制成可药用的乳浊剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂等。另外，根据需要可以添加湿润剂、助悬剂之类的助剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等。

另一方面，制成非口服制剂时，按照常法通过使本发明的上述有效成分溶解或混悬于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等，根据需要添加杀菌剂、稳定剂、等渗调节剂、止痛剂等来制备。另外，也可以制备固体组合物，然后在使用前溶解于无菌水或无菌注射用溶剂中使用。

作为外用制剂，包括经皮给药用或经粘膜(口腔内、鼻腔内)给药用的固体、半固体或液体制剂。另外也包括栓剂等。例如，可以制成乳剂、洗剂等乳浊剂，外用酊剂、经粘膜给药用的液体制剂等液体制剂，油性软膏、亲水性软膏等软膏剂，膜剂、贴剂(テ一プ剤)、泥敷剂等经皮给药用或经粘膜给药用的贴剂等。

以上的各种制剂分别使用公知的药物用载体等，可以通过常法适宜制备。另外，该制剂的有效成分的含量，考虑其给药方式、给药方法等，优选在下述的给药量范围内，只要是可以给与该有效成分的量就没有特别限定。例如，通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，在治疗药或预防药100重量％中，通常是0.001～100重量％，优选0.01～90重量％，更优选0.1～80重量％。另外，将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，在治疗药或预防药100重量％中，通常是0.000001～100重量％，优选0.00001～90重量％，更优选0.0001～80重量％。

本发明的有效成分与上述重组BMP-2并用时，相对于100重量份有效成分，重组BMP-2通常优选使用0.1～100000重量份左右。该有效成分与重组BMP-2并用时的比例，对于下述的成骨促进剂、BMP生成增强剂、食品、饮料、饲料是同样的。

本发明的治疗药或预防药按照与制剂形式相适应的适当的给药途径给药。给药方法没有特别限定，可以是内服、外用和注射。注射剂

例如可以静脉、肌内、皮下、皮内等给药，作为外用剂，例如栓剂，则可通过与栓剂相适应的给药方法给药。

本发明的治疗药或预防药的给药量根据该制剂形式、给药方法、使用目的和该治疗药或预防药的给药对象患者的年龄、体重、症状而适当设定，并不是一成不变的。通常按照制剂中含有的上述有效成分的给药量，例如，通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，人(例如成人)每日为0.0001mg～2000mg/kg体重，优选0.001mg～1000mg/kg体重，更优选0.01mg～100mg/kg体重。将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，人(例如成人)每日为0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.01μg～100mg/kg体重。当然给药量因各种条件，例如提取溶剂的种类、使用溶剂的用量等而变动，因此有比上述给药量少即足够的情形，也有需要超出上述范围的情形。可以在需要的给药量范围内，一天内单次给药，或分多次给药、也可以按规定的时间给药。另外，本发明的治疗药或预防药除了直接口服给药之外，可以添加到任意的饮料食品中进行日常的摄取。

另外，本发明还可以提供含有上述有效成分的成骨促进剂和BMP生成增强剂。作为该成骨促进剂和BMP生成增强剂，可以是上述有效成分自身，或也可以是含有上述有效成分的组合物。成骨促进剂和BMP生成增强剂，例如将上述有效成分与可以用于和该有效成分相同用途的其他成分等配合，按照上述治疗药或预防药的制备方法，可以制备为通常使用的试剂的形式。该成骨促进剂或BMP生成增强剂中上述有效成分的含量，考虑该成骨促进剂或BMP生成增强剂的给药方法、使用目的等，只要是能达到本发明所要求的效果的量即可，并没有特别限定。例如，通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，在成骨促进剂或BMP生成增强剂100重量％中，通常是0.001～100重量％，优选0.01～90重量％，更优选0.1～80重量％。另外，将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，在成骨促进剂或BMP生成增强剂100重量％中，通常是0.000001～100重量％，优选0.00001～90重量％，更优选0.0001～80重量％。

该成骨促进剂或BMP生成增强剂的用量，只要是能达到本发明所要求的效果的量即可，并没有特别限定。特别是用于向机体给药时，优选在治疗药或预防药的有效成分的给药量范围内，只要是可以给与该有效成分的量即可。本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂在与促进成骨或BMP生成增强相关的疾病中是有用的。

本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂可以包含于植入剂中使用。由此，例如在骨折时，通过使用该植入剂，促进骨接合，因此可以使骨的愈合或植入剂与骨组织的整合加速。在此，所谓植入剂是指在外科手术的过程中至少部分地被导入体内的器具，是针对关节、骨、牙、韧带或腱等的断裂或损伤而使用的。植入剂可以永远留在体内，或被生物降解吸收。本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂可以包含于植入剂的内部，或也可在植入剂表面包衣使之被含有。本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂的含量只要能得到所要求的效果可以使当设定。植入剂可以通过公知的方法使用本发明的有效成分来制备。

本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂可以包含于牙膏中使用。该牙膏通过本发明的成骨促进作用或BMP生成增强作用，可以进行牙周组织的再生、牙周炎的预防和促进再钙化。本发明的成骨促进剂或BMP生成增强剂的含量只要能得到所要求的效果可以适当设定。牙膏可以通过公知的方法使用本发明的有效成分来制备。

该成骨促进剂或BMP生成增强剂在与骨相关的疾病的药物筛选中也有用。进一步地，该成骨促进剂或BMP生成增强剂在与关于骨物理变化的功能研究中也有用。

本发明的有效成分如下述所未见毒性。另外，不用担心产生副作用。那是因为，只要使用该有效成分，就可以安全且适当地发挥促进成骨或BMP生成增强作用。因此，含有该有效成分的本发明的药物、食品、饮料或饲料，对需要促进成骨或增强BMP生成的疾病的治疗或预防有效。

本发明提供含有上述有效成分的用于促进成骨或增强BMP生成的食品、饮料或饲料。在此，所谓“含有”是指含有、添加和/或稀释的意思。本发明的食品、饮料或饲料，通过其促进成骨或BMP生成增强作用，对需要促进成骨或增强BMP生成的疾病症状的改善、预防极为有用。

在本说明书中，上述所谓“含有”是指在食品、饮料或饲料中含有本发明所使用的有效成分的形式；上述所谓“添加”是指在食品、饮料或饲料中添加本发明所使用的有效成分的形式；上述所谓“稀释”是指在本发明所使用的有效成分中，添加食品、饮料或饲料的原料的形式。

本发明的食品、饮料或饲料的制备方法没有特别限定。例如，配合、烹调、加工等可以按照一般的食品、饮料或饲料进行，按照它们的制备方法来制造，得到的食品、饮料或饲料中只要含有具有促进成骨或BMP生成增强作用的本发明的上述有效成分即可。

本发明的食品或饮料并没有特别限定，例如有：含有本发明的上述有效成分的谷物加工制品(小麦粉加工制品、淀粉类加工制品、预混加工制品、面类、通心粉类、面包类、豆馅包类、荞麦面类、麦麸、米粉、粉丝、包装糯米糕点等)、油脂加工制品(塑性油脂、炸油、色拉油、蛋黄酱、调味酱等)、大豆加工制品(豆腐类、豆酱、纳豆等)、食用肉类加工制品(火腿、腊肉、压制火腿、红肠等)、水产品(冷冻碎鱼肉、鱼糕、圆筒状鱼糕、鱼糕片、炸胡萝卜鱼肉片、汆鱼丸、筋、鱼肉火腿、肠、鲣鱼刨花、鱼卵加工制品、水产罐头、甜烹海味等)、乳制品(原料乳、奶油、酸乳酪、黄油、干酪、练乳、奶粉、冰激凌等)、蔬菜·果实加工制品(糊类、果酱类、咸菜类、果实饮料、蔬菜饮料、混合饮料等)、糕点类(口香糖、饴糖、巧克力、饼干类、糕点面包类、蛋糕、糯米糕点(日本式)、糯米饼干类等)、酒精饮料(日本酒、中国酒、葡萄酒、威士忌、烧酒、伏特加、白兰地、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、清凉酒精饮料、果酒、利口酒等)、嗜好饮料(绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、清凉饮料、乳酸饮料等)、调料(酱油、酱汁、醋、甜料酒等)、罐装·瓶装·袋装食品(牛肉饭、盖浇饭、红豆饭、咖哩、其它各种加工食品等)、半干燥或浓缩食品(肝酱、其它调味酱、荞面·面条汁、浓缩汤类等)、干燥食品(快餐面类、快餐咖哩、速溶咖啡、果汁粉、汤粉末、快餐酱汤、加工食品、加工饮料、加工汤等)、冷冻食品(鸡素烧、蒸鸡蛋羹、烤鳗鱼、汉堡牛排、烧麦、饺子、各种浓肉汤、果汁鸡尾酒等)、固态食品、液体食品(汤等)、香辣调料类等农产·林产加工制品、畜产加工制品、水产加工制品等。作为本发明的食品，特别优选口香糖、饴糖类等。该食品由于在口中咀嚼一定的时间，如果在其中含有本发明的有效成分，就可以通过本发明的有效成分来奏效，例如，可以使牙周组织的再生效果、促进牙的钙化的效果更有效地发挥。

本发明的食品或饮料含有、添加和/或稀释一种或多种上述有效成分，其含量只要是发挥其促进成骨或BMP生成增强作用所必要的量即可，对其形状没有特别的限定，也包括可以口服摄取的片状、颗粒状、胶囊状等形状。

本发明的饮料可以将本发明的有效成分与伞形科、百合科和菊科以外的植物例如它们以外的蔬菜或果实等的榨汁液混合、或与它们同时榨汁，制成健康饮料。例如将明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草的榨汁液用水稀释，与小松菜、芜菁、青梗菜、西红柿、柑桔、柠檬、葡萄柚、奇异果、菠菜、小萝卜、萝卜、白菜、卷心菜、做沙拉的生菜、生菜、秋葵、菜椒、黄瓜、菜豆、毛豆、豌豆、玉米、芝麻菜、枇杷、桔子、甘夏桔等的榨汁液，牛奶，豆浆等混合，制成具有促进成骨或BMP生成增强作用的健康饮料。

作为本发明饮料的一种实施方案的酒精饮料，本发明使用的伞形科、百合科和/或菊科植物，例如将明日叶、芹菜、百合、芦荟和/或艾草浸渍于饮用的酒精类中，将其直接或按照公知的酒精饮料的制造方法得到酒精饮料，该酒精饮料可供饮用。

在本发明中作为有效成分使用的来自植物的处理物，例如，将粉碎物、破碎物按照公知的方法制成片剂等的形式也包含于本发明的使品中。

本发明中食品或饮料中的上述有效成分的含量没有特别限定，从发挥其功能和活性的观点考虑可适当选择，例如在本发明中通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，在食品100重量％中，含量为0.1重量％以上，优选1～100重量％，更优选6～100重量％；在饮料100重量％中，含量为0.1重量％以上，优选1～100重量％，更优选6～100重量％。另外，将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，在食品100重量％中，含量为0.0001重量％以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％；在饮料100重量％中，含量为0.0001重量％以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％。另外，本发明的食品或饮料，当其中优选含有的有效成分为，例如，通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，人(例如成人)可以每日摄取0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.01μg～100mg/kg体重。将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，人(例如成人)每日为0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.01μg～100mg/kg体重。当然摄取量因各种条件，例如提取溶剂的种类、使用溶剂的用量等而变动，因此有比上述摄取量少即足够的情形，也有需要超出上述范围的情形。

本发明提供含有上述有效成分的、具有促进成骨或BMP生成增强作用的生物用饲料，进而，作为另一种实施方案，还提供生物的饲养方法，其特征在于给生物施用上述有效成分。另外作为本发明的另一种实施方案，提供生物饲养剂，其特征在于含有上述有效成分。在此，所谓“含有”是指上述的含有、添加和/或稀释的意思。

在这些发明中，所谓生物是例如养殖动物、宠物动物等，作为养殖动物例举有家畜、实验动物、家禽、鱼类、甲壳类或贝类。饲料例如有维持和/或改善身体状况的饲料。生物饲养剂例如有浸渍剂、饲料添加剂、饮料添加剂。

根据这些发明，在使用该发明的以上例举的生物中，基于本发明中使用的上述有效成分的促进成骨或BMP生成增强作用，有望发挥与本发明上述治疗药或预防药同样的效果。即，可以发挥该生物的需要促进成骨或增强BMP生成的疾病的治疗或预防效果。

本发明中使用的上述有效成分，通常例如在本发明中通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，对象生物每日施用0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.017μg～100mg/kg体重。将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，对象生物每日施用0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.01μg～100mg/kg体重。当然投与量因各种条件，例如提取溶剂的种类、使用溶剂的用量等而变动，因此有比上述投与量少即足够的情形，也有需要超出上述范围的情形。施用可以通过例如将该有效成分预先添加、混合到给对象生物的人工配合饲料的原料中，或与人工配合饲料的粉末原料混合后，再加入其他的原料，进行混合。另外，上述有效成分在饲料中的含量没有特别限定，可以根据目的适当决定，例如在本发明中通过使用20mL水作为提取溶剂的提取操作，从1g在本发明中被用作原料的植物干燥物得到提取物，将得到的提取物浓缩至5mL，以此作为有效成分时，在饲料100重量％中，含量为0.1重量％以上，优选1～100重量％，更优选6～100重量％。将本发明的化合物作为有效成分使用时，没有特别限定，在饲料100重量％中，含量为0.0001重量％以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％。

本发明饲料的制备方法并没有特别限定，其混合可以按照通常的饲料进行，只要所制备的饲料中含有具有促进成骨或BMP生成增强作用的本发明的上述有效成分即可。

生物饲养剂可以按照上述饲料的情况制备、使用。

可适用本发明的生物并没有特别限定，广泛适用于养殖动物中的马、牛、猪、羊、山羊、骆驼、驼羊等家畜；小鼠、大鼠、豚鼠、兔等实验动物；鸡、鸭、火鸡、鸵鸟等家禽；以及作为宠物动物的狗、猫等。

通过摄取含有本发明中使用的具有促进成骨或BMP生成增强作用的上述有效成分的饲料，或将对象生物浸泡于本发明中使用的具有促进成骨或BMP生成增强作用的上述有效成分的液体中，可以良好地维持或改善家畜、试验动物、家禽、动物宠物等的身体状况，另外，这些实施方案也成为本发明提供的生物饲养方法的一种方案。

接下来，对本发明的BMP生成增强作用的测定方法、具有BMP生成增强作用的物质的筛选方法和该物质的制备方法进行说明。这些方法都可以优选地用于：选择本发明中作为原料使用的植物、得到本发明的有效成分、评价本发明的有效成分和包含该有效成分的治疗药、食品等组合物所具有的BMP生成增强作用。

作为本发明的其他实施方案，提供供试品的BMP生成增强作用的测定方法(称为本发明的测定方法)，其特征在于包含(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤(以下，将这些细胞统称为本发明的细胞株)的步骤，和(b)以步骤(a)得到的培养液中的BMP量作为BMP生成增强作用的指标进行测定的步骤。

本发明的测定方法，在各种BMP生成细胞中，使用本发明的细胞株，首次稳定地测定了细胞的BMP生成量，完成了该测定方法。另外，后述的对具有BMP生成增强作用的物质的筛选方法和该物质的制备方法也是同样。

上述HuO9细胞(人骨肉瘤细胞)有市售的，可以得到。作为HuO9细胞的次代株，例如有自然变异株、人工变异株等变异株。上述人工变异株可以通过公知的变异处理例如诱变剂和紫外线照射来制备。作为使用这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤，可以通过公知的细胞融合操作来制备，例如通过与骨髓瘤细胞的细胞融合等方法得到的细胞株。

关于本发明的测定方法，对本发明中使用的细胞株培养用的培养基，没有特别限定，只要是选择能使该细胞生长发育的培养基即可，可以使用公知的市售培养基。作为本发明中使用的细胞株的培养时间，只要比因供试品的作用而提高细胞的BMP生成量所需要的时间长即可，没有特别限定，可以例举几分钟～10日，优选1小时～5日，更优选12小时～3日。关于培养温度，没有特别限定，可以在本发明中使用的细胞株的生长发育适宜的温度下进行培养，例如0～100℃，优选10～60℃，更优选20～50℃。

步骤(a)中在与供试品接触的条件下本发明细胞株的培养，可以通过例如在与本发明细胞株的培养开始的同时或培养过程中，对含有该细胞株的培养液中添加、混合供试品，开始或继续进行培养。供试品的添加量没有特别限定，为得到所要求的效果可以适当设定。作为添加供试品时培养液中的本发明细胞株的量，优选1×10³～1×10⁶细胞/mL左右。

培养一定时间后，在步骤(b)中，测定由本发明细胞株生成的BMP量。培养液中的BMP量的测定，没有特别限定，可以通过以下方法进行，例如酶联免疫测定法、放射免疫测定法、蛋白质印迹法，或将BMP的生物学作用，例如向成骨细胞的分化诱导能力作为指标进行的生物测定(例如参照，Katagiri等.，BBRC Vol.172，No.1，p295-299(1990)；Yamaguchi等.，BBRC Vol.120，No.2，p366-371(1996)；Takuwa等.，BBRC Vol.174，No.1，p96-101(1991))。

本发明的测定方法中，将由本发明细胞株生成的BMP量作为指标测定BMP生成增强作用。例如，如后述的实施例4，将不与供试品接触时由本发明细胞株生成的BMP量作为100％，通过相对地表示与供试品接触时的BMP量，可以定量地测定(评价)供试品的BMP生成增强作用。即，BMP量超过100％时，可以判定供试品具有BMP生成增强作用，BMP量用数值以相对量表示，以此可以定量地评价其作用。

作为本发明的其他实施方案，提供具有BMP生成增强作用的物质的筛选方法(以下称为本发明的筛选方法)，其特征在于，包含(a)在与供试品接触的条件下培养本发明细胞株的步骤，和(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量的步骤，在此，与在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞株时相比，BMP量多时，判定供试品具有BMP生成增强作用。

本发明的筛选方法可以与上述本发明的测定方法同样地实施。

例如，如上所述，将由不与供试品接触时的本发明细胞株生成的BMP量作为100％，通过相对地表示与供试品接触时的BMP量，定量地表示供试品的BMP生成增强作用，BMP量超过100％时，可以判定供试品具有BMP生成增强作用。另外，例如测定供试品和具有一定的BMP生成增强作用的对照物质(例如，上述式(A)所示的化合物)各自的BMP生成增强作用，将对照物质的BMP量作为100％，按照上述情形定量地表示供试品的BMP量，通过将两者比较，可以筛选具有更优异的BMP生成增强作用的物质。在此BMP生成增强作用的测定中，可以使用上述本发明的测定方法。

作为本发明的其他实施方案，提供具有BMP生成增强作用的物质的制备方法(以下称为本发明的制备方法1)，其特征在于，包含(a)得到具有BMP生成增强作用的物质的步骤、和(b)使用本发明的测定方法，测定步骤(a)中得到的物质的BMP生成增强作用的步骤。本发明的制备方法1在已经检定了BMP生成增强作用的BMP生成增强物质的制备中有用。

步骤(a)，可以通过例如按照上述本发明的筛选方法获得BMP生成增强物质来进行。

步骤(b)中，例如，可以由得到的BMP生成增强物质分离精制BMP生成增强成分。即，在步骤(b)中通过使用本发明的测定方法测定步骤(a)中得到的物质的BMP生成增强作用，以该作用作为指标，边确认BMP生成增强成分的精制程度，边进行分离精制操作，可以得到所需成分。BMP生成增强成分的分离精制，可以按照作为适用于本发明有效成分来自植物的处理物的方法上述公知方法进行。

作为本发明制备方法的一种实施形式，提供具有BMP生成增强作用的物质的制备方法(以下称为本发明的制备方法2)，其特征在于，包含(a)在与供试品接触的条件下培养本发明细胞株的步骤，和(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量的步骤，在此，和在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞株时相比，BMP量多时，判定供试品具有BMP生成增强作用，得到该供试品作为具有BMP生成增强作用的物质。

该本发明的制备方法2，可以与上述本发明的筛选方法同样地实施。在本发明的制备方法2中，判定供试品具有BMP生成增强作用时，得到该供试品作为具有BMP生成增强作用的物质。可将得到的具有BMP生成增强作用的物质供本发明的制备方法1使用，进行BMP生成增强成分的分离精制。

本发明中使用的上述有效成分，即使以发挥其作用的有效量对生物进行给药，也未见毒性。例如，口服给药时，即使将明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草的水提取物以1g/kg体重对小鼠单次给药，也未见死亡例。另外，即使上述有效成分对大鼠以1g/kg体重口服给药，也未见死亡例。

实施例

以下，举出实施例更详细地说明本发明，但是本发明并不受这些记载的任何限定。另外，只要无特别说明，实施例中的％是指体积％。

实施例1(E)-1-(5，6，7，8，8a，10a-六氢-1，7-二羟基-8，8，10a-三甲基-9H-呫吨-4-基)-3-(4-羟苯基)-2-丙烯-1-酮的制备

(1)往明日叶(Angelica keiskei Koidz.)根部的干燥粉末5.8kg中加入24L乙酸乙酯，室温下搅拌，进行3小时提取，抽滤过滤后，分离乙酸乙酯提取液和残渣。将乙酸乙酯提取液用旋转蒸发仪减压浓缩后，溶解于氯仿中，并使其全部吸附于硅胶BW-300SP(富士シリシア化学公司制：750mL)。接着依次用己烷∶氯仿＝2∶5(750mL)，氯仿(1000mL)，氯仿∶甲醇＝10∶1(1100mL)将吸附物梯度洗脱。

(2)将实施例1-(1)中得到的氯仿∶甲醇＝10∶1洗脱组分浓缩固化后，溶解于30mL氯仿中，使其中一半吸附于硅胶(BW-300SP，300mL)。接着依次用氯仿(1800mL)，氯仿∶甲醇＝500∶7(300mL)，乙酸乙酯(300mL)将吸附物梯度洗脱。

(3)将实施例1-(2)中得到的乙酸乙酯洗脱组分浓缩固化后，溶解于氯仿∶甲醇＝50∶1(20mL)中，吸附于硅胶(BW-300SP，300mL)。接着依次用氯仿∶甲醇＝500∶10(1200mL)，氯仿∶甲醇＝500∶13(500mL)，氯仿∶甲醇＝500∶19(500mL)，氯仿∶甲醇＝500∶22(800mL)，乙酸乙酯(500mL)将吸附物梯度洗脱，每1组分中取18mL。

(4)收集实施例1-(3)中得到的硅胶层析组分115号到155号，减压浓缩，溶解于7mL的二甲基亚砜中。将其中一半用反相色谱分离。树脂采用COSMOSIL 140C18-OPN(ナカライテスク公司制造：树脂量50mL)。接着依次用蒸馏水(40mL)，20％乙醇水溶液(50mL)，30％乙醇水溶液(50mL)，50％乙醇水溶液(第1次洗脱50mL，之后第2次洗脱50mL)，乙醇(50mL)进行洗脱。

(5)将实施例1-(4)的50％乙醇水溶液洗脱组分之中第1次洗脱部分50mL减压浓缩后，溶解于3mL的50％乙醇水溶液，使用反相色谱分离。以下叙述其条件。色谱柱使用TSK gel ODS-80Ts(21.5mm×30cm：东ソ-公司制造)。使用蒸馏水和乙腈以体积比1比1混合所得溶剂作为溶剂，洗脱速度是5mL/分钟，在215nm进行检测。以洗脱液的紫外吸收为指标收集反相色谱组分1～5。

(6)通过质谱分析仪(DX302：日本电子公司制造)，通过FAB-MS的手段测定实施例1-(5)中得到的反相色谱组分2(含有保留时间为24.1分钟检测峰的组分)的质谱(MS)。基质使用间硝基苄醇。结果检测出m/z 407(M-H)^-的峰。图1表示该质谱。图1中横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。接着，使用核磁共振(NMR)谱装置(AVANCE600型：Bruker BIOSPIN公司制造)，测定反相色谱组分2的各种NMR谱，进行结构解析。以下表示NMR的信号归属。另外，峰的归属号码如以下式(B)所示。

¹H-NMR：δ0.81(3H，s，7”-CH₃)，1.03(3H，s，7”-CH₃)，1.25(3H，s，3”-CH₃)，1.54(1H，m，5”-H)，1.61(1H，dd，J＝4.8，13.2Hz，2”-H)，1.71(1H，m，5”-H)，1.75(1H，m，4”-H)，1.87(1H，m，4”-H)，2.34(1H，dd，J＝13.2，16.8Hz，1”-H)，2.67(1H，dd，J＝4.8，16.8Hz，1”-H)，3.27(1H，m，6”-H)，4.65(1H，d，J＝4.8Hz，6”-OH)，6.47(1H，d，J＝8.4Hz，5’-H)，6.83(2H，d，J＝8.4Hz，3-H和5-H)，7.39(1H，d，J＝8.4Hz，6’-H)，7.42(1H，d，J＝15.6Hz，β-H)，7.48(1H，d，J＝15.6Hz，α-H)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz，2-H和6-H)，9.97(1H，br-s，4-OH)，10.22(1H，br-s，4’-OH)

¹H-NMR中，试样溶解于氘代二甲基亚砜中，氘代二甲基亚砜的残余质子的化学位移值表示为2.51ppm。图2表示¹H-NMR谱。图2中，横轴表示化学位移值，纵轴表示信号的强度。

¹³C-NMR：δ15.3(7”-CH₃)，18.8(1”-C)，20.7(3”-CH₃)，28.1(7”-CH₃)，28.9(5”-C)，38.3(4”-C)，38.9(7”-C)，46.4(2”-C)，76.8(6”-C)，77.9(3”-C)，107.7(5’-C)，110.4(3’-C)，116.8(3-C和5-C)，120.8(1’-C)，125.2(α-C)，127.1(1-C)，130.2(6’-C)，130.8(2-C和6-C)，141.2(β-C)，154.9(2’-C)，160.3(4-C)，160.6(4’-C)，189.8(C＝O)

¹³C-NMR中，试样溶解于氘代二甲基亚砜中，氘代二甲基亚砜的化学位移值表示为40.2ppm。图3表示¹³C-NMR谱。图3中，横轴表示化学位移值，纵轴表示信号的强度。

以上，通过对反相色谱组分2进行质谱、NMR谱分析的结果，确定了反相色谱组分2是(E)-1-(5，6，7，8，8a，10a-六氢-1，7-二羟基-8，8，10a-三甲基-9H-呫吨-4-基)-3-(4-羟苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量408，以下称为化合物a)。

实施例2化合物a诱导ST-2细胞分化为成骨细胞的作用

(1)将小鼠的间充质细胞株ST-2混悬于含有10％胎牛血清(BioWhittaker公司制造)的DMEM培养基(Bio Whittaker公司制造)中，使达到3×10⁴细胞/mL，在96孔的平板中各接种0.1mL，在无菌条件下培养。培养2日后，更换新培养基。往其中添加作为试样的实施例1中得到的来自明日叶根的化合物a，培养3日。接着，以碱性磷酸酶为指标，测定ST-2细胞向成骨细胞的分化。用PBS洗涤细胞一次，加入反应基质液(100mM二乙醇胺缓冲液pH10.0，2mM氯化镁，1mM对硝基苯基磷酸酯)100μL，在37℃反应30分钟。接着，加入0.2N的氢氧化钠100μL使反应停止，在405nm测定游离的对硝基苯酚量。以不添加试样的作为对照，以对照的碱性磷酸酶活性为100％表示诱导分化为成骨细胞的活性。试样的添加量如表1所示。该实验连续进行两次，取其平均值。其结果表明化合物a浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化。表1表示其结果。

表1化合物a诱导ST-2细胞分化为成骨细胞的活性

添加量(μM)              碱性磷酸酶活性(％)

0                        100

0.313                    219.4

0.625                    259.6

1.25                     358.3

实施例3化合物a诱导MC3T3-E1细胞分化成成骨细胞的作用

将小鼠的前成骨细胞株MC3T3-E1混悬于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，使达到3×10⁴细胞/mL，在96孔的平板中各接种0.1mL，在无菌条件下培养。培养2后，更换新培养基。往其中加入作为试样的实施例1中得到的来自明日叶根的化合物a，培养5日。接着，以碱性磷酸酶为指标，用与实施例2相同的方法测定向成骨细胞的分化。其结果表明化合物a浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化。表2表示其结果。

表2化合物a诱导MC3T3-E1细胞分化为成骨细胞的活性

添加量(μM)                  碱性磷酸酶活性(％)

0                            100

1.25                         171.0

2.5                          292.2

实施例4明日叶的BMP-2生成增强作用

(1)相对于粉碎的明日叶根干燥物2g，加水40mL，搅拌下在60℃提取30分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，重复进行2次同样的操作。收集得到的上清液，浓缩至10mL，制备明日叶根水提取物。

(2)将人骨肉瘤细胞HuO9混悬于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，使达到1×10⁵细胞/mL，在96孔的平板中各接种0.1mL，在无菌条件下培养。培养2后，更换新培养基。往其中加入作为试样的实施例4-(1)中得到的明日叶根水提取物，培养48小时。接着，通过酶联免疫测定法(BMP-2 Immunoassay：GT公司制造)测定培养液中成骨蛋白质-2(BMP-2)的浓度。以不添加试样的作为对照，以该细胞培养液中的BMP-2浓度为100％表示BMP-2生成增强活性。试样的添加量如表3所示。该实验连续进行两次，取其平均值。其结果表明实施例4-(1)得到的明日叶根水提取物浓度依赖性地增强BMP-2的生成。表3表示其结果。

表3明日叶根水提取物的BMP-2生成增强作用

添加量(％)                   BMP-2生成增强活性(％)

0                            100.0

0.625                        192.8

1.25                         277.7

2.5                          405.0

对照的BMP-2生成量为0.270ng/ml。

实施例5明日叶诱导分化成成骨细胞的作用

将小鼠胚细胞株C3H10T1/2混悬于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，使达到3×10⁴细胞/mL，在96孔的平板中各接种0.1mL，在无菌条件下培养。培养3日后，更换新培养基。往其中加入作为试样实施例4-(1)中得到的明日叶根水提取物，培养6。接着，以碱性磷酸酶为指标，用与实施例2相同的方法测定向成骨细胞的分化。其结果表明实施例4-(1)得到的明日叶根水提取物浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化。表4表示其结果。

表4明日叶根水提取物诱导分化为成骨细胞的作用

添加量(％)               碱性磷酸酶活性(％)

0                        100.0

0.025                    137.1

0.05                     153.4

0.1                      159.4

0.2                      202.9

实施例6来自明日叶根水提取物的COSMOSIL分段物的BMP-2生成增强作用

(1)相对于粉碎的明日叶根干燥物3kg，加水30L，搅拌下在60℃提取60分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，加水20L，搅拌，室温下提取60分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。合并上清液，制备明日叶根水提取液45L。

(2)使用反相色谱对实施例6-(1)中得到的明日叶根水提取液进行分离。其条件如下。树脂使用COSMOSIL 140C18-OPN(树脂量700mL)。提供明日叶根水提取液1.5L，依次用水(2.1L)，10％乙醇(2L)，20％乙醇(2.3L)，40％乙醇(2L)，60％乙醇(3.5L)作为展开溶剂进行洗脱，得到各COSMOSIL分段物。

(3)将实施例6-(2)中得到的各COSMOSIL分段物的1/50量浓缩至10mL。用与实施例4-(2)相同的方法测定各浓缩物的BMP-2生成增强活性。其结果表明水洗脱组分，10％乙醇洗脱组分，20％乙醇洗脱组分具有BMP-2生成增强活性。表5表示其结果。

表5

组分                      试样浓度(％)          BMP-2生成增强活性(％)

                          0                     100

水活脱组分                1.25                  438.5

                          2.5                   753.7

                          5                     1079

                          10                    1064

10％乙醇洗脱组分          1.25                  198.2

                          2.5                   283.5

                          5                     394.6

                          10                    637.5

20％乙醇洗脱组分          1.25                  180.1

                          2.5                   167.2

                          5                     244.7

                          10                    376.5

对照的BMP-2生成量为0.126ng/ml。

实施例7来自明日叶根水提取物的硅胶柱分段物的BMP-2生成增强作用

(1)实施例6-(1)得到的明日叶根水提取物之中，将41L浓缩至19L，制备明日叶根水提取浓缩液。

(2)往实施例7-(1)得到的明日叶根水提取浓缩液300mL中加入200mL乙醇，室温下静置1小时，然后进行离心分离使上清液和沉淀分离。向沉淀中加入300mL蒸馏水，反复进行同样的操作。合并得到的上清液，浓缩固化后，溶解于108mL蒸馏水中，制备来自明日叶根水提取物的乙醇沉淀处理物。

(3)使用硅胶柱层析对实施例7-(2)得到的来自明日叶根水提取物的乙醇沉淀处理物进行分离。其条件如下。将25mL来自明日叶根水提取物的乙醇沉淀处理物浓缩固化后，溶解于体积比为6比3的氯仿和乙醇的混合溶液中，将其吸附于硅胶BW-300SP(树脂量300mL)上。接着，依次用氯仿∶乙醇＝6∶3(600mL)，氯仿∶乙醇∶水＝30∶15∶1(900mL)，氯仿∶乙醇∶水＝12∶8∶1(500mL)，乙醇∶水＝10∶1(600mL)，乙醇∶水＝20∶3(200mL)，乙醇∶水＝4∶1(250mL)，乙醇∶水＝1∶1(300mL)的梯度洗脱吸附物。

收集氯仿∶乙醇∶水＝12∶8∶1的后面一半洗脱部分(200mL)和乙醇∶水＝10∶1前半洗脱部分(200mL)，得到硅胶柱洗脱组分1。收集乙醇∶水＝10∶1的后面一半洗脱部分(400mL)和乙醇∶水＝20∶3洗脱部分、乙醇∶水＝4∶1洗脱部分，得到硅胶柱洗脱组分2。将乙醇∶水＝1∶1洗脱部分作为硅胶柱洗脱组分3得到。

(4)将实施例7-(3)中得到的各硅胶柱分段物的1/5量浓缩至1.25mL。用与实施例4-(2)相同的方法测定各浓缩物的BMP-2生成增强活性。其结果表明表6所示组分具有BMP-2生成增强活性。

表6

                                试样浓度        BMP-2生成增强活性

组分(洗脱溶剂的组成)            (％)            (％)

                                0               100

组分1                           0.625           152.2

(氯仿∶乙醇∶水＝12∶8∶1       1.25            185.1

、乙醇∶水＝10∶1)              2.5             307.5

组分2                           0.625           191.0

(乙醇∶水＝10∶1、              1.25            310.4

20∶3、4∶1)                    2.5             492.5

                                5               558.2

组分3                           0.625           244.8

(乙醇∶水＝1∶1)                1.25            420.9

                                2.5             671.6

                                5               803.0

对照的BMP-2生成量为0.096ng/ml。

实施例8芹菜叶部水提取物的BMP-2生成增强作用

(1)相对于粉碎的芹菜叶部干燥物2g，加水40mL，搅拌下在60℃提取30分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，重复进行2次同样的操作。收集得到的上清液，浓缩至10mL，制备芹菜叶部水提取物。

(2)用与实施例4-(2)相同的方法测定实施例8-(1)制备的芹菜叶部水提取物的BMP-2生成增强活性。其结果表明芹菜叶部水提取物具有BMP-2生成增强活性。

表7芹菜叶部水提取物的BMP-2生成增强作用

添加量(％)             BMP-2生成增强活性(％)

0                      100

2.5                    171.8

5.0                    527.0

对照的BMP-2生成量为0.119ng/ml。

实施例9芦荟水提取物的BMP-2生成增强作用

(1)相对于粉碎的芦荟干燥物2g，加水40mL，搅拌下在60℃提取30分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，重复进行2次同样的操作。收集得到的上清液，浓缩至10mL，制备芦荟水提取物。

2)用与实施例4-(2)相同的方法测定实施例9-(1)制备的芦荟水提取物的BMP-2生成增强活性。其结果表明芦荟水提取物具有BMP-2生成增强活性。

表8芦荟水提取物的BMP-2生成增强作用

添加量(％)             BMP-2生成增强活性(％)

0                      100

5.0                    238.5

对照的BMP-2生成量为0.274ng/ml。

实施例10艾草水提取物的BMP-2生成增强作用

(1)相对于粉碎的艾草干燥物2g，加水40mL，搅拌下在60℃提取30分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，重复进行2次同样的操作。收集得到的上清液，浓缩至10mL，制备艾草水提取物。

(2)用与实施例4-(2)相同的方法测定实施例10-(1)制备的艾草水提取物的BMP-2生成增强活性。其结果表明艾草水提取物具有BMP-2生成增强活性。

表9艾草水提取物的BMP-2生成增强作用

添加量(％)              BMP-2生成增强活性(％)

0                       100

0.25                    383.4

0.5                     461.5

对照的BMP-2生成量为0.119ng/ml。

实施例11芦荟水提取物诱导分化成成骨细胞的作用

用与实施例5相同的方法测定实施例9-(1)中制备的芦荟水提取物诱导分化成成骨细胞的作用。其结果表明实施例9-(1)中得到的芦荟水提取物浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化。表10表示其结果。

表10芦荟水提取物诱导分化为成骨细胞的作用

添加量(％)                 碱性磷酸酶活性(％)

0                          100

0.125                      118.3

0.25                       125.4

0.5                        131.7

1                          184.6

2                          249.6

实施例12百合花水提取物诱导分化成成骨细胞的作用

(1)相对于粉碎的百合花部干燥物2g，加水40mL，搅拌下在60℃提取30分钟。接着进行离心分离使上清液和沉淀分离。对于沉淀，重复进行2次同样的操作。收集得到的上清液，浓缩至10mL，制备百合花水提取物。

(2)用与实施例5相同的方法测定实施例12-(1)中制备的百合花水提取物诱导分化成成骨细胞的作用。其结果表明实施例12-(1)中得到的百合花部水提取物浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化。表11表示其结果。

表11百合花水提取物诱导分化为成骨细胞的作用

添加量(％)                  碱性磷酸酶活性(％)

0                           100

0.013                       97.9

0.025                       137.5

0.05                        175.7

0.1                         280.8

0.2                         290.4

实施例13明日叶根水提取物和重组人BMP-2诱导分化成成骨细胞的作用的协同作用

将小鼠胚细胞株C3H10T1/2混悬于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，使达到3×10⁴细胞/mL，在96孔的平板中各接种0.1mL，在无菌条件下培养。培养4后，更换新培养基。往其中加入作为试样的实施例4-(1)中得到的明日叶根水提取物和重组人BMP-2(GT公司制造)，培养11日。接着，以碱性磷酸酶为指标，用与实施例5相同的方法测定向成骨细胞的分化。其结果表明重组人BMP-2浓度依赖性地诱导向成骨细胞的分化，但通过并用明日叶根水提取物，增强了向成骨细胞的分化诱导作用。表12表示其结果。

表12明日叶根水提取物和人BMP-2诱导分化为成骨细胞的作用

重组人BMP-2       明日叶根水提取物  碱性磷酸酶活性

(ng/ml)                (％)            (％)

0                      0               100.0

0                      0.05            190.5

500                    0               379.6

500                    0.05            745.6

1000                   0               687.1

1000                   0.05            1404.1

实施例14明日叶根水提取物诱导间充质干细胞分化成成骨细胞的作用

将人间充质干细胞(TAKARA BIO公司制造)混悬于含有10％胎牛血清的DMEM培养基(TAKARA BIO公司制造)中，使达到1.2×10⁴细胞/mL，在48孔的平板中各接种0.5mL，在无菌条件下培养。培养5日后，更换为含有5mMβ-甘油磷酸、100nM地塞米松的新培养基。在该培养基中添加实施例4-(1)中得到的明日叶根水提取物作为试样进行培养。每3、4更换培养基。人间充质干细胞向成骨细胞的分化以碱性磷酸酶活性和细胞的钙蓄积量作为指标。用与实施例2相同的方法测定碱性磷酸酶活性，表示为1分钟每孔游离的对硝基苯酚量。细胞中蓄积的钙量是如下测定的，往用PBS洗涤过的细胞中加入6N盐酸，对于进行超声波破碎的溶液，使用钙定量盒(Calucium E-testWako，和光纯药工业公司制造)测定。

其结果，明日叶根水提取物随时间强力地促进在间充质干细胞分化为成骨细胞时伴随的碱性磷酸酶活性和在成骨细胞成熟中伴随的钙蓄积。表13表示碱性磷酸酶活性的测定结果，表14表示细胞的钙蓄积的测定结果。

表13

明日叶根水提取物(％)	细胞的碱性磷酸酶活性(pmol对硝基酚/分钟/孔)
					培养时间(日)
	0	7	14	21
					00.1	50.550.5	786.52277.7	2490.25022.9	3656.04724.1

表14

明日叶根水提取物(％)	钙向细胞中的蓄积(μg钙/孔)
					培养时间(日)
	0	14	21	28
					00.1	0.9100.910	2.1402.575	2.2884.832	3.19258.127

工业实用性

本发明提供含有来自伞形科、百合科或菊科植物的处理物、用于治疗或预防需要促进成骨或增强成骨蛋白质生成的疾病的药物、成骨作用促进剂或BMP生成增强剂、食品、饮料或饲料。该药物可以作为骨质疏松症、骨折等与骨相关疾病的治疗药或预防药。另外，成骨作用促进剂或BMP生成增强剂，可以用作骨折治疗、牙治疗中使用的植入剂、牙膏。另外，该制剂在骨功能研究、BMP生成增强药物的筛选中也有用。另外，该食品或饮料，通过作为日常的饮料食品摄取，可以改善需要促进成骨或增强BMP生成的疾病的症状。另外，通过使动物摄取该饲料也可以期待同样的效果。

Claims (13)

1.需要促进成骨或增强成骨蛋白质生成的疾病治疗药或预防药，其特征在于，含有选自下述(a)～(c)中的来自植物的处理物作为有效成分：

(a)来自伞型科植物的处理物

(b)来自百合科植物的处理物

(c)来自菊科植物的处理物。

2.根据权利要求1所述的治疗药或预防药，其中，植物是明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草。

3.成骨促进剂或成骨蛋白质生成增强剂，其特征在于，合有选自下述(a)～(c)中的来自植物的处理物作为有效成分：

(a)来自伞型科植物的处理物

(b)来自百合科植物的处理物

(c)来自菊科植物的处理物。

4.根据权利要求3所述的成骨促进剂或成骨蛋白质生成增强剂，其中，植物是明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草。

5.用于促进成骨或增强成骨蛋白质生成的食品、饮料或饲料，其特征在于，含有选自下述(a)～(c)中的来自植物的处理物作为有效成分：

(a)来自伞型科植物的处理物

(b)来自百合科植物的处理物

(c)来自菊科植物的处理物。

6.根据权利要求5所述的食品、饮料或饲料，其中，植物是明日叶、芹菜、百合、芦荟或艾草。

7.需要促进成骨或增强成骨蛋白质生成的疾病治疗药或预防药，其特征在于，含有下式(A)所示的化合物、其衍生物或它们的盐作为有效成分。

8.成骨促进剂或成骨蛋白质生成增强剂，其特征在于，含有权利要求7所述的式(A)所示的化合物、其衍生物或它们的盐作为有效成分。

9.用于促进成骨或增强成骨蛋白质生成的食品、饮料或饲料，其特征在于，含有权利要求7所述的式(A)所示的化合物、其衍生物或它们的盐作为有效成分。

10.成骨蛋白质生成增强作用的测定方法，其特征在于，包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)将步骤(a)得到的培养液中的BMP量作为供试品的BMP生成增强作用的指标进行测定的步骤。

11.具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的筛选方法，其特征在于，包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量的步骤，在此，与在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞时相比，BMP量多时，可以判断供试品具有BMP生成增强作用。

12.具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的制备方法，其特征在于，包含下述步骤：

(a)得到具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的步骤，和

(b)使用权利要求10的测定方法，测定在步骤(a)中得到的物质的成骨蛋白质生成增强作用的步骤。

13.具有成骨蛋白质生成增强作用的物质的制备方法，其特征在于，包含下述步骤：

(a)在与供试品接触的条件下，培养使用HuO9细胞或其次代株、或这之中任意一种细胞株得到的杂交瘤的步骤，和

(b)测定步骤(a)得到的培养液中的BMP量的步骤，在此，与在不与供试品接触的条件下或与具有BMP生成增强作用的对照物质接触的条件下培养上述细胞时相比，BMP量多时，可以判断供试品具有BMP生成增强作用，作为具有BMP生成增强作用的物质而取得该供试品。

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