CN1670203A - 一种食品级木聚糖酶及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明为一种食品级木聚糖酶及其生产方法，它采用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为菌种，经培养、发酵、提纯、溶析等工序制得，其液体发酵酶活力为2500～3500IU/ml，固体发酵酶活力为50000～100000IU/g；最适作用温度为45～55℃，最适作用pH为6.5～7.5，常温保存180天酶活力损失低于5％。本发明选用的菌株为短小芽孢杆菌，性能稳定，酶系纯，该菌株不产毒，酶产品为无毒产品，符合食品工业标准。该菌株易培养，发酵周期短，仅14～18小时，液体发酵酶活高，达到2500～3500IU/ml，生产成本低。本方法采用价格低廉的农副产品生产木聚糖酶，使原料成本降低50％，附加值高。

Description

一种食品级木聚糖酶及其生产方法

技术领域：

本发明属生物工程领域，涉及菌种发酵制备酶的技术。

背景技术：

木聚糖酶(1，4-β-D-xylan xylanohydrolase，EC.3.2.18)是一类木聚糖降解酶系，属于水解酶类，包括内切β-木聚糖酶、外切β-木聚糖酶和β-木二糖苷酶。内切β-木聚糖酶作用于木聚糖主链的木聚糖苷键，水解木聚糖随机切断主链内的糖苷键，而生成分子量大小不同的寡糖。外切β-木聚糖酶作用于木聚糖主要是从非还原性末端切下一个个的单糖，β-木二糖酶是将木二糖水解成两个单糖。木聚糖酶是现代生物工程技术的最新科研成果，现在已知能够产生木聚糖酶的菌种包括多种真菌和细菌，所用的菌种不同、方法不同，生产的木聚糖酶理化性质、分子量各不相同，酶活力和催化特性有相当大的差异，最适pH、最适作用温度及金属离子对酶活性的影响各不相同，不同的应用范围对木聚糖酶的要求也各不相同。近年来，木聚糖在食品工业、饲料工业、造纸工业、酒精工业等行业中有着十分诱人的应用前景，国外将木聚糖酶应用于食品工业作为食品改良剂，用来生产低聚木糖作功能性保健品配料，用作饲料添加剂以增加其利用率，应用于造纸工业中用于预漂白以改善纸浆性能，用于水解农业有机废料生产酒精，人们还将其与其它酶制剂一起应用于纺织工业中。

随着市场对木聚糖酶应用范围的拓展，国内外对木聚糖酶的菌种筛选和发酵条件的研究工作也陆续增加，综合有关文献报道内容可以看出，当前木聚糖酶的研究还存在着两方面不足，一是酶活力偏低，文献报道数据木聚糖酶液体发酵酶活力最高不超过450-750IU/ml，固体发酵酶活力为4000-5000IU/g，生产成本较高，达不到工业化生产水平；二是酶提取工艺水平低，产品大部分为黄色或淡黄色，而且其中含有大量培养基残渣及其它杂质，达不到食品级酶制剂标准要求，影响其在食品上的应用。

国外曾有用黑曲霉A3菌株生产木聚糖酶用于食品工业的报道，但由于用其发酵生产的木聚糖酶酶活力低，仅有300-400IU/ml，生产周期在48小时以上，成本高，所产酶最适反应PH为4.6，偏酸性，而食品工业生产绝大多数为中性，用于食品工业并不适宜。

中国科学院微生物研究所2002.10.14申请的02131439.x发明专利公开了一种利用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)发酵生产木聚糖酶的方法，该方法制得的木聚糖酶酶活力可达650～750IU/ml，其应用范围是造纸和饲料工业，由于所得木聚糖酶中未经严格提纯，杂质含量偏高，尚不能满足食品工业的要求。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有较强酶活力，安全无毒，可在食品工业中应用的木聚糖酶及其生产方法。

本发明所提供的木聚糖酶是一种食品级的木聚糖酶，它采用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为菌种，经培养、发酵、提纯、溶析等工序制得的；其液体发酵酶活力为2500～3500IU/ml，固体发酵酶活力为50000～100000IU/g；最适作用温度为45～55℃，最适作用pH为6.5～7.5，常温保存180天酶活力损失低于5％。

上述木聚糖酶中，重金属(以Pb计)≤40mg/kg，菌落总数≤1000cfu/g，大肠菌群≤10MPN/100g，沙门氏菌(25g样)不得检出，符合食品工业卫生、安全标准。

本发明所提供的木聚糖酶生产方法包括菌种培养、发酵、提纯、溶析等主要工序：其中菌种培养工序：以短小芽孢杆菌为生产菌种，采用试管斜面菌种→茄形瓶斜面菌种培养方法；发酵工序：采用细菌深层发酵工艺，由种子罐和发酵罐二级发酵；提纯工序：增加了絮凝技术—向发酵液中添加絮凝剂、膜过滤技术—采用陶瓷微滤膜和聚砜超滤膜进行二次过滤、酶稳定剂技术—向浓缩液中添加稳定剂；溶析技术—采用食用酒精溶析提取木聚糖酶。

(1)菌种培养：

本发明所述的木聚糖酶生产方法中采用短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)为生产菌种。该菌株属于芽孢杆菌属，短小芽孢杆菌。由中国科学院微生物研究所对该菌种进行鉴定，鉴定结果如下：

该菌株属于芽孢杆菌属，短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。为好氧菌，最低生长温度5～15℃，最高生长温度45～49℃，菌体长2～3微米，宽0.6～0.7微米。孢子柱状中生，无明显膨胀，革兰氏阳性。周生鞭毛，能运动，液化明胶能力强，不水解淀粉，发酵葡萄糖产酸不产气，可以利用阿拉伯糖、木糖、甘露糖代替葡萄糖产酸，V-P反应阳性，过氧化氢酶阳性，卵黄反应为阴性。在含7％氯化钠的培养基中可以生长，在柠檬酸盐琼脂上产碱，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐，适应生长的pH范围宽，从pH5.0-pH8.0均能良好生长。

本发明所述的木聚糖酶生产方法中菌种培养采用试管斜面菌种→茄形瓶斜面菌种培养方法，其培养基组分和培养条件如下：

培养基组分：酵母膏0.2％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.2％，琼脂1.8-2.0％(重量％)，其余为水。PH7.0～7.2。

培养条件：30～32℃恒温培养三天。

(2)发酵工序：

本发明所述的木聚糖酶生产方法中的发酵工艺采用细菌深层发酵工艺，由种子罐和发酵罐二级发酵。其培养基组分和发酵条件如下：

培养基组分为：水洗麸皮(1.5～3)％，豆饼粉(1.5～3)％，玉米芯(1～2)％，磷酸氢二钾(0.5～1)％，硫酸镁(0.1～0.3)％，硫酸铵(0.5～1)％(重量％)，其余为水。PH为6.5～7.5。灭菌处理：压力1kg/cm²、温度120～125℃下灭菌30分钟。

上述发酵培养基中，玉米芯为菌种产木聚糖酶的诱导物可刺激菌种产酶；水洗麸皮是用水将麸皮中的淀粉洗掉，提供菌种单一碳源，有利于产酶；硫酸镁为菌种产酶激活剂，有利于提高菌种产酶力。

发酵过程和条件为：采用茄形瓶种子→种子罐→发酵罐的工艺路线。种子罐发酵培养10-11h左右，开始进行镜检，观察细菌的形态，测定细菌个数，PH值和酶活等指标的变化情况。13-14hr左右，菌种达到对数生长期，转接发酵罐。发酵温度31-32℃，罐压0.5-0.8kg/cm²，通气量0-7h为1∶0.3-0.5(vvm)，7-15h为1∶0.7-0.8(vvm)，15h以后为1∶0.3-0.5(vvm)。(vvm代表每分钟通人气体占液体体积的份数，液体体积为1)。发酵12h后开始进行检测酶活，酶活达最高时发酵结束。

(3)提纯工序：

为了确保本发明木聚糖酶产品能够达到食品级卫生安全标准，本发明所述的木聚糖酶生产方法中改进和完善了发酵液中木聚糖酶的提纯工序，它包括絮凝，过滤去除残存培养基、菌体和杂质，浓缩，吸附，溶析，过滤、干燥、包装等步骤，其突出特点在于本发明技术方案对絮凝、膜过滤、酶稳定技术的创新改进。

其工艺流程如下：

絮凝剂           硅藻土                     去除菌体和杂质

  ↓               ↓                            ↑

发酵液→板框压滤→滤液→板框压滤→澄清酶液→陶瓷膜二次过滤→超滤膜

           ↓

     去除培养基残渣

浓缩→浓缩液→吸附剂吸附→酒精溶析沉淀→板框压滤→滤饼→

        ↑

      稳定剂

冷冻干燥→粉碎→灭菌→包装→化验检测→成品木聚糖酶制剂

具体操作过程为：发酵结束后，向发酵液中添加絮凝剂，使发酵液中残存培养基进行絮凝，然后进行板框压滤，去除发酵培养基残渣；添加硅藻土吸附杂蛋白，板框压滤得到澄清酶液；再进行陶瓷膜二次过滤，去除发酵液中的菌体和杂质；过滤清夜进入超滤设备，通过超滤膜超滤浓缩，浓缩液酶活控制在10000-20000u/ml之间；浓缩液添加稳定剂和吸附剂玉米淀粉，并开动搅拌10～20分钟，添加食用酒精，对酶液中的木聚糖酶进行溶析，60分钟后进行板框压滤，收集酶饼，并将酶饼进行冷冻干燥，得到干燥酶粉。

上述提纯工序中絮凝技术的特征如下：

絮凝剂的成分和用量：磷酸氢二钠1～2％、氯化钙0.5～1％、聚丙烯酰胺0.01～0.03％(占发酵液重量百分数)。

絮凝操作过程及条件：首先向发酵液中加入磷酸氢二钠，开动搅拌20～30分钟，使它完全溶解，然后加入氯化钙，开搅拌10～20分钟，将发酵液转入絮凝罐，调节ph至6.5～7.5，缓慢加入聚丙烯酰胺，最后开搅拌5～10分钟，进行絮凝。

作用：磷酸氢二钠和氯化钙加入发酵液后能形成强大的凝胶，再加入聚丙烯酰胺进一步形成更大凝胶，使发酵液中的培养基残渣和大部分菌体进行絮凝，便于过滤去除杂质。

上述提纯工序中膜过滤技术的特征为如下：：

采用过滤直径为0.2μm的陶瓷微滤膜对酶液进行初次过滤，去除杂质和菌体，再采用分子量截留为10000D的聚砜超滤膜进行二次过滤，去除小分子杂质，并将酶液进行浓缩，操作温度5～35℃，操作压力2～5kg/cm²。

上述提纯工序中酶稳定技术—向浓缩液中添加稳定剂的特征如下：

稳定剂成分和用量：壳聚糖0.1-0.5％，β-环状糊精0.5-1％(占发酵液重量百分数)。

稳定剂的作用功能特点：壳聚糖对酶具有强大吸附作用，将酶吸附，β-环状糊精具有环状结构将酶进行包埋，使酶处于一个相对稳定的环境中，减少因为酒精提取过程中酒精对酶的破坏作用，酶提取率可提高10-15％。

上述提纯工序中溶析技术的特征如下：

添加重量为酶液的5～8％的玉米淀粉为吸附剂吸附并采用食用酒精对酶液中的木聚糖酶进行溶析，食用酒精含量为90～95％，添加量使酶液中酒精最终浓度达到65～75％，提取木聚糖酶。

上述提纯工序中其它操作过程可参照类似的公知技术。

本发明所述的木聚糖酶，为食品级木聚糖酶，其各项指标均达到食品工业标准要求，它可应用于食品工业的多种领域，如用于面包、馒头工业化生产中，可提高和改善面包、馒头的组织结构，增加内部气孔均匀度，提高面包、馒头的高挺度和弹性，使面包、馒头的体积增大15～20％，提高馒头的白度，可以代替化学添加剂使用。

本发明所述的木聚糖酶产品质量标准如下：

外观：灰白色粉末，无潮解结块现象。

理化指标：

   表1  木聚糖酶产品的理化指标

项目	指标
		酶活力IU/g    ≥	50000
细度(通过100目标准筛)％	100

酶活力单位IU/g：在50℃、PH值7.2条件下，每分钟产生1微摩尔(μmol)木糖的酶量为一个酶活力单位(测试方法附后)。

卫生指标：

表2  木聚糖酶产品的卫生指标

重金属(以Pb计)，mg/kg ≤	40
		铅(以Pb计)，mg/kg     ≤	10
砷(以As计)，mg/kg     ≤	3
		菌落总数，cfu/g       ≤	1000
大肠菌群，MPN/100g    ≤	10
		沙门氏菌(25g样)	不得检出

保质期：在常温条件下保存，木聚糖酶制剂保质期不少于180天(在保质期内不低于标示酶活力)。

毒性、安全性检测：

(1)产酶菌株毒力试验：产酶菌株经中国疾病卫生防疫控制中心进行菌种毒力试验检测，检测结果表明：短小芽孢杆菌的BCP培养原液和5倍浓缩液组与各自对照组相比，小鼠体重增长无显著性差异，同时未观察到受试小鼠有毒性反应或死亡，即该菌株不产毒。

(2)产品安全性毒理学试验：该菌株生产的木聚糖酶发酵液及固体产品经山东省疾病预防控制中心进行毒理安全试验证实，该酶是安全的。小鼠急性毒性试验表明该样品属实际无毒物质；Ames试验：结果为阴性；小鼠骨髓嗜多染红细胞微和试验结果为阴性；小鼠精子畸形试验：结果为阴性；大鼠30天喂养实验表明该样品30天喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。

本发明所述的木聚糖酶最佳作用条件：

(1)温度对酶活力的影响

测定了酶在不同温度下表现的酶活力，结果表明酶的最适作用温度在45～55℃，见附图1。

(2)作用pH值对酶活力的影响

测定了酶在不同pH环境下表现的酶活力，结果表明酶的最适作用pH为6.5～7.5，见附图2。

其中横坐标阿拉伯数字所代表的pH数值为：1.pH3.82.pH4.8  3.pH5.8  4.pH6.5  5.pH7.0  6.pH7.2  7.pH7.88.pH8.5  9.pH9.0

本发明所述的木聚糖酶的稳定性：

(1)液体木聚糖酶的热稳定性

将液体木聚糖酶分别在4℃和30-65℃的条件下，保温0.5hr、1hr和2hr，然后按标准条件测定剩余酶活力。结果表明，酶在40℃以下酶活较稳定，随着温度的增高，酶活力损失很快。结果见表3。

               表3：液体木聚糖酶的热稳定性

温度/℃	相对酶活(0.5hr)/％	相对酶活(1hr)/％	相对酶活(2hr)/％
				4	100	100	100
30	100	100	100
				40	100	99.4	91.6
50	100	90.2	62.5
				55	92.1	73.7	36.0
60	41.3	16.8	9.5
				65	28.5	8.9	0

(2)固体木聚糖酶的热稳定性

将固体木聚糖酶在85℃干热条件下，分别保温0、15、30、45、60min，然后按标准条件测定剩余酶活力。

结果显示，木聚糖酶在固体条件下耐热性较好，85℃处理60min后仍有90％的相对酶活力，见附图3。

(3)固体木聚糖酶的贮藏稳定性

将干粉酶制剂，在干燥环境、常温下存放，半年内酶活损失小于5％，酶活的变化情况见表4：

               表4  固体木聚糖酶保存实验酶活力变化

项目	0天	60天	121天	181天	失活率
						1	52683	52001	51258	50155	4.8％
2	53217	52594	51836	51088	4.0％
						3	52875	52065	51328	50602	4.3％
平均值	52925	52534	51374	50615	4.37％

本发明所述的木聚糖酶及其生产方法具有以下优越性：

1.本发明所选用的菌株为短小芽孢杆菌，性能稳定，酶系纯，产品为内切β-木聚糖酶，水解木聚糖产物为功能性低聚木糖，单木糖含量低，低聚糖含量达总糖的70％；该菌株产生的木聚糖酶最佳反应PH为中性，适合食品生产的加工环境；该菌株不产毒，酶产品为无毒产品，符合食品工业标准。

2.该菌株易培养，发酵周期短，仅14～18小时，液体发酵酶活高，达到2500～3500IU/ml，生产成本低。

3.发酵过程中采用了新的培养基配方，具有诱导、激活、促进产酶的作用，有利于提高产品酶活力。

4.酶的提取工序中采用先进的絮凝技术、膜过滤技术，提高了酶的纯度，保证了产品的高酶活力，使酶的回收率达到了85～90％以上，固体酶制剂酶活达到5～10万IU/g以上。

5.采用新型的酶稳定保护剂，酶活力稳定，便于长期储存使用。

6.附加值高，本方法采用价格低廉的农副产品为原料生产食品级木聚糖酶，可使原料成本降低50％。

附图说明：

图1为温度对酶活力的影响

图2为pH对酶活力的影响

图3为固体木聚糖酶的热稳定性

具体实施方式：

1.菌种斜面培养实施例

配制菌种斜面培养基：酵母膏0.2％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.2％，琼脂1.8-2.0％，其余为水，PH7.0。

将培养基充分溶解，然后倒入茄形瓶中，包好后进行1kg/cm²压力灭菌30分钟，制作斜面培养基，在无菌条件下接种试管菌种，30-32℃恒温培养三天。

2.发酵过程实施例

采用茄形瓶种子(1个)→2m³种子罐→20m³发酵罐的工艺路线，种子罐培养基与发酵罐培养基配方：水洗麸皮2％，豆饼粉2％，液体半纤维素1.5％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸镁0.1％，硫酸铵0.5％；PH7.2。种子罐发酵培养10-11h左右，开始进行镜检，观察细菌的形态，测定细菌个数，PH值和酶活等指标的变化情况。13-14hr左右，菌种达到对数生长期，转接发酵罐。发酵温度31-32℃，罐压0.6kg/cm²，通气量0-7h为1∶0.5vvm，7-15h为1∶0.7vvm，15h以后为1∶0.5vvm。

(1)发酵过程中的参数变化见表5：

         表5：20m³发酵罐发酵过程中参数变化

时间(hr)	PH值	菌数	酶活(IU/ml)
				12	7.55	50	1094
14	7.88	54	2098
				16	8.06	55	2652
18	8.09	53	2932
				19	8.11	53	2920

(2)20m³发酵罐生产数据举例：(见表6)

                       表6：5批20m³发酵罐生产数据举例

项目	发酵液		压滤液		超滤液		干酶粉		提取率％
										酶活IU/ml	数量m3	酶活IU/ml	数量m3	酶活IU/ml	数量m3	酶活IUg	数量kg
	03106批	2512.8	13.5	2000.6	16.8	6385.9	5.0	53586.9										550	86.88
031008批									2748.3	13.5	2208.5	16.8	7402.6	5.0	54397.5	571	87.60
	031010批	2931.2	13.5	2355.4	16.8	7908.2	5.0	99500.8										384	87.39
031012批									3122.5	13.5	2509.2	16.8	8340.9	5.0	98825.2	372	87.21
	031014批	3420.1	13.5	2748.3	16.8	9230.2	5.0	99082.5										403	86.44

3.提取净化实施例

发酵结束后，首先向发酵液中加入磷酸氢二钠，开动搅拌20分钟，使它完全溶解，然后加入氯化钙，开搅拌10分钟，将发酵液转入絮凝罐，调节ph至7.0-7.2，缓慢加入聚丙烯酰胺，最后开搅拌5分钟，进行絮凝。30分钟后进行板框压滤，去除发酵培养基残渣；添加硅藻土吸附杂蛋白，板框压滤得到澄清酶液；再进行陶瓷微滤膜过滤，去除发酵液中的菌体和杂质；过滤清夜进入超滤设备，通过超滤膜超滤浓缩，浓缩液酶活力控制在10000-20000IU/ml之间；向浓缩液中添加0.3％壳聚糖，0.5％β-环状糊精和8％淀粉，并开动搅拌10分钟，添加90-95％(v/v)食用酒精，使酒精最终浓度达到70％(v/v)，60分钟后进行板框压滤，收集酶饼，并将酶饼进行冷冻干燥，得到干燥酶粉。其各项指标为：

编号	检验项目	单位	检验结果
				1	酶活力	IU/g	52122
2	干燥失重	％	10.0
				3	细度(通过100目铜筛网)	％	100
4	重金属(以Pb计)	％	＜0.002
				5	砷(以As计)	％	＜0.0003
6	细菌总数	个/克	100
				7	大肠杆菌	个/100克	未检出
8	沙门氏菌	/	未检出

附：木聚糖酶酶活力测定方法

本方法是以Sigma公司生产的燕麦木聚糖为底物，以D-木糖(分析纯)为标准，用DNS法测还原糖量，以此反映木聚糖酶的作用活力。

具体方法：称取适量木聚糖酶样品，用0.2mol/ml的pH7.2磷酸盐缓冲液适当稀释后(一般稀释后酶液约0.2-0.3IU/ml)，取0.5ml加入刻度试管中，加入2ml用0.2mol/ml的pH7.2磷酸盐缓冲液配制的0.5％木聚糖溶液混匀，置50℃恒温水浴30分钟，取出后立即加入2mlDNS试剂摇匀，放入沸水浴中10分钟，立即冷却，然后用蒸馏水定容至15ml。空白对照试管中不加酶液，待50℃转化完加入DNS试剂后，再加入0.5ml酶液，同其它样品一起煮沸，定容至15ml，在550nm下测OD值。

在上述条件下，每一分钟产生的还原糖量相当于1微摩尔(μmol)木糖所需酶量为一个酶活力单位(IU/ml)。

Claims (10)

1.一种食品级木聚糖酶，其特征在于它采用短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)为菌种，经培养、发酵、提纯、溶析工序制得的；其液体发酵酶活力为2500～3500IU/g，固体产品酶活力为50000～100000IU/g；最适作用温度为45～55℃，最适作用pH为6.5～7.5，常温保存180天酶活力损失低于5％。

2.如权利要求1所述的一种食品级木聚糖酶，其特征在于木聚糖酶中，重金属(以Pb计)≤40mg/kg，菌落总数≤1000cfu/g，大肠菌群≤10MPN/100g，沙门氏菌(25g样)不得检出，符合食品工业卫生、安全标准。

3.如权利要求1所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于包括菌种培养、发酵、提纯、溶析工序；其中菌种培养工序：以短小芽孢杆菌为生产菌种，采用试管斜面菌种→茄形瓶斜面菌种培养方法；发酵工序：采用细菌深层发酵工艺，由种子罐和发酵罐二级发酵；提纯工序：增加了絮凝技术-向发酵液中添加絮凝剂、膜过滤技术-采用陶瓷微滤膜和聚砜超滤膜进行二次过滤、酶稳定剂技术-向浓缩液中添加稳定剂；溶析工序：采用食用酒精溶析提取木聚糖酶。

4.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的菌种培养工序使用的培养基配方为：酵母膏0.2％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.2％，琼脂1.8-2.0％(重量％)，其余为水；PH7.0～7.2；培养条件为：  30～32℃恒温培养三天。

5.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的发酵工序使用的培养基组分为：水洗麸皮(1.5～3)％，豆饼粉(1.5～3)％，玉米芯(1～2)％，磷酸氢二钾(0.5～1)％，硫酸镁(0.1～0.3)％，硫酸铵(0.5～1)％(重量％)，其余为水；PH为6.5～7.5；发酵过程和条件为：采用茄形瓶种子(1个)→2m³种子罐→20m³发酵罐的工艺路线，种子罐发酵培养10-11h左右，开始进行镜检，观察细菌的形态，测定细菌个数，PH值和酶活力等指标的变化情况，13-14h左右，菌种达到对数生长期，转接发酵罐；发酵温度31-32℃，罐压0.5-0.8kg/cm²，通气量0-7h为1∶0.3-0.5(vvm)，7-15h为1∶0.7-0.8(vvm)，15h以后为1∶0.3-0.5(vvm)，发酵12h后开始进行检测酶活力，酶活力达最高时发酵结束。

6.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的提纯工序中向发酵液中添加絮凝剂的成分和用量为磷酸氢二钠1-2％、氯化钙0.5-1％、聚丙烯酰胺0.01-0.03％(占发酵液重量百分数)。

7.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的提纯工序中膜过滤技术采用过滤直径为0.2μm的陶瓷微滤膜对酶液进行初次过滤，再采用分子量截留为10000D的聚砜超滤膜进行二次过滤，去除小分子杂质，并将酶液进行浓缩。

8.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的提纯工序中向浓缩液中添加稳定剂成分和用量为壳聚糖0.1-0.5％，β-环状糊精0.5-1％(占发酵液重量百分数)。

9.如权利要求3所述的一种食品级木聚糖酶的生产方法，其特征在于所说的提纯工序中溶析技术是添加重量为酶液的5～8％的玉米淀粉为吸附剂吸附并采用食用酒精对酶液中的木聚糖酶进行溶析，食用酒精含量为90～95％，添加量使酶液中酒精最终浓度达到65～75％，提取木聚糖酶。

10.如权利要求1所述的一种食品级木聚糖酶的应用，其特征在于应用于食品工业中作食品改良剂和食品添加剂。

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