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CN1329619A - 有活性但不诱发过敏反应的过敏反应激发子片段 - Google Patents

有活性但不诱发过敏反应的过敏反应激发子片段 Download PDF

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CN1329619A
CN1329619A CN99814028A CN99814028A CN1329619A CN 1329619 A CN1329619 A CN 1329619A CN 99814028 A CN99814028 A CN 99814028A CN 99814028 A CN99814028 A CN 99814028A CN 1329619 A CN1329619 A CN 1329619A
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Z·－M·魏
H·范
J·L·尼格梅耶
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EDEN BIASCIENCE CORP
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Abstract

本发明涉及过敏反应激发子蛋白或多肽的分离的活性片段,所述片段在植物中不诱发过敏反应。本发明还公开了编码这种片段的分离的DNA分子。按照本发明的过敏反应激发子蛋白或多肽的分离的片段以及编码它们的分离的DNA分子具有以下活性:赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治植物害虫。在给植物或由所述植物种子培育的植物有效赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下,以非感染的形式将过敏反应激发子的片段应用到植物或植物种子,可以达到该目的。或者,可以提供用编码所述片段的DNA分子转化的转基因植物或植物种子,并在给植物或由所述植物种子培育的植物有效赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下,培育所述转基因植物或从转基因植物种子产生的植物。

Description

有活性但不诱发过敏反应的过敏反应激发子片段
本申请要求于1998年10月5日申请、序号为60/103,050的美国临时专利申请的权益。
                  发明领域
本发明涉及过敏反应激发子的活性片段，所述片段不诱发过敏反应。
                  发明背景
细菌病原体和它们的植物寄主之间的相互作用一般属于两类：(1)亲和性互作(病原体-寄主)，导致寄主植物中的胞间细菌生长、症状发生和病害发生；和(2)非亲和性互作(病原体-非寄主)，导致过敏反应，一种特殊类型的非亲和性互作产生，无进行性病害症状。在寄主植物的亲和性互作期间，细菌群体显著地增加及进行性症状产生。在非亲和性互作期间，细菌群体不增加，并且进行性症状不产生。
过敏反应是植物针对许多病原体的与有效防卫相关的一种快速、局部坏死(Kiraly，Z.，“入侵者触发的防卫：过敏性，”Plant Disease：AnAdvanced Treatise，第5卷，J.G.Horsfall和E.B.Cowling编著，第201-224页，Academic Press New York(1980)；Klement，Z.，“过敏性，”Phytopathogenic Prokaryotes。第2卷，M.S.Mount和G.H.Lacy编著，第149-177页，Academic Press，New York(1982))。如果将高浓度(≥107细胞/ml)有限寄主范围的病原体像丁香假单胞菌(Pseudomonassyrngae)或解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)浸润非寄主植物的叶片，则容易观察到作为组织崩溃的细菌诱发的过敏反应(在较低水平的接种物下坏死仅在分离的植物细胞中产生)(Klement，Z.，“致植物病假单胞菌致病性的快速检测，”Nature 199：299-300；Klement等，“烟草叶片中致植物病细菌诱导的过敏反应，”Phytopathology 54：474-477(1963)；Tumer等，“植物和参与过敏反应的细菌细胞之间的数量关系，”Phytopathology 64：885-890(1974)；Klement，Z.，“过敏性，”Phytopathogenic Prokaryotes→第2卷，M.S.Mount和G.H.Lacy编著，第149-177页，Academic Press，New Yorlk(1982))。在非寄主中诱发过敏反应的能力以及在寄主中致病的能力看来是有联系的。如Klement，Z.所述(“过敏性，”Phytopathogenic Prokaryotes，第2卷，M.S.Mount和GH.Lacy编著，第149-177页，Academic Press，New York)，这些病原体在它们与亲和性寄主的互作中也引起生理上类似的发生坏死，尽管这种坏死延迟发生。此外，产生过敏反应或致病的能力依赖于一组命名为hrp的共同基因(Lindgren，P.B.等，“丁香假单胞菌‘phaseolicola’致病变种(Pseudomonas syringae pv.‘phaseolicola’)基因簇控制菜豆植物的致病性以及非寄主植物的过敏性，”J Bacteriol168：512-22(1986)；Willis，D.K.等，“致植物病细菌的hrp基因，”Mol.Plant-Microbe Interact.4：132-138(1991))。因此，过敏反应可能保留植物防卫特征细菌致病性基础这两方面的线索。
hrp基因广泛分布于革兰氏阴性植物病原体中，其中它们是成簇的、保守的并在某些情况下是可互换的(Willis，D.K.等，“致植物病细菌的hrp基因，”Mol.Plant-Microbe Interact.4：132-138(1991)；Bonas，U.，“致植物病细菌的hrp基因，”Current Topics in Microbiology andImmunology：Bacterial Pathogenesis of Plants and Animals-Molecular andCellular Mechanisms，J.L.Dangl编著，第79-98页，Springer-Verlag，Berlin(1994))。几个hrp基因编码类似于耶尔森氏菌属(Yersinia)、志贺氏菌属(Shigella)和沙门氏菌(Salmonella spp.)用来分泌动物疾病中必需蛋白的蛋白分泌途径的组分(Van Gijsegem等，“植物和动物致病细菌中的致病性决定子的进化保守性，”Trends Microbiol.1：175-180(1993))。在解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌和茄假单胞菌(P.solanacearum)中，hrp基因已经显示控制过敏反应富含甘氨酸蛋白激发子的产生和分泌(He，S.Y.等，“丁香假单胞菌丁香致病变种(Pseudomonas syrmgae pv.syrmgae)HarpinPss：通过Hrp途径分泌并诱发植物中的过敏反应的蛋白，”Cell 73：1255-1266(1993)，Wei，Z.-H.等，“解淀粉欧文氏菌的HrpI在分泌Harpin中起作用并且HrpI为新蛋白质家系的一个成员，”J Bacterial 175：7958-7967(1993)；Arlat，M.等，“通过茄假单胞菌的Hrp途径分泌PopAl—在特定矮牵牛基因型上诱导过敏样反应的蛋白”EMBO J.13：543-553(1994))。
这些蛋白中的第一个是在解淀粉欧文氏菌Ea321—引起蔷薇科植物火疫病的细菌中被发现，并命名为harpin(Wei，Z.-M.等，“Harpin：植物病原体解淀粉欧文氏菌产生的过敏反应的激发子，”Science257：85-88(1992))。编码hrpN基因中的突变揭示了，解淀粉欧文氏菌在非寄主烟草叶片中诱发过敏反应以及在高度感病的梨果中引起病害症状都需要hatpin。茄假单胞菌GMI1000 PopAl蛋白具有相似的物理特性并且在烟草叶片中也诱发过敏反应，而烟草叶片不是该菌株的寄主(Arlat等，“通过茄假单胞菌Hrp途径分泌PopAl—在特定矮牵牛基因型上诱导过敏样反应的蛋白，”EMBO J.13：543-53(1994))。然而，茄假单胞菌popA突变体还在烟草中诱发过敏反应并在番茄中引起病害。因此，在革兰氏阴性植物病原体中，这些富含甘氨酸过敏反应激发子的作用可以大不相同。
已经将其它植物病原体的过敏反应激发子分离、克隆并测序。这些激发子包括：菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)(Bauer等，“菊欧文氏菌HarpinEch：软腐致病作用，”MPMI8(4)：484-91(1995))；胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)(Cui等，“胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种(Erwinia carotovora subsp.Carotovora)Ecc71菌株的RsmA突变体在烟草叶片中过量表达hrpNEcc并诱发过敏反应样反应，”MPMI 9(7)：565-73(1996))；斯氏欧文氏菌(Erwinia stewartii)(Ahmad等，“Hatpin对斯氏欧文氏菌在玉米中的致病性不是必需的，”8th Int’l.Cong.Molec.Plant-Microb.Inter.1996年7月14-19日和Ahmad等，“Harpin对斯氏欧文氏菌在玉米中的致病性不是必需的，”Ann.Mtg.Am.Phytopath.Soc.1996年7月27-31日)和丁香假单胞菌丁香致病变种(Comell Research Foundation，Inc.的WO 94/26782)。
本发明力图鉴定过敏反应激发子蛋白或多肽的片段，所述片段不诱发过敏反应，但如果和植物一起应用则是有活性的。
                      发明概述
本发明涉及欧文氏菌属过敏反应激发子蛋白或多肽的分离的片段，所述片段在植物中不诱发过敏反应，但如果和植物一起应用则具有其它方面的活性。本发明还公开了编码这种片段的分离的DNA分子。
按照本发明的过敏反应激发子的片段如果和植物一起应用则具有以下活性：赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治害虫。这涉及，在给植物或由所述植物种子培育的植物有效赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下，将所述片段以非感染的形式应用于植物或植物种子。
作为将所述片段应用于植物或植物种子以给植物赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的替代方法，可以使用转基因植物或植物种子。当使用转基因植物时，这涉及，提供用按照本发明的编码过敏反应激发子蛋白或多肽片段的DNA分子转化的转基因植物，并且在给所述植物或由所述植物种子培育的植物有效赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下，培育所述植物。或者，可以提供用编码这样的片段的DNA分子转化的转基因植物种子，并将所述种子播种于土壤中。然后在给植物或由所述植物种子培育的植物有效赋予抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下繁殖植物。
附图简述
图1显示过敏反应激发子蛋白或多肽的截短的蛋白。
图2显示一系列用于构建截短的harpin蛋白的合成寡核苷酸引物。N代表N末端(5’区)，而C代表C末端(3’区)。所述引物对应于本申请的所示序列识别号：N1(SEQ.ID.No.1)、N76(SEQ.ID.No.2)、N99(SEQ.ID.No.3)、N105(SEQ.ID.No.4)、N110(SEQ.ID.No.5)、N137(SEQ.ID.No.6)、N150(SEQ.ID.No.7)、N169(SEQ.ID.No.8)、N210(SEQ ID.No.9)、N267(SEQ.ID.No.10)、N343(SEQ.ID.No.11)、C75(SEQ.ID.No.12)、C104(SEQ.ID.No.13)、C168(SEQ.ID.No.14)、C180(SEQ.ID.No.15)、C204(SEQ.ID.No.16)、C209(SEQ.ID.No.17)、C266(SEQ.ID.No.18)、C342(SEQ.ID.No.19)和C403(SEQ.ID.No.20)。
                发明详述
本发明涉及过敏反应激发子蛋白或多肽的分离的片段，其中所述片段在植物中不诱发过敏反应但具有其它活性。本发明还公开了编码这种片段的DNA分子以及含有这种分子的表达系统、宿主细胞和植物。本发明公开了所述片段自身的用途以及编码所述片段的DNA分子的用途。
按照本发明的过敏反应激发子多肽或蛋白的片段得自各种各样的真菌和细菌病原体的过敏反应激发子多肽或蛋白。这样的多肽或蛋白能够诱发所述激发子接触的植物组织中的局部坏死。多肽或蛋白激发子的合适细菌源的实例包括欧文氏菌属、假单胞菌属和黄单胞菌属(Xanthomonas)的种(例如以下细菌：解淀粉欧文氏菌、菊欧文氏菌、斯氏欧文氏菌、胡萝卜软腐欧文氏菌、丁香假单胞菌、茄假单胞菌、野油菜黄单胞菌及它们的混合物)。
过敏反应激发子蛋白或多肽的真菌源的实例是疫霉属(Phytophthora)。合适的疫霉属菌种包括寄生疫霉(Phytophthoraparasitica)、隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)、樟疫霉(Phytophthoracinnamomi)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、大雄疫霉(phytophthoramegasperma)和柑橘褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)。
得自菊欧文氏菌的过敏反应激发子多肽或蛋白具有对应于如下的SEQ ID.No.21的氨基酸序列：Met Gln Ile Thr Ile Lys Aia His Ile Gly Gly Asp Leu Gly Val Ser1               5               10              15Gly Leu Gly Ala Gln Gly Leu Lys Gly Leu Ash Ser Ala Ala Ser Ser
        20                  25                  30Leu Gly Ser Ser Val Asp Lys Leu Ser Ser Thr Ile Asp Lys Leu Thr
    35                   40                 45Ser Ala Leu Thr Ser Met Met Phe Gly Gly Ala Leu Ala Gln Gly Leu
50                  55                  60Gly Ala Ser Ser Lys Gly Leu Gly Met Ser Asn Gln Leu Gly Gln Ser65                  70                  75                  80Phe Gly Asn Gly Ala Gln Gly Ala Ser Asn Leu Leu Ser val Pro Lys
            85                  90                   95Ser Gly Gly Asp Ala Leu Ser Lys Met Phe Asp Lys Ala Leu Asp Asp
        100                  105                110Leu Leu Gly His Asp Thr Val Thr Lys Leu Thr Asn Gln Ser Asn Gln
    115                 120                  125Leu Ala Asn Ser Met Leu Asn Ala Ser Gln Met Thr Gln Gly Asn Met
130                 135                 140Asn Ala Phe Gly Ser Gly Val Asn Asn Ala Leu Ser Ser Ile Leu Gly145                 150                 155                 160Asn Gly Leu Gly Gln Ser Met Ser Gly Phe Ser Gln Pro Ser Leu Gly
            165                  170                 175Ala Gly Gly Leu Gln Gly Leu Ser Gly Ala Gly Ala Phe Asn Gln Leu
        180                  185                  190Gly Asn Ala Ile Gly Met Gly Val Gly Gln Asn Ala Ala Leu Ser Ala
    195                 200                 205Leu Ser Asn Val Ser Thr His Val Asp Gly Asn Asn Arg His Phe Val
210                 215                 220Asp Lys Glu Asp Arg Gly Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met Asp225                 230                 235                 240Gln Tyr Pro Glu Ile Phe Gly Lys Pro Glu Tyr Gln Lys Asp Gly Trp
            245                 250                 255Ser Ser Pro Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp A la Lys Ala Leu Ser Lys
        260                 265                  270Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Gly Ala Ser Met Asp Lys Phe Arg Gln
    275                 280                 285Ala Met Gly Met Ile Lys Ser Ala Va1 Ala Gly Asp Thr Gly Asn Thr
290                 295                 300Asn Leu Asn Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Ser Leu Gly Ile Asp Ala305                 310                 315                 320Ala Val Val Gly Asp Lys Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Lys Leu Ala
            325                 330                 335Asn Ala
该过敏反应激发子多肽或蛋白的分子量为34kDa、热稳定、甘氨酸含量高于16％，而基本上不含半胱氨酸。具有对应于如下SEQ.ID.No.22的核苷酸序列的DNA分子编码菊欧文氏菌过敏反应激发子多肽或蛋白：CGATTTTACC CGGGTGAACG TGCTATGACC GACAGCATCA CGGTATTCGA CACCGTTACG     60GCGTTTATGG CCGCGATGAA CCGGCATCAG GCGGCGCGCT GGTCGCCGCA ATCCGGCGTC    120GATCTGGTAT TTCAGTTTGG GGACACCGGG CGTGAACTCA TGATGCAGAT TCAGCCGGGG    180CAGCAATATC CCGGCATGTT GCGCACGCTG CTCGCTCGTC GTTATCAGCA GGCGGCAGAG    240TGCGATGGCT GCCATCTGTG CCTGAACGGC AGCGATGTAT TGATCCTCTG GTGGCCGCTG    300CCGTCGGATC CCGGCAGTTA TCCGCAGGTG ATCGAACGTT TGTTTGAACT GGCGGGAATG    360ACGTTGCCGT CGCTATCCAT AGCACCGACG GCGCGTCCGC AGACAGGGAA CGGACGCGCC    420CGATCATTAA GATAAAGGCG GCTTTTTTTA TTGCAAAACG GTAACGGTGA GGAACCGTTT    480CACCGTCGGC GTCACTCAGT AACAAGTATC CATCATGATG CCTACATCGG GATCGGCGTG    540GGCATCCGTT GCAGATACTT TTGCGAACAC CTGACATGAA TGAGGAAACG AAATTATGCA    600AATTACGATC AAAGCGCACA TCGGCGGTGA TTTGGGCGTC TCCGGTCTGG GGCTGGGTGC    660TCAGGGACTG AAAGGACTGA ATTCCGCGGC TTCATCGCTG GGTTCCAGCG TGGATAAACT    720GAGCAGCACC ATCGATAAGT TGACCTCCGC GCTGACTTCG ATGATGTTTG GCGGCGCGCT    780GGCGCAGGGG CTGGGCGCCA GCTCGAAGGG GCTGGGGATG AGCAATCAAC TGGGCCAGTC    840TTTCGGCAAT   GGCGCGCAGG   GTGCGAGCAA   CCTGCTATCC   GTACCGAAAT   CCGGCGGCGA     900TGCGTTGTCA   AAAATGTTTG   ATAAAGCGCT   GGACGATCTG   CTGGGTCATG   ACACCGTGAC     960CAAGCTGACT   AACCAGAGCA   ACCAACTGGC   TAATTCAATG   CTGAACGCCA   GCCAGATGAC    1020CCAGGGTAAT   ATGAATGCGT   TCGGCAGCGG   TGTGAACAAC   GCACTGTCGT   CCATTCTCGG    1080CAACGGTCTC   GGCCAGTCGA   TGAGTGGCTT   CTCTCAGCCT   TCTCTGGGGG   CAGGCGGCTT    1140GCAGGGCCTG   AGCGGCGCGG   GTGCATTCAA   CCAGTTGGGT   AATGCCATCG   GCATGGGCGT    1200GGGGCAGAAT   GCTGCGCTGA   GTGCGTTGAG   TAACGTCAGC   ACCCACGTAG   ACGGTAACAA    1260CCGCCACTTT   GTAGATAAAG   AAGATCGCGG   CATGGCGAAA   GAGATCGGCC   AGTTTATGGA    1320TCAGTATCCG   GAAATATTCG   GTAAACCGGA   ATACCAGAAA   GATGGCTGGA   GTTCGCCGAA    1380GACGGACGAC   AAATCCTGGG   CTAAAGCGCT   GAGTAAACCG   GATGATGACG   GTATGACCGG    1440CGCCAGCATG   GACAAATTCC   GTCAGGCGAT   GGGTATGATC   AAAAGCGCGG   TGGCGGGTGA    1500TACCGGCAAT   ACCAACCTGA   ACCTGCGTGG   CGCGGGCGGT   GCATCGCTGG   GTATCGATGC    1560GGCTGTCGTC   GGCGATAAAA   TAGCCAACAT   GTCGCTGGGT   AAGCTGGCCA   ACGCCTGATA    1620ATCTGTGCTG   GCCTGATAAA   GCGGAAACGA   AAAAAGAGAC   GGGGAAGCCT   GTCTCTTTTC    1680TTATTATGCG   GTTTATGCGG   TTACCTGGAC   CGGTTAATCA   TCGTCATCGA   TCTGGTACAA    1740ACGCACATTT   TCCCGTTCAT   TCGCGTCGTT   ACGCGCCACA   ATCGCGATGG   CATCTTCCTC    1800GTCGCTCAGA   TTGCGCGGCT   GATGGGGAAC   GCCGGGTGGA   ATATAGAGAA   ACTCGCCGGC    1860CAGATGGAGA   CACGTCTGCG   ATAAATCTGT   GCCGTAACGT   GTTTCTATCC   GCCCCTTTAG    1920CAGATAGATT   GCGGTTTCGT   AATCAACATG   GTAATGCGGT   TCCGCCTGTG   CGCCGGCCGG    1980GATCACCACA   ATATTCATAG   AAAGCTGTCT   TGCACCTACC   GTATCGCGGG   AGATACCGAC    2040AAAATAGGGC   AGTTTTTGCG   TGGTATCCGT   GGGGTGTTCC   GGCCTGACAA   TCTTGAGTTG    2100GTTCGTCATC   ATCTTTCTCC   ATCTGGGCGA   CCTGATCGGT   T                          2141
得自解淀粉欧文氏菌的过敏反应激发子多肽或蛋白具有对应于如下的SEQ.ID.No.23的氨基酸序列：Met Ser Leu Asn Thr Ser Gly Leu Gly Ala Ser Thr Met Gln Ile Ser1               5                   10                  15Ile Gly Gly Ala Gly Gly Asn Asn Gly Leu Leu Gly Thr Ser Arg Gln
        20                  25                  30Asn Ala Gly Leu Gly Gly Asn Ser Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Asn
    35                  40                  45Gln Asn Asp Thr Val Asn Gln Leu Ala Gly Leu Leu Thr Gly Met Met
50                  55                  60Met Met Met Ser Met Met Gly Gly Gly Gly Leu Met Gly Gly Gly Leu65                  70                  75                  80Gly Gly Gly Leu Gly Asn Gly Leu Gly Gly Ser Gly Gly Leu Gly Glu
            85                  90                  95Gly Leu Ser Asn Ala Leu Asn Asp Met Leu Gly Gly Ser Leu Asn Thr
        100                 105                 110Leu Gly Ser Lys Gly Gly Asn Asn Thr Thr Ser Thr Thr Asn Ser Pro
    115                 120                 125Leu Asp Gln Ala Leu Gly Ile Asn Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser
130                 135                 140Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln145                 150                 155                 160Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly
            165                 170                 175Gln Asp Gly Thr Gln Gly Ser Ser Ser Gly Gly Lys Gln Pro Thr Glu
        180                 185                 190Gly Glu Gln Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Val Thr Asp Ala Leu Ser Gly
    195                 200                 205Leu Met Gly Asn Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly
210                 215                 220Gly Gly Gln Gly Gly Asn Ala Gly Thr Gly Leu Asp Gly Ser Ser Leu225                 230                 235                 240Gly Gly Lys Gly Leu Gln Asn Leu Ser Gly Pro Val Asp Tyr Gln Gln
            245                 250                 255Leu Gly Asn Ala val Gly Thr Gly Ile Gly Met Lys Ala Gly Ile Gln
        260                 265                 270Ala Leu Asn Asp Ile Gly Thr His Arg His Ser Ser Thr Arg Ser Phe
    275                 280                 285Val Asn Lys Gly Asp Arg Ala Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met
290                 295                 300Asp Gln Tyr Pro Glu Val Phe Gly Lys Pro Gln Tyr Gln Lys Gly Pro305                 310                 315                 320Gly Gln Glu Val Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser
            325                 330                 335Lys Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Pro Ala Ser Met Glu Gln Phe Asn
        340                 345                 350Lys Ala Lys Gly Met Ile Lys Arg Pro Met Ala Gly Asp Thr Gly Asn
    355                 360                 365Gly Asn Leu Gln Ala Arg Gly Ala Gly Gly Ser Ser Leu Gly Ile Asp
370                 375                 380Ala Met Met Ala Gly Asp Ala Ile Asn Asn Met Ala Leu Gly Lys Leu385                 390                 395                 400Gly Ala Ala该过敏反应激发子多肽或蛋白的分子量约为39kDa、pI约为4.3并于100℃耐热至少10分钟。该过敏反应激发子多肽或蛋白基本上不含半胱氨酸。得自解淀粉欧文氏菌的过敏反应激发子多肽或蛋白更全面地描述于Wei，Z.-M.、R.J.Laby、C.H.Zumoff、D.W.Bauer、S.-Y.He、A.Collmer和S.V.Beer，“Harpin—植物病原体解淀粉欧文氏菌产生的过敏反应的激发子，”Science 257：85-88(1992)，该文献通过引用结合到本文中。编码该多肽或蛋白的DNA分子具有对应于如下SEQ.ID.No.24的核苷酸序列：AAGCTTCGGC  ATGGCACGTT  TGACCGTTGG  GTCGGCAGGG  TACGTTTGAA  TTATTCATAA    60GAGGAATACG  TTATGAGTCT  GAATACAAGT  GGGCTGGGAG  CGTCAACGAT  GCAAATTTCT   120ATCGGCGGTG  CGGGCGGAAA  TAACGGGTTG  CTGGGTACCA  GTCGCCAGAA  TGCTGGGTTG   180GGTGGCAATT  CTGCACTGGG  GCTGGGCGGC  GGTAATCAAA  ATGATACCGT  CAATCAGCTG   240GCTGGCTTAC  TCACCGGCAT  GATGATGATG  ATGAGCATGA  TGGGCGGTGG  TGGGCTGATG   300GGCGGTGGCT  TAGGCGGTGG  CTTAGGTAAT  GGCTTGGGTG  GCTCAGGTGG  CCTGGGCGAA   360GGACTGTCGA  ACGCGCTGAA  CGATATGTTA  GGCGGTTCGC  TGAACACGCT  GGGCTCGAAA   420GGCGGCAACA  ATACCACTTC  AACAACAAAT  TCCCCGCTGG  ACCAGGCGCT  GGGTATTAAC   480TCAACGTCCC  AAAACGACGA  TTCCACCTCC  GGCACAGATT  CCACCTCAGA  CTCCAGCGAC   540CCGATGCAGC  AGCTGCTGAA  GATGTTCAGC  GAGATAATGC  AAAGCCTGTT  TGGTGATGGG   600CAAGATGGCA  CCCAGGGCAG  TTCCTCTGGG  GGCAAGCAGC  CGACCGAAGG  CGAGCAGAAC   660GCCTATAAAA  AAGGAGTCAC  TGATGCGCTG  TCGGGCCTGA  TGGGTAATGG  TCTGAGCCAG   720CTCCTTGGCA  AACGGGGACT  GGGAGGTGGT  CAGGGCGGTA  ATGCTGGCAC  GGGTCTTGAC   780GGTTCGTCGC  TGGGCGGCAA  AGGGCTGCAA  AACCTGAGCG  GGCCGGTGGA  CTACCAGCAG   840TTAGGTAACG CCGTGGGTAC CGGTATCGGT ATGAAAGCGG GCATTCAGGC GCTGAATGAT   900ATCGGTACGC ACAGGCACAG TTCAACCCGT TCTTTCGTCA ATAAAGGCGA TCGGGCGATG   960GCGAAGGAAA TCGGTCAGTT CATGGACCAG TATCCTGAGG TGTTTGGCAA GCCGCAGTAC  1020CAGAAAGGCC CGGGTCAGGA GGTGAAAACC GATGACAAAT CATGGGCAAA AGCACTGAGC  1080AAGCCAGATG ACGACGGAAT GACACCAGCC AGTATGGAGC AGTTCAACAA AGCCAAGGGC  1140ATGATCAAAA GGCCCATGGC GGGTGATACC GGCAACGGCA ACCTGCAGGC ACGCGGTGCC  1200GGTGGTTCTT CGCTGGGTAT TGATGCCATG ATGGCCGGTG ATGCCATTAA CAATATGGCA  1260CTTGGCAAGC TGGGCGCGGC TTAAGCTT                                     1288
得自解淀粉欧文氏菌的另一种可能合适的过敏反应激发子公开于美国专利申请序号09/120,927，该文献通过引用结合到本文中。具有如下SEQ.ID.No.25的核酸序列的DNA分子编码所述蛋白质：ATGTCAATTC TTACGCTTAA CAACAATACC TCGTCCTCGC CGGGTCTGTT CCAGTCCGGG    60GGGGACAACG GGCTTGGTGG TCATAATGCA AATTCTGCGT TGGGGCAACA ACCCATCGAT   120CGGCAAACCA TTGAGCAAAT GGCTCAATTA TTGGCGGAAC TGTTAAAGTC ACTGCTATCG   180CCACAATCAG GTAATGCGGC AACCGGAGCC GGTGGCAATG ACCAGACTAC AGGAGTTGGT   240AACGCTGGCG GCCTGAACGG ACGAAAAGGC ACAGCAGGAA CCACTCCGCA GTCTGACAGT   300CAGAACATGC TGAGTGAGAT GGGCAACAAC GGGCTGGATC AGGCCATCAC GCCCGATGGC   360CAGGGCGGCG GGCAGATCGG CGATAATCCT TTACTGAAAG CCATGCTGAA GCTTATTGCA   420CGCATGATGG ACGGCCAAAG CGATCAGTTT GGCCAACCTG GTACGGGCAA CAACAGTGCC   480TCTTCCGGTA CTTCTTCATC TGGCGGTTCC CCTTTTAACG ATCTATCAGG GGGGAAGGCC   540CCTTCCGGCA ACTCCCCTTC CGGCAACTAC TCTCCCGTCA GTACCTTCTC ACCCCCATCC   600ACGCCAACGT CCCCTACCTC ACCGCTTGAT TTCCCTTCTT CTCCCACCAA AGCAGCCGGG   660GGCAGCACGC CGGTAACCGA TCATCCTGAC CCTGTTGGTA GCGCGGGCAT CGGGGCCGGA   720AATTCGGTGG CCTTCACCAG CGCCGGCGCT AATCAGACGG TGCTGCATGA CACCATTACC   780GTGAAAGCGG GTCAGGTGTT TGATGGCAAA GGACAAACCT TCACCGCCGG TTCAGAATTA   840GGCGATGGCG GCCAGTCTGA AAACCAGAAA CCGCTGTTTA TACTGGAAGA CGGTGCCAGC   900CTGAAAAACG TCACCATGGG CGACGACGGG GCGGATGGTA TTCATCTTTA CGGTGATGCC   960AAAATAGACA ATCTGCACGT CACCAACGTG GGTGAGGACG CGATTACCGT TAAGCCAAAC  1020AGCGCGGGCA AAAAATCCCA CGTTGAAATC ACTAACAGTT CCTTCGAGCA CGCCTCTGAC  1080AAGATCCTGC AGCTGAATGC CGATACTAAC CTGAGCGTTG ACAACGTGAA GGCCAAAGAC  1140TTTGGTACTT TTGTACGCAC TAACGGCGGT CAACAGGGTA ACTGGGATCT GAATCTGAGC   1200CATATCAGCG CAGAAGACGG TAAGTTCTCG TTCGTTAAAA GCGATAGCGA GCGGCTAAAC   1260GTCAATACCA GTGATATCTC ACTGGGTGAT GTTGAAAACC ACTACAAAGT GCCGATGTCC   1320GCCAACCTGA AGGTGGCTGA ATGA                                          1344
参见GenBank登录号U94513。本发明的分离的DNA分子编码具有如下SEQ.ID.No.26的氨基酸序列的过敏反应激发子蛋白或多肽：Met Ser Ile Leu Thr Leu Asn Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu1               5                   10                  15Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu Gly Gly His Asn Ala Asn Ser
        20                  25                  30Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala
    35                  40                  45Gln Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln Ser Gly
50                  55                  60Asn Ala Ala Thr Gly Ala Gly Gly Asn Asp Gln Thr Thr Gly Val Gly65                  70                  75                  80Asn Ala Gly Gly Leu Asn Gly Arg Lys Gly Thr Ala Gly Thr Thr Pro
            85                  90                  95Gln Ser Asp Ser Gln Asn Met Leu Ser Glu Met Gly Asn Asn Gly Leu
        100                 105                 110Asp Gln Ala Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp
    115                 120                 125Asn Pro Leu Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp
130                 135                 140Gly Gln Ser Asp Gln Phe Gly Gln Pro Gly Thr Gly Asn Asn Ser Ala145                 150                 155                 160Ser Ser Gly Thr Ser Ser Ser Gly Gly Ser Pro Phe Asn Asp Leu Ser
            165                 170                 175Gly Gly Lys Ala Pro Ser Gly Asn Ser Pro Ser Gly Asn Tyr Ser Pro
        180                 185                 190Val Ser Thr Phe Ser Pro Pro Ser Thr Pro Thr Ser Pro Thr Ser Pro
    195                 200                 205Leu Asp Phe Pro Ser Ser Pro Thr Lys Ala Ala Gly Gly Ser Thr Pro
210                 215                  220Val Thr Asp His Pro Asp Pro Val Gly Ser Ala Gly Ile Gly Ala Gly225                 230                 235                 235Asn Ser Val Ala Phe Thr Ser Ala Gly Ala Asn Gln Thr Val Leu His
            245                 250                 255Asp Thr Ile Thr Val Lys Ala Gly Gln Val Phe Asp Gly Lys Gly Gln
        260                 265                 270Thr Phe Thr Ala Gly Ser Glu Leu Gly Asp Gly Gly Gln Ser Glu Asn
    275                 280                 285Gln Lys Pro Leu Phe Ile Leu Glu Asp Gly Ala Ser Leu Lys Asn Val
290                 295                 300Thr Met Gly Asp Asp Gly Ala Asp Gly Ile His Leu Tyr Gly Asp Ala305                 310                 315                 320Lys Ile Asp Asn Leu His Val Thr Asn Val Gly Glu Asp Ala Ile Thr
            325                 330                 335Val Lys Pro Asn Ser Ala Gly Lys Lys Ser His Val Glu Ile Thr Asn
        340                 345                 350Ser Ser Phe Glu His Ala Ser Asp Lys lle Leu Gln Leu Asn Ala Asp
    355                 360                 365Thr Asn Leu Ser Val Asp Asn Val Lys Ala Lys Asp Phe Gly Thr Phe
370                 375                 380Val Arg Thr Asn Gly Gly Gln Gln Gly Asn Trp Asp Leu Asn Leu Ser385                 390                 395                 400His Ile Ser Ala Glu Asp Gly Lys Phe Ser Phe Val Lys Ser Asp Ser
            405                 410                 415Glu Gly Leu Asn Val Asn Thr Ser Asp Ile Ser Leu Gly Asp Val Glu
        420                 425                 430Asn His Tyr Lys Val Pro Met Ser Ala Asn Leu Lys Val Ala Glu
    435                 440                 445该蛋白或多肽为酸性的、富含甘氨酸和丝氨酸，而缺乏半胱氨酸。它也是热稳定、对蛋白酶敏感以及受植物新陈代谢抑制剂的抑制。本发明的蛋白或多肽预期的分子大小约为4.5kDa。
得自解淀粉欧文氏菌的另一种可能合适的过敏反应激发子公开于美国专利申请序号09/120,663，该文献通过引用结合到本文中。具有如下SEQ.ID.No.27的核酸序列的DNA分子编码所述蛋白质：ATGGAATTAA   AATCACTGGG   AACTGAACAC   AAGGCGGCAG   TACACACAGC   GGCGCACAAC     60CCTGTGGGGC   ATGGTGTTGC   CTTACAGCAG   GGCAGCAGCA   GCAGCAGCCC   GCAAAATGCC    120GCTGCATCAT   TGGCGGCAGA   AGGCAAAAAT   CGTGGGAAAA   TGCCGAGAAT   TCACCAGCCA    180TCTACTGCGG   CTGATGGTAT   CAGCGCTGCT   CACCAGCAAA   AGAAATCCTT   CAGTCTCAGG    240GGCTGTTTGG   GGACGAAAAA   ATTTTCCAGA   TCGGCACCGC   AGGGCCAGCC   AGGTACCACC    300CACAGCAAAG   GGGCAACATT   GCGCGATCTG   CTGGCGCGGG   ACGACGGCGA   AACGCAGCAT    360GAGGCGGCCG   CGCCAGATGC   GGCGCGTTTG   ACCCGTTCGG   GCGGCGTCAA   ACGCCGCAAT    420ATGGACGACA   TGGCCGGGCG   GCCAATGGTG   AAAGGTGGCA   GCGGCGAAGA   TAAGGTACCA    480ACGCAGCAAA   AACGGCATCA   GCTGAACAAT   TTTGGCCAGA   TGCGCCAAAC   GATGTTGAGC    540AAAATGGCTC   ACCCGGCTTC   AGCCAACGCC   GGCGATCGCC   TGCAGCATTC   ACCGCCGCAC    600ATCCCGGGTA   GCCACCACGA   AATCAAGGAA   GAACCGGTTG   GCTCCACCAG   CAAGGCAACA    660ACGGCCCACG   CAGACAGAGT   GGAAATCGCT   CAGGAAGATG   ACGACAGCGA   ATTCCAGCAA    720CTGCATCAAC   AGCGGCTGGC   GCGCGAACGG   GAAAATCCAC   CGCAGCCGCC   CAAACTCGGC    780GTTGCCACAC   CGATTAGCGC   CAGGTTTCAG   CCCAAACTGA   CTGCGGTTGC   GGAAAGCGTC    840CTTGAGGGGA   CAGATACCAC   GCAGTCACCC   CTTAAGCCGC   AATCAATGCT   GAAAGGAAGT    900GGAGCCGGGG   TAACGCCGCT   GGCGGTAACG   CTGGATAAAG   GCAAGTTGCA   GCTGGCACCG    960GATAATCCAC   CCGCGCTCAA   TACGTTGTTG   AAGCAGACAT   TGGGTAAAGA   CACCCAGCAC   1020TATCTGGCGC   ACCATGCCAG   CAGCGACGGT   AGCCAGCATC   TGCTGCTGGA   CAACAAAGGC   1080CACCTGTTTG   ATATCAAAAG   CACCGCCACC   AGCTATAGCG   TGCTGCACAA   CAGCCACCCC   1140GGTGACATAA   AGGGCAAGCT   GGCGCAGGCG   GGTACTGGCT   CCGTCAGCGT   AGACGGTAAA   1200AGCGGCAAGA   TCTCGCTGGG   GAGCGGTACG   CAAAGTCACA   ACAAAACAAT   GCTAAGCCAA   1260CCGGGGGAAG   CGCACCGTTC   CTTATTAACC   GGCATTTGGC   AGCATCCTGC   TGGCGCAGCG   1320CGGCCGCAGG   GCGAGTCAAT   CCGCCTGCAT   GACGACAAAA   TTCATATCCT   GCATCCGGAG   1380CTGGGCGTAT   GGCAATCTGC   GGATAAAGAT   ACCCACAGCC   AGCTGTCTCG   CCAGGCAGAC   1440GGTAAGCTCT   ATGCGCTGAA   AGACAACCGT   ACCCTGCAAA   ACCTCTCCGA   TAATAAATCC   1500TCAGAAAAGC   TGGTCGATAA   AATCAAATCG   TATTCCGTTG   ATCAGCGGGG   GCAGGTGGCG   1560ATCCTGACGG   ATACTCCCGG   CCGCCATAAG   ATGAGTATTA   TGCCCTCGCT   GGATGCTTCC   1620CCGGAGAGCC   ATATTTCCCT   CAGCCTGCAT   TTTGCCGATG   CCCACCAGGG   GTTATTGCAC   1680GGGAAGTCGG   AGCTTGAGGC   ACAATCTGTC   GCGATCAGCC   ATGGGCGACT   GGTTGTGGCC   1740GATAGCGAAG   GCAAGCTGTT   TAGCGCCGCC   ATTCCGAAGC   AAGGGGATGG   AAACGAACTG   1800AAAATGAAAG   CCATGCCTCA   GCATGCGCTC   GATGAACATT   TTGGTCATGA   CCACCAGATT   1860TCTCGATTTT   TCCATGACGA   CCACGGCCAG   CTTAATGCGC   TGGTGAAAAA   TAACTTCAGG   1920CAGCAGCATG   CCTGCCCGTT   GGGTAACGAT   CATCAGTTTC   ACCCCGGCTG   GAACCTGACT   1980GATGCGCTGG   TTATCGACAA   TCAGCTGGGG   CTGCATCATA   CCAATCCTGA   ACCGCATGAG   2040ATTCTTGATA   TGGGGCATTT   AGGCAGCCTG   GCGTTACAGG   AGGGCAAGCT   TCACTATTTT   2100GACCAGCTGA   CCAAAGGGTG   GACTGGCGCG   GAGTCAGATT   GTAAGCAGCT   GAAAAAAGGC   2160CTGGATGGAG   CAGCTTATCT   ACTGAAAGAC   GGTGAAGTGA   AACGCCTGAA   TATTAATCAG   2220AGCACCTCCT   CTATCAAGCA   CGGAACGGAA   AACGTTTTTT   CGCTGCCGCA   TGTGCGCAAT   2280AAACCGGAGC   CGGGAGATGC   CCTGCAAGGG   CTGAATAAAG   ACGATAAGGC   CCAGGCCATG   2340GCGGTGATTG   GGGTAAATAA   ATACCTGGCG   CTGACGGAAA   AAGGGGACAT   TCGCTCCTTC   2400CAGATAAAAC   CCGGCACCCA   GCAGTTGGAG   CGGCCGGCAC   AAACTCTCAG   CCGCGAAGGT   2460ATCAGCGGCG   AACTGAAAGA   CATTCATGTC   GACCACAAGC   AGAACCTGTA   TGCCTTGACC   2520CACGAGGGAG   AGGTGTTTCA   TCAGCCGCGT   GAAGCCTGGC   AGAATGGTGC   CGAAAGCAGC   2580AGCTGGCACA   AACTGGCGTT   GCCACAGAGT   GAAAGTAAGC   TAAAAAGTCT   GGACATGAGC   2640CATGAGCACA   AACCGATTGC   CACCTTTGAA   GACGGTAGCC   AGCATCAGCT   GAAGGCTGGC   2700GGCTGGCACG   CCTATGCGGC   ACCTGAACGC   GGGCCGCTGG   CGGTGGGTAC   CAGCGGTTCA   2760CAAACCGTCT   TTAACCGACT   AATGCAGGGG   GTGAAAGGCA   AGGTGATCCC   AGGCAGCGGG   2820TTGACGGTTA   AGCTCTCGGC   TCAGACGGGG   GGAATGACCG   GCGCCGAAGG   GCGCAAGGTC   2880AGCAGTAAAT   TTTCCGAAAG   GATCCGCGCC   TATGCGTTCA   ACCCAACAAT   GTCCACGCCG   2940CGACCGATTA   AAAATGCTGC   TTATGCCACA   CAGCACGGCT   GGCAGGGGCG   TGAGGGGTTG   3000AAGCCGTTGT   ACGAGATGCA   GGGAGCGCTG   ATTAAACAAC   TGGATGCGCA   TAACGTTCGT   3060CATAACGCGC   CACAGCCAGA   TTTGCAGAGC   AAACTGGAAA   CTCTGGATTT   AGGCGAACAT   3120GGCGCAGAAT   TGCTTAACGA   CATGAAGCGC   TTCCGCGACG   AACTGGAGCA   GAGTGCAACC   3180CGTTCGGTGA   CCGTTTTAGG   TCAACATCAG   GGAGTGCTAA   AAAGCAACGG   TGAAATCAAT   3240AGCGAATTTA   AGCCATCGCC   CGGCAAGGCG   TTGGTCCAGA   GCTTTAACGT   CAATCGCTCT   3300GGTCAGGATC   TAAGCAAGTC   ACTGCAACAG   GCAGTACATG   CCACGCCGCC   ATCCGCAGAG   3360AGTAAACTGC   AATCCATGCT   GGGGCACTTT   GTCAGTGCCG   GGGTGGATAT   GAGTCATCAG   3420AAGGGCGAGA   TCCCGCTGGG   CCGCCAGCGC   GATCCGAATG   ATAAAACCGC   ACTGACCAAA   3480TCGCGTTTAA   TTTTAGATAC   CGTGACCATC   GGTGAACTGC   ATGAACTGGC   CGATAAGGCG   3540AAACTGGTAT   CTGACCATAA   ACCCGATGCC   GATCAGATAA   AACAGCTGCG   CCAGCAGTTC   3600GATACGCTGC   GTGAAAAGCG   GTATGAGAGC   AATCCGGTGA   AGCATTACAC   CGATATGGGC   3660TTCACCCATA   ATAAGGCGCT   GGAAGCAAAC   TATGATGCGG   TCAAAGCCTT   TATCAATGCC   3720TTTAAGAAAG   AGCACCACGG   CGTCAATCTG   ACCACGCGTA   CCGTACTGGA   ATCACAGGGC   3780AGTGCGGAGC   TGGCGAAGAA   GCTCAAGAAT   ACGCTGTTGT   CCCTGGACAG   TGGTGAAAGT   3840ATGAGCTTCA   GCCGGTCATA   TGGCGGGGGC   GTCAGCACTG   TCTTTGTGCC   TACCCTTAGC   3900AAGAAGGTGC   CAGTTCCGGT   GATCCCCGGA   GCCGGCATCA   CGCTGGATCG   CGCCTATAAC  3960CTGAGCTTCA   GTCGTACCAG   CGGCGGATTG   AACGTCAGTT   TTGGCCGCGA   CGGCGGGGTG  4020AGTGGTAACA   TCATGGTCGC   TACCGGCCAT   GATGTGATGC   CCTATATGAC   CGGTAAGAAA  4080ACCAGTGCAG   GTAACGCCAG   TGACTGGTTG   AGCGCAAAAC   ATAAAATCAG   CCCGGACTTG  4140CGTATCGGCG   CTGCTGTGAG   TGGCACCCTG   CAAGGAACGC   TACAAAACAG   CCTGAAGTTT  4200AAGCTGACAG   AGGATGAGCT   GCCTGGCTTT   ATCCATGGCT   TGACGCATGG   CACGTTGACC  4260CCGGCAGAAC   TGTTGCAAAA   GGGGATCGAA   CATCAGATGA   AGCAGGGCAG   CAAACTGACG  4320TTTAGCGTCG   ATACCTCGGC   AAATCTGGAT   CTGCGTGCCG   GTATCAATCT   GAACGAAGAC  4380GGCAGTAAAC   CAAATGGTGT   CACTGCCCGT   GTTTCTGCCG   GGCTAAGTGC   ATCGGCAAAC  4440CTGGCCGCCG   GCTCGCGTGA   ACGCAGCACC   ACCTCTGGCC   AGTTTGGCAG   CACGACTTCG  4500GCCAGCAATA   ACCGCCCAAC   CTTCCTCAAC   GGGGTCGGCG   CGGGTGCTAA   CCTGACGGCT  4560GCTTTAGGGG   TTGCCCATTC   ATCTACGCAT   GAAGGGAAAC   CGGTCGGGAT   CTTCCCGGCA  4620TTTACCTCGA   CCAATGTTTC   GGCAGCGCTG   GCGCTGGATA   ACCGTACCTC   ACAGAGTATC  4680AGCCTGGAAT   TGAAGCGCGC   GGAGCCGGTG   ACCAGCAACG   ATATCAGCGA   GTTGACCTCC  4740ACGCTGGGAA   AACACTTTAA   GGATAGCGCC   ACAACGAAGA   TGCTTGCCGC   TCTCAAAGAG  4800TTAGATGACG   CTAAGCCCGC   TGAACAACTG   CATATTTTAC   AGCAGCATTT   CAGTGCAAAA  4860GATGTCGTCG   GTGATGAACG   CTACGAGGCG   GTGCGCAACC   TGAAAAAACT   GGTGATACGT  4920CAACAGGCTG   CGGACAGCCA   CAGCATGGAA   TTAGGATCTG   CCAGTCACAG   CACGACCTAC  4980AATAATCTGT   CGAGAATAAA   TAATGACGGC   ATTGTCGAGC   TGCTACACAA   ACATTTCGAT  5040GCGGCATTAC   CAGCAAGCAG   TGCCAAACGT   CTTGGTGAAA   TGATGAATAA   CGATCCGGCA  5100CTGAAAGATA   TTATTAAGCA   GCTGCAAAGT   ACGCCGTTCA   GCAGCGCCAG   CGTGTCGATG  5160GAGCTGAAAG   ATGGTCTGCG   TGAGCAGACG   GAAAAAGCAA   TACTGGACGG   TAAGGTCGGT  5220CGTGAAGAAG   TGGGAGTACT   TTTCCAGGAT   CGTAACAACT   TGCGTGTTAA   ATCGGTCAGC  5280GTCAGTCAGT   CCGTCAGCAA   AAGCGAAGGC   TTCAATACCC   CAGCGCTGTT   ACTGGGGACG  5340AGCAACAGCG   CTGCTATGAG   CATGGAGCGC   AACATCGGAA   CCATTAATTT   TAAATACGGC  5400CAGGATCAGA   ACACCCCACG   GCGATTTACC   CTGCAGGGTG   GAATAGCTCA   GGCTAATCCG  5460CAGGTCGCAT   CTGCGCTTAC   TGATTTGAAG   AAGGAAGGGC   TGGAAATGAA   GAGCTAA     5517该DNA分子被称为解淀粉欧文氏菌的dspE基因。本发明的这种分离的DNA分子编码具有如下SEQ.ID.No.28的氨基酸序列的诱发植物病原体的过敏反应的蛋白或多肽：Met Glu Leu Lys Ser Leu Gly Thr Glu His Lys Ala Ala Val His Thr1               5                   10                  15Ala Ala His Asn Pro Val Gly His Gly Val Ala Leu Gln Gln Gly Ser
        20                  25                  30Ser Ser Ser Ser Pro Gln Asn Ala Ala Ala Ser Leu Ala Ala Glu Gly
    35                  40                  45Lys Asn Arg Gly Lys Met Pro Arg Ile His Gln Pro Ser Thr Ala Ala
50                  55                  60Asp Gly Ile Ser Ala Ala His Gln Gln Lys Lys Ser Phe Ser Leu Arg65                  70                  75                  80Gly Cys Leu Gly Thr Lys Lys Phe Ser Arg Ser Ala Pro Gln Gly Gln
            85                  90                  95Pro Gly Thr Thr His Ser Lys Gly Ala Thr Leu Arg Asp Leu Leu Ala
        100                 105                 110Arg Asp Asp Gly Glu Thr Gln His Glu Ala Ala Ala Pro Asp Ala Ala
    115                 120                 125Arg Leu Thr Arg Ser Gly Gly Val Lys Arg Arg Asn Met Asp Asp Met
130                 135                 140Ala Gly Arg Pro Met Val Lys Gly Gly Ser Gly Glu Asp Lys Val Pro145                 150                 155                 160Thr Gln Gln Lys Arg His Gln Leu Asn Asn Phe Gly Gln Met Arg Gln
            165                 170                 175Thr Met Leu Ser Lys Met Ala His Pro Ala Ser Ala Asn Ala Gly Asp
        180                 185                 190Arg Leu Gln His Ser Pro Pro His Ile Pro Gly Ser His His Glu Ile
    195                 200                 205Lys Glu Glu Pro Val Gly Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ala His Ala
210                 215                 220Asp Arg Val Glu Ile Ala Gln Glu Asp Asp Asp Ser Glu Phe Gln Gln225                 230                 235                 240Leu His Gln Gln Arg Leu Ala Arg Glu Arg Glu Asn Pro Pro Gln Pro
            245                 250                 255Pro Lys Leu Gly Val Ala Thr Pro Ile Ser Ala Arg Phe Gln Pro Lys
        260                 265                 270Leu Thr Ala Val Ala Glu Ser Val Leu Glu Gly Thr Asp Thr Thr Gln
    275                 280                 285Ser Pro Leu Lys Pro Gln Ser Met Leu Lys Gly Ser Gly Ala Gly Val
290                 295                 300Thr Pro Leu Ala Val Thr Leu Asp Lys Gly Lye Leu Gln Leu Ala Pro305                 310                 315                 320Asp Asn Pro Pro Ala Leu Asn Thr Leu Leu Lys Gln Thr Leu Gly Lys
            325                 330                 335Asp Thr Gln His Tyr Leu Ala His His Ala Ser Ser Asp Gly Ser Gln
        340                 345                 350His Leu Leu Leu Asp Asn Lys Gly His Leu Phe Asp Ile Lys Ser Thr
    355                 360                 365Ala Thr Ser Tyr Ser Val Leu His Asn Ser His Pro Gly Glu Ile Lys
370                 375                 380Gly Lys Leu Ala Gln Ala Gly Thr Gly Ser Val Ser Val Asp Gly Lys385                 390                 395                 400Ser Gly Lys Ile Sar Leu Gly Ser Gly Thr Gln Ser His Asn Lys Thr
            405                 410                 415Met Leu Ser Gln Pro Gly Glu Ala His Arg Ser Leu Leu Thr Gly Ile
        420                 425                 430Trp Gln His Pro Ala Gly Ala Ala Arg Pro Gln Gly Glu Ser Ile Arg
    435                 440                 445Leu His Asp Asp Lys Ile His Ile Leu His Pro Glu Leu Gly Val Trp
450                 455                 460Gln Ser Ala Asp Lys Asp Thr His Ser Gln Leu 5er Arg Gln Ala Asp465                 470                 475                 480Gly Lys Leu Tyr Ala Leu Lys Asp Asn Arg Thr Leu Gln Asn Leu Ser
            485                 490                 495Asp Asn Lys Ser Ser Glu Lys Leu Val Asp Lys Ile Lys Ser Tyr Ser
        500                505                  510Val Asp Gln Arg Gly Gln Val Ala Ile Leu Thr Asp Thr Pro Gly Arg
    515                 520                 525His Lys Net Ser Ile Met Pro Ser Leu Asp Ala Ser Pro Glu Ser His
530                 535                 540Ile Ser Leu Ser Leu His Phe Ala Asp Ala His Gln Gly Leu Leu His545                 550                 555                 560Gly Lys Ser Glu Leu Glu Ala Gln Sar Val Ala Ile Ser His Gly ArS
            565                 570                 575Leu Val Val Ala Asp Ser Glu Gly Lys Leu Phe Ssr Ala Ala Ile Pro
        580                 585                 590Lys Gln Gly Asp Gly Asn Glu Leu Lys Met Lys Ala Met Pro Gln His
    595                 600                 605Ala Leu Asp Glu His Phe Gly His Asp His Gln Ile Ser Gly Phe Phe
610                 615                 620His Asp Asp His Gly Gln Leu Asn Ale Leu Val Lys Asn Asn Phe Arg625                 630                 635                 640Gln Gln His Ala Cys Pro Leu Gly Asn Asp His Gln Phe His Pro Gly
            645                 650                 655Trp Asn Leu Thr Asp Ala Leu Val Ile Asp Asn Gln Leu Gly Leu His
        660                 665                 670His Thr Asn Pro Glu Pro His Glu Ile Leu Asp Met Gly His Leu Gly
    675                 680                 585Ser Leu Ala Leu Gln Glu Gly Lys Leu His Tyr Phe Asp Gln Leu Thr
690                 695                 700Lys Gly Trp Thr Gly Ala Glu Ser Asp Cys Lys Gln Leu Lys Lys Gly705                 710                 715                 720Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Leu Leu Lys Asp Gly Glu Val Lys Arg Leu
            725                 730                 735Asn Ile Asn Gln Ser Thr Ser Ser Ile Lys His Gly Thr Glu Asn Val
        740                 745                 750Phe Ser Leu Pro His Val Arg Asn Lys Pro Glu Pro Gly Asp Ala Leu
    755                 760                 765Gln Gly Leu Asn Lys Asp Asp Lys Ala Gln Ala Met Ala Val Ile Gly
770                 775                 780Val Asn Lys Tyr Leu Ala Leu Thr Glu Lys Gly Asp Ile Arg Ser Phe785                 790                 795                 800Gln Ile Lys Pro Gly Thr Gln Gln Leu Glu Arg Pro Ala Gln Thr Leu
            805                 810                 8l5Ser Arg Glu Gly Ile Ser Gly Glu Leu Lys Asp Ile His Val Asp His
        820                 825                 830Lys Gln Asn Leu Tyr Ala Leu Thr His Glu Gly Glu Val Phe His Gln
    835                 840                 845Pro Arg Glu Ala Trp Gln Asn Gly Ala Glu Ser Ser Ser Trp His Lys
850                 855                 860Leu Ala Leu Pro Gln Ser Glu Ser Lye Leu Lys Ser Leu Asp Met Ser865                 870                 875                 880His Glu His Lys Pro Ile Ala Thr Phe Glu Asp Gly Ser Gln His Gln
            885                 890                 895Leu Lys Ala Gly Gly Trp His Ala Tyr Ala Ala Pro Glu Arg Gly Pro
        900                 905                 910Leu Ala val Gly Thr Ser Gly Ser Gln Thr Val Phe Asn Arg Leu Met
    915                 920                 925Gln Gly Val Lys Gly Lys Val Ile Pro Gly Ser Gly Leu Thr Val Lys
930                 935                 940Leu Ser Ala Gln Thr Gly Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Arg Lys Val945                 950                 955                 960Ser Ser Lys Phe Ser Glu Arg Ile Arg Ala Tyr Ala Phe Asn Pro Thr
            965                 970                 975Met Ser Thr Pro Arg Pro Ile Lys Asn Ala Ala Tyr Ala Thr Gln His
        980                 985                 990Gly Trp Gln Gly Arg Glu Gly Leu Lys Pro Leu Tyr Glu Met Gln Gly
    995                 1000                1005Ala Leu Ile Lys Gln Leu Asp Ala His Ash Val Arg His Ash Ala Pro
1010                1015                1020Gln Pro Asp Leu Gln Ser Lys Leu Glu Thr Leu Asp Leu Gly Glu His1025                1030                1035                1040Gly Ala Glu Leu Leu Asn Asp Met Lys Arg Phe Atg Asp Glu Leu Glu
            1045                1050                1055Gln Ser Ala Thr Arg Ser Val Thr Val Leu Gly Gln His Gln Gly Val
        1060                1065                1070Leu Lys Ser Asn Gly Glu Ile Asn Ser Glu Phe Lys Pro Ser Pro Gly
    1075                1080                1085Lys Ala Leu Val Gln Ser Phe Asn Val Asn Arg Ser Gly Gln Asp Leu
1090                1095                1100Ser Lys Ser Leu Gln Gln Ala Val His Ala Thr Pro Pro Ser Ala Glu1105                1110                1115                1120Ser Lys Leu Gln Ser Met Leu Gly His Phe Vel Ser Ala Gly Val Asp
            1125                1130                1135Met Ser His Gln Lys Gly Glu Ile Pro Leu Gly Arg Gln Arg Asp Pro
        1140                1145                1150Asn Asp Lys Thr Ala Leu Thr Lys Ser Arg Leu Ile Leu Asp Thr Val
    1155                1160                1165Thr Ile Gly Glu Leu His Glu Leu Ale Asp Lys Ala Lys Leu Val Ser
1170                1175                1180Asp His Lys Pro Asp Ala Asp Gln Ile Lys Gln Leu Arg Gln Gln Phe1185                1190                1195                1200Asp Thr Leu Arg Glu Lys Arg Tyr Glu Ser Asn Pro Val Lys His Tyr
            1205                1210                1215Thr Asp Met Gly Phe Thr His Asn Lys Ala Leu Glu Ala Asn Tyr Asp
        1220                1225                1230Ala Val Lys Ala Phe Ile Ash Ala Phe Lys Lys Glu His His Gly Val
    1235                1240                1245Asn Leu Thr Thr Arg Thr Val Leu Glu Ser Gln Gly Ser Ala Glu Leu
1250                1255                1260Ala Lys Lys Leu Lys Asn Thr Leu Leu Ser Leu Asp Ser Gly Glu Ser1265                1270                1275                1280Met Ser Phe Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gly Vel Ser Thr Va1 Phe Val
            1285                1290                1295Pro Thr Leu Ser Lys Lys Val Pro Val Pro Val Ile Pro Gly Ala Gly
        1300                1305                1310Ile Thr Leu Asp Arg Ala Tyr Asn Leu Ser Phe Ser Arg Thr Ser Gly
    1315                1320                1325Gly Leu Asn Val Ser Phe Gly Arg Asp Gly Gly Val Ser Gly Asn Ile
1330                1335                1340Met Val Ala Thr Gly His Asp Val Met Pro Tyr Met Thr Gly Lys Lys1345                1350                1355                1360Thr Ser Ala Gly Asn Ala Ser Asp Trp Leu Ser Ala Lys His Lys Ile
            1365                1370                1375Ser Pro Asp Leu Arg Ile Gly Ala Ala Val Ser Gly Thr Leu Gln Gly
        1380                1385                1390Thr Leu Gln Asn Ser Leu Lys Phe Lys Leu Thr Glu Asp Glu Leu Pro
    1395                1400                1405Gly Phe Ile His Gly Leu Thr His Gly Thr Leu Thr Pro Ala Glu Leu
1410                1415                1420Leu Gln Lys Gly Ile Glu His Gln Met Lys Gln Gly Ser Lys Leu Thr1425                1430                1435                1440Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Asn Leu Asp Leu Arg Ala Gly Ile Asn
            1445                1450                1455Leu Asn Glu Asp Gly Ser Lys Pro Asn Gly Val Thr Ala Arg Val Ser
        1460                1465                1470Ala Gly Leu Ser Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Gly Ser Arg Glu Arg
    1475                1480                1485Ser Thr Thr Ser Gly Gln Phs Gly Ser Thr Thr Ser Ala Ser Asn Asn
1490                1495                1500Arg Pro Thr Phe Leu Asn Gly Val Gly Ala Gly Ala Asn Leu Thr Ala1505                1510                1515                1520Ala Leu Gly Val Ala His Ser Ser Thr His Glu Gly Lys Pro Val Gly
            1525                1530                1535Ile Phe Pro Ala Phe Thr Ser Thr Asn Val Ser Ala Ala Leu Ala Leu
        1540                1545                1550Asp Asn Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Leu Glu Leu Lys Arg Ala Glu
    1555                1560                1565Pro Val Thr Ser Asn Asp Ile Ser Glu Leu Thr Ser Thr Leu Gly Lys
1570                1575                1580His Phe Lys Asp Ser Ala Thr Thr Lys Met Leu Ala Ala Leu Lys Glu1585                1590                1595                1600Leu Asp Asp Ala Lys Pro Ala Glu Gln Leu His Ile Leu Gln Gln His
            1605                1610                1615Phe Ser Ala Lys Asp Val Val Gly Asp Glu Arg Tyr Glu Ala Val Arg
        1620                1625                1630Asn Leu Lys Lys Leu Val Ils Arg Gln Gln Ala Ala Asp Ser His Ser
    1635                1640                1645Met Glu Leu Gly Ser Ala Ser His Ser Thr Thr Tyr ASn Asn Leu Ser
1650                1655                1660Arg Ile Asn Asn Asp Gly Ile Val Glu Leu Leu His Lys His Phe Asp1665                1670                1675                1680Ala Ala Leu Pro Ala Ser Ser Ala Lys Arg Leu Gly Glu Met Met Asn
            1685                1690                1695Asn Asp Pro Ala Leu Lys Asp Ile Ile Lys Gln Leu Gln Ser Thr Pro
        1700                1705                1710Phe Ser Ser Ala Ser Val Ser Met Glu Leu Lys Asp Gly Leu Arg Glu
    1715                1720                1725Gln Thr Glu Lys Ala Ile Leu Asp Gly Lys Val Gly Arg Glu Glu Val
1730                1735                1740Gly Val Leu Phe Gln Asp Arg Asn Asn Leu Arg Val Lys Ser Val Ser1745                1750                1755                1760Val Ser Gln Ser Val Ser Lys Ser Glu Gly Phe Asn Thr Pro Ala Leu
            1765                1770                1775Leu Leu Gly Thr Ser Asn Ser Ala Ala Mer Ser Met Glu Arg Asn Ile
        1780                1785                1790Gly Thr Ile Asn Phe Lys Tyr Gly Gln Asp Gln Asn Thr Pro Arg Arg
    1795                1800                1805Phe Thr Leu Glu Gly Gly Ile Ala Gln Ala Asn Pro Gln Val Ala Ser
1810                1815                1820Ala Leu Thr Asp Leu Lys Lys Glu Gly Leu Glu Met Lys Ser1825                1830                1835该蛋白或多肽约为198kDa，而pI为8.98。
本发明涉及具有如下SEQ.ID.No.29的核苷酸序列的分离的DNA分子：ATGACATCGT  CACAGCAGCG  GGTTGAAAGG  TTTTTACAGT  ATTTCTCCGC  CGGGTGTAAA     60ACGCCCATAC  ATCTGAAAGA  CGGGGTGTGC  GCCCTGTATA  ACGAACAAGA  TGAGGAGGCG    120GCGGTGCTGG  AAGTACCGCA  ACACAGCGAC  AGCCTGTTAC  TACACTGCCG  AATCATTGAG    180GCTGACCCAC  AAACTTCAAT  AACCCTGTAT  TCGATGCTAT  TACAGCTGAA  TTTTGAAATG    240GCGGCCATGC  GCGGCTGTTG  GCTGGCGCTG  GATGAACTGC  ACAACGTGCG  TTTATGTTTT    300CAGCAGTCGC  TGGAGCATCT  GGATGAAGCA  AGTTTTAGCG  ATATCGTTAG  CGGCTTCATC    360GAACATGCGG  CAGAAGTGCG  TGAGTATATA  GCGCAATTAG  ACGAGAGTAG  CGCGGCATAA    420该DNA分子被称为dspF基因。本发明的这种分离的DNA分子编码具有如下SEQ.ID.No.30的氨基酸序列的过敏反应激发子蛋白或多肽：Met Thr Ser Ser Gln Gln Arg Val Glu Arg Phe Leu Gln Tyr Phe Serl               5                   10                  15Ala Gly Cys Lys Thr Pro Ile His Leu Lys Asp Gly Val Cys Ala Leu
        20                  25                  30Tyr Asn Glu Gln Asp Glu Glu Ala Ala Val Leu Glu Val Pro Gln His
    35                  40                  45Ser Asp Ser Leu Leu Leu His Cys Arg Ile Ile Glu Ala Asp Pro Gln
50                  55                  60Thr Ser Ile Thr Leu Tyr Ser Met Leu Leu Gln Leu Asn Phe Glu Met65                  70                  75                  80Ala Ala Met Arg Gly Cys Trp Leu Ala Leu Asp Glu Leu His Asn Val
            85                  90                  95Arg Leu Cys Phe Gln Gln Ser Leu Glu His Leu Asp Glu Ala Ser Phe
        100                 105                 110Ser Asp Ile Val Ser Gly Phe Ile Glu His Ala Ala Glu Val Arg Glu
    115                 120                 125Tyr Ile Ala Gln Leu Asp Glu Ser Ser Ala Ala
130                 135该蛋白或多肽约为16kDa，而pI为4.45。
得自丁香假单胞菌的过敏反应激发子多肽或蛋白具有对应于如下SEQ.ID.No.31的氨基酸序列：Met Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Ser Ser Leu Gln Thr Pro Ala Metl               5                   10                  15Ala Leu Val Leu Val Arg Pro Glu Ala Glu Thr Thr Gly Ser Thr Ser
        20                  25                  30Ser Lys Ala Leu Gln Glu Val Val Val Lys Leu Ala Glu Glu Leu Met
    35                  40                  45Arg Asn Gly Gln Leu Asp Asp Ser Ser Pro Leu Gly Lys Leu Leu Ala
50                  55                  60Lys Ser Met Ala Ala Asp Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ile Glu Asp Val65                  70                  75                  80Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe
            85                  90                  95Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met
        100                 105                 110Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu Leu
    115                 120                 125Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro Met
130                 135                 140Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe Pro145                 150                 155                 160Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn Phe
            165                 170                 175LGu Asp Gly Asp Glu Thr Ala Ala Phe Arg Ser Ala Leu Asp Ile Ilo
        180                 185                 190Gly Gln Gln Leu Gly Asn Gln Gln Ser Asp Ala Gly Ser Leu Ala Gly
    195                 200                 205Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser Ser
210                 215                 220Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp Ser225                 230                 235                 240Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp
            245                 250                 255Arg Gly Leu Gln Ser Val Leu Ala Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Val
        260                 265                 270Asn Thr Pro Gln Thr Gly Thr Ser Ala Asn Gly Gly Gln Ser Ala Gln
    275                 280                 285Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu Ala
290                 295                 300Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser Ala305                 310                 315                 320Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Arg
            325                 330                 335Asn Gln Ala Ala Ala
        340该过敏反应激发子多肽或蛋白的分子量为34-35kDa。它富含甘氨酸(约13.5％)，而缺乏半胱氨酸和酪氨酸。关于得自丁香假单胞菌的过敏反应激发子的进一步信息见于He，S.Y.，H.C.Huang和A.Collmer，“丁香假单胞菌丁香致病变种Harpinpss：通过Hrp途径分泌并诱发植物过敏反应的蛋白，”Cell 73：1255-1266(1993)，该文献通过引用结合到本文中。编码得自丁香假单胞菌的过敏反应激发子的DNA分子具有对应于如下SEQ.ID.No.32的核苷酸序列：ATGCAGAGTC TCAGTCTTAA CAGCAGCTCG CTGCAAACCC CGGCAATGGC CCTTGTCCTG   60GTACGTCCTG AAGCCGAGAC GACTGGCAGT ACGTCGAGCA AGGCGCTTCA GGAAGTTGTC  120GTGAAGCTGG CCGAGGAACT GATGCGCAAT GGTCAACTCG ACGACAGCTC GCCATTGGGA  180AAACTGTTGG CCAAGTCGAT GGCCGCAGAT GGCAAGGCGG GCGGCGGTAT TGAGGATGTC  240ATCGCTGCGC TGGACAAGCT GATCCATGAA AAGCTCGGTG ACAACTTCGG CGCGTCTGCG  300GACAGCGCCT CGGGTACCGG ACAGCAGGAC CTGATGACTC AGGTGCTCAA TGGCCTGGCC   360AAGTCGATGC TCGATGATCT TCTGACCAAG CAGGATGGCG GGACAAGCTT CTCCGAAGAC   420GATATGCCGA TGCTGAACAA GATCGCGCAG TTCATGGATG ACAATCCCGC ACAGTTTCCC   480AAGCCGGACT CGGGCTCCTG GGTGAACGAA CTCAAGGAAG ACAACTTCCT TGATGGCGAC   540GAAACGGCTG CGTTCCGTTC GGCACTCGAC ATCATTGGCC AGCAACTGGG TAATCAGCAG   600AGTGACGCTG GCAGTCTGGC AGGGACGGGT GGAGGTCTGG GCACTCCGAG CAGTTTTTCC   660AACAACTCGT CCGTGATGGG TGATCCGCTG ATCGACGCCA ATACCGGTCC CGGTGACAGC   720GGCAATACCC GTGGTGAAGC GGGGCAACTG ATCGGCGAGC TTATCGACCG TGGCCTGCAA   780TCGGTATTGG CCGGTGGTGG ACTGGGCACA CCCGTAAACA CCCCGCAGAC CGGTACGTCG   840GCGAATGGCG GACAGTCCGC TCACGATCTT GATCAGTTGC TGGGCGGCTT GCTGCTCAAG   900GGCCTGGAGG CAACGCTCAA GGATGCCGGG CAAACAGGCA CCGACGTGCA GTCGAGCGCT   960GCGCAAATCG CCACCTTGCT GGTCAGTACG CTGCTGCAAG GCACCCGCAA TCAGGCTGCA  1020GCCTGA                                                             1026
得自丁香假单胞菌的另一种可能合适的过敏反应激发子公开于美国专利申请序号09/120,817，该文献通过引用结合到本文中。所述蛋白具有如下SEQ.ID.No.33的核苷酸序列：TCCACTTCGC TGATTTTGAA ATTGGCAGAT TCATAGAAAC GTTCAGGTGT GGAAATCAGG     60CTGAGTGCGC AGATTTCGTT GATAAGGGTG TGGTACTGGT CATTGTTGGT CATTTCAAGG    120CCTCTGAGTG CGGTGCGGAG CAATACCAGT CTTCCTGCTG GCGTGTGCAC ACTGAGTCGC    180AGGCATAGGC ATTTCAGTTC CTTGCGTTGG TTGGGCATAT AAAAAAAGGA ACTTTTAAAA    240ACAGTGCAAT GAGATGCCGG CAAAACGGGA ACCGGTCGCT GCGCTTTGCC ACTCACTTCG    300AGCAAGCTCA ACCCCAAACA TCCACATCCC TATCGAACGG ACAGCGATAC GGCCACTTGC    360TCTGGTAAAC CCTGGAGCTG GCGTCGGTCC AATTGCCCAC TTAGCGAGGT AACGCAGCAT    420GAGCATCGGC ATCACACCCC GGCCGCAACA GACCACCACG CCACTCGATT TTTCGGCGCT    480AAGCGGCAAG AGTCCTCAAC CAAACACGTT CGGCCAGCAG AACACTCAGC AAGCGATCGA    540CCCGAGTGCA CTGTTGTTCG GCAGCGACAC ACAGAAAGAC GTCAACTTCG GCACGCCCGA    600CAGCACCGTC CAGAATCCGC AGGACGCCAG CAAGCCCAAC GACAGCCAGT CCAACATCGC    660TAAATTGATC AGTGCATTGA TCATGTCGTT GCTGCAGATG CTCACCAACT CCAATAAAAA    720GCAGGACACC AATCAGGAAC AGCCTGATAG CCAGGCTCCT TTCCAGAACA ACGGCGGGCT    780CGGTACACCG   TCGGCCGATA   GCGGGGGCGG   CGGTACACCG   GATGCGACAG   GTGGCGGCGG     840CGGTGATACG   CCAAGCGCAA   CAGGCGGTGG   CGGCGGTGAT   ACTCCGACCG   CAACAGGCGG     900TGGCGGCAGC   GGTGGCGGCG   GCACACCCAC   TGCAACAGGT   GGCGGCAGCG   GTGGCACACC     960CACTGCAACA   GGCGGTGGCG   AGGGTCGCGT   AACACCGCAA   ATCACTCCGC   AGTTGGCCAA    1020CCCTAACCGT   ACCTCAGGTA   CTGGCTCGGT   GTCGGACACC   GCAGGTTCTA   CCGAGCAAGC    1080CGGCAAGATC   AATGTGGTGA   AAGACACCAT   CAAGGTCGGC   GCTGGCGAAG   TCTTTGACGG    1140CCACGGCGCA   ACCTTCACTG   CCGACAAATC   TATGGGTAAC   GGAGACCAGG   GCGAAAATCA    1200GAAGCCCATG   TTCGAGCTGG   CTGAAGGCGC   TACGTTGAAG   AATGTGAACC   TGGGTGAGAA    1260CGAGGTCGAT   GGCATCCACG   TGAAAGCCAA   AAACGCTCAG   GAAGTCACCA   TTGACAACGT    1320GCATGCCCAG   AACGTCGGTG   AAGACCTGAT   TACGGTCAAA   GGCGAGGGAG   GCGCAGCGGT    1380CACTAATCTG   AACATCAAGA   ACAGCAGTGC   CAAAGGTGCA   GACGACAAGG   TTGTCCAGCT    1440CAACGCCAAC   ACTCACTTGA   AAATCGACAA   CTTCAAGGCC   GACGATTTCG   GCACGATGGT    1500TCGCACCAAC   GGTGGCAAGC   AGTTTGATGA   CATGAGCATC   GAGCTGAACG   GCATCGAAGC    1560TAACCACGGC   AAGTTCGCCC   TGGTGAAAAG   CGACAGTGAC   GATCTGAAGC   TGGCAACGGG    1620CAACATCGCC   ATGACCGACG   TCAAACACGC   CTACGATAAA   ACCCAGGCAT   CGACCCAACA    1680CACCGAGCTT   TGAATCCAGA   CAAGTAGCTT   GAAAAAAGGG   GGTGGACTC                  1729该DNA分子被称为丁香假单胞菌的dspE基因。本发明的这种分离的DNA分子编码具有如下SEQ.ID.No.34的氨基酸序列的诱发植物病原体的过敏反应的蛋白或多肽：Met Ser Ile Gly Ile Thr Pro Arg Pro Gln Gln Thr Thr Thr Pro Leu1               5                   10                  15Asp Phe Ser Ala Leu Ser Gly Lys Ser Pro Gln Pro Asn Thr Phe Gly
        20                  25                  30Glu Gln Asn Thr Gln Gln Ala Ile Asp Pro Ser Ala Leu Leu Phe Gly
    35                  40                  45Ser Asp Thr Gln Lys Asp Val Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val
50                  55                  60Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile65                  70                  75                  80Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu Leu Gln Met Leu Thr
            85                  90                  95Asn Ser Asn Lys Lys Gln Asp Thr Asn Gln Glu Gln Pro Asp Ser Gln
        100                 105                 110Ala Pro Phe Gln Asn Asn Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ala Asp Ser
    115                 120                 125Gly Gly Gly Gly Thr Pro Asp Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Thr
130                 135                 140Pro Ser Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Thr Pro Thr Ala Thr Gly145                 150                 155                 160Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Pro Thr Ala Thr Gly Gly Gly
            165                 170                 175Ser Gly Gly Thr Pro Thr Ala Thr Gly Gly Gly Glu Gly Gly Val Thr
        180                 185                 190Pro Gln Ile Thr Pro Gln Lau Ala Asn Pro Asn Arg Thr Ser Gly Thr
    195                 200                 205Gly Ser Val Ser Asp Thr Ala Gly Ser Thr Glu Gln Ala Gly Lys Ile
210                 215                 220Asn Val Val Lys Asp Thr Ile Lys Val Gly Ala Gly Glu Val Phe Asp225                 230                 235                 240Gly His Gly Ala Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Met Gly Asn Gly Asp
            245                 250                 255Gln Gly Glu Asn Gln Lys Pro Met Phe Glu Leu Ala Glu Gly Ala Thr
        260                 265                 270Leu Lys Asn Val Asn Leu Gly Glu Asn Glu Vai Asp Gly Ile His Val
    275                 280                 285Lys Ala Lys Asn Ala Gln Glu Val Thr Ile Asp Asn Val His Ala Gln
290                 295                 300Asn Val Gly Glu Asp Leu Ile Thr Val Lys Gly Glu Gly Gly Ala Ala305                 310                 315                 320Val Thr Asn Leu Asn Ile Lys Asn Ser Ser Ala Lys Gly Ala Asp Asp
            325                 330                 335Lys Val Val Gln Leu Asn Ala Asn Thr His Leu Lys Ile Asp Asn Phe
        340                 345                 350Lys Ala Asp Asp Phe Gly Thr Met Val Arg Thr Asn Gly Gly Lys Gln
    355                 360                 365Phe Asp Asp Met Ser Ile Glu Leu Asn Gly Ile Glu Ala Asn His Gly
370                 375                 380Lys Phe Ala Leu Val Lys Ser Asp Ser Asp Asp Leu Lys Leu Ala Thr385                 390                 395                 400Gly Asn Ile Ala Met Thr Asp Val Lys His Ala Tyr Asp Lys Thr Gln
            405                 410                 415Ala Ser Thr Gln His Thr Glu Leu
        420该蛋白或多肽约为42.9kDa。
得自茄假单胞菌的过敏反应激发子多肽或蛋白具有对应于如下SEQ.ID.No.35的氨基酸序列：Met Ser Val Gly Asn Ile Gln Ser Pro Ser Asn Leu Pro Gly Leu Gln1               5                   10                  15Asn Leu Asn Leu Asn Thr Asn Thr Asn Ser Gln Gln Ser Gly Gln Ser
        20                  25                  30Val Gln Asp Leu Ile Lys Gln Val Glu Lys Asp Ile Leu Asn Ile Ile
    35                  40                  45Ala Ala Leu Val Gln Lys Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gly Asn Thr Gly
50                  55                  60Asn Thr Gly Asn Ala Pro Ala Lys Asp Gly Asn Ala Asn Ala Gly Ala65                  70                  75                  80Asn Asp Pro Ser Lys Asn Asp Pro Ser Lys Ser Gln Ala Pro Gln Ser
            85                  90                  95Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met
        100                 105                 110Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys Leu Leu Lys Ala
    115                 120                 125Ala Leu His Met Gln Gln Pro Gly Gly Asn Asp Lye Gly Asn Gly Val
130                 135                 140Gly Gly Ala Asn Gly Ala Lys Gly Ala Gly Gly Gln Gly Gly Leu Ala145                 150                 155                 160Glu Ala Leu Gln Glu Ile Glu Gln Ile Leu Ala Gln Leu Gly Gly Gly
            165                 170                 175Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Val Gly Gly Ala Gly Gly
        180                 185                 190Ala Asp Gly Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Asn Gly Ala
    195                 200                 205Asp Gly Gly Asn Gly Val Asn Gly Asn Gln Ala Asn Gly Pro Gln Asn
210                 215                 220Ala Gly Asp val Asn Gly Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly Ser Glu Asp225                 230                 235                 240Gln Gly Gly Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu Asn
            245                 250                 255Ala Leu Val Gln Met Met Gln Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gln
        260                 265                 270Ala Gln Gly Gly Ser Lys Gly Ala Gly Asn Ala Ser Pro Ala Ser Gly
    275                 280                 285Ala Asn Pro Gly Ala Asn Gln Pro Gly Ser Ala Asp Asp Gln Ser Ser
290                 295                 300Gly Gln Asn Asn Leu Gln Ser Gln Ila Mat Asp Val Val Lys Glu Val305                 310                 315                 320Val Gln Ile Leu Gln Gln Met Leu Ala Ala Gln Asn Gly Gly Ser Gln
            325                 330                 335Gln Ser Thr Ser Thr Gln Pro Met
           340具有对应于如下SEQ.ID.No.36的核苷酸序列的DNA分子编码上述多肽或蛋白：ATGTCAGTCG   GAAACATCCA   GACCCGTCG    AACCTCCCGG   GTCTGCAGAA   CCTGAACCTC       60AACACCAACA   CCAACAGCCA   GCAATCGGGC   CAGTCCGTGC   AAGACCTGAT   CAAGCAGGTC      120GAGAAGGACA   TCCTCAACAT   CATCGCAGCC   CTCGTGCAGA   AGGCCGCACA   GTCGGCGGGC      180GGCAACACCG   GTAACACCGG   CAACGCGCCG   GCGAAGGACG   GCAATGCCAA   CGCGGGCGCC      240AACGACCCGA   GCAAGAACGA   CCCGAGCAAG   AGCCAGGCTC   CGCAGTCGGC   CAACAAGACC      300GGCAACGTCG   ACGACGCCAA   CAACCAGGAT   CCGATGCAAG   CGCTGATGCA   GCTGCTGGAA      360GACCTGGTGA   AGCTGCTGAA   GGCGGCCCTG   CACATGCAGC   AGCCCGGCGG   CAATGACAAG      420GGCAACGGCG   TGGGCGGTGC   CAACGGCGCC   AAGGGTGCCG   GCGGCCAGGG   CGGCCTGGCC      480GAAGCGCTGC   AGGAGATCGA   GCAGATCCTC   GCCCAGCTCG   GCGGCGGCGG   TGCTGGCGCC      540GGCGGCGCGG   GTGGCGGTGT   CGGCGGTGCT   GGTGGCGCGG   ATGGCGGCTC   CGGTGCGGGT      600GGCGCAGGCG   GTGCGAACGG   CGCCGACGGC   GGCAATGGCG   TGAACGGCAA   CCAGGCGAAC      660GGCCCGCAGA   ACGCAGGCGA   TGTCAACGGT   GCCAACGGCG   CGGATGACGG   CAGCGAAGAC      720CAGGGCGGCC   TCACCGGCGT   GCTGCAAAAG   CTGATGAAGA   TCCTGAACGC   GCTGGTGCAG      780ATGATGCAGC   AAGGCGGCCT   CGGCGGCGGC   AACCAGGCGC   AGGGCGGCTC   GAAGGGTGCC      840GGCAACGCCT   CGCCGGCTTC   CGGCGCGAAC   CCGGGCGCGA   ACCAGCCCGG   TTCGGGGGAT      900GATCAATCGT CCGGCCAGAA CAATCTGCAA TCCCAGATCA TGGATGTGGT GAAGGAGGTC    960GTCCAGATCC TGCAGCAGAT GCTGGCGGCG CAGAACGGCG GCAGCCAGCA GTCCACCTCG   1020ACGCAGCCGA TGTAA                                                    1035关于得自茄假单胞菌的过敏反应激发子多肽或蛋白的进一步信息叙述于Arlat，M.，F.Van Gijsegem，J.C.Huet，J.C.Pemollet和CA.Boucher，“通过茄假单胞菌的Hrp途径分泌PopAl—在特定矮牵牛基因型上诱导过敏样反应的蛋白，”EMBO J.13：543-533(1994)，该文献通过引用结合到本文中。
得自野油菜黄单胞菌大豆致病变种(Xanthomonas campestris pv.glycines)的过敏反应激发子多肽或蛋白具有对应于如下SEQ.ID.No.37的氨基酸序列：
Thr Leu Ile Glu Leu Met Ile Val Val Ala Ile Ile Ala Ile Leu Ala
1               5                   10                  15
Ala Ile Ala Leu pro Ala Tyr Gln Asp Tyr
            20                  25该序列为得自野油菜黄单胞菌大豆致病变种的过敏反应激发子多肽或蛋白的仅具有26个残基的氨基端序列。它与在其它野油菜黄单胞菌致病变种中所确定的fimbrial亚基蛋白相匹配。
得自野油菜黄单胞菌天竺葵致病变种(Xanthomonas campestris pv.pelargonii)的过敏反应激发子多肽或蛋白为热稳定、对蛋白酶敏感，并且分子量为20kDa。它包括对应于如下SEQ.ID.No.38的氨基酸序列：
Ser Ser Gln Gln Ser Pro Ser Ala Gly Ser Glu Gln Gln Leu Asp Gln
1               5                   10                  15
Leu Leu Ala Met
            20
  Cui等，“胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种Ecc71菌株的RsInA突变体在烟草叶片中过量表达hrpNEcc并诱发过敏反应样反应，”MPMI9(7)：565-73(1996)中描述了胡萝卜软腐欧文氏菌过敏反应激发子蛋白或多肽的分离，该文献通过引用结合到本文中。Ahmad等，“Harpin对斯氏欧文氏菌在玉米中的致病性不是必需的，”8thInt’l.Cong.Molec.Plant-Microb.Inter.1996年7月14-19日和Ahmad等，“Harpin对斯氏欧文氏菌在玉米中的致病性不是必需的，”Ann Mtg.Am.Phytopath.Soc.1996年7月27-31日中陈述了斯氏欧文氏菌的过敏反应激发子蛋白或多肽，所述文献通过引用结合到本文中。
Kaman等，“来自疫霉属的胞外蛋白激发子：对细菌和真菌植物病原体最具特异性(most specificity)并诱导抗性，”Molec.Plant-MicrobeInteract.，6(1)：15-25(1993)；Ricci等，“得自病原体真菌疫霉属、在烟草中诱发坏死和获得抗性的蛋白的结构及活性，”Eur.J.Biochem.，183：555-63(1989)；Ricci等，“寄生疫霉的分离菌在烟草中差别产生parasiticein及坏死和抗性的激发子，”Plant Path.41：298-307(1992)；Baillreul等，“烟草中过敏反应的一种新的激发子：真菌糖蛋白诱发细胞死亡、防卫基因的表达、水杨酸的产生及诱导系统获得抗性，”PlantJ.8(4)：551-60(1995)和Bonnet等，“烟草和其它植物中的激发子触发的获得抗性，”Eur.J.PlantPath.，102：181-92(1996)，描述了得自寄生疫霉、隐地疫霉、樟疫霉、辣椒疫霉、大雄疫霉和柑橘褐腐疫霉的过敏反应激发子蛋白或多肽，这些文献均通过引用结合到本文中。
按照本发明的另一种过敏反应激发子是来自美国专利申请序号09/136,625中全面描述的密执安棍状杆菌坏腐亚种(Clavibactermichiganensis subsp.sepedonicus)的激发子，该文献通过引用结合到本文中。
上述激发子为典型的激发子。通过在表达编码激发子的基因的条件下，培养诱发过敏反应的真菌或细菌，可以鉴定出其它激发子。可以通过使用得自培养上清液的无细胞制备物的浸润合适的植物组织，测试其激发子活性(即局部坏死)。
本发明包括上述过敏反应激发子多肽或蛋白的片段以及来自其它病原体的全长激发子的片段。
通过几种方法可以产生合适的片段。在第一种方法中，按照常规分子遗传学操作，通过亚克隆基因片段产生编码已知激发子蛋白的基因的亚克隆。然后在体外或体内将这些亚克隆在细菌细胞中表达以产生较小的蛋白或肽，可以按照以下所述方法测试所述蛋白或多肽的激发子活性。
作为一种可采用的方法，可以通过用蛋白水解酶像胰凝乳蛋白酶或葡萄球菌A蛋白酶或胰蛋白酶消化全长激发子蛋白，产生激发子蛋白的片段。不同的蛋白水解酶可能基于激发子蛋白的氨基酸序列在不同的位点剪切激发子蛋白。从蛋白酶解中产生的有些片段可以是活性的抗性激发子。
在另一个方案中，根据对所述蛋白一级结构的认识，经采用PCR技术和选择代表所述蛋白特定部分的多组特异性引物，可以合成所述激发子蛋白基因的片段。然后将这些片段克隆到合适的载体中以表达截短的肽或蛋白。
化学合成也可用来制备合适的片段。采用待产生的激发子的已知氨基酸序列进行这样的合成。或者，使全长激发子经受高温高压产生片段。然后经常规方法(例如层析、SDS-PAGE)可以将这些片段分离。
不诱发过敏反应的过敏反应激发子合适的片段的实例包括解淀粉欧文氏菌过敏反应激发子的片段。合适的片段包括SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的C端片段、SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的N端片段或SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的内部片段。SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的C端片段可以覆盖(span)以下序列的氨基酸：SEQ.ID.No.23：169和403、210和403、267和403、或343和403。SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的内部片段可以覆盖以下序列的氨基酸：SEQ.ID.No.23：105和179、137和166、121和150、或137和156。按照本发明可以鉴定出其它合适的片段。
过敏反应激发子的有用片段(所述片段本身不诱发过敏反应)的另一个实例是含有丁香假单胞菌丁香致病变种过敏反应激发子的氨基酸序列(SEQ.ID.No.31)的氨基酸190-294的蛋白片段。该片段可用来赋予抗病性和促进植物生长。
过敏反应激发子的有用片段的再一实例是具有对应于SEQ.ID.No.39的氨基酸序列的肽。该肽得自诱发过敏反应的大雄疫霉糖蛋白，并促进植物生长。
例如，通过缺失或添加对所述多肽的特性、二级结构和亲水特性方面的影响最小的氨基酸，可以产生变异体。例如，可以将多肽连接到共翻译或翻译引导所述蛋白转运的蛋白N-末端的信号(或前导)序列上。也可以将所述多肽连接到接头或其它序列上以便于合成、纯化或鉴定所述多肽。
本发明的所述片段优选为分离的形式(即从其宿主生物中分离的)，而更优选通过常规技术，以纯化的形式(优选至少约60％，更优选80％，纯度)产生。通常，产生本发明的所述片段但不分泌到重组宿主细胞的生长培养基中。或者，将本发明的蛋白或多肽分泌到生长培养基中。在非分泌蛋白的情况下，为了分离所述蛋白片段，将携带重组质粒的宿主细胞(例如大肠杆菌)繁殖、经超声处理、热处理或化学处理裂解，然后将匀浆离心以去除细菌碎片。然后将所述上清液加热处理并通过离心分离所述片段。将含有所述片段的上清液部分在合适大小的葡聚糖或聚丙烯酰胺柱中经过凝胶过滤以分离所述片段。必要时，可以经离子交换或HPLC进一步纯化所述蛋白部分。
采用常规重组DNA技术，可以将编码所述过敏反应激发子多肽或蛋白的所述片段的DNA分子掺入到细胞中。一般而言，这涉及将所述DNA分子插入到所述DNA分子为异源的(即通常不存在)表达系统中。将所述异源DNA分子适当的有义方向和正确的读框插入到所述表达系统或载体中。所述载体含有所述插入的蛋白编码序列的转录和翻译的必需元件。
Cohen和Boyer的美国专利第4,237,224号(该文献通过引用结合到本文中)，描述了采用限制酶切割并用DNA连接酶连接，产生重组质粒形式的表达系统。然后采用多种转化方法将这些重组质粒引入，并在包括组织培养中生长的原核生物和真核细胞的单细胞培养物中复制。
也可以将重组基因引入到病毒，诸如痘苗病毒中。可以通过将质粒转染到用病毒感染的细胞中产生重组病毒。
合适的载体包括但不限于以下的病毒载体诸如λ载体系统gt11、gtWES.tB、卡隆4(Charon 4)和质粒载体诸如pBR322、pBR325、pACYC177、pACYC1084、pUC8、pUC9、pUC18、pUC19、pLG339、pR290、pKC37、pKC101、SV40、pBluescript II SK+/-或KS+/-(参见“Stratagene Cloning Systems”Catalog(1993)from Stratagene，LaJolla，Calif，其通过引用结合到本文中)、pQE、pIH821、pGEX、pET系列(参见F.W.Studier等，“采用T7 RNA聚合酶直接表达克隆的基因”GeneExpression Technology第185卷(1990)，该文献通过引用结合到本文中)及其任何衍生物。通过转化尤其是转导、接合、带动转移(mobilization)或电穿孔，可以将重组分子引入到细胞中。采用如Sambrook等，Molecular Cloning：A Laborotoruy Manual，Cold Springs Laboratory，ColdSprings Harbor，New Yodk(1989)所描述的本领域中的标准克隆方法，将所述DNA序列克隆到所述载体中，该文献通过引用结合到本文中。
可以利用各种宿主-载体系统来表达所述蛋白编码序列。首先，所述载体系统必须与所用的宿主细胞相匹配。宿主-载体系统包括但不限于以下所述宿主-载体系统：用噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA转化的细菌；微生物诸如含有酵母载体的酵母；用病毒(例如痘苗病毒、腺病毒等)感染的哺乳动物细胞系统；用病毒(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；和被细菌感染的植物细胞。这些载体的表达元件在其强度和特异性方面不同。根据所采用的宿主-载体系统，可以使用许多合适的转录和翻译元件中的任何一种。
不同遗传信号和加工事件控制多种水平的基因表达(例如DNA的转录和信使RNA(mRNA)的翻译)。
DNA转录依赖于引导RNA聚合酶结合并因此启动mRNA合成的一段DNA序列的启动子的存在。真核启动子的DNA序列与原核启动子的DNA序列有差异。此外，真核启动子及伴随的遗传信号可能不被原核系统识别或可能在原核系统中不起作用，而原核启动子在真核细胞中也不被识别和不起作用。
同样，原核生物中的mRNA翻译依赖于与真核生物的那些信号不同的适当的原核生物信号的存在。原核生物中的mRNA有效翻译需要mRNA上称为Shine-Dalgarno(“SD”)序列的核糖体结合位点。该序列是一段位于编码所述蛋白质氨基端的甲硫氨酸的起始密码子，通常是AUG之前的短的mRNA核苷酸序列。SD序列与16S rRNA(核糖体RNA)的3’-末端互补，然后可能通过与所述rRNA形成双链体启动mRNA结合到核糖体上，以便正确定位该核糖体。关于使基因表达最大化的综述，参见Roberts和Lauer，Methods in Enzymology，68：473(1979)，该文献通过引用结合到本文中。
启动子在其“强度”(即它们启动转录的能力)方面不同。为了表达克隆的基因，最好是采用强启动子以获得高水平转录，并因此表达所述基因。基于所采用的宿主细胞系统，可以使用许多合适启动子中的任何一种。例如，当在大肠杆菌中克隆其噬菌体或质粒时，可以将启动子诸如T7噬菌体启动子、lac启动子、trp启动子、rec启动子、核糖体RNA启动子、大肠杆菌噬菌体λ的PR和PL启动子和其它启动子包括但不限于lacUV5、ompF、bla、lpp等，用来引导高水平转录相邻的DNA区段。此外，可以将通过重组DNA或其它合成DNA技术产生的杂种trp-lacUV5(tac)启动子或其它大肠杆菌启动子用来提供插入的基因转录。
可以选择若非特异性诱导则抑制启动子作用的细菌宿主细胞菌株和表达载体。在某些操作中，为了有效转录插入的DNA，必需加入特异性的诱导物。例如，加入乳糖或IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导lac操纵子。各种其它操纵子诸如trp、pro等是处于不同的控制之下。
在原核细胞中基因的有效转录和翻译，也需要特定的起始信号。根据基因特异性的信使RNA和所合成的蛋白质的量分别测量，这些转录和翻译起始信号在“强度”方面可以不同。含有启动子的DNA表达载体，也可以包括任何各种“强”转录和/或翻译起始信号的组合物。例如，大肠杆菌中的有效翻译需要起始密码子(“ATG”)5’约7-9个碱基的SD序列以提供核糖体结合位点。因此，可以采用可以由宿主细胞核糖体使用的任何SD-ATG组合。这样的组合包括但不限于来自大肠杆菌噬菌体λ的cro基因或N基因或来自大肠杆菌色氨酸E、D、C、B或A基因的SD-ATG组合。此外，可以使用涉及掺入合成的核苷酸的重组DNA或其它技术产生的任何SD-ATG组合。
一旦已经将编码过敏反应激发子多肽或蛋白的片段的分离的DNA分子克隆到表达系统中，就随时可以将其掺入到宿主细胞中。基于所述载体/宿主细胞系统，通过以上所述的各种形式的转化可以进行这样的掺入。合适的宿主细胞包括但不限于细菌、病毒、酵母、哺乳动物细胞、昆虫、植物等。
本发明还涉及赋予植物抗病性、促进植物生长和/或实现防治植物害虫的方法。这些方法涉及，在给所述片段有效赋予抗病性、促进生长和/或防治害虫的条件下，将在非感染形式的不诱发过敏反应的过敏反应激发子多肽或蛋白的片段应用于整株植物或植物部分或植物种子。或者，可以将过敏反应激发子蛋白或多肽的这些片段应用于植物，以便从这种植物自身收获的种子能够赋予植物抗病性、促进植物生长和/或实现防治害虫。
作为将过敏反应激发子多肽或蛋白的片段应用于植物或植物种子以便给植物或由所述植物种子培育的植物赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的替代方法，可以使用转基因植物或植物种子。如果使用转基因植物，这种方法涉及：提供用编码过敏反应激发子多肽或蛋白的片段的DNA分子转化的转基因植物，所述片段不诱发过敏反应，并在有效允许那种DNA分子赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下培育所述植物。或者，可以提供用编码过敏反应激发子多肽或蛋白的片段的DNA分子转化的转基因植物种子，所述片段不诱发过敏反应；并将所述种子播种于土壤中。然后在有效允许那种DNA分子赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下，从播种的种子繁殖植物。
可以以许多方式，包括：1)应用一种分离的片段或2)应用不引起病害并用编码所述片段的基因转化的细菌，实施将过敏反应激发子多肽或蛋白应用于所述植物或植物种子的本发明的实施方案。在后面的实施方案中，通过应用含有编码所述过敏反应激发子多肽或蛋白的片段(所述片段不诱发过敏反应)的DNA分子的细菌，可以将所述片段应用于植物或植物种子。这样的细菌必须能够分泌或输出所述片段，以便所述片可以接触植物或植物种子细胞。在这些实施方案中，通过在植物中或种子或正好在将所述细菌引入所述植物或植物种子之前，由细菌产生所述片段。
可以使用本发明的所述方法处理各种各样的植物或它们的种子以赋予抗病性、促进生长和/或防治害虫。合适的植物包括双子叶植物和单子叶植物，更具体地讲，有用的作物可以包括：苜蓿、水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、玉米、马铃薯、甘薯、菜豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、甘蓝、抱子甘蓝、甜菜、欧洲防风、芜菁、花椰菜、青花椰菜、萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、南瓜、西葫芦(pumpkin)、西葫芦(zucchini)、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、柑桔、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、大豆、烟草、番茄、高梁和甘蔗。合适的观赏植物的实例为：拟南芥(Arabidopsis thaliana)、非洲紫罗兰属(Saintpaulia)、碧冬茄、天竺葵、一品红、菊花、康乃馨和百日草。
关于本发明过敏反应激发子蛋白或多肽的片段在赋予抗病性方面的用途，不可以赋予抵抗感染的绝对免疫性，但降低所述病害的严重程度，并使症状发生延迟。病斑数目、病斑大小和真菌病原菌孢子形成的数量都减少了。这种赋予抗病性的方法具有治疗先前不可治疗的病害、系统性治疗由于费用的原因不可能分别治疗的病害，并避免了使用感染性因子或环境上有害的物质的潜力。
按照本发明赋予植物病原体抗性的方法可用于赋予针对各种各样的病原体包括病毒、细菌和真菌的抗性。通过本发明的方法获得尤其是对以下病毒：烟草花叶病毒和番茄花叶病毒的抗病性。按照本发明也可以赋予植物尤其是对以下细菌的抗病性：茄假单胞菌、丁香假单胞菌烟草致病变种(Pseudomonas syringae pv.tabaci)和野油菜黄单胞菌天竺葵致病变种。通过采用本发明的方法，植物可获得尤其是对以下真菌的抗病性：尖镰孢(Fusarium oxysporum)和致病疫霉(Phytophthorainfestans)。
就使用本发明过敏反应激发子蛋白或多肽的片段来促进植物生长而论，可以获得各种形式的植物生长增强或促进。早在植物生长从种子开始时或后来在植物的生命中，这种作用均可以产生。例如，按照本发明的植物生长包括更高的产量、所生产的种子品质提高、种子发芽百分率提高、植株大小增加、更高的生物量、更多更大的果实、果实更早着色以及更早结果和植物成熟。因此，本发明给生产者提供显著的经济效益。例如，早发芽和早熟使得作物可以于在其它情况下短生长季节使作物不能生长的地区生长。种子发芽率的提高导致改善作物植株密度而更有效利用种子。较高的产量、增加的大小和提高的生物量产量使从给定的小块土地产生更高的收益。
本发明再一方面涉及实现任何形式的植物害虫防治。例如，按照本发明的害虫防治包括防止害虫接触已经应用过敏反应激发子的植物、防止通过对植物摄食损伤引起的直接害虫损害、使害虫远离这样的植物、杀死接近这样的植物的害虫、干扰摄食这样的植物的害虫的幼虫、防止害虫定居寄主植物、防止定居的害虫释放植物毒素等。本发明也防止由害虫侵染引起的对植物后来的病害损害。
针对各种各样的害虫本发明是有效的。欧洲玉米螟是玉米(臼齿形甜玉米)的一种主要的害虫，但它还在超过200种植物物种上摄食，包括嫩荚菜豆、黄荚种菜豆和利马豆以及食用大豆、胡椒、马铃薯和番茄及许多杂草物种。其它的损害各种各样的蔬菜作物的害虫幼虫的摄食害虫包括以下的害虫：甜菜夜蛾、粉纹夜蛾、谷实夜蛾、秋夜蛾、小菜蛾、甘蓝根种蝇(cabbage root maggot)、葱蝇、玉术种蝇、瓜野螟(甜瓜野螟)、胡椒带实蝇、番茄蠹蛾和蛆。总起来说，该类群害虫代表了在世界范围内蔬菜生产的经济上最重要的害虫类群。
如果处理整株或部分所述植物，包括叶、茎、根、繁殖体(例如插条)等时，通过种种方法可以实施包括应用过敏反应激发子多肽或蛋白的片段(所述片段不诱发过敏反应)的本发明的方法。这种方法可以(但不必)涉及将所述过敏反应激发子多肽或蛋白的片段浸润所述植物。合适的应用方法包括高压或低压喷洒、注射和接近激发子应用发生时的叶片磨损。当按照本发明的应用实施方案处理植物种子或繁殖体(例如插条)时，可以通过高压或低压喷洒、包膜、浸泡或注射应用按照本发明的过敏反应激发子多肽或蛋白的片段。本领域的技术人员可以设想其它合适的应用方法，前提是他们能够实现将所述片段与所述植物或植物种子的细胞接触。一旦用本发明的过敏反应激发子的片段处理后，就将所述种子播种于自然或人工土壤中，并采用常规方法栽培以产生植株。在将植株已从用按照本发明处理的种子繁殖出来后，可以一次或多次应用所述过敏反应激发子蛋白或多肽的片段或完整的激发子处理所述植物，以赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治所述植物的害虫。
可以将按照本发明的过敏反应激发子多肽或蛋白的片段，单独地或与其它物质的混合物应用于植物或植物种子。或者，可以将所述片段单独地应用于植物，而在不同时间应用其它物质。
适合于按照本发明的应用实施方案处理植物或植物种子的组合物在载体中含有过敏反应激发子多肽或蛋白的片段，所述片段不诱发过敏反应。合适的载体包括水、水溶液、浆液或干粉。在该实施方案中，所述组合物含有高于500nM的所述片段。
尽管不是必需的，该组合物可以含有其它添加剂，包括肥料、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂及其混合物。合适的肥料包括(NH4)2NO3。合适的杀虫剂的实例为马拉硫磷。有效杀真菌剂包括克菌丹。
其它合适的添加剂包括缓冲剂、润湿剂、包膜剂和磨蚀剂。这些物质可用来有利于本发明的方法。此外，可以将所述诱发过敏反应的片段与其它常规种子制剂和处理材料(包括粘土和多糖)一起应用于植物种子。
在涉及使用转基因植物和转基因种子的本发明的替代实施方案中，通常不需要将过敏反应激发子的片段应用于所述植物或种子。而是，按照本领域众所周知的方法，产生用编码这样的片段的DNA分子转化的转基因植物。
通过采用微量加液器机械转移所述重组DNA，可以将上面所述的载体直接微注射到植物细胞中。Crossway，Mol.Gen.Genetics，202：179-85(1985)，该文献通过引用结合到本文中。采用聚乙二醇，也可以将遗传物质转移到所述植物细胞中。Krens等，Nature，296：72-74(1982)，该文献通过引用结合到本文中。
用赋予病原体抗性的基因转化植物细胞的另一种方案是所述宿主细胞的粒子轰击(也称为biolistic转化)。可以以几种方法中的一种实现该方案。首先涉及将惰性粒子或生物活性粒子推进细胞。全部为Sanford等的美国专利第4,945,050、5,036,006和5,100,792号公开了该技术，这些文献通过引用结合到本文中。总的来讲，该方法涉及，在有效穿透所述细胞外表面并被掺入其内部的条件下，将惰性粒子或生物活性粒子推进所述细胞。如果使用惰性粒子，则可以通过用含有所述异源DNA的载体包被所述粒子，将所述载体引入所述细胞中。或者，所述载体可以包围所述靶细胞以便通过所述粒子的尾流(wake)将所述载体带入所述细胞中。也可以将生物活性粒子(例如含有所述载体和异源DNA的干的细菌细胞)推进植物细胞。
引入的再一种方法是原生质体与其它实体融合，所述其它实体为或者小细胞、细胞、溶酶体或者其它可融合的脂质表面的小体(fusiblelipid-surfaced bodies)的。Fraley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79：1859-63(1982)，该文献通过引用结合到本文中。
通过电穿孔也可将所述DNA分子引入所述植物细胞。Fromm等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：5824(1985)，该文献通过引用结合到本文中。在该技术中，在含有表达盒的质粒存在下，将植物原生质体电穿孔。高场强电脉冲可逆地使生物膜透化而引入质粒。电穿孔的植物原生质体重新形成细胞壁、分裂并再生。
将所述DNA分子引入植物细胞的另一种方法是用预先用所述基因转化的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或发根农杆菌(A.rhizogenes)感染植物细胞。在本领域已知的合适条件下，培育所述转化的植物细胞以形成芽或根，然后进一步发育成植株。一般而言，该方法涉及用细菌悬浮液接种所述植物组织，然后于25-28℃在不含抗生素的再生培养基上将所述组织培育48-72小时。
农杆菌属(Agrobacterium)是革兰氏阴性根瘤菌科的一个代表性属。其菌种引起冠瘿病(根癌农杆菌)和发根病(发根农杆菌)。将冠瘿肿瘤和发根中的植物细胞诱导以产生称为冠瘿碱的氨基酸衍生物，冠瘿碱只由所述细菌分解代谢。引起冠瘿碱表达的细菌基因是嵌合表达盒的控制元件的便利来源。此外，测定冠瘿碱的存在可用来鉴定转化的组织。
用根癌农杆菌的Ti质粒或发根农杆菌的Ri质粒，可以将异源遗传序列引入合适的植物细胞。通过农杆菌感染，将Ti质粒或Ri质粒传递到植物细胞，并稳定地整合到所述植物基因组中。J.Schell，Science，237：1176-83(1987)，该文献通过引用结合到本文中。
转化后，必须将所述转化的植物细胞再生。
在Evans等，Handbook of Plant Cell Cultures.第1卷：(MacMillanPublishing Co.，New York，1983)和Vasil I.R.(编著)，Cell Culture andSomatic Cell Genetics ofPlants，Acad.Press，Odando，第1卷，1984和第III卷(1986)中描述了从培养的原生质体再生植株，所述文献通过引用结合到本文中。
已经知道，实际上所有植物都可以从培养的细胞或组织再生，包括但不限于甘蔗、甜菜、棉花、果树和豆科植物的所有主要物种。
再生的方法在植物种与种之间不同，但一般首先提供转化的原生质体的悬浮液或含有转化的外植体的培养皿。形成愈伤组织，然后从愈伤组织诱导长芽，并随后长根。或者，可以在愈伤组织中诱导胚形成。这些胚如天然胚一样萌发以形成植株。所述培养基一般含有各种氨基酸和激素诸如植物生长素和细胞分裂素。最好是也将谷氨酸和脯氨酸加入到所述培养基中，尤其是对像玉米和苜蓿这样的物种。有效的再生取决于培养基、基因型和培养史。如果控制好了这三种可变因素，那么再生通常是能再现的和可重复的。
将表达盒稳定地掺入到转基因植物后，它可以通过有性杂交转移到其它植物。根据所杂交的物种，可以采用许多标准育种技术中的任何一种。
一旦产生出该类型的转基因植株，就可按照常规方法将所述植株自身栽培，编码过敏反应激发子的片段的基因的存在导致抗病性、促进植物生长和/或防治植物害虫，。或者，从转基因植物回收转基因种子或繁殖体(例如插条)。然后将所述种子播种于土壤中，并采用常规方法栽培以产生转基因植物。在有效赋予植物抗病性、促进植物生长和/或防治害虫的条件下，从播种的转基因种子繁殖转基因植物。尽管不希望受理论的限制，但这样的抗病性、生长促进和/或害虫防治可由RNA介导或可以因所述多肽或蛋白片段的表达产生。
如果按照本发明使用转基因植物和植物种子，则它们还可以用与用来处理应用按照本发明的过敏反应激发子片段的所述植物和种子相同的材料处理。可以通过包括高压或低压喷洒、注射、包膜和浸泡的上述方法，将包括按照本发明的过敏反应激发子片段的这些其它的材料应用于所述转基因植物和植物种子。同样，在从所述转基因植物种子繁殖植株后，可以将所述植株用按照本发明的过敏反应激发子片段的一种或多种应用方法处理，以赋予抗病性、促进生长和/或防治害虫。也可用常规植物处理剂(例如杀虫剂、肥料等)处理这种植物。
                            实施例实施例1-细菌菌株和质粒
以下实施例中所用的大肠杆菌菌株包括分别从Gibco BRL(GrandIsland，N.Y.)和Stratagene(La Jolla，CA)购买的DH5α和BL21(DE3)。从Novagen(Madison，WI)购买pET28(b)载体。Eco DH5α/2139含有完整的hrpN基因。2139构成物由Comeil大学的D.Bauer生产。用HindIII经限制酶酶切消化，将hrpN基因从2139质粒中切下，然后经琼脂糖凝胶纯化以用作PCR合成截短的hrpN克隆的DNA模板。随后将这些克隆插入到含有Kanr基因的(His)6载体pET28(b)中用于选择转化体。实施例2-DNA操作
从Boeringer Mannheim(Indianapolis，IN)或Gibco BRL获得限制酶。从Gibco BRL获得T4 DNA连接酶、小牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)和PCR SupemixTM。从Qiagen(Hilden，德国)购买QIAprep旋转(spin)小量制备试剂盒、Qiagen质粒小量制备试剂盒和QIAquick PCR纯化试剂盒。由Lofstrand Labs有限公司(Gaithersburg，MD)合成PCR引物。由Bio-SynthesisInc.(LewisVille，TX)合成寡肽。按照标准技术(Sambrook等，Laboratory Manual，第二版，Cold Spring HarborLaboratory Press(1989))或根据制造商提供的方案，进行所有的DNA操作，诸如质粒分离、限制酶酶切消化、DNA连接和PCR。实施例3-hrpN基因的片段化
经PCR产生一系列的N端和C端截短的hrpN基因以及内部片段(图1)。将全长hrpN基因用作DNA模板，设计用于每个截短的克隆的3’引物和5’引物(图2)。3’引物包含一个含有起始密码子ATG(甲硫氨酸)的NdeI酶切割位点，而5’引物包含终止密码子TAA和一个用于连接到pET28(b)载体中的HindIII酶切割位点。在GeneAmpTM 9700(Perkin-Elmer，Foster City CA)、0.5ml管中进行PCR。将45μlSupermixTM(Life Technology，Gaithersburg，MD)与20pmoles每对DNA引物、10ng全长harpin DNA和去离子H2O混合至终体积50μl。将混合物于95℃加热2分钟后，于94℃持续1分钟、58℃持续1分钟和72℃持续1.5分钟，进行PCR30次循环(cycles)。在6％TBE凝胶(Novex，San Diego，CA)上证实该PCR产物。将扩增的DNA用QIAquick PCR纯化试剂盒纯化，于37℃用Nde I和Hind III消化5小时，用苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶25∶1)抽提一次然后用乙醇沉淀。将5μg pET28(b)载体DNA用15单位的Nde I和20单位的Hind III于37℃消化3小时，然后用CIAP处理以减少由不完全单个酶消化所产生的背景。将消化的载体DNA用QIAquick PCR纯化试剂盒纯化，然后直接用于连接。在含有约200ng消化的pET28(b)、30ng定向(targeted)PCR片段和1单位T4DNA连接酶的15ul混合物中、于14-16℃进行5-12小时的连接反应。将5-7.5μl连接溶液加入到15ml Falcon管中的100μl DH5α感受态细胞中，然后于冰上培育30分钟。于42℃热激45秒后，将0.9mlSOC溶液或0.45ml LB培养基加入到每支管中，然后于37℃温育1小时。将20ul、100μl和200μl转化的细胞加到含有30μg/ml卡那霉素的LB琼脂上，然后于37℃温育过夜。将单个菌落转移到3ml LB培养基上，然后于37℃培养过夜。用QIAprep小量制备试剂盒(QIAGEN，Hilden，Germany)从2ml培养物中制备质粒DNA。将得自所述转化细胞的DNA经限制酶消化分析或部分测序以证实所述成功转化。采用如上所述的标准化学转化方法，将含有目的DNA序列的质粒转移到BL21菌株中。产生作为阳性对照的pET28(b)载体中的含有全长harpin蛋白的克隆，而产生作为阴性对照的仅含有pET28(b)载体的克隆。实施例4-过敏反应激发子截短的蛋白的表达
将含有所述hrpN克隆的大肠杆菌BL21(DE3)菌株在含有30μg/ml卡那霉素的Luria肉汤培养基(5g/L Difco酵母提取物、10g/L Difco胰蛋白胨、5g/L NaCl和1mM NaOH)中，于37℃生长过夜。然后将所述细菌接种到100倍体积的相同培养基中，于37℃生长至0.6-0.8的OD620。然后将所述细菌接种到250倍体积的相同培养基中，于37℃生长至约0.3或0.6-0.8的OD620。然后加入1mM IPTG，并将培养物于19℃生长过夜(约18小时)。采用该策略不能将所有的所述克隆成功地表达。有几个克隆不得不生长于Temfic肉汤(12g/L细菌用胰蛋白胨、24g/L细菌用酵母、0.4％甘油、0.17M KH2PO4、0.72K2HPO4)中，和/或IPTG诱导后于37℃生长，和/或早于过夜时收获(表1)。
            表1：过敏反应激发子截短的蛋白的表达
片段   氨基酸(SEQ.ID.No.23) 生长培养基  诱导O.D.    表达温度    收获时间
    1(+对照)  1-403     LB  约0.3或0.6-0.8   19℃或25℃     16-18hr
    2(+对照)     -   LB和TB  约0.3或0.6-0.8   19℃和37℃     16-18hr
    3  105-403     LB  0.6-0.8     19℃     16-18hr
    4  169-403     TB  约0.3     19℃     16-18hr
    5  210-403   LB或M9ZB  0.6-0.8     19℃     16-18hr
    6  257-403   LB或M9ZB  0.6-0.8     19℃     16-18hr
    7  343-403     LB  约0.3     19℃     5hr
    8  1-75     TB  约0.3     37℃     16-18hr
    9  1-104     TB  约0.3     37℃     16-18hr
    10  1-168     TB  约0.3     37℃     16-18hr
    11  1-266     LB  约0.3     37℃     4hr
    12  1-342     LB  0.6-0.8     19℃     16-18hr
    13  76-209     LB  约0.3     37℃     5hr
    14  76-168   TB或LB  约0.3     37℃  3hr或16-18hr
    15  105-209    M9ZB  约0.3     37℃     3hr
    16  169-209                                 无表达
    17  105-168     LB  约0.3     37℃     3-5hr
    18  99-209     LB  约0.3     37℃     3hr
    19  137-204     LB  约0.3     37℃     3hr
    20  137-180     LB  约0.3     37℃     16-18hr
    21  105-180     LB  约0.3     37℃     3hr
    22  150-209                                 无表达
    23  150-180                                 无表达
实施例5-过敏反应激发子截短的蛋白的小规模纯化(证实表达)
将50ml hrpN克隆的培养物如上生长以诱导表达所述截短的蛋白。在收获所述培养物后，将1.5ml所述细胞悬浮液于14,000rpm离心5分钟，再次悬浮于尿素裂解缓冲液(8M尿素、0.1M Na2HPO4和0.01M Tris-pH8.0)中，于室温下温育10分钟，然后再次于14,000rpm离心10分钟，然后保存所述上清液。将平衡的(His)6-结合镍琼脂糖树脂的50％浆液的50μl等份样品加入到所述上清液中，于4℃混合1小时。然后将镍琼脂糖用尿素洗涤缓冲液(8M尿素、0.1M Na2HPO4和0.01M Tris--pH6.3)洗涤三次，在洗涤之间于5,000rpm离心5分钟。用50μl尿素洗脱缓冲液(8M尿素、0.1M Na2HPO4、0.01M Tris和0.1M EDTA--pH6.3)，将所述蛋白从该树脂中洗脱下来。根据所述截短的蛋白的大小，将所述洗脱物在4-20％、16％或10-20％Tris-甘氨酸预制凝胶上电泳，以证实所述表达。实施例6-烟草HR的诱导
将生长用于小规模纯化所述截短的蛋白的50ml培养物中的1.5ml等份样品，于14,000rpm离心4分钟，再次悬浮于等体积的5mM、pH6.8的磷酸钾缓冲液中。将所述细胞悬浮液超声处理约30秒，然后用磷酸钾缓冲液以1∶2和1∶10稀释。通过在单个叶片中磨一个洞，将两种稀释物加净细胞裂解物浸润10-15片叶的烟草植株的第4至第9片叶，并采用无针头的注射器将所述细菌裂解物浸润到叶片胞间隙中。浸润后24-48小时，记录HR反应。将烟草(Nicotiana tabacum v.Xanthi)幼苗于20-25℃的环境温度、光照周期为12小时光照/12小时黑暗和约40％RH下生长。因为小规模尿素纯化产生非常少的由于纯化过程引起的变性的蛋白，所以将细胞裂解物用于最初HR测定(以筛选HR活性的截短的蛋白)。实施例7-用于综合生物活性测定的过敏反应激发子截短的蛋白的
      大规模天然纯化
如先前所述，培育6瓶500ml hrpN克隆的培养物以诱导表达所述截短的蛋白。在收获所述培养物后，将所述细胞于7,000rpm离心5分钟，再次悬浮于咪唑裂解缓冲液(5mM咪唑、0.5MNaCl和20mMTris)加0.05％Triton X-100和0.1mg/ml溶菌酶中，于30℃温育10分钟，超声处理2分钟，再次于15,000rpm离心20分钟，然后保存所述上清液。将平衡的(His)6-结合镍琼脂糖树脂的50％液浆的4ml等份样品加入到所述上清液中，于4℃混合约4小时。然后将镍琼脂糖用咪唑洗涤缓冲液(20mM咪唑、0.5M NaCl和20mM Tris)洗涤三次，在洗涤之间于5,000rpm离心5分钟，然后置于一次性层析柱中。将所述层析柱于1100rpm离心1分钟以去除任何残余的洗涤缓冲液，然后经将所述柱和洗脱缓冲液一起于室温下温育10分钟，然后于1100rpm将所述柱离心1分钟，用4ml咪唑洗脱缓冲液(1M咪唑、0.5M NaCl和20mM Tris)，将所述蛋白从该树脂中洗脱下来。根据所述截短的蛋白的大小，将所述洗脱物在4-20％、16％或10-20％Tris-甘氨酸预制凝胶上电泳，以证实所述表达。经将所述蛋白条带与Mark 12分子量标准参照物中的标准蛋白条带相比较，确定所述蛋白的浓度。实施例8-用于综合生物活性测定的过敏反应激发子截短的蛋白的
    大规模尿素纯化
本方法与上述大规模天然纯化的方法相同，只是使用尿素裂解液、尿素洗涤缓冲液和尿素洗脱缓冲液，并且所述细胞不像上述天然纯化一样超声处理。纯化后，先经8小时内对越来越低浓度的尿素透析，然后经对10mM Tris/20mM NaCl透析过夜，将所述蛋白复性。所述复性过程引起N端蛋白沉淀。将所述沉淀的1-168蛋白经加入100mM Tris-HCl、pH10.4溶解，然后于30℃将所述蛋白加热约1小时。经将所述蛋白条带与Mark 12分子量标准参照物中的标准蛋白条带相比较，确定所述蛋白的浓度。采用该策略，没有成功地溶解1-75和1-104蛋白片段，所以将它们在100mM Tris-HCl、pH10.4中超声处理以尽可能地溶解多的所述蛋白，并暴露所述蛋白的活性位点用于生物活性测定。实施例9-生长促进作用(GE)的诱导
将60粒番茄(Lycopersicon spp.cv.Marglobe)种子在用5mM磷酸钾缓冲液、pH6.8稀释的10μg/ml和20μg/ml所述截短的蛋白中浸泡过夜。第二天早上，将所述60粒种子播种于3个盆中，12-15天后以及18-20天后，测量每盆10株最高番茄植株的高度，并与只用磷酸盐缓冲液处理的对照植株的高度相比较。在高度方面进行分析以确定用所述截短的蛋白处理的植株的高度与所述缓冲液对照的植株的高度相比是否存在显著的差异，从而确定是否所述蛋白诱导生长促进作用。实施例10-系统获得抗性(SAR)的诱导
将具有8-12片叶的3株烟草(Nicotiana tabacum cv.Xanthi)植株(约75天的植株)用于所述测定。将所述烟草植株的其中一片叶盖住，其余的叶片用约50ml的5mM磷酸钾缓冲液稀释的20μg/ml所述截短的蛋白溶液喷洒。5-7天后，将2片叶(未喷洒的叶片以及与之相反的刚好在喷洒的叶片上面的喷洒叶片)用1.8μg/ml TMV的20μl溶液及一撮硅藻土接种，即通过用所述混合物沿所述叶片的上表面磨擦来接种。TMV通过硅藻土形成的极微小的损伤进入该植株中。TMV接种后约3-4天，将该两片叶子上的病斑数目与阴性对照缓中液的处理叶片上的病斑数目相比较，计数TMV病斑的数目。通过与所述缓冲液对照相比较，进行分析以确定由该蛋白片段减少TMV病斑数目的效能。计算效能的百分率为：TMV病斑减少(％效能)＝100×(1-处理叶片上病斑的平均数/缓冲液对照叶片上病斑的平均数)。实施例11-过敏反应激发子截短的蛋白的表达
进行所述片段蛋白的小规模表达和纯化以筛选表达和HR活性(表2)。
                              表2
    过敏反应激发子截短的蛋白的表达和HR活性(小规模筛选)
    片段#  氨基酸(SEQ.ID.No.23)   表达   HR活性
   1(+对照)     1-403     +     +
   2(-对照)       - 只有背景蛋白     -
    3     105-403     +     +
    4     169-403     +     -
    5     210-403     +     -
    6     267-403     +     -
    7     343-403    +/-     -
    8     1-75     +     -
    9     1-104     +    +/-
    10     1-168     +     +
    11     1-266     +     +
    12     1-342     +     +
    13     76-209     +     +
    14     76-168     +     -
    15     105-209     +     +
    16     169-209     -     -
    17     105-168     +     -
    18     99-209     +     +
    19     137-204     +     +
    20     137-180     +     +
    21     105-180     +     +
    22     150-209     -     -
    23     150-180     -     -
所有的所述克隆的片段蛋白都以变化的水平表达，只是三条小片段(氨基酸169-209、150-209和150-180)除外。片段210-403和267-403表达得非常好，从小规模纯化中产生高浓度的蛋白，在SDS凝胶电泳上出现清晰的蛋白条带。其它片段(诸如氨基酸1-168和1-104)产生少得多的蛋白，在电泳上出现模糊的蛋白条带。难以确定是否表达片段343-403，即最小的C端蛋白，因为在所述凝胶上除怀疑的343-403蛋白之外有几种明显的背景蛋白。，测试分别包含所述全长过敏反应激发子蛋白及仅包含背景蛋白的阳性对照蛋白和阴性对照蛋白的表达以及HR活性。
进行所述片段蛋白的大规模表达和纯化以确定表达水平和HR活性的效价(表3)。
                              表3
    过敏反应激发子截短的蛋白的表达水平和HR效价(大规模纯
                             化)
    片段#     氨基酸(SEQ ID.No.23)      表达      HR效价
    1(+对照)     1-403    3.7mg/ml     5-7μg/ml
    2(-对照)      -       -     1∶2稀释
    4     169-403    2mg/ml        -
    5     210-403    5mg/ml        -
    6     267-403    4mg/ml        -
    7     343-402    200μg/ml        -
    8     1-75    50μg/ml        -
    9     1-104    50μg/ml    3μg/ml(1∶16稀释)
    10     1-168    1mg/ml    1μg/ml
    13     76-209    2.5mg/ml    5μg/ml
    14     76-168    2mg/ml        -
    15     105-209    5mg/ml    5-10μg/ml
    17     105-168    250μg/ml        -
    19     137-204    3.6mg/ml    3.5μg/ml
    20     137-180    250μg/ml    16μg/ml
选择在鉴定过敏反应激发子中认为是最重要的所述截短的蛋白用于大规模表达。阳性对照(全长过敏反应激发子)以3.7mg/ml相对高水平表达。所有所述C端蛋白以2-5mg/ml相对高水平表达，只是如先前所讨论的片段343-403除外。所述N端片段也表达得非常好；然而，在纯化过程期间，所述蛋白沉淀并且很少再溶解。表3中的所述浓度只反映了所述溶解的蛋白。所述内部片段在2-3.6mg/ml的范围内表达。极难以确定片段105-168的浓度(据估计所述浓度可能比所示的高得多)，因为SDS凝胶上的蛋白条带为大片段，但染色很浅。所述阴性对照包含如预期的几种背景蛋白，但没有明显地诱导优势蛋白。实施例12-烟草HR的诱导
所述全长阳性对照蛋白少至仅5-7μg/ml的就诱发HR。只包含背景蛋白的所述阴性对照(pET28)咪唑纯化“蛋白”少至1∶2稀释度诱发HR反应，将该测定的敏感性降低为1∶1和1∶2稀释度，不能使用该蛋白。这种假HR可能由于纯化过程中所用的咪唑结合一种或几种背景蛋白的亲和性、从而不完全被透析出引起。约60mM浓度的咪唑就诱发假HR反应。
包括来自氨基酸137-180(SEQ.ID.No.23)，仅仅44个氨基酸蛋白的小的内部区域的一个决定性结构域(definitive domain)鉴定为最小的HR结构域。其它潜在的结构域认为是位于来自氨基酸1-104(可能氨基酸1-75)(SEQ.ID.No.23)的该蛋白的N端。由于在纯化这些片段蛋白中遇到的困难引起的，难以证实或缩小N端HR结构域。因为当采用天然纯化过程时没有回收到蛋白，所述N端片段蛋白不得不用尿素纯化。因此，这些蛋白在复性过程期间沉淀，难以或几乎不可能再溶于溶液，从而使该蛋白难以通过HR测定，因为只有可溶的蛋白能诱发HR。缩小N端HR结构域的困难只是由于以下事实构成：阴性对照在低稀释水平时诱发假HR，从而降低了所述测定的敏感性。
意料不到的是，如果在氨基酸168和169(片段76-168和105-168)(SEQ.ID.No.23)之间，将所述内部HR结构域切割，则所述片段丧失其HR活性。这表明，片段1-168(SEQ.ID.No.23)的HR活性不应归因于所述内部HR结构域，而是归因于某些其它结构域，导致设想可能在所述蛋白的N端区域发现第二个HR结构域。然而，如先前所讨论的，难以证实该设想。
过敏反应激发子C端(氨基酸210-403(SEQ.ID.No.23))不含有HR结构域。采用目前的HR测定，在可检测水平上它不诱发HR。甚至大的得自氨基酸169-403(SEQ.ID.No.23)的C端片段也不诱发HR，尽管它包含部分内部HR结构域。如上所述，在氨基酸168和169(SEQ.ID.No.23)之间切割蛋白引起HR活性的丧失。
因为某些具有61个氨基酸或更少的小的克隆的蛋白不表达，合成具有30个氨基酸的几种寡肽以缩小内部HR结构域的功能区域。在氨基酸121-179(SEQ.ID.No.23)范围内合成所述寡肽。然而，这些寡肽不诱发HR。预期寡肽137-166、121-150和137-156(SEQ.ID.No.23)可能诱发HR，因为这些片段不包含必不可少的氨基酸168和169(SEQ.ID.No.23)。预期寡肽150-179(SEQ.ID.No.23)可能诱发HR。可能是30个氨基酸对于所述蛋白而言太小，以致不能诱发任何活性，因为缺乏折叠并因此缺乏结合；或者可能是在合成所述肽期间，失去了重要的氨基酸(或者在所述过程中或者仅因为选择哪30个氨基酸进行合成)，因此，所述片段将不能诱发HR。实施例13-植物生长促进作用(PGE)的诱导
所述C端片段将番茄生长增强9％至21％。所述N端片段将番茄生长增强4％至13％。所述内部片段将生长增强9％至20％。76-209片段在浓度60μg/ml下将生长增强18％，但在通常20μg/ml下不促进生长。这归因于所述定量过程的不精确性(表4)。
                              表4
  片段#  氨基酸 PGE hr＞缓冲液@10μg/ml PGE hr＞缓冲液@20μg/ml
 1(+对照)  1-403      12％    11％
 2(-对照)     -      -3％    -2％
    4  169-403      9％    12％
    5  210-403      13％    14％16％@40μg/ml
    6  267-403      2l％     21％23％@40μg/ml
    7  343-403      7％     7％
    9  1-104      4％     8％
    10  1-168      13％     5％
    13  76-209      7％     4％18％@40μg/ml
    14  76-168      18％     20％
    15  105-209      14％     19％
    17  105-168      19％     16％
    19  137-204      11％     13％
    20  137-180       -      9％
*高于所述缓冲液对照10％以上的株高必需通过PGE测定所述寡肽将生长增强从7.4％至17.3％(表5)。
                              表5
片段     氨基酸    表达 HR效价    TMV效能 PGE ht＞缓冲液
寡肽     150-179     NA   -     72.9％     10.1％
寡肽     137-166     NA   -     61.2％     12.0％
寡肽     121-150     NA   -     60.0％     17.3％
寡肽     137-156     NA   -    -87.7％     7.4％
所述数据表明，有超过一个的PGE结构域存在，尽管所述C端结构域和内部结构域看来比所述N端结构域占优势，因为所述N端片段最低数量促进生长。实施例14-系统获得抗性(SAR)的诱导
迄今所测试的所有所述过敏反应激发子片段看来都具有60％效能或更高，只是寡肽137-156除外(表5和6)。
                        表6
    片段#     氨基酸    TMV防治的效能
   1(+对照)     1-403     84％和72％
   2(-对照)       -     40％和31％
    4     169-403     64％和79％
    5     210-403     77％和78％
    6     267-403     70％和72％
    9      1-104         82％
    10      1-168         69％
    13     76-209     44％和84％
    14     76-168     83％和87％
    15     105-209     57％和67％
    17     105-168         89％
    19     137-204     89％和77％
    20     137-180     64％和58％
这些数据表明在所述蛋白内有多个SAR结构域。实施例15-HR、PGE和SAR之间的关系
显然，所述过敏反应活性可与所述植物生长促进活性分离。所述C端片段在浓度只有20μg/ml时就明显地促进番茄生长约20％，但这些相同片段甚至在高于200μg/ml浓度也不能诱发烟草HR。SAR活性也看来可与HR活性分离。该发现对将来在过敏反应激发子技术的转基因应用方面的工作是非常重要的。诱导PGE和/或SAR但不诱发HR的所述片段对该技术是必不可少的，因为即使低水平HR激发子的组成型表达也可能杀伤植物。实施例16-得自丁香假单胞菌丁香致病变种的过敏反应激发子不
          诱发HR的片段在烟草中诱导对TMV的抗病性以及促
          进番茄的生长
为了测试得自HrpZ—来自丁香假单胞菌丁香致病变种的过敏反应激发子的不诱发HR的片段是否能够诱导抗病性，制备几种片段构成物并测试表达的片段蛋白在烟草中的HR诱发和抗病性诱导以及番茄中的生长促进作用。
采用Pfu Turbo(Stratagene)，经PCR扩增hrpZ—编码来自丁香假单胞菌丁香致病变种过敏反应激发子的基因的以下区段：编码氨基酸152-190、氨基酸152-294、氨基酸190-294、氨基酸301-341和全长HrpZ(氨基酸1-341)的区域。将所述DNA片段克隆到pCAL-n(Stratagene)中以产生钙调蛋白结合肽的C端融合蛋白。选择pCAL-n，因为所述融合蛋白能够容易地和在钙调蛋白树脂上温和纯化。将所述DNA转化到大肠杆菌DH5α中，并鉴定出正确克隆。然后将所述克隆转移到大肠杆菌BLR DE3中用于蛋白表达。将所述细菌生长于Terrific肉汤中至0.8-1.0的OD620。然后用IPTG诱导蛋白表达，并将所述细菌再培育3小时。所有的HrpZ片段都能以这种方法表达。
挑选氨基酸片段152-294和190-294用于进一步的分析和鉴定。预期片段152-294包含一个诱发HR的结构域，而片段190-294不含诱发HR的结构域。将所述培养物离心，然后将所述细菌再悬浮于40ml、10mM Tris pH8.0中。加入20μl消泡剂和40μl、200mM PMSF，并将所述细菌超声处理以破碎细胞。经离心去除细菌碎片，然后将所述上清液在沸水浴中放置10分钟。经离心去除所述沉淀，并保留所述上清液—一种粗蛋白制剂用于测试。
15μl每种上清液于凝胶上电泳并染色以确定所述蛋白是否存在。据估计152-294片段比190-294片段存在的量约多5倍。将每种制剂的几种稀释液浸润两株烟草植株的叶片用于HR测试(表7)。如表7中所示，152-294片段诱发HR，而190-294片段不诱发HR。
                    表7HrpZ片段的HR测试结果HrDZ片段               片段制剂的稀释度a
             1∶2    1∶5    1∶25    1∶125152-294          +，+b  +，+    +，+      -，-190-294          -，-    -，-    -，-      -，-a用MilliQ水稀释所述制剂。b结果表示两株植物的每株。+，HR；-，无HR.
然后将所述片段制剂测试诱导TMV抗病性以及生长促进作用。由于HrpZ片段浓度方面的差异，将152-294制剂稀释40倍，而将190-294制剂稀释8倍。结果显示，与缓冲液对照相比，190-294氨基酸片段将TMV病斑的数目减少了85％(表8)。相比之下，152-294氨基酸片段将TMV病斑的数目只减少了55％。也如表8中所示，用152-294氨基酸片段处理的植物比用缓冲液处理的植物生长多4.64％，而用190-294氨基酸片段处理的植物比用缓冲液处理的植物生长多2.62％。
                        表8
              HR试验、TMV和PGE试验结果HrpZ片段     HR诱发作用a   TMV(％效能)b   PGE(％＞缓冲液ht)c152-294          +             54.64             4.64190-294          -             85.25             2.62a+，烟草叶片中诱发HR；-，烟草叶片中无HR。b未喷洒的烟草叶片中的TMV病斑减少的％。c比缓冲液喷洒的植物高度多的％。
这些试验结果显示，氨基酸152-294看来参与HR诱发作用，因为它们的去除消除了诱发HR的能力。这两种片段制剂实现病害防治和生长促进作用。因此，诱发HR的能力不是TMV感染减弱和生长促进作用的决定性因素。实施例17-使用得自大雄疫霉的13个氨基酸的肽刺激番茄幼苗生长
欧芹叶片针对大豆病原体大雄疫霉产生一种典型的抗病反应，包括过敏性细胞死亡、防卫相关基因活化和植物保卫素生成。几年以前，将42kDa糖蛋白激发子从大雄疫霉真菌培养物滤液中纯化(Parker等，“得自大雄疫霉大豆小种(Phytophthora megasperma f.sp.glycinea)的胞外糖蛋白诱发培养的欧芹细胞和原生质体中的植物保卫素合成，”Mol.Plant Microbe Interact.4：19-27(1991)，该文献通过引用结合到本文中)。然后，13个氨基酸的寡肽鉴定为包含在42kDa糖蛋白内。这13个氨基酸的肽看来具有与全长糖蛋白(42kDa)相似的生物活性。在欧芹细胞中它足够诱发复杂的防卫反应，包括H＋/Ca2＋流入、K＋/Cl-流出、活性氧产生、SAR基因诱导和植物保卫素化合物累积(Nurnberger等，“真菌寡肽激发子对欧芹质膜的高亲和性结合触发多种防卫反应，”Cell 78：449-460(1994)，该文献通过引用结合到本文中)。
为了测试得自42kDa蛋白的13个氨基酸的肽是否也促进植物生长，由Biosynthesis公司合成20mg所述寡肽。该合成的肽序列为NH2-Val-Trp-Asn-Gln-Pro-Val-Arg-Gly-Phe-Lys-Val-Tyr-Glu-COOH(SEQ.ID.No.39)。将所合成的肽重新悬浮于10ml、5mM磷酸钾缓冲液中，然后用相同的缓冲液稀释至1ng/ml和100ng/ml。将100粒番茄种子(品种，Marglobe)在20ml肽溶液中浸泡过夜。将浸泡过的种子播种于装有人工土壤的8英寸盆中。将浸泡在没有所述肽的缓冲液中的种子用作对照。在幼苗出土和首先两片真叶完全扩展开后，记录番茄幼苗的高度。在烟草和其它试验的植物中，所述肽不能诱发HR。然而，它对植物生长促进作用具有很大影响。表9显示，用所述肽处理的番茄幼苗在高度方面增加了12.6％，表明得自42kDa糖蛋白的真菌肽可以促进番茄幼苗生长。进一步研究表明，所述肽在其它作物包括烟草中也具有相似的生长效应。用所述肽溶液喷洒植物获得相似的生长促进作用。
                          表9处理                     幼苗高度(cm)         平均(cm)变化％缓冲液              6.0  6.0  6.0  5.5  5.5     5.55   -
                5.5  5.5  5.0  5.0  5.5肽溶液(100ng/ml)    6.5  6.0  6.5  6.5  6.5     6.25  12.6
                6.0  6.0  6.0  6.0  6.5
尽管为了说明在细节上已经描述了本发明，不用说这种细节仅为了该目的，而在不偏离本发明的精神和范围的情况下，本领域技术人员可以在其中进行变化，本发明的精神和范围由以下权利要求书限定。
                    序列表<110>Eden Bioscienoe Corporation<120>有活性但不诱发过敏反应的过敏反应激发子片段<130>21829/34<140><141><150>60/103,050<151>1998-10-05<160>39<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>1gggaattcat atgagtctga atacaagtgg g                               31<210>2<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>2gggaattcat atgggcggtg gcttaggcggt                                31<210>3<211>29<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>3ggcatatgtc gaacgcgctg aacgatatg                                  29<210>4<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>4gggaattcat atgttaggcg gttcgctgaa c                                31<210>5<211>29<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>5ggcatatgct gaacacgctg ggctcgaaa                                   29<210>6<211>29<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>6ggcatatgtc aacgtcccaa aacgacgat                                   29<210>7<211>27<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>7ggcatatgtc cacctcagac tccagcg                                     27<210>8<211>34<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>8gggaattcat atgcaaagcc tgtttggtga tggg                             34<210>9<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>9gggaattcat atgggtaatg gtctgagcaa g                                31<210>10<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>10gggaattcat atgaaagcgg gcattcaggc g                                31<210>11<211>34<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>11gggaattcat atgacaccag ccagtatgga gcag                             34<210>12<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>12gcaagcttaa cagcccacca ccgcccatca t                                31<210>13<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>13gcaagcttaa atcgttcagc gcgttcgaca g                                31<210>14<211>34<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>14gcaagcttaa tatctcgctg aacatcttca gcag                             34<210>15<211>30<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>15gcaagcttaa ggtgccatct tgcccatcac                                  30<210>16<211>34<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>16gcaagcttaa atcagtgact ccttttttat aggc                             34<210>17<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>17gcaagcttaa caggcccgac agcgcatcag t                                31<210>18<211>31<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>18gcaagcttaa accgataccg gtacccacgg c                                31<210>19<211>34<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>19gcaagcttaa tccgtcgtca tctggcttgc tcag                             34<210>20<211>25<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>20gcaagcttaa gccgcgccca gcttg                                       25<210>21<211>338<212>PRT<213>菊欧文氏菌<400>21Met Gln Ile Thr Ile Lys Ala His Ile Gly Gly Asp Leu Gly Val Ser1                5                   10                 15Gly Leu Gly Ala Gin Gly Leu Lys Gly Leu Asn Ser Ala Ala Ser Ser
         20                  25                  30Leu Gly Ser Ser Val Asp Lys Leu Ser Ser Thr Ile Asp Lys Leu Thr
    35                   40                   45Ser Ala Leu Thr Ser Met Met Phe Gly Gly Ala Leu Ala Gln Gly Leu
 50                  55                  60Gly Ala Ser Ser Lys Gly Leu Gly Met Ser Asn Gln Leu Gly Gln Ser65                  70                  75                  80Phe Gly Asn Gly Ala Gln Gly Ala Ser Asn Leu Leu Ser Val Pro Lys
             85                  90                  95Ser Gly Gly Asp Ala Leu Ser Lys Met Phe Asp Lys Ala Leu Asp Asp
        100                 105                 110Leu Leu Gly His Asp Thr Val Thr Lys Leu Thr Asn Gln Ser Asn Gln
    115                 120                 125Leu Ala Asn Ser Met Leu Asn Ala Ser Gln Met Thr Gln Gly Asn Met
130                 135                  140Asn Ala Phe Gly Ser Gly Val Asn Asn Ala Leu Ser Ser Ile Leu Gly145                 150                 155                 160Asn Gly Leu Gly Gln Ser Met Ser Gly Phe Ser Gln Pro Ser Leu Gly
            165                 170                 175Ala Gly Gly Leu Gln Gly Leu Ser Gly Ala Gly Ala Phe Asn Gln Leu
        180                 185                 190Gly Asn Ala Ile Gly Met Gly Val Gly Gln Asn Ala Ala Leu Ser Ala
    195                 200                 205Leu Ser Asn Val Ser Thr His Val Asp Gly Asn Asn Arg His Phe Val
210                 215                 220Asp Lys Glu Asp Arg Gly Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met Asp225                 230                 235                 240Gln Tyr Pro Glu Ile Phe Gly Lys Pro Glu Tyr Gln Lys Asp Gly Trp
            245                 250                 255Ser Ser Pro Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser Lys
        260                 265                 270Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Gly Ala Ser Met Asp Lys Phe Arg Gln
    275                 280                 285Ala Met Gly Met Ile Lys Ser Ala Val Ala Gly Asp Thr Gly Asn Thr
290                 295                 300Asn Leu Asn Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Ser Leu Gly Ile Asp Ala305                 310                 315                 320Ala Val Val Gly Asp Lys Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Lys Leu Ala
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    275                 280                 285Val Asn Lys Gly Asp Arg Ala Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met
290                 295                 300Asp Gln Tyr Pro Glu Val Phe Gly Lys Pro Gln Tyr Gln Lys Gly Pro305                 310                 315                 320Gly Gln Glu Val Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser
            325                 330                 335Lys Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Pro Ala Ser Met Glu Gln Phe Asn
        340                 345                 350Lys Ala Lys Gly Met Ile Lys Arg Pro Met Ala Gly Asp Thr Gly Asn
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     35                  40                  45Gln Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln Ser Gly
 50                  55                  60Asn Ala Ala Thr Gly Ala Gly Gly Asn Asp Gln Thr Thr Gly Val Gly 65                  70                  75                  80Asn Ala Gly Gly Leu Asn Gly Arg Lys Gly Thr Ala Gly Thr Thr Pro
             85                   90                 95Gln Ser Asp Ser Gln Asn Met Leu Ser Glu Met Gly Asn Asn Gly Leu
        100                 105                 110Asp Gln Ala Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp
    115                 120                 125Asn Pro Leu Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp
130                 135                 140Gly Gln Ser Asp Gln Phe Gly Gln Pro Gly Thr Gly Asn Asn Ser Ala145                 150                 155                 160Ser Ser Gly Thr Ser Ser Ser Gly Gly Ser Pro Phe Asn Asp Leu Ser
            165                 170                 175Gly Gly Lys Ala Pro Ser Gly Asn Ser Pro Ser Gly Asn Tyr Ser Pro
        180                 185                 190Val Ser Thr Phe Ser Pro Pro Ser Thr Pro Thr Ser Pro Thr Ser Pro
    195                 200                 205Leu Asp Phe Pro Ser Ser Pro Thr Lys Ala Ala Gly Gly Ser Thr Pro
210                 215                 220Val Thr Asp His Pro Asp Pro Val Gly Ser Ala Gly Ile Gly Ala Gly225                 230                 235                 240Asn Ser Val Ala Phe Thr Ser Ala Gly Ala Asn Gln Thr Val Leu His
            245                 250                 255Asp Thr Ile Thr Val Lys Ala Gly Gln Val Phe Asp Gly Lys Gly Gln
        260                 265                 270Thr Phe Thr Ala Gly Ser Glu Leu Gly Asp Gly Gly Gln Ser Glu Asn
    275                 280                 285Gln Lys Pro Leu Phe Ile Leu Glu Asp Gly Ala Ser Leu Lys Asn Val
290                 295                 300Thr Met Gly Asp Asp Gly Ala Asp Gly Ile His Leu Tyr Gly Asp Ala305                 310                 315                 320Lys Ile Asp Asn Leu His Val Thr Asn Val Gly Glu Asp Ala Ile Thr
            325                 330                 335Val Lys Pro Asn Ser Ala Gly Lys Lys Ser His Val Glu Ile Thr Asn
        340                 345                 350Ser Ser Phe Glu His Ala Ser Asp Lys Ile Leu Gln Leu Asn Ala Asp
    355                 360                 365Thr Asn Leu Ser Val Asp Asn Val Lys Ala Lys Asp Phe Gly Thr Phe
370                 375                 380Val Arg Thr Asn Gly Gly Gln Gln Gly Asn Trp Asp Leu Asn Leu Ser385                 390                 395                 400His Ile Ser Ala Glu Asp Gly Lys Phe Ser Phe Val Lys Ser Asp Ser
            405                 410                 415Glu Gly Leu Asn Val Asn Thr Ser Asp Ile Ser Leu Gly Asp Val Glu
        420                 425                 430Asn His Tyr Lys Val Pro Met Ser Ala Asn Leu Lys Val Ala Glu
    435                 440                 445<210>27<211>5517<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>27atggaattaa aatcactggg aactgaacac aaggcggcag tacacacagc ggcgcacaac   60cctgtggggc atggtgttgc cttacagcag ggcagcagca gcagcagccc gcaaaatgcc  120gctgcatcat tggcggcaga aggcaaaaat cgtgggaaaa tgccgagaat tcaccagcca  180tctactgcgg ctgatggtat cagcgctgct caccagcaaa agaaatcctt cagtctcagg  240ggctgtttgg ggacgaaaaa attttccaga tcggcaccgc agggccagcc aggtaccacc  300cacagcaaag gggcaacatt gcgcgatctg ctggcgcggg acgacggcga aacgcagcat  360gaggcggccg cgccagatgc ggcgcgtttg acccgttcgg gcggcgtcaa acgccgcaat  420atggacgaca tggccgggcg gccaatggtg aaaggtggca gcggcgaaga taaggtacca  480acgcagcaaa aacggcatca gctgaacaat tttggccaga tgcgccaaac gatgttgagc  540aaaatggctc acccggcttc agccaacgcc ggcgatcgcc tgcagcattc accgccgcac  600atcccgggta gccaccacga aatcaaggaa gaaccggttg gctccaccag caaggcaaca  660acggcccacg cagacagagt ggaaatcgct caggaagatg acgacagcga attccagcaa  720ctgcatcaac agcggctggc gcgcgaacgg gaaaatccac cgcagccgcc caaactcggc  780gttgccacac cgattagcgc caggtttcag cccaaactga ctgcggttgc ggaaagcgtc  840cttgagggga cagataccac gcagtcaccc cttaagccgc aatcaatgct gaaaggaagt  900ggagccgggg taacgccgct ggcggtaacg ctggataaag gcaagttgca gctggcaccg  960gataatccac ccgcgctcaa tacgttgttg aagcagacat tgggtaaaga cacccagcac 1020tatctggcgc accatgccag cagcgacggt agccagcatc tgctgctgga caacaaaggc 1080cacctgtttg atatcaaaag caccgccacc agctatagcg tgctgcacaa cagccacccc 1140ggtgagataa agggcaagct ggcgcaggcg ggtactggct ccgtcagcgt agacggtaaa 1200agcggcaaga tctcgctggg gagcggtacg caaagtcaca acaaaacaat gctaagccaa 1260ccgggggaag cgcaccgttc cttattaacc ggcatttggc agcatcctgc tggcgcagcg 1320cggccgcagg gcgagtcaat ccgcctgcat gacgacaaaa ttcatatcct gcatccggag 1380ctgggcgtat ggcaatctgc ggataaagat acccacagcc agctgtctcg ccaggcagac 1440ggtaagctct atgcgctgaa agacaaccgt accctgcaaa acctctccga taataaatcc 1500tcagaaaagc tggtcgataa aatcaaatcg tattccgttg atcagcgggg gcaggtggcg 1560atcctgacgg atactcccgg ccgccataag atgagtatta tgccctcgct ggatgcttcc 1620ccggagagcc atatttccct cagcctgcat tttgccgatg cccaccaggg gttattgcac 1680gggaagtcgg agcttgaggc acaatctgtc gcgatcagcc atgggcgact ggttgtggcc 1740gatagcgaag gcaagctgtt tagcgccgcc attccgaagc aaggggatgg aaacgaactg 1800aaaatgaaag ccatgcctca gcatgcgctc gatgaacatt ttggtcatga ccaccagatt 1860tctggatttt tccatgacga ccacggccag cttaatgcgc tggtgaaaaa taacttcagg 1920cagcagcatg cctgcccgtt gggtaacgat catcagtttc accccggctg gaacctgact 1980gatgcgctgg ttatcgacaa tcagctgggg ctgcatcata ccaatcctga accgcatgag 2040attcttgata tggggcattt aggcagcctg gcgttacagg agggcaagct tcactatttt 2100gaccagctga ccaaagggtg gactggcgcg gagtcagatt gtaagcagct gaaaaaaggc 2160ctggatggag cagcttatct actgaaagac ggtgaagtga aacgcctgaa tattaatcag 2220agcacctcct ctatcaagca cggaacggaa aacgtttttt cgctgccgca tgtgcgcaat 2280aaaccggagc cgggagatgc cctgcaaggg ctgaataaag acgataaggc ccaggccatg 2340gcggtgattg gggtaaataa atacctggcg ctgacggaaa aaggggacat tcgctccttc 2400cagataaaac ccggcaccca gcagttggag cggccggcac aaactctcag ccgcgaaggt 2460atcagcggcg aactgaaaga cattcatgtc gaccacaagc agaacctgta tgccttgacc 2520cacgagggag aggtgtttca tcagccgcgt gaagcctggc agaatggtgc cgaaagcagc 2580agctggcaca aactggcgtt gccacagagt gaaagtaagc taaaaagtct ggacatgagc 2640catgagcaca aaccgattgc cacctttgaa gacggtagcc agcatcagct gaaggctggc 2700ggctggcacg cctatgcggc acctgaacgc gggccgctgg cggtgggtac cagcggttca 2760caaaccgtct ttaaccgact aatgcagggg gtgaaaggca aggtgatccc aggcagcggg 2820ttgacggtta agctctcggc tcagacgggg ggaatgaccg gcgccgaagg gcgcaaggtc 2880agcagtaaat tttccgaaag gatccgcgcc tatgcgttca acccaacaat gtccacgccg 2940cgaccgatta aaaatgctgc ttatgccaca cagcacggct ggcaggggcg tgaggggttg 3000aagccgttgt acgagatgca gggagcgctg attaaacaac tggatgcgca taacgttcgt 3060cataacgcgc cacagccaga tttgcagagc aaactggaaa ctctggattt aggcgaacat 3120ggcgcagaat tgcttaacga catgaagcgc ttccgcgacg aactggagca gagtgcaacc 3180cgttcggtga ccgttttagg tcaacatcag ggagtgctaa aaagcaacgg tgaaatcaat 3240agcgaattta agccatcgcc cggcaaggcg ttggtccaga gctttaacgt caatcgctct 3300ggtcaggatc taagcaagtc actgcaacag gcagtacatg ccacgccgcc atccgcagag 3360agtaaactgc aatccatgct ggggcacttt gtcagtgccg gggtggatat gagtcatcag 3420aagggcgaga tcccgctggg ccgccagcgc gatccgaatg ataaaaccgc actgaccaaa 3480tcgcgtttaa ttttagatac cgtgaccatc ggtgaactgc atgaactggc cgataaggcg 3540aaactggtat ctgaccataa acccgatgcc gatcagataa aacagctgcg ccagcagttc 3600gatacgctgc gtgaaaagcg gtatgagagc aatccggtga agcattacac cgatatgggc 3660ttcacccata ataaggcgct ggaagcaaac tatgatgcgg tcaaagcctt tatcaatgcc 3720tttaagaaag agcaccacgg cgtcaatctg accacgcgta ccgtactgga atcacagggc 3780agtgcggagc tggcgaagaa gctcaagaat acgctgttgt ccctggacag tggtgaaagt 3840atgagcttca gccggtcata tggcgggggc gtcagcactg tctttgtgcc tacccttagc 3900aagaaggtgc cagttccggt gatccccgga gccggcatca cgctggatcg cgcctataac 3960ctgagcttca gtcgtaccag cggcggattg aacgtcagtt ttggccgcga cggcggggtg 4020agtggtaaca tcatggtcgc taccggccat gatgtgatgc cctatatgac cggtaagaaa 4080accagtgcag gtaacgccag tgactggttg agcgcaaaac ataaaatcag cccggacttg 4140cgtatcggcg ctgctgtgag tggcaccctg caaggaacgc tacaaaacag cctgaagttt 4200aagctgacag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         20                  25                  30Ser Ser Ser Ser Pro Gln Asn Ala Ala Ala Ser Leu Ala Ala Glu Gly
     35                  40                  45Lys Asn Arg Gly Lys Met Pro Arg Ile His Gln Pro Ser Thr Ala Ala
 50                  55                  60Asp Gly Ile Ser Ala Ala His Gln Gln Lys Lys Ser Phe Ser Leu Arg65                  70                  75                  80Gly Cys Leu Gly Thr Lys Lys Phe Ser Arg Ser Ala Pro Gln Gly Gln
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        100                 105                 110Arg Asp Asp Gly Glu Thr Gln His Glu Ala Ala Ala Pro Asp Ala Ala
    115                 120                 125Arg Leu Thr Arg Ser Gly Gly Val Lys Arg Arg Asn Met Asp Asp Met
130                 135                 140Ala Gly Arg Pro Met Val Lys Gly Gly Ser Gly Glu Asp Lys Val Pro145                 150                 155                 160Thr Gln Gln Lys Arg His Gln Leu Asn Asn Phe Gly Gln Met Arg Gln
            165                 170                 175Thr Met Leu Ser Lys Met Ala His Pro Ala Ser Ala Asn Ala Gly Asp
        180                 185                 190Arg Leu Gln His Ser Pro Pro His Ile Pro Gly Ser His His Glu Ile
    195                 200                 205Lys Glu Glu Pro Val Gly Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ala His Ala
210                 215                 220Asp Arg Val Glu Ile Ala Gln Glu Asp Asp Asp Ser Glu Phe Gln Gln225                 230                 235                 240Leu His Gln Gln Arg Leu Ala Arg Glu Arg Glu Asn Pro Pro Gln Pro
            245                 250                 255Pro Lys Leu Gly Val Ala Thr Pro Ile Ser Ala Arg Phe Gln Pro Lys
        260                 265                 270Leu Thr Ala Val Ala Glu Ser Val Leu Glu Gly Thr Asp Thr Thr Gln
    275                 280                 285Ser Pro Leu Lys Pro Gln Ser Met Leu Lys Gly Ser Gly Ala Gly Val
290                 295                 300Thr Pro Leu Ala Val Thr Leu Asp Lys Gly Lys Leu Gln Leu Ala Pro305                 310                 315                 320Asp Asn Pro Pro Ala Leu Asn Thr Leu Leu Lys Gln Thr Leu Gly Lys
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    355                 360                 365Ala Thr Ser Tyr Ser Val Leu His Asn Ser His Pro Gly Glu Ile Lys
370                 375                 380Gly Lys Leu Ala Gln Ala Gly Thr Gly Ser Val Ser Val Asp Gly Lys385                 390                 395                 400Ser Gly Lys Ile Ser Leu Gly Ser Gly Thr Gln Ser His Asn Lys Thr
            405                 4l0                 415Met Leu Ser Gln Pro Gly Glu Ala His Arg Ser Leu Leu Thr Gly Ile
        420                 425                 430Trp Gln His Pro Ala Gly Ala Ala Arg Pro Gln Gly Glu Ser Ile Arg
    435                 440                 445Leu His Asp Asp Lys Ile His Ile Leu His Pro Glu Leu Gly Val Trp
450                 455                 460Gln Ser Ala Asp Lys Asp Thr His Ser Gln Leu Ser Arg Gln Ala Asp465                 470                 475                 480Gly Lys Leu Tyr Ala Leu Lys Asp Asn Arg Thr Leu Gln Ash Leu Ser
            485                 490                 495Asp Asn Lys Ser Ser Glu Lys Leu Val Asp Lys Ile Lys Ser Tyr Ser
        500                 505                 510Val Asp Gln Arg Gly Gln Val Ala Ile Leu Thr Asp Thr Pro Gly Arg
    515                 520                 525His Lys Met Ser Ile Met Pro Ser Leu Asp Ala Ser Pro Glu Ser His
530                 535                 540Ile Ser Leu Ser Leu His Phe Ala Asp Ala His Gln Gly Leu Leu His545                 550                 555                 560Gly Lys Ser Glu Leu Glu Ala Gln Ser Val Ala Ile Ser His Gly Arg
            565                 570                 575Leu Val Val Ala Asp Ser Glu Gly Lys Leu Phe Ser Ala Ala Ile Pro
        580                 585                 590Lys Gln Gly Asp Gly Asn Glu Leu Lys Met Lys Ala Met Pro Gln His
    595                 600                 605Ala Leu Asp Glu His Phe Gly His Asp His Gln Ile Ser Gly Phe Phe
610                 615                 620His Asp Asp His Gly Gln Leu Asn Ala Leu Val Lys Asn Asn Phe Arg625                 630                 635                 640Gln Gln His Ala Cys Pro Leu Gly Asn Asp His Gln Phe His Pro Gly
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        660                 665                 670His Thr Asn Pro Glu Pro His Glu Ile Leu Asp Met Gly His Leu Gly
    675                 680                 685Ser Leu Ala Leu Gln Glu Gly Lys Leu His Tyr Phe Asp Gln Leu Thr
690                 695                 700Lys Gly Trp Thr Gly Ala Glu Ser Asp Cys Lys Gln Leu Lys Lys Gly705                 710                 715                 720Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Leu Leu Lys Asp Gly Glu Val Lys Arg Leu
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        740                 745                 750Phe Ser Leu Pro His Val Arg Asn Lys Pro Glu Pro Gly Asp Ala Leu
    755                 760                 765Gln Gly Leu Asn Lys Asp Asp Lys Ala Gln Ala Met Ala Val Ile Gly
770                 775                 780Val Asn Lys Tyr Leu Ala Leu Thr Glu Lys Gly Asp Ile Arg Ser Phe785                 790                 795                 800Gln Ile Lys Pro Gly Thr Gln Gln Leu Glu Arg Pro Ala Gln Thr Leu
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    835                 840                 845Pro Arg Glu Ala Trp Gln Asn Gly Ala Glu Ser Ser Ser Trp His Lys
850                 855                 860Leu Ala Leu Pro Gln Ser Glu Ser Lys Leu Lys Ser Leu Asp Met Ser865                 870                 875                 880His Glu His Lys Pro Ile Ala Thr Phe Glu Asp Gly Ser Gln His Gln
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    915                 920                 925Gln Gly Val Lys Gly Lys Val Ile Pro Gly Ser Gly Leu Thr Val Lys
930                 935                 940Leu Ser Ala Gln Thr Gly Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Arg Lys Val945                 950                 955                 960Ser Ser Lys Phe Ser Glu Arg Ile Arg Ala Tyr Ala Phe Asn Pro Thr
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        980                 985                 990Gly Trp Gln Gly Arg Glu Gly Leu Lys Pro Leu Tyr Glu Met Gln Gly
    995                 1000                1005Ala Leu Ile Lys Gln Leu Asp Ala His Asn Val Arg His Asn Ala Pro
1010                1015                1020Gln Pro Asp Leu Gln Ser Lys Leu Glu Thr Leu Asp Leu Gly Glu His1025                1030                1035                1040Gly Ala Glu Leu Leu Asn Asp Met Lys Arg Phe Arg Asp Glu Leu Glu
            1045                1050                1055Gln Ser Ala Thr Arg Ser Val Thr Val Leu Gly Gln His Gln Gly Val
        1060                1065                1070Leu Lys Ser Asn Gly Glu Ile Asn Ser Glu Phe Lys Pro Ser Pro Gly
    1075                1080                1085Lys Ala Leu Val Gln Ser Phe Asn Val Asn Arg Ser Gly Gln Asp Leu
1090                1095                1100Ser Lys Ser Leu Gln Gln Ala Val His Ala Thr Pro Pro Ser Ala Glu1105               1110                1115                1120Ser Lys Leu Gln Ser Met Leu Gly His Phe Val Ser Ala Gly Val Asp
           1125                1130                1135Met Ser His Gln Lys Gly Glu Ile Pro Leu Gly Arg Gln Arg Asp Pro
       1140                1145                1150Asn Asp Lys Thr Ala Leu Thr Lys Ser Arg Leu Ile Leu Asp Thr Val
   1155                1160                1165Thr Ile Gly Glu Leu His Glu Leu Ala Asp Lys Ala Lys Leu Val Ser1170                1175                1180Asp His Lys Pro Asp Ala Asp Gln Ile Lys Gln Leu Arg Gln Gln Phe1185               1190                1195                1200Asp Thr Leu Arg Glu Lys Arg Tyr G1u Ser Asn Pro Val Lys His Tyr
           1205                1210                1215Thr Asp Met Gly Phe Thr His Asn Lys Ala Leu Glu Ala Asn Tyr Asp
       1220                1225                1230Ala Val Lys Ala Phe Ile Asn Ala Phe Lys Lys Glu His His Gly Val
   1235                1240                1245Asn Leu Thr Thr Arg Thr Val Leu Glu Ser Gln Gly Ser Ala Glu Leu1250                1255                1260Ala Lys Lys Leu Lys Asn Thr Leu Leu Ser Leu Asp Ser Gly Glu Ser1265               1270                1275                1280Met Ser Phe Ser Arg Ser Tyr Gly Gly Gly Val Ser Thr Val Phe Val
           1285                1290                1295Pro Thr Leu Ser Lys Lys Val Pro Val Pro Val Ile Pro Gly Ala Gly
       1300                1305                1310Ile Thr Leu Asp Arg Ala Tyr Asn Leu Ser Phe Ser Arg Thr Ser Gly
   1315                1320                1325Gly Leu Asn Val Ser Phe Gly Arg Asp Gly Gly Val Ser Gly Asn Ile1330                1335                1340Met Val Ala Thr Gly His Asp Val Met Pro Tyr Met Thr Gly Lys Lys1345               1350                1355                1360Thr Ser Ala Gly Asn Ala Ser Asp Trp Leu Ser Ala Lys His Lys Ile
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       1380                1385                1390Thr Leu Gln Asn Ser Leu Lys Phe Lys Leu Thr Glu Asp Glu Leu Pro
   1395                1400                1405Gly Phe Ile His Gly Leu Thr His Gly Thr Leu Thr Pro Ala Glu Leu1410                1415                1420Leu Gln Lys Gly Ile Glu His Gln Met Lys Gln Gly Ser Lys Leu Thr1425               1430                1435                1440Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Asn Leu Asp Leu Arg Ala Gly Ile Asn
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   1715                1720                1725Gln Thr Glu Lys Ala Ile Leu Asp Gly Lys Val Gly Arg Glu Glu Val1730                1735                1740Gly Val Leu Phe Gln Asp Arg Asn Asn Leu Arg Val Lys Ser Val Ser1745               1750                1755                1760Val Ser Gln Ser Val Ser Lys Ser Glu Gly Phe Asn Thr Pro Ala Leu
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   1795                1800                1805Phe Thr Leu Glu Gly Gly Ile Ala Gln Ala Asn Pro Gln Val Ala Ser1810                1815                1820Ala Leu Thr Asp Leu Lys Lys Glu Gly Leu Glu Met Lys Ser1825               1830                1835<210>29<211>420<212>DNA<213>解淀粉欧文氏菌<400>29atgacatcgt cacagcagcg ggttgaaagg tttttacagt atttctccgc cgggtgtaaa  60acgcccatac atctgaaaga cggggtgtgc gccctgtata acgaacaaga tgaggaggcg 120gcggtgctgg aagtaccgca acacagcgac agcctgttao tacactgccg aatcattgag 180gctgacccac aaacttcaat aaccctgtat tcgatgctat tacagotgaa ttttgaaatg 240gcggccatgc goggctgttg gctggcgctg gatgaactgc acaacgtgcg tttatgtttt 300cagcagtcgc tggagcatct ggatgaagca agttttagcg atatcgttag cggcttcatc 360gaacatgcgg cagaagtgcg tgagtatata gcgcaattag acgagagtag cgcggcataa 420<210>30<211>139<212>PRT<213>解淀粉欧文氏菌<400>30Met Thr Ser Ser Gln Gln Arg Val Glu Arg Phe Leu Gln Tyr Phe Ser1               5                  10                  15Ala Gly Cys Lys Thr Pro Ile His Leu Lys Asp Gly Val Cys Ala Leu
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130                 135<210>3l<211>341<212>PRT<213>丁香假单胞菌<400>31Met Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Ser Ser Leu Gln Thr Pro Ala Met1               5                  10                  15Ala Leu Val Leu Val Arg Pro Glu Ala Glu Thr Thr Gly Ser Thr Ser
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     35                  40                  45Arg Asn Gly Gln Leu Asp Asp Ser Ser Pro Leu Gly Lys Leu Leu Ala
 50                  55                  60Lys Ser Met Ala Ala Asp Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ile Glu Asp Val65                  70                  75                  80Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe
             85                  90                  95Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met
        100                 105                 110Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu Leu
    115                 120                 125Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro Met
130                 135                 140Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe Pro145                 150                 155                 160Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn Phe
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    195                 200                 205Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser Ser
210                 215                 220Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp Ser225                 230                 235                 240Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp
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    275                 280                 285Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu Ala
290                 295                 300Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser Ala305                 310                 315                 320Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Arg
            325                 330                 335Asn Gln Ala Ala Ala
         340
<210>32
<211>1026
<212>DNA
<213>丁香假单胞菌
<400>32atgcagagtc tcagtcttaa cagcagctcg ctgcaaaccc cggcaatggc ccttgtcctg   60gtacgtcctg aagccgagac gactggcagt acgtcgagca aggcgcttca ggaagttgtc  120gtgaagctgg ccgaggaact gatgcgcaat ggtcaactcg acgacagctc gccattggga  180aaactgttgg ccaagtcgat ggccgcagat ggcaaggcgg gcggcggtat tgaggatgtc  240atcgctgcgc tggacaagct gatccatgaa aagctcggtg acaacttcgg cgcgtctgcg  300gacagcgcct cgggtaccgg acagcaggac ctgatgactc aggtgctcaa tggcctggcc  360aagtcgatgc tcgatgatct tctgaccaag caggatggcg ggacaagctt ctccgaagac  420gatatgccga tgctgaacaa gatcgcgcag ttcatggatg acaatcccgc acagtttccc  480aagccggact cgggctcctg ggtgaacgaa ctcaaggaag acaacttcct tgatggcgac  540gaaacggctg cgttccgttc ggcactcgac atcattggcc agcaactggg taatcagcag  600agtgacgctg gcagtctggc agggacgggt ggaggtctgg gcactccgag cagtttttcc  660aacaactcgt ccgtgatggg tgatccgctg atcgacgcca ataccggtcc cggtgacagc  720ggcaataccc gtggtgaagc ggggcaactg atcggcgagc ttatcgaccg tggcctgcaa  780tcggtattgg ccggtggtgg actgggcaca cccgtaaaca ccccgcagac cggtacgtcg  840gcgaatggcg gacagtccgc tcaggatctt gatcagttgc tgggcggctt gctgctcaag  900ggcctggagg caacgctcaa ggatgccggg caaacaggca ccgacgtgca gtcgagcgct  960gcgcaaatcg ccaccttgct ggtcagtacg ctgctgcaag gcacccgcaa tcaggctgca 1020gcctga                                                            1026<210>33<211>1729<212>DNA<213>丁香假单胞菌<400>33tccacttcgc tgattttgaa attggcagat tcatagaaac gttcaggtgt ggaaatcagg   60ctgagtgcgc agatttcgtt gataagggtg tggtactggt cattgttggt catttcaagg  120cctetgagtg cggtgcggag caataccagt cttcctgctg gcgtgtgcac actgagtcgc  180aggcataggc atttcagttc cttgcgttgg ttgggcatat aaaaaaagga acttttaaaa  240acagtgcaat gagatgecgg caaaacggga accggtcgct gcgctttgcc actcacttcg  300agcaagctca accccaaaca tccacatccc tatcgaacgg acagcgatac ggccacttgc  360tctggtaaac cctggagctg gcgtcggtcc aattgcccac ttagcgaggt aacgcagcat  420gagcatcggc atcacacccc ggccgcaaca gaccaccacg ccactcgatt tttcggcgct  480aagcggcaag agtcctcaac caaacacgtt cggcgagcag aacactcagc aagcgatcga  540cccgagtgca ctgttgttcg gcagcgacac acagaaagac gtcaacttcg gcacgcccga  600cageaccgtc cagaatccgc aggacgccag caagcccaac gacagccagt ccaacatcgc  660taaattgatc agtgcattga tcatgtcgtt gctgcagatg ctcaccaact ccaataaaaa  720gcaggacacc aatcaggaac agcctgatag ccaggctcct ttccagaaca acggcgggct  780cggtacaccg tcggccgata gcgggggcgg cggtacaccg gatgcgacag gtggcggcgg  840cggtgatacg ccaagcgcaa caggcggtgg cggcggtgat actccgaccg caacaggcgg  900tggcggcagc ggtggcggcg gcacacccac tgcaacaggt ggcggcagcg gtggcacacc  960cactgcaaca ggcggtggcg agggtggcgt aacaccgcaa atcactccgc agttggccaa 1020ccctaaccgt acctcaggta ctggctcggt gtcggacacc gcaggttcta ccgagcaagc 1080cggcaagatc aatgtggtga aagacaccat caaggtcggc gctggcgaag tctttgacgg 1140ccacggcgca accttcactg ccgacaaatc tatgggtaac ggagaccagg gcgaaaatca 1200gaagcccatg ttcgagctgg ctgaaggcgc tacgttgaag aatgtgaacc tgggtgagaa 1260cgaggtcgat ggcatccacg tgaaagccaa aaacgctcag gaagtcacca ttgacaacgt 1320gcatgcccag aacgtcggtg aagacctgat tacggtcaaa ggcgagggag gcgcagcggt 1380cactaatctg aacatcaaga acagcagtge caaaggtgca gacgacaagg ttgtccagct 1440caacgccaac actcacttga aaatcgacaa cttcaaggcc gacgatttcg gcacgatggt 1500tcgcaccaac ggtggcaagc agtttgatga catgagcatc gagctgaacg gcatcgaagc 1560taaccacggc aagttcgccc tggtgaaaag cgacagtgac gatctgaagc tggcaacggg 1620caacatcgcc atgaccgacg tcaaacacgc ctacgataaa acccaggcat cgacccaaca 1680caccgagctt tgaatccaga caagtagctt gaaaaaaggg ggtggactc             1729<210>34<211>424<212>PRT<213>丁香假单胞菌<400>34Met Ser Ile Gly Ile Thr Pro Arg Pro Gln Gln Thr Thr Thr Pro Leu1               5                  10                  15Asp Phe Ser Ala Leu Ser Gly Lys Ser Pro Gln Pro Asn Thr Phe Gly
         20                  25                  30Glu Gln Asn Thr Gln Gln Ala Ile Asp Pro Ser Ala Leu Leu Phe Gly
     35                  40                  45Ser Asp Thr Gln Lys Asp Val Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val
 50                  55                  60Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile65                  70                  75                  80Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu Leu Gln Met Leu Thr
             85                  90                  95Asn Ser Asn Lys Lys Gln Asp Thr Asn Gln Glu Gln Pro Asp Ser Gln
        100                 105                 110Ala Pro Phe Gln Asn Asn Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ala Asp Ser
    115                 120                 125Gly Gly Gly Gly Thr Pro Asp Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Thr
130                 135                 140Pro Ser Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Thr Pro Thr Ala Thr Gly145                 150                 155                 160Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Pro Thr Ala Thr Gly Gly Gly
            165                 170                 175Ser Gly Gly Thr Pro Thr Ala Thr Gly Gly Gly Glu Gly Gly Val Thr
        180                 185                 190Pro Gln Ile Thr Pro Gln Leu Ala Ash Pro Asn Arg Thr Ser Gly Thr
    195                 200                 205Gly Ser Val Ser Asp Thr Ala Gly Ser Thr Glu Gln Ala Gly Lys Ile
210                 215                 220Asn Val Val Lys Asp Thr Ile Lys Val Gly Ala Gly Glu Val Phe Asp225                230                 235                 240Gly His Gly Ala Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Met Gly Asn Gly Asp
            245                 250                 255Gln Gly Glu Asn Gln Lys Pro Met Phe Glu Leu Ala Glu Gly Ala Thr
        260                 265                 270Leu Lys Asn Val Asn Leu Gly Glu Asn Glu Val Asp Gly Ile His Val
    275                 280                 285Lys Ala Lys Asn Ala Gln Glu Val Thr Ile Asp Asn Val His Ala Gln
290                 295                 300Asn Val Gly Glu Asp Leu Ile Thr Val Lys Gly Glu Gly Gly Ala Ala305                 310                 315                 320Val Thr Asn Leu Asn Ile Lys Asn Ser Ser Ala Lys Gly Ala Asp Asp
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        340                 345                 350Lys Ala Asp Asp Phe Gly Thr Met Val Arg Thr Asn Gly Gly Lys Gln
    355                 360                 365Phe Asp Asp Met Ser Ile Glu Leu Asn Gly Ile Glu Ala Asn His Gly
370                 375                 380Lys Phe Ala Leu Val Lys Ser Asp Ser Asp Asp Leu Lys Leu Ala Thr385                 390                 395                 400Gly Asn Ile Ala Met Thr Asp Val Lys His Ala Tyr Asp Lys Thr Gln
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        420<210>35<211>344<212>PRT<213>茄假单胞菌<220><223>未知生物体的描述：茄假单胞菌<400>35Met Ser Val Gly Asn Ile Gln Ser Pro Ser Asn Leu Pro Gly Leu Gln1               5                  10                  15Asn Leu Asn Leu Asn Thr Asn Thr Asn Ser Gln Gln Ser Gly Gln Ser
         20                  25                  30Val Gln Asp Leu Ile Lys Gln Val Glu Lys Asp Ile Leu Asn Ile Ile
     35                  40                  45Ala Ala Leu Val Gln Lys Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gly Asn Thr Gly
 50                  55                  60Asn Thr Gly Asn Ala Pro Ala Lys Asp Gly Asn Ala Asn Ala Gly Ala65                  70                  75                  80Asn Asp Pro Ser Lys Asn Asp Pro Ser Lys Ser Gln Ala Pro Gln Ser
             85                  90                  95Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met
        100                 105                 110Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys Leu Leu Lys Ala
    115                 120                 125Ala Leu His Met Gln Gln Pro Gly Gly Asn Asp Lys Gly Asn Gly Val
130                 135                 140Gly Gly Ala Asn Gly Ala Lys Gly Ala Gly Gly Gln Gly Gly Leu Ala145                 150                 155                 160Glu Ala Leu Gln Glu Ile Glu Gln Ile Leu Ala Gln Leu Gly Gly Gly
            165                 170                 175Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Val Gly Gly Ala Gly Gly
        180                 185                 190Ala Asp Gly Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Asn Gly Ala
    195                 200                 205Asp Gly Gly Asn Gly Val Asn Gly Asn Gln Ala Asn Gly Pro Gln Asn
210                 215                 220Ala Gly Asp Val Asn Gly Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly Ser Glu Asp225                 230                 235                 240Gln Gly Gly Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu Asn
            245                 250                 255Ala Leu Val Gln Met Met Gln Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gln
        260                 265                 270Ala Gln Gly Gly Ser Lys Gly Ala Gly Asn Ala Ser Pro Ala Ser Gly
    275                 280                 285Ala Asn Pro Gly Ala Asn Gln Pro Gly Ser Ala Asp Asp Gln Ser Ser
290                 295                 300Gly Gln Asn Asn Leu Gln Ser Gln Ile Met Asp Val Val Lys Glu Val205                 310                 315                 320Val Gln Ile Leu Gln Gln Met Leu Ala Ala Gln Asn Gly Gly Ser Gln
            325                 330                 335Gln Ser Thr Ser Thr Gln Pro Met
        340<210>36<211>1035<212>DNA<213>茄假单胞菌<400>36atgtcagtcg gaaacatcca gagcccgtcg aacctcccgg gtctgcagaa cctgaacctc   60aacaccaaca ccaacagcca gcaatcgggc cagtccgtgc aagacctgat caagcaggtc  120gagaaggaca tcctcaacat catcgcagcc ctcgtgcaga aggccgcaca gtcggcgggc  180ggcaacaccg gtaacaccgg caacgcgccg gcgaaggacg gcaatgccaa cgcgggcgcc  240aacgacccga gcaagaacga cccgagcaag agccaggctc cgcagtcggc caacaagacc  300ggcaacgtcg acgacgccaa caaccaggat ccgatgcaag cgctgatgca gctgctggaa  360gacctggtga agctgctgaa ggoggccctg cacatgcagc agcccggcgg caatgacaag  420ggcaacggcg tgggcggtgc caacggcgcc aagggtgccg gcggccaggg cggcctggcc  480gaagcgctgc aggagatcga gcagatcctc gcccagctcg gcggcggcgg tgctggcgcc  540ggcggcgcgg gtggcggtgt cggcggtgct ggtggcgcgg atggcggctc cggtgcgggt  600ggcgcaggcg gtgcgaacgg cgccgacggc ggcaatggcg tgaacggcaa ccaggcgaac  660ggcccgcaga acgcaggcga tgtcaacggt gccaacggcg cggatgacgg cagcgaagac  720cagggcggcc tcaccggcgt gctgcaaaag ctgatgaaga tcctgaacgc gctggtgcag  780atgatgcagc aaggcggcct cggcggcggc aaccaggcgc agggcggctc gaagggtgcc  840ggcaacgcct cgccggcttc cggcgcgaac ccgggcgcga accagcccgg ttcggcggat  900gatcaatcgt ccggccagaa caatctgcaa tcccagatca tggatgtggt gaaggaggtc  960gtccagatcc tgcagcagat gctggcggcg cagaacggcg gcagccagca gtccacctcg 1020acgcagccga tgtaa                                                  1035<210>37<211>26<212>PRT<213>野油菜黄单胞菌大豆致病变种<400>37Thr Leu Ile Glu Leu Met Ile Val Val Ala Ile Ile Ala Ile Leu Ala1               5                  10                  15Ala Ile Ala Leu Pro Ala Tyr Gln Asp Tyr
         20                  25<210>38<211>20<212>PRT<213>野油菜黄单胞菌天竺葵致病变种<400>38Ser Ser Gln Gln Ser Pro Ser Ala Gly Ser Glu Gln Gln Leu Asp Glnl               5                  10                  15Leu Leu Ala Met
         20<210>39<211>13<212>PRT<213>大雄疫霉<400>39Val Trp Asn Gln Pro Val Arg Gly Phe Lys Val Tyr Glul               5                  10

Claims (46)

1.过敏反应激发子蛋白或多肽的分离的片段，其中所述片段在植物中不诱发过敏反应，但具有其它活性。
2.按照权利要求1的分离的片段，其中所述过敏反应激发子蛋白或多肽得自欧文氏菌属、假单胞菌属、黄单胞菌属或疫霉属。
3.按照权利要求2的分离的片段，其中所述过敏反应激发子蛋白或多肽得自解淀粉欧文氏菌。
4.按照权利要求3的分离的片段，其中所述片段选自SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的C端片段、SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的N端片段和SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的内部片段。
5.按照权利要求4的分离的片段，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列中覆盖SEQ.ID.No.23的以下氨基酸的C端片段：169和403、210和403、267和403、或343和403。
6.按照权利要求4的分离的片段，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的N端片段。
7.按照权利要求4的分离的片段，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列中覆盖SEQ.ID.No.23的以下氨基酸的内部片段：105和179、137和166、121和150、或137和156。
8.按照权利要求2的分离的片段，其中所述过敏反应激发子得自丁香假单胞菌。
9.按照权利要求8的分离的片段，其中所述片段包含SEQ.ID.No.31的氨基酸190-294。
10.分离的DNA分子，编码按照权利要求1的片段。
11.按照权利要求10的分离的DNA分子，其中所述过敏反应激发子蛋白或多肽得自欧文氏菌属、假单胞菌属、黄单胞菌属或疫霉属。
12.按照权利要求11的分离的DNA分子，其中所述过敏反应激发子蛋白或多肽得自解淀粉欧文氏菌。
13.按照权利要求12的分离的DNA分子，其中所述片段选自SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的C端片段、SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的N端片段和SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的内部片段。
14.按照权利要求12的分离的DNA分子，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列中覆盖SEQ.ID.No.23的以下氨基酸的C端片段：169和403、210和403、267和403、或343和403。
15.按照权利要求12的分离的DNA分子，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列的N端片段。
16.按照权利要求12的分离的DNA分子，其中所述片段为SEQ.ID.No.23的氨基酸序列中覆盖SEQ.ID.No.23的以下氨基酸的内部片段：105和179、137和166、121和150、或137和156。
17.按照权利要求11的分离的DNA分子，其中所述过敏反应激发子得自丁香假单胞菌。
18.按照权利要求18的分离的DNA分子，其中所述片段包含SEQ.ID.No.31的氨基酸190-294。
19.用按照权利要求10的DNA分子转化的表达系统。
20.按照权利要求19的表达系统，其中所述DNA分子以适当的有义方向和并在正确的读框内。
21.用按照权利要求10的DNA分子转化的宿主细胞。
22.按照权利要求21的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自植物细胞和细菌细胞。
23.按照权利要求21的宿主细胞，其中所述DNA分子用表达系统转化。
24.用权利要求10的DNA分子转化的转基因植物。
25.按照权利要求24的转基因植物，其中所述植物选自：苜蓿、水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、玉米、马铃薯、甘薯、菜豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、甘蓝、抱子甘蓝、甜菜、欧洲防风、芜菁、花椰菜、青花椰菜、萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、南瓜、西葫芦(pumpkin)、西葫芦(zucchini)、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、柑桔、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、大豆、烟草、番茄、高梁和甘蔗。
26.按照权利要求24的转基因植物，其中所述植物选自：拟南芥、非洲紫罗兰属、碧冬茄、天竺葵、一品红、菊花、康乃馨和百日草。
27.用权利要求10的DNA分子转化的转基因植物种子。
28.按照权利要求27的转基因植物种子，其中所述植物种子选自：苜蓿、水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、玉米、马铃薯、甘薯、菜豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、甘蓝、抱子甘蓝、甜菜、欧洲防风、芜菁、花椰菜、青花椰菜、萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、南瓜、西葫芦(pumpkin)、西葫芦(zucchini)、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、柑桔、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、大豆、烟草、番茄、高梁和甘蔗。
29.按照权利要求27的转基因植物种子，其中所述植物种子选自：拟南芥、非洲紫罗兰属、碧冬茄、天竺葵、一品红、菊花、康乃馨和百日草。
30.赋予植物抗病性的方法，所述方法包括：
在有效赋予抗病性的条件下，以非感染的形式将过敏反应激发子蛋白或多肽的片段应用到植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应。
31.按照权利要求30的方法，其中在所述应用期间将植物处理。
32.按照权利要求30的方法，其中在所述应用期间将植物种子处理，所述方法还包括：
在自然土壤或人工土壤中，播种用所述过敏反应激发子的片段处理的种子以及
从在所述土壤中播种的种子繁殖植物。
33.促进植物生长的方法，所述方法包括：
在有效促进植物生长的条件下，以非感染的形式将过敏反应激发子蛋白或多肽的片段应用到植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应。
34.按照权利要求33的方法，其中在所述应用期间将植物处理。
35.按照权利要求33的方法，其中在所述应用期间将植物种子处理，所述方法还包括：
在自然土壤或人工土壤中，播种用所述过敏反应激发子的片段处理的种子以及
从在所述土壤中播种的种子繁殖植物。
36.植物害虫防治的方法，所述方法包括：
在有效防治害虫的条件下，以非感染的形式将过敏反应激发子蛋白或多肽的片段应用到植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应。
37.按照权利要求36的方法，其中在所述应用期间将植物处理。
38.按照权利要求36的方法，其中在所述应用期间将植物种子处理，所述方法还包括：
在自然土壤或人工土壤中，播种用所述过敏反应激发子的片段处理的种子以及
从在所述土壤中播种的种子繁殖植物。
39.赋予植物抗病性的方法，所述方法包括：
提供用编码过敏反应激发子蛋白或多肽的片段的DNA分子转化的转基因植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应，然后
在有效赋予抗病性的条件下，培育所述转基因植物或由所述转基因植物种子所产生的转基因植物。
40.按照权利要求39的方法，其中提供转基因植物。
41.按照权利要求39的方法，其中提供转基因植物种子。
42.促进植物生长的方法，所述方法包括：
提供用编码过敏反应激发子蛋白或多肽的片段的DNA分子转化的转基因植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应，然后
在有效促进植物生长的条件下，培育所述转基因植物或由所述转基因植物种子所产生的转基因植物。
43.按照权利要求42的方法，其中提供转基因植物。
44.按照权利要求42的方法，其中提供转基因植物种子。
45.植物害虫防治的方法，所述方法包括：
提供用编码过敏反应激发子蛋白或多肽的片段的DNA分子转化的转基因植物或植物种子，所述片段不诱发过敏反应，然后
在有效防治害虫的条件下，培育所述转基因植物或由所述转基因植物种子所产生的转基因植物。
46.按照权利要求45的方法，其中提供转基因植物。
47.按照权利要求45的方法，其中提供转基因植物种子。
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