CN1309420C - 抗体抗龋制剂 - Google Patents
抗体抗龋制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1309420C CN1309420C CNB200410047128XA CN200410047128A CN1309420C CN 1309420 C CN1309420 C CN 1309420C CN B200410047128X A CNB200410047128X A CN B200410047128XA CN 200410047128 A CN200410047128 A CN 200410047128A CN 1309420 C CN1309420 C CN 1309420C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antiserum
- menthol
- salicylic acid
- gallic acid
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 82
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 claims abstract description 44
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 claims abstract description 44
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 claims abstract description 38
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 38
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 6
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 claims description 30
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 16
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 55
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 208000025157 Oral disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 abstract description 4
- 208000030194 mouth disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 abstract description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 9
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical compound C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 5
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000001013 cariogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000021918 systemic acquired resistance Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 208000002064 Dental Plaque Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-MRTMQBJTSA-N Isoborneol Natural products C1C[C@@]2(C)[C@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-MRTMQBJTSA-N 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 241001593750 Turcica Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000675 anti-caries Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N borneol Natural products C1CC2(C)C(C)CC1C2(C)C CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N dl-isoborneol Natural products C1CC2(C)C(O)CC1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- VHBSECWYEFJRNV-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O.OC(=O)C1=CC=CC=C1O VHBSECWYEFJRNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186044 Actinomyces viscosus Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 240000000572 Blumea balsamifera Species 0.000 description 1
- 235000007627 Caesalpinia Nutrition 0.000 description 1
- 241000522234 Caesalpinia Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000008495 Chrysanthemum leucanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 244000192528 Chrysanthemum parthenium Species 0.000 description 1
- 235000000604 Chrysanthemum parthenium Nutrition 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- 206010051625 Conjunctival hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010010726 Conjunctival oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000123611 Dipterocarpaceae Species 0.000 description 1
- 241000123612 Dryobalanops Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010015946 Eye irritation Diseases 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical group CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010033971 Paratyphoid fever Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 240000007711 Peperomia pellucida Species 0.000 description 1
- 241000605894 Porphyromonas Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241001312524 Streptococcus viridans Species 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 1
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 1
- 229940025250 camphora Drugs 0.000 description 1
- 239000010238 camphora Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- ZSRQDUNHUIEDHK-UHFFFAOYSA-N excelsioside Natural products COC(=O)C1=COC(OC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(=CC)C1CC(=O)Oc3ccc(CCO)cc3 ZSRQDUNHUIEDHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000013 eye irritation Toxicity 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000008384 feverfew Nutrition 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- VTSMBFKSVVGHBS-UHFFFAOYSA-N formoside Natural products C1CC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC2(C(O)=O)C(CCC2C3(C)C)=C1C2(C)CCC3OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OCC(O)C1OC(C1O)OCC(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O VTSMBFKSVVGHBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 description 1
- 229930008677 glyco alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及用于口腔抗龋的生物制品。本发明由用口腔致龋的几种变形链球菌菌株混合培养后经家兔免疫制备的抗血清与水杨酸、薄荷醇、没食子酸中的一种或一种以上增效剂组成，各组分的母液经稀释后组合的浓度稀释范围为抗血清20～80X、水杨酸10～80X、薄荷醇4～40X、没食子酸1～8X；本发明的各种组合的抑菌效果均高于单一抗血清；经检测，抗体抗龋制剂对口腔最常见和最主要的致龋菌均有明显的抗菌活性，而且无毒性，无刺激性，因而可用于生产防治龋齿的口腔药物，口腔疫苗以及添加到日常生活用品如牙膏、嗽口液、口香糖中防龋及预防其他口腔疾病。
Description
技术领域：本发明涉及一种牙科用的制品，具体涉及口腔抗龋的生物制品。
背景技术：长期以来，国内外以氟化物作为主要的防龋剂，但随着广泛的应用，也暴露出氟化物的一些问题。据有关部门调查表明：氟化物在水中即使微量也可能与有机物结合形成三卤甲烷。三卤甲烷是一种具有基因毒性的致癌物；氟化物的长期应用，会产生耐氟菌株，该菌株不仅抗氟，且仍然可以致龋，尤其当它存在于混合菌斑时，致龋能力更强。
鉴于以上存在的问题，各国学者们都致力于寻找新的、更好的，从根本上消除致龋病原体的防龋制剂的研究。国外一些科学家先后发现和证实了变形链球菌是主要的致龋病原体。由此，不少学者从免疫学的角度，针对如何从根本上防龋做了大量的研究，并取得了重大的成果。研究表明，主动免疫和被动免疫防龋均是有效技术。但由于主动免疫疫苗在人体组织内可能产生其它不利于人体的反应，故主动免疫尚未在人类中开展应用。而被动免疫是口腔内直接输入抗变链球菌抗体(免疫球蛋白)，从而达到防龋的目的，避免了主动免疫所存在的问题，因此，成为当今防龋研究的热点。目前，应用于实践中的主要是抗龋牙鸡蛋黄抗体(anti-DC IgY)。抗龋牙IgY可明显地抑制变链菌菌体酶的活性，制备出的抗龋牙IgY效价可达320，且被证明安全无毒；还由于抗龋牙IgY接触致龋菌后便与菌体结合而使致龋菌失活，从而可以达到标本兼治的目的。
然而，尽管抗龋牙IgY可明显地抑制变链菌菌体酶的活性，但仍难达到现在广泛使用的氟化物等化学防龋制剂的直接效果。因此，如何增强应用抗体抑制致龋菌的效果，则是重要的需要研究解决的问题。
发明内容：本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷，提供一种具有非常明显的抑制牙菌斑中的变链菌的生长，还能明显抑制一些重要牙周病原菌的活性，不仅具有很好的防龋作用，而且可以防止其它口腔疾病的抗体抗龋制剂。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：抗体抗龋制剂由用口腔致龋的几种变形链球菌菌株混合培养后经家兔免疫制备的抗血清与水杨酸、薄荷醇、没食子酸中的一种或一种以上的增效剂组成；四种组分组合时以抗体效价640、水杨酸0.138g/ml、薄荷醇0.01g/ml、没食子酸0.047g/ml浓度的溶液为母液，经稀释X倍后混合，各组分的浓度稀释范围为：抗血清20～80X；水杨酸10～80X；薄荷醇4～40X；没食子酸1～8X；抗龋制剂的四种组分组合时，抗体效价提高，抗血清的稀释倍数增加，组分的浓度范围扩大。
下面进一步详述本发明：通过培养指示菌，观察指示菌菌落状态和生长变化，制备指示菌抗血清，测定指示菌抗血清、水杨酸、薄荷醇和没食子酸对指示菌生长的抑制作用，测定抑菌圈大小和最低抑菌浓度。通过正交试验设计，将指示菌抗血清、水杨酸、薄荷醇及没食子酸按一定浓度一定比例分别进行组合后发现对抑制指示菌生长具有明显的增效作用。
一、抗血清(抗体)的制备
1、制备材料
1.1、菌种
菌种来源：从四川大学华西口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室购得。
菌种名称及编号：变形链球菌(Streptococcus Porteus)S.mulans AHT，S.mulansBHT，S.mulans MT8148。菌种由试验室冻干保存。(以下简称指示菌)。
1.2、培养基
固体培养基：葡萄糖2％，酵母膏1％，蛋白胨1％，琼脂1.6％，pH 7.0，121℃灭菌20min。
液体培养基：葡萄糖2％，酵母膏1％，蛋白胨1％，pH 7.0，121℃灭菌20min。
性能测定培养基：葡萄糖2％，酵母膏1％，蛋白胨1％，pH 7.0。在培养液中加入数滴1.6％溴甲酚紫水溶液呈紫色。分装试管约10ml，并将杜氏发酵管倒置于培养液中，121℃灭菌20min。
2、菌种的增殖培养和活性测定
2.1、指示菌的培养
2.1.1、增殖培养
挑取少量冻干的混合指示菌接入液体培养基中，37℃静置培养72小时。当培养液混浊，液面无膜，而振动后有绢丝样的波动物时，接入另一新鲜液体培养基中，接种量20％一30％，继续培养72h。
2.1.2、稀释培养
吸取增殖液1ml加入9ml无菌水中，依次稀释至10-6，分别取不同稀释度菌液1ml于培养皿中，然后加入融化并冷却至45℃左右的固体培养基10-15ml，摇匀，待凝固后再加入10ml培养基，摇匀，制成含菌的双层平板，于37℃培养2-5天。
2.1.3、活性测定
选择具有透明圈的白色小型菌落，接入性能测定培养基内，然后补充培养基距管口2cm处，密封管口，37℃培养2-3天，观察培养液颜色的变化。当所挑指示菌与同型乳酸发酵时，由于产生乳酸，培养基颜色由紫色变为黄色；若所挑菌株与异型发酵时，不仅培养基颜色发生变化，而且由于产气，在杜氏管内充满气体。
2.1.4、菌体的保存
将增殖培养后的菌液经12000r/min离心4min，去上清液，0.9％生理盐水冲洗，菌体放入4℃冰箱保存。
3、制备抗血清
3.1、抗原的制备
挑取培养好的指示菌与PBS磷酸缓冲液混匀，配制成浓度为1mg/ml的菌悬液，取菌悬液2ml与完全弗氏佐剂混合乳化(菌悬液∶完全弗氏佐剂＝1∶1)，充分混合后备用。
3.2、菌体免疫
免疫前从家兔耳静脉采集约3ul血液，作为对照血清。
用指示菌抗原做家兔免疫的注射程序如下：
表1
| 时间 | 剂量 | 途径 |
| 第1天第7天第13天第19天 | 0.5ml1.0ml2.0ml2.5ml | 耳静脉耳静脉耳静脉耳静脉 |
3.3、采血
注射最后一次后采试血约3ml，当试血效价达到1∶500以上，则可心脏采全血，否则要加强注射1-2次。
3.4、抗血清的分离保存
从免疫家兔心脏采集的血液经室温或37℃静置后置于冰箱中过夜，让血清充分析出，必要时经3000r/min离心10min，PBS洗涤2次，按1∶100的比例加入1％的硫柳汞，分装入青霉素瓶，置-20℃保存备用。
3.5、抗血清的效价测定
3.5.1、抗血清稀释
按表2两倍稀释法稀释抗血清
表2稀释方法
| 血清稀释度 | 1∶10 | 1∶20 | 1∶40 | 1∶80 | 1∶160 | 1∶320 | 1∶640 | 1∶1280 | 1∶2560 | 1∶5120 | CK |
| 血清(ml)生理盐水 | 0.10.9 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 0.50.5 | 00.5 |
| (ml) |
3.5.2、抗原稀释
将保存的指示菌抗原用生理盐水稀释，使其相当于麦氏比浊管第7管的浓度。
3.5.3、效价测定
分别在11支血清管中加入0.5ml指示菌抗原稀释液，抗原与等量的抗血清均匀混合，置37℃水浴锅中孵育2～4小时，按下述判定标准测定效价：
++++100％凝集(完全凝集，上层变清)
+++约75％凝集(绝大部分凝集，上层略浑)
++约50％凝集(部分凝集，上层较浑)
+约25％凝集(很少部分凝集，上层浑浊)
-无凝集(液体浑浊)
以出现“++”反应的最大稀释倍数为抗血清的效价。经测定，指示菌抗血清的效价为640。
3.6、抗血清抑制指示菌生长测定
3.6.1、最佳菌浓度的筛选
挑取指示菌菌体0.5000g，稀释至5ml生理盐水中，浓度为0.1g/ml，备用。取10支干净已灭菌的试管，依次稀释成10、20、40、80、160、320、640、1280、2560、5120倍共11个浓度梯度。培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿分别接种不同浓度的指示菌稀释液50ul，各3个重复，37℃温箱培养18h，观察实验结果。
通过比较，以第10管浓度菌液的指示菌菌落分布均匀，密度一致，生长状况良好，最适合做抑菌实验。因此，以该浓度作为抑菌实验浓度，备用。菌浊度测定，配制真菌混悬液，以生理盐水为空白对照，721型分光光度计测定菌浓度，波长530nm，测定第10管菌液吸光度，OD420值为0.33。
3.6.2、抑菌试验
采用牛津杯法测定抑菌圈的大小。
将抗血清依次稀释成10、20、40、80、100、200、400、800、1000、1200倍共10个浓度梯度。培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿涂布指示菌液50ul，4个重复，吸取200ul抗血清加入至涂布指示菌液的培养皿中，37℃温箱培养18h，结果见表4。
表4 抗血清抑菌效果：
| 抗血清稀释倍数 | 抑菌效果(mm) |
| 母液102040*8010020040080010001200 | 无抑菌现象，大量凝集。无抑菌现象，微量凝集。10.07 10.18 9.34 10.2011.49 10.91 11.30 11.7610.24 9.93 10.25 10.16无明显抑菌现象无明显抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象 |
效价为640的抗血清的20～80X稀释液对指示菌有抑制作用，其中以40X的生理盐水稀释液的抑菌效果最佳。
二、增效剂的配制与抑菌效果测定
1、水杨酸
水杨酸(salicylic acid)，即邻羟基苯甲酸，是植物的一种次生代谢产物，它广泛存在于植物界，在生物体内除以游离形式和葡萄糖苷形式存在外还可以以水杨酸甲酯的形式释放到空气中。水杨酸具有多种生理调节作用，最典型的生理作用是诱导生物产生系统获得性抗性，是生物产生系统获得性抗性的必需因子。许多实验证明SA是重要的系统获得性抗性(Systemic acquired resistance，SAR)的内源信号分子。
1.1、配制
水杨酸，由北京华美生物工程公司购入。称取水杨酸(分析纯)6.9000g，充分研磨成细末，按百分比浓度溶入50％乙醇溶液中，定容至50ml，浓度为1M，作为母液备用。依次稀释10、20、40、80、100、200、400、600、800、1000、1200共11个浓度梯度。
1.2、抑菌效果测定
培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿涂布指示菌液50ul，4个重复，吸取200ul水杨酸到涂布指示菌液的培养皿中。以50％乙醇作空白对照，4个重复，37℃温箱培养18小时。测定结果见表5。
表5 抑菌效果
| 水杨酸稀释倍数 | 抑菌圈(mm) |
| 10*20408010020040080010001200 | 19.48 19.63 19.76 19.5415.40 15.30 15.15 15.6712.25 11.51 10.10 11.1711.11 11.02 10.00 9.95外环较暗，不明显外环暗，不明显无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象 |
50％乙醇空白对照，4个重复，均不产生抑菌圈，说明50％乙醇不抑制指示菌的生长，没有抑菌作用，不干扰测定水杨酸对指示菌的作用效果；从表5中可以看出水杨酸在10～80X的50％乙醇稀释度范围有抑菌效果，以10X的抑菌效果最佳。
2、薄荷醇
薄荷醇也是植物的一种次生代谢产物，人工为龙脑香科常绿乔木龙脑香(Dryobalanops Arornatica Gaertnerf)树脂的加工品，或菊科植物(Blumea Balsamifera)的提取物，或以樟脑、松节油为原料经化学合成的加工制成品。薄荷醇属挥发性药物，在有机化学中称为莰醇，难溶于水，可溶于含水乙醇中，由两个异戊二烯单位的化合物组成，属于多烯族化合物。薄荷醇是从含挥发油类植物中提取，亦属于醇类。牟氏的体外抗菌试验表明：薄荷醇可抑制或杀灭金黄色葡萄球菌、乙型溶菌性链球菌、绿色链球菌、大肠杆菌等5种常见细菌，其最低抑菌浓度(MIC)为1.0％-2.0％，最低杀菌浓度(MFC)为1.5％-2.0％，为接触抑菌。其主要成分龙脑与异龙脑的抗菌效果一致，两组分间既无拮抗也无协同作用。研究发现其最低杀菌浓度(MFC)为10％。日前薄荷醇在临床上的应用极为广泛，特别是在心脑血管疾病中的应用尤引人关注。
2.1、配制
薄荷醇，(龙脑59.9％，异龙脑37.5％)，由北京华美生物工程公司购入。称取薄荷醇(分析纯)1.0000g，充分研磨成细末，按百分比浓度溶入45％乙醇溶液中，定容至100ml，作为母液备用。用45％乙醇依次稀释成0、2、4、8、10、20、40、80、160、320、640共11个浓度梯度。
2.2、抑菌效果测定
培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿涂布指示菌液50ul，4个重复，移取200ul薄荷醇液入培养皿中。45％乙醇作空白对照，4个重复，37℃温箱培养18小时。测定结果见表6。
表6 抑菌效果
| 薄荷醇稀释倍数 | 抑菌圈(mm) |
| 母液248*10204080160320640 | 无抑菌现象无抑菌现象10.25 10.51 10.51 10.3613.86 13.47 14.77 14.1211.03 11.45 11.38 11.1610.08 9.65 9.85 10.129.50 9.41 9.71 9.69无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象无抑菌现象 |
45％乙醇空白对照，4个重复均不产生抑菌圈，说明45％乙醇不抑制指示菌的生长，没有抑菌作用，不干扰测定薄荷醇对指示菌的作用效果。表6的测定结果说明薄荷醇在4～40X的45％乙醇稀释度范围有抑菌效果，以8X的抑菌效果最佳。
3、没食子酸
没食子酸(Gallic acid)可以从五倍子、刺云实豆荚等植物中提取而得.没食子酸对蛋白质有沉淀作用，与皮肤、粘膜的溃疡面接触后，其组织蛋白质即被凝固，造成一层被膜而呈收敛作用；腺细胞的蛋白质被凝固引起分泌，产生粘膜干燥，神经末梢蛋白质的沉淀，可呈微弱的局部麻醉现象。没食子酸可与若干金属、生物碱甙类形成不溶解化合物，因而用作解毒剂。没食子对小肠有收敛作用，可减轻肠道炎症，制止腹泻。此外，对金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、伤寒、副伤寒、痢疾、炭疽、白喉、绿脓杆菌均有抑制作用。
3.1、配制
没食子酸，由北京华美生物工程公司购入。称取没食子酸4.7035g，按百分比浓度溶入蒸馏水中，定容至100ml，浓度为0.25M，作为母液备用。依次稀释0、2、4、8、10、20、40、60、80、100共10个浓度梯度。
3.2、抑菌效果测定
培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿涂布指示菌液50ul，3个重复，吸取200ul没食子酸液至涂布指示菌的培养皿中，37℃温箱培养18小时。测定结果见表7。
表7、抑菌效果
| 稀释倍数 | 抑菌圈(mm) | ||
| 母液2*4810204080100 | 25.8121.5217.6111.94无现象无现象无现象无现象无现象 | 25.4021.7717.5411.88无现象无现象无现象无现象无现象 | 25.5121.4017.6711.72无现象无现象无现象无现象无现象 |
从表7的测定结果看出，母液及2～8X的稀释液均有抑菌效果。
三、抗血清与增效剂不同组合的增效测定：
1、正交试验考察的因素及水平
为探讨抗血清与水杨酸、薄荷醇、没食子酸不同组合是否具有增效作用，以抑菌圈的大小为评价指标，进行正交试验。考察不同浓度的水杨酸、薄荷醇、没食子酸和抗血清4种主要因素对抑制指示菌生长的抑菌圈大小的影响，试验通过四因素、四水平组合正交实验选择抑制指示菌生长的浓度组合。
表8 正交试验考察的因素及水平
| 水平 | 因素 | |||
| 水杨酸浓度 | 薄荷醇浓度 | 抗血清浓度 | 没食子酸浓度 | |
| 1 | 10X | 4X | 20X | 1X |
| 2 | 20X | 8X | 40X | 2X |
| 3 | 40X | 20X | 60X | 4X |
| 4 | 80X | 40X | 80X | 8X |
以上母液的浓度为：血清效价640，水扬酸0.138g/ml，薄荷醇0.01g/ml，没食子酸0.047g/ml。”X”为稀释倍数。
2、正交试验方法与结果
以血清20-80X，薄荷醇4-40X，水扬酸10-80X，没食子酸1-8X，为区间，每个物质分别选用四个以上浓度进行组合进行正交实验。
按照上列的组合逐个依次配制，分别吸取每种物质1ml混合于大试管中，充分混匀，移取混合液1ml到eppendorf管中，以测定各组合、各浓度的抑菌效果。
培养基灭菌，倒平板，冷却，每皿涂乳布指示菌液50ul，依次从eppendorf管中吸取已配制好的混合液200ul放置到牛津杯中，每处理三个重复，37℃培养18h后，观察不同因素水平组合的抑菌效果(见表9)。
表9.1. 一种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 10X | 17.21 | 9 | 60X | 10X | 18.87 |
| 2 | 20X | 20X | 15.24 | 10 | 60X | 20X | 15.77 |
| 3 | 20X | 40X | 10.71 | 11 | 60X | 40X | 10.34 |
| 4 | 20X | 80X | 9.99 | 12 | 60X | 80X | 10.66 |
| 5 | 40X | 10X | 19.12 | 13 | 80X | 10X | 19.79 |
| 6 | 40X | 20X | 15.55 | 14 | 80X | 20X | 12.96 |
| 7 | 40X | 40X | 10.47 | 15 | 80X | 40X | 11.10 |
| 8 | 40X | 80X | 10.03 | 16 | 80X | 80X | 9.98 |
| 总平均值 | 12.98 |
表9.2. 一种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 2X | 21.34 | 7 | 60X | 2X | 22.69 |
| 2 | 20X | 4X | 18.19 | 8 | 60X | 4X | 14.10 |
| 3 | 20X | 8X | 12.10 | 9 | 60X | 8X | 13.04 |
| 4 | 40X | 2X | 20.46 | 10 | 80X | 2X | 23.43 |
| 5 | 40X | 4X | 16.33 | 11 | 80X | 4X | 17.44 |
| 6 | 40X | 8X | 11.87 | 12 | 80X | 8X | 11.67 |
| 总平均值 | 16.88 |
表9.3. 一种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 薄荷醇 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 薄荷醇 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 4X | 10.28 | 6 | 40X | 40X | 10.17 |
| 2 | 20X | 8X | 12.49 | 7 | 80X | 4X | 10.35 |
| 3 | 20X | 40X | 9.95 | 8 | 80X | 8X | 12.51 |
| 4 | 40X | 4X | 11.13 | 9 | 80X | 40X | 9.96 |
| 5 | 40X | 8X | 13.27 | ||||
| 总平均值 | 11.12 |
表9.4. 二种增效剂与抗血清交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 薄荷醇 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 薄荷醇 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 10X | 4X | 17.70 | 33 | 60X | 10X | 4X | 18.45 |
| 2 | 20X | 10X | 8X | 17.38 | 34 | 60X | 10X | 8X | 17.69 |
| 3 | 20X | 10X | 20X | 19.96 | 35 | 60X | 10X | 20X | 17.51 |
| 4 | 20X | 10X | 40X | 19.30 | 36 | 60X | 10X | 40X | 15.33 |
| 5 | 20X | 20X | 4X | 15.26 | 37 | 60X | 20X | 4X | 12.43 |
| 6 | 20X | 20X | 8X | 12.05 | 38 | 60X | 20X | 8X | 12.21 |
| 7 | 20X | 20X | 20X | 12.89 | 39 | 60X | 20X | 20X | 11.38 |
| 8 | 20X | 20X | 40X | 12.61 | 40 | 60X | 20X | 40X | 12.00 |
| 9 | 20X | 40X | 4X | 10.12 | 41 | 60X | 40X | 4X | 11.44 |
| 10 | 20X | 40X | 8X | 10.27 | 42 | 60X | 40X | 8X | 10.91 |
| 11 | 20X | 40X | 20X | 10.15 | 43 | 60X | 40X | 20X | 11.77 |
| 12 | 20X | 40X | 40X | 9.87 | 44 | 60X | 40X | 40X | 9.99 |
| 13 | 20X | 80X | 4X | 9.67 | 45 | 60X | 80X | 4X | 9.79 |
| 14 | 20X | 80X | 8X | 10.11 | 46 | 60X | 80X | 8X | 9.66 |
| 15 | 20X | 80X | 20X | 9.38 | 47 | 60X | 80X | 20X | 9.83 |
| 16 | 20X | 80X | 40X | 9.61 | 48 | 60X | 80X | 40X | 9.35 |
| 17 | 40X | 10X | 4X | 19.92 | 49 | 80X | 10X | 4X | 19.87 |
| 18 | 40X | 10X | 8X | 18.99 | 50 | 80X | 10X | 8X | 20.01 |
| 19 | 40X | 10X | 20X | 17.68 | 51 | 80X | 10X | 20X | 17.77 |
| 20 | 40X | 10X | 40X | 13.32 | 52 | 80X | 10X | 40X | 16.67 |
| 21 | 40X | 20X | 4X | 14.45 | 53 | 80X | 20X | 4X | 12.70 |
| 22 | 40X | 20X | 8X | 11.06 | 54 | 80X | 20X | 8X | 13.13 |
| 23 | 40X | 20X | 20X | 10.81 | 55 | 80X | 20X | 20X | 13.44 |
| 24 | 40X | 20X | 40X | 10.09 | 56 | 80X | 20X | 40X | 12.10 |
| 25 | 40X | 40X | 4X | 10.11 | 57 | 80X | 40X | 4X | 11.01 |
| 26 | 40X | 40X | 8X | 10.30 | 58 | 80X | 40X | 8X | 10.20 |
| 27 | 40X | 40X | 20X | 10.22 | 59 | 80X | 40X | 20X | 9.45 |
| 28 | 40X | 40X | 40X | 9.60 | 60 | 80X | 40X | 40X | 10.19 |
| 29 | 40X | 80X | 4X | 9.39 | 61 | 80X | 80X | 4X | 10.00 |
| 30 | 40X | 80X | 8X | 9.98 | 62 | 80X | 80X | 8X | 9.98 |
| 31 | 40X | 80X | 20X | 9.45 | 63 | 80X | 80X | 20X | 9.74 |
| 32 | 40X | 80X | 40X | 9.46 | 64 | 80X | 80X | 40X | 9.65 |
| 总平均值 | 12.29 |
表9.5. 二种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 薄荷醇 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 薄何醇 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 4X | 2X | 14.76 | 10 | 40X | 8X | 4X | 16.91 |
| 2 | 20X | 4X | 4X | 12.81 | 11 | 40X | 10X | 2X | 13.28 |
| 3 | 20X | 8X | 2X | 15.49 | 12 | 40X | 10X | 4X | 13.26 |
| 4 | 20X | 8X | 4X | 14.21 | 13 | 80X | 4X | 2X | 16.17 |
| 5 | 20X | 10X | 2X | 15.38 | 14 | 80X | 4X | 4X | 10.11 |
| 6 | 20X | 10X | 4X | 12.25 | 15 | 80X | 8X | 2X | 19.89 |
| 7 | 40X | 4X | 2X | 13.99 | 16 | 80X | 8X | 4X | 11.90 |
| 8 | 40X | 4X | 4X | 11.02 | 17 | 80X | 10X | 2X | 13.56 |
| 9 | 40X | 8X | 2X | 18.74 | 18 | 80X | 10X | 4X | 10.99 |
| 总平均值 | 13.63 |
表9.6. 二种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 没食子酸 | 水扬酸 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 没食子酸 | 水扬酸 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 2X | 10X | 17.20 | 4 | 40X | 2X | 10X | 18.88 |
| 2 | 20X | 4X | 10X | 15.94 | 5 | 80X | 4X | 10X | 14.32 |
| 3 | 40X | 2X | 10X | 16.31 | 6 | 80X | 2X | 10X | 11.67 |
| 总平均值 | 15.72 |
表9.7. 三种增效剂与抗血清正交试验结果(三重复平均值)
| 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 薄荷醇 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) | 编号 | 抗血清 | 水扬酸 | 薄荷醇 | 没食子酸 | 抑菌圈(mm) |
| 1 | 20X | 10X | 8X | 2X | 21.04 | 17 | 60X | 10X | 8X | 2X | 19.97 |
| 2 | 20X | 10X | 8X | 4X | 16.79 | 18 | 60X | 10X | 8X | 4X | 17.03 |
| 3 | 20X | 10X | 20X | 2X | 15.55 | 19 | 60X | 10X | 20X | 2X | 22.33 |
| 4 | 20X | 10X | 20X | 4X | 14.91 | 20 | 60X | 10X | 20X | 4X | 16.19 |
| 5 | 20X | 40X | 8X | 2X | 14.61 | 21 | 60X | 40X | 8X | 2X | 14.66 |
| 6 | 20X | 40X | 8X | 4X | 13.14 | 22 | 60X | 40X | 8X | 4X | 14.65 |
| 7 | 20X | 40X | 20X | 2X | 14.99 | 23 | 60X | 40X | 20X | 2X | 15.21 |
| 8 | 20X | 40X | 20X | 4X | 12.05 | 24 | 60X | 40X | 20X | 4X | 13.30 |
| 9 | 40X | 10X | 8X | 2X | 22.55 | 25 | 80X | 10X | 8X | 2X | 23.54 |
| 10 | 40X | 10X | 8X | 4X | 17.87 | 26 | 80X | 10X | 8X | 4X | 22.93 |
| 11 | 40X | 10X | 20X | 2X | 17.99 | 27 | 80X | 10X | 20X | 2X | 16.70 |
| 12 | 40X | 10X | 20X | 4X | 14.06 | 28 | 80X | 10X | 20X | 4X | 14.05 |
| 13 | 40X | 40X | 8X | 2X | 13.00 | 29 | 80X | 40X | 8X | 2X | 15.36 |
| 14 | 40X | 40X | 8X | 4X | 12.10 | 30 | 80X | 40X | 8X | 4X | 12.03 |
| 15 | 40X | 40X | 20X | 2X | 12.44 | 31 | 80X | 40X | 20X | 2X | 12.53 |
| 16 | 40X | 40X | 20X | 4X | 10.78 | 32 | 80X | 40X | 20X | 4X | 11.10 |
| 总平均值 | 15.79 |
以上”X”为每种物质的母液稀释倍数。
3、增效结果分析
从表9.1～9.7可看出：
3.1使用一种增效剂的抗血清其抑菌圈最高最低值的平均值分别比单一抗血清的最高值11.76高3.12和5.79[见表9.1、9.2、9.3，血清加入水扬酸：(9.98+19.79)/2＝14.88；血清加入没食子酸：(11.67+23.43)/2＝17.55]；总平均值(血清加入水扬酸：12.98，血清加入没食子酸：16.88，血清加入薄荷醇：11.12)以及抗血清加入薄荷醇的最高最低平均值：(9.95+12.51)/2＝11.23均高于抗血清的20X，40X，80X三种浓度的平均值9.74(见表6)；使用一种增效剂的抗血清的最低值9.95高于单独使用抗血清的最低值9.34。
3.2、使用二种增效剂的抗血清其抑菌圈最高最低值的平均值比单独使用抗血清的抑菌圈最大值：11.76分别高2.30，3.24，3.51[见表9.4、9.5、9.6血清加入薄荷醇和水扬酸：(8.11+20.01)/2＝14.06，血清加入没食子酸和薄荷醇：(10.11+19.89)/2＝15.00，血清加入没食子酸和水扬酸：(11.67+18.88)/2＝15.27]；总平均值比单独使用血清的最高值11.76分别高0.53，1.87，3.96(血清加入水扬酸和薄荷醇：12.29，血清加入没食子酸和薄荷醇：13.63，血清加入没食子酸和水扬酸：15.72)。
3.3、使用三种增效剂的抗血清其抑菌圈最高最低值的平均值比单独使用血清的抑菌圈最大值11.76高5.40[见表9.7血清加水扬酸加没食子酸加薄荷醇：(10.78+23.54)/2＝17.16]：总平均值比单独使用抗血清的最高值11.76高4.03(血清加水扬酸加没食子酸加薄荷醇：15.79)；四种物质的最低值10.78高于单独使用抗血清的最低值9.34。
上述结果说明一种或一种以上的增效剂加入抗血清中的增效作用明显。当抗体效价提高，抗血清的稀释范围扩大。
四川大学华西口腔医学院口腔医学工程教育重点实验室对抗体抗龋制剂进行抗菌活性检测，检测采用NCCLs推荐的厌氧菌药物敏感试验肉湯稀释法，测定抗体抗龋制剂对口腔最常见和最主要的致龋菌：变形链球菌和粘性放线菌，以及重要牙周病原菌：牙龈卟啉单细胞菌的抗菌活性，结果显示检品对三种实验菌株均有明显的抗菌活性。
表10 检品对三株实验菌的MIC和MBC(g/L)
| 牙龈卟啉单胞菌 | 变形链球菌 | 粘性放射线菌 | |
| MIC | 1.56 | 3.12 | 3.12 |
| MBC | 3.12 | 3.12 | 3.12 |
以上结果表明，抗体抗龋制剂具有非常明显的抑制牙菌斑中的变链菌的生长，还能明显抑制一些重要牙周病原菌的活性，不仅具有很好的防龋作用，而且可以防止其它口腔疾病。
根据湖南省疾病控制中心对“抗体抗龋制剂”产品进行急毒性试验结果表明，对昆明种雌雄小鼠的急性经口LD50大于20000mg/Kg·bw，属实际无毒物；24小时、48小时、72小时对白色家兔的急性眼刺激性反应结果为角膜、红膜、结膜充血和结膜水肿积分均值均为0，属无刺激性。
因此抗体抗龋制剂可用于生产防治龋齿的口腔药物，儿童防龋的口腔疫苗，还可用于口腔保健产品以及添加至人们日常用品如牙膏、嗽口液、口香糖等中用于防龋及防口腔疾病。
具体实施方式：
用4X没食子酸加入到80X血清中，用蒸馏水稀释600-800倍后加入牙膏中制成牙膏，或制成漱口液等可以有效地防止龋病及牙周炎。
用10X水扬酸及20X薄荷醇混合制成增效剂加入到80X血清中，用蒸馏水稀释500倍后可制成专用的抗龋喷剂保健用品，可专门用于儿童抗龋牙保健。
用2X没食子酸、10X水扬酸与8X薄荷醇混合制成增效剂加入到80X血清中，用蒸馏水稀释200倍可制成防龋口腔药品喷剂。制成的药品喷于口腔患处不仅能有效地防止龋病，而且还对牙周炎有较好的治疗作用。
Claims (2)
1、一种抗体抗龋制剂，其特征在于抗龋制剂由用口腔致龋的几种变形链球菌菌株混合培养后经家兔免疫制备的抗血清与水杨酸、薄荷醇、没食子酸中的一种或一种以上的增效剂组成。
2、按权利要求1所述的抗体抗龋制剂，其特征在于抗龋制剂的四种组分组合时以抗体效价640、水杨酸0.138g/ml、薄荷醇0.01g/ml、没食子酸0.047g/ml浓度的溶液为母液，经稀释后混合，各组分混合的浓度稀释范围为：
抗血清 稀释20～80倍
水杨酸 稀释10～80倍
薄荷醇 稀释4～40倍
没食子酸 稀释1～8倍。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB200410047128XA CN1309420C (zh) | 2004-12-31 | 2004-12-31 | 抗体抗龋制剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB200410047128XA CN1309420C (zh) | 2004-12-31 | 2004-12-31 | 抗体抗龋制剂 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1660422A CN1660422A (zh) | 2005-08-31 |
| CN1309420C true CN1309420C (zh) | 2007-04-11 |
Family
ID=35010159
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB200410047128XA Expired - Fee Related CN1309420C (zh) | 2004-12-31 | 2004-12-31 | 抗体抗龋制剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1309420C (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX337177B (es) * | 2008-02-08 | 2016-02-16 | Colgate Palmolive Co | Sales de arginina y sus usos para el tratamiento de enfermedades en la cavidad oral. |
| CN103830599B (zh) * | 2014-02-11 | 2016-03-23 | 刘禾青 | 一种防蛀牙口含片及其制备方法 |
| CN107028829B (zh) * | 2017-04-25 | 2020-07-21 | 攀枝花学院 | 复方芒果叶提取物抗炎保健牙膏及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1557491A (zh) * | 2004-01-15 | 2004-12-29 | 高春平 | 抑制龋齿病原菌特异性抗体制剂 |
-
2004
- 2004-12-31 CN CNB200410047128XA patent/CN1309420C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1557491A (zh) * | 2004-01-15 | 2004-12-29 | 高春平 | 抑制龋齿病原菌特异性抗体制剂 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 抗龋齿蛋黄抗体的制备及功能性研究 杨严俊 等，食品科学，第24卷第7期 2003 * |
| 特异性抗变形链球菌鸡蛋黄抗体IgY对定菌鼠龋齿发生的影响 樊明文 等，华西口腔医学杂志，第21卷第5期 2003 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1660422A (zh) | 2005-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4026722B2 (ja) | 植物発酵エキス、植物発酵エキス末及び該植物発酵エキス配合物 | |
| Boyko et al. | Changes in the viability of the eggs of Ascaris suum under the influence of flavourings and source materials approved for use in and on foods | |
| CN100589807C (zh) | 一种复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液的配方及制作工艺 | |
| CN1883275A (zh) | 一种植物抗生素及其应用 | |
| CN1309420C (zh) | 抗体抗龋制剂 | |
| FI66122C (fi) | Saett att framstaella ett vaccin vilket aer anvaendbart foerprofylax och behandling av trikofytos hos paelsdjur och kan ner foerorsakad av en patogen organism trichophyton mentagr phytes | |
| CN105473704B (zh) | 来自假交替单胞菌属的分离细菌的应用、环脂肽及其应用 | |
| CN106821935A (zh) | 从鲎试剂废料中提取抑菌组合物制备化妆品的方法 | |
| CN102234622A (zh) | 改善口腔内细菌群的发酵乳酸杆菌sg-a95及其保健组合物 | |
| CN104997701A (zh) | 含白芨醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品 | |
| Williams et al. | Studies on the effects of the honey of two floral types (Ziziphus spp. and Acelia spp.) on organism associated with burn wound infections | |
| CN115192642B (zh) | 一种具有杀寄生虫功能的包含侧孢短芽孢杆菌和发酵中药的复合生物制剂的制备方法和应用 | |
| CN109350570A (zh) | 一种基于天然植物成分的化妆品防腐剂及其应用 | |
| CN1857268A (zh) | 一种米诺地尔溶液及其搽片的制备方法 | |
| CN107929170A (zh) | 一种宠物用桉油香波及其制备方法和应用 | |
| CN101732732A (zh) | 牛型结核菌素标准物质及其制备方法 | |
| KR20110058928A (ko) | 식용 또는 약용버섯균을 배양한 수세미 | |
| CN107986456A (zh) | 一种应用于水体蓝藻的预防和抑制方法 | |
| CN105560374A (zh) | 一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法 | |
| CN1144597C (zh) | 转基因抗菌肽蝇蛆中制备兽用基因抗菌肽药品的方法及其应用 | |
| CN1282460C (zh) | 一种治疗感冒的中药及其制备工艺 | |
| CN111956672A (zh) | 蛹虫草抑菌活性物质提取及应用 | |
| CN104542507B (zh) | 一种高蛋白血症的家蚕模型的制备方法与应用 | |
| CN1364866A (zh) | 溶葡萄球菌复合酶洗液及制备方法 | |
| CN101006856A (zh) | 灵芝孢子粉及灵芝子实体的灭菌方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20070411 Termination date: 20100201 |