CN1387765A - 含有大黄提取物的杀菌剂及其组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大黄提取物及其组合物,属于农药领域。本发明是从一种植物大黄(拉丁文名称为:Rheumpalmatum)中提取大黄素、大黄酚、芦荟大黄素及其二种、三种混合物以及将它们制成各种农药剂型用于作物杀菌。实验证明,本发明的生物农药防治效果与化学农药相当。

Description

含有大黄提取物的杀菌剂及其组合物

技术领域

本发明涉及一种大黄提取物及其组合物，本发明属于农药领域。

技术背景

随着人类社会的发展，人们对环境保护及食品安全的要求越来越高，“绿色农业”、“有机农业”已成为农业发展的方向。而伴随着人类活动的加剧，环境恶化日趋严重，病虫害危害更为频繁。能够有效地控制植物病原菌生长并能把农药残留降低至最低，并为人们提供无公害农产品一直是农药领域的研究人员所追求的，利用中草药为原料制造植物杀菌杀虫剂成为实现上述目的有效途径之一。中国专利申请00129782公开了一种以黄连、鱼腥草、薄荷、大黄、车前草为原料制成植物农药的方法。中国专利申请01127595公开了一种从大黄提取液分离出大黄总游离蒽醌类化合物的方法，它有如下步骤：1.将大黄提取液加酸后加热水解，优选的酸是盐酸，2.将水解液加碱调节pH至8-10，3.将碱化后的水解液过阴离子交换树脂分离柱，弃去流出液，用水洗至中性，4.用氢氧化钾一醇溶液洗脱，收集洗脱液，5.在洗脱液中加水或不加水后蒸去醇，然后加酸沉淀出大黄总游离蒽醌，主要为大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。但这些技术均因研究不深入或者可操作性不强而无法实施。本发明通过大量试验，从中药大黄中提取一系列的化合物，经过大量的药效试验表明，它对植物的很多的病原具有很好的防治作用，并且与环境相容，具有残留低、防效高、杀菌谱广等特点。

发明内容

本发明是从一种植物大黄(拉丁文名称为：Rheum palmatum)中提取大黄素、大黄酚、芦荟大黄素及其二种、三种混合物(以下简称大黄提取物)以及将它们制成各种农药剂型用于作物杀菌。

一种含有大黄提取物的杀菌剂，其特征在于该杀菌剂含有大黄酚和/或大黄素和/或芦荟大黄素。

本发明的大黄提取物大黄素、大黄酚、芦荟大黄素及其二种、三种混合物可以和其他化学杀菌剂混配成组合物，本发明所述的化学杀菌剂可以是烯唑醇、霜脲氰、烯酰吗啉等之中的任一种；进一步说，本发明的组合物含有0.01％---90％的大黄素和/或大黄酚和/或芦荟大黄素等大黄提取物和0.01％---90％的烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉。

利用上述本发明所说的组合物，配以本领域内技术人员公知助剂(包括溶剂、填充物、增效剂等)可以制成本发明的多种剂型，其有效成分含量为：

大黄提取物大黄素和/或大黄酚和/或芦荟大黄素0.01％---90％

烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉                  0.01％---90％

本发明可能加工的剂型是：

A、乳油

B、可湿性粉剂

C、油悬浮剂

D、水悬浮剂

A、乳油是通过将有效成分溶在一种或多种有机溶剂中，用于本发明的溶剂可以是甲醇、乙醇、氯仿、二甲苯、甲苯等之中的一种或多种组合物；用于本发明的乳化剂可以是脂肪醇聚乙二醇硫酸盐、脂肪酰胺N-甲基牛黄酸钠盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠之中的一种或多种物质，通常用量为1---30％；本发明还包含渗透剂T、氮酮、YZ-901，通常用量为0.1---20％。

B、可湿性粉剂是在水中可均匀分散的制剂，本发明的可湿性粉剂除加有白碳黑、轻质碳酸钙、陶土、硅藻土等稀释剂或惰性物质以外，它含有离子型或非离子型表面活性剂(润湿剂、分散剂)，例如：脂肪醇聚乙二醇醚硫酸盐，脂肪酰胺N-甲基牛黄酸钠盐，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，十二烷基苯磺酸钠-钙，木质素磺酸钠-钙，SOPA等之中的一种或多种物质，含量为1-30％；本发明还包含渗透剂T、氮酮、YZ-901通常用量为0.1---20％。

C、油悬浮剂是由原药、表面活性剂加入矿物油或植物油而制成，本发明的表面活性剂包括邻苯二甲酸二甲脂、丁脂、二异丁脂、二月桂醇酯、二环酯、二环乙酯、二环辛酯及脂肪酸、脂肪醇的液体酯类，通常用量1-80％；可做乳化剂的脂肪醇聚乙二醇醚硫酸盐、脂肪酰胺N-甲基牛磺酸钠盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠-钙、木质素磺酸钠-钙、SOPA，通常用量1-30％。

D、水悬浮剂是将大黄的提取物与烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉进行混用，在加入增效剂、助剂后，经过球磨、砂磨制成的制剂，本发明的助剂可以是脂肪醇聚乙二醇醚硫酸盐、脂肪酰胺N-甲基牛磺酸钠盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠-钙，木质素磺酸钠-钙、烷基酚聚氧乙烯醚、三苯乙基苯酚聚氧乙烯之中的一种或多种物质，通常用量1---30％，本发明还含有渗透剂T，通常用量0.1---30％，乙二醇、CMC、黄原胶通常用量0.1---10％。

本发明杀菌剂组合物的优选配比是(重量百分比)：

大黄素和/或大黄酚和/或芦荟大黄素         0.1---60％

烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉                 0.1---90％

助剂为OP---10、0201、0203、农乳500、1600、1601、1602、2201、0208、十二烷基苯黄酸钠-钙，木质素黄酸钠-钙、SOPA中的任意一种或多种组合物，通常用量1---30％。

增效剂为渗透剂T、氮酮、YZ---901中的任意一种或多种组合物，通常用量1---30％。

填充物为CMC、黄原胶、白碳黑、陶土、硅藻土中的的任意一种或多种组合物，通常用量0.1---80％。

按照上述配比称取各组分，经配制加工可制成本发明的可湿性粉剂。

本发明大黄素杀菌剂的最佳配方为：

大黄素                 0.2％

SOPA                   15％

乙醇                   20％

二甲苯                 补足至100％

本发明杀菌剂较已有的技术相比有如下优点：

1、无残留。本发明的产品是无公害农药。

2、杀菌谱广对多种菌具有很好的防治作用。

3、增效作用明显。

附图简要说明：

图1为本发明大黄主要成分提取流程图

图2为本发明大黄提取物对黄瓜白粉病的防效变化曲线

实施方式：本发明大黄提取物防治黄瓜白粉病的研究报告1材料和方法1.1材料1.1.1植物材料  大黄(拉丁文名称为：Rheum palmatum)1.1.2菌种  黄瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)(采自河北省植保所)；番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麦根腐病菌(Cochliobolus sativus)等20种致病菌(河北农大毒素室提供)1.1.3黄瓜品种  长春密刺(承德长城种业公司)1.1.4化学药剂  15％粉锈宁WP(张家港市第二农药厂)；20％腈菌唑WP(浙江一帆农药厂)1.1.5药品及仪器

无水乙醇、乙醚、碳酸钠、碳酸氢钠、盐酸、氯仿、吡啶、异戊醇(均为分析纯)Fs-100小型粉碎机、旋转蒸发器、离心机1.2方法1.2.1大黄粗提物的初筛1.2.1.1大黄粗提物的制备

大黄粉碎→提取(中草药∶80％乙醇＝1∶5(w/v))→振荡(2d，150r·min^-1，25℃)→离心(3500r·min^-1，20min)取上清液→40℃旋转蒸发→用80％乙醇定容(药液毫升数与大黄克数相等)→4℃冰箱保存备用。1.2.1.2黄瓜苗的培育

采用无土栽培方法，参照文献介绍的塑料日光温室春茬早黄瓜栽培技术。1.2.1.3白粉菌菌种的保存

将用于保存菌种的黄瓜苗与测试所用的黄瓜苗隔离，接种，在20℃～24℃的温室中培育备用。1.2.1.4接种

采接种后9天的发病叶片，用毛笔将分生孢子刷于盛有清水的烧杯中，将其配成在10×10倍显微镜下每视野约20个分生孢子的悬浮液。然后将孢子悬浮液均匀的喷在破心期植株的叶片上。1.2.1.5保护和治疗效果测定

在黄瓜破心期喷提取物，设清水、80％乙醇和化学药剂(保护效果测试用粉锈宁1000倍液，治疗效果测试用腈菌唑3000倍液)对照，每个处理10株，置于24℃～26℃下，塑料布覆盖保湿，待清水对照充分发病时调查各处理病情，记录严重度，计算病情指数和防效。保护和治疗效果分别指接种前24h和接种后24h喷药的效果(保护作用测试用50倍液，治疗作用测试用100倍液)。

病情指数(％)＝平均严重度×普遍率×100

防效(％)＝(对照病指-处理病指)/对照病情指数×1001.2.2毒力测定

将粗提物分别稀释600、800、1000、1200、1400、1600、1800倍，然后测试其对黄瓜白粉病的保护作用，计算出Ec50和Ec90。1.2.3持效期测试

在接种前1、2、3、4、5、6d用粗提物100倍液处理10株幼苗，且在接种前1d设清水、80％乙醇、粉锈宁1000倍液等对照处理而后统一接种，待清水对照严重发病时调查各处理严重度并记录结果，计算病情指数和防效。1.2.4抑菌谱的测试

将1mL提取液加入到100mL融化的PDA培养基中，倒皿(d＝9cm)，用d＝0.6cm的打孔器打菌盘接种(设清水、80％乙醇作对照，每处理4次重复)。放入25℃恒温培养箱中培养，待对照菌落长到7cm左右测量菌落直径，并计算抑制率。

抑制率(％)＝(CK净生长量-处理净生长量)/CK净生长量×100

注：净生长量＝菌落直径-菌盘直径1.2.5大黄中主要成分活性测试

将标准品大黄酸、大黄酚分别用吡啶、无水乙醇溶解稀释500x、1000x，然后加水继续稀释1万、5万、10万、20万倍4个浓度，大黄素用10％乙醇稀释500x和1000x，然后设清水、10％、2％、1％、0.5％吡啶和10％、2％、1％、0.5％乙醇对照测其活性。同时用所提取到的大黄素、大黄酸、大黄酚与大黄素甲醚等粗提品1000倍液测试对黄瓜白粉病菌的保护活性。1.2.7与化学药剂配比试验

将粗提物制成0.2％水剂，与烯唑醇按有效成分比3∶1，1∶1，1∶3等3个比例进行混配，然后分别测其和各单剂的Ec50，计算其共毒系数。2结果与分析2.1大黄粗提物对黄瓜白粉病的保护和治疗作用的测试结果与分析2.1.1保护作用测试结果

大黄植物粗提物活性较高，其50倍液防效与化学药剂粉锈宁1000倍液处于同一显著水平。

                  表1  大黄提取物对黄瓜白粉病的保护效果测试结果

         处理    平均严重度/％  普遍率/％  病情指数/％  防效/％  差异显著性

         粉锈宁    2.00           40.00       0.80       98.90       ns

         大黄      23.25          100.00      23.25      73.04       ns

         80％乙醇  86.00          100.00      86.00      0.29        **

         清水      86.25          100.00      86.25      0.00        **

         粉锈宁    4.00           40.00       1.60       98.07       ns

         大黄      30.00          100.00      24.00      71.08       ns

         清水      83.00          100.00      83.00      0.00        **

         80％乙醇  88.00          100.00      88.00      -6.02       **

         注：ns表示处理与粉锈宁之间差异不显著；^*表示处理与粉锈宁之间差异显著

         (置信度为0.05)；^**表示处理与粉锈宁之间差异极显著(置信度为0.01)。

          为不同批次分隔线。2.2大黄毒力测试结果与分析

根据图2大黄提取物对黄瓜白粉病的防效变化趋势曲线得到其相关拟合方程：y＝-1.7706x²-2.6837x+107.51(R²＝0.9882)，根据此方程计算出大黄提取物对黄瓜白粉病的Ec50为1398.30倍，其Ec90为1051.21倍。2.3  大黄的保护作用的持效期测试结果

从表2中可以看出，提前1d～6d喷大黄提取物100倍液，其防效均在90％以上，显著优于粉锈宁1000倍液，由此可以得出，大黄提取物的保护作用的持效期至少可达6d。

             表2  大黄提取物对黄瓜白粉病菌保护作用的持效期

         处理      病情指数    防效/％  5％显著水  1％极显著水

                     /％                平         平

         80％乙醇   89.13       -2.31     a          A

         清水       87.12       0.00      a          A

         粉锈宁     22.16       73.41     b          B

         接种前1d   8.59        92.60     c          C

         接种前6d   6.42        92.60     c          C

         接种前5d   4.17        95.63     c          C

         接种前2d   2.11        97.57     c          C

         接种前4d   1.52        98.27     c          C

         接种前3d   0.30        99.65     c          C2.4大黄提取物抑菌谱的测试结果

从表3中可以看出，大黄提取物100倍液对供试的20种真菌都有一定的抑制作用，其中抑制率达50％以上的有10种，占供试菌的50％，且对小麦根腐病菌(Cochliobolus sativus)和玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)抑制率达到了80％左右。

          表3  大黄提取物对20种致病真菌菌落直径的抑制作用

                          80％乙醇   TS-109                                   80％乙醇      TS-109

      供试真菌                                           供试真菌

                          抑菌率/％  抑菌率/％                                抑菌率/％    抑菌率/％

Cochliobolus sativus        2.58      82.21       Alternaria solani             9.09         49.79

Exserohilum turcicum        -33.40    79.69       Colletotrichum graminicola    5.84         49.04

Gibberella zeae             9.36      66.00       Alternaria porri              5.21         47.13

Rhizoctonia solani          25.79     63.06       Fusarium graminearum          -20.29       43.97

Pythium gramineacola        3.42      60.57       Rizoctonia cerealis           -4.87        42.11

Fusarium moniliforme        8.06      60.28       Leptosphaeria maydis          -4.84        41.09

Botryosphaeria berengeriana -6.46     58.14       Colletotrichum gossypii       4.70         33.37

Curvularia lunata           5.82      56.66       Alternaria kikuchiana         1.34         30.54

Colletotrichum capsici      3.09      51.97       Alternaria mali               -1.15        21.47

Fusarium oxysporum          16.46     51.92       Verticillium dahliae          -3.37        20.452.5大黄提取物有效成分鉴定结果

从表4可以看出，标准品大黄酸对黄瓜白粉菌无活性，大黄素表现出一定活性，而大黄酚表现出高活性，其10000倍液与烯唑醇3000倍液的防效处于同一显著水平。从表5可以看出，粗提品大黄酸对黄瓜白粉病菌无活性，而大黄素、大黄酚与大黄素甲醚表现出较高活性。因此可以得出：大黄酸为防治白粉病的非有效成分，大黄素与大黄酚是其有效成分。

                            表4大黄中主要成分的活性测试结果(标准品)

         处理                      病情指数/％    防效/％    5％显著水平    1％极显著水平

         10％乙醇                   97.8105        -7.78        a               A

         2.0％乙醇                  94.7497        -4.44        a               A

         大黄酸_(5万倍)               94.1514        -3.70        a               A

         大黄酸_(10万倍)              94.1439        -3.70        a               A

         2.0％吡啶                  92.7700        -2.22        a               A

         大黄酸_(20万倍)              91.7715        -1.23        a               A

         0.5％吡啶                  91.7565        -1.11        a               A

         1.0％吡啶                  90.7835        0.00         a               A

         清水                       90.7565        0.00         a               A

         大黄酸_(1万倍)               88.5658        2.47         a               A

         1.0％乙醇                  84.6417        6.67         a               A

         0.5％乙醇                  83.1687        8.33         a               A

         大黄酚_(20万倍)              52.4120        42.22        b               B

         大黄酚_(10万倍)              51.4458        43.33        b               B

         大黄酚_(5万倍)               34.0404        62.56        c               B

         大黄素_(1000倍)              0.5000         94.49        d               C

         大黄素_(500倍)               0.3000         96.69        d               C

         大黄酚_(1万倍)               0.0000         100.00       d               C

         烯唑醇_(3000x)               0.0000         100.00       d               C

               表5大黄提取液中主要成分活性测定结果(粗提品)

         处理                 病情指数/％    防效/％    5％显著水平    1％极显著水平

         80％乙醇               100.00        -8.70         a                A

         清水                   92.00         0.00          a                A

         大黄酸                 90.00         2.17          a                A

         大黄素                 10.80         88.26         b                B

         大黄酚和               0.800         99.13         b                B

         大黄素甲醚2.5大黄提取物与烯唑醇的配比试验结果：

由毒力方程得出：烯唑醇   Ec50＝0.523ppm

                大黄提取物  Ec50＝0.970ppm大黄提取物∶烯唑醇    Ec50ppm    共毒系数

   3∶1             0.986       121.06

    1∶1        0.282        240.98

    1∶3        0.603        138.02由共毒系数可知，大黄提取物与烯唑醇的有效成分按3∶1-1∶3的比例配比具有明显的增效作用，二者可按此比例混配。

用本领域内人员共知的技术，按上述方法可分别得出大黄酚和/或大黄素和/或芦荟大黄素分别与烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉复配的共毒系数，即在大黄酚和/或大黄素和/或芦荟大黄素0.01％---90％，烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉0.1％---90％的范围内复配具有明显的增效作用。

二、配方实施例：

按照本发明所述的各物质的数值范围，称取有效成分、助剂、乳化剂、溶剂的量可配制本发明的乳油，同样的方法可制得本发明的可湿性粉剂、油悬浮剂、水悬浮剂等。

Claims (5)

1、含有大黄提取物的杀菌剂，其特征在于该杀菌剂含有大黄酚和/或大黄素和/或芦荟大黄素。

2、根据权利要求1所述的杀菌剂，其特征在于它可以与烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉配比成组合物。

3、根据权利要求1所述的杀菌剂，其特征在于大黄素杀菌剂的最佳配方为：

大黄素                 0.2％

SOPA                   15％

乙醇                   20％

二甲苯                 补足至100％

4、根据权利要求2所述的组合物，其特征在于该组合物含有：

大黄酚和/或大黄素和/或芦荟大黄素0.01％---90％

烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉        0.1％---90％。

5、根据权利要求2所述的组合物，其特征在于该组合物的优选的重量百分比组成为：

大黄素和/或大黄酚和/或芦荟大黄素             0.1---60％

烯唑醇或霜脲氰或烯酰吗啉                     0.1---90％

助剂为OP---10、0201、0203、农乳500、1600、1601、1602、2201、0208、十二烷基苯黄酸钠-钙，木质素黄酸钠-钙、SOPA中的任意一种或多种组合物，用量1---30％

增效剂为渗透剂T、氮酮、YZ---901中的任意一种或多种组合物，用量1---30％

填充物为CMC、黄原胶、白碳黑、陶土、硅藻土中的的任意一种或多种组合物，用量0.1---80％。

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