CN1236049C - 一种地区和原料来源不同的林木菌根真菌菌剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种地区和原料来源不同的林木菌根真菌菌剂的制备方法，是将基质木屑、麸皮、珍珠岩、草炭等选择搭配后，按重量比混合，以无机盐及部分营养元素的投加，按基质含水量为50-70%配制成营养液用于拌料，待料液拌均匀后，分装封好，加压蒸气灭菌；冷却后将事先经过二级生物发酵生产的菌体，以2-10%的量接种于基质内，恒温培养10-30天。本发明不受原料来源和地区的限制，成本低、适于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及真菌菌剂，具体地说是一种地区和原料来源不同的林木菌根真菌菌剂的制备方法。
背景技术
菌根是自然界真菌与植物共生的一种普遍现象。菌根能促进植物对水分和营养物质的吸收，产生生物活性物质，增强植物的抗逆性，对于某些植物或特定的环境条件下，菌根的存在会成为影响植物生长发育的决定因素。因而菌根作为一种生物技术被广泛应用于农林生产。用纯培养状态下的菌根真菌营养菌丝体，进行人工接种，加速苗木菌根形成，以促进苗木生长，从而提高了苗木质量。研究菌根真菌营养条件及菌剂生产技术实现林木幼苗人工菌根化，这在育种和造林中具有广阔的应用前景，特别是荒山造林中，具有不可替代的作用。因此，引起国内外菌根专家、学者的极大关注，并在引种、育苗、造林及环境保护等方面做了大量工作，已取得显著效果。但在生产上应用菌根技术时，菌剂的制备往往是在实验室内完成，主要采用60-70％基质重量的麸皮作为氮源或以下脚料稻糠作为氮源补充，碳源以杂木屑为主，而菌剂又需携带或托运到实际现场应用，造成菌剂成本昂贵，使这种实用的新技术的推广和应用受到了严重的限制。
发明内容
为了克服上述憋端，本发明的目的是提供一种成本低、不受地区所限、适于推广应用的林木菌根真菌菌剂的制备方法。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：按重量比混合配制各组分，可按如下过程制备：
1)基质搭配混合：基质包括3-4份木屑与1-2份麸皮混合而成；
2)营养液配制：按1立升水内加入磷酸氢二铵0.1-0.5g、葡萄糖2-10g、氯化钙0.01-0.08g、硫酸镁0.01-0.2g、三氯化铁0.001-0.005g、氯化钠0.05-0.3g、维生素B10.01-0.05g与磷酸二氢钾0.5-5g和/或磷酸氢二钾0.32-3.2g配成营养液；
3)灭菌：将上述营养液与基质混拌，使混拌后的基质含水量为50-70％，分装封好，在105-125℃加压下进行蒸汽灭菌1-2小时，冷却备用；
4)菌体制备：取经一级培养后的菌种与培养基，以菌种与培养基的混合比例为2-5∶100混合，用二级生物发酵法制取菌体；
5)菌剂制备：将灭菌后的基质以其2-10％的菌体量进行接种，在23-30℃下恒温培养10-30天。
所述基质中还可加入占基质总重量的10-70％的添充剂，添充剂为草炭、麦桔、稻草、稻壳、玉米杆中一种或几种；所述基质中还可加入占基质总重量10-50％珍珠岩作为载体；所述营养液配制中还可选择添加一种或几种下列物质：酵母膏0.05-0.3g，蛋白胨1.0-3.0g，硫酸亚铁浓度为10-50ppm，硫酸锌浓度为10-50ppm，钼酸钠浓度为10-50ppm；
所述木屑为桦木屑、落叶松木屑、枫木屑、马尾松木屑中一种或几种混合；
所述木屑为针叶木屑时需在混配基质前用蒸汽120摄氏度预蒸30分钟以上或常压预蒸2小时以上，同时进行气体排放。
所述菌种为林木菌根真菌：劣味乳菇、毛边滑锈伞、灰环乳牛肝菌、松塔牛肝、高环柄菇、赭丝膜菌中一种或几种混合。
本发明具有如下优点
1.材料来源广泛，成本低。本发明制备菌剂的材料均为木材加工过程中产生的废弃料——木屑，农作物的下脚料(如麦桔、稻草、稻壳、玉米杆)及建筑材料珍珠岩，沼泽地的草炭，这些材料与现有技术中主要采用60-70％基质重量的麸皮作为氮源或以下脚料稻糠作为氮源补充相比，不需高出资且易得。
2.本发明操作不受地区的限制。由于林木菌根真菌系共生营养特点，又具有腐生的特性，所以树木的木屑自然是它们生长发育首选的载体基质。但由于，地区的差别，原材料的种类并不相同，本发明对制备菌剂的技术进行了调整：将不适宜的针叶木屑材料进行预处理；为降低成本以当地丰富的材料进行选择搭配，通过对与其相适应的各种营养成分的选择配比及剂量进行调整，使这种实用新技术能获得广泛的推广和应用。
3.本发明能够因地制宜、就地取材、因漏就简、就地加工应用，将会进一步增强菌剂于当地的适应性，且能广泛应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
实施例1.采用落叶松木屑作为基质制备的菌剂(主要应用于大\小兴安岭)
其制备过程如下：
(1)基质配比：取落叶松木屑70％蒸气预蒸、常压气体排放2小时，使基质中的芳香族物质挥发，以芳香气味轻重鉴别之，后取麸皮30％与落叶松木屑按重量比混合；
(2)营养液拌基质：在1立升水中添加磷酸氢二铵0.2g、葡萄糖5g、氯化钙0.05g、氯化钠0.05g、磷酸二氢钾3g、蛋白胨1.0g、硫酸镁0.05g、三氯化铁0.004g、硫酸锌浓度为10ppm、钼酸钠浓度为10ppm和维生素B10.05g，使基质含水量达65％；
(3)灭菌：将混合、固液配比适宜的基质，装瓶封好，在110℃略高于一个大气压下进行水蒸汽灭菌2小时，冷却备用；
(4)菌体制作：将一级培养后(斜面培养)菌种与培养基以2∶100比例接种，用生物发酵法生产(摇床振荡培养)，具体取毛边滑锈伞(Hebeloma mesophaeum)、灰环乳牛肝菌(Suillus aeruginascens)和赭丝膜菌(Cortinarius russus)，在1立升水中添加：马铃薯100g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、微生素B10.02g，制成培养基，以体积为100ml分装于500ml的三角瓶内，用摇床振荡恒温培养3天；
(5)菌剂：将制取的菌体以7％的量接种于上述固体基质中，28℃恒温培养15天。
实施例2.采用珍珠岩、草炭作为基质制备的菌剂(主要应用于寒温带及北温带)
(1)基质配比：将桦木屑25％、珍珠岩40％、草炭20％、麸皮15％按重量比混合；
(2)营养液拌基质：以1立升水添加磷酸氢二铵0.3g、葡萄糖10.0g、蛋白胨3.0g、氯化钙0.08g、氯化钠0.2g、磷酸二氢钾2.0g、硫酸镁0.01g、三氯化铁0.005g、和维生素B10.04g，使基质含水量达70％；
(3)灭菌：将混合固液配比适宜的基质装袋封好，在115℃略高于一个大气压下进行蒸汽灭菌1.5小时，冷却备用；
(4)菌体制作：将一级培养后菌种与培养基以5∶100比例混合，用生物发酵法生产(摇床振荡培养)，具体取劣味乳菇(Lactarius insulsus)、毛边滑锈伞(Hebeloma mesophaeum)和赭丝膜菌(Cortinarius russus)；在1立升水中添加：马铃薯300g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、微生素B10.05g，配成培养基，以体积为130ml分装于500ml三角瓶内，摇床振荡恒温培养5天；
(5)菌剂：将制取的菌体以10％的量接种于上述固体基质中，23℃恒温培养30天。
实施例3.采用马尾松木屑作为基质制备的菌剂(主要应用于广西玉林地区)
(1)马尾松木屑预处理；取60％马尾松木屑水蒸汽120摄氏度预蒸30分钟后气体排放，以使基质中的芳香族物质挥发，以芳香气味轻重鉴别之，后取麸皮40％与马尾松木屑按重量比混合；
(2)营养液拌基质：以1立升水中，添加磷酸氢二铵0.1g、葡萄糖4.0g、氯化钙0.03g、氯化钠0.1g、磷酸二氢钾3.0g，酵母膏0.2g，硫酸镁0.1g、三氯化铁0.001g、微生素B10.04，硫酸锌浓度为20ppm、钼酸钠浓度为30ppm，使基质含水量达60％；
(3)灭菌：将混合固液配比适宜的基质装瓶封好，在113℃略高于一个大气压下进行水蒸汽灭菌1.8小时，冷却备用；
(4)菌体制作：将一级培养后菌种与培养基以4∶100比例接种，用生物发酵法生产(摇床振荡培养)，具体取赭丝膜菌(Cortinarius russus)、毛边滑锈伞(Hebeloma mesophaeum)、劣味乳菇(Lactarius insulsus)和高环柄菇(Lepiota procera)；在1立升水中添加培养基：马铃薯200g、葡萄糖15g、麦芽汁4波美度、磷酸二氢钾4g、硫酸镁2.5g、微生素B10.04g，制成培养基，以体积为120ml分装于500ml三角瓶内，摇床振荡恒温培养7天；
(5)菌剂：将制取的菌体以5％的量接种于上述固体基质中，恒温27℃培养20天。
实施例4.采用农副产品下脚料作为基质制备的菌剂(主要应用于非林区)
(1)基质配比：取枫木木屑30％、稻壳45％、稻草15％、麸皮10％按重量比混合；
(2)营养液拌基质：以1立升水中添加磷酸氢二铵0.4g、葡萄糖8g、氯化钙0.01g、氯化钠0.3g、蛋白胨2.0g、酵母膏0.3g、磷酸二氢钾1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g，硫酸亚铁浓度为50ppm、三氯化铁0.002g和维生素B10.02g，使基质含水量达50％；
(3)灭菌：将混合固液配比适宜的基质装袋或瓶封好，在121℃1.5个大气压下进行水蒸汽灭菌1.0小时，冷却备用；
(4)菌体制作：将一级培养后的菌种与培养基以3∶100比例接种，用生物发酵法生产(摇床振荡培养)。具体取毛边滑锈伞(Hebelomamesophaeum)、劣味乳菇(Lactarius insulsus)和松塔牛肝(Boletusfloccopus)；在1立升水中添加：马铃薯100g、葡萄糖18g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁2g、微生素B10.03g，制成培养基，以体积为140ml分装于500ml三角瓶内，摇床振荡培养5天；
(5)菌剂：将制取的菌体以4％的量接种于上述固体基质中，25℃培养25天。
利用本发明的菌剂，应用于大兴安岭火烧迹地森林资源恢复与更新中，培育出的菌根化苗木在火烧迹地上造林，当年成活率达到95％以上；当年高生长，兴安落叶松比对照提高80％、樟子松比对照提高128％。利用本发明的菌剂，使广西玉林地区国营六万林场的马尾松育苗由原来的一年一换茬廷长为2-3年换一次茬，为林场节约开支400-500元/亩。
Claims (7)
1.一种地区和原料来源不同的林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于按重量比混合配制各组分，按如下过程制备：
1)基质搭配混合：基质包括3-4份木屑与1-2份麸皮混合而成；
2)营养液配制：按1立升水内加入磷酸氢二铵0.1-0.5g、葡萄糖2-10g、氯化钙0.01-0.08g、硫酸镁0.01-0.2g、三氯化铁0.001-0.005g、氯化钠0.05-0.3g、维生素B10.01-0.05g与磷酸二氢钾0.5-5g和/或磷酸氢二钾0.32-3.2g配成营养液；
3)灭菌：将上述营养液与基质混拌，使混拌后的基质含水量为50-70％，分装封好，在105-125℃下进行蒸汽灭菌1-2小时，冷却备用；
4)菌体制备：取经一级培养后的菌种与培养基，以菌种与培养基的混合比例为2-5∶100混合，用二级生物发酵法制取菌体；
5)菌剂制备：将灭菌后的基质以其2-10％的菌体量进行接种，在23-30℃下恒温培养10-30天。
2.按照权利要求1所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述基质中还可加入占基质总重量的10-70％的添充剂，添充剂为草炭、麦桔、稻草、稻壳、玉米杆中一种或几种。
3.按照权利要求1所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述基质中还可加入占基质总重量10-50％珍珠岩作为载体。
4.按照权利要求1所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述营养液配制中还可选择添加一种或几种下列物质：酵母膏0.05-0.3g，蛋白胨1.0-3.0g，硫酸亚铁浓度为10-50ppm，硫酸锌浓度为10-50ppm，钼酸钠浓度为10-50ppm。
5.按照权利要求1所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述木屑为桦木屑、落叶松木屑、枫木屑、马尾松木屑中一种或几种混合。
6.按照权利要求1或5所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述木屑为针叶木屑时需在混配基质前用蒸汽120摄氏度预蒸30分钟或常压预蒸2小时，同时进行气体排放。
7.按照权利要求1所述林木菌根真菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述菌种为林木菌根真菌：劣味乳菇、毛边滑锈伞、灰环乳牛肝菌、松塔牛肝、高环柄菇、赭丝膜菌中一种或几种混合。
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