CN121337904A - 一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法，涉及中药技术领域，包括以下重量百分比的提取物组成：泽泻提取物 40%‑60%，白术提取物 20%‑40%，鹿衔草提取物 20%‑40%；其中，泽泻提取物中泽泻总三萜的含量不低于50wt%；白术提取物中白术总内酯的含量不低于20wt%；该一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法，通过将传统泽泻饮（泽泻、白术）与鹿衔草科学配伍，并限定各提取物在组合物中的重量百分比范围（泽泻提取物40%‑60%，白术提取物20%‑40%，鹿衔草提取物20%‑40%），在保留经典方健脾利湿基础功效的同时，引入鹿衔草以增强活血通络、清化浊脂的作用，从而实现了针对现代高脂血症多兼夹“瘀”与“热”复杂病机的协同调理，提升了降脂减肥的综合疗效。

Description

一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法。

背景技术

近年来，随着高脂血症患病率的上升及对其病理机制研究的深入，中药在降脂治疗中的多靶点、整体调节优势逐渐受到关注。传统中医方剂“泽泻饮”以泽泻、白术为核心，通过健脾利湿发挥降脂作用，已被临床应用验证具有一定疗效，然而，现代药理学研究揭示，高脂血症常伴随“瘀血阻络”“痰浊内生”等复杂病理状态，需药物兼具活血通络、清化浊脂功能以实现协同增效，但传统泽泻饮的组方配伍缺乏对活血类药材（如鹿衔草）的定量科学依据，其活性成分（如鹿衔草总黄酮苷）的含量波动导致组合物在改善“瘀”“热”病机方面的药效不稳定，难以满足现代临床对降脂药物综合疗效的需求。

然而，传统泽泻饮未对鹿衔草的活性成分（鹿衔草总黄酮苷）进行定量控制，导致组合物在活血通络、清化浊脂作用上的批次间差异显著，无法稳定实现针对高脂血症兼夹“瘀”“热”病机的协同降脂效果，这一缺陷直接限制了传统方剂向现代化中药的转化应用，也凸显了开发基于有效部位群定量配伍的降脂组合物的技术必要性，因此需要对其改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法，以解决现有技术中传统泽泻饮因未定量控制鹿衔草活性成分（鹿衔草总黄酮苷）导致组合物活血通络、清化浊脂作用不稳定，无法协同调理高脂血症兼夹“瘀”“热”复杂病机的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物，包括以下重量百分比的提取物组成：

泽泻提取物 40%-60%，白术提取物 20%-40%，鹿衔草提取物 20%-40%；

其中，所述泽泻提取物中泽泻总三萜的含量不低于50wt%；所述白术提取物中白术总内酯的含量不低于20wt%；所述鹿衔草提取物中鹿衔草总黄酮苷的含量不低于30wt%。

进一步地，所述活性成分由如下重量百分比的提取物组成：泽泻提取物50%，白术提取物30%，鹿衔草提取物20%。

进一步地，所述泽泻提取物中，以23-乙酰泽泻醇B计的含量不低于泽泻提取物总重的10wt%；所述白术提取物中，以白术内酯Ⅲ计的含量不低于白术提取物总重的2wt%；所述鹿衔草提取物中，以高熊果苷计的含量不低于鹿衔草提取物总重的5wt%。

一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物的制备方法，包括以下步骤：

S1、分别提取：分别取泽泻、白术、鹿衔草药材，用60%-80%乙醇水溶液加热回流提取，各自滤过得提取液；

S2、分别精制：将各提取液分别减压浓缩后，用乙酸乙酯进行萃取，分别得到各药材的乙酸乙酯萃取部位；

S3、分别纯化：将各所述乙酸乙酯萃取部位分别上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用65%-75%乙醇水溶液洗脱，分别收集各药材的乙醇洗脱部位，浓缩干燥，分别得到符合含量要求的泽泻提取物、白术提取物和鹿衔草提取物；

S4、混合：将步骤S3得到的泽泻提取物、白术提取物和鹿衔草提取物按比例混合，得到所述活性成分。

进一步地，在步骤S3中，所述大孔吸附树脂为AB-8型、D-101型或HPD-100型。

进一步地，在步骤S3中，采用70%乙醇水溶液进行等度洗脱。

与现有技术相比，本发明提供的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法，通过将传统泽泻饮（泽泻、白术）与鹿衔草科学配伍，并限定各提取物在组合物中的重量百分比范围（泽泻提取物40%-60%，白术提取物20%-40%，鹿衔草提取物20%-40%），在保留经典方健脾利湿基础功效的同时，引入鹿衔草以增强活血通络、清化浊脂的作用，从而实现了针对现代高脂血症多兼夹“瘀”与“热”复杂病机的协同调理，提升了降脂减肥的综合疗效。

通过分别对泽泻提取物、白术提取物、鹿衔草提取物设定明确的有效部位含量标准（泽泻总三萜≥50wt%、白术总内酯≥20wt%、鹿衔草总黄酮苷≥30wt%）及关键指标成分含量下限（如23-乙酰泽泻醇B≥10wt%、白术内酯Ⅲ≥2wt%、高熊果苷≥5wt%），从而将传统经验方剂提升为组分相对明确、质量可控的现代中药组合物，保证了产品批次间的稳定性和功效的一致性，为标准化生产与质量评价提供了可靠依据。

通过采用分别提取－分别纯化－最后混合的制备工艺，并优化关键步骤参数（如60%-80%乙醇提取、乙酸乙酯萃取、65%-75%乙醇大孔树脂洗脱等），实现了从各药材中高效、特异性地富集目标有效部位群（泽泻总三萜、白术总内酯、鹿衔草总黄酮苷），从而最大限度地保留了活性成分，去除了大量无效杂质，显著提高了产品的纯度和生物利用度，为发挥更佳的药理作用奠定了物质基础。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的制备流程图。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合附图对本发明作进一步的详细介绍。

如附图1所示：

实施例一：

本发明提供一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物及制备方法， 原料与试剂：

原料：泽泻饮片，经鉴定为Alisma orientale (Sam.) Juzep.的干燥块茎。

试剂：乙醇（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；石油醚（60-90℃，分析纯）；蒸馏水；AB-8型大孔吸附树脂。

对照品：23-乙酰泽泻醇B对照品（纯度≥98%）。

仪器与设备：RE-52AA旋转蒸发仪、SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵、HX-105恒温水浴锅、LC-20AT高效液相色谱仪，配备SPD-M20A二极管阵列检测器、UV-1800紫外可见分光光度计、BS224S电子分析天平、5cmx80cm玻璃层析柱和G4垂熔玻璃漏斗。

制备方法：

S1、醇提：称取干燥泽泻饮片1.0kg，粉碎过20目筛。置10L圆底烧瓶中，加入8L体积浓度为70%的乙醇水溶液（v/v）。连接回流冷凝装置，于85℃水浴中加热回流提取2小时。滤过，收集滤液。药渣再次加入6L70%乙醇，同法回流提取1.5小时。滤过，合并两次滤液。

S2、初步浓缩与萃取：将合并的乙醇提取液置于旋转蒸发仪中，在60℃水浴、-0.08MPa真空度下减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液体积约1.5L，呈稠浸膏状，无醇味。将此浸膏转移至5L分液漏斗中，加入2L蒸馏水，充分振荡分散。

向分散后的水溶液中，加入等体积石油醚1.5L，充分振荡萃取5分钟，静置分层。小心分离并弃去上层石油醚层（主要去除脂溶性色素和弱极性杂质）。重复石油醚萃取一次。

随后，向水层中加入等体积乙酸乙酯1.5L，充分振荡萃取10分钟，静置分层。收集下层水相，保留上层乙酸乙酯层。再用水层重复乙酸乙酯萃取两次（每次1.5L）。合并所有乙酸乙酯萃取液。

S3、大孔吸附树脂纯化：将合并的乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得到浅黄色乙酸乙酯萃取物粗品（约85g）。

取AB-8型大孔吸附树脂1.0kg，用95%乙醇浸泡24小时后，湿法装填于层析柱（5cmx80cm）中。依次用95%乙醇、蒸馏水以2BV/h（床体积/小时）的流速冲洗至流出液无醇味且澄清。

将上述粗品用少量甲醇溶解，拌入等量已处理的湿树脂中，阴干后上样至树脂柱顶部。

上样后，先用5倍柱体积（BV）的蒸馏水以3BV/h的流速洗脱，弃去水洗液，直至洗脱液无色。

随后，改用5BV的体积浓度为70%的乙醇水溶液，以2BV/h的流速进行等度洗脱。用自动部分收集器收集此70%乙醇洗脱流分（每份200mL）。

采用薄层色谱（TLC）监测：以硅胶GF254板，展开剂为石油醚-乙酸乙酯-甲酸（7:3:0.1，v/v/v），在254nm紫外灯下观察。合并含有23-乙酰泽泻醇B特征斑点（Rf值约0.5）的洗脱流分（通常为第3—8份）。

S4、干燥：将合并的70%乙醇洗脱流分在60℃、-0.08MPa条件下减压浓缩至稠膏，移至真空干燥箱中，于50℃下干燥至恒重（约48小时），粉碎过80目筛，得到淡黄色至类白色泽泻高含量提取物粉末。

质量检测与数据：

得率计算：提取物重量为42.5g。

得率=（提取物重量/药材重量）×100%=(42.5g/1000g)×100%=4.25%。

泽泻总三萜含量测定（紫外分光光度法）：

标准曲线制备：精密称取23-乙酰泽泻醇B对照品10.0mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，得1.0mg/mL贮备液。精密吸取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8mL，分别置具塞试管中，水浴挥干甲醇。各管精密加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，于60℃水浴加热15分钟，冰水冷却后加冰醋酸5.0mL，摇匀。以相应试剂为空白，在546nm波长处测定吸光度（A）。以浓度（C,μg/mL）为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A=0.0125C+0.0032，R²=0.9996。

样品测定：精密称取本品粉末约10.0mg，置10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取0.5mL，按“标准曲线制备”项下方法，自“置具塞试管中”起，同法操作，测定吸光度，代入回归方程计算浓度，并换算成总三萜（以23-乙酰泽泻醇B计）在样品中的百分含量。

测定结果：平行测定3份，总三萜含量分别为52.3%、51.8%、52.1%，平均值为52.1%（w/w）。

23-乙酰泽泻醇B含量测定（高效液相色谱法）：

色谱条件：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm）；

流动相：乙腈（A）－水（B），梯度洗脱（0-30min，55%A→80%A）；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：208nm；

进样量：10μL；

对照品溶液：精密称取23-乙酰泽泻醇B对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。

供试品溶液：精密称取本品粉末约20.0mg，置50mL容量瓶中，加甲醇约45mL，超声（250W,40kHz）处理30分钟，冷却，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

测定结果：平行测定3份，23-乙酰泽泻醇B含量分别为11.2%、10.9%、11.4%，平均值为11.2%（w/w）。

实施例二：

本实施例与上一个实施例基本相同，区别在于，原料与试剂：

原料：白术饮片，经鉴定为Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。

试剂：乙醇（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；石油醚（60-90℃，分析纯）；蒸馏水；D-101型大孔吸附树脂。

对照品：白术内酯Ⅲ对照品（纯度≥98%，批号A-025）；白术内酯I对照品（纯度≥98%）；苍术酮对照品（纯度≥95%）。

仪器与设备（同实施例一一）：RE-52AA旋转蒸发仪、SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵、HX-105恒温水浴锅、LC-20AT高效液相色谱仪（配备SPD-M20A检测器）、UV-1800紫外可见分光光度计、BS224S电子分析天平、玻璃层析柱、G4垂熔玻璃漏斗。

制备方法：

S1、醇提：称取干燥白术饮片1.0kg，粉碎过20目筛。置10L圆底烧瓶中，加入8L体积浓度为75%的乙醇水溶液（v/v）。连接回流冷凝装置，于80℃水浴中加热回流提取2小时。滤过，收集滤液。药渣再次加入6L75%乙醇，同法回流提取1.5小时。滤过，合并两次滤液。

S2、初步浓缩与萃取：将合并的乙醇提取液置于旋转蒸发仪中，在60℃水浴、-0.08MPa真空度下减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液体积约1.2L，呈稠浸膏状，无醇味。将此浸膏转移至5L分液漏斗中，加入2L蒸馏水，充分振荡分散。

向分散后的水溶液中，加入等体积石油醚1.5L，充分振荡萃取5分钟，静置分层。小心分离并弃去上层石油醚层（主要去除挥发油如苍术酮及部分脂溶性杂质）。此石油醚萃取步骤重复两次，以充分去除挥发油成分。

随后，向水层中加入等体积乙酸乙酯1.5L，充分振荡萃取10分钟，静置分层。收集下层水相，保留上层乙酸乙酯层。再用水层重复乙酸乙酯萃取两次（每次1.5L）。合并所有乙酸乙酯萃取液。

S3、大孔吸附树脂纯化：将合并的乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得到黄褐色乙酸乙酯萃取物粗品（约78g）。

取D-101型大孔吸附树脂1.0kg，预处理（同实施例1树脂处理方法）后，湿法装填于层析柱（5cmx80cm）中。

将上述粗品用少量丙酮溶解，拌入等量已处理的湿树脂中，阴干后上样至树脂柱顶部。

上样后，先用5倍柱体积（BV）的蒸馏水以3BV/h的流速洗脱，弃去水洗液，直至洗脱液接近无色。

随后，改用6BV的体积浓度为65%的乙醇水溶液，以2BV/h的流速进行等度洗脱。用自动部分收集器收集此65%乙醇洗脱流分（每份200mL）。

采用薄层色谱（TLC）监测：以硅胶GF254板，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（5:1，v/v），喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，于可见光下观察。合并含有白术内酯I、Ⅲ等内酯类成分特征斑点（Rf值分别约为0.4和0.3）的洗脱流分（通常为第4—10份）。

S4、干燥：将合并的65%乙醇洗脱流分在60℃、-0.08MPa条件下减压浓缩至稠膏，移至真空干燥箱中，于45℃下干燥至恒重（约48小时），粉碎过80目筛，得到浅黄色白术高含量提取物粉末。

质量检测与数据：

得率计算：提取物重量为35.6g。

得率=（提取物重量/药材重量）×100%=(35.6g/1000g)×100%=3.56%。

白术总内酯含量测定（紫外分光光度法）：

标准曲线制备：精密称取白术内酯Ⅲ对照品10.0mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，得1.0mg/mL贮备液。精密吸取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL，分别置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。以甲醇为空白，在220nm波长处直接测定吸光度（A）。白术内酯类化合物在此波长附近有末端吸收，可用于总内酯的快速测定。以浓度（C,μg/mL）为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A=0.0087C+0.0018，R²=0.9993。

样品测定：精密称取本品粉末约20.0mg，置50mL容量瓶中，加甲醇约45mL，超声（250W,40kHz）处理30分钟，冷却，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取适量，用甲醇稀释至合适浓度（使吸光度在标准曲线范围内），在220nm波长处测定吸光度，代入回归方程计算浓度，并换算成总内酯（以白术内酯Ⅲ计）在样品中的百分含量。

测定结果：平行测定3份，总内酯含量分别为22.7%、21.9%、22.3%，平均值为22.3%（w/w）。

白术内酯Ⅲ含量测定（高效液相色谱法）：

色谱条件：

色谱柱：Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm,5μm）；

流动相：乙腈－水（45:55,v/v），等度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：25℃；

检测波长：220nm；

进样量：10μL；

对照品溶液：精密称取白术内酯Ⅲ对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.05mg的溶液。

供试品溶液：同“白术总内酯含量测定”项下供试品溶液。

系统适用性试验：取对照品溶液进样，理论塔板数按白术内酯Ⅲ峰计算应不低于5000。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

测定结果：平行测定3份，白术内酯Ⅲ含量分别为2.31%、2.25%、2.28%，平均值为2.28%（w/w）。典型色谱图中，白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ能实现良好分离。

实施例三：

本实施例与上一个实施例基本相同，区别在于，原料与试剂：

原料：鹿衔草原药材，经鉴定为Pyrola calliantha H. Andr.的干燥全草。

试剂：乙醇（分析纯）；乙酸乙酯（分析纯）；石油醚（60-90℃，分析纯）；蒸馏水；HPD-100型大孔吸附树脂。

对照品：高熊果苷对照品（纯度≥98%）；芦丁对照品（纯度≥98%）。

仪器与设备（同实施例一及二）：RE-52AA旋转蒸发仪、SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵、HX-105恒温水浴锅、LC-20AT高效液相色谱仪（配备SPD-M20A检测器）、UV-1800紫外可见分光光度计、BS224S电子分析天平、玻璃层析柱、G4垂熔玻璃漏斗。

制备方法：

S1、醇提：称取干燥鹿衔草药材1.0kg，剪碎。置10L圆底烧瓶中，加入10L体积浓度为60%的乙醇水溶液（v/v）。连接回流冷凝装置，于75℃水浴中加热回流提取1.5小时。滤过，收集滤液。药渣再次加入8L60%乙醇，同法回流提取1.5小时。滤过，合并两次滤液。

S2、初步浓缩与萃取：将合并的乙醇提取液置于旋转蒸发仪中，在55℃水浴、-0.08MPa真空度下减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液体积约2.0L，呈深褐色浸膏状，无醇味。将此浸膏转移至5L分液漏斗中，加入2L蒸馏水，充分振荡分散。

向分散后的水溶液中，加入等体积石油醚1.5L，充分振荡萃取5分钟，静置分层。小心分离并弃去上层石油醚层（主要去除叶绿素等脂溶性色素）。重复石油醚萃取一次。

随后，向水层中加入等体积乙酸乙酯1.5L，充分振荡萃取15分钟，静置分层。保留下层水相（水层含黄酮苷等极性较大成分），收集上层乙酸乙酯层。再用水层重复乙酸乙酯萃取两次（每次1.5L）。合并所有乙酸乙酯萃取液。

S3、大孔吸附树脂纯化：将合并的乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干，得到棕褐色乙酸乙酯萃取物粗品（约92g）。

取HPD-100型大孔吸附树脂1.2kg，预处理（同实施例1树脂处理方法）后，湿法装填于层析柱（5cmx80cm）中。

将上述粗品用少量70%乙醇溶解，拌入等量已处理的湿树脂中，阴干后上样至树脂柱顶部。

上样后，先用6倍柱体积（BV）的蒸馏水以3BV/h的流速洗脱，弃去水洗液，直至洗脱液接近无色。

随后，采用梯度洗脱：先用3BV的体积浓度为30%的乙醇水溶液以2BV/h流速洗脱，弃去该部分（主要洗脱杂质）；然后改用5BV的体积浓度为70%的乙醇水溶液，以2BV/h的流速进行洗脱。用自动部分收集器收集此70%乙醇洗脱流分（每份200mL）。

采用薄层色谱（TLC）监测：以硅胶GF254板，展开剂为乙酸乙酯－甲醇－水-甲酸（10:2:1:0.1，v/v/v/v），在365nm紫外灯下观察荧光斑点。合并含有高熊果苷等黄酮苷类成分特征斑点（Rf值约0.4，亮蓝色荧光）的洗脱流分（通常为70%乙醇洗脱的第2—7份）。

S4、干燥：将合并的70%乙醇洗脱流分在55℃、-0.08MPa条件下减压浓缩至稠膏，移至真空干燥箱中，于40℃下真空干燥至恒重（约60小时），粉碎过80目筛，得到棕黄色鹿衔草高含量提取物粉末。

质量检测与数据：

得率计算：提取物重量为48.8g。

得率=（提取物重量/药材重量）×100%=(48.8g/1000g)×100%=4.88%。

鹿衔草总黄酮苷含量测定（紫外分光光度法-以芦丁计）：

标准曲线制备：精密称取芦丁对照品10.0mg，置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶解并定容，得0.2mg/mL贮备液。精密吸取0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL，分别置10mL容量瓶中，各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟；再加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟；再加4%氢氧化钠溶液4.0mL，用60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15分钟。以相应试剂为空白，在510nm波长处测定吸光度（A）。以芦丁浓度（C,μg/mL）为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A=0.0112C+0.0045，R²=0.9998。

样品测定：精密称取本品粉末约25.0mg，置50mL容量瓶中，加60%乙醇约45mL，超声（250W,40kHz）处理30分钟，冷却，加60%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取1.0mL，置10mL容量瓶中，按“标准曲线制备”项下方法，自“加5%亚硝酸钠溶液0.3mL”起，同法操作，测定吸光度，代入回归方程计算总黄酮（以芦丁计）浓度，并换算成在样品中的百分含量。

测定结果：平行测定3份，总黄酮苷（以芦丁计）含量分别为36.5%、35.8%、36.2%，平均值为36.2%（w/w）。

高熊果苷含量测定（高效液相色谱法）

色谱条件：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6mm×250mm,5μm）；

流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（18:82,v/v），等度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：260nm；

进样量：10μL；

对照品溶液：精密称取高熊果苷对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含0.08mg的溶液。

供试品溶液：精密称取本品粉末约50.0mg，置25mL容量瓶中，加50%甲醇约20mL，超声（250W,40kHz）处理30分钟，冷却，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过。

系统适用性试验：取对照品溶液进样，理论塔板数按高熊果苷峰计算应不低于3000。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

测定结果：平行测定3份，高熊果苷含量分别为5.86%、5.71%、5.93%，平均值为5.83%（w/w）。

实施例四：

本实施例与上一个实施例基本相同，区别在于，原料：

实施例一制备的泽泻高含量提取物（泽泻总三萜含量52.1%，23-乙酰泽泻醇B含量11.2%）。

实施例二制备的白术高含量提取物（白术总内酯含量22.3%，白术内酯Ⅲ含量2.28%）。

实施例三制备的鹿衔草高含量提取物（鹿衔草总黄酮苷含量36.2%，高熊果苷含量5.83%）。

仪器与设备：BS224S电子分析天平（感量0.1 mg）、FZ-1000高速万能粉碎机、SYH-10三维运动混合机、LC-20AT高效液相色谱仪（配备SPD-M20A二极管阵列检测器）、50mL具塞锥形瓶、药匙、称量纸等。

活性成分（降脂组合物）的制备方法：

S1、原料预处理与称量：将上述三种提取物粉末分别置于40℃真空干燥箱中干燥4小时以除去可能吸潮的水分，取出后置于干燥器中冷却至室温备用。

按照优选重量百分比进行计算和称量，以配制总量为10.0g的活性成分为例：

泽泻提取物用量：10.0g×50%=5.000g；

白术提取物用量：10.0g×30%=3.000g；

鹿衔草提取物用量：10.0g×20%=2.000g；

使用电子分析天平，分别精密称取实施例一提取物5.000g、实施例二提取物3.000g、实施例三提取物2.000g。

S2、混合：将称取好的三种提取物粉末，共同置入三维运动混合机的混合桶中。设置混合机参数：转速15rpm，混合时间30分钟。启动混合机，进行充分、均匀的混合。

混合结束后，取出混合物。为验证混合均匀度，可从混合桶的上、中、下三层及中心、边缘等不同位置随机取样5份，每份约100mg，备用进行含量均匀度检查。

S3、最终产品获取：将混合均匀的粉末再次过80目筛，收集筛下物，即得到本发明所述的降脂组合物（活性成分），为均一的黄棕色至棕黄色粉末。将其分装于密封的棕色玻璃瓶中，置于阴凉干燥处保存。

质量检测与化学表征：

外观与均匀度检查：产品为色泽均匀的黄棕色至棕黄色粉末，无肉眼可见的色斑或结块。取步骤二预留的5份样品，测定23-乙酰泽泻醇B含量，计算RSD（相对标准偏差）为1.2%（<2.0%），表明混合均匀度良好。

三种指标成分的含量测定与比例计算：

供试品溶液制备：精密称取本实施例制备的降脂组合物粉末约100.0mg，置50mL容量瓶中，加入甲醇约45mL，超声（250W,40kHz）处理40分钟（确保三种成分充分溶解），冷却至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

HPLC测定条件（同实施例一、二、三的优化综合方法）：

色谱柱：Agilent ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)

流动相：采用梯度洗脱程序以同时分离三种成分。

时间（min）—乙腈（A,%）—0.1%磷酸水（B,%）；

0—20—80;

15—45—55;

25—80—20;

30—20—80（平衡5min）；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：采用程序可变波长：0-12min，208nm（检测23-乙酰泽泻醇B）；12—20min，220nm（检测白术内酯Ⅲ）；20—30min，260nm（检测高熊果苷）。

进样量：10μL。

对照品溶液：分别精密称取23-乙酰泽泻醇B、白术内酯Ⅲ、高熊果苷对照品适量，用甲醇配制成含三者浓度分别约为0.1mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL的混合对照品溶液。

测定法：分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。典型色谱图中，三种目标成分分离良好，保留时间分别为：23-乙酰泽泻醇B约9.5min，白术内酯Ⅲ约15.2min，高熊果苷约23.8min。按外标法以峰面积分别计算各成分在本发明组合物中的含量。

测定结果（平行测定3次）：

指标成分	含量1 (mg/g)	含量2 (mg/g)	含量3 (mg/g)	平均含量 (mg/g)	RSD (%)
						23-乙酰泽泻醇B	55.8	54.9	56.2	55.6	1.2
白术内酯Ⅲ	6.72	6.85	6.63	6.73	1.6
						高熊果苷	11.45	11.68	11.32	11.48	1.6

注：平均含量以“mg/g组合物”表示，即w/w的千分比（‰）。例如，55.6mg/g=5.56%。

重量比计算：

以23-乙酰泽泻醇B的平均含量为基准（设为1），计算其与白术内酯Ⅲ、高熊果苷的含量比。

白术内酯Ⅲ含量/23-乙酰泽泻醇B含量=6.73/55.6≈0.121

高熊果苷含量/23-乙酰泽泻醇B含量=11.48/55.6≈0.206

因此，在本实施例制备的降脂组合物中，23-乙酰泽泻醇B：白术内酯Ⅲ：高熊果苷的重量比约为1:0.12:0.21。

以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述附图和描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。

Claims (6)

1.一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物，其特征在于，包括以下重量百分比的提取物组成：

泽泻提取物 40%-60%，白术提取物 20%-40%，鹿衔草提取物 20%-40%；

其中，所述泽泻提取物中泽泻总三萜的含量不低于50wt%；所述白术提取物中白术总内酯的含量不低于20wt%；所述鹿衔草提取物中鹿衔草总黄酮苷的含量不低于30wt%。

2.根据权利要求1所述的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物，其特征在于，所述活性成分由如下重量百分比的提取物组成：泽泻提取物50%，白术提取物30%，鹿衔草提取物20%。

3.根据权利要求1所述的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物，其特征在于，所述泽泻提取物中，以23-乙酰泽泻醇B计的含量不低于泽泻提取物总重的10wt%；所述白术提取物中，以白术内酯Ⅲ计的含量不低于白术提取物总重的2wt%；所述鹿衔草提取物中，以高熊果苷计的含量不低于鹿衔草提取物总重的5wt%。

4.一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物的制备方法，适用于权利要求1至3任一所述的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物，其特征在于，包括以下步骤：

S1、分别提取：分别取泽泻、白术、鹿衔草药材，用60%-80%乙醇水溶液加热回流提取，各自滤过得提取液；

S2、分别精制：将各提取液分别减压浓缩后，用乙酸乙酯进行萃取，分别得到各药材的乙酸乙酯萃取部位；

S3、分别纯化：将各所述乙酸乙酯萃取部位分别上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用65%-75%乙醇水溶液洗脱，分别收集各药材的乙醇洗脱部位，浓缩干燥，分别得到符合含量要求的泽泻提取物、白术提取物和鹿衔草提取物；

S4、混合：将步骤S3得到的泽泻提取物、白术提取物和鹿衔草提取物按比例混合，得到所述活性成分。

5.根据权利要求4所述的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述大孔吸附树脂为AB-8型、D-101型或HPD-100型。

6.根据权利要求4所述的一种基于泽泻饮有效部位群的降脂组合物的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，采用70%乙醇水溶液进行等度洗脱。