CN121202800A - Fgfr4抑制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种FGFR4抑制剂及其制备方法和应用，涉及医药技术领域。所述化合物包含其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；本发明提供了其在制备预防和/或治疗FGFR4异常性疾病中的应用。

Description

FGFR4抑制剂及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种FGFR4抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

酪氨酸激酶受体(FGFR1-4)及其配体，成纤维细胞生长因子(FGFs)在多种信号转导途径中发挥重要作用，包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)磷脂酶Cγ(PLCγ)，蛋白激酶C(PKC)以及信号转导子和转录激活子(STAT)。FGFR激活导致一系列细胞信号事件，包括细胞增殖，分化和迁移增加。

其中，成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)，可选择性结合成纤维细胞生长因子19(FGF19)以刺激反式自磷酸化并通过下游MAP激酶和AKT信号通路介导细胞效应。研究表明，FGF19在肝癌，结肠癌和肺鳞癌的亚组中过表达(Nicholes,K.等人，Am.J.Pathol.160,2295–2307(2002))。FGF19的单克隆抗体阻断了过表达FGF19的结肠癌细胞系和异种移植物的生长(Desnoyers,L.R.等人，Oncogene 27,85–97(2008))。

FGFR抑制剂的临床发展已经确认它们作为抗肿瘤剂的效用，然而，仍然需要用于靶向FGFR(特别是FGFR4)的新试剂。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了一种靶向抑制FGFR4的化合物、其光学异构体及其药学上可接受的盐，对肿瘤细胞恶性增殖具有较好的抑制作用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种化合物，具有式(Ⅰ)的结构，所述化合物包含其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；

再一方面，本发明提供了一种药物组合物，包含式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，以及一种或多种可药用载体、稀释剂、赋形剂。

再一方面，本发明提供了式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，上述所述的药物组合物在制备预防和/或治疗FGFR4异常性疾病中的应用。

优选地，所述疾病选自癌症、代谢性疾病、炎症性或自身免疫性疾病。

优选地，所述癌症为实体瘤或血液瘤。

优选地，所述实体瘤为胆管癌、结直肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌。

优选地，所述血液瘤为淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病。

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

应该理解，本文中所述的取代和取代的组合，无论是否明确地说明，是指符合该被取代成员的化合价的取代。例如，应用于碳成员的取代是指C的四价；当应用于氮成员时，其是指N的三价；在通常表示带有正电荷时，其是指氮成员的四键。化合价允许的选项为本领域技术的一部分。

术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸－氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡萄糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

术语“异构体”是指本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(士)”表示外消旋。

除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键或用波浪线表示直形实线键和直形虚线键

术语“溶剂化物”是指由溶质(即式I化合物)或其药学可接受的盐和不妨碍溶质生物活性的溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的实例包括但不限于水、乙醇和乙酸。当溶剂是水时，该溶剂化物称为水合物。水合物包括但不限于半、一、一倍半、二和三水合物。

术语“前药”是本发明化合物的功能性衍生物，其在体内容易转化为需要的化合物。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。实施例中的所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义。

实施例1中间体1的合成

步骤1中间体1的合成

将6-溴-2-氯喹唑啉(1-1，20g，82.6mmol)，1-2，22.56g，123.97mmol)，碳酸铯(47.85g，247.9mmol)，双三苯基磷二氯化钯(5.8g，8.26mmol)溶解于四氢呋喃(200mL)/二氧六环(40mL)/水(40mL)的混合溶剂中，氮气保护下加热回流3h。TLC显示原料反应彻底，向体系中加入水，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机层，饱和NaCl溶液(400mL)洗涤，无水Na₂SO₄干燥，减压回收溶剂得到浅黄色固体约26g(1-3)，不经进一步纯化直接投下一步。

将1-3溶于无水四氢呋喃(240mL)中，氮气保护，-20℃下向体系中缓慢滴加磺酰氯(20mL)，继续搅拌35分钟。TLC检测原料反应彻底，减压浓缩。残余物用二氯甲烷溶解，再次减压浓缩，重复此步骤多次。残余物用95％乙醇(500mL)打浆1h，过滤出固体，并于60℃下烘至恒重得到中间体1约20.2g。Yield:94％；¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.63(s,1H),8.20(d,J＝8.7Hz,1H),7.86–7.80(m,1H),6.68(s,1H),3.99(s,1H).ESI-MS:m/z＝353[M+H]⁺。

实施例2化合物1的合成

步骤1化合物1-5的合成

将中间体1(736mg，2mmol)，化合物1-4(365mg,2.2mmol)，碳酸铯(1.956g,6mmol)，Pd₂(dba)₃(92mg,0.1mmol)X-PHOS(95mg,0.2mmol),溶于DMA中，氮气保护下，加热至100℃反应4h。TLC显示原料反应彻底，向体系中加入水，硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(400mL)洗涤，无水Na₂SO₄干燥，减压回收溶剂，残余物经柱层析纯化(EtOAc:石油醚＝1:2)得淡黄色固体418mg。Yield:35％；ESI-MS:m/z＝483[M+H]⁺

步骤2化合物1的合成

将化合物1-5(70mg,0.14mmol)溶于甲醇中，加入10％ Pd/C(14mg)，H2保护下回流反应6h。硅藻土过滤，滤液减压浓缩得化合物1-6粗产品可直接用于下一步反应。

将1-6溶于DCM，加入丙烯酸(24mg,0.28mmol)，EDCI-HCl(59mg,0.31mmol)，室温反应8h。向体系中加入水，DCM萃取(20ml×3)，合并有机相，饱和NaCl溶液(40mL)洗涤，无水Na₂SO₄干燥，减压回收溶剂，残余物经柱层析纯化(EtOAc:石油醚＝1:1)得淡黄色固体52mg。Yield:71％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),7.90(s,1H),7.65(s,1H),7.58(d,J＝3.0Hz,1H),7.57(d,J＝3.3Hz,1H),6.94(s,1H),6.68(s,1H),6.32(s,1H),5.65(s,1H),4.01(s,6H),2.40(s,3H),2.26(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.95,163.15,158.71,154.67,150.65,139.68,136.98,136.63,134.89,134.34,132.73,131.79,130.92,128.84,128.60,127.79,127.13,125.90,125.12,122.00,120.16,114.66,96.99,56.65,29.69,21.33,18.68.ESI-MS:m/z＝507[M+H]⁺。

实施例3.生物活性评价

一、体外FGFR4酶活测定

1.化合物配制

化合物用100％ DMSO溶解为10mM存储液。

2.激酶反应过程

(1)配制1×Kinase buffer。

(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试浓度为10uM起始,10倍稀释7个浓度，复孔测试，在96孔板中梯度稀释成100倍终浓度的10个不同浓度的溶液。然后用Echo550转移250nl到384反应板中备用。阴性对照孔和阳性对照孔中分别加250nl的100％ DMSO。

(3)用1×Kinase buffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。

(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的1×Kinase buffer。

(5)1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。

(6)用1×Kinase buffer配制25/15倍终浓度的ATP和Kinase substrate22的混合溶液。

(7)加入15μL的25/15倍终浓度的ATP和底物的混合溶液,起始反应。

(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温分别孵育相应的时间。

(9)加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。

(10)用Caliper EZ ReaderⅡ读取转化率。

3.数据分析

(1)计算公式

％Inhibition＝(Conversion％_max-Conversion％_sample)/(Conversion％_max-Conversion％_min)×100

其中：Conversion％_sample是样品的转化率读数；Conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；Conversion％_max：阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。

(2)拟合量效曲线

以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性IC50值。计算公式是Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))

表1.化合物在体外对FGFR4酶活抑制的IC₅₀值

化合物编号	FGFR4酶活抑制IC50(nM)
		化合物1	30

由表1可知，本发明化合物在低浓度条件下即可实现对FGFR4酶活的强效抑制。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (4)

1.一种化合物，其特征在于，所述的化合物为：

2.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，以及一种或多种可药用载体、稀释剂、赋形剂。

3.权利要求1所述的化合物、其立体异构体、几何异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或权利要求2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗FGFR4异常性疾病药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疾病为实体瘤。