CN121175078A

CN121175078A - 治疗表达PDGFRα的癌症的方法

Info

Publication number: CN121175078A
Application number: CN202380096520.4A
Authority: CN
Inventors: M·P·维特克罗夫特; A·伊瓦什凯维奇
Original assignee: Thales Pharmaceuticals Innovation Co ltd; Eli Lilly and Co
Current assignee: Thales Pharmaceuticals Innovation Co ltd; Eli Lilly and Co
Priority date: 2023-04-04
Filing date: 2023-04-04
Publication date: 2025-12-19
Also published as: WO2024207047A1; KR20250175319A; MX2025011329A; AU2023439766A1; EP4688007A1

Abstract

本发明涉及包含与治疗性放射性同位素缀合的奥拉单抗抗体的组合物及其使用方法，所述组合物用于治疗表达血小板源性生长因子受体α(PDGFR‑α)的癌症。

Description

治疗表达PDGFRα的癌症的方法

技术领域

本发明涉及用于治疗表达血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)的癌症的蛋白质和组合物及其使用方法。

背景技术

软组织肉瘤(STS)起源于软组织或结缔组织，如脂肪、肌肉、神经、纤维组织、血管或深层皮肤组织。STS是一种异质性疾病，对于所述异质性疾病，存在相对较少的有效方案。

因此，需要用于治疗STS和相关癌症的新的和经改进的方法和试剂。

本说明书中对任何现有技术的引用并不表示承认或暗示此现有技术构成任何管辖区内的共同常识的一部分，也不表示此现有技术可以被本领域的技术人员合理地理解、视为相关，和/或与其它现有技术相组合。

发明内容

本发明涉及用于治疗表达血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)的癌症的试剂和方法。

在第一方面，本发明提供了一种奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与放射性同位素缀合，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段用于：

-治疗或预防特征在于PDGFRα表达或与所述PDGFRα表达相关的癌症或使所述癌症的进展最小化。

应当理解，奥拉单抗抗体或其抗原结合片段(其中所述抗体或其抗原结合片段与放射性同位素缀合)还可以被称为经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段。

在第二方面，本发明提供了一种奥拉单抗抗体或奥拉单抗抗体生物缀合物，其适于用治疗性放射性同位素进行放射性标记。

优选地，所述奥拉单抗生物缀合物包含与适于进一步与放射性同位素缀合的任何螯合基团或连接基团缀合的奥拉单抗抗体。任选地，所述奥拉单抗生物缀合物选自：奥拉单抗-TMT(6,6”-双[N,N”,N”'-四(羧甲基)氨基甲基]-4'-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶)、奥拉单抗-DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸)、奥拉单抗-TCMC、奥拉单抗-DO3A、奥拉单抗-CB-DO2A、奥拉单抗-NOTA、奥拉单抗-Diamsar、奥拉单抗-DTPA、奥拉单抗-CHX-A”-DTPA、奥拉单抗-TETE、奥拉单抗-Te2A、奥拉单抗-HBED、奥拉单抗-DFO、奥拉单抗-DFOsq、奥拉单抗-DFO-NCS和奥拉单抗-HOPO或与如WO 2022/133537中所公开的螯合剂或与如本文所述的或本领域技术人员已知的任何其它螯合剂螯合的奥拉单抗。

在任何方面，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段优选地包含竞争性抑制抗体结合的抗原结合结构域，所述抗体包括包含如SEQ ID NO:4中所示的序列的VH和包含如SEQID NO:12中所示的序列的VL。

在本文的任何方面或实施例中，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段包含具有如SEQ ID NO:4中所定义的可变重链的抗原结合结构域的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及具有如SEQ ID NO:12中所定义的VL的抗原结合结构域的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

如本文所使用的，本发明的抗原结合蛋白的互补决定区序列(CDR)可以根据IMGT、Chothia或Kabat编号系统或本领域技术人员已知的任何其它CDR编号系统来定义。

在本发明的任何方面或实施例中，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：

(i)VH，所述VH包含互补决定区(CDR)1，所述CDR1包含与SEQ ID NO:1中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，CDR2，所述CDR2包含与SEQ ID NO:2中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，以及CDR3，所述CDR3包含与SEQ IDNO:3中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；

(ii)VH，所述VH包含与SEQ ID NO:4中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；

(iii)VL，所述VL包含CDR1，所述CDR1包含与SEQ ID NO:9中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，CDR2，所述CDR2包含与SEQ ID NO:10中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，以及CDR3，所述CDR3包含与SEQ ID NO:11中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；

(iv)VL，所述VL包含与SEQ ID NO:12中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；

(v)VH，所述VH包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的序列；

(vi)VH，所述VH包含SEQ ID NO:4中所示的序列；

(vii)VL，所述VL包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:9中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:10中所示的序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:11中所示的序列；

(viii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:12中所示的序列；

(ix)VH，所述VH包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的序列；以及VL，所述VL包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:9中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:10中所示的序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:11中所示的序列；或

(x)包含SEQ ID NO:4中所示的序列的VH和包含SEQ ID NO:12中所示的序列的VL。

所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段可以进一步包含：

(i)VH，所述VH包含框架区(FR)1，所述FR1包含与如SEQ ID NO:5中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含与如SEQ ID NO:6中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含与如SEQ ID NO:7中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含与如SEQ ID NO:8中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；以及

(ii)VL，所述VL包含框架区(FR)1，所述FR1包含与如SEQ ID NO:13中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含与如SEQ IDNO:14中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含与如SEQ ID NO:15中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含与如SEQ ID NO:16中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成。

在另外的实施例中，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段包含：

(i)VH，所述VH包含框架区(FR)1，所述FR1包含如SEQ ID NO:5中所示的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含如SEQ ID NO:6中所示的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含如SEQ ID NO:7中所示的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含如SEQ ID NO:8中所示的序列或由其组成，以及

(ii)VL，所述VL包含框架区(FR)1，所述FR1包含如SEQ ID NO:13中所示的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含如SEQ ID NO:14中所示的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含如SEQ ID NO:15中所示的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含如SEQ ID NO:16中所示的序列或由其组成。

在任何实施例中，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含与SEQID NO:4中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；和/或VL，所述VL包含与SEQ ID NO:12中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；其中所述VH和VL与SEQ ID NO:4和12的序列之间的序列变异不在所述CDR中，并且其中所述抗原结合蛋白保留与PDGFRα结合的能力。

在任何实施例中，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段包含VH和/或VL，与如SEQID NO:4或12中分别所示的氨基酸序列相比，所述VH和/或VL包含不超过1个、不超过2个、不超过3个、不超过4个、不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过13个、不超过14个、不超过15个、不超过16个、不超过17个、不超过18个、不超过19个或不超过20个氨基酸残基取代、缺失或添加；其中所述氨基酸取代、缺失或添加不在所述CDR中，并且所述抗原结合蛋白保留与PDGFRα结合的能力。

如本文所使用的，术语HCDR1、HCDR2和HCDR3将被理解为是指可变重链的CDR；术语LCDR1、LCDR2和LCDR3将被理解为是指可变轻链的CDR；并且术语HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4将被理解为分别是指重链和轻链的构架区。

如本文所述，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段可以呈以下形式：

(i)单结构域抗体(sdAb)；

(ii)单链Fv片段(scFv)；

(iii)二聚体scFv(di-scFv)；或

(iv)与抗体的恒定区、Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3连接的(ii)或(iii)中的一者。

另外，如本文所述，所述奥拉单抗或其抗原结合片段可以呈以下形式：

(i)双功能抗体；

(ii)三功能抗体；

(iii)四功能抗体；

(iv)Fab；

(v)F(ab')2；

(vi)Fv；

(vii)双特异性抗体或其它形式的多特异性抗体；或

(viii)与抗体的恒定区、Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3连接的(i)至(vii)中的一者。

任选地，所述抗原结合结构域的可变重区和可变轻区通过接头连接。

在任何实施例中，所述抗原结合结构域可以包含：

FR1-CDR1–FR2–CDR2–FR3–CDR3–FR4–接头-FR1a-CDR1a–FR2a–CDR2a–FR3a–CDR3a–FR4a。

如本文所定义的，所述接头可以是化学的、一个或多个氨基酸、或在两个半胱氨酸残基之间形成的二硫键。

在本发明的任何方面或实施例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段可以包含人恒定区，例如IgG恒定区，如IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄恒定区或其混合物。在包含V_H和V_L的抗体或蛋白质的情况下，所述V_H可以与重链恒定区连接并且所述V_L可以与轻链恒定区连接。

在一个实例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段包含IgG₄抗体的恒定区或IgG₄抗体的稳定恒定区。在一个实例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段包含具有位置241处的脯氨酸的IgG₄恒定区(根据Kabat的编号系统(Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质的序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》华盛顿州哥伦比亚特区美国卫生与公众服务部(Washington DC United States Department of Health and HumanServices),1987和/或1991))。

在一个实例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区包含稳定重链恒定区，所述稳定重链恒定区包含完全或部分具有或不具有C末端赖氨酸残基的序列的混合物。

在本文的任何方面的另外的实施例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段包含Fc区，其中所述Fc区被工程化以具有增强的诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的能力。优选地，所述增强的诱导ADCC的能力是由Fc区中与Fc受体相互作用的氨基酸的突变、缺失或修饰赋予的。

在另一个实施例中，所述奥拉单抗或其抗原结合片段包含Fc区，所述区被工程化成：

-具有增加的体外或体内半衰期；

-具有增加的诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性的能力；和/或

-具有降低的效应子功能。

优选地，所述奥拉单抗抗体呈抗体的形式(即包含可变轻链和可变重链，与包括重链CH2和/或CH3的抗体的恒定区连接)。

在另外的实施例中，所述奥拉单抗可以包含如SEQ ID NO:17中所定义的重链恒定区和/或如SEQ ID NO:18中所定义的轻链恒定区。

在某些实施例中，所述奥拉单抗可以包含如SEQ ID NO:19中所示的重链和/或如SEQ ID NO:20中所示的轻链。

在仍另外的实施例中，所述奥拉单抗呈抗体的形式，并且可以包含恒定区中的一个或多个氨基酸取代，以便减少抗体的体内半衰期。因此，本发明提供了一种奥拉单抗抗体，所述奥拉单抗抗体在恒定区的CH2和/或CH3结构域中具有取代并且包含残基His310、His435、His436和Ile253(Kabat编号)中的一个或多个处的取代，由此改变所述抗体的FcRn结合亲和力和/或血清半衰期(例如，相对于包含天然CH2和CH3结构域的奥拉单抗)。

在一些实例中，抗体的位置310和/或435处的氨基酸可以是丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、缬氨酸或甘氨酸。

优选地，位置310处的残基选自丙氨酸或谷氨酸或谷氨酰胺；或者来自重链恒定区的氨基酸残基435选自精氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸。在其它优选的实施例中，所述抗体具有位置310处的丙氨酸残基和位置435处的谷氨酰胺残基。

在另外的实施例中，所述抗体还包含残基Lys322处的氨基酸取代。优选地，所述取代是K322A。

在特别优选的实施例中，所述奥拉单抗抗体包含取代K322A、H310A和H435Q。

在优选的实施例中，经修饰的抗体对FcRn的结合亲和力和/或经修饰的抗体的血清半衰期减少了至少约2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在本发明的优选的实施例中，经修饰的抗体对FcRn的结合亲和力和/或经修饰的抗体的血清半衰期减少了至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％。

在任何方面或实施例中，所述抗体还可以包含与恒定重链区的Ser228和Leu235相当的残基处的氨基酸取代，如Ser228Pro和/或Leu235Glu。

根据第一方面并且根据其任何实施例，所述经放射性标记的奥拉单抗与适于治疗肿瘤或癌症肿块的任何放射性同位素缀合。合适的放射性同位素的实例包括：锕-225(²²⁵Ac)、砹-211(²¹¹At)、铋-212和铋-213(²¹²Bi、²¹³Bi)、铜-64和铜-67(⁶⁴Cu、⁶⁷Cu)、碘-123、碘-124、碘-125或碘-131(¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I)(¹²³I)、铅-212(²¹²Pb)、镥-177(¹⁷⁷Lu)、镭-223和镭-224(²²³Ra、²²⁴Ra)、铼-186和铼-188(¹⁸⁶Re和¹⁸⁸Re)、钐-153(¹⁵³Sm)、钪-47(⁴⁷Sc)、锶-90(⁹⁰Sr)、铽-149和铽-161(¹⁴⁹Tb和¹⁶¹Tb)以及钇-90(⁹⁰Y)。在优选实施例中，与所述抗体或其片段缀合的所述放射性核素是锕-225或镥-177。

在任何实施例中，所述经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段是⁸⁹Zr-奥拉单抗、²²⁵Ac-奥拉单抗或¹⁷⁷Lu-奥拉单抗，其中所述放射性同位素与所述奥拉单抗抗体直接或间接缀合。

在任何方面或实施例中，放射性同位素可以直接例如通过氨基酸残基的卤化与奥拉单抗缀合。优选地，所述经放射性标记的奥拉单抗的所述放射性同位素例如通过螯合剂或其它连接部分与奥拉单抗或其抗原结合片段间接连接。在一个实例中，所述奥拉单抗与选自由以下组成的组的螯合部分缀合：TMT(6,6”-双[N,N”,N”'-四(羧甲基)氨基甲基]-4'-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶)、DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸)、TCMC、DO3A、CB-DO2A、NOTA、Diamsar、DTPA、CHX-A”-DTPA、TETE、Te2A、HBED、DFO、DFOsq、DFO-NCS和HOPO、如WO 2022/133537(以引用的方式并入本文)中所描述的螯合剂、或如本文所述的或本领域技术人员已知的其它螯合剂。

在另一个实例中，所述经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段或奥拉单抗抗体生物缀合物与双功能接头缀合，例如溴乙酰基、硫醇、琥珀酰亚胺酯、TFP酯、马来酰亚胺，或者使用本领域中已知的任何胺或硫醇修饰化学物质。

优选地，经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段是¹⁷⁷Lu-奥拉单抗或¹⁷⁷Lu标记的奥拉单抗，其中所述¹⁷⁷Lu通过接头与所述奥拉单抗如¹⁷⁷Lu-DOTA-奥拉单抗缀合。

在另外的方面，提供了一种用于获得本发明的第一方面的经放射性标记的奥拉单抗的方法，其中所述方法包含放射性标记第二方面的奥拉单抗生物缀合物或抗体。

在另外的方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段、奥拉单抗生物缀合物或经放射性标记的奥拉单抗，任选地与药学上可接受的赋形剂的组合。

仍另外，提供了一种编码如本文所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段、或奥拉单抗生物缀合物的核酸或核酸构建体。

还提供了一种宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞包含本发明的核酸或核酸构建体。

在第四方面，本发明提供了一种治疗、预防受试者的癌症或使所述受试者的癌症的进展最小化的方法，所述方法包含：

-向有需要的受试者施用如本文所述的经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，

由此治疗、预防所述受试者的癌症或使所述受试者的癌症的进展最小化。

在另外的方面，本发明提供了一种使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长的方法，所述方法包含：

由此使所述受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长。

在另外的方面，本发明提供了一种使受试者的癌症转移最小化、降低或预防所述癌症转移的方法，所述方法包含：

由此使所述受试者的癌症转移最小化、降低或预防所述癌症转移。

在另外的方面，本发明提供了一种增加患有癌症的受试者的存活期的方法，所述方法包含：

由此增加所述受试者的存活期。

另一方面，本发明进一步提供了一种如本文所述的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的用途，其用于制备用以实现以下各项的药物：

-治疗、预防受试者的癌症或使所述受试者的癌症的进展最小化，

-使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长，

-使受试者的转移最小化、降低或预防所述受试者的转移，或

-增加患有癌症的受试者的存活期。

另一方面，本发明进一步提供了一直如本文所述的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的用途，其用于：

-使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长，

-使受试者的转移最小化、降低或预防所述受试者的转移，或

-增加受试者的存活期。

另一方面，本发明进一步提供了如本文所述的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段，其用于：

-使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长，

-使受试者的转移最小化、降低或预防所述受试者的转移，或

-增加受试者的存活期。

在本发明的任何方面或实施例中，应当理解，向受试者施用的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的量是治疗有效量的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段。

在本发明的任何方面，本文所述的任何药物或药物组合物可以适于腹膜内、瘤内、局部、口服、静脉内施用、向呼吸道施用，优选地通过吸入或鼻内、皮下或肌内施用。典型地，本文所述的任何药物或药物组合物适于静脉内施用。

在本文所述的任何方法或用途中，所述经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段可以作为癌症的唯一治疗来施用或可以与一种或多种另外的治疗组合施用。所述经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段可以在先前癌症治疗(任选地其中所述先前治疗包含外科手术、化学疗法、免疫疗法、外束辐射、自体干细胞疗法或其组合)后施用。所述经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段可以与针对癌症的另外的治疗(任选地其中所述另外的治疗包含外科手术、化学疗法、免疫疗法、外束辐射、自体干细胞疗法或其组合)同时或依次施用。

应当理解，优选地，根据上述方面和实施例，所述癌症优选地是表达或过度表达PDGFR-α的癌症。

所述癌症可以选自由以下组成的列表：软组织肉瘤(STS)、软骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤和横纹肌肉瘤。本发明的方法可以使得能够治疗、预防特征在于肿瘤细胞和/或肿瘤基质中PDGFRα表达的癌症、使所述癌症的进展最小化。

在任何实施例中，所述癌症可以是癌前的或非转移性的。在任何实施例中，所述癌症可以是恶性的或转移性的。

在任何实施例中，所述方法进一步包含鉴定需要如本文所述的治疗的受试者。所述方法可以包含鉴定所述受试者患有表达或过度表达PDGFR-α的癌症。

如本文所使用的，除非上下文另有要求，否则术语“包含(comprise)”和所述术语的变体，如“包含(comprising)”、“包含(comprises)”和“包含(comprised)”，不旨在排除另外的添加、组分、整体或步骤。

本发明的另外的方面和在前述段落中描述的各方面的另外的实施例将从以下描述中变得显而易见，所述以下描述通过举例的方式并参考附图给出。

附图说明

图1：DFOsq-和DOTA-生物缀合的奥拉单抗的示意图。

图2：Biacore表面等离子体共振测定的建立。

图3：KRIB、HuO9和A-204肉瘤细胞系中的总PDGFRA和表面PDGFRA的表达。A.用蛋白质印迹确定总PDGFRA表达。通过FACS确定PDGFRα在未固定细胞上的表面表达。

图4：蛋白质印迹显示奥拉单抗介导的PDGFRA激活通路抑制。

图5：A)在1小时时⁸⁹Zr-DFOSq-奥拉单抗与A204和HCC827细胞的结合；B)在1小时和4小时时⁸⁹Zr-DFOSq-奥拉单抗和¹⁷⁷Lu-DOTA-奥拉单抗与A204细胞的结合。

图6：在24小时、48小时和120小时的PET图像的实例。测量每个图像的SUV最大值、肿瘤:背景比率、肿瘤:肝比率和肿瘤:骨比率。

图7：在24小时、48小时和120小时时⁸⁹Zr-DFOsq-奥拉单抗的生物分布，如通过携带A204的裸鼠的血液和解剖的肺、心脏、肝、肾、肌肉、脾、骨和肿瘤中的放射性计数所测量的。

图8：用经放射性标记的奥拉单抗治疗后的平均肿瘤体积。在携带Balb/c裸小鼠的A204-异种移植物肿瘤的处理组(¹⁷⁷Lu-奥拉单抗，10MBq)和对照组(冷-DOTA-奥拉单抗)中测量的平均肿瘤体积±SEM，直到来自每个组的第一只小鼠达到肿瘤终点。

图9：示出了从处理/媒剂的第一天(第1天)直到第90天实验结束时的个体肿瘤体积。

图10：在携带Balb/c裸小鼠的A204异种移植物肿瘤的处理组(¹⁷⁷Lu-奥拉单抗，10MBq)和对照组中测量的存活期。

序列信息

表1：PDGFRα结合抗体(奥拉单抗)的氨基酸序列的总结

具体实施方式

血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)

血小板源性生长因子受体α(PDGFRα或PDGFRalpha)是III型受体酪氨酸激酶。PDGFRα对发育至关重要，并且在成年后发挥重要功能。例如，对于无效突变纯合的小鼠在胚胎发生期间死亡。在发育后期，PDGFRα在许多间充质结构中表达，而相邻的上皮细胞产生血小板源性生长因子(PDGF)。

血小板源性生长因子家族生长因子由五种不同的二硫键连接的二聚体PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD组成，它们通过PDGFRα和PDGFRβ起作用。这些生长因子是由二硫键连接的多肽链构成的二聚体分子，所述二硫键连接的多肽链同时与两种受体蛋白结合并诱导受体二聚化、自磷酸化和细胞内信号传导。PDGFRα可以与PDGFRβ形成异源二聚体，也可以形成同源二聚体。因为PDGFRβ不以高亲和力与PDGF-A链结合，所以PDGF-AA仅激活αα受体二聚体，而PDGF-AB和PDGF-CC激活αα和αβ受体异源二聚体。

还已经在一些肿瘤和基质细胞(包括肉瘤)上检测到PDGFR-α，其中信号传导可以有助于癌细胞增殖、转移和肿瘤微环境的维持。

奥拉单抗(Lartruvo^TM)是与人血小板源性生长因子(PDGF)受体a(PDGFRα)选择性结合的全人IgG1单克隆抗体。奥拉单抗与PDGFR-α之间的相互作用阻止通过PDGF-AA和PDGF-BB配体以及PDGF-AA、PDGF-BB和PDGF-CC诱导的受体激活和下游PDGFR-α通路信号传导结合受体。奥拉单抗表现出针对所选肉瘤细胞系的体外和体内抗肿瘤活性，并且破坏了体内肿瘤植入物模型中的PDGFR-α信号传导通路。

在2019年，Lartruvo^TM在软组织肉瘤患者的确认性III期试验中未能满足主要总体存活终点(ANNOUNCE试验；NCT02451943)。然而，本发明人惊讶地发现，经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段可以用于治疗特征在于PDGFRα表达的一系列癌症。

一般定义

贯穿本说明书，除非另有明确说明或上下文另有要求，否则对单个步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组的提及应被视为涵盖这些步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组中的一个和多个(即，一种或多种)。因此，如本文所使用的，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数方面，并且反之亦然。例如，提及“一个”包括单个以及两个或更多个；提及“一种”包括单种以及两种或更多种；提及“所述”包括单个以及两个或更多个等等。

本领域的技术人员将理解，除了具体描述的那些之外，本发明容易进行变化和修改。应当理解，本发明包括所有此类改变和修改。本发明还包括本说明书中个别或共同提及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征中的任何两个或更多个步骤或特征的任何和所有组合。

本领域的技术人员将认识到可以与本文所述的方法或材料类似或等效的许多方法和材料，所述方法和材料可以用于实践本发明。本发明决不限于所描述的方法和材料。

本文提及的所有专利和出版物都以引用的方式整体并入。

本发明不限于本文所述的具体实例的范围，这些实例旨在仅用于例示目的。功能等效的产物、组合物和方法显然在本发明的范围内。

除非另有明确说明，否则本文中的本发明的任何实例或实施例在进行必要的修改后应被视为适用于本发明的任何其它实例或实施例。

除非另有特别说明，否则本文所使用的所有技术和科学术语应被视为具有与本领域(例如，在诊断技术、放射成像、细胞培养、分子遗传学、免疫学、免疫组织化学、蛋白质化学和生物化学中)的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。

术语“和/或”(例如“X和/或Y”)应被理解为意指“X和Y”或“X或Y”，并且应被视为对这两个含义或任一含义提供明确支持。

所选定义

术语“经分离的蛋白质”或“经分离的多肽”是一种蛋白质或多肽，由于其起源或衍生来源，其不与天然状态下伴随其的天然缔合组分缔合；基本上不含来自相同来源的其它蛋白质。可以使用本领域中已知的蛋白质纯化技术，使蛋白质基本上不含天然缔合的组分或通过分离基本上纯化。“基本上经纯化的”意指蛋白质基本上不含污染剂，例如，至少约70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或96％、或97％、或98％或99％不含污染剂。

术语“重组”应当理解为意指人工基因重组的产物。因此，在包含抗体抗原结合结构域的重组蛋白的上下文中，该术语不涵盖受试者体内天然存在的抗体，所述抗体是B细胞成熟期间发生的自然重组的产物。然而，如果此类抗体是经分离的，它被认为是包含抗体抗原结合结构域的经分离的蛋白质。类似地，如果使用重组手段分离和表达编码蛋白质的核酸，则所得蛋白质是包含抗体抗原结合结构域的重组蛋白。重组蛋白还涵盖当其在细胞、组织或受试者内时通过人工重组手段表达的蛋白质，例如在其中表达的蛋白质。

术语“蛋白质”应当理解为包括单个多肽链，即由肽键连接的一系列连续氨基酸，或彼此共价或非共价连接的一系列多肽链(即，多肽复合物)。例如，所述一系列多肽链可以使用合适的化学物质或二硫键共价连接。非共价键的实例包括氢键、离子键、范德华力(Vander Waals force)和疏水相互作用。

术语“多肽”或“多肽链”将从前述段落中被理解为意指由肽键连接的一系列连续的氨基酸。

如本文所使用的，术语“抗原结合蛋白”可与“抗原结合结构域”可互换使用，并且应被视为意指能够与抗原特异性结合的抗体的区，即VH或VL或包含VH和VL两者的Fv。抗原结合结构域不需要在完整抗体的上下文中，例如，其可以呈分离形式(例如，结构域抗体)或呈另一种形式，例如，如本文所述，如scFv。

出于本公开的目的，术语“抗体”包括能够通过包含在Fv内的抗原结合结构域与一种或几种密切相关的抗原特异性结合的蛋白质。该术语包括四链抗体(例如，两条轻链和两条重链)、重组或经修饰的抗体(例如，嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、CDR移植抗体、灵长类动物化抗体、去免疫抗体、合成人源化抗体、半抗体、双特异性抗体)。抗体通常包含恒定结构域，所述恒定结构域可以排列成恒定区或恒定片段或可结晶片段(Fc)。抗体的示例性形式包含作为其基本单位的四链结构。全长抗体包含两条共价连接的重链(约50至70kD)和两条轻链(各自约23kDa)。轻链通常包含可变区(如果存在的话)和恒定结构域，并且在哺乳动物中是κ轻链或λ轻链。重链通常包含可变区和通过铰链区与另外的恒定结构域连接的一个或两个恒定结构域。哺乳动物的重链是下列类型之一：α、δ、ε、γ或μ。每条轻链也与重链中的一条共价连接。例如，两条重链以及重链和轻链通过链间二硫键并通过非共价相互作用保持在一起。在不同类型的抗体中，链间二硫键的数量可以不同。每条链具有N末端可变区(VH或VL，其中每个长度为约110个氨基酸)和C末端处的一个或多个恒定结构域。轻链的恒定结构域(长度为约110个氨基酸的CL)与重链的第一恒定结构域(长度为330至440个氨基酸的CH1)对齐并二硫键合。轻链可变区与重链的可变区对齐。抗体重链可以包含2个或更多个另外的CH结构域(如CH2、CH3等)，并且可以包含CH1与CH2恒定结构域之间的铰链区。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、种类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。在一个实例中，抗体是鼠(小鼠或大鼠)抗体或灵长类动物(如，人)抗体。在一个实例中，抗体重链丢失了C端赖氨酸残基。在一个实例中，抗体是人源化的、合成人源化的、嵌合的、CDR移植的或去免疫的。

术语“全长抗体”、“完整抗体”或“整个抗体”可互换地用于指基本上完整形式的抗体，而不是抗体的抗原结合片段。具体地，整个抗体包括具有包括Fc区的重链和轻链的抗体。恒定结构域可以是野生型序列恒定结构域(例如，人野生型序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。

如本文所使用的，“可变区”是指如本文所定义的抗体的轻链和/或重链的能够与抗原特异性地结合的部分，并且包括互补决定区(CDR)；即CDR1、CDR2和CDR3，以及框架区(FR)的氨基酸序列。例如，可变区包含三个或四个FR(例如，FR1、FR2、FR3和任选地FR4)以及三个CDR。VH是指重链的可变区。VL是指轻链的可变区。

如本文所使用的，术语“受试者”应被理解为意指包括人在内的任何动物，例如哺乳动物。示例性受试者包括但不限于人和非人灵长类动物。例如，受试者是人类。

“抗体”或“免疫球蛋白”或“Ig”是存在于血液或脊椎动物的其它体液中的γ球蛋白，其在免疫系统中起作用以与抗原结合，因此鉴定和中和异物。

抗体通常是由两个相同轻(L)链和两个相同重(H)链构成的异源四聚糖蛋白。每条L链通过一个共价二硫键与H链连接。根据H链同种型，两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫桥。

H和L链定义了特定的Ig结构域。更具体地，每条H链在N末端处具有可变结构域(VH)，随后是α链和γ链中的每条链的三个恒定结构域(CH)，以及μ同种型和ε同种型的四个CH结构域。每条L链在N末端处具有可变结构域(VL)，随后在其另一端处具有恒定结构域(CL)。VL与VH对齐，并且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。

抗体可以分配给不同的类别或同种型。存在五种类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其具有分别命名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能的相对微小差异，将γ类和α类进一步分成子类，例如，人表达以下子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。来自任何脊椎动物物种的L链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列而指定为称为κ和λ的两种明显不同类型中的一种。

恒定结构域包括Fc部分，所述Fc部分包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体(如ADCC)的效应子功能由Fc区中的序列确定，所述Fc区也是由存在于某些类型的细胞上的Fc受体(FcR)识别的部分。

VH和VL的配对一起形成“可变区”或“可变结构域”，包括抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。V结构域含有抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白影响抗原结合并且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。V区跨越约110个氨基酸残基，并且由被称为15-30个氨基酸的框架区(FR)(通常约4个)的相对不变的延伸段组成，所述框架区由被称为“高变区”(通常约3个)的极可变性的较短区隔开，所述高变区的长度各自为9-12个氨基酸。FR主要采用β片层构型，并且高变区形成连接β片层结构并且在一些情况下形成β片层结构的一部分的环。

“高变区”、“HVR”或“HV”是指抗体可变结构域的在序列上是高变的和/或形成结构上限定的环的区。通常，抗体包含六个高变区；VH中有三个(H1、H2、H3)，并且VL中有三个(L1、L2、L3)。许多高变区描述正在使用且涵盖于本文中。

如本文所使用的，术语“互补决定区”(同义CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变区的氨基酸残基，其存在是特异性抗原结合的主要因素。每个可变区结构域(VH或VL)典型地具有三个被鉴定为CDR1、CDR2和CDR3的CDR。VH的CDR在本文中也分别被称为CDR H1、CDR H2和CDR H3，其中CDR H1与VH的CDR 1相对应，CDR H2与VH的CDR 2相对应，并且CDR H3与VH的CDR 3相对应。同样，VL的CDR在本文中分别被称为CDR L1、CDR L2和CDR L3，其中CDRL1与VL的CDR 1相对应，CDR L2与VL的CDR 2相对应，并且CDR L3与VL的CDR 3相对应。在一个实例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置是根据Kabat《具有免疫学意义的蛋白质的序列》,马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院,1987和1991(在本文中也被称为“Kabat编号系统”)定义的。在另一个实例中，根据增强型Chothia编号方案(http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html)定义分配给CDR和FR的氨基酸位置。本发明不限于由Kabat编号系统定义的FR和CDR，而是包括所有编号系统，包括典型编号系统或Chothia和Lesk的编号系统《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917,1987；Chothia等人,《自然(Nature)》342:877-883,1989；和/或Al-Lazikani等人,《分子生物学杂志》273:927-948,1997；Honnegher和Plükthun的编号系统《分子生物学杂志》309:657-670,2001；或在Giudicelli等人,《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》25:206-2111997中讨论的IMGT系统。在一个实例中，CDR是根据Kabat编号系统定义的。任选地，根据Kabat编号系统的重链CDR2不包含本文所列出的五个C末端氨基酸，或者这些氨基酸中的任何一个或多个被另一种天然存在的氨基酸取代。在此方面，Padlan等人,《美国实验生物学会联合会会志(FASEB J.)》,9:133-139,1995证实重链CDR2的五个C末端氨基酸通常不涉及抗原结合。

“框架”或“FR”残基是除本文所定义的高变区或CDR残基以外的那些可变结构域残基。VH的FR在本文中也分别被称为FR H1、FR H2、FR H3和FR H4，其中FR H1与VH的FR 1相对应，FR H2与VH的FR 2相对应，FR H3与VH的FR 3相对应，并且FR H4与VH的CDR 4相对应。同样，VL的FR在本文中分别被称为FR L1、FR L2、FR L3和FR L4，其中FR L1与VL的FR 1相对应，FR L2与VL的FR 2相对应，FR L3与VL的FR 3相对应，并且FR L4与VL的CDR 4相对应。

“用于形成抗原结合蛋白的肽”通常是指可以形成赋予抗体对抗原的特异性的构象的肽。实例包括整个抗体或整个抗体相关结构、包括可变结构域的整个抗体片段、可变结构域和其片段(包括轻链和重链)或包括高变区或恒定区中的一些但不是全部的轻链和重链的片段。

“完整”或“整个”抗体是包含抗原结合蛋白以及CL和至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。

“整个抗体相关结构”包括多聚化形式的整个抗体。

“包括可变结构域的整个抗体片段”包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双功能抗体；线性抗体、单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

Fab片段由完整L链以及H链的可变区结构域(VH)和一个重链的第一恒定结构域(CHI)组成。每个Fab片段在抗原结合方面是单价的，即其具有单个抗原结合蛋白。

Fab'片段与Fab片段的不同之处在于，在包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸的CHI结构域的羧基末端处具有另外的少量残基。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基。

F(ab')2片段大致与两个具有二价抗原结合活性的二硫键连接的Fab片段相对应，并且仍然能够交联抗原。

“Fv”是含有完全抗原识别和抗原结合位点的抗体片段。这一片段由紧密地非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。

在单链Fv(scFv)物种中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可以通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以缔合成与双链Fv物种中的二聚体结构类似的“二聚体”结构。通过这两个结构域的折叠产生了六个高变环(H链和L链各3个环)，所述高变环为抗原结合贡献氨基酸残基，并赋予抗体抗原结合特异性。

“单链Fv”还缩写为“sFv”或“scFv”是包含连接形成单个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，scFv多肽进一步包含位于VH结构域与VL结构域之间的使scFv能够形成对于抗原结合而言所期望的结构的多肽接头。

“单个可变结构域”是具有识别和结合抗原的能力的Fv的一半(仅包含三个对抗原具有特异性的CDR)，但是以比完整结合位点更低的亲和力进行。

“双功能抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，所述片段包含与同一条多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过在VH结构域与VL结构域之间构建具有短接头(约5-10个残基)的sFv片段(参见前一段落)来制备小抗体片段，使得实现V结构域的链间而非链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。

双功能抗体可以是二价或双特异性的。双特异性双功能抗体是两个“交叉”sFv片段的异源二聚体，其中两种抗体的VH结构域和VL结构域存在于不同的多肽链上。三功能抗体和四功能抗体还通常是本领域中已知的。

“经分离的抗体”是已经从其先前存在的环境的组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。污染物组分是会干扰抗体的治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。

“人抗体”是指具有与由人产生的抗体相对应的氨基酸序列的氨基酸序列和/或已经使用如本文所公开的用于制备人抗体的任何技术制备的抗体。这种人抗体的定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可以使用本领域中已知的各种技术产生，包括噬菌体展示文库。人抗体可以通过将抗原施用于转基因动物来制备，所述转基因动物已经被修饰以产生此类抗体以响应抗原激发，但其内源基因座已被禁用。

非人(例如，啮齿动物)抗体的“人源化”形式是含有源自非人抗体的最小序列的嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自接受者的高变区的残基被来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的具有期望抗体特异性、亲和力和能力的高变区的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被对应非人残基替代。此外，人源化抗体可以包含不存在于接受者抗体或供体抗体中的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。一般来说，人源化抗体将包含其中所有或基本上所有高变环与非人免疫球蛋白的区相对应并且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR的至少一个并且典型地两个可变结构域中的基本上所有可变结构域。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。

“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体中获得的抗体，即包含所述群体的单独抗体是相同的，除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外。单克隆抗体针对抗原上的单个抗原位点或决定簇具有高度特异性。除了其特异性之外，单克隆抗体的有利之处还在于，可以合成这些抗体，而不受其它抗体污染。单克隆抗体可以通过杂交瘤方法制备，或者可以在细菌、真核动物或植物细胞中使用重组DNA方法制备。“单克隆抗体”也可以从噬菌体抗体文库中分离。

本文中的单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出期望生物活性即可。本文中的所关注嵌合抗体包括包含源自非人灵长类动物(例如，旧大陆猴、类人猿等)的可变结构域抗原结合序列和人恒定区序列的“灵长类动物化”抗体。

“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。通常，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域中已知的常见方法来测量，包括本文所述的方法。低亲和力抗体通常会缓慢地与抗原结合并倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常更快地与抗原结合并倾向于保持更长的结合。各种测量结合亲和力的方法在本领域中是已知的，所述方法中的任何方法可以用于本发明的目的。

如本文所使用的，涉及抗原结合蛋白或其抗原结合结构域与抗原的相互作用时，术语“结合”意指相互作用取决于抗原上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在。例如，抗体识别特异性蛋白质结构而非一般的蛋白质并且与其结合。如果抗体与表位“A”结合，则在含有经标记的“A”和抗体的反应中，含有表位“A”(或游离的、未经标记的“A”)的分子的存在将减少与抗体结合的经标记的“A”的量。

如本文所使用的，术语“特异性结合(specifically binds)”或“特异性结合(binds specifically)”应被视为意指本发明的抗原结合蛋白与特定抗原或表达所述抗原的细胞的反应或缔合比与替代性抗原或细胞的反应或缔合更频繁、更迅速、持续时间更长和/或亲和力更大。

如本文所使用的，术语“不可检测地结合”应被理解为意指抗原结合蛋白(例如，抗体)以高于背景小于10％或8％或6％或5％的水平与候选抗原结合。背景可以是在不存在蛋白质的情况下和/或在存在阴性对照蛋白质(例如，同种型对照抗体)的情况下检测到的结合信号水平和/或在存在阴性对照抗原的情况下检测到的结合水平。使用生物传感器分析(例如，Biacore)检测结合水平，其中抗原结合蛋白被固定并与抗原接触。

如本文所使用的，术语“不显著结合”应被理解为意指本发明的抗原结合蛋白与多肽的结合水平在统计学上不显著高于背景，例如，在不存在抗原结合蛋白的情况下和/或在存在阴性对照蛋白(例如，同种型对照抗体)的情况下检测到的结合信号水平和/或在存在阴性对照多肽的情况下检测到的结合水平。使用生物传感器分析(例如，Biacore)检测结合水平，其中抗原结合蛋白被固定并与抗原接触。

“亲和力成熟”抗体是在其一个或多个HVR中具有一个或多个改变的抗体，这些改变使得抗体对抗原的亲和力相比于不具有那些改变的亲本抗体有所改善。优选的亲和力成熟抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。通过本领域中已知的程序产生亲和力成熟抗体。

“ADCC”是指称为抗体依赖性细胞毒性的过程，其是在人类中主要由自然杀伤(NK)细胞介导的免疫应答。在ADCC中，NK细胞表面上的FcyRIII识别与靶细胞表面上展示的抗原结合的抗体的Fe区。这激活了NK细胞，所述NK细胞释放穿孔素和颗粒酶，从而引起靶细胞的裂解和凋亡。

“CDC”是指称为补体依赖性细胞毒性的复杂过程，所述过程可以通过一连串蛋白质作用导致细胞杀伤，所述蛋白质可以通过两种主要通路中的任一种起作用。

“ADCP”是指称为抗体依赖性细胞介导的吞噬作用的过程。在该Fe受体介导的过程中，抗体与其结合的靶细胞被吞噬细胞(如巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和树突状细胞)吞噬。在该过程中涉及多种Fc受体。

“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。优选的阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。

如本文所使用的，“激动剂抗体”是模拟所关注多肽的功能活性中的至少一种功能活性的抗体。

如本文所指，“Fc区”是由通过一个或多个二硫键连接的两条多肽链组成的二聚体，每条链包含铰链结构域加上CH2和CH3结构域的一部分或全部。所述多肽链中的每条多肽链被称为“Fc多肽链”。为了区分两条Fe多肽链，一条在本文中被称为“A链”，并且另一条被称为“B链”更具体地，预期用于本发明的Fc区是IgG Fc区，其可以是哺乳动物或人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。在人IgG1 Fc区中，已知至少两种等位基因类型。

如本文所指的“含Fc的蛋白质”是包含如本文所述的Fc区和与靶分子结合的结合区的蛋白质。术语“含Fc的蛋白质”涵盖含有Fc区的抗体或Fc融合蛋白。

词语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗，其中目的是减缓(减轻)不期望的生理变化或病症。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻、疾病程度的减轻、疾病的稳定(即，不恶化)状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或减缓以及缓和(不论是部分还是总体)，不论是可检测的还是不可检测的。治疗还可以意指与未接受治疗的预期存活期相比，存活期延长。治疗可以不必导致疾病或病症的完全清除，但是可以减少或最小化感染的并发症和副作用以及疾病或病症的进展。

短语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须与包含调配物的其它成分和/或用调配物治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容。

抗体

本发明涉及与PDGFRα特异性结合的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的用途，其用于治疗癌症。如本文所使用的，奥拉单抗也可以被称为IMC-3G3，并且是与人PDGFRα特异性结合的抗体。

如本文所使用的，术语“特异性结合”或“特异性结合”应被视为意指用于根据本发明使用的药剂与PDGFRα或表达其的细胞的反应或缔合比与替代性抗原或细胞的反应或缔合更频繁、更迅速、持续时间更长和/或亲和力更大。例如，与PDGFRα结合的抗原结合蛋白的亲和力比其与其它抗原结合的亲和力实质上大得多(例如，1.5倍、或2倍、或5倍、或10倍、或20倍、或40倍、或60倍、或80倍至100倍、或150倍或200倍)。

用于评估与蛋白质(例如，PDGFRα)结合的方法在本领域中是已知的，例如，如Scopes(《蛋白质纯化：原理和实践(Protein purification:principles and practice)》,第三版,施普林格出版社(Springer Verlag),1994)中所述。此类方法通常涉及固定药剂(例如，抗体)并使其与标记的靶(在抗体的情况下，为抗原)接触。在洗涤去除非特异性结合的蛋白质之后，检测标签的量，并且因此检测结合的抗原。当然，可以标记抗原结合位点并固定抗原。还可以使用淘选类型测定。可替代地或另外地，可以使用表面等离子体共振测定。

恒定区

用于本发明的如本文所述的任何抗体和/或其抗原结合片段可以包含抗体的恒定区。这包括与Fc融合的抗体的抗原结合片段。

可用于产生如本文所述的抗体或其抗原结合片段的恒定区的序列可以从许多不同来源获得。在一些实例中，蛋白质的恒定区或其部分源自人抗体。恒定区或其部分可以源自任何抗体类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何抗体同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一个实例中，恒定区是人同种型IgG4或稳定的IgG4恒定区。

在本发明的各个实施例中，抗体的Fc区可以包含用于改变效应子功能(包括增加或减少效应子功能)和循环半衰期的一个或多个取代。此类取代和修饰的各个实例描述于Saunders(2019)《免疫学前沿(Front.Immunol.)》第1296章中，所述文献以引用的方式并入本文。

在一个实例中，例如与天然或野生型人IgG1或IgG3 Fc区相比，恒定区的Fc区诱导效应子功能的能力降低。在一个实例中，效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。用于评估含Fc区的蛋白质的效应子功能水平的方法是本领域已知的和/或本文所述的。

在一个实例中，Fc区是IgG4 Fc区(即，来自IgG4恒定区)，例如人IgG4 Fc区。合适的IgG4 Fc区的序列对技术人员来说是显而易见的和/或可从公开数据库中获得(例如，可从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)获得)。

在一个实例中，恒定区是稳定IgG4恒定区。术语“稳定IgG4恒定区”将被理解为意指已经被修饰以减少Fab臂交换或经历Fab臂交换或形成半抗体的倾向或形成半抗体的倾向的IgG4恒定区。“Fab臂交换”是指一种类型的针对人IgG4的蛋白质修饰，其中IgG4重链和连接的轻链(半分子)被来自另一个IgG4分子的重-轻链对交换。因此，IgG4分子可以获得识别两种不同抗原的两种不同Fab臂(产生双特异性分子)。Fab臂交换在体内自然发生，并且可以通过经纯化的血细胞或还原剂如还原型谷胱甘肽在体外诱导。当IgG4抗体解离形成两个分子，每个分子含有重链和轻链时，就形成了“半抗体”。

在一个实例中，根据Kabat的系统(Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质的序列》华盛顿州哥伦比亚特区美国卫生与公众服务部,1987和/或1991)，稳定IgG4恒定区包含铰链区的位置241处的脯氨酸。该位置与根据EU编号系统的铰链区的位置228相对应(Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质的序列》华盛顿州哥伦比亚特区美国卫生与公众服务部,2001和Edelman等人,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.USA)》,63,78-85,1969)。在人IgG4中，这种残基通常是丝氨酸。在丝氨酸取代脯氨酸之后，IgG4铰链区包含序列CPPC。在这方面，技术人员将意识到“铰链区”是连接Fc和Fab区的抗体重链恒定区的富含脯氨酸的部分，其赋予抗体的两个Fab臂流动性。铰链区包括涉及重链间二硫键的半胱氨酸残基。根据Kabat的编号系统，其通常被定义为从人IgG1的Glu226延伸到Pro243。通过将形成重链间二硫键(S-S)的第一个和最后一个半胱氨酸残基放置在相同的位置中，可以将其它IgG同种型的铰链区与IgG1序列进行比对(参见例如WO2010/080538)。

稳定IgG4抗体的另外的实例是其中人IgG4的重链恒定区(根据EU编号系统)中的位置409处的精氨酸被赖氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸取代的抗体(例如，如WO2006/033386中所描述的)。恒定区的Fc区可以另外地或可替代地包含选自由以下组成的组的残基：与405相对应(根据EU编号系统)的位置处的丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。任选地，铰链区包含位置241处的脯氨酸(即，CPPC序列)(如上所述)。

在另一个实例中，Fc区是经修饰具有降低的效应子功能的区，即，“非免疫刺激性Fc区”。例如，Fc区是包含选自由268、309、330和331组成的组的一个或多个位置处的取代的IgG1 Fc区。在另一个实例中，Fc区是IgG1 Fc区，包含一种或多种以下变化E233P、L234V、L235A和G236的缺失和/或一种或多种以下变化A327G、A330S和P331S(Armour等人,《欧洲免疫学杂志》29:2613-2624,1999；Shields等人,《生物化学杂志(J BiolChem.)》276(9):6591-604,2001)。非免疫刺激性Fc区的另外的实例描述于例如以下文献中：Dall'Acqua等人,《免疫学杂志(JImmunol.)》177:1129-1138 2006；和/或Hezareh《病毒学杂志(JVirol)》；75:12161-12168,2001。

具有降低的效应子功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个的取代的抗体(如美国专利第6,737,056中所述，所述美国专利以引用的方式并入本文)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或更多个处具有取代的Fc突变体，包括将残基265和297取代为丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利第7,332,581号)。例如，抗体变体可以包含具有减弱FcγR结合的一个或多个氨基酸取代(例如，在Fc区的位置234和235处的取代(残基的EU编号))的Fc区。例如，取代是L234A和L235A(LALA)(参见例如WO 2012/130831)。这些取代可以另外地包括位置329处的脯氨酸残基的取代，如P329G突变，以使其不能与FcR结合。另外，可以在Fc区中进行改变，这些改变导致改变的(即，减弱的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如美国专利第6,194,551号、WO 99/51642以及Idusogie等人《免疫学杂志》164:4178-4184(2000)中所述。

在一些方面，Fc区包括对补体(C1q)和/或Fcγ受体(FcγR)结合位点的突变。在一些方面，此类突变可以使得抗体不能够进行抗体定向细胞毒性(ADCC)和补体定向细胞毒性(CDC)。CDC缺陷型抗体的一个实例是包含Glu318、Lys320、Pro329、Pro331和Lys322(例如，K322A)中的一个或多个处的取代的抗体，其中Fc区中的残基的编号是根据Kabat等人中所述的EU索引。

在另一个实例中，Fc区是嵌合Fc区，例如，包含至少一个来自IgG4抗体的CH2结构域和至少一个来自IgG1抗体的CH3结构域，其中Fc区包含选自由240、262、264、266、297、299、307、309、323、399、409和427(EU编号)组成的组的一个或多个氨基酸位置处的取代(例如，如WO2010/085682中所述)。示例性取代包括240F、262L、264T、266F、297Q、299A、299K、307P、309K、309M、309P、323F、399S和427F。

另外的修饰

本发明还考虑对包含Fc区或恒定区的抗体或抗原结合蛋白的另外的修饰。

新生儿Fc受体(FcRn)对于体内IgG类抗体的代谢命运是重要的。FcRn的功能是从溶酶体降解通路中补救IgG，使得清除率降低和半衰期延长。FcRn以高亲和力与IgG类抗体的Fc区的CH2-CH3部分结合。IgG类抗体与FcRn之间的相互作用是pH依赖性的，并且以1:2的化学计量发生，即一个IgG抗体分子可以通过其两个重链Fc区多肽与两个FcRn分子相互作用(参见例如，Huber,A.H.等人,《分子生物学杂志》230(1993)1077-1083)。

在本发明的某些实施例中，抗体可以包含一个或多个增加蛋白质的半衰期的氨基酸取代。例如，抗体包含Fc区，所述区包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代增加Fc区对新生儿Fc区(FcRn)的亲和力。例如，Fc区在较低的pH(例如，约pH 6.0)下具有增加的对FcRn的亲和力，以促进内体中的Fc/FcRn结合。在一个实例中，与在约pH 7.4下的亲和力相比，Fc区在约pH 6下具有增加的对FcRn的亲和力，这促进Fc在细胞再循环后再释放到血液中。这些氨基酸取代可用于通过减少从血液中的清除来延长蛋白质的半衰期。

根据EU编号系统，示例性氨基酸取代包括T250Q和/或M428L或T252A、T254S和T266F或M252Y、S254T和T256E或H433K和N434F。另外的或替代性氨基酸取代描述于例如US20070135620或US7083784中。

在另外的实施例中，抗体包含一个或多个降低蛋白质的半衰期的氨基酸取代。例如，抗体包含Fc区，所述区包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代降低或减少Fc区对新生儿Fc区(FcRn)的亲和力。

因此，本发明提供一种抗体，所述抗体在恒定区的CH2和/或CH3结构域中具有取代并且包含残基His310、His435、His436和Ile253(Kabat编号)中的一个或多个处的取代，由此相对于天然存在的抗体改变所述抗体的FcRn结合亲和力和/或血清半衰期。

在本发明的优选的实施例中，经修饰的抗体对FcRn的结合亲和力和/或经修饰的抗体的血清半衰期减少了至少约2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在本发明的优选的实施例中，经修饰的抗体对FcRn的结合亲和力和/或经修饰的抗体的血清半衰期减少了至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％。

抗体也可以包含与恒定重链区的Ser228和Leu235相当的残基处的氨基酸取代，如Ser228Pro和/或Leu235Glu。

蛋白质产生

本发明的抗原结合蛋白的产生通常需要含有编码本发明的抗原结合蛋白的多核苷酸的表达载体。可以使用本领域中熟知的技术(包括本文所述的技术)通过重组DNA技术获得编码本发明的抗原结合蛋白的多核苷酸并且将其亚克隆到用于产生抗原结合蛋白的载体中。考虑了许多不同的表达系统，包括使用哺乳动物细胞(包括人类细胞)来产生和分泌抗原结合蛋白。细胞的实例包括293F、CHO和NSO细胞系。

可以使用本领域中已知的方法构建含有蛋白质编码序列以及适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些包括体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。在某些实施例中，提供了一种可复制载体，所述可复制载体具有与启动子可操作地连接的编码抗原结合蛋白的核酸。

用表达载体转染的细胞可以通过常规技术培养以产生抗原结合蛋白。因此，在某些实施例中，提供了含有与启动子可操作地连接的编码本发明的抗原结合蛋白的多核苷酸的宿主细胞或细胞转染子。启动子可以是异源的。可以利用各种宿主表达载体系统，并且在某些系统中，载体系统的转录机器与宿主细胞特别匹配。例如，哺乳动物细胞如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)可以用包括来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件的载体转染。另外地或可替代地，可以使用一种宿主细胞，所述宿主细胞调节插入序列的表达或根据需要对基因产物进行修饰和加工，包括各种形式的翻译后修饰。具有特定翻译后修饰过程的哺乳动物宿主细胞的实例包括CHO、VERY、BHK、HeIa、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NSO、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。

根据旨在用于蛋白分子的用途，可以有利地选择许多细菌表达载体。在一个实例中，当要产生大量抗原结合蛋白时，可以使用导致表达高水平的容易纯化的融合蛋白产物的载体，如大肠杆菌(E.coli)表达载体pUR278。表达产物可以与lacZ的融合蛋白的形式产生。其它细菌载体包括pIN载体等。pGEX载体也可以用于表达外源多肽作为与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白。这些融合蛋白通常是可溶的并且可以通过吸附并与谷胱甘肽-琼脂糖亲和基质结合、随后在存在游离谷胱甘肽的情况下洗脱而从经裂解的细胞中容易地纯化。在经表达的多肽中可以提供凝血酶和/或因子Xa蛋白酶切割位点，以便经克隆的靶基因产物可以从GST部分释放。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)可以用作载体以在包括草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的昆虫系统中表达外源基因。所使用的特定启动子可以取决于蛋白质编码被插入到序列中的位置。例如，序列可以单独克隆到多角体蛋白基因中并置于多角体蛋白启动子的控制下。

基于病毒的表达系统可以用于哺乳动物细胞，如腺病毒，由此所关注编码序列可以与腺病毒晚期启动子和三联前导序列连接。然后可以使用体外或体内重组来将该嵌合基因插入到腺病毒基因组中。插入到区E1或E3中将产生能够在受感染宿主细胞中表达抗原结合蛋白的活重组病毒。包括ATG起始密码子和邻近序列的特异性起始信号可能是插入的抗原结合蛋白编码序列进行有效翻译所需的。起始和翻译控制信号以及密码子可以从各种来源(天然的和合成的)获得。转录增强子元件和转录终止子可以用于增强基于病毒的系统的表达效率。

当需要长期、高产率地产生重组蛋白时，优选稳定表达。通常使用可选择标志物基因，由此在转染后，细胞在富集培养基中生长1-2天，并且然后转移到含有选择性培养基的培养基中，在所述选择性培养基中可以筛选含有对应可选择标志物例如抗生素抗性的细胞。结果是，已经将质粒稳定整合到其染色体中的细胞生长并形成病灶，所述病灶进而可以被克隆并扩增到细胞系中。单纯疱疹病毒胸苷激酶、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因和腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因是可以分别用于tk-细胞、hgprt-细胞或aprT-细胞的基因的实例，由此提供适当的选择系统。以下基因：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤的抗性；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性；neo，其赋予对氨基糖苷G-418的抗性；以及hygro，其赋予对潮霉素的抗性，是可以用于抗代谢物选择系统的基因的实例。

可以通过已知方法通过重组表达系统纯化本发明的抗原结合蛋白，所述已知方法包括离子交换色谱法、亲和色谱法(尤其是对特异性抗原蛋白A或蛋白G的亲和力)和凝胶过滤柱色谱法)、离心、差别溶解度或通过用于纯化蛋白质的任何其它标准技术。可以通过提供呈融合蛋白的形式的抗原结合蛋白来促进或帮助纯化。

大量的本发明的抗原结合蛋白可以通过在研究实验室中从中试表达系统开始的可放大工艺来产生，所述可放大工艺被放大到分析规模的生物反应器(典型地从5L至约50L生物反应器)或生产规模的生物反应器(例如但不限于75L、100L、150L、300L或500L)。期望的可放大工艺包括其中存在低至不可检测的聚集水平的那些，如通过HPSEC或rCGE测量的，典型地不超过5重量％的蛋白质聚集至不超过0.5重量％的蛋白质聚集。另外地或可替代地，在可放大工艺中，可能期望根据表示完整抗原结合蛋白的总峰面积测量的不可检测水平的片段化，使得至少80％且高达99.5％或更高的总峰面积表示完整抗原结合蛋白。在其它实施例中，本发明的可放大工艺以约10mg/L至约300mg/L或更高的生产效率产生抗原结合蛋白。

已经开发了用于产生抗体片段的各种技术，包括完整抗体的蛋白水解消化和在宿主细胞中的重组表达。关于后者，如下所述，Fab、Fv和scFv抗体片段全都可以在大肠杆菌中表达和分泌，抗体片段可以从抗体噬菌体文库中分离，并且Fab'-SH片段可以直接从大肠杆菌中回收并化学偶联形成F(ab')2片段。在另一种方法中，F(ab')2片段直接从重组宿主细胞培养物中分离。

在另一个实施例中，提供了包括上述核酸的载体。载体可以例如呈质粒、粘粒、病毒颗粒或噬菌体的形式。可以通过各种程序将适当的核酸序列插入到载体中。一般来说，使用本领域中已知的技术将DNA插入到适当的限制性核酸内切酶位点中。载体组分通常包括但不限于以下各项中的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标志物基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。含有这些组分中的一种或多种的合适载体的构建采用本领域技术人员已知的标准连接技术。

抗原结合位点不仅可以直接重组产生，而且可以作为与异源多肽的融合多肽重组产生，所述异源多肽可以是信号序列或在成熟蛋白或多肽的N末端处具有特异性切割位点的其它多肽。一般来说，信号序列可以是载体的组分，或者所述信号序列可以是插入到载体中的编码抗原结合位点的DNA的一部分。信号序列可以是例如选自碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp或热稳定肠毒素II前导序列的组的原核信号序列。对于酵母分泌，信号序列可以是例如酵母转化酶前导序列、α因子前导序列或酸性磷酸酶前导序列或白色念珠菌(C.albicans)葡糖淀粉酶前导序列。在哺乳动物细胞表达中，哺乳动物信号序列可以用于指导蛋白质的分泌，如来自相同或相关物种的分泌多肽的信号序列，以及病毒分泌前导序列。

编码本发明的抗原结合蛋白的多肽组分的多核苷酸序列可以使用如上所述的标准重组技术来获得。可以使用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦获得，就将编码多肽的序列插入到能够在原核宿主中复制和表达异源多核苷酸的重组载体中。本领域中可用和已知的许多载体可以用于本发明的目的。适当载体的选择将主要取决于插入到载体中的核酸的大小以及用载体转化的具体宿主细胞。每种载体含有各种组分，取决于其功能(异源多核苷酸的扩增或表达或两者)和其与其所驻留的特定宿主细胞的相容性。

一般来说，含有源自与宿主细胞相容的物种的复制子和控制序列的质粒载体与这些宿主结合使用。表达载体和克隆载体两者都含有使得载体能够在一个或多个所选宿主细胞中复制的核酸序列，以及能够在经转化的细胞中提供表型选择的标记序列。此类序列对于各种细菌、酵母和病毒是熟知的。来自质粒pBR322(其含有编码氨苄青霉素(Amp)和四环素(Tet)抗性的基因并且因此提供了用于鉴定经转化的细胞的简单手段)的复制起点适用于大多数革兰氏阴性细菌，2μm质粒起点适用于酵母，并且各种病毒起点(SV40、多瘤、腺病毒、VSV或BPV)可用于哺乳动物细胞中的克隆载体。pBR322、其衍生物或其它微生物质粒或噬菌体也可以含有或被修饰以含有可以被微生物生物体用于表达内源蛋白质的启动子。

另外，含有与宿主微生物相容的复制子和控制序列的噬菌体载体可以用作与这些宿主结合的转化载体。例如，细菌噬菌体(如λGEM.TM.-11)可以用于制备重组载体，所述重组载体可以用于转化敏感宿主细胞(如大肠杆菌LE392)。

本发明的表达载体可以包含两个或更多个启动子-顺反子(顺反子是含有用于产生单个多肽的所有信息的DNA片段)对。启动子是位于顺反子上游(5')的未翻译的调节序列，其调节顺反子的表达。原核启动子典型地分为两类，即诱导型和组成型。诱导型启动子是响应于培养条件的变化(例如，存在或不存在营养物，或温度的变化)而起始在其控制下的顺反子的增加的转录水平的启动子。

由各种潜在的宿主细胞识别的大量启动子是熟知的。通过经由限制性酶消化从源DNA中去除启动子并将经分离的启动子序列插入到本发明的载体中，所选启动子可以与编码轻链或重链的顺反子DNA可操作地连接。天然启动子序列和许多异源启动子两者都可以用于指导靶基因的扩增和/或表达。在一些实施例中，利用异源启动子，因为与天然靶多肽启动子相比，它们通常允许表达的靶基因的更大转录和更高产率。

由各种潜在宿主细胞识别的启动子是熟知的。适合与原核宿主一起使用的启动子包括PhoA启动子、β-半乳聚糖酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统和杂合启动子，如tac或trc启动子。用于细菌系统的启动子还将含有与编码本发明的抗原结合蛋白的DNA可操作地连接的夏因-达尔加诺(S.D.)序列。然而，在细菌中具有功能性的其它启动子(如其它已知的细菌或噬菌体启动子)也是适用的。其核苷酸序列已被公开，由此使得技术人员能够使用接头或衔接子将其与编码靶轻链和重链的顺反子可操作地连接以供应任何所需的限制性位点。

在本发明的一个方面中，重组载体内的每个顺反子包含分泌信号序列组分，其指导表达的多肽跨越膜的易位。一般来说，信号序列可以是载体的组分，或者所述信号序列可以是插入到载体中的靶多肽DNA的一部分。被选择用于本发明的目的的信号序列应当是被宿主细胞识别和加工(即，被信号肽酶切割)的信号序列。对于不识别和加工异源多肽的天然信号序列的原核宿主细胞，将信号序列用例如选自由以下组成的组的原核信号序列取代：碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp或热稳定肠毒素II(STII)前导序列、LamB、PhoE、PelB、OmpA和MBP。在本发明的一个实施例中，表达系统的两个顺反子中所使用的信号序列是STII信号序列或其变体。

另一方面，根据本发明的免疫球蛋白的产生可以在宿主细胞的细胞质中进行，并且因此不需要在每个顺反子内存在分泌信号序列。就此而言，免疫球蛋白轻链和重链在细胞质被表达、折叠和组装以形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(例如，大肠杆菌trxB菌株)提供有利于二硫键形成的细胞质条件，由此允许被表达的蛋白质亚基的适当折叠和组装。

本发明提供了一种表达系统，其中可以调节表达的多肽组分的定量比率，以便使分泌的和正确组装的本发明的抗原结合蛋白的产率最大化。此类调节是至少部分地通过同时调节多肽组分的翻译强度来实现。

就真核宿主细胞中的表达而言，载体组分通常包括但不限于以下中的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标志物基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。

用于真核宿主细胞中的载体还可以含有信号序列或在所关注成熟蛋白质或多肽的N末端处具有特异性切割位点的其它多肽。所选的异源信号序列优选地是被宿主细胞识别和加工(即，被信号肽酶切割)的异源信号序列。在哺乳动物细胞表达中，哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列(例如，单纯疱疹病毒gD信号)是可用的。

用于此类前体区的DNA在阅读框中连接至编码抗体的DNA。

通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分。例如，SV40起点典型地可以仅因为其含有早期启动子而被使用。

表达和克隆载体典型地含有选择基因，也称为可选择标志物。典型的选择基因编码如下蛋白质：(a)赋予对抗生素或其它毒素(例如，氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性，(b)补充营养缺陷型缺陷，或(c)供应无法从复合培养基获得的关键营养素，例如编码杆菌(Bacilli)的D-丙氨酸消旋酶的基因。

选择方案的一个实例利用药物来抑制宿主细胞的生长。用异源基因成功转化的那些细胞产生赋予耐药性的蛋白质并且因此经受住选择方案。此类显性选择的实例使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。

用于哺乳动物细胞的合适的可选择标志物的实例是能够鉴定能够吸收编码抗原结合蛋白的核酸的细胞的标志物，如DHFR或胸苷激酶、金属硫蛋白-I和-II，优选地灵长类动物金属硫蛋白基因、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。当使用野生型DHFR时，适当的宿主细胞是DHFR活性缺陷的CHO细胞系(例如，ATCC CRL-9096)，其被制备和繁殖。例如，通过在含有DHFR的甲氨蝶呤(Mtx)(一种竞争性拮抗剂)的培养基中培养全部转化体来首先鉴定用DHFR选择基因转化的细胞。可替代地，用编码抗体、野生型DHFR蛋白质和另一种可选择标志物(如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH))的DNA序列转化或共同转化的宿主细胞(特别是含有内源DHFR的野生型宿主)可以通过在含有针对可选择标志物(如氨基糖苷抗生素，例如卡那霉素、新霉素或G418)的选择剂的培养基中的细胞生长来选择。

表达和克隆载体通常含有与编码抗原结合蛋白的核酸序列可操作地连接以指导mRNA合成的启动子。被各种潜在宿主细胞识别的启动子是熟知的。

真核基因通常具有位于转录起始位点上游大约25至30个碱基处的富含AT的区。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一个序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核苷酸。在大部分真核基因的3'端处是AATAAA序列，其可以是用于将聚A尾区添加到编码序列的3'端的信号。所有这些序列被适当地插入到真核表达载体中。

用于与酵母宿主一起使用的合适的促进序列的实例包括用于3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子，包括烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。

其它酵母启动子(其是具有受生长条件控制的转录的另外优点的诱导型启动子)是醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢相关的降解酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶以及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子区。

抗原结合蛋白在哺乳动物宿主细胞中从载体转录受到控制，例如通过从以下获得的启动子：病毒基因组，所述病毒如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和猴病毒40(SV40)；异源哺乳动物启动子，例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子；以及热休克启动子，条件是此类启动子与宿主细胞系统相容。

通过将增强子序列插入到载体中可以增加高等真核生物对编码抗原结合蛋白的DNA的转录。增强子序列包括已知来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白和胰岛素)的增强子序列。然而，典型地将使用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括复制起点后侧的SV40增强子(bp 100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、复制起点后侧的多瘤增强子和腺病毒增强子。

在真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人或来自其它多细胞生物的有核细胞)中使用的表达载体还将含有终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可以从真核或病毒DNA或cDNA的5'和偶尔地3'非翻译区获得。这些区含有在编码抗原结合蛋白的mRNA的非翻译部分中转录为聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。

在另一个实施例中，提供了包括上述载体或核酸的细胞。核酸分子或载体可以作为基因组外的独立分子，优选地作为能够复制的分子存在于经遗传修饰的宿主细胞或宿主中，或者所述核酸分子或载体可以稳定地整合到宿主细胞或宿主的基因组中。

本发明的宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。

原核细胞的实例是通常用于克隆的原核细胞，如大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。此外，真核细胞包含例如真菌或动物细胞。

合适的真菌细胞的实例是酵母细胞，优选地酵母属的酵母细胞并且最优选地酿酒酵母物种的酵母细胞。

动物细胞的实例是例如昆虫细胞、脊椎动物细胞，优选地哺乳动物细胞，例如HEK293、NSO、CHO、MDCK、U2-OS、Hela、NIH3T3、MOLT-4、Jurkat、PC-12、PC-3、IMR、NT2N、Sk-n-sh、CaSki、C33A。这些宿主细胞(例如，CHO细胞)可以为本发明的抗体分子提供翻译后修饰，包括前导肽去除、H(重)和L(轻)链的折叠和组装、分子在正确侧处的糖基化和功能性分子的分泌。

本领域中已知的另外的合适的细胞系可从细胞系保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(ATCC))获得。

在另一个实施例中，提供了包括上述细胞的动物。在某些实施例中，含有转基因的动物和其组织可用于产生本发明的抗原结合蛋白。将核酸分子作为转基因引入到非人宿主中和其随后的表达可以用于产生抗原结合蛋白，例如，在转基因动物的奶中表达这样的转基因提供了获得定量抗原结合蛋白的手段。在此方面，有用的转基因包含与来自乳腺特异性基因(如酪蛋白或β-乳球蛋白)的启动子和/或增强子结构可操作地连接的本发明的核酸分子，例如用于本文所述的抗原结合蛋白的编码序列。动物可以是非人哺乳动物，最优选地小鼠、大鼠、绵羊、小牛、狗、猴或猿。

经放射性标记的抗体

技术人员将熟悉用于将可检测部分(如放射性核素(放射性标记))与抗体或其抗原结合片段缀合的标准方法。

如本文所使用的，术语放射性核素可以与术语放射性同位素和放射性标记可互换地使用。

在本发明的任何实施例中，放射性标记可以与奥拉单抗或其抗原结合片段缀合，直接通过与蛋白质中的单个或多个氨基酸残基的结合(例如，酪氨酸残基的卤化)或间接(通过螯合剂或辅基或接头)与放射性同位素(即，放射性标记)连接。

合适的螯合剂或接头的实例可以选自由以下组成的组：TMT(6,6”-双[N,N”,N”'-四(羧甲基)氨基甲基]-4'-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶)、DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸，也称为替坦司坦(tetraxetan))、TCMC(DOTA的四伯胺)、DO3A(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三(乙酸)-10-(2-硫乙基)乙酰胺)、CB-DO2A(4,10-双(羧甲基)-1,4,7,10-四氮杂双环[5.5.2]十四烷)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-三乙酸)、Diamsar(3,6,10,13,16,19-六氮杂双环[6,6,6]二十烷-1,8-二胺)、DTPA(喷替酸或二亚乙基三胺五乙酸)、CHX-A”-DTPA([(R)-2-氨基-3-(4-异硫氰基苯基)丙基]-反式-(S,S)-环己烷-1,2-二胺-五乙酸)、TETA(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸)、Te2A(4,11-双(羧甲基)-1,4,8,11-四氮杂双环[6.6.2]十六烷)、HBED、DFO(去铁胺)、DFOsq(DFO-方酰胺)和HOPO(3,4,3-(LI-1,2-HOPO))或如本文所述的其它螯合剂。其它已知的螯合部分包括3p-C-NETA({4-[2-(双-羧基-甲基氨基)-5-(4-硝基苯基)戊基]-7-羧甲基-[1,4,7]三氮杂壬-1-基}乙酸)、5p-C-NETA(2-({1-[4,7-双(羧甲基)-1,4,7-三氮杂壬-1-基]-7-(4-硝基苯基)庚-2-基}(羧甲基)氨基)乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸)和NODA(1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4-二乙酸)。

另外的合适的螯合剂(例如，包含DOTA和DFO)公开于WO 2022/133537中，所述文献以引用的方式并入本文。

在某些实施例中，奥拉单抗可以与放射性同位素¹²⁴l共价偶联。该同位素是可以与抗体连接的正电子发射体，例如，如Larsson等人(《核医学杂志》33(1992),2020-2023)或US5,185,142所述，所述文献的内容以引用的方式并入本文。

在任何实施例中，蛋白质或抗体的放射性标记通过共价碘化，特别是利用氯甘脲试剂(1,3,4,6-四氯-3a,6a-二苯基甘脲)来完成。虽然氯甘脲标记是类似于氯胺-T方法的固相氧化方法，但是通常被认为是更温和的，因为反应在氧化剂表面上进行，从而使底物的暴露量最少化(Salacinzki,P.R.P.等人,《分析生物化学(Anal.Biochem.)》117:136(1981))。

具有放射性金属和其它卤化放射性同位素的螯合剂可以通过蛋白质/抗体中的一个或多个氨基酸残基或反应性部分与抗体结合，包括但不限于一个或多个赖氨酸残基、酪氨酸残基或硫醇部分。

在另一个实例中，抗体可以与双功能接头缀合，例如溴乙酰基、硫醇、琥珀酰亚胺酯、TFP酯、马来酰亚胺，或者使用本领域中已知的任何胺或硫醇修饰化学物质。

技术人员将熟悉用于将螯合剂与抗体和其衍生物或片段缀合的标准方法。另外，技术人员将熟悉用于选择用于与放射性金属配对的相关螯合剂的方法，例如，如《化学学会评论(Chem.Soc.Rev.)》,2014,43,260中所述，所述文献以引用的方式并入本文。

在任何方面或实施例中，经放射性标记的奥拉单抗可以包含适于治疗肿瘤或癌症肿块的任何放射性同位素。放射性同位素可以用于α(alpha)或β(beta)或γ(gamma)疗法。

合适的放射性同位素的实例包括：锕-225(²²⁵Ac)、砹-211(²¹¹At)、铋-212和铋-213(²¹²Bi、²¹³Bi)、铜-64和铜-67(⁶⁴Cu、⁶⁷Cu)、碘-123、碘-124、碘-125或碘-131(¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I)(¹²³I)、铅-212(²¹²Pb)、镥-177(¹⁷⁷Lu)、镭-223和镭-224(²²³Ra、²²⁴Ra)、铼-186和铼-188(¹⁸⁶Re和¹⁸⁸Re)、钐-153(¹⁵³Sm)、钪-47(⁴⁷Sc)、锶-90(⁹⁰Sr)、铽-149和铽-161(¹⁴⁹Tb和¹⁶¹Tb)以及钇-90(⁹⁰Y)。在优选实施例中，与所述抗体或其片段缀合的所述放射性核素是锕-225或镥-177。

经放射性标记的奥拉单抗的施用和治疗方法

用于将抗原结合蛋白制备成适于向受试者施用的形式(例如，药物组合物)的方法在本领域中是已知的，并且包括例如在《雷明顿氏药物科学(Remington's PharmaceuticalSciences)》(第18版,宾夕法尼亚州伊斯顿的麦克出版公司(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.),1990)和《美国药典：国家处方集(U.S.Pharmacopeia:NationalFormulary)》(宾夕法尼亚州伊斯顿的麦克出版公司,1984)中描述的方法。

经放射性标记的奥拉单抗抗体通常作为具有药学上可接受的载剂(例如，生理盐水溶液)或其它水性载剂的药物组合物施用，任选地包含蛋白质稳定剂，如人血清白蛋白(HSA)。组合物可以含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。根据本发明的抗原结合蛋白在这些调配物中的浓度可以在很大范围内变化，并且将根据所选的特定施用方式和患者的需要，主要基于流体体积、粘度、体重等进行选择。示例性载剂包括水、盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用如混合油和油酸乙酯等非水性媒剂。脂质体也可以使用用作载剂。媒剂可以含有少量增强等渗性和化学稳定性的添加剂，例如缓冲液和防腐剂。

施用是指使用本领域的技术人员已知的各种方法和递送系统中的任何方法和递送系统，包括本文所述的那些将包含治疗剂的组合物物理引入到受试者体内。药物组合物可以由如本文所述的本发明的活性剂调配，用于任何适当的施用途径。

经放射性标记的奥拉单抗优选地静脉内施用，优选地通过输注或静脉内注射。通过输注施用抗体优选地在至多约30分钟的时段内、更优选地在约15分钟内进行。当然，经放射性标记的奥拉单抗还可以通过皮下、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内和颅内注射或输注技术来施用。

短语‘治疗有效量’或‘有效量’通常是指经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的量，所述经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段(i)治疗特定疾病、病状或病症，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状，或(iii)延迟本文所述的特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作。不期望的作用，例如副作用，有时与期望治疗效果一起显现；因此，从业者在确定什么是适当的“有效量”时权衡潜在利益与潜在风险。

例如，对于肿瘤治疗，相对于未经治疗的受试者，治疗有效量的本文所述的经放射性标记的抗体或组合物可以抑制肿瘤生长至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％或更多。可替代地，本文所述的治疗可以使得肿瘤质量完全消退。在本发明的其它实施例中，可以观察到肿瘤消退并持续至少约10天、至少约20天、至少约30天、至少约40天、至少约50天或至少约60天、至少约70天、至少约80天、至少约90天、至少约100天或更长时间的时段。

药物的治疗有效量还可以包括“预防性”或“预防有效量”，其是施用于有患上癌症风险(例如，患有前恶性病状的受试者)或患有癌症复发的受试者的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的任何量，其抑制癌症的发展或复发。在某些实施例中，预防有效量完全预防癌症的发展或复发。“抑制”或“预防”癌症的发展或复发意指降低癌症的发展或复发的可能性，或完全预防癌症的发展或复发。

术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”受试者包括向受试者应用或施用本发明的化合物，其目的是延迟、减缓、稳定、治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、减少恶化、改良、改善或影响疾病或病状、疾病或病状的症状、或疾病或病状的风险(或易感性)。术语“治疗”是指成功治疗或改善损伤、病理或病状的任何指标，包括任何客观或主观参数，如减轻；缓解；减少恶化的速率；减轻疾病的严重程度；稳定、减少症状或使得损伤、病理或病状对受试者而言更易忍受；减缓恶化或衰退的速率；使恶化末期不那么衰弱；或改善受试者的身体或精神健康。

如本文所使用的，使癌症的进展最小化或预防所述癌症意指治疗受试者以防止或延迟肿瘤的复发或转移，或预防现有肿瘤的生长。使癌症的进展最小化或预防所述癌症包括在癌症治疗后预防或延迟癌症复发，或预防现有肿瘤的生长。被预防的复发包括例如在外科手术切除后的肿瘤床的复发。可替代地，复发包括癌症在身体的另一部分的转移。如本文所使用的，术语“预防复发(preventing recurrence)”和“预防复发(preventingrelapse)”是可互换的。

本发明还包括预防个体的癌症的发展的方法。例如，需要预防癌症的个体可能被认为有患上癌症风险，但尚未患有可检测到的癌症。有癌症发展风险的个体可以是具有癌症家族史的个体，和/或基因测试或其它测试指示具有癌症发展高风险或高可能性的个体。个体可能具有癌症干细胞，但尚未患有任何可检测到的肿瘤。应当理解，预防癌症发展的方法包括延迟受试者癌症发作的方法。

在本根据的一些实施例中，待治疗或预防的、或期望使进展最小化的癌症是软组织肉瘤、软骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤或横纹肌肉瘤。在本公开的一实施例中，癌症是原发性肿瘤。在一实施例中，癌症是转移性癌症。在又其它实施例中，癌症已经转移。

如本文所使用的，术语“软组织肉瘤”或“STS”是在连接、支撑和围绕其它身体结构的组织中开始的一种类型的癌症。这包括脂肪、肌肉、纤维组织、血管、神经、腱、关节内层、或深层皮肤组织和/或关节内层。它们可以在身体的任何部分中找到。存在超过50个亚型的软组织肉瘤。STS的类型包括但不限于：血管肉瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、上皮样肉瘤、胃肠道基质瘤(GIST)、卡波济氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、脂肪肉瘤、恶性外周神经鞘肿瘤、粘液纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、孤立性纤维瘤、滑膜肉瘤或未分化的多形性肉瘤。

在本文的任何方面或实施例中，经放射性标记的奥拉单抗可以与针对癌症的另一种治疗的施用组合(即，依次、同时或之后)施用。在任何实施例中，治疗可以是针对癌症的任何治疗，所述治疗任选地选自：外科手术、免疫疗法、外束辐射、化学疗法或放射免疫疗法。

化疗剂是选择性破坏癌细胞和组织的化学药剂或药物。化疗剂可以包括但不限于化合物，如紫杉烷化合物、通过紫杉烷机制起作用的化合物、铂化合物、蒽环霉素化合物、抗代谢物、表鬼臼毒素化合物、喜树碱化合物或其任何组合。

在本发明的任何方面，可以同时施用经放射性标记的奥拉单抗和另外的癌症治疗。可替代地，它们可以依次施用。例如，另外的治疗剂(例如，化疗剂)可以在经放射性标记的奥拉单抗之前施用，或者经放射性标记的奥拉单抗可以在另外的治疗剂(例如，化疗剂)之前施用。可替代地，用另外的治疗剂(例如，化疗剂)和/或经放射性标记的奥拉单抗的治疗可以交错进行。

根据本发明使用的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的合适剂量将根据待治疗的病状和/或正在治疗的受试者而变化。技术熟练的医师有能力确定合适的剂量，例如，通过从次最佳剂量开始并递增地修改剂量以确定最佳或有用的剂量。可替代地，为了确定治疗/预防的合适剂量，使用来自细胞培养物测定或动物研究的数据，其中合适剂量在循环浓度范围内，包括毒性很小或没有毒性的活性化合物的ED₅₀。剂量可以根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。最初可以根据细胞培养测定估计治疗/预防有效剂量。在动物模型中可以将剂量调配为实现包括如在细胞培养中确定的IC₅₀(即，实现症状的半数最大抑制的化合物的浓度或量)的循环血浆浓度范围。可以使用此类信息来更准确地确定人体中的有用剂量。可以例如通过高效液相色谱法来测量血浆中的水平。

技术人员将理解，用于根据本发明的方法使用的药剂的剂量将取决于各种因素，包括施用所述药剂的受试者的年龄、性别、身高和体重，并且取决于所述药剂。

优选地，将奥拉单抗以约1mg至约50mg的剂量、优选地以约5mg至约20mg的剂量并且更优选地以约10mg的剂量施用或输注于受试者。经放射性标记的抗体的比活性优选地为约15MBq/mg至约20MBq/mg，更优选地约18MBq/mg至约19MBq/mg。

在某些实施例中，通过缓慢输注以约5mg至20mg的奥拉单抗的质量剂量施用经放射性标记的奥拉单抗。

在一些实施例中，将有效量的抗体或其抗原结合片段在第一个21天周期的第1天和第8天中的每一者或在第一个28天周期的第1天和第8天中的每一者以约15mg/kg、约20mg/kg或约25mg/kg的负荷剂量施用于被鉴定为患有癌症的患者，随后在随后的21天周期的第1天和第8天中的每一者或在随后的28天周期的第1天和第8天中的每一者以约15mg/kg、约20mg/kg或约25mg/kg将标准剂量的抗体或其抗原结合片段施用于所述患者。

在一些实施例中，本文所公开的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段持续至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约1年、至少约18个月、至少约24个月、至少约3年、至少约5年或至少约10年的最短持续时间。在一些实施例中，用本文所公开的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的治疗持续至多约18个月、16个月、14个月、12个月、10个月、8个月或6个月的最长持续时间。治疗持续时间可以是这些最短持续时间中的任何一个到这些最长持续时间中的任何一个，例如1至18个月。

如本文所使用的，术语“受试者”、“个体”和“患者”将被理解为是可互换的。尽管本发明可用于人类，但本发明也可用于兽医治疗目的。本发明可用于家畜或农场动物，如牛、羊、马和家禽；对于如猫、狗等伴侣动物；并且对于动物园的动物来说。

试剂盒

在另一个实施例中，提供了包括如上所述的经放射性标记的奥拉单抗或抗原结合片段的试剂盒或制品，优选地提供用于本文所概述的方法或用途。

任选地，所述试剂盒进一步包含具有使用说明书的标签或包装插页。

所述试剂盒或“制品”可以包含容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可以由多种材料形成，如玻璃或塑料。容器容纳用于有效治疗病状的治疗组合物并且可以具有无菌接入端口(例如，容器可以是具有皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。标签或包装插页指示治疗组合物用于治疗所选择的病状。在一个实施例中，标签或包装插入物包括使用说明书。

所述试剂盒可以包含(a)治疗组合物；以及(b)其中含有第二活性成分(principle或ingredient)的第二容器。在本发明的该实施例中的试剂盒可以进一步包含包装插页，所述包装插页指示所述活性成分和其它活性成分可以用于治疗病症或预防源于癌症的并发症。可替代地或另外地，试剂盒可以进一步包含第二(或第三)容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲液，如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。所述试剂盒可以进一步包括从商业和使用者立场上期望的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。

在某些实施例中，诊断组合物可以按一次性或可重复使用的装置的形式提供，包括用于容纳诊断组合物的接受器。在一个实施例中，装置是注射器。装置可以容纳1-2mL的治疗组合物。治疗组合物可以以准备好用于使用的状态或需要混合或添加另外的组分的状态提供在装置中。

应当理解，本说明书中公开和定义的本发明扩展到文本或附图中提及的或明显的单独特征中的两个或更多个特征的所有替代性组合。所有这些不同的组合构成本发明的各个替代性方面。

以下实例旨在说明但不以任何方式非限制本发明。

实例

实例1：生物缀合物的合成和表征

使用(例如，包含如SEQ ID NO:4中所示的VH和如SEQ ID 12中所示的VL)的奥拉单抗免疫球蛋白抗体来产生呈DOTA-奥拉单抗和DFOsq-奥拉单抗形式的奥拉单抗-生物缀合物。

使用标准方法进行DOTA-奥拉单抗和DFOsq-奥拉单抗生物缀合。合成30mg的每种缀合物，并且对缀合物进行分析表征。

表2：奥拉单抗与DOTA-NHS酯的缀合反应

DOTA-NHS缀合物表现出高单体纯度(>98％)以及DOTA-奥拉单抗1和DOTA-奥拉单抗2的值4.4和4.3(分别使用两种不同的细胞培养方法产生)；抗体标记程度(DOL)的值(数据未示出)。

表3：奥拉单抗与DFO-sq的缀合反应的条件

DFOsq-奥拉单抗缀合物与DFPsq的尺寸排阻色谱法(SEC)筛选表明在缀合后具有高单体纯度(>98％)(数据未示出)。

进一步评估DFOsq-缀合的奥拉单抗的下表3中列出的特性。

表4：在稳定和瞬时转染细胞系中产生的DOTA和DFOsq生物缀合物的分析表征

用于与PDGFRα结合的Biacore抗体和缀合物筛选

使用Biacore MCK(基于表面等离子体共振的技术)测试所产生的缀合物和奥拉单抗与PDGFRα(义翘神州公司(Sino Biological)，#10556-H08H，批号LC15MY0708)的比较结合(图2)。所使用的仪器是Biacore T200。运行缓冲液：含有1mg/ml BSA的HBS-P+缓冲液。芯片：蛋白A捕获传感器芯片。分析温度：25℃。流速：30μl/min。配体：在10μl/min下，经纯化的抗体，约80RU。分析物：人PDGFRα。稀释范围：从270nM至0.123nM的8点3倍稀释。分析物注射时间：240秒。分析物解离时间：1200秒。再生：甘氨酸pH 1.5。分析：利用双参考相减的1:1结合。

结果表明，所有被测试抗体都与PDGFRα以类似亲和力结合(表5)。

表5：与PDGFRα结合的裸奥拉单抗、DOTA-和DFOsq-缀合的奥拉单抗的表征

配体	K_a(1/Ms)	K_d(1/s)	K_D(M)	R_MAX	Chi²(RU²)
						奥拉单抗	3.39E+05	2.07E-03	6.11E-09	37.6	0.259
DOTA-奥拉单抗	3.88E+05	2.09E-03	5.38E-09	32.3	0.305
						DFOSq-奥拉单抗	3.75E+05	2.10E-03	5.61E-09	35.8	0.328
奥拉单抗	3.31E+05	1.93E-03	5.83E-09	43.8	0.362
						DOTA-奥拉单抗	3.82E+05	2.07E-03	5.41E-09	35.9	0.181
DFOsq-奥拉单抗	3.62E+05	2.01E-03	5.56E-09	32.1	0.203

实例2：所选细胞系中PDGFRα表达的验证

用于异种移植物肿瘤模型的随后测试的细胞系的选择是基于由Lowery等人,2017公布的数据，其中奥拉单抗的功效已经在HuO9(骨肉瘤)和A-204(胚胎性横纹肌肉瘤)细胞系中得到证实。

图3显示在KRIB、HuO9和A-204肉瘤细胞系中确定了总PDGFRA和表面PDGFRA的表达。所有三种细胞系均表达PDGFRA，PDGFRA在HuO9中最丰富；然而，发现HuO9细胞具有更小比例的定位于质膜的PDGRFA总量。

所有三种细胞系的PDGF-AA刺激触发AKT在丝氨酸473上的磷酸化。这通过与奥拉单抗的先前温育得以消除(图4)。

实例3：体内异种移植物模型的开发

在Balb/c裸小鼠的异种移植物模型中测试KRIB和A204细胞系生长性质。两种细胞系都显示出可再现的生长和良好的“摄取率(take-rates)”。鉴于所述细胞系对电离辐射更大的放射敏感性，选择A204细胞克隆用于随后的生物分布研究。

放射性标记DFOSq-奥拉单抗产生94％的放射化学纯度，如通过质量控制方法所评估的。在结合和免疫反应性级分(IRF)测定中评估经放射性标记的抗体与所选参考细胞系的表面结合和内化。

活性与细胞的比率是基于初始试验，所述初始试验显示在1小时时与1.25和2.5kBq/5百万个细胞的类似饱和结合，并且不与阴性对照细胞结合(1MBq/4μg的比活性)。在1小时时A204细胞中的饱和结合(IRF)确定为约40％，而阴性对照细胞系(HCC827)中的结合为约3％(图5，A)。发现30-50％的总结合在1小时后被内化(图5，B)。

实例4：成像和生物分布研究

以20μg的抗体质量剂量向Balb/c裸鼠(N＝4)注射5.03MBq，并且在注射后1天、2天、4天和6天拍摄PET图像(图6)。为了阻断，共注射344μg(标称17倍过量)的未经标记的抗体缀合物。在注射后1天对阻断小鼠进行成像并且在稍后的时间点重新成像或通过生物分布收获。在注射后1天、2天和4天(每个时间点n＝4)对小鼠实施安乐死并且收获组织用于生物分布(图7)。

成像和生物分布分析表明，在测试时段内，经放射性标记的奥拉单抗以高肿瘤/背景比率靶向肿瘤。在注射后120小时观察到约55％ ID/g的高肿瘤摄取，并且证实肿瘤/背景比率为约20。

实例5：异种移植物肿瘤模型中的功效研究

将20x Balb/c裸小鼠在右侧腹皮下植入A204细胞。其中，随后用10MBq¹⁷⁷Lu-DOTA-奥拉单抗以40μg的抗体质量剂量处理16只小鼠。4只小鼠接受媒剂(非放射性标记的-DOTA-奥拉单抗)。

在数周内监测肿瘤体积(图8和9)和小鼠存活期(图10)。

A204异种移植物模型在媒剂对照组(冷-DOTA-奥拉单抗)中显示出指数增长，其中倍增时间为大约7天。用10MBq ¹⁷⁷Lu-DOTA-奥拉单抗的治疗诱导初始停滞以及逐步的肿瘤消退和抑制(图8和9)，其中3只小鼠在研究结束时在第90天仍然活着(图10)，2只小鼠达到肿瘤终点(第50天和第68天)并且2只小鼠由于体重减轻而被实施安乐死。

各组之间肿瘤体积的差异(从第1天开始的变化)在第20天具有统计学显著性(P＝0.0003非配对T检验)，此后差异继续增加(但是由于小鼠达到终点而不能进行统计学测试)。

Claims

1.一种奥拉单抗抗体或奥拉单抗抗体生物缀合物，其适于用治疗性放射性同位素进行放射性标记。

2.根据权利要求1所述的奥拉单抗生物缀合物，其中所述生物缀合物包含与选自以下各项的螯合基团或连接基团缀合的奥拉单抗抗体：TMT(6,6”-双[N,N”,N”'-四(羧甲基)氨基甲基]-4'-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶)、DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸)、TCMC、DO3A、CB-DO2A、NOTA、Diamsar、DTPA、CHX-A”-DTPA、TETE、Te2A、HBED、DFO、DFOsq、DFO-NCS和HOPO。

3.一种奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段与适于治疗用途的放射性同位素缀合，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段用于：

4.根据权利要求1至3中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段或抗体生物缀合物，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段或抗体生物缀合物包含竞争性抑制抗体结合的抗原结合结构域，所述抗体包括包含如SEQ ID NO:4中所示的序列的VH和包含如SEQ IDNO:12中所示的序列的VL。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段或抗体生物缀合物，其中所述抗体或其片段包含具有如SEQ ID NO:4中所定义的可变重链的抗原结合结构域的HCDR1、HCDR2和HCDR3以及具有如SEQ ID NO:12中所定义的VL的抗原结合结构域的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：

(vi)VH，所述VH包含SEQ ID NO:4中所示的序列；

(viii)VL，所述VL包含SEQ ID NO:12中所示的序列；

(ix)VH，所述VH包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:1中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:2中所示的序列，以及CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:3中所示的序列；以及VL，所述VL包含CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:9中所示的序列，CDR2，所述CDR2包含SEQ IDNO:10中所示的序列，以及

CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:11中所示的序列；或

7.根据权利要求6所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段进一步包含：

(ii)VL，所述VL包含框架区(FR)1，所述FR1包含与如SEQ ID NO:13中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含与如SEQ ID NO:14中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含与如SEQ ID NO:15中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含与如SEQ ID NO:16中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％相同的序列或由其组成。

8.根据权利要求6所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，所述奥拉单抗抗体或其抗原结合片段进一步包含：

(i)VH，所述VH包含框架区(FR)1，所述FR1包含如SEQ ID NO:5中所示的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含如SEQ ID NO:6中所示的序列或由其组成；

FR3，所述FR3包含如SEQ ID NO:7中所示的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含如SEQID NO:8中所示的序列或由其组成，以及

(ii)VL，所述VL包含框架区(FR)1，所述FR1包含如SEQ ID NO:13中所示的序列或由其组成；FR2，所述FR2包含如SEQ ID NO:14中所示的序列或由其组成；FR3，所述FR3包含如SEQID NO:15中所示的序列或由其组成；FR4，所述FR4包含如SEQ ID NO:16中所示的序列或由其组成。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含与SEQ ID NO:4中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；和/或VL，所述VL包含与SEQ ID NO:12中所示的序列至少约80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；其中所述VH和VL与所述SEQ ID NO:4和12的序列之间的序列变异不在所述CDR中，并且其中所述抗原结合蛋白保留与PDGFRα结合的能力。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH和/或VL，与如SEQ ID NO:4或12中分别所示的氨基酸序列相比，所述VH和/或VL包含不超过1个、不超过2个、不超过3个、不超过4个、不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、不超过10个、不超过11个、不超过12个、不超过13个、不超过14个、不超过15个、不超过16个、不超过17个、不超过18个、不超过19个或不超过20个氨基酸残基取代、缺失或添加；其中所述氨基酸取代、缺失或添加不在所述CDR中，并且所述抗原结合蛋白保留与PDGFRα结合的能力。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段呈以下形式：

(i)单结构域抗体(sdAb)；

(ii)单链Fv片段(scFv)；

(iii)二聚体scFv(di-scFv)；或

12.根据权利要求1至10中任一项所述的奥拉单抗或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段呈以下形式：

(i)双功能抗体；

(ii)三功能抗体；

(iii)四功能抗体；

(iv)Fab；

(v)F(ab')2；

(vi)Fv；

(vii)双特异性抗体或其它形式的多特异性抗体；或

13.根据权利要求1至12中任一项所述的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段呈免疫球蛋白的形式，如IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄。

14.根据权利要求13所述的奥拉单抗抗体，其中所述奥拉单抗抗体包含如SEQ ID NO:17中所定义的重链恒定区和/或如SEQ ID NO:18中所定义的轻链恒定区。

15.根据权利要求13或14所述的奥拉单抗抗体，其中所述奥拉单抗抗体包含如SEQ IDNO:19中所示的重链和/或如SEQ ID NO:20中所示的轻链。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述奥拉单抗抗体在所述恒定区中包含一个或多个氨基酸取代，以便减少所述抗体的体内半衰期。

17.根据权利要求13至16中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体包含所述抗体的所述恒定区的残基His310、His435、His436和Ile253中的一个或多个处的取代。

18.根据权利要求13至17中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体包含位置310处的选自丙氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺的氨基酸取代。

19.根据权利要求13至18中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体包含位置435处的选自精氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸的氨基酸取代。

20.根据权利要求13至19中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体包含位置310处的丙氨酸残基和位置435处的谷氨酰胺残基。

21.根据权利要求13至20中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体包含残基Lys322处的氨基酸取代，优选地其中所述取代是K322A。

22.根据权利要求16至21中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述抗体对FcRn的结合亲和力和/或所述抗体的血清半衰期减少了至少约2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍；或者其中与不包含相同取代的免疫球蛋白相比，所述经修饰的抗体对FcRn的结合亲和力和/或经修饰的抗体的血清半衰期减少了至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％。

23.根据权利要求3至22中任一项所述的奥拉单抗抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段与适于治疗肿瘤或癌症肿块的放射性同位素缀合。

24.根据权利要求23所述的奥拉单抗抗体或抗原结合片段，其中所述放射性同位素选自：锕-225(²²⁵Ac)、砹-211(²¹¹At)、铋-212和铋-213(²¹²Bi、²¹³Bi)、铜-64和铜-67(⁶⁴Cu、⁶⁷Cu)、碘-123、碘-124、碘-125或碘-131(¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I)(¹²³I)、铅-212(²¹²Pb)、镥-177(¹⁷⁷Lu)、镭-223和镭-224(²²³Ra、²²⁴Ra)、铼-186和铼-188(¹⁸⁶Re和¹⁸⁸Re)、钐-153(¹⁵³Sm)、钪-47(⁴⁷Sc)、锶-90(⁹⁰Sr)、铽-149和铽-161(¹⁴⁹Tb和¹⁶¹Tb)以及钇-90(⁹⁰Y)。

25.根据权利要求24所述的奥拉单抗抗体或抗原结合片段，其中所述放射性同位素是锕-225或镥-177，并且其中所述放射性同位素与所述奥拉单抗抗体直接或间接缀合。

26.根据权利要求23至25中任一项所述的奥拉单抗抗体，其中所述放射性同位素直接例如通过氨基酸残基的卤化与所述奥拉单抗缀合。

27.根据权利要求23至25中任一项所述的奥拉单抗，其中所述放射性同位素例如通过螯合剂或其它连接部分与所述奥拉单抗或其抗原结合片段间接连接。

28.根据权利要求27所述的奥拉单抗，其中所述奥拉单抗与选自由以下组成的组的螯合部分缀合：TMT(6,6”-双[N,N”,N”'-四(羧甲基)氨基甲基]-4'-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶)、DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸)、TCMC、DO3A、CB-DO2A、NOTA、Diamsar、DTPA、CHX-A”-DTPA、TETE、Te2A、HBED、DFO、DFOsq、DFO-NCS和HOPO或本领域技术人员已知的其它螯合剂。

29.根据权利要求24至28中任一项所述的经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是¹⁷⁷Lu-奥拉单抗或¹⁷⁷Lu标记的奥拉单抗，优选地其中所述¹⁷⁷Lu通过接头与所述奥拉单抗缀合。

30.一种治疗、预防受试者的癌症或使所述受试者的癌症的进展最小化的方法，所述方法包含：

-向有需要的受试者施用根据权利要求3至29中任一项所述的经放射性标记的奥拉单抗抗体或其抗原结合片段，

31.一种使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长的方法，所述方法包含：

32.一种使受试者的癌症转移最小化、降低或预防所述癌症转移的方法，所述方法包含：

33.一种增加患有癌症的受试者的存活期的方法，所述方法包含：

由此增加所述受试者的存活期。

34.一种根据权利要求3至29中任一项所述的经放射性标记的奥拉单抗或其抗原结合片段的用途，其用于制备用以实现以下各项的药物：

-使受试者的肿瘤生长最小化、降低或预防所述肿瘤生长，

-使受试者的转移最小化、降低或预防所述受试者的转移，或

-增加患有癌症的受试者的存活期。

35.根据权利要求30至33中任一项所述的方法或根据权利要求34所述的用途，其中所述癌症选自由以下组成的列表：软组织肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和横纹肌肉瘤。

36.根据权利要求30至33或35中任一项所述的方法，其中所述癌症的特征在于肿瘤细胞和/或肿瘤基质中PDGFRα的表达。

37.根据权利要求35或36所述的方法或用途，其中所述肿瘤或癌症是非转移性的。

38.根据权利要求35或36所述的方法或用途，其中所述癌症是恶性的或转移性的。